CN208172011U - 免疫层析检测试剂盒 - Google Patents

Abstract

本实用新型公开了一种免疫层析检测试剂盒。该免疫层析检测试剂盒包括试纸卡以及吸头。所述试纸卡具有衬垫、样品垫、分析膜以及吸水垫，所述衬垫上依次顺序分布有所述样品垫、所述分析膜以及所述吸水垫，所述样品垫、所述分析膜以及所述吸水垫依次搭接，所述分析膜上含有检测线和质控线，所述检测线上含有检测抗原、检测抗原类似物或者检测抗体，所述质控线上含质控系统材料；所述吸头的内壁粘附有偶联物层，所述偶联物层为信号物层。该免疫层析检测试剂盒能够提高检测灵敏度。

Description

免疫层析检测试剂盒

技术领域

本实用新型涉及生物检测领域，特别是涉及一种免疫层析检测试剂盒。

背景技术

目前在生物检测领域，使用的免疫层析检测试剂盒中，信号物质在试纸条结合垫上或配套样本稀释液内。检测试剂盒中参与免疫反应的主要部分为试纸条或试纸条与样本稀释液。信号物质在试纸条结合垫上时，通常情况下，在使用时，移取待测样本与样本稀释液混合后，加到试纸条的样品垫上，孵育一定时间后，使用信号阅读器进行发光信号强度的检测。然而，由于待测样本在样品垫上停留的时间较短，待测样本中待测物质与偶联相关蛋白的荧光物质结合不充分，导致检测结果不准确。信号物质在样本稀释液内时，移取待测样本与样本稀释液混合后，加到试纸条的样品垫上，孵育一定时间后，使用信号阅读器进行发光信号强度的检测。然而，通常情况下，由于信号物质在液相中不能常温稳定长期保存，因此需放置在2-8℃。

实用新型内容

基于此，有必要提供一种能够提高检测灵敏度的免疫层析检测试剂盒。

一种免疫层析检测试剂盒，包括：

试纸卡，所述试纸卡具有衬垫、样品垫、分析膜以及吸水垫，所述衬垫上依次顺序分布有所述样品垫、所述分析膜以及所述吸水垫，所述样品垫、所述分析膜以及所述吸水垫依次搭接，所述分析膜上含有检测线和质控线，所述检测线上含有检测抗原、检测抗原类似物或者检测抗体，所述质控线上含质控系统材料；以及

吸头，所述吸头的内壁粘附有偶联物层，所述偶联物层为信号物层。

在其中一个实施例中，所述偶联物层在所述吸头内壁上呈环形或圆形分布。

在其中一个实施例中，所述衬垫为粘性衬垫。

在其中一个实施例中，所述衬垫为底部具有粘合剂的PVC板。

在其中一个实施例中，所述吸头呈透明状。

在其中一个实施例中，所述偶联物层位于所述吸头的中部。

在其中一个实施例中，所述信号物层为偶联相关蛋白的荧光物层。

在其中一个实施例中，所述试纸卡还包括卡套，所述卡套的其中一表面具有点样窗口以及显示窗口，所述衬垫以及所述衬垫上的样品垫、所述分析膜以及所述吸水垫均位于所述卡套内，所述样品垫与所述点样窗口相对，所述分析膜上的检测线和质控线均与所述显示窗口相对。

在其中一个实施例中，所述点样窗口呈圆形。

在其中一个实施例中，所述显示窗口呈矩形。

上述免疫层析检测试剂盒通过在吸头的内壁粘附有偶联物层，偶联物层为可识别待测物的信号物质、可识别质控系统材料的大分子物质的信号物质；在检测时，用吸头吸取样本稀释液后反复吹打，可以使得吸头内壁粘附的偶联物层中的偶联物溶于样本稀释液中，再将溶有偶联物的样本稀释液滴加到样品垫上进行检测；偶联物与样本稀释液中的待测物在液相中比在结合垫上反应更充分，样本稀释液中的待测物与偶联物在加入试纸条之前已反应充分，使得待测物与偶联物的反应不受不同样本在样品垫和结合垫上的流动均一性存在差异的影响，样本稀释液中的待测物与偶联物结合充分可提高免疫层析检测的精密度以及灵敏度。

附图说明

图1为一实施例所述的免疫层析检测试剂盒示意图；

图2为图1所示免疫层析检测试剂盒的试纸卡侧面剖视示意图。

附图标记说明

10、免疫层析检测试剂盒；100、试纸卡；110、衬垫；120、样品垫；130、分析膜；131、检测线；132、质控线；140、吸水垫；150、卡套；151、点样窗口；152、显示窗口；200、吸头；210、偶联物层。

具体实施方式

为了便于理解本实用新型，下面将参照相关附图对本实用新型进行更全面的描述。附图中给出了本实用新型的较佳实施例。但是，本实用新型可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本实用新型的公开内容的理解更加透彻全面。

需要说明的是，当元件被称为“固定于”另一个元件，它可以直接在另一个元件上或者也可以存在居中的元件。当一个元件被认为是“连接”另一个元件，它可以是直接连接到另一个元件或者可能同时存在居中元件。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本实用新型的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本实用新型的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本实用新型。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。

本实施例涉及了一种免疫层析检测试剂盒10。该免疫层析检测试剂盒10包括试纸卡100以及吸头200；其中，吸头200又名枪头、移液器吸嘴。

试纸卡100具有衬垫110、样品垫120、分析膜130以及吸水垫140。衬垫110上依次顺序分布有样品垫120、分析膜130以及吸水垫140，样品垫120、分析膜130以及吸水垫140依次搭接。分析膜130上含有检测线131和质控线132。检测线131上含有检测抗原、检测抗原类似物或者检测抗体，质控线132上含质控系统材料。其中，质控系统材料对于本领域技术人员而言是公知的，例如其可为选自生物素-亲和素体系、凝集素-糖体系、与鼠抗体不同种属的质控体系中的材料。

吸头200的内壁粘附偶联物层210，其中，偶联物层210为能够识别待测物质或质控系统材料中的大分子物质的信号物层。信号物层中的信号物质包括但不限于荧光素、荧光微球、时间分辨微球、彩色微球、胶体金、量子点、磁珠等。

在一个实施例中，偶联物层210为偶联相关蛋白的荧光物。

在一个实施例中，偶联物层210在吸头200内壁上呈环形或圆形分布。

在一个实施例中，衬垫110为粘性衬垫。粘性衬垫的设置使得试纸卡100可以固定，避免试纸卡100移动，提高使用者在滴加样本稀释液时的精确度。

优选地，衬垫110为带有粘合剂的PVC板。

在一个实施例中，吸头200呈透明状。透明状的吸头200便于使用者在使用时可以肉眼观察吸头200内偶联物层210上的偶联物是否溶解在样本稀释液中。

在一个实施例中，偶联物层210位于吸头200的中部。

进一步地，试纸卡100还包括卡套150，卡套150的其中一表面具有点样窗口151以及显示窗口152，衬垫110以及衬垫110上的样品垫120、分析膜130以及吸水垫140均位于卡套150内，样品垫120与点样窗口相对，分析膜130上的检测线和质控线与显示窗口152相对。

优选地，点样窗口151呈圆形。显示窗口152呈矩形。

实施例1

本实施例使用上述免疫层析检测试剂盒10来检测血清样本中的PCT含量。

免疫层析检测试剂盒10的制备：试纸卡100具有衬垫110、样品垫120、分析膜130以及吸水垫140，其中样品垫120为玻璃纤维素膜，分析膜130为硝酸纤维素膜(NC膜)，衬垫110为带有粘合剂的PVC板。

吸头200为内壁含有偶联物层210，其中偶联物层210中的偶联蛋白为PCT单克隆抗体1、羊抗兔(GAR)抗体，偶联物层210中的信号物质为荧光微球。

含有干燥的偶联物层210的吸头200制备：将PCT荧光微球偶联物、GAR荧光微球偶联物分别按5-25％、0.5-2％的比例混匀在偶联物稀释液(用于保护偶联物中的蛋白)中，其通常含有糖类、蛋白保护剂、表面活性剂的缓冲液中，如磷酸缓冲液、硼酸缓冲液、Tris-HCl缓冲液等，取1-10μL点样在吸头200内壁，放置25-37℃干燥12-24小时。

检测方法：取出试纸卡100，使用移液器和免疫层析检测试剂盒10中相应的吸头200移取75μL待测血清样本(或全血、血浆样本)，加入样本稀释液管中，反复吹打5-10次，直到吸头200内壁无偶联物(荧光微球偶联抗体)残留，PCT偶联物、GAR偶联物在待测血清样本中均匀分布。待测血清样本中的PCT抗原与吸头200内壁的荧光微球偶联PCT单克隆抗体1发生特异性结合，在样本稀释液管中形成荧光微球-PCT单克隆抗体1-PCT抗原复合物。从样本稀释液管中移取75μL混合溶液，加入试纸卡100的样品垫120处。在分析膜130的毛细管作用力下，GAR荧光微球偶联物向吸水垫140端流动，当层析至质控线132时，被质控线132包被的兔IgG抗体捕获，形成荧光微球-GAR抗体-兔IgG抗体复合物被固定在分析膜130的质控线132处。荧光微球-PCT单克隆抗体1-PCT抗原复合物向吸水纸端流动，当层析至检测线131时，被检测线131包被的PCT单克隆抗体2捕获，通过“双抗夹心法”形成荧光微球-PCT单克隆抗体1-PCT抗原-PCT单克隆抗体2复合物被固定在NC膜的检测线131处，待测血清样本中的PCT抗原越多，被捕获的复合物越多。没有被质控线132或检测线131捕获的荧光微球偶联物则直接通过检测线，到达吸水垫140端。在室温下反应15min后，利用荧光定量检测分析仪检测质控线132与检测线131区域的荧光信号强度。

样本结果：按上述检测方法检测，将荧光定量分析仪测得的荧光信号值代入根据PCT抗原浓度与荧光信号强度绘制的标准曲线中，即可得到相应的待测血清样本浓度值。检测线131处荧光信号值与待测血清样本中PCT含量成正相关。

实施例2

本实施例使用上述免疫层析检测试剂盒10来检测血清样本中T4抗原含量

免疫层析检测试剂盒10的制备：试纸卡100具有衬垫110、样品垫120、分析膜130以及吸水垫140，其中样品垫120为玻璃纤维素膜，分析膜130为硝酸纤维素膜(NC膜)，衬垫110为带有粘合剂的PVC板。

吸头200为内壁含有偶联物层210，其中偶联物层210中的偶联蛋白为T4单克隆抗体、羊抗兔(GAR)抗体，偶联物层210中的荧光物为时间分辨微球。

含有干燥偶联物层210的吸头200制备：将T4时间分辨微球偶联物、GAR时间分辨微球偶联物分别按5-25％、0.5-2％的比例混匀在含有糖类、蛋白保护剂、表面活性剂的缓冲液中，如磷酸缓冲液、硼酸缓冲液、Tris-HCl缓冲液等，取1-10μL点样在吸头200内壁，放置25-37℃干燥12-24小时。

检测方法：取出试纸卡100，使用移液器和免疫层析检测试剂盒10中相应的吸头200移取75μL待测血清样本(或全血、血浆样本)，加入样本稀释液管中，反复吹打5-10次，直到吸头200内壁无时间分辨微球偶联物残留，T4偶联物、GAR偶联物在待测血清样本中均匀分布。样本中的T4抗原与吸头200内壁的时间分辨微球偶联T4单克隆抗体发生特异性结合，在样本稀释液管中形成时间分辨微球-T4单克隆抗体-T4抗原复合物。从样本稀释液管中移取75μL混合溶液，加入试纸卡100的样品垫120处。在分析膜130的毛细管作用力下，GAR时间分辨微球偶联物向吸水纸端流动，当层析至质控线132时，被质控线132包被的兔IgG抗体捕获，形成时间分辨微球-GAR抗体-兔IgG抗体复合物被固定在NC膜的质控线132处。时间分辨微球-T4单克隆抗体-T4抗原复合物向吸水纸端流动，当层析至检测线131时，检测线131包被的T4抗原与样本中的T4抗原“竞争”结合T4偶联物，即“竞争法”，若样本中T4抗原较少，则T4包被抗原可竞争结合较多T4偶联物，若样本中T4抗原较多，则T4包被抗原竞争结合的T4偶联物较少，最终形成时间分辨微球-T4单克隆抗体-T4抗原复合物被固定在NC膜的检测线131处。没有被质控线132或检测线131捕获的时间分辨微球偶联物则直接通过检测区域，到达吸水垫140端。在室温下反应15min后，利用荧光定量检测分析仪检测质控线132与检测线131区域的荧光信号强度。

样本结果：按上述检测方法检测，将荧光定量分析仪测得的荧光信号值代入根据T4抗原浓度与荧光信号强度绘制的标准曲线中，即可得到相应的样本浓度值。检测线131处荧光信号值与待测血清样本中T4抗原含量成负相关。

上述免疫层析检测试剂盒10通过在吸头200的内壁粘附有偶联物层210，偶联物层210为偶联可识别待测物的信号物质、可识别质控系统材料的大分子物质的信号物质；在检测时，将吸头200吸取样本稀释液后反复吹打，使得吸头200内壁粘附的偶联物溶于样本稀释液中，再将溶有偶联物的样本稀释液滴加到样品垫120上进行检测；偶联物与样本稀释液中的待测物在液相中比在结合垫上反应更充分，样本稀释液中的待测物与偶联物在加入试纸条之前已反应充分，使得待测物与偶联物反应不受不同样本在样品垫120和结合垫上的流动均一性存在差异的影响，样本稀释液中的待测物与偶联物结合充分可提高免疫层析检测的精密度以及灵敏度。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本实用新型的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本实用新型专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本实用新型构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本实用新型的保护范围。因此，本实用新型专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种免疫层析检测试剂盒，其特征在于，包括：

试纸卡，所述试纸卡具有衬垫、样品垫、分析膜以及吸水垫，所述衬垫上依次顺序分布有所述样品垫、所述分析膜以及所述吸水垫，所述样品垫、所述分析膜以及所述吸水垫依次搭接，所述分析膜上含有检测线和质控线，所述检测线上含有检测抗原、检测抗原类似物或者检测抗体，所述质控线上含质控系统材料；以及

吸头，所述吸头的内壁粘附有偶联物层，所述偶联物层为信号物层。

2.根据权利要求1所述的免疫层析检测试剂盒，其特征在于，所述偶联物层在所述吸头内壁上呈环形或圆形分布。

3.根据权利要求1或2所述的免疫层析检测试剂盒，其特征在于，所述衬垫为粘性衬垫。

4.根据权利要求3所述的免疫层析检测试剂盒，其特征在于，所述衬垫为底部具有粘合剂的PVC板。

5.根据权利要求1或2所述的免疫层析检测试剂盒，其特征在于，所述吸头呈透明状。

6.根据权利要求1或2所述的免疫层析检测试剂盒，其特征在于，所述偶联物层位于所述吸头的中部。

7.根据权利要求1所述的免疫层析检测试剂盒，其特征在于，所述信号物层为偶联相关蛋白的荧光物层。

8.根据权利要求1或2所述的免疫层析检测试剂盒，其特征在于，所述试纸卡还包括卡套，所述卡套的其中一表面具有点样窗口以及显示窗口，所述衬垫以及所述衬垫上的样品垫、所述分析膜以及所述吸水垫均位于所述卡套内，所述样品垫与所述点样窗口相对，所述分析膜上的检测线和质控线均与所述显示窗口相对。

9.根据权利要求8所述的免疫层析检测试剂盒，其特征在于，所述点样窗口呈圆形。

10.根据权利要求8所述的免疫层析检测试剂盒，其特征在于，所述显示窗口呈矩形。