CS200548B2 - Determination method of unbonded hormones or medicaments - Google Patents
Determination method of unbonded hormones or medicaments Download PDFInfo
- Publication number
- CS200548B2 CS200548B2 CS782722A CS272278A CS200548B2 CS 200548 B2 CS200548 B2 CS 200548B2 CS 782722 A CS782722 A CS 782722A CS 272278 A CS272278 A CS 272278A CS 200548 B2 CS200548 B2 CS 200548B2
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- antibody
- hormones
- hormone
- unbound
- gel
- Prior art date
Links
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 title claims abstract description 71
- 239000005556 hormone Substances 0.000 title claims abstract description 71
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 26
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 12
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 claims description 14
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 claims description 14
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 10
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 7
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 claims description 4
- 230000001837 anti-cortisol effect Effects 0.000 claims description 3
- 229920006322 acrylamide copolymer Polymers 0.000 claims description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 claims description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 14
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 14
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 abstract 1
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 18
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 12
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 9
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 8
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 7
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N Methacrylic acid Chemical compound CC(=C)C(O)=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 5
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 5
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 5
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 description 5
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 2-Propenoic acid Natural products OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 4
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 4
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 2
- MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N Testostosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000007334 copolymerization reaction Methods 0.000 description 2
- -1 estosterone Chemical compound 0.000 description 2
- 239000007863 gel particle Substances 0.000 description 2
- 102000036124 hormone binding proteins Human genes 0.000 description 2
- 108091011044 hormone binding proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 2
- 229960003604 testosterone Drugs 0.000 description 2
- XUIIKFGFIJCVMT-UHFFFAOYSA-N thyroxine-binding globulin Natural products IC1=CC(CC([NH3+])C([O-])=O)=CC(I)=C1OC1=CC(I)=C(O)C(I)=C1 XUIIKFGFIJCVMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DNXHEGUUPJUMQT-UHFFFAOYSA-N (+)-estrone Natural products OC1=CC=C2C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CCC2=C1 DNXHEGUUPJUMQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PROQIPRRNZUXQM-UHFFFAOYSA-N (16alpha,17betaOH)-Estra-1,3,5(10)-triene-3,16,17-triol Natural products OC1=CC=C2C3CCC(C)(C(C(O)C4)O)C4C3CCC2=C1 PROQIPRRNZUXQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JHPBZFOKBAGZBL-UHFFFAOYSA-N (3-hydroxy-2,2,4-trimethylpentyl) 2-methylprop-2-enoate Chemical compound CC(C)C(O)C(C)(C)COC(=O)C(C)=C JHPBZFOKBAGZBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 17β-estradiol Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000055 Corticotropin-Releasing Hormone Substances 0.000 description 1
- XUIIKFGFIJCVMT-GFCCVEGCSA-N D-thyroxine Chemical compound IC1=CC(C[C@@H](N)C(O)=O)=CC(I)=C1OC1=CC(I)=C(O)C(I)=C1 XUIIKFGFIJCVMT-GFCCVEGCSA-N 0.000 description 1
- WDJUZGPOPHTGOT-OAXVISGBSA-N Digitoxin Natural products O([C@H]1[C@@H](C)O[C@@H](O[C@@H]2C[C@@H]3[C@@](C)([C@@H]4[C@H]([C@]5(O)[C@@](C)([C@H](C6=CC(=O)OC6)CC5)CC4)CC3)CC2)C[C@H]1O)[C@H]1O[C@@H](C)[C@H](O[C@H]2O[C@@H](C)[C@@H](O)[C@@H](O)C2)[C@@H](O)C1 WDJUZGPOPHTGOT-OAXVISGBSA-N 0.000 description 1
- LTMHDMANZUZIPE-AMTYYWEZSA-N Digoxin Natural products O([C@H]1[C@H](C)O[C@H](O[C@@H]2C[C@@H]3[C@@](C)([C@@H]4[C@H]([C@]5(O)[C@](C)([C@H](O)C4)[C@H](C4=CC(=O)OC4)CC5)CC3)CC2)C[C@@H]1O)[C@H]1O[C@H](C)[C@@H](O[C@H]2O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](O)C2)[C@@H](O)C1 LTMHDMANZUZIPE-AMTYYWEZSA-N 0.000 description 1
- DNXHEGUUPJUMQT-CBZIJGRNSA-N Estrone Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 DNXHEGUUPJUMQT-CBZIJGRNSA-N 0.000 description 1
- KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N N,N,N',N'-tetramethylethylenediamine Chemical compound CN(C)CCN(C)C KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- 102000002248 Thyroxine-Binding Globulin Human genes 0.000 description 1
- 108010000259 Thyroxine-Binding Globulin Proteins 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000003929 acidic solution Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 description 1
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 1
- 229940035676 analgesics Drugs 0.000 description 1
- 239000000730 antalgic agent Substances 0.000 description 1
- 230000002513 anti-ovulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940097217 cardiac glycoside Drugs 0.000 description 1
- 239000002368 cardiac glycoside Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000003433 contraceptive agent Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- IDLFZVILOHSSID-OVLDLUHVSA-N corticotropin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO)C1=CC=C(O)C=C1 IDLFZVILOHSSID-OVLDLUHVSA-N 0.000 description 1
- 229960000258 corticotropin Drugs 0.000 description 1
- 108010024337 cortisol binding globulin Proteins 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 1
- DOBMPNYZJYQDGZ-UHFFFAOYSA-N dicoumarol Chemical compound C1=CC=CC2=C1OC(=O)C(CC=1C(OC3=CC=CC=C3C=1O)=O)=C2O DOBMPNYZJYQDGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001912 dicoumarol Drugs 0.000 description 1
- 229960000648 digitoxin Drugs 0.000 description 1
- WDJUZGPOPHTGOT-XUDUSOBPSA-N digitoxin Chemical compound C1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](C)O[C@@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@@H](O[C@@H]3C[C@@H]4[C@]([C@@H]5[C@H]([C@]6(CC[C@@H]([C@@]6(C)CC5)C=5COC(=O)C=5)O)CC4)(C)CC3)C[C@@H]2O)C)C[C@@H]1O WDJUZGPOPHTGOT-XUDUSOBPSA-N 0.000 description 1
- 229960005156 digoxin Drugs 0.000 description 1
- LTMHDMANZUZIPE-PUGKRICDSA-N digoxin Chemical compound C1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](C)O[C@@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@@H](O[C@@H]3C[C@@H]4[C@]([C@@H]5[C@H]([C@]6(CC[C@@H]([C@@]6(C)[C@H](O)C5)C=5COC(=O)C=5)O)CC4)(C)CC3)C[C@@H]2O)C)C[C@@H]1O LTMHDMANZUZIPE-PUGKRICDSA-N 0.000 description 1
- LTMHDMANZUZIPE-UHFFFAOYSA-N digoxine Natural products C1C(O)C(O)C(C)OC1OC1C(C)OC(OC2C(OC(OC3CC4C(C5C(C6(CCC(C6(C)C(O)C5)C=5COC(=O)C=5)O)CC4)(C)CC3)CC2O)C)CC1O LTMHDMANZUZIPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 229960005309 estradiol Drugs 0.000 description 1
- 229930182833 estradiol Natural products 0.000 description 1
- PROQIPRRNZUXQM-ZXXIGWHRSA-N estriol Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H]([C@H](O)C4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 PROQIPRRNZUXQM-ZXXIGWHRSA-N 0.000 description 1
- 229960001348 estriol Drugs 0.000 description 1
- 229960003399 estrone Drugs 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 238000003505 heat denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010324 immunological assay Methods 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 1
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 1
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 150000003873 salicylate salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 229930002534 steroid glycoside Natural products 0.000 description 1
- 239000003270 steroid hormone Substances 0.000 description 1
- 150000008143 steroidal glycosides Chemical class 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 230000028016 temperature homeostasis Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000005495 thyroid hormone Substances 0.000 description 1
- 229940036555 thyroid hormone Drugs 0.000 description 1
- 229940034208 thyroxine Drugs 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940082632 vitamin b12 and folic acid Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
- G01N33/743—Steroid hormones
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/815—Test for named compound or class of compounds
- Y10S436/817—Steroids or hormones
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
Vynález se týká způsobu stanovení nevázaných hormonů nebo léčiv.
Steroidy jsou v lidském séru vázány na bílkoviny. Stanovení hormonů v klinickoChemické analytice hormonů je založeno téměř výlučně na principu uvolnění vazby přenosových bílkovin s hormony a na měření celkové koncentrace hormonu. Jako techniky к uvolňování vazby přicházejí v úvahu nejrůznější způsoby, například extrakce rozpouštědly, denaturace teplem, enzymová hydrolýza a působení kyselin nebo alkálií.
Obsah vazebných bílkovin v lidském séru však není vždy stejně veliký. Je známo, že u pacientek při antiovulační terapii nebo v pozdním těchotenství jsou měřeny například zřetelně zvýšené hodnoty globulinu vázajícího kortisol, popřípadě globulinu vázajícího thyroxin. Kromě toho bylo nalezeno izolované zvýšení nebo snížení obsahu vazebných bílkovin, jejichž rodinná kumulace a dědičnost jsou ještě diskutovány.
Takové změněné hladiny vazebných bílkovin vedou při stanovení celkového hormonu к hodnotám, které svědčí o nějakém syndromu, zatímco u pacientů se však klinický obraz příslušného syndromu neukazuje, protože regulace hormonu probíhá zřejmě jen přes podíl nevázaný na bílkovinu, zatímco podíl vázaný na bílkovinu je biologicky neaktivní.
Známé způsoby stanovení na bílkovinu vázaného a volného hormonu jsou buď takové, u kterých se udržuje rovnováha mezi vázaným a volným hormonem v průběhu dělení, jako například při klasické rovnovážné dialýze nebo při ultrafiltraci, nebo způsoby, při kterých se sice během dělení neudržuje rovnováha, jako například při sloupcové chromatografii nebo při adsorpčních metodách, které však nicméně poskytují míru skutečně volného podílu hormonu. Reakční doba při těchto způsobech představuje kritický faktor, protože vazba mezi adsor· bentem a steroidem je ireverzibilní.
Známé dělicí postupy jsou velice náročné a poskytují jenom procentuální podíl volného hormonu. Absolutní hodnota musí být vypočtena pomocí dodatečného zjištění celkové koncentrace hormonu. Tímto nepřímým stanovením je měření spojeno s odpovídající nepřesností, nehledě na mimořádně náročné techniky, které jsou nutné ke stanovení procentuálního podílu.
Úkolem vynálezu je vytvoření způsobu stanovení nevázaných hormonů nebo léčiv, který dovoluje stanovení absolutní koncentrace volných hormonů a nikoli jenom procentuálního podílu. Způsob má být dále jedno duchý a automatizovatelný.
Předmětem vynálezu je způsob 'stanovení nevázaných hormonů nebo léčiv pomocí reakce hormonů nebo léčiv s protilátkou a radioimunologickým vyhodnocením, vyznačující se tím, ' že roztok obsahující nevázané hormony, hormony vázané na vazebné bílkoviny a vazebné bílkoviny, se nanáší na imobillzovanou protilátku, například antikortizolovou protilátku, načež nevázaný hormon se nechá rágovat s protilátkou, hormony vázané na vazebné bílkoviny a vazebné bílkoviny se eluují roztokem, který obsahuje značený hormon, ' značený hormon se nechá reagovat s protilátkou, značený hormon nezreagovaný s protilátkou se eluuje a stanoví, například radiologicky.
Způsob podle vynálezu dovoluje stanové-, ní absolutní koncentrace nevázaných hormonů nebo léčiv jediným postupem. - Tato metoda stanovení je mimořádně jednoduchá, rychlá a automatizovatelná.
Způsob podle vynálezu spočívá na následujícím principu: V séru nebo' plazmě jsou hormon nebo léčiva [H] podle Guldberg-Waageova zákona v termodynamické rovnováze s přenosovou bílkovinou (B):
H+B^HB
Nanese-li se sérum na sušený prášek gelu protilátky začne matrice silně bobtnat. Toto bobtnání, které probíhá velmi rychle, vede k rychlému 'oddělení difundovatelného volného hormonu a komplexu hormonu s vazebnou bílkovinou, poněvadž při bobtnání pro malou velikost pórů matrice mohou do ní vniknout - jen poměrně - malé ' molekuly. Malý volný hormon se strhává s tekutinou dó nitra ' gelu V,, zatímco bílkoviny a ' hormony vázané' na bílkoviny pro malou - velikost pórů . gelu mohou používat ' - pouze vnějšího objemu Va, - obklopujícího částice gelu. Bobtnáním se. dosáhne prakticky - velmi rychlého a dokonalého - oddělení volného - a vázaného hormonu. .·..
Poněvadž -.je - v objemu V, obklopeném - částicemi gelu,' který činí' asi 80 až 90 % celkového. . objemu gelu, -' Obsažena protilátka, uskuteční - se - tam -reakce protilátky ' š přitékajícím - hormonem: '
AK +' H^ AkH ·
Ve druhém ' stupni probíhá eluce pouze tak dlouho, až je vymyt vnější objem obklopující částice' Va. V objemu Va jsou mimo jiné obsažený vazebná bílkovina a komplex hormonu s vazebnou bílkovinou.
Difundovatelný hormon je obsažen po bobtnání převážně ve vnitřním objemu zrna gelu. V,. Během bobtnání zreagovala protilátka již s hormonem. ' Objem Vf je dále podstatně větší než Va. Z těchto důvodů ' se elucí, která zahrnuje jenom vnější objem Va zrna gelu, vymývá z gelu málo difundovatelného hormonu.
Provádí-li se eluce komplexu hormonu s vazebnou bílkovinou roztokem, který obsahuje značený hormon, lze druhou reakcí vázat značeným hormonem tu protilátku, která ještě nevytvořila komplex s neznačeným hormonem.
Protože reakce neznačeného hormonu a značeného hormonu s protilátkou probíhají po sobě, nemusí se při inkubací . se značeným hormonem čekat na ustavení rovnováhy. Po určité době může se provádět dělení protilátkou vázaného a nevázaného hormonu - elucí roztokem pufru.
Měření koncentrace značeného hormonu v eluátu nebo gelu lze provádět radiologicky známým způsobem. Radioimunologické stanovení neznačených hormonů je rovněž známo. Podrobný popis. radioimunologického stanovení ' lze nalézt, například v Clinical Chemistry, sv. 19, č. 2, 1973, str. 145. V úvahu přicházejí rovněž alternativní - - způsoby stanovení, jako fluoroimunologické stanovení nebo stanovení pomocí enzymového značení.
Způsob podle vynálezu - je vhodný k stanovení různých hormonů a léčiv, která se vyskytují v séru nebo plazmě, vázány zčásti na specifické nebo nespecifické vazebné bílkoviny. V úvahu přicházejí hormony štítné žlázy, zejména . -thyroxin a trjjodthyronin, steroidní hormony, jako kortisol, ťestosteron, progesteron, estron, estradiol a estriol, a srdeční glykosidy, jako digitoxin a digoxin. Dále mohou být stanoveny vitamíny, zejména vitamín B12 a kyselina listová, jakož i léčiva se silnou vazbou na bílkoviny, jako například antikoagulancia, dikumarol, analgetika a salicyláty.
Protilátky lze imobilizovat pomocí různých matric. Příklady matric - jsou agaróza, - celulóza, částice skla, polyamidy, polyakrylamidy a. kopolymery akrylamidu. Poslední jsou obzvláště výhodné. Výhody protilátky uzavřené v matrici spočívají ve vyloučení rušivých molekul s vyšší - molekulární hmotností, . úspoře pipetování a odstřeďování a dlouhé trvanlivosti imobilzované protilátky - při teplotě místnosti.
Kopolymerací - akrylamidu s kopolymerovatelnými sloučeninami lze ovlivňovat mikrookolí polymerní matrice. Účinek - ' spočívá v podstatě na hydrofóbních a hýdrofilních, jakož i elektrostatických ' efektech.
Obměnou polymerní - matrice pomocí kopolymerace jě možné podstatné zvýšení vazebné specifičnosti protilátky a potlačení nežádoucích zkřížených reaktivit.
Přednost se dává zejména kopolymerům z akrylamidu a z jedné - nebo více sloučenin typu kyseliny akrylové, kyseliny methakrylové, methabutylamidu, jejich derivátů - a solí kyseliny akrylové a methakrylové.
- Podíl' alkylamidu v kopolymeru '- může činit mezi 1 a 99<%o molárních, s -výhodou 5 až 95 % a zejména 20 až 80 % molárních.
Obzvláště vhodné jsou kopolymery z akřy.lamidu a -kyseliny methakrylové a zejmé na takové, u kterých podíl kyseliny methakrylové činí 20 až 60 molárních procent.
Použitím kopolymerů, které obsahují kyselinu akrylovou nebo* methakrylovou * nebo jejich soli, lze docííit * dále u kyselých popřípadě alkalických roztoků neutralizačního efektu nebo účinku pufru. Jako solí jsou výhodné soli alkalických kovů a/nebo soli kovů alkalických zemin.
Výrobu polymerních matric s imobilizovanou protilátkou lze realizovat například tak, že se ke směsi monomerů přidá roztok protilátky. Roztok se zpolymeruje například radikálově a * získaný polymer se rozmělní, promyje a vysuší.
K docílení vhodné velikosti pórů polymerní matrice se mění koncentrace monomeru. Koncentrace monomeru v rozsahu asi 20 % vede k velikosti pórů asi od 7 do 10 angstromů.
Na výkresu je znázorněno uspořádání k automatizovanému provedení způsobu podle vynálezu.
Imobilizovaná protilátka je umístěna v malých sloupečcích 5. Ty jsou upevněny na ploše adaptéru 4. Pod tím- jsou uspořádány dávkovači a jímací nádobky, které mohou spolu tvořit jednotku 6. Sloupečky 5 jsou spojeny pomocí přívodů 7 s čerpadly 1 a 2. Zařízení je · ovládáno elektronickým * zařízením 3.
Vzorek, který má být stanoven, se vloží do reakční nádobky a zasune, pod připravený sloupeček 5 s protilátkou. Potom se na elektronickém zařízení nastaví následující program: . .
Jedno nebo obě čerpadla běží po určitou dobu zpětně, čímž se vzorek nasaje do suchého gelu s protilátkou.
Potom následuje krátká přestávka. Během této doby probíhá proces bobtnání gelu a oddělování volných a bílkovinou vázaných hormonů. Tato fáze bobtnání je řádově velikosti 1 minuty.
V dalším stupni běží obě čerpadla, přičemž čerpadlo 1 dodává eluční tekutinu, například roztok pufru nebo vodu a čerpadlo 2 dodává eluční tekutinu · se značeným hormonem (tracerem) nebo běží jenom čerpadlo 2. Tímto způsobem se eluuje současně frakce bílkoviny a nanáší se tracer.
Aby se tracer před nanesením do gelu nemísil s roztokem pufru, tj. aby nebyl zřeďován, přivádějí se roztok pufru a traceru oddělenými kanály, které končí přímo nad gelem. Tato eluce a nanášení traceru má probíhat pokud možno rychle, aby hormon neměl čas difundovat ven z gelu.
Požadované přesnosti stanovení se dosahuje, jestliže se buď značkovaný hormon přidává v přesné dávce, nebo pracuje-li se v oblasti nasycení protilátky.
Potom následuje další přestávka, kdy značkovaný hormon reaguje s ještě volnými místy zmobilizované protilátky. Tento interval je obvykle řádově velikosti asi 10 minut. Potom následuje eluce čistým roztokem pufru, zatímco čerpadlo 1 běží vpřed. Touto e lucí se dosáhne oddělení značeného hormonu vázaného a nevázaného na protilátku.
V eluátu, popřípadě ve sloupečku zbývající radioaktivita je mírou koncentrace stanovených látek.
Kalibrační křivka se sestrojí tak, že * se známé koncentrace hormonu bez bílkoviny podrobí stejným reakčním stupňům.
Srovnání známých stanovení pomocí dialýzy a adsorpce na uhlí ukázalo, že způsobem podle vynálezu jsou měřeny skutečně jenom volné difundovatelné hormony. .
Systém znázorněný na výkresu představuje, více-kanálový systém, který umožňuje paralelní stanovení více vzorků.
Při praktickém provádění se ukázalo, že termoregulace na teplotu 0 °C ke snížení disociace není nutná, naopak, i při 22°C prováděná měření poskytla identické hodnoty.
Vynález je v dalším blíže popsán na příkladu, který ukazuje stanovení difundovatelného kortisolu v séru.
Výroba polymerního gelu s imobilizovanou protilátkou se provádí následujícím způsobem. Pro každou polymerační násadu byla koncentrace nastavena tak, aby celková koncentrace monomeru činila 3,13 mol/litr. Pro jednu násadu bylo rozpouštěno v kádince například 5 g akrylamidu, 1,25 g N,N‘-methylenbitakrylamidu ve 24 ml fosfátového pufru (pH 7,2). Při výrobě kopolymerů byl akrylamid * ekvimolárně nahrazen akrylovými deriváty. Po přidání antiséra v 1 ml fosfátového pufru byla reakce iniciována 0,15 .miligramy rlboflavinu a 0,10 ml N,N,N‘,N‘-tetramethylethylendiaminu a ultrafialovým zářením.
Zatímco doba ozařování byla asi 45 minut, teplota byla udržována pod 50 °C. Přitom byl blok gelu rozmělněn, promyt destilovanou vodou a vysušen.
Při stanovení difundovatelného kortisolu bylo použito dvou pístových čerpadel s dopravní rychlostí 0,68 ml/min (čerpadlo 1) a 0,5 ml/min (čerpadlo 2), která se mohou pohybovat vpřed a nazad. 60 mg suchého gelu s antikortisolovou protilátkou bylo dávkováno do malých sloupečků s vloženým filtrem. Z reakční nádoby bylo čerpadly do sloupečků nasáto 320 [Δ inkubačního roztoku, který obsahoval tyto látky rozpuštěné ve fosfátovém pufru (pH 7,2) : pro křivku dávka/účinek neznačený kortisol se vzrůstající koncentrací (0,56 až 17,66 pMol) pro * stanovení séra zředěné sérum (1 : 12). Reakční teplota byla udržována konstantní při 0oc+0,5oC. Pomocí čerpadel následovala po 4 minutách bobtnání eluce bílkovin ze sloupečků pomocí 630 /xl 3H-kortisolového roztoku ve scintilačních nádobkách. Po 10 minutách inkubační doby s 3H-kortisolem byl oddělen volný kortisol od protilátkou vázaného kortisolu elucí pomocí čerpadla 2, které dodávalo roztok fosfátového pufru (pH 7,2). Eluát (1 ml při 3 * min doby eluce) byl jímán do scintilačních nádobek, zreagován s 15 ml scintilačního roztoku a v kapalinovém s^intil^át^o200548 ru byla změřena radioaktivita. Z minutových impulsů (cpm) byla vypočtena koncentrace volného indikátorového haptenu 3H-kortisolu. Na křivce dávka/účinnost byl odečten obsah difundovatelného kortisolu v séru.
Byly zkoušeny matrice s protilátkami, které obsahovaly následující akrylové deriváty: 100 % akrylamidu, 60 % akrylamidu a 40 % esteru kyseliny methakrylové, a 60 % akrylamidu a 40 % kyseliny methakrylové. Koncentrace monomeru činila vždy 3,13 mol/litr, takže bylo dosaženo velikosti pórů 0,8 až 1,0 nm. Velikost zrn gelu činila průměrně asi 400 ^m. Při rychlosti čerpání 0,5 ml/min bylo po 4 minutách eluováno 92 % volných haptenů.
Stanovení difundovatelného kortisolu v ^g/100 ml poskytlo za různých podmínek následující hodnoty: normálně 1,5 až 2,5, stimulační test ACTH 4,5 až 10,8, při dexamethasonové sepresi 0,15 až 1,0 a při těhotenství 3,0 až 7,8. Tyto’ hodnoty odpovídají hodnotám získaným obvyklými metodami, například rovnovážnou dialýzou.
Způsob podle vynálezu byl použit i ke stanovení testosteronu. Pracovní postup odpovídal v podstatě vpředu popsanému stanovení kortisolu. Bylo však použito 160 mg gelu s protilátkou, na kolonku byl nasát 1 ml inkubačního roztoku, eluce bílkoviny provedena 1580 μΐ roztoku 3H-testosteronu koncentrace 270 pg/100 μΐ. Vycházela formální senzitivita 10 pg/ml.
PŘEDMĚT
Claims (3)
- PŘEDMĚT1. Způsob stanovení nevázaných hormonů nebo léčiv reakcí hormonů nebo léčiv s protilátkou a radioimunologickým vyhodnocením vyznačující se tím, že roztok obsahující nevázané hormony, hormony vázané na vazebné bílkoviny a vazebné bílkoviny se nanáší na imobilizovanou protilátku, například antikortizolovou protilátku, načež se nevázaný hormon nechává reagovat s protilátkou a hormony vázané na vazebné bílkoviny a vazebné bílkoviny se eluují roztokem, kterýVYNALEZU obsahuje značený hormon, který se nechá reagovat s protilátkou, načež se. značený hormon nezreagovaný s protilátkou eluuje a stanoví, například radiologicky.
- 2. Způsdb podle bodu 1, vyznačující se tím, že se používá protilátky uzavřené do polymerního gelu.
- 3. Způsob podle bodu 1 nebo 2, vyznačující se tím, že se používá protilátka uzavřená v akrylamidovém polymeru nebo v akrylamidovém kopolymeru.1 list výkresů
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE2731028A DE2731028C2 (de) | 1977-07-08 | 1977-07-08 | Verwendung eines Antikörpergels zur immunologischen Bestimmung von Hormonen, Pharmaka und Vitaminen, welche in ungebundenem Zustand vorliegen |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS200548B2 true CS200548B2 (en) | 1980-09-15 |
Family
ID=6013515
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS782722A CS200548B2 (en) | 1977-07-08 | 1978-04-27 | Determination method of unbonded hormones or medicaments |
Country Status (27)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4235865A (cs) |
| JP (1) | JPS5417117A (cs) |
| AU (1) | AU519215B2 (cs) |
| BE (1) | BE866490A (cs) |
| BR (1) | BR7802601A (cs) |
| CA (1) | CA1108531A (cs) |
| CH (1) | CH642751A5 (cs) |
| CS (1) | CS200548B2 (cs) |
| DD (1) | DD136186A5 (cs) |
| DE (1) | DE2731028C2 (cs) |
| DK (1) | DK181578A (cs) |
| ES (1) | ES469641A1 (cs) |
| FI (1) | FI781221A7 (cs) |
| FR (1) | FR2396975A1 (cs) |
| GB (1) | GB1603773A (cs) |
| GR (1) | GR64475B (cs) |
| HU (1) | HU177805B (cs) |
| IE (1) | IE46809B1 (cs) |
| IL (1) | IL54559A (cs) |
| LU (1) | LU79533A1 (cs) |
| NL (1) | NL7804467A (cs) |
| NO (1) | NO781474L (cs) |
| NZ (1) | NZ187072A (cs) |
| PL (1) | PL111139B1 (cs) |
| SE (1) | SE7804802L (cs) |
| YU (1) | YU101078A (cs) |
| ZA (1) | ZA782357B (cs) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4311687A (en) * | 1978-09-08 | 1982-01-19 | Corning Glass Works | Radiometric assay of dialysates |
| US4292296A (en) * | 1978-09-12 | 1981-09-29 | Baxter Travenol Laboratories, Inc. | Diagnostic method |
| DE3000483A1 (de) * | 1979-01-09 | 1980-07-17 | Fuji Photo Film Co Ltd | Mikrokapseln fuer immunologische bestimmungen |
| US4381291A (en) * | 1979-02-23 | 1983-04-26 | Ab Fortia | Measurement of free ligands |
| US4366143A (en) * | 1979-09-24 | 1982-12-28 | Amersham International Public Limited Company | Assay for the free portion of substances in biological fluids |
| US4391795A (en) * | 1980-03-21 | 1983-07-05 | Becton Dickinson And Company | Assay for free thyroid hormone |
| US4410633A (en) * | 1980-09-25 | 1983-10-18 | Corning Glass Works | Method for the measurement of free thyroxine or 3,5,3'-triiodothyronine in a liquid sample |
| IL63363A (en) * | 1981-07-20 | 1986-08-31 | Cais Michael | Non-centrifugation method for immunoassay of materials |
| US4558013A (en) * | 1983-04-08 | 1985-12-10 | Mast Immunosystems, Ltd. | Calibrated reaction measurement system |
| JPH042955U (cs) * | 1990-04-19 | 1992-01-10 | ||
| JPH0414452U (cs) * | 1990-05-21 | 1992-02-05 | ||
| US20100105071A1 (en) * | 2007-02-28 | 2010-04-29 | Children's Medical Center Corporation | Methods for predicting the onset of menarche |
| WO2014120028A1 (en) | 2013-01-29 | 2014-08-07 | Ux2 Centrum Technologiczne Sp. Z.O.O. | The lock of the connection set for structural elements, the connection set with locks and the method of joining constructional elements with the use of the connection set |
| KR102018084B1 (ko) | 2018-03-02 | 2019-09-04 | 주식회사 만도 | 차량의 조향 장치 및 방법 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3966897A (en) * | 1973-04-02 | 1976-06-29 | Marine Colloids, Inc. | Medium for use in bioassay and method of using same |
| US3925017A (en) * | 1973-05-01 | 1975-12-09 | Wisconsin Alumni Res Found | Preparation of dry, porous gel particles having high water regain for liquid sampling |
| US4039652A (en) * | 1973-10-11 | 1977-08-02 | Miles Laboratories, Inc. | Column method of immunoassay employing an immobilized binding partner |
| US4061466A (en) * | 1974-10-16 | 1977-12-06 | Ingvar Gosta Holger Sjoholm | Biologically active composition and the use thereof |
-
1977
- 1977-07-08 DE DE2731028A patent/DE2731028C2/de not_active Expired
-
1978
- 1978-04-19 GR GR56026A patent/GR64475B/el unknown
- 1978-04-20 YU YU01010/78A patent/YU101078A/xx unknown
- 1978-04-20 FI FI781221A patent/FI781221A7/fi not_active Application Discontinuation
- 1978-04-20 IL IL54559A patent/IL54559A/xx unknown
- 1978-04-21 AU AU35363/78A patent/AU519215B2/en not_active Expired
- 1978-04-24 US US05/899,706 patent/US4235865A/en not_active Expired - Lifetime
- 1978-04-25 ZA ZA00782357A patent/ZA782357B/xx unknown
- 1978-04-26 BR BR7802601A patent/BR7802601A/pt unknown
- 1978-04-26 CA CA302,084A patent/CA1108531A/en not_active Expired
- 1978-04-26 FR FR7812345A patent/FR2396975A1/fr active Granted
- 1978-04-26 SE SE7804802A patent/SE7804802L/xx unknown
- 1978-04-26 NL NL7804467A patent/NL7804467A/xx not_active Application Discontinuation
- 1978-04-26 NO NO781474A patent/NO781474L/no unknown
- 1978-04-26 LU LU79533A patent/LU79533A1/de unknown
- 1978-04-26 DK DK781815A patent/DK181578A/da not_active Application Discontinuation
- 1978-04-26 CH CH454378A patent/CH642751A5/de not_active IP Right Cessation
- 1978-04-26 NZ NZ187072A patent/NZ187072A/xx unknown
- 1978-04-27 BE BE187208A patent/BE866490A/xx not_active IP Right Cessation
- 1978-04-27 CS CS782722A patent/CS200548B2/cs unknown
- 1978-04-27 DD DD78205047A patent/DD136186A5/xx unknown
- 1978-04-27 HU HU78CA423A patent/HU177805B/hu unknown
- 1978-04-27 ES ES469641A patent/ES469641A1/es not_active Expired
- 1978-04-27 JP JP5072778A patent/JPS5417117A/ja active Granted
- 1978-04-27 IE IE836/78A patent/IE46809B1/en unknown
- 1978-04-27 GB GB16823/78A patent/GB1603773A/en not_active Expired
- 1978-04-27 PL PL1978206417A patent/PL111139B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IL54559A (en) | 1981-11-30 |
| CA1108531A (en) | 1981-09-08 |
| IE780836L (en) | 1979-01-08 |
| IE46809B1 (en) | 1983-09-21 |
| CH642751A5 (de) | 1984-04-30 |
| PL206417A1 (pl) | 1979-03-12 |
| DE2731028A1 (de) | 1979-01-25 |
| NO781474L (no) | 1979-01-09 |
| DD136186A5 (de) | 1979-06-20 |
| BE866490A (fr) | 1978-08-14 |
| AU519215B2 (en) | 1981-11-19 |
| JPS6229745B2 (cs) | 1987-06-27 |
| PL111139B1 (en) | 1980-08-30 |
| FR2396975B1 (cs) | 1984-05-11 |
| US4235865A (en) | 1980-11-25 |
| IL54559A0 (en) | 1978-07-31 |
| YU101078A (en) | 1989-02-28 |
| ZA782357B (en) | 1979-04-25 |
| NL7804467A (nl) | 1979-01-10 |
| FR2396975A1 (fr) | 1979-02-02 |
| LU79533A1 (de) | 1978-09-29 |
| AU3536378A (en) | 1979-10-25 |
| SE7804802L (sv) | 1979-01-09 |
| FI781221A7 (fi) | 1979-01-09 |
| HU177805B (en) | 1981-12-28 |
| ES469641A1 (es) | 1979-01-01 |
| GB1603773A (en) | 1981-11-25 |
| NZ187072A (en) | 1980-10-24 |
| GR64475B (en) | 1980-03-27 |
| DE2731028C2 (de) | 1986-09-04 |
| JPS5417117A (en) | 1979-02-08 |
| BR7802601A (pt) | 1979-04-17 |
| DK181578A (da) | 1979-01-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4292296A (en) | Diagnostic method | |
| US3970429A (en) | Method for immunological determinations | |
| US3966897A (en) | Medium for use in bioassay and method of using same | |
| US4104026A (en) | Immunoassay separation technique | |
| US4138474A (en) | Method and device for immunoassay | |
| EP0026103B1 (en) | A method for determining the free portion of substances in biological fluids | |
| Westphal | [41] Assay and properties of corticosteroid-binding globulin and other steroid-binding serum proteins | |
| CS200548B2 (en) | Determination method of unbonded hormones or medicaments | |
| US4108976A (en) | Automated direct serum radioimmunoassay | |
| US4427781A (en) | Particle agglutination immunoassay with agglutinator for determining haptens; PACIA | |
| US4128628A (en) | Automated immunoassay | |
| GB2025046A (en) | Solid phase assays | |
| US4128629A (en) | Extraction-free cortisol assay | |
| Donohue et al. | Improved radioimmunoassay of plasma cortisol | |
| JPH063449B2 (ja) | 不均質免疫学的測定試験に用いるための安定な固定化ハプテン試薬及びその製造方法並びに用途 | |
| EP0007229B1 (en) | Assay invoving labelled substances employing a re-usable immobilised binder | |
| CA1054050A (en) | Gel column device and use in blood purification and immunoassay | |
| Agarwal | Identification and properties of renal mineralocorticoid receptors in relation to glucocorticoid binders in rat liver and kidney | |
| Mehta | Therapeutic monitoring of free (unbound) drug levels: analytical aspects | |
| AT371606B (de) | Immunologische bestimmung von ungebundenen hormonen oder pharmaka | |
| Dohji et al. | Rapid measurement of oestradiol and oestriol by high-performance liquid chromatography after automatic pretreatment | |
| Updike et al. | Gel entrapment of antibody: A new strategy for facilitating both manual and automated radioimmunoassay | |
| US4268494A (en) | Automated direct serum radioassay | |
| US4312854A (en) | Immunoassay for thyroid stimulating hormone employing florisil adsorbent as separating agent | |
| Crowley et al. | Assessment of a simple competitive protein-binding technique for plasma cortisol assay |