CN207571143U - 一种检测试条 - Google Patents
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Abstract
本申请公开了一种检测试条，包括底板，所述底板上依次设有样品垫、结合垫、反应膜、吸水垫；所述样品垫上设有滤血膜；所述结合垫包被有被标记物标记且可与待检测样本中的第一抗原结合的第一抗体B，以及被标记物标记且可与第二抗原结合的第二抗体B，所述结合垫还含有第二抗原；所述反应膜上设有第一检测带、第二检测带，所述第一检测带包被有第一抗体A，所述第一抗体A可与第一抗原结合；所述第二检测带包被有第二抗体A，所述第二抗体A可与第二抗原结合。本申请提供的检测试条，使用方便简单，检测成本低，易于推广，尤其适用于血液中C肽的快速定量检测。
Description
技术领域
本申请涉及检测设备技术领域，特别是涉及一种检测试条。
背景技术
为实现对患者血液中特定物质的定量检测，以获取患者的生理指标用于判断病情，需要使用检测试条，尤其是免疫类床旁检测(point-of-care testing)需要在采样现场即可进行分析，快速得到减压结果。
C肽(C-Peptide)是胰岛β细胞的分泌产物，它由其前体胰岛素原产生。一个分子的胰岛素原经酶切后，裂解成一个分子的胰岛素和一个分子的C肽。
C肽水平的测定可应用于糖尿病分型及了解糖尿病患者胰岛B细胞的功能。无论1型或2型糖尿病患者，初病时都可通过检测C肽或胰岛素水平以判断胰岛B细胞功能。由于外周血中C肽被肝细胞摄取少，不受肝脏酶灭活，半衰期比胰岛素长，更能反应胰岛B细胞分泌时浓度，加之其基础清除率稳定，不受多种因素影响，故C肽释放试验曲线下面积优于胰岛素释放试验，更能代表胰岛B细胞功能。C肽的清除主要通过肾脏降解和排泄，C肽在尿中的浓度高于血浆中的浓度。另外，对于外源性胰岛素的测定，由于C肽与胰岛素抗体无交叉反应，不受胰岛素抗体干扰，外源性胰岛素又不含C肽，故C肽测定显得更为重要，从而了解胰岛B细胞功能情况，对于指导治疗有积极作用。
目前市场上用于C肽检测的产品较多，其主要的检测方法有化学发光法、酶联免疫法等。酶联免疫法操作繁琐，测试时间长，化学发光法需要特殊的仪器和专业操作技术，且仪器投放价格较昂贵，不适合临床快速经济的检测。
实用新型内容
为解决上述技术问题，本实用新型的目的为提供一种检测试条；本实用新型提供的检测试条，使用方便简单，检测成本低，易于推广，尤其适用于血液中C肽的快速定量检测。
本实用新型提供的技术方案如下：
一种检测试条，包括底板，所述底板上依次设有样品垫、结合垫、反应膜、吸水垫；
所述样品垫上设有滤血膜；
所述结合垫包被有被标记物标记且可与待检测样本中的第一抗原结合的第一抗体B，以及被标记物标记且可与第二抗原结合的第二抗体B，所述结合垫还含有第二抗原；
所述反应膜上设有第一检测带、第二检测带，所述第一检测带包被有第一抗体A，所述第一抗体A可与第一抗原结合；所述第二检测带包被有第二抗体A，所述第二抗体A可与第二抗原结合。
优选地，所述样品垫经抗红细胞抗体处理。
优选地，所述第一抗体B、第一抗体A为C肽单克隆抗体对。
优选地，所述第二抗体B、第二抗体A为卵清蛋白单克隆抗体对，所述第二抗原为卵清蛋白。
优选地，所述结合垫中标记第一抗体B、第二抗体B的标记物具体为胶体金或荧光材料。
优选地，所述荧光材料具体为荧光乳胶颗粒。
优选地，所述荧光乳胶颗粒具体为罗丹明、异硫氰酸荧光素、藻红蛋白、多甲藻黄素绿素蛋白、碘化丙啶中的任意一种。
优选地，所述底板为半硬质塑料、硬质塑料、硬纸片中的任意一种。
优选地，所述样品垫的材质为玻璃纤维；和/或，所述结合垫的材质为玻璃纤维。
优选地，所述反应膜的材质为硝酸纤维素。
本实用新型提供的检测试条，将待检测样本滴至滤血膜上，滤去血细胞，血清进入样品垫，并向结合垫的方向流动，复溶结合垫内物质而调节自身的流动性。同时，待检测样品中的第一抗原与结合垫中的第一抗体B结合，结合垫中的第二抗原与第二抗体B结合，并向反应膜继续流动，当流动至反应膜上的第一检测带时，结合在一起的第一抗体B与第一抗原中的第一抗原，与第一抗体A结合被固定。物质继续流动，当流动至第二检测带时，结合在一起的第二抗体B与第二抗原中的第二抗原，与第二抗体A结合被固定。又由于第一抗体B、第二抗体B本身被标记物标记，则在第一检测带处，结合在一起的第一抗体B、第一抗体A以及第一抗原显现标记物的颜色或发出特定波长的光；在第二检测带处，结合在一起的第二抗体B、第二抗体A以及第二抗原显现标记物的颜色或发出特定波长的光。则通过第一检测带、第二检测带处的颜色深度或光的强度，可以计算测试结果，从而获得待检测样品中特定抗原(即第一抗原)的含量，用于诊断。而结合垫中设置的第二抗原，以及第二抗体B、第二抗体A，主要作为体系的内参，用于检测试条是否有效，通过在第二检测带处的颜色深度或发出的光的强度，可以判断试条本身是否有效。
为提高测试效率，在底板远离样品垫的一侧设置吸水垫，吸水垫利用自身的吸水特性增加待检测样本的流动速度，从而提高待检测样本的层析效率。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请中记载的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本实用新型实施例中检测试条的结构示意图；
图2为本实用新型实施例6中试条性能检测的标准曲线图；
附图标记：1-底板；2-样品垫；3-结合垫；4-反应膜；41-第一检测带；42-第二检测带；5-吸水垫；6-滤血膜。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本申请中的技术方案，下面将结合本申请实施例中的附图，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本申请保护的范围。
请如图1至图2所示，本实用新型实施例提供一种检测试条，包括底板1，所述底板1上依次设有样品垫2、结合垫3、反应膜4、吸水垫5；
所述样品垫2上设有滤血膜6；
所述结合垫3包被有被标记物标记且可与待检测样本中的第一抗原结合的第一抗体B，以及被标记物标记且可与第二抗原结合的第二抗体B，所述结合垫3还含有第二抗原；
所述反应膜4上设有第一检测带41、第二检测带42，所述第一检测带41包被有第一抗体A，所述第一抗体A可与第一抗原结合；所述第二检测带42包被有第二抗体A，所述第二抗体A可与第二抗原结合。
本实用新型提供的检测试条，将待检测样本滴至滤血膜6上，滤去血细胞，血清进入样品垫2，并向结合垫3的方向流动，复溶结合垫3内物质而调节自身的流动性。同时，待检测样品中的第一抗原与结合垫中的第一抗体B结合，结合垫3中的第二抗原与第二抗体B结合，并向反应膜4继续流动，当流动至反应膜上的第一检测带41时，结合在一起的第一抗体B与第一抗原中的第一抗原，与第一抗体A结合被固定。物质继续流动，当流动至第二检测带42时，结合在一起的第二抗体B与第二抗原中的第二抗原，与第二抗体A结合被固定。又由于第一抗体B、第二抗体B本身被标记物标记，则在第一检测带41处，结合在一起的第一抗体B、第一抗体A以及第一抗原显现标记物的颜色或发出特定波长的光；在第二检测带42处，结合在一起的第二抗体B、第二抗体A以及第二抗原显现标记物的颜色或发出特定波长的光。则通过第一检测带41、第二检测带42处的颜色深度或光的强度，可以计算测试结果，从而获得待检测样品中特定抗原(即第一抗原)的含量，用于诊断。而结合垫中设置的第二抗原，以及第二抗体B、第二抗体A，主要作为体系的内参，用于检测试条是否有效，通过在第二检测带42处的颜色深度或发出的光的强度，可以判断试条本身是否有效。
为提高测试效率，在底板1远离样品垫2的一侧设置吸水垫5，吸水垫利用自身的吸水特性增加待检测样本的流动速度，从而提高待检测样本的层析效率。
优选地，所述样品垫2经抗红细胞抗体处理。
样品垫2经抗红细胞抗体处理，可以配合滤血膜6，对血液样本中的红细胞进行全面的截留，而又不影响血液中需要检测的物质流过，进入结合垫3中进行检测。
优选地，所述第一抗体B、第一抗体A为C肽单克隆抗体对。
优选地，所述第二抗体B、第二抗体A为卵清蛋白单克隆抗体对，所述第二抗原为卵清蛋白。
本实用新型提供的检测试条中，第一抗体B、第一抗体A为C肽单克隆抗体对，即第一抗体B、第一抗体A均可以与第一抗原(C肽)发生结合反应，但结合的是不同的位点，结合之后就形成了三明治抗体夹心结构，第一抗体A、第一抗体B之间并无直接反应。第二抗体A、B也是同样的关系。
优选地，第一抗体B为C肽单克隆抗体，第一抗体A为抗C肽单克隆抗体。第二抗体B为卵清蛋白单克隆抗体，第二抗原为卵清蛋白，第二抗体A为抗卵清蛋白单克隆抗体。则血样滴在滤血膜6上，并配合样品垫2，滤除红细胞，使含有第一抗原(C肽)的血清进入结合垫3中，血清中的C肽与结合垫3中的C肽单克隆抗体结合，同时在样本流动过程中，带动结合垫3中的卵清蛋白与结合垫3中的卵清蛋白单克隆抗体结合，并向反应膜4移动。当流动至第一检测带41时，与C肽结合的C肽单克隆抗体又与抗C肽单克隆抗体结合而被固定在第一检测带41处。反应液继续流动至第二检测带42时，与卵清蛋白结合的卵清蛋白单克隆抗体又与抗卵清蛋白单克隆抗体结合而被固定在第二检测带42处。由于第一抗体B(即C肽单克隆抗体)、第二抗体B(即卵清蛋白单克隆抗体)分别被标记物标记，则在第一检测带41、第二检测带42处可分别检测到标记物的颜色深度或发出的光的强度，从而计算C肽、卵清蛋白的含量。卵清蛋白的检测，一方面可以用于检测试条是否有效，另一方面可以消除试条由于非特异性吸附引起的干扰。而对C肽含量的检测，可以反映胰岛B细胞的功能情况，从而反映病人的身体状况。
优选地，所述结合垫3中标记第一抗体B、第二抗体B的标记物具体为胶体金或荧光材料。
优选地，所述荧光材料具体为荧光乳胶颗粒。
优选地，所述荧光乳胶颗粒具体为罗丹明、异硫氰酸荧光素、藻红蛋白、多甲藻黄素绿素蛋白、碘化丙啶中的任意一种。
标记物可以是胶体金，或者荧光乳胶颗粒。其中荧光乳胶颗粒可以是罗丹明、异硫氰酸荧光素、藻红蛋白、多甲藻黄素绿素蛋白、碘化丙啶中的任意一种。当标记物是胶体金时，第一检测带41、第二检测带42处检测胶体金的颜色深度，从而反映被检测物质含量。当标记物是荧光乳胶颗粒时，第一检测带41、第二检测带42处检测荧光的强度，从而反映被检测物质含量。优选使用荧光乳胶颗粒。
优选地，所述底板1为半硬质塑料、硬质塑料、硬纸片中的任意一种。
优选地，所述样品垫2的材质为玻璃纤维；和/或，所述结合垫3的材质为玻璃纤维。
优选地，所述反应膜4的材质为硝酸纤维素。
实施例1 荧光乳胶颗粒标记抗体的制备
设置水浴锅中恒温85℃，取180ml超纯水加入圆底烧瓶内，加入搅拌杆调节转速至300转/分钟，依次加入10mM-100mM浓度罗丹明10ml，苯乙烯10ml，10分钟后待圆底烧瓶内液体温度升至85℃左右，再加入引发剂过硫酸钾，使其聚合反应2小时。冷却后测定悬浊液中颗粒的固体含量，再用离心弃上清，加入超纯水重悬颗粒的方法，对颗粒进行洗涤，洗涤3-5遍，洗涤完成后重悬恢复至原体积再待使用。
取上述洗涤好的乳胶颗粒溶液20ml，超声波处理30秒-1分钟，先后加入0.2MNHS和0.2M EDC溶液各30ul，并混合均匀，置8℃摇床，100转/分钟1小时，然后将溶液取出，置于离心管内，称重，再离心弃上清，加入超纯水至原重再将颗粒重悬的洗涤方式，洗涤3-5遍，加入C肽单克隆抗体B 2mg，混合均匀后，8℃，100转/分钟摇床孵育24小时。孵育完成后，加入颗粒悬浮液(PH值7.4的0.01MPB+5％海藻糖+1％PEG6000+1％酪蛋白)80ml，制得C肽单克隆抗体乳胶颗粒。
取上述洗涤好的乳胶颗粒溶液20ml，超声波处理30秒-1分钟，先后加入0.2MNHS和0.2M EDC溶液各30ul，并混合均匀，置8℃摇床，100转/分钟1小时，然后将溶液取出，置于离心管内，称重，再离心弃上清，加入超纯水至原重再将颗粒重悬的洗涤方式，洗涤3-5遍，加入卵清蛋白抗体2mg，混合均匀后，8℃，100转/分钟摇床孵育24小时。孵育完成后，加入颗粒悬浮液(PH值7.4的0.01MPB+5％海藻糖+1％PEG6000+1％酪蛋白)80ml，制得卵清蛋白抗体乳胶颗粒。
实施例2 结合垫的制备
将实施例1制备好的卵清蛋白抗体乳胶颗粒，按每毫升颗粒加入2mg/ml卵清蛋白50μl，混合均匀后，与C肽单克隆抗体乳胶颗粒按照1:10-20的比例混合均匀。用颗粒悬浮液(PH值7.4的0.01MPB+5％海藻糖+1％PEG6000+1％酪蛋白)调节颗粒浓度，按0.5-1.μg/cm2的用量涂覆到结合垫上，冻干后干燥保存。
实施例3 样品垫制备
配制样品垫液(PH值7.4的0.02MPB+0.1％TW20+10mg/L抗红细胞抗体)，铺至18cm*30cm玻璃纤维上，每张玻璃纤维铺置的量为40ml，充分浸润，沥干，37℃烘干16h，烘干后将玻璃纤维用斩切机将其裁成29mm*300mm大小，加干燥剂装铝箔袋封口保存。
实施例4 反应膜制备
分别将抗C肽单克隆抗体A和抗卵清蛋白单克隆抗体，各用(0.01MPB+3％海藻糖)包被缓冲液稀释成1.0-2.0mg/ml，使用量为36ul/30CM，用喷膜机喷膜包被，使其固定，分别用划膜仪划膜至硝酸纤维素膜(赛多利斯2CM，95膜)上，形成第一检测带41、第二检测带42，37℃反应烘干16h，装袋，备用。
实施例5 试条组装
将实施例2至实施例4制备的结合垫、样品垫、反应膜，与滤血膜，以及吸水垫(如吸水纸)依次贴到PVC底板上，按实验要求均匀切成适当宽度的膜条，装壳后可用于临床样本检测。
实施例6 试纸性能检测
将C肽蛋白配制成20ug/L、15ug/L、10ug/L、5ug/L、3ug/L、1ug/L、0.5ug/L，取实施例5制备的试条，每个浓度测试10次，将样本用PBS(PH值7.4，0.02M)稀释2倍(30ul样本加入到60ul PBS缓冲液中，充分混匀)，取75ul混匀后的样本滴加到试条上，反应10分钟后读取结果。
检测结果如下：
测试结果的线性方程为y＝1.0003x-0.0041，R2＝0.9995，请见附图2。从测定结果表明：实施例6中测试线性R2＞0.99，CV＜10％。
实施例7 临床样品检测
取C肽临床检测血样10份，使用实施例5制作的试条，进行临床血液标本测试。
检测结果如下：
| 样本序号 | 临床值(ug/L) | 测试值(ug/L) | 测试偏差 |
| 1 | 3.31 | 3.22 | -2.72％ |
| 2 | 1.06 | 0.98 | -7.55％ |
| 3 | 8.68 | 9.03 | 4.03％ |
| 4 | 17.69 | 16.89 | -4.52％ |
| 5 | 2.95 | 3.12 | 5.76％ |
| 6 | 0.82 | 0.76 | -7.32％ |
| 7 | 0.63 | 0.66 | 4.76％ |
| 8 | 7.55 | 7.92 | 4.90％ |
| 9 | 12.69 | 14.16 | 11.58％ |
| 10 | 19.16 | 18.92 | -1.25％ |
从测定结果表明：实施例7中准确度相对偏差﹤15％。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本实用新型。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本实用新型的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本实用新型将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
Claims (10)
1.一种检测试条，其特征在于，包括底板(1)，所述底板(1)上依次设有样品垫(2)、结合垫(3)、反应膜(4)、吸水垫(5)；
所述样品垫(2)上设有滤血膜(6)；
所述结合垫(3)包被有被标记物标记且可与待检测样本中的第一抗原结合的第一抗体B，以及被标记物标记且可与第二抗原结合的第二抗体B，所述结合垫(3)还含有第二抗原；
所述反应膜(4)上设有第一检测带(41)、第二检测带(42)，所述第一检测带(41)包被有第一抗体A，所述第一抗体A可与第一抗原结合；所述第二检测带(42)包被有第二抗体A，所述第二抗体A可与第二抗原结合。
2.根据权利要求1所述的试条，其特征在于，所述样品垫(2)经抗红细胞抗体处理。
3.根据权利要求2所述的试条，其特征在于，所述第一抗体B、第一抗体A为C肽单克隆抗体对。
4.根据权利要求3所述的试条，其特征在于，所述第二抗体B、第二抗体A为卵清蛋白单克隆抗体对，所述第二抗原为卵清蛋白。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的试条，其特征在于，所述结合垫(3)中标记第一抗体B、第二抗体B的标记物具体为胶体金或荧光材料。
6.根据权利要求5所述的试条，其特征在于，所述荧光材料具体为荧光乳胶颗粒。
7.根据权利要求6所述的试条，其特征在于，所述荧光乳胶颗粒具体为罗丹明、异硫氰酸荧光素、藻红蛋白、多甲藻黄素绿素蛋白、碘化丙啶中的任意一种。
8.根据权利要求1-4中任一项所述的试条，其特征在于，所述底板(1)为半硬质塑料、硬质塑料、硬纸片中的任意一种。
9.根据权利要求1-4中任一项所述的试条，其特征在于，所述样品垫(2)的材质为玻璃纤维；和/或，所述结合垫(3)的材质为玻璃纤维。
10.根据权利要求1-4中任一项所述的试条，其特征在于，所述反应膜(4)的材质为硝酸纤维素。
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| GR01 | Patent grant | ||
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