FI68653C - Metod foer bestaemning av tyroxin-bindningsindex i serum och testfoerpackning foer utfoerande av bestaemningen - Google Patents
Metod foer bestaemning av tyroxin-bindningsindex i serum och testfoerpackning foer utfoerande av bestaemningen Download PDFInfo
- Publication number
- FI68653C FI68653C FI791720A FI791720A FI68653C FI 68653 C FI68653 C FI 68653C FI 791720 A FI791720 A FI 791720A FI 791720 A FI791720 A FI 791720A FI 68653 C FI68653 C FI 68653C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- thyroxine
- enzyme
- antibody
- serum
- buffer
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 32
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 title claims description 22
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 title 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 34
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 34
- XUIIKFGFIJCVMT-UHFFFAOYSA-N thyroxine-binding globulin Natural products IC1=CC(CC([NH3+])C([O-])=O)=CC(I)=C1OC1=CC(I)=C(O)C(I)=C1 XUIIKFGFIJCVMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- XUIIKFGFIJCVMT-GFCCVEGCSA-N D-thyroxine Chemical compound IC1=CC(C[C@@H](N)C(O)=O)=CC(I)=C1OC1=CC(I)=C(O)C(I)=C1 XUIIKFGFIJCVMT-GFCCVEGCSA-N 0.000 claims description 21
- 229940034208 thyroxine Drugs 0.000 claims description 21
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 15
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 claims description 15
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 11
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 10
- 102000009488 Thyroxine-Binding Proteins Human genes 0.000 claims description 8
- 108010048889 Thyroxine-Binding Proteins Proteins 0.000 claims description 8
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 7
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims description 7
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 7
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 6
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 claims description 5
- 239000007982 barbital buffer Substances 0.000 claims description 5
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 4
- 239000007981 phosphate-citrate buffer Substances 0.000 claims description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 2
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 claims 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 claims 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 29
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 13
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 10
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 8
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 8
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 5
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- AUYYCJSJGJYCDS-LBPRGKRZSA-N Thyrolar Chemical compound IC1=CC(C[C@H](N)C(O)=O)=CC(I)=C1OC1=CC=C(O)C(I)=C1 AUYYCJSJGJYCDS-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 4
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 4
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PKIZUZDCXKXZEW-RSAXXLAASA-N ON1C(=O)CCC1=O.IC1=CC(C[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)=CC(I)=C1OC1=CC(I)=C(O)C(I)=C1 Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O.IC1=CC(C[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)=CC(I)=C1OC1=CC(I)=C(O)C(I)=C1 PKIZUZDCXKXZEW-RSAXXLAASA-N 0.000 description 3
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000005495 thyroid hormone Substances 0.000 description 3
- 229940036555 thyroid hormone Drugs 0.000 description 3
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 2
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 2
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- LHGVFZTZFXWLCP-UHFFFAOYSA-N guaiacol Chemical compound COC1=CC=CC=C1O LHGVFZTZFXWLCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002285 poly(styrene-co-acrylonitrile) Polymers 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000000163 radioactive labelling Methods 0.000 description 2
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IITIZHOBOIBGBW-UHFFFAOYSA-N 3-ethyl-2h-1,3-benzothiazole Chemical compound C1=CC=C2N(CC)CSC2=C1 IITIZHOBOIBGBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PCDWFBFHIIKIPM-UHFFFAOYSA-N 3-ethyl-2h-1,3-benzothiazole-2-sulfonic acid Chemical compound C1=CC=C2N(CC)C(S(O)(=O)=O)SC2=C1 PCDWFBFHIIKIPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AGNFWIZBEATIAK-UHFFFAOYSA-N 4-phenylbutylamine Chemical compound NCCCCC1=CC=CC=C1 AGNFWIZBEATIAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- 108010073178 Glucan 1,4-alpha-Glucosidase Proteins 0.000 description 1
- 102100022624 Glucoamylase Human genes 0.000 description 1
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 1
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 1
- AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N Hydroxylamine Chemical compound ON AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010020850 Hyperthyroidism Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 241001000340 Sitticus Species 0.000 description 1
- 102000002248 Thyroxine-Binding Globulin Human genes 0.000 description 1
- 108010000259 Thyroxine-Binding Globulin Proteins 0.000 description 1
- 108050000089 Transthyretin Proteins 0.000 description 1
- 102100029290 Transthyretin Human genes 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 102000005840 alpha-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010030291 alpha-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000012237 artificial material Substances 0.000 description 1
- 239000003637 basic solution Substances 0.000 description 1
- 108010051210 beta-Fructofuranosidase Proteins 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012611 container material Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000007334 copolymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 1
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 229960001867 guaiacol Drugs 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 208000003532 hypothyroidism Diseases 0.000 description 1
- 230000002989 hypothyroidism Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000001573 invertase Substances 0.000 description 1
- 235000011073 invertase Nutrition 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000011545 laboratory measurement Methods 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- IMAPVMCDQZNHHS-UHFFFAOYSA-N n-cyclohexyl-n'-(1-morpholin-4-ylcyclohexyl)methanediimine Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1(N2CCOCC2)CCCCC1 IMAPVMCDQZNHHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 1
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 239000000941 radioactive substance Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000009877 rendering Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 229960001922 sodium perborate Drugs 0.000 description 1
- ILXAOQAXSHVHTM-UHFFFAOYSA-M sodium;2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;chloride Chemical compound [Na+].[Cl-].OCC(N)(CO)CO ILXAOQAXSHVHTM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- YKLJGMBLPUQQOI-UHFFFAOYSA-M sodium;oxidooxy(oxo)borane Chemical compound [Na+].[O-]OB=O YKLJGMBLPUQQOI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- STCOOQWBFONSKY-UHFFFAOYSA-N tributyl phosphate Chemical compound CCCCOP(=O)(OCCCC)OCCCC STCOOQWBFONSKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940035722 triiodothyronine Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
- G01N33/78—Thyroid gland hormones, e.g. T3, T4, TBH, TBG or their receptors
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/81—Packaged device or kit
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/975—Kit
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/807—Apparatus included in process claim, e.g. physical support structures
- Y10S436/81—Tube, bottle, or dipstick
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
UjgftrA ΓΒ1 nn KUULUTUSJULKAISU /Q/r , UTLÄGGNINGSSKRIFT 6o65 3 • C (45) Patentti ay2nj.u-tty 10 10 1985
Patent oeddelat (51) Kv.lk.4/)nt.CL* C 12 « V00, G 01 N 33/78 (21) Patenttihakemus — Patentansokning 791720 (22) Hakemispäivä — Ansöknlngsdag 29.05.79 CFh ' ' (23) Alkupäivä — Giltighetsdag 29.05.79 (41) Tullut julkiseksi — Blfvit offentllg 12 ~j9
Patentti- ja rekisterihallitus Nähtäviksipanon ja kuul.julkaisun pvm.- 98 06 *85
Patent- och registerstyrelsen ' ' Ansökan utlagd och utl.skriften publicerad zo.uo .o? (32)(33)(31) Pyydetty etuoikeus — Begärd prioritet 1 2.06.78
Saksan Li i ttotasava1 ta-Förbunds repub 1i ken
Tyskland(DE) P 282565Ο.Ο (71) Boehringer Mannheim GmbH., Sandhofer Strasse 112-132, D-6800
Mannheim-Wa1dhof, Saksan Liittotasavalta-Förbundsrepubl iken Tyskland(DE) (72) Gerd Kleinhammer, Tutzing, Gerlinde Deutsch, Pöcking, Hans-Ralf Linke, Raisting, Fritz Stähler, Tutzing, Wolfgang Gruber,
Tutz i ng-Unterze i sme ring, Saksan Li i ttotasavalta-Förbunds republi ken Tyskland(DE) (7*0 Berggren Oy Ab (5I4) Menetelmä seerumin tyroksiinin si tomis indeks in määräämiseksi ja koepakkaus määrityksen suorittamiseksi - Metod för bestämning av tyroxin-bindningsindex i serum och testförpackning för utförande av bestämningen
Kilpirauhasdiagnostilkalla on kliinisen kemian alalla kilpirauhas- tutkimusten laajan levinneisyyden vuoksi erityinen merkitys. In-vitro- kilpirauhasdiagnostiikan perusajatus käsittää seerumissa olevan ko- konaistyroksiinin (Gesamt T^) määrityksen sekä tyroksiiniin sidotun globuliinin (TBG) pitoisuuden määrityksen, joka suoritetaan ns.
trijodityroniinin sitoutumisella (T-j-uptake) tai tyroksiinin sito- misindeksikokeena (TBI-tests).
Mainitulla T^-uptake-kokeella määritetään seerumin kilpirauhashor-moonin kantajaproteiinin jäännössitomiskapasiteetti (RBK). Näitä proteiineja ovat tyroksiinia sitova globuliini (TBG), johon noin 60 % kaikesta T^-määrästä on sitoutunut, sekä tyroksiinia sitova albumiinin esiaste (TBPA) ja albumiini. Näistä jäännössitomiskapa-siteeteista on niin ollen kilpirauhashormoonin sitoutuminen TBG:hen tärkein. Kilpirauhasen liikatoiminnassa, jolloin esiintyy esim. kohonnut -määrä, sitoutuu enemmän ja kilpirauhastoiminnan vajavuuden tapauksessa sitoutuu vähemmän kilpirauhashormoonia ja T^:a kantajaproteiinin sidospaikkoihin.
2 68653
Erään tunnetun TBI:n määritysmenetelmän mukaan sekoitetaan määrätty määrä radioaktiivista T^ra seeruminäytteen ja anioninvaihtajän kanssa. Kantajaproteiinin vapaat sidokset ja anioninvaihtaja kilpailevat radioaktiivisen T3 sitomisesta. Mitä enemmän vapaita paikkoja kantajaproteiinin sidoksessa on, sitä enemmän siihen sitoutuu radioaktiivista T3:a, lopun sitoutuessa ioninvaihtajaan. Tästä hyödytään mittaamalla radioaktiivisuus joko anioninvaihtajassa tai liuoksessa. Tyroksiinin sitomisindeksi (TBI) saadaan jakamalla tutkitun seerumin kantajaproteiiniin sitoutuneen T3:n radioaktiivisuus stan-dardiliuoksen radioaktiivisuuden kanssa ja kertomalla standardille ominaisella vakiolla. Tämän tunnetun menetelmän eräs epäkohta on, että joudutaan käyttämään radioaktiivisia aineita. Tämä taas vaatii toisaalta kalliit ja monimutkaiset määritysmenetelmät ja toisaalta lailliset määräykset vaikeuttavat radioaktiivisten reanenssien käsittelyä näiden aineiden potentiaalisen terveysvaaran takia.
Keksintö perustuu tämän vuoksi tehtävään kehittää TBI-määritysmenetelmä, jolla ei ole näitä epäkohtia ja joka sallii kilpirauhasdiag-nostiikassa tavallisen laboratorion mittauslaitteistolle sopivan yksinkertaisen ja luotettavan TBI-määrityksen.
Tämä ongelma on ratkaistu menetelmällä määrittää seerumin tyroksiinin sitomisindeksi, joka on tunnettu siitä, että tutkittavaan seeruminäytteeseen sekoitetaan määrätty määrä tyroksiinia ja määrätty määrä tyroksiinia, johon sinänsä tunnetulla tavalla kcvalenttisesti sidottu määrätty määrä määritettävissä olevaa entsyymiä. Saatu liuos on kontaktissa kiinteässä faasissa olevan anti-tyroksiini-vasta-aineen kanssa, ja nestemäinen faasi erotetaan kiinteästä ja lisätyn entsyymin aktiviteetti määritetään jommasta kummasta faasista.
Keksinnössä on tunnetun T3~uptake-kokeen radioaktiivisella aineella merkitseminen korvattu merkitsemällä helposti määritettävällä entsyymillä. Tehdyt kokeet osoittavat kuitenkin, ettei ole mahdollista korvata tunnetun T3~uptaketestin radioaktiivisesta merkittyä T3:a(T3-Ji25^ entsyymillä merkityillä T3:lla tai T^rllä. Osoittautui nimittäin, että entsyymillä merkityt T3 tai T^ eivät sitoutuneet seerumin proteiinin sitoutumiskykyisiin paikkoihin. Oletettavasti entsyymi suuren kokonsa ansiosta on steerisenä esteenä sidoksen muodostumiselle.
Il 3 68653
Yllättävästi on huomattu, että entsyymillä merkitty T4 pystyy kilpailemaan entsyymillä merkitsemättömän T4*.n kanssa kiinteässä faasissa sijaitsevasta anti-T^-vasta-aineesta. Keksinnön mittausmenetelmien mukaan seerumin proteiinin sitoutumiskykyiset paikat ja liukenmaton anti-T4-vasta-aine kilpailevat T4:stä, jolloin T^:ää sitoutuu sitä enemmän anti-T^-vasta-aineeseen mitä vähemmän seerumilla on vapaita sidospaikkoja. Samanaikaisesti kilpailee entsyymillä merkitty T4 entsyymillä merkitsemättömän T4:n kanssa anti-T4~ vasta-aineesta. Tällöin mitä suurempi on seerumin tyroksiinin si-tomiskapasiteetti ja siis tyroksiinin sitomisindeksi TBI, sitä enemmän entsyymillä merkittyä T4:ää sitoutuu kiinteään faasiin. Kiinteästä faasista mitattu entsyymin aktiivisuus antaa täten suoran mitan tämän faasin TBI:lie. Kuitenkin aktiviteetti voidaan myös mitata liuoksesta faasista.
Merkintäentsyyminä voidaan keksinnön mukaisessa menetelmässä käyttää jokaista helposti määritettävissä olevaa entsyymiä, joka voidaan sitoa tyroksiiniin sen menettämättä aktiivisuuttaan. Edullista olisi keksinnön mukaisessa menetelmässä käyttää sellaista merkintä-entsyymiä, jonka aktiivisuus voidaan määrittää optisella menetelmällä, erikoisesti värireaktiolla näkyvän valon alueella tai NADH-pitoisuu-den muuttamisella. Tyypillisiä esim. merkintäentsyymiksi sopivista entsyymeistä ovat peroksidaasi (POD), glukoosioksidaasi, a- ja β-galaktosidaasi, glukoamylaasi, invertaasi ja alkaalinen fosfataasi.
Kaikille yllä mainituille entsyymeille on olemassa yksinkertaiset ja nopeat määritysmenetelmät, esimerkkinä viitataan H.U. Bergmeyerin kirjaan "Methoden der enzymatischen Analyse", Verlag Chemie, 3.
Auflage 1974. Kiinteässä faasissa oleva anti-T^-vasta-aine voi esiintyä ilman kantajaa esim. saattamalla se liukenemattomaksi ristisito-malla polyfunktionaalisten re^genssien, kuten dialdehydien, dioksidien ym. kanssa. Kuitenkin olisi suositeltavaa sitoa vasta-aine kiinteään kantajamateriaaliin. Anti-T4~vasta-aineen kiinteänä kantajana voi toimia jokainen materiaali, joka on inertti menetelmässä käytettävien aineiden suhteen. On huomattu, että lukuisten materiaalien kohdalla anti-T4~vasta-aine voidaan kiinnittää riittävän hyvin adsorptiovoimilla kantajamateriaalin pintaan. Valinnaisesti voidaan myös vasta-aine sitoa kantajamateriaaliin yleisesti käytössä olevilla menetelmillä biologisesti aktiivisen proteiinin sitomiseksi kiinteään kantajamateriaaliin. Tyyppiesimerkkeinä mainittakoon kantajan pinnan aktivointi bromi-syaani-menetelmällä, proteiinikopoly- 4 68653 meroinnilla, vasta-aineen ristisitomisella kantajaan polyfunktio-naalisella sidonta-aineella, kuten glutaarialdehydillä tai yms.
Nämä menetelmät ovat asiantuntijoille tuttuja.
Keksinnön mukaisessa menetelmässä olisi edullista käyttää astioita, kuten reagenssilaseja, joiden sisäpinta on pinnoitettu vasta-aineella. Astiamateriaalien tyyppiesimerkkejä ovat polystyroli, styroli-akryylinitriili-kopolymeraatti sekä muut keinotekoiset aineet ja lasi. Käytettäessä styrolipohjäistä keinoainesta saadaan riittävä pinnoitus säilyttämällä vasta-aineliuos vain jonkin aikaa astiassa.
Yllä mainitut menettelyt pätevät myös kantajamateriaaleihin, jotka eivät ole astioita, vaan koostuvat esimerkiksi pienistä osasista soveltuen pylvään täyteaineiksi.
Anti-T^-vasta-ainetta saadaan tavanomaisen menetelmän mukaan valmistettaessa hormonien vasta-aineita. Suositeltavaa olisi käyttää T4:n johdannaista immunogeenina siihen soveltuvalla kantajaproteiinilla. Alan ammattimiehille tunnetuista kantajaproteiineista on naudan seerumin albumiini (RSA) osoittautunut erityisen soveliaaksi. Kantajaproteiini liitetään kemiallisesti T4:ään, esimerkiksi glutaarialdehydillä heikosti emäksisessä liuoksessa ja yhdistämällä tähän pelkistys natriumboorihydridillä. Toinen sovelias yhdistämismenetelmä on reaktio morfolino-disykloheksyyli-karbodi-imidillä. Tällä tavoin saadun T4~immunogeenin soveltamiseen sopivia koe-eläimiä ovat esimerkiksi kaniinit tai lampaat. Myös muita eläinlajeja voidaan käyttää .
Keksinnön mukaisen edullisen T4:llä merkityn peroksidaasin valmistus suoritetaan tarkoituksenmukaisesti saattamalla t-butyylioksi-karbo-nyyli-tyroksiini-N-hydroksisukkiini-imidi reagoimaan POD:n kanssa ja puhdistamalla saatu tuote kromatograafisesti. Vastaavalla tavalla voidaan useimmat muut kysymykseen tulevat entsyymit sitoa käyttämällä toisia tunnettuja proteiinikemiallisia menetelmiä.
Kuten on mainittu, lisätään keksinnön mukaisessa menetelmässä määrätty määrä T4:ää. On havaittu, että tämä määrä on tarkoituksenmukaisesti välillä 100 ja 500 ng T4/ml seerumia. Voidaan kuitenkin käyttää suurempia tai pienempiä määriä. Yllä mainittu pitoisuusalue peittää kuitenkin kaikki käytännössä esiintyvät seerumin koostumukset ja riittää yhtä hyvin hyper- kuin hypotyroiideille seerumeille.
II
5 68653
Lisätyn entsyymillä merkityn T4:n määrä riippuu käytettävästä entsyymistä, ja erikoisesti tämän entsyymin spesifisestä aktiivisuudesta, joka on helposti määritettävissä. Kun käytetään edullista merkintää peroksidaasille (POD) on tarkoituksemukaista lisätä tätä sellainen määrä, että varsinaisena koeseoksena on noin 1-200 mU POD/ml.
Seerumin, puskuria, T^:ää ja entsyymillä merkittyä T^tää sisältävän reaktioseoksen annetaan olla tarpeeksi kauan kontaktissa liukenemattoman, erikoisesti kantajaan sidotun anti-T^-vasta-aineen kanssa, jotta saataisiin vakio määrä sidoksia merkityn T,j:n ja vasta-aineen välillä. Reaktion kesto riippuu tietyssä laajuudessa olosuhteista kuten pH-arvosta, lämpötilasta ja pitoisuudesta. Yleisesti riittää 1/2 - 2 tunnin vaikutusaika. Inkubaation jälkeen valutetaan liuos kantajasta, esimerkiksi dekantoimalla astiasta, kantaja pestään vedellä ja lopuksi määritetään kantajaan sitoutuneen entsyymin aktiivisuus. Suositeltavan menetelmän tapauksessa käytettäessä astiaan sopivaa kantajaa ja peroksidaasia (POD) merkintäentsyyminä lisätään esimerkiksi H202:ta ja ABTS ® :ää (2,2'-atsino-di/3-etyylibents-tiatsoliinisulfonaatti (6J_/ puskuriliuoksessa ja mitataan ekstinktio-differenssi aallonpituudella 405 nm.
Keksintö kohdistuu lisäksi koepakkaukseen keksinnön mukaisten menetelmien suorittamiseksi. Pakkaus koostuu pääasiassa tyroksiinista, entsyymillä merkitystä tyroksiinista, anti-tyroksiini-vasta-aineesta liukenemattomana kiintoaineena, puskurista ja entsyymin määritykseen tarvittavasta reagenssista. Sopivia puskureita ovat sellaiset, joiden pH-arvoalue voidaan säätää 7,5-9,3 välille. Suositeltavaa olisi pH-arvo välillä 8,0-9,0. ’ Annetun alueen käyttökelpoisten puskureiden tyypillisiä esimerkkejä ovat fpsfaattipuskurit, tris-puskurit, Lorakspuskurit, barbitaalipuskurit.
Edullista olisi käyttää 0,05-0,5 M barbitaalipuskuria.
Keksinnön mukaisessa koepakkauksessa voi myös lisäyksenä olla sta-bilisaattoreita kuten naudan seerumin albumiinia, hiilihydraatteja ja glyseriiniä.
Suositeltavaa olisi, että keksinnön mukainen koepakkaus sisältää entsyymillä merkittynä T^:nä tyroksiini-peroksidaasia. Tässä tapauksessa voi entsyymin aktiivisuuden määrittämiseen käytettävä rea- 6 68653 genssi olla H2C>2 tai H202:ta vapauttava yhdiste, kuten natriumper-boraatti tai perhydriitti sekä 2,21-atsino-di/3-etyylibentstiatso-liinisulfonaatti (6)_/, joka merkitään tavanmukaisesta ABTS ^ , sekä tähän sopiva puskuri. Esimerkki sopivasta puskurista on fosfaatti-sitraatti-puskuri, pH 4,5-6,0. Toinen tähän sopiva puskuri koostuu fosfaattipuskurista, pH 7,0, guajakolista ja vetyperoksidista.
Keksinnön mukainen koepakkaus sisältää eräässä erityisessä suoritusmuodossa seuraavaa: tyroksiinia 100-400 ng/ml tyroksiini-POD 5-100 mU/ml barbitaalipuskuria 0,1-0,2 M, pH 8,6 naudan seerumin albumiinia 0,2 % anti-tyroksiini-vasta-aine (laskettuna ilman kantajaa) 1-0,05 ^,ug/ml H202 0,5-5 mmol/1 ABTS 5-50 mmol/1 fosfaatti-sitraatti-puskuri,
pH 5,0 0,1-0,2 M
Entsyymillä merkityn tyroksiinin valmistamiseksi on suositeltavaa aloittaa t-butyylioksikarbonyyli-tyroksiini-N-hydroksisukkiini-imidillä ja reaktio tapahtuu puskuri/dimetyyliformamidi-liuokses-sa 1:1. Puskurissa käytetään kulloinkin käytetylle entsyymille parhaiten soveltuvaa puskuria. Johdannaisen puhdistamiseksi on fe-nyylibutyyliamiini-sefarcosi osoittautunut hyväksi.
Keksintö on mahdollistanut yksinkertaisen ja tavallisille laborato-riolaitteille soveltuvan menetelmän seerumin tyroksiinin sitomisin-deksin määrittämiseksi, jolla on sama tarkkuus muttei samoja haittapuolia kuin tunnetulla radioaktiivista merkintää käyttävällä menetelmällä.
Keksintöä selostetaan alla lähemmin esimerkkien avulla.
Esimerkki 1 A. Anti-tyroksiini-vasta-aineen valmistus
Tyroksiini liitetään naudan seerumin albumiiniin vesiliuoksessa, jonka pH on 10, lisäämällä 1,9 paino-% glutaarialdehydiä jonka jälkeen Schiff-Basensidos pelkistetään käyttämällä ylimäärin natrium-boorihydridiä ja T4~immunogeeni puhdistetaan kromatograafisesti. Saatu tuote dialysoidaan ja testataan koe-eläimillä.
Il 7 68653 B. Tj-PODtn valmistus POD saatetaan reagoimaan t-butyylioksikarbonyyli-tyroksiini-N-hydroksisukkiini-imidin kanssa, jota on molaarisesti kymmenkertaisesti ylimäärin, dimetyyliformamidi/fosfaattipuskurissa, pH 8,5, 1:1. Tämän jälkeen poistetaan DMF dialysoimalla ja vesiliuos johdetaan fenyylibutyyliamiin i-sefaroosin lävitse. Pylväs pestään tris-NaCl-puskurilla ja eluoidaan 1 M NaCl sisältävällä etyleeniglyko-li/vesi-seoksella 1:1. Eluaattia sekoitetaan kaksi tuntia 0,5 M hydroksyyliamiinin kanssa, ja lopuksi dialysoidaan fosfaattipuskuria vastaan. Saatua liuosta sekoitetaan naudan seerumin albumiinin kanssa ja kylmäkuivataan.
C. Kantajaan sidotun anti-T^-vasta-aineen valmistus
Anti-T^-vasta-aine saadaan tunnetulla tavalla immunisoiduista koe-eläimistä ja saostetaan ammoniumsulfaatilla. Saostuma liuotetaan 0,04 M fosfaattipuskuriin pitoisuuteen 1:6000. 1,5 ml näin saatua liuosta annetaan seistä yön yli styrooli-akryylinitriili-sekapoly-meraatti (Luran) reagenssilaseissa, jonka jälkeen liuos imetään pois ja lasit pestään 1 % RSArta sisältävällä fysiologisella keittosuolaliuoksella ja kuivataan.
D. Määrityksen suorittaminen
Kohdassa C saadulla anti-T^-vasta-aineella pinnoitettuihin reagens-silaseihin pipetoidaan 10 ^ul seerumia ja reagenssia, joka sisältää 280 ng T4/ml ja 10 mU/ml T4-P0D:ia 0,12 M barbitaalipus-kurissa, pH 8,6, ja 0,2 % naudan seerumin albumiinia. Peagenssiseos saa seistä 2 tuntia huoneenlämmössä. Tämän jälkeen lasit imetään tyhjiksi ja POD-rea-genssi lisätään, niihin. Mainittu reagenssi koostuu seuraavista aiheista; 1,47 rtfi/l l*2®2 ^ nrool/l ABTS 0,2 M f osf aattisitraattipuskurissa, pH 5,0. Synty vä värimuutos mitataan 45 nm:llä.
Tulosten tulkinnassa kahden erilaisen T^-sitomiskapasiteetin omaavan standardin avulla, joita käsitellään samoin kuin näytteitä, muodostetaan standardisuora, jossa piirretään näille standardeille mitattujen ekstinktioiden käänteisluvut joko standardiin sitomaa T^-määrää vastaan tai suoraan ennakolta mitattuja standardien TBI-arvoja vastaan.
E. Menetelmän käyttö ihmisseerumin tutkimiseen 83 ihmisseerumia tutkittiin keksinnön mukaisella ja jo kaupan olevalla 8 68653 T3-J225 menetelmäHä. Jos tutkitut seerumit luokitellaan kulloinkin saadun TBI-arvon perusteella kyseessä olevan menetelmän normaali-alueen mukaan näytteisiin, joilla on pienentynyt, normaali ja kohonnut T^-sitomiskapasiteetti, osoittautuu, että molempien menetelmien välillä on tyydyttävä korrelaatio (katso taulukko 1).
Taulukko 1 1 2 3 1 28 1 2 1 28 3 3 22 1) pienentynyt 2) normaali ) 3) kohonnut ) Vsitomiskapasiteetti
Taulukko 1: Keksinnön mukaisen menetelmän TBI-määrityksen (A) ver tailu tavanmukaiseen TBI-radio-määritykseen (B) käyttämällä ihmis-seeruminäytteitä (n = 83).
Claims (8)
1. Menetelmä seerumin tyroksiinin sitomisindeksin määrittämiseksi, tunnettu siitä, että tutkittavaan seeruminäytteeseen lisätään määrätty määrä tyroksiinia ja määrätty määrä tyroksiiniin kovalentti-sesti sidottua määritettävissä olevaa entsyymiä, saatu liuos saatetaan kontaktiin kiinteässä faasissa olevaan anti-tyroksiini-vasta-aineen kanssa, liuosfaasi erotetaan kiinteästä ja lisätyn määritettävissä olevan entsyymin aktiivisuus määritetään jommasta kummasta faasista.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että määritettävänä entsyyminä käytetään peroksidaasia.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että anti-tyroksiini-vasta-aine käytetään kantajaan sidotussa muodossa.
4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kiinteänä faasina käytetään astiaa, jonka sisäpinta päällystetään vasta-aineella.
5. Jonkin edellisen patenttivaatimuksen mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että lisätään 100-500 ng tyroksiinia/ml seerumia.
6. Jonkin edellisen patenttivaatimuksen mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että lisätään 1-200 mU/mL tyroksiiniin sidottua peroksidaasia.
7. Koepakkaus jonkin edellisen patenttivaatimuksen mukaisen menetelmän suorittamiseksi, tunnettu siitä, että se sisältää tyroksiinia, entsyymillä merkittyä tyroksiinia, kiinteään kantajaan sidottua anti-tyroksiini-vasta-ainetta, puskuria, entsyymin aktiivisuuden määrittämiseen tarvittavaa reagenssia ja mahdollisesti stabilisaattoreita ja immuunireaktiota edistäviä aineita.
8. Patenttivaatimuksen 7 mukainen koepakkaus, tunnettu siitä, että se sisältää ainakin: 10 68653 tyroksiinia 100-400 ng/ral tyroksiini-POD:ia 5-100 mU/ml barbitaalipuskuria 0,1-0,2 M, pH 8,6 naudan seerumin albumiinia 0,2 % anti-tyroksiini-vasta-ainetta (laskettuna ilman 1-0,05 ,ug/ml kantajaa) ' H202:a 0,5-5 mmol/1 ABTS:a 5-50 mmol/1 fosfaatti-sitraatti- puskuria, pH 5,0 0,1-0,2 M II 68653
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE2825650 | 1978-06-12 | ||
| DE2825650A DE2825650C3 (de) | 1978-06-12 | 1978-06-12 | Verfahren zur Bestimmung des Thyroxin-bindungsindex im Serum |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI791720A7 FI791720A7 (fi) | 1979-12-13 |
| FI68653B FI68653B (fi) | 1985-06-28 |
| FI68653C true FI68653C (fi) | 1985-10-10 |
Family
ID=6041575
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI791720A FI68653C (fi) | 1978-06-12 | 1979-05-29 | Metod foer bestaemning av tyroxin-bindningsindex i serum och testfoerpackning foer utfoerande av bestaemningen |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4467030A (fi) |
| EP (1) | EP0006998B1 (fi) |
| JP (1) | JPS551590A (fi) |
| AT (1) | AT361134B (fi) |
| CA (1) | CA1122119A (fi) |
| CS (1) | CS208781B2 (fi) |
| DE (2) | DE2825650C3 (fi) |
| ES (1) | ES481490A1 (fi) |
| FI (1) | FI68653C (fi) |
| HU (1) | HU182464B (fi) |
| YU (1) | YU136479A (fi) |
| ZA (1) | ZA792871B (fi) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4410633A (en) * | 1980-09-25 | 1983-10-18 | Corning Glass Works | Method for the measurement of free thyroxine or 3,5,3'-triiodothyronine in a liquid sample |
| DE3122019C2 (de) * | 1981-06-03 | 1983-11-10 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und Vorrichtung zur Durchführung eines automatisierten kontinuierlichen Enzymimmunotestes |
| DE3504406A1 (de) * | 1985-02-08 | 1986-08-14 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren zur bestimmung der bindungskapazitaet des thyroxin bindenden globulins |
| DE3546014A1 (de) * | 1985-12-24 | 1987-06-25 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur bestimmung der bindungskapazitaet des thyroxin bindenden tbg |
| DE3812610A1 (de) * | 1988-04-15 | 1989-10-26 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur bestimmung der thyroxinbindekapazitaet und dazu geeignete standardloesung |
| JP5997446B2 (ja) * | 2011-02-03 | 2016-09-28 | アークレイ株式会社 | 甲状腺ホルモン固定化担体の液体試薬およびその用途 |
| CN115808519A (zh) * | 2022-07-15 | 2023-03-17 | 桂林电子科技大学 | 一种用于甲状腺素检测的化学发光试剂盒及其制备方法 |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NL154598B (nl) * | 1970-11-10 | 1977-09-15 | Organon Nv | Werkwijze voor het aantonen en bepalen van laagmoleculire verbindingen en van eiwitten die deze verbindingen specifiek kunnen binden, alsmede testverpakking. |
| US4040907A (en) * | 1974-06-20 | 1977-08-09 | Syva Company | Iodothyronine enzyme conjugates |
| US3962039A (en) * | 1974-08-08 | 1976-06-08 | Center For Laboratory Medicine | Analytical procedure for thyroid hormones |
| US4043872A (en) * | 1975-02-20 | 1977-08-23 | Syva Company | Polyiodothyronine immunoassay |
| US4081245A (en) * | 1976-05-03 | 1978-03-28 | Beckman Instruments, Inc. | Immunoassay procedure employing novel immunochemical composites |
| US4032626A (en) * | 1976-06-30 | 1977-06-28 | Corning Glass Works | Reagent and method for tbg assay |
| US4052504A (en) * | 1976-06-30 | 1977-10-04 | Corning Glass Works | Assay for thyroxine binding globulin |
| GB1573627A (en) * | 1976-09-18 | 1980-08-28 | Ismail A A A | Process and device for the determination and detection of a reaction component |
| US4168207A (en) * | 1977-08-03 | 1979-09-18 | Syva Company | TBG assay |
-
1978
- 1978-06-12 DE DE2825650A patent/DE2825650C3/de not_active Expired
-
1979
- 1979-05-02 CA CA000326897A patent/CA1122119A/en not_active Expired
- 1979-05-21 CS CS793505A patent/CS208781B2/cs unknown
- 1979-05-28 AT AT386979A patent/AT361134B/de not_active IP Right Cessation
- 1979-05-29 FI FI791720A patent/FI68653C/fi not_active IP Right Cessation
- 1979-06-06 EP EP79101785A patent/EP0006998B1/de not_active Expired
- 1979-06-06 DE DE7979101785T patent/DE2961673D1/de not_active Expired
- 1979-06-11 YU YU01364/79A patent/YU136479A/xx unknown
- 1979-06-11 ZA ZA792871A patent/ZA792871B/xx unknown
- 1979-06-11 HU HU79BO1790A patent/HU182464B/hu not_active IP Right Cessation
- 1979-06-12 JP JP7311379A patent/JPS551590A/ja active Granted
- 1979-06-12 ES ES481490A patent/ES481490A1/es not_active Expired
-
1981
- 1981-05-15 US US06/263,948 patent/US4467030A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE2825650C3 (de) | 1981-02-05 |
| JPH0146828B2 (fi) | 1989-10-11 |
| DE2961673D1 (en) | 1982-02-18 |
| FI791720A7 (fi) | 1979-12-13 |
| DE2825650A1 (de) | 1979-12-13 |
| CA1122119A (en) | 1982-04-20 |
| FI68653B (fi) | 1985-06-28 |
| EP0006998B1 (de) | 1981-12-30 |
| HU182464B (en) | 1984-01-30 |
| US4467030A (en) | 1984-08-21 |
| DE2825650B2 (de) | 1980-05-29 |
| ATA386979A (de) | 1980-07-15 |
| ES481490A1 (es) | 1980-01-16 |
| JPS551590A (en) | 1980-01-08 |
| ZA792871B (en) | 1980-07-30 |
| EP0006998A1 (de) | 1980-01-23 |
| AT361134B (de) | 1981-02-25 |
| CS208781B2 (en) | 1981-09-15 |
| YU136479A (en) | 1984-04-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4434236A (en) | Immunoassay wherein labeled antibody is displaced from immobilized analyte-analogue | |
| US4859583A (en) | Chemiluminescent immunochemical technique for low molecular weight antigens | |
| US3999948A (en) | Diagnostic reagent holder and method | |
| FI102921B (fi) | Menetelmä biologisesti aktiivisten reagenssien valmistamiseksi sukkiin i-imidiä sisältävistä polymeereistä, analyysielementti ja menetelmiä n iiden käyttämiseksi | |
| EP0321261B1 (en) | Use of immobilized biotinylated receptor in test device, kit and method for determining a ligand | |
| US5188939A (en) | Displacement immunoassay utilizing an oligavalent labelled antibody | |
| JPS6367661B2 (fi) | ||
| US4804625A (en) | Assay procedures | |
| CA2046130A1 (en) | Biologically active reagent, analytical element and methods for use of the reagent | |
| EP0587222A2 (en) | Dry immunoassay elements with a separate absorbent layer | |
| US4366242A (en) | Method and agent for the immunological determination of enzymes | |
| KR960016717B1 (ko) | 검체의 검출방법 및 시약 | |
| FI68653C (fi) | Metod foer bestaemning av tyroxin-bindningsindex i serum och testfoerpackning foer utfoerande av bestaemningen | |
| US5188938A (en) | Enzyme quantitation wicking assay | |
| EP0431682B1 (en) | Buffered wash composition, insolubilizing composition, test kits and method of use | |
| JPH0792460B2 (ja) | 抽出組成物として界面活性剤混合物を使用する歯周病に随伴する微生物検出用キットおよびその検出方法 | |
| IE64286B1 (en) | Process for the determination of an immunologically detectable substance and a suitable vessel therefor | |
| EP0152254A2 (en) | Chromogenic support immunoassay utilizing labeled complement components | |
| JP2749104B2 (ja) | アミンオキシドを含有する免疫化学的アツセイ用の試薬 | |
| JPH0346565A (ja) | 磁性体を利用した酵素免疫測定法 | |
| EP0658251A1 (en) | Water soluble polymers for use in immunoassays and dna hybridization assays | |
| CA1336163C (en) | Enzyme quantitation wicking assay | |
| EP0537826B1 (en) | Diagnostic test kit and specific binding assay using a peroxidase label and a modulator of signal | |
| CA1087324A (en) | Diagnostic reagent holder and method | |
| CA1093222A (en) | Diagnostic reagent holder and method |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed | ||
| MM | Patent lapsed |
Owner name: BOEHRINGER MANNHEIM GMBH |