CS208781B2 - Method of determination of the bonding index in the blood serum - Google Patents

Method of determination of the bonding index in the blood serum Download PDF

Info

Publication number
CS208781B2
CS208781B2 CS793505A CS350579A CS208781B2 CS 208781 B2 CS208781 B2 CS 208781B2 CS 793505 A CS793505 A CS 793505A CS 350579 A CS350579 A CS 350579A CS 208781 B2 CS208781 B2 CS 208781B2
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
thyroxine
serum
antibodies
binding
carrier
Prior art date
Application number
CS793505A
Other languages
English (en)
Inventor
Gerd Kleinhammer
Gerlinde Deutsch
Hans-Ralf Linke
Fritz Staehler
Wolfgang Gruber
Original Assignee
Boehringer Mannheim Gmbh
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Boehringer Mannheim Gmbh filed Critical Boehringer Mannheim Gmbh
Publication of CS208781B2 publication Critical patent/CS208781B2/cs

Links

Classifications

    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/74Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
    • G01N33/78Thyroid gland hormones, e.g. T3, T4, TBH, TBG or their receptors
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10STECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/81Packaged device or kit
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10STECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/975Kit
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10STECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/807Apparatus included in process claim, e.g. physical support structures
    • Y10S436/81Tube, bottle, or dipstick

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Description

(54) Způsob stanovení vazného indexu thyroxinu v krevním séru
Diagnostika funkčního stavu štítné žlázy má v rámci klinické chemie vzhledem к velkému rozšíření poruch této žlázy velký význam. Při základní diagnostice funkce štítné žlázy in vitro se stanoví celkové množství thyroxinu v séru, stanoví se rovněž koncentrace globulinu, vážícího thyroxin. Toto stanovení se provádí pomocí příjmu trijodthyroxinu nebo tak zvaného vazného indexu thyroxinu.
Při testu na příjem trijodthyroxinu se stanoví zbytek vazné kapacity nosných bílkovin pro hormony štítné žlázy v krevním séru. Z těchto bílkovin jde o globu Γη, který váže thynos m, na nějž se váže přibližně 60 procent celkového množství thyroain-u, částečně jde také o prealbum n, a albumin, které jsou rovněž schopny vázat thyroxin. Při stanovení zbytko<vé vazné kapacity jde převážně o stanovení vazby hormonu štítné žlázy na globulin, který váže thyroxin. V případe, že jde o zvýšenou činnost štítné žlázy je obsah thyroxinu zvýšen, při snížené činnosti štítné žlázy je méně vazných míst nosných bílkovin vázáno na thyrox.n a trijodthyronin.
Známý způsob stanovení vazného indexu thyroxinu se provádí tak, že se smísí známé množství radiOaKtlvníhC trijOdthyrOTinu se vzorkem krevního séra a rontoměniče. Raďoaktivní trijodthyrcnin se dělí mezi vazná místa nosné bílkoviny a iontoměniče. V případě, že nosná bílkovina obsahuje větší mncžství neobsazených vazných míst, váže se větší množství radioaktivního' trijodthyromnu na tato místa a zbytek na iontoměn*č. Vyhodnocení se provádí měřením radioaktivity -na tontcmčniči nebo v roztoku.. Poměr radioaktivity roztoku, který odpovídá množství radioaktivního' trijodthyroninu, vázaného na nosné bílkoviny zkoumaného vzcrku séra к radioaktivitě roztoku standardního- vzorku, násobený faktorem, specifickým pro každý standard se nazývá vazný index thyroxinu.
Nevýhoda tohoto· známého způsobu spočívá v nutnosti použití radioaktivních sloučenin. Z toho vyplývá na jedné straně nutnost drahého· a komplikovaného měřicího zařízení, na druhé straně nutnost zcela zvláštního zacházení s radioaktivními reakčními činidly vzhledem к možnému poškození zdravotního stavu pracovníků laboratoře. Tyto nevýhody ztěžují stanovení.
Vynález si klade za úkol navrhnout způsob stanovení vazného indexu thyroxinu, prostý svrchu uvedených nevýhod, proveditelný v každé laboratoři pomocí běžných zařízení a umožňující tak snadné stanovení tohoto indexu ke zjištění fukčního stavu štítné žlázy.
; - Předmětem vynálezu je tedy způsob stanovení vazného indexu thyroxinu v krevním séru, vyznačující se tím, že se ke zkoumanému vzorku séra přidá 100 - až 500 ng thyroxinu ml ia 1 až 200 milí jednotek stanovitelného enzymu ml, kovalentně vázaného na thyroxin, získaný roztok se uvede ve styk s protilátkami proti thyroxinu v pevné fázi, kapalná fáze - se· -oddělí od pevné fáze a v jedné z těchto- fází se měří účinnost použitého' -enzymu..
Vynález vychází z toho, že je možno- užít místo .radioaktivního značení trijodthyroninu - značení enzymem, zvláště v tom případě, že se užije snadno -stanovitelného enzymu. Pokusy však prokázaly, -že - není možno nahraď ‘t radioaktivně značený trijodthyronin (—1125— enzymaticky značeným trijodthyroninem nebo thyroxinem. Ukázalo se totiž, že tyto látky značené enzymem nejsou vázány -na vazná místa bílkovin krevního- séra. Příčinou toho je patrně poměrně velká molekula -enzymu, takže vzniká sférická zábrana.
Nyní bylo- neočekávaně zjištěno, že thýroxin značený enzymem se -může dostat dokonkurence s neznačeným thyroxinem v -případě styku s· protilátkami proti thyroxinu, nacházejícími -se v -pevné fázi. Na této- skutečnosti je založen způsob podle vynálezu, při němž -na jedné straně dochází ke konkurenci vazných· míst -sérových bílkovin a nerozpustné protilátky proti thyroxinu, kde při vazbě - na thyroxin, přičemž v případě, že se naváže větší množství thyroxinu na protilátku, zbývá méně volných vazných míst v -séru. Současně dochází ke konkurenci značeného' a neznačeného- thyroxinu o protilátku. To znamená, že . se váže tím* víceznačného thyroxinu na pevnou fázi, čím vyšší je vazná schopnost séra pro thyroxin a tím i- vazný index thyroxinu. Naměřená enzymatická účinnost v pevné fázi je tedy přímým měřítkem pro velikost vazného indexu. Je však možno stanovit účinnost -enzymu i v kapalné fázi.
Ke značení je nutno užít při provádění způsobu podle vynálezu enzymu, který je možno snadno stanovit a který je možno vázat na thyroxin bez ztráty enzymatické účinnosti. Zvláště vhodné pro- toto značení jsou enzymy, jej - chž účinnost je možno snadno stanovit opticky, - a to- zvláště pomocí barevných zkoušek ve viditelném -světle nebo· změnami jejich NAI^I^-h^kM^^t^i^^iraíe. Typickými příklady vhodných enzymů jsou - peroxidáza, glukózooxidáza, a- -a /-galaktosídáza, glikoamyláza, invertáza a - -alkalická fosfatáza.
Pro všechny -shora uvedené -enzymy jsou známy jednoduché a rychlé metody -stanovení, - které byly popsány například v publikaci H. U. Bergmeyer „Methoden. den enzymatischen Analyse“, Verlag Chemie, 3. vydání 1974j Protilátky proti thyroxinu v pevné fázi -není nutno vázat na -nosič, je možno je učinit nerozpustnými například- zesítěním pomocí polyfunkčních reakčních -složek, jako jsou - - dialdéhydy, - . dloxidy apod. S výhodou je však možno protilátky vázat na pevný nosič. Pevným nosičem pro protilátky pro-ti thyroxinu je jakýkoliv materiál, -který je inertní vzhledem k reakčním složkám a na -nějž je možno protilátky vázat. Bylo zjištěno, že u celé řady materiálů se - - protilátky váží dostatečně -pevně .na povrch -nosiče. Jetaké možno- postupovat tak, že se protilátky váží běžným způsobem pro fixaci - biologicky aktivních bílkovin na pevném nosiči, to znamená kovalentní vazby. Typickým příkladem je aktivace povrchu.nosiče bromkyanem, koklymerací vlíkoviny, povrchovým zesilněním protilátky na nosič působením polyfunkčního zesitňujícího činidla, například glutaraldehyd-u a podobně. Všechny tyto způsoby jsou v oboru známy.
S výhodou se při provádění způsobu podle vynálezu -užije nádobek, jejichž vnitřní stěna je potažena protilátkou. Typickými materiály pro výrobu těchto nádobek jsou polystyren, kopolymery styrenu a aikrylonitrilu, další plastické hmoty a sklo. U - plastických hmot na podkladě -styrenu stačí pro potažení -stěn uložení roztoku protilátky . na určitou dobu do· nádobky.
Způsob podle vynálezu je samozřejmě možno’ provádět také při použití nosičů, které - -nemají tvar -nádobky, tyto nosiče mohou být rozděleny i na jednotlivé částice, mohou například tvořit náplň sloupce.
Protilátky proti thyroxinu je možno· získat běžným způsobem pro výrobu protilátek proti hormonům. Výhodné je použití konjugátu thyroxinu na vhodné nosné bílkovině k vyvolání imunity. Zvláště vhodné - z velkého množství - běžně známých nosných bílkovin jsou -albuminy sko-tu. Tyto -sérové albuminy sko-tu nebo jiné nosné bílkoviny se -váží na thyroxin - chemicky, například působením glutardialdehydu ve slabě alkalickém prostředí s následnou redukcí borohydridem sodíku. Dalším vhodným způsobem je reakce s morfolicyklohexylkarbodiimidem. Vhodnými pokusnými zvířaty pro- aplikaci takto získaných látek, - vyvolávajících imunitu proti thyroxinu jsou například králíci nebo· ovce, je však možno užít i jiných zvířat.
Thyroxin, značený peroxidázou a použití při provádění způsobu podle vynálezu -se získává s výhodou reakcí ter.butyloxykarbony 1thyroxinu-N-hydroxysukcinimidu -s peroxidázou s následným chromatografickým -čištěním získaného produktu. Obdobným způsobem je možno -získat i většinu dalších značených produktů při použití postupů, známých v - chemii bílkovin.
Jak již bylo uvedeno, přidává se ke vzorku séra určité množství thyroxinu. Bylo zjištěno, že toto množství má být 100 až - 500 ng thyroxinu/ml séra. Je však možno užít - i většího -nebo menšího množství. Svrchu uvedené -rozmezí však -stačí pro všechny praktické vzorky séra, to znamená, jak pro -séra s případě snížené činnosti štítné žlázy, tak pro
100 až 400 ng/ml a ž 100 mU/ml
0,1 až 0,2 M, pH 8,6
0,2 % až 0,05 ^g/ml
0,5 až 5 m?M/l séra v případě zvýšené činnosti štítné žlázy. Množství přidaného thyroxinu, značeného enzymem závisí na druhu užitého enzymu, zvláště ina jeho specifické účinnosti, kterou je možno snadno stanovit. V případě, že se užije peroxidázy, užije se s výhodou takové množství, aby ve výsledném vzorku byla účinnost 1 až 200 mU peroxidázy/.ml.
Reakční směs séra, pufru, thyroxinu a enzymaticky značeného thyroxinu se uvede ve styk s protilátkami proti thyroxinu, které jsou nerozpustné a s výhodou vázány na nosič tak dlouho, aby bylo možno dosáhnout stálé vazby značeného thyroxinu na protilátku. Doba styku závisí na podmínkách, zejména pH, teplotě a koncentraci. Obvykle stačí půl hodiny až 2 hodiny. Po skončení inkubace se roztok oddělí od nosiče, například vylitím: roztoku z nádobky, nosič se promyje vodou a pak se stanoví účinnost enzymu, vázaného na nosič. Při výhodném provedení způsobu podle vynálezu při použití nosiče ve formě nádobky a peroxidázy jako enzymu se přidá například peroxid vodíku a 2,2‘-azinodi[3-ethylbenzthiazolinsulfonát (6)] v roztoku v pufru a měří se extinkce při vlnové délce 405 nm.
К provádění způsobu podle vynálezu lze užít různých sestav. Sestava se například skládá z thyroxinu, enzymaticky značeného thyroxinu, protilátky proti thyroxinu ve formě nerozpustné pevné látky, z pufru a reakčního činidla ke stanovení enzymatické účinnosti. Vhodné pufry mají oblast pH v rozmezí 7,5 až 9,3. Výhodné pH tvoří rozmezí 8,0 až 9,0. Typickými příklady použitelných pufrů jsou fosfátový pufr, tris-pufr, boraxový pufr a barbitalový pufr.
Nejvýhodnější je barbitalový pufr v koncentraci 0,05 až 0,5 M.
Sestava může obsahovat ještě stabilizační činidla, například sérový albumin skotu, uhlohydráty nebo, glycerin.
S výhodou obsahuje sestava jako enzymaticky značený thyroxm vázaný na peroxidázu. Reakční činidlo pro stanovení enzymatické účjnnosti může být v tomto výhodném případě tvořeno peroxidem vodíku nebo sloučeninou, která tento peroxid uvolňuje, například perboritanem tento peroxid uvolňuje, například perboritanem sodným nebo perhydritem a 2,2‘-azino-di[ (3-ethylbemzthiazolinsulfonát/6/} J, jakož i vhodným pufrem. Typickým příkladem vhodného pufru je fosforečnanový a citronanový pufr o pH 4,5 až 6,0. Dalším vhodným pufrem pro toto provedení je fosfátový pufr o pH 7,0, guayakol a peroxid vodíku.
Ve výhodném provedení obsahuje sestava následující složky:
thyroxin thyroxinperoxidáza barbitalový pufr sérový albumin skotu protilátky proti thyroxmu (bez nosiče]
H2O2
2,2‘-azino-di- (3-ethylbenzthiazolinsulfonát' (6]i ' pufr s fosfátem a citronanem o pH 5,0 až 50 mM/1
0,1 až 0,2 M
Při výrobě enzymaticky značeného thyroxinu se s. výhodou vychází z terc.butyloxykair bony Ithyroxin-N-.hydroxysukcinimidu a reakce se provádí ve směsi pufru a dimethylformamidu v poměru 1 : 1. Jako pufr se užije kterýkoli ze svrchu uvedených pufrů. К čištění .konjugátu je vhodná fenylbutylaminsepharóza.
Způsobem podle vynálezu je tedy možno snadno, provést stanovení vazného indexu thyroxinu v séru, přičemž přesnost tohoto· stanovení odpovídá přesnosti při použití radioaktivních látek, způsob podle vynálezu je však prostý nevýhod shora uvedeného způsobu.
Způsob podle vynálezu lze využít v diagnostických i průmyslových podmínkách, zejména při výrobě farmaceutických přípravků.
Vynález bude osvětlen následujícími příklady.
Příklad 1
A. Výroba protilátek proti thyroxinu
Thyroxin se váže ve vcdném roztoku o pH 10 přidáním 1,9 hmotnostních % glutardialdehydu na sérový albumin skotu. Pak se redukuje sloučenina Schiffovy báze borohydridem sodným a látky, vyvolávající imunitu proti thyroxinu se čistí chromatograficky. Získaný produkt se podrobí dialýze a pak se podává pokusným zvířatům.
B. Výroba thyroxinperoxidázy
Peroxidáza se uvede v reakci s 10,násobným molárním přebytkem terc.butyloxyk.arbonylthyroxin-N-hydroxysukcinimidu ve směsi dimethylformamidu a fosfátového· pufru o pH 8,5 v poměru 1 : 1. Pak se dimethylformamid odstraní dialýzou a vodný roztok se smísí s fenylbutylaminsepharózou. Sloupec se promyje siměsí trispufru s chloridem sodným a pak směsí ethylenglykolu a vody v poměru 1 : 1 s obsahem 1 M chloridu sodného·. Eluát se míchá 2 hodiny s 0,5 M hydroxylaminu, načež se dialyzuje proti toisfá208781 tavernu pufru. Získaný roztok se smísí se sérovým albuminem skotu a pak se lyofilizuje.
C. Výroba protilátek proti thyroxinu, vázaných na nosič
Z imunizovaných zvířat se známým způsobem získá antisérum proti thyroxinu a vysráží se síranem amonným. Srážení se provádí v 0,04 M fosfátovém pufru 1 : 6000, v němž se také rozpustí sraženina. 1,5 ml takto získaného roztoku se nechá stát pres noc v reakčních nádobkách ze. směsného polymeru styrenu a akrylonitrilu (Lurain), pak se obsah odsaje, nádobky se vymyjí fyziologickým roztokem chloridu sodného s obsahem 1 % sérového albuminu skotu, načež se promyjí a vysuší.
D. Stanovení
Shora získané reakční nádobky s vrstvou protilátek proti thyroxinu se naplní 10 μ1 séra a 1 ml reakčního činidla, které obsahuje 280 ng thyroxinu/ml a 10 mU/ml thyroxin-peroxidázy v 0,12 M bar bita lovem pufru o pH 8,6 s přísadou 0,2 °/o sérového albuminu skotu. Směs se nechá stát 2 hodiny při teplotě místnosti. Pak se obsah nádobek odsaje, nádobky se naplní reakčním činidlem pro stanovení peroxidázy, které sestává z
1,47 m.M/1 H2O2 a 14 rnM/1 ABTS v 0,2 M pufru s fosforečnanem a citronanem o pH 5,0. Změna barvy se měří při 405 nm.
К vyhodnocení se užije cejchovací křivky, získané pomocí dvou standardů s různou vaznou schopností thyroxinu, které se zpracovávají stejným způsobem jako vzorky. Nanášejí se převrácené hodnoty extinkcí, naměřených pro tyto standardy, přičemž je možno stanovit vázané množství thyroxinu nebo přímo hodnoty vazného indexu thyroxinu.
E. Použití metody pro lidské sérum vzorků lidského séra se zkoumá způsobem podle vynálezu a sciu-časně se provádí zkouška při použití trijodthyroninu, značeného radioaktivním jodem. Zkoumaná sera se klasifikují podle získané hodnoty vazného indexu thyroxinu jako normální a jako séra se sníženou nebo zvýšenou vaznou kapacitou thyroxinu. Je zřejmé, že mezi oběma metodami je naprostý souhlas jak je zřejmé z tabulky 1.
Tabulka 1
A/B 1 2 3
1 28 1
2 1 28
3 1) snížená 3 22
2) normální l vazná schopnost thyroxinu
3) zvýšeni I
A — způsob podle vynálezu
В —- způsob s použitím radioaktivního značení

Claims (6)

  1. PŘEDMĚT VYNALEZU
    1. Způsob stanovení vazného indexu thyroxinu v krevním séru, vyznačující se tím, že se ke zkoumanému vzorku séra přidá 100 až 500 ng thyroxinu/ml a 1 až 200 milijednotek stanovitelného enzymu/ml, kovalentně vázaného na thyroxin, získaný roztok se uvede ve styk s protilátkami proti thyroxinu v pevné fázi, kapalná fáze se oddělí od pevné fáze a v jedné z těchto fází se měří účinnost použitého enzymu.
  2. 2. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se jako stanovitelného enzymu užije peroxidázy.
  3. 3. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se protilátky proti thyroxinu užijí ve formě, vázané na nosič.
  4. 4. Způsob podle bodu 3, vyznačující se tím, že se jako pevného nosiče užije nádobky, jejíž vnitrní stěna je povlečena protilátkou.
  5. 5. Způsob podle bodů 1 až 4, vyznačující se tím, že se užije 100 až 500 ng thyroxinu/ml séra.
  6. 6. Způsob podle bodů 1 až 5, vyznačující se tím, že se užije 1 až 10 mU/ml peroxidázy vázané na thyroxin.
CS793505A 1978-06-12 1979-05-21 Method of determination of the bonding index in the blood serum CS208781B2 (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE2825650A DE2825650C3 (de) 1978-06-12 1978-06-12 Verfahren zur Bestimmung des Thyroxin-bindungsindex im Serum

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CS208781B2 true CS208781B2 (en) 1981-09-15

Family

ID=6041575

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS793505A CS208781B2 (en) 1978-06-12 1979-05-21 Method of determination of the bonding index in the blood serum

Country Status (12)

Country Link
US (1) US4467030A (cs)
EP (1) EP0006998B1 (cs)
JP (1) JPS551590A (cs)
AT (1) AT361134B (cs)
CA (1) CA1122119A (cs)
CS (1) CS208781B2 (cs)
DE (2) DE2825650C3 (cs)
ES (1) ES481490A1 (cs)
FI (1) FI68653C (cs)
HU (1) HU182464B (cs)
YU (1) YU136479A (cs)
ZA (1) ZA792871B (cs)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4410633A (en) * 1980-09-25 1983-10-18 Corning Glass Works Method for the measurement of free thyroxine or 3,5,3'-triiodothyronine in a liquid sample
DE3122019C2 (de) * 1981-06-03 1983-11-10 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Verfahren und Vorrichtung zur Durchführung eines automatisierten kontinuierlichen Enzymimmunotestes
DE3504406A1 (de) * 1985-02-08 1986-08-14 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Verfahren zur bestimmung der bindungskapazitaet des thyroxin bindenden globulins
DE3546014A1 (de) * 1985-12-24 1987-06-25 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zur bestimmung der bindungskapazitaet des thyroxin bindenden tbg
DE3812610A1 (de) * 1988-04-15 1989-10-26 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zur bestimmung der thyroxinbindekapazitaet und dazu geeignete standardloesung
JP5997446B2 (ja) * 2011-02-03 2016-09-28 アークレイ株式会社 甲状腺ホルモン固定化担体の液体試薬およびその用途
CN115808519A (zh) * 2022-07-15 2023-03-17 桂林电子科技大学 一种用于甲状腺素检测的化学发光试剂盒及其制备方法

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL154598B (nl) * 1970-11-10 1977-09-15 Organon Nv Werkwijze voor het aantonen en bepalen van laagmoleculire verbindingen en van eiwitten die deze verbindingen specifiek kunnen binden, alsmede testverpakking.
US4040907A (en) * 1974-06-20 1977-08-09 Syva Company Iodothyronine enzyme conjugates
US3962039A (en) * 1974-08-08 1976-06-08 Center For Laboratory Medicine Analytical procedure for thyroid hormones
US4043872A (en) * 1975-02-20 1977-08-23 Syva Company Polyiodothyronine immunoassay
US4081245A (en) * 1976-05-03 1978-03-28 Beckman Instruments, Inc. Immunoassay procedure employing novel immunochemical composites
US4032626A (en) * 1976-06-30 1977-06-28 Corning Glass Works Reagent and method for tbg assay
US4052504A (en) * 1976-06-30 1977-10-04 Corning Glass Works Assay for thyroxine binding globulin
GB1573627A (en) * 1976-09-18 1980-08-28 Ismail A A A Process and device for the determination and detection of a reaction component
US4168207A (en) * 1977-08-03 1979-09-18 Syva Company TBG assay

Also Published As

Publication number Publication date
AT361134B (de) 1981-02-25
US4467030A (en) 1984-08-21
ZA792871B (en) 1980-07-30
DE2825650C3 (de) 1981-02-05
DE2825650B2 (de) 1980-05-29
EP0006998A1 (de) 1980-01-23
FI791720A7 (fi) 1979-12-13
FI68653B (fi) 1985-06-28
DE2825650A1 (de) 1979-12-13
DE2961673D1 (en) 1982-02-18
FI68653C (fi) 1985-10-10
HU182464B (en) 1984-01-30
EP0006998B1 (de) 1981-12-30
JPH0146828B2 (cs) 1989-10-11
ES481490A1 (es) 1980-01-16
JPS551590A (en) 1980-01-08
CA1122119A (en) 1982-04-20
ATA386979A (de) 1980-07-15
YU136479A (en) 1984-04-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0594772B1 (en) Water-soluble, polymer-based reagents and conjugates comprising moieties derived from divinyl sulfone
US5543332A (en) Water-soluble, polymer-based reagents and conjugates comprising moieties derived from divinyl sulfone
US4931385A (en) Enzyme immunoassays and immunologic reagents
CA1098824A (en) Stabilized peroxidase reagent for enzyme immunoassay
US5051356A (en) Specific binding composition comprising a low pI protein or carbohydrate and a diagnostic test kit and method of use
EP0280211A2 (de) Verfahren zur Bestimmung von Antikörpern
CS257757B2 (en) Method of reaction determination between antigen and antibody and reaction agent for realization of this process
CA1168580A (en) Immunological reagent for the detection of tubes of the rheumatoid factor in a biological specimen and process for preparing this novel reagent
CS208781B2 (en) Method of determination of the bonding index in the blood serum
GB2102946A (en) Enzyme immunoassay
EP0095089B1 (en) Improved homogeneous binding assay method and reagent system, test kit and test device therefor
JPH0215827B2 (cs)
EP0152847A1 (en) Stabilized enzyme conjugate composition
Másson et al. Chemical activation of nitrocellulose membranes for peptide antigen‐antibody binding studies: direct substitution of the nitrate group with diaminoalkane
US4288538A (en) Test method and composition therefor
JPS60186759A (ja) 色原性担体イムノアツセ−
JP2749104B2 (ja) アミンオキシドを含有する免疫化学的アツセイ用の試薬
JPH032662A (ja) 免疫測定システム、免疫測定方法、洗浄溶液試薬および酵素基質有機化学コンパウンド
EP0210863A1 (en) Immunoassay
EP0040728A1 (en) An improvement in and relating to assaying methods involving biospecific affinity reactions
JPS61241665A (ja) 安定化された固相試薬
JP3655657B2 (ja) アッセイ試薬及びそれを使用した測定方法
CA1336163C (en) Enzyme quantitation wicking assay
JPH01316660A (ja) 物質の免疫学的検出方法及びこれに使用する組成物及びテストキット
US20040121416A1 (en) Assay