CN1160572C - 层析测定方法 - Google Patents
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Abstract
在标记试剂洗脱量测定区域6，对与测定相关的实质的标记试剂量进行测定，对在测定与被检查溶液中的测定对象物的反应的反应结果测定区域7中所获得的结果，反映上述实质的标记试剂量。这样，可提供一种层析测定方法，该层析测定方法可排除外在的环境因素、被检查溶液的性质的因素、测定操作的误操作等的影响，并使用了具有更高精度和更高可靠性的生物传感器。
Description
技术领域
本发明涉及一种层析测定方法，特别是涉及通过利用层析的生物传感器对被检查溶液进行测定的方法的改进。
背景技术
生物传感器利用了酶等具有的特异反应，通过检测体液等的被检查溶液中的测定成分，可应用于临床领域等。
作为利用层析法定性或定量地测定由这样的生物传感器检测的被检查溶液(试样)中的测定成分的代表例，具有免疫层析传感器。该免疫层析传感器具有展开被检查溶液的展开层，上述展开层在其一部分包含有将试剂固化的试剂部分，在另一部分包含有在干燥状态下保持根据被检查溶液展开而可洗脱的标记试剂的标记试剂保持部分，当展开被检查溶液时，在上述试剂固化部分中产生结合，并通过测定其结合量，可测定被检查溶液中的测定成分。
作为一般的免疫层析传感器，由添加被检查溶液的被检查溶液添加部分和多个展开层构成，在作为上述展开层的一部分的试剂固化部分上固化抗体，另外，在上述展开层的上述试剂固定部分的上游侧的标记试剂保持部分上以根据上述被检查溶液而可洗脱的干燥状态下保持由金胶体粒子等标记物标记的抗体。
当在这样的免疫层析传感器添加必要量的被检查溶液时，被检查溶液一边对上述标记的抗体进行洗脱，一边渗透到多孔质材料中。通过测定在上述试剂固化部分，根据上述被检测溶液而可洗脱的标记抗体与该试剂固化部分的抗体结合的标记抗体量，从而可检测出被检查液中的测定成分。另外，该结合的标记抗体量的测定可通过对标记抗体在试剂固定部分结合而残留的金胶体粒子等标记物的量进行目测确认而进行测定。即，根据含在被检测溶液中的抗原(测定成分)的浓度，上述试剂固化部分的显色度(色浓度)会变化，因此检测人员通过目视进行测定。
在这里，说明了将抗原抗体反应的夹心面包反应作为测定原理的场合，但除此之外，将竞争反应作为测定原理也可同样在抗体固化部的标记试剂的结合状态下获得测定结果。
另外，在上述例中说明了可通过目测并以定性判定来获得测定结果的场合，但为了改善因目测导致的的判定的较低的再现性和个人差别，日本特开平8-334511号公报记载了用CCD来摄影并自动判定上述试验片的上述试剂固化部分的显色度的方法。另外，作为上述测定结果，要求半定量或比其更高精度的判定的场合，有公开于日本特开平10-274624号公报的、利用光学读取装置利用透过方式读取的方法和公开于日本特开平10-274653号公报的、用摄影机等以图像形式取入并进行运算处理的方法。
然而，在上述那样的现有的被检查溶液内的测定对象物的测定方法中，通过因上述传感器的干燥状态、传感器中的试剂的保存状况、或传感器制作时的环境引起的传感器中的试剂浓度误差等而产生的因素、或被检查溶液的性质而产生的因素、或测定时的误操作或测定时的环境等产生的因素等，使得根据上述被检查溶液从标记试剂保持部分洗脱的标记抗体的洗脱量变化。
与上述试剂固化部分通过洗脱上述标记抗体而结合的标记抗体结合量，若上述标记抗体的洗脱量为一定，则可更为正确而且均匀地测定上述被检查溶液中的测定对象物浓度，但当上述因素使标记抗体的洗脱量变化时，即使上述被检查溶液中的测定对象物浓度为一定，每次测定与试剂固化部分结合的标记抗体量也会变化。
即，当进行用于求出定性的测定结果的测定时，在由于上述因素使标记抗体的洗脱量变化的场合，特别是在测定极限高感度附近存在提供错误的测定结果的问题。
另外，在上述标记抗体的洗脱量极少的场合，存在不能在上述试剂固化部分获得正确的结合量的问题。
另外，在需要进行半定量性或定量性的测定的场合，也存在上述因素导致的标记抗体的洗脱量变化使得试剂固化部分的标记抗体结合量产生变化、只能获得精度较低的测定结果的问题。为此，在上述方法中，定性或半定量测定为极限，不能实现定量测定。
本发明就是鉴于这样的状况而作出的，其目的在于提供一种可获得高精度的测定结果、在定量测定中也可提高精度的层析测定方法。
发明的公开
本发明的方案1所述的层析测定方法，是利用生物传感器根据层析法测定包含于上述被检查溶液中的测定成分，而该生物传感器具有将被检查溶液展开的展开层、在上述展开层的一部分上通过将试剂固化而形成的试剂固化部、及在上述展开层的另一部分上通过保持根据上述被检查溶液的展开而可洗脱的标记试剂而形成的标记试剂保持部；其中，通过测定上述试剂固化部的上述标记试剂的结合量，对上述被检查溶液中的测定成分进行定性或定量，同时测定上述标记试剂成分的洗脱量或未洗脱的残存量。
这样，在根据上述试剂固化部的上述标记试剂结合量检测出被检查溶液内的测定对象物的场合，通过测定对该结合量产生影响的上述标记成分的实质的洗脱量或残余量，可得知固化的上述标记试剂成分结合量的妥当性(结合量数据的可靠性)，具有提高测定操作的正确性的效果，另外，通过测定上述洗脱量或测定残存量，相对上述试剂固化部分的上述标记试剂成分的结合量施加与洗脱量相应的修正，从而反映与实际测定相关的上述标记试剂成分量，获得可实现更高精度的、利用了生物传感器的层析测定方法的效果。
本发明的方案2所述的层析测定方法为方案1所述的层析测定方法，其中，利用上述标记试剂成分的洗脱量或未洗脱的残留量来修正上述试剂固化部的上述标记试剂的结合量。
这样，可反映与实际测定相关的上述标记试剂成分量，获得可实现更高精度的、利用了生物传感器的层析测定方法的效果。
本发明的方案3所述的层析测定方法为方案1或方案2所述的层析测定方法，其中，上述标记试剂成分的洗脱量或未洗脱的残留量的测定利用光学检测器来进行。
这样，可更为正确地使上述标记试剂成分的洗脱量数值化，获得可实现更高精度的、利用了生物传感器的层析测定方法的效果。
本发明的方案4所述的层析测定方法为方案1-方案3中任何一项所述的层析测定方法，其中，上述标记试剂成分的洗脱量的测定在上述试剂固化部以外的部分进行。
这样，在不受测定对象成分量的影响的、试剂固化部以外的部分中测定上述标记试剂成分洗脱量，可更为正确地测定标记试剂洗脱量，获得可实现更高精度的利用了生物传感器的层析测定方法的效果。
本发明的方案5所述的层析测定方法为方案1-方案4中任何一项所述的层析测定方法，其中，上述标记试剂成分的洗脱量的测定，在上述试剂固化部中测定上述标记试剂的结合量之前进行。
这样，可预先得知与在上述试剂固化部产生的与结合相关的标记试剂量，提高测定操作的正确性，同时，可使判断更迅速，获得可实现更高精度的、利用了生物传感器的层析测定方法的效果。
附图的简单说明
图1为示出本发明实施形式的、免疫层析传感器的构成的透视图。
图2为示出本发明实施形式1的免疫层析传感器的、被检查溶液添加后的状态的图，图2(a)示出在添加被检查溶液后的初期状态，图2(b)、(c)示出标记试剂结合量测定时的状态。
图3为示出本发明实施形式1的层析测定方法的、生物传感器应测定的区域的顺序的一例的透视图，图3(a)为示出最初应测定的区域的图，图3(b)为接下来应测定的区域的图。
图4为示出由本发明实施形式1的生物传感器测定的hCG的各浓度的吸光度AT+BT与吸光度CT的关系的图。
图5为示出由本发明实施形式1的生物传感器测定的各hCG浓度的修正前的测定结果(图5(a))与修正后的测定结果(图5(b))的图。
图6为示出本发明实施形式1的层析测定方法的、生物传感器应测定的区域的顺序的另一例的透视图，图6(a)为示出最初应测定的区域的图，图6(b)为接下来应测定的区域的图。
实施发明的最佳形式
实施形式1
下面参照图1-图6说明本发明的实施形式。
图1为示出实施本发明实施形式1的层析测定方法时所使用的、免疫层析传感器的构成的图。
如图1所示，本实施形式1的免疫层析传感器由添加被检查溶液的被检查溶液添加部1、包含标记试剂保持部2和抗体固化部4(试剂固化部)的抗体固化膜3(展开层)、及吸水部5构成。
上述被检查溶液添加部1为添加被检查溶液的部分，由被检查溶液来可润湿的材料即无纺布制成。作为用于该被检查溶液添加部1的材料，除无织布以外，可由被检查溶液可润湿的材料例如玻璃纤维滤纸、膜滤器等任意的材料构成。
上述标记试剂保持部2为在抗体固化膜3的一部分中保持标记试剂的部分。该标记试剂为通过标记物即金胶体来标记的抗体，可根据上述被检查溶液的渗透而可洗脱那样地在干燥状态下被保持。在本实施形式1中，作为上述标记试剂，使用通过金胶体来标记的抗体，但作为标记物，除金胶体以外，还可选择酶、蛋白质、色素、萤光色素、金属溶胶、非金属溶胶、胶乳等的着色粒子等，另外，作为通过该标记物来进行标记的试剂，除抗体以外，用抗原、半抗原、蛋白质等也同样可进行。
另外，上述抗体固化部4为在抗体固化膜3的上述标记试剂保持部2以外的一部分中，干燥状态下固定并保持抗体的部分。该抗体不由被检查溶液洗脱，具有在由被检查溶液洗脱之前与上述标记试剂保持部2的标记试剂结合的性质。为此，上述抗体固化部4的抗体可在该抗体固化部4中结合并捕捉上述标记试剂。
在本实施形式1的免疫层析传感器中，例示出了利用夹心面包反应的场合，即在标记试剂保持部2设置抗体，将被检查溶液中的测定对象物作为抗原，但对于利用竞争反应的场合，可通过将被检查溶液中的测定对象物作为抗原并将抗原设置到标记试剂保持部2而加以实施，另外，对于利用抗原抗体反应的场合，可根据使用者的选择用多种方式同样地加以实施。
上述抗体固化膜3包含上述标记试剂保持部2和抗体固化部4，由硝酸纤维素构成。用于该抗体固化膜3的材料除了硝酸纤维素以外，只要为可由被检查溶液来润湿的材料，则同样可实施。
另外，上述吸水部5用于吸收通过上述抗体固化膜3的被检查溶液，由玻璃纤维滤纸构成。作为该吸水部5的材料，除了玻璃纤维滤纸以外，只要为无纺布、树脂多孔质材料等可由被检查溶液来润湿的材料，则可由任意的材料构成。
在本实施形式1中，可实施这样一种层析测定方法，该层析测定方法在这样构成的免疫层析传感器滴下被检查溶液，使其在上述抗体固化膜3上展开，检测从上述标记试剂保持部2洗脱的上述标记试剂的洗脱量或洗脱后的该标记试剂保持部2上的残余量，从而提高测定操作的正确性，并且，对上述抗体固化部4的上述标记试剂的结合量施加与标记试剂的洗脱量相应的修正，可反映与实际测定相关的上述标记试剂量，可以更高的精度测定包含于上述被检查溶液中的测定对象。
以下，说明由本实施形式的免疫层析传感器检测包含于被检查溶液中的测定对象物的层析测定方法。
图2示出在被检查溶液添加部1添加被检查溶液后的免疫层析传感器的状态。
图2(a)示出将被检查溶液添加到被检查溶液添加部1后经过的时间处于较早时刻的免疫层析传感器的状态，图中的符号6示出测定标记试剂洗脱量的区域。如图2(a)所示，添加到被检查溶液添加部1的被检查溶液一边洗脱标记试剂保持部2的标记试剂一边开始朝吸水部5渗透，在该时刻，通过被检查溶液来洗脱的标记试剂未到达抗体固化部4。
图2(b)示出在抗体固化部4测定标记试剂结合量的时刻的免疫层析传感器的状态，图中的符号7示出抗体固化部4的标记试剂结合量的测定区域。在图2(b)中，通过抗体固化膜3的被检查溶液被吸水部5吸收，在抗体固化部4可观察到与被检查溶液中的测定对象物量所对应的反应。
图2(c)示出与图2(b)相同时刻的免疫层析传感器的状态，图中的符号8示出测定标记试剂洗脱残余量的区域。
这样在上述抗体固化部4以外的部分进行标记试剂成分的洗脱量的测定是因为，在上述抗体固化部4，根据被检查溶液中的测定对象物的量使标记试剂结合量变化，所以，如在测定开始后将一定时间划分开来读取标记试剂，则不能判断其值是由测定对象物的结合反应产生还是不由其产生。
另外，在测定上述抗体固化部4的上述标记试剂的结合量之前(上游侧)进行标记试剂洗脱量的测定，是因为在测定操作中添加被检查溶液后，被检查溶液展开于抗体固化膜3上，但在通过上述抗体固化部4之前通过标记试剂保持部2，使上述标记试剂成分洗脱，所以，若在上述标记试剂通过测定部分即上述抗体固化部4之前，预先测定该标记试剂洗脱量，则可迅速地反映到在上述抗体固化部4中结合的标记试剂的测定中。
另外，在不进行这样的迅速的修正也没有问题的场合，也有这样的方法，即，在上述抗体固化部4上即标记试剂结合量测定区域7测定标记试剂量后，在其值上反映在图2(c)的状态下的在标记试剂洗脱残余量测定区域8所获得的测定值。
下面，作为使用本实施形式1的生物传感器的层析测定方法的具体例，以尿中的hCG(人绒毛膜促性腺激素)的定量为例，利用图1-图6进一步说明本实施形式1的层析测定方法。本实施形式4的测定方法不限于hCG的定量。
首先，作为本实施形式1的试验片(免疫层析传感器)，制造了在硝酸纤维素膜中包含抗hCG-β抗体固化线和抗hCG-α抗体与金胶体的复合体的宽带的免疫层析试验片。
上述试验片如图1所示那样由抗体固化膜3、被检查溶液添加部1、及吸水部5构成；该抗体固化膜3由硝酸纤维素膜构成，包含抗体固化部4和标记试剂保持部2，该抗体固化部4该将抗hCG-β抗体固化，该标记试剂保持部2处于其之前(上游侧)，并包含抗hCG-α抗体和金胶体的复合体；该被检查溶液添加部1由无纺布制成；该吸水部5由玻璃纤维制成。
本实施形式1在图1所示上述试验片添加hGC溶液，由反射型分光光度计(CS9300；岛津制造所)如图3(a)所示那样从光源100向标记试剂洗脱量测定区域6照射检查光，由检测器200接收其反射光，从而测定标记试剂洗脱量测定区域6的反射吸光度，接着，如图3(b)所示那样，与图3(a)同样地由反射型分光光度计测定标记试剂结合量测定区域7的反射吸光度，并利用标记试剂洗脱量测定区域6的吸光度进行标记试剂结合量测定区域7的吸光度的修正。
下面，说明A.试验片的制作方法、B.被检查溶液的调制方法、C.修正方法的讨论。
A.层析试验片的制作
准备用磷酸缓冲溶液稀释并进行了浓度调制的抗hCG-β抗体溶液。利用溶液排出装置将该抗体溶液涂覆到硝酸纤维素膜上。这样，在硝酸纤维膜上获得检测用的抗体固化线(抗体固化部4)。干燥该硝酸纤维素膜后，浸入到含有1％脱脂乳的Tris-HCl缓冲溶液中，轻缓地晃动30分钟。30分钟后，将膜移动到Tris-HCl缓冲溶液槽中，轻缓地晃动10分钟后，再在别的Tris-HCl缓冲溶液槽中再轻缓地晃动10分钟，进行膜的清洗。进行2次清洗后，从清洗液中取出膜，在室温下干燥。
金胶体是通过在0.01％氯化金酸的回流中的100℃溶液中添加柠檬酸溶液从而调制的。持续30分钟回流后进行冷却。在根据0.2M的碳酸钾溶液，在调制成pH9的上述金胶体溶液中加入抗hCG-α抗体并搅拌数分钟后，加入10％BSA(牛血清白蛋白)溶液pH9并使最终加入量为1％，并进行搅拌，从而调制了抗体金胶体复合体(标记抗体)。在4℃、20000G下对上述标记抗体溶液进行50分钟离心分离，从而对标记抗体进行分离，使其悬浮在清洗缓冲液(1％BSA·磷酸缓冲液)中，之后，进行上述离心分离，将标记抗体洗净分离。由清洗缓冲液悬浮该标记抗体，由0.8μm的过滤器过滤后，调制成当初金胶体溶液量的10分之1，在4℃下储藏。
将上述标记抗体溶液设置到溶液排出装置，将抗hCG-β抗体涂覆到固化干燥膜上的从抗体固化部分离开的位置后，使膜干燥。由此，在抗体固化膜3上获得标记抗体保持部(标记试剂保持部)2。
将包含这样调制得到的抗体固化线4和标记抗体保持部2的抗体固化膜3贴到反应层载体支承体(图中未示出)上，将无纺布作为被检查溶液添加部1，将玻璃纤维滤纸作为吸水部5加上后，切断成0.5cm宽的细片，制作试验片。
B.被检查溶液的调制
在人尿中加入已知浓度的hCG溶液，从而调制各种各样的已知浓度的hCG溶液。
C.修正方法的讨论
下面，说明令标记试剂结合量测定时间为5分钟后，令标记试剂洗脱量测定时间为1分钟后和3分钟后的场合的、使用反射吸光度的修正方法。
在进行修正时，需要预先求出器件(试验片)固有的系数。首先，为了求出制作的器件系数，调制含hCG浓度1000IU/l的尿，在试验片(试验片数N＝10)的被检查溶液添加部1上添加200μl以上。将上述被检查溶液添加时刻作为开始时间，利用反射型分光光度计(CS9300；岛津制作所制)检测开始1分钟后、3分钟后的标记试剂洗脱量测定区域6的反射吸光度。并在5分钟后用上述同样的反射型分光光度计对标记试剂结合量测定区域7的显色状况进行检测。将标记试剂洗脱量测定区域6中1分钟后的吸光度作为吸光度AT，将3分钟后的反射吸光度作为吸光度BT，将标记试剂结合量测定区域7的检测结果作为吸光度CT，将其测定结果绘成曲线，推导出以下所示关系式(1)。该测定结果示于图4(b)。
Y＝1.12X+D(其中，X+AT+BT) …… (1)
在这里，Y为标记试剂结合量测定区域7的吸光度，在图4中为纵轴。另外，X示出标记试剂洗脱量测定区域6的吸光度的和，在图4中，为横轴。另外，D为常数。
然后，求出标记试剂洗脱量测定区域6的测定结果的中心值。在本实施形式1的例中，整个测定的中心值为0.29。
这样，获得器件(生物传感器)固有的系数E＝1.12，F＝0.29。该器件固有的系数E为标记试剂洗脱量测定区域6和标记试剂结合量测定区域7的吸光度的关系式的斜率，另外，F为在标记试剂洗脱量测定区域6获得的吸光度的中心值。
然后，通过在人尿中加入已知浓度的hCG溶液，调制含有100、1000、10000IU/l的hCG的尿，利用该3种浓度已知的被检查溶液，由本实施形式1的层析测定方法进行测定，比较修正前的测定值与修正后的测定值。
首先，对于各hCG浓度的尿，在试验片上的被检查溶液添加部1添加上述含hCG的尿200μl，朝吸水部5方向使其展开，开始测定。将被检查溶液添加时刻作为开始时间，利用反射型分光光度计(CS9300；岛津制作所制)检测开始1分钟后、3分钟后的标记试剂洗脱量测定区域6的反射吸光度。并在5分钟后用上述同样的反射型分光光度计对标记试剂结合量测定区域7的显色状况进行检测。将标记试剂洗脱量测定区域6中1分钟后的吸光度作为吸光度AT，将3分钟后的反射吸光度作为吸光度BT，将标记试剂结合量测定区域7的5分钟后的检测结果作为吸光度CT。
图4为示出被检查溶液中的测定对象物即hCG各浓度的吸光度AT和吸光度BT之和与吸光度CT的关系的图。图4(a)-图4(c)分别示出各种场合下的吸光度AT与吸光度BT之和与吸光度CT的关系，其中，图4(a)中hCG浓度为100IU/l，图4(b)中hCG浓度为1000IU/l，图4(c)中hCG浓度为10000IU/l。由图4(a)-图4(c)可知，在各hCG浓度下，吸光度AT和吸光度BT之和与吸光度CT相关。
下面，使用上述测定结果和上述器件系数，利用下式(2)进行标记试剂结合量测定区域7的检测结果的吸光度CT的修正，求出修正值CH。
修正值CH＝CT×(1-((AT+BT)-F×E) …… (2)
其中，CH表示修正结果。
图5为示出各hCG浓度下的标记试剂结合量测定区域7的修正前测定数据和修正后测定数据的图。图5(a)为按hCG各浓度将修正前的图4的结果绘成曲线的图，图5(b)为对由图4所示测定结果用式(2)修正后的测定结果按hCG各浓度绘成曲线的图。
可以看出，修正前的hCG同一浓度内的CV值(变动系数)分别为11.1％、10.8％、13.85％，但经修正后CV值(变动系数)分别成为8.9％、4.1％、1.9％，整个浓度区域都大幅度提高了测定值的精度。通过这样进行修正，测定值的精度大幅度提高，即使标记试剂成分的洗脱量产生变化，只要hCG浓度相同，测定值也可不太受变动的影响，定量精度大幅度提高。
在以上说明中，详细说明了测定标记试剂洗脱量后进行修正的场合，但在测量标记试剂残余量后进行修正的场合，也可由与图3同样的反射型分光计，先求出标记试剂结合量测定区域7的反射吸光度(参照图6(a))，接着，求出标记试剂洗脱残余量测定区域8的反射吸光度(参照图6(b))，用该标记试剂洗脱残余量测定区域8的反射吸光度对标记试剂结合量测定区域7的反射吸光度进行修正后，与上述标记试剂洗脱量检测的场合同样地计算仪表固有的值，利用式(2)进行修正。
如以上那样按照本实施形式1的层析测定方法，即使在因传感器的干燥状态、传感器中的试剂成分的保存状况、传感器制作时的温度、湿度、制作时间等外在的状况等传感器部的因素；或被检查溶液的性质的因素；或测定操作的误操作、测定操作时的环境等测定操作的因素等，使标记试剂成分的洗脱量产生变化的场合，通过检测该标记试剂的洗脱量或残余量，也可提高测定操作的正确性，另外，通过检测上述洗脱量或残余量，对上述试剂固化部的上述标记试剂成分的结合量施加上与洗脱量相应的修正，可提供更高精度的层析测定方法。
在本实施形式1中，说明了使用如图1所示那样的试验片的场合的修正方法的一例，但试验片的形状不限于此，也可适当选择。
另外，上述器件固有的值E、F根据标记试剂保持浓度、标记试剂保持面积、标记试剂保持量、标记试剂种类、流速、试剂溶剂种、标记试剂保持区域与固化试剂的位置等因素而变化，可根据需要适当进行选择。
另外，可根据需要适当选择洗脱量的检测方法、洗脱量测定区域的场所、修正运算式等。
产业上利用的可能性
本发明的层析测定方法作为在测定试剂固化部的标记试剂的结合量以对被检查溶液的测定成分进行定性或定量的场合，获得更高精度的测定结果的方法，非常有用。
Claims (5)
1.一种层析测定方法，是利用生物传感器根据层析法测定上述被检查溶液中的测定成分，而该生物传感器具有：添加被检查溶液的试料添加部、将被检查溶液展开的展开层、在上述展开层的一部分上通过将试剂固化而形成的试剂固化部、及在上述展开层的另一部分上通过保持根据上述被检查溶液的展开而可洗脱的标记试剂而形成的标记试剂保持部；其特征在于：
在上述试料添加部上添加被检查溶液后经过一定时间后，测定上述试剂固化部中的上述标记试剂的结合量，从而对上述被检查溶液中的测定成分进行定性或定量测定，
测定从上述标记试剂保持部洗脱的上述标记试剂的洗脱量或从上述标记试剂保持部洗脱上述标记试剂后的该标记试剂的残存量，从而检验上述试剂固化部中的上述标记试剂的结合量的妥当性。
2.如权利要求1所述的层析测定方法，其特征在于：对于在上述试剂固化部中测定的上述标记试剂的结合量，使用从上述标记试剂保持部洗脱的上述标记试剂的洗脱量或从上述标记试剂保持部洗脱上述标记试剂后的该标记试剂的残存量进行计算，从而修正上述试剂固化部中的标记试剂的结合量。
3.如权利要求1所述的层析测定方法，其特征在于：从上述标记试剂保持部洗脱的上述标记试剂的洗脱量或从上述标记试剂保持部洗脱上述标记试剂后的该标记试剂的残存量的测定是利用光学检测器来进行的。
4.如权利要求1所述的层析测定方法，其特征在于：上述标记试剂的洗脱量的测定是在上述展开层上的上述标记试剂保持部和上述试剂固化部之间的区域进行的。
5.如权利要求4所述的层析测定方法，其特征在于：在测定从上述标记试剂保持部洗脱的上述标记试剂的洗脱量后，在对上述试剂固化部中测定上述标记试剂的结合量。
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| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| ASS | Succession or assignment of patent right |
Owner name: PANASONIC HEALTHCARE + MEDICAL EQUIPMENT CO., LTD. Free format text: FORMER OWNER: MATSUSHITA ELECTRIC INDUSTRIAL CO, LTD. Effective date: 20140520 |
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| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20140520 Address after: Ehime Prefecture, Japan Patentee after: Panasonic Healthcare Co., Ltd Address before: Osaka Japan Patentee before: Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. |
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| ASS | Succession or assignment of patent right |
Owner name: PANASONIC HEALTHCARE HOLDINGS CO., LTD. Free format text: FORMER OWNER: PANASONIC HEALTHCARE + MEDICAL EQUIPMENT CO., LTD. Effective date: 20150414 |
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| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20150414 Address after: Tokyo, Japan Patentee after: Panasonic's health medical treatment is controlled interest Co., Ltd. Address before: Ehime Prefecture, Japan Patentee before: Panasonic Healthcare Co., Ltd |
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| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20040804 Termination date: 20160508 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |