CN206832816U - 猪瘟抗体半定量检测卡 - Google Patents
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Abstract
本实用新型公开了一种猪瘟抗体半定量检测卡，包括卡壳和卡壳内的试纸条，卡壳上设有加样孔和视窗孔，所述试纸条包括底板，所述底板上依次衔接有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水纸；所述硝酸纤维素膜上设有猪瘟E2蛋白抗原对照线、猪瘟E2蛋白抗原检测线和羊抗兔抗体质控线。本实用新型提供的猪瘟抗体半定量检测卡，其为半定量的胶体金检测卡，能检测出是否有抗体以及抗体水平的高低，有助于技术人员更好地判断是否要打疫苗。
Description
技术领域
本实用新型涉及猪瘟抗体检测卡领域，尤其涉及一种快速半定量检测猪瘟病毒抗体全血检测卡。
背景技术
猪瘟（Classical Swine Fever ,CSF)是由猪瘟病毒引起的一种急性、热性、高度接触性传染病，主要特征是高温、微血管变性而引起全身出血、坏死、梗塞。猪瘟对猪危害极为严重，会造成养猪业重大损失，被世界卫生组织(OIE)列为A类传染病。猪瘟目前是发生最多、危害最大、流行最广的动物传染病之一。
疫苗免疫是我国猪瘟防控的主要手段，采集免疫后猪血清，并检测血清中猪瘟抗体的效价是监控猪瘟的主要方法。目前市面上主要的检测抗体有中和试验、ELISA酶标试剂盒、胶体金快速检测卡。中和试验需要培养病毒，需要一定的技术人员和实验设施，还有传播病毒的危险，费用昂贵；ELISA操作复杂，需要专业的设备和技术人员；目前市面上的胶体金卡大多是只有定性的功能，结果只能是有抗体或者没有，但是有抗体不一定就有保护病毒感染的能力，抗体需要达到一定的水平才有保护机体抵抗病毒感染的能力，至于达到多高的水平才有保护力，不同厂家都没有一个明确的说法。
实用新型内容
本实用新型的目的是提供一种猪瘟抗体半定量检测卡，其为半定量的胶体金检测卡，能检测出是否有抗体以及抗体水平的高低，有助于技术人员更好地判断是否要打疫苗。
为实现上述目的，本实用新型提供一种猪瘟抗体半定量检测卡，包括卡壳和卡壳内的试纸条，卡壳上设有加样孔和视窗孔，所述试纸条包括底板，所述底板上依次衔接有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水纸；所述硝酸纤维素膜上设有猪瘟E2蛋白抗原对照线、猪瘟E2蛋白抗原检测线和羊抗兔抗体质控线。
作为本实用新型的进一步改进，所述硝酸纤维素膜两端分别与金标垫和吸水纸相互交叠连接，所述样品垫压贴在金标垫上。
作为本实用新型的更进一步改进，所述金标垫上设有用胶体金标记的猪瘟E2蛋白抗原和和胶体金标记的兔抗羊抗体的混合物喷涂层。
作为本实用新型的更进一步改进，所述样品垫为全血滤膜。
有益效果
与现有技术相比，本实用新型的猪瘟抗体半定量检测卡的优点为：设定了一条对照线R线，除了能检测出猪体内的猪瘟抗体水平，还能半定量的检测出抗体水平的高低，就是否需要打疫苗这个难题给出了实际的参考意义。在检测过程中，样本中的猪瘟抗体会被金标垫上用胶体金标记的猪瘟E2蛋白抗原特异性的识别并结合，并沿层析膜移动，和硝酸纤维素膜上的对照线和检测线上的抗原结合，通过对应卡壳上的观察孔，添加样本后只要检测线T线的颜色等同或者较对照线R线深，就表明该猪体内有较高抗体滴度，具有一定的保护力，不需要再打疫苗；如果检测线T线不出线或者出线但是颜色较对照线R线显色浅，就表明该猪体内的抗体水平不足，需要加强免疫。本实用新型操作简单，灵明度高，检测结果快速准确。半定量的检测方法对猪只是否需要打疫苗具有很高的临床指导意义。
通过以下的描述并结合附图，本实用新型将变得更加清晰，这些附图用于解释本实用新型的实施例。
附图说明
为了更清楚地说明本实用新型实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本实用新型的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为猪瘟抗体半定量检测卡的结构布置图。
图中，底板1；样品垫2；金标垫3；硝酸纤维素膜4；对照线5；检测线6；质控线7；吸水纸8；卡壳9；加样孔10；视窗孔11。
具体实施方式
现在参考附图描述本实用新型的实施例。
实施例
本实用新型的具体实施方式如图1所示，一种猪瘟抗体半定量检测卡，包括卡壳9和卡壳9内的试纸条，卡壳9上设有加样孔10和视窗孔11。所述试纸条包括底板1，所述底板1上依次衔接有样品垫2、金标垫3、硝酸纤维素膜4和吸水纸8；所述硝酸纤维素膜4上设有猪瘟E2蛋白抗原对照线5、猪瘟E2蛋白抗原检测线6和羊抗兔抗体质控线7。加样孔10的位置与样品垫2对应，视窗孔11的位置与对照线5、检测线6和质控线7对应。对照线为R线，检测线为T线，质控线为C线。
所述硝酸纤维素膜4两端分别与金标垫3和吸水纸8相互交叠连接，所述样品垫2压贴在金标垫3上。
金标垫3上设有用胶体金标记的猪瘟E2蛋白抗原和胶体金标记的兔抗羊抗体的混合喷涂层。该混合喷涂层中，胶体金标记的猪瘟E2蛋白抗原和胶体金标记的兔抗羊抗体的混合比例为体积比1:1。
金标垫3上用胶体金标记的猪瘟E2蛋白抗原是猪瘟E2蛋白抗原与一定数量的胶体金颗粒溶液通过物理吸附连接而成，所述胶体金颗粒溶液中含有的胶体金颗粒大小为25nm。金标垫3上用胶体金标记的兔抗羊抗体是兔抗羊抗体与一定数量的胶体金颗粒溶液通过物理吸附连接而成，胶体金颗粒溶液中含有的胶体金颗粒大小为25nm。然后将制备好的胶体金猪瘟E2蛋白抗原和胶体金兔抗羊抗体按体积比1:1的比例共同铺在金标垫3上。
所述样品垫2为全血滤膜。
金标垫3上与胶体金结合的猪瘟E2蛋白抗原，在和猪血液样本中的抗体结合后和硝酸纤维素膜4上的对照线R5和检测线T6上的猪瘟E2蛋白抗原结合显色；金标垫3上与胶体金结合的兔抗羊抗体，用来和硝酸纤维素膜4上的质控线7上的羊抗兔抗体结合显色。
胶体金颗粒溶液的制备方法如下：
（1）配制1%的HAuCl4及1%的柠檬酸三钠。
（2）取300ml纯水加热到沸腾，再加入6ml的HAuCl4，加热5分钟并搅拌混匀；
（3）快速加入9.6ml的柠檬酸三钠，继续加热10分钟；
（4）关掉电源，自然冷却待用。
胶体金标记的猪瘟E2蛋白抗原是将上述胶体金颗粒和猪瘟E2蛋白抗原通过物理吸附连接而成，其具体步骤如下：
（1）E2蛋白于0.01M的PBS中透析过夜；
（2）每毫升胶体金溶液中加入8µL、0.02M的K2CO3，调节PH；
（3）缓慢加入终浓度为10µg/mL的猪瘟E2蛋白，磁力搅拌器搅拌混匀40-60min；
（4）加入终浓度为1%的BSA，搅拌混匀40min；
（5）两步离心纯化金标抗原：5000r/min离心20min，收集管底沉淀，同时将上清再8500r/min离心30min，收集管底沉淀。所收集的沉淀用复溶液，按照标记胶体金体积的1/8重悬复溶。
胶体金标记的兔抗羊抗体是将胶体金颗粒和兔抗羊抗体通过物理吸附连接而成，其具体步骤如下：
（1）兔抗羊抗体于0.01M的PBS中透析过夜；
（2）每毫升胶体金溶液中加入10µL、0.02M的K2CO3，调节PH；
（3）缓慢加入终浓度为10µg/mL的兔抗羊抗体，磁力搅拌器搅拌混匀40-60min；
（4）加入终浓度为1%的BSA，搅拌混匀40min；
（5）两步离心纯化金标
抗体：5000r/min离心20min，收集管底沉淀，同时将上清再8500r/min离心30min，收集管底沉淀。所收集的沉淀用复溶液，按照标记胶体金体积的1/8重悬复溶，两种金标液按1:1的比例充分混匀后按30mL的量铺一张金垫，金垫宽度为25cm，长度为30cm，于干燥间过夜烘干；
（6）所用的复溶液为0.05mol/L Tris-cl，pH8.0；加入1%牛血清白蛋白，2%的蔗糖，0.15%的吐温-20。
在本实施例中，硝酸纤维素膜4上的对照线5上包被的是0.5mg/ml的猪瘟E2蛋白抗原，检测线6上包被的是1.0mg/ml的猪瘟E2蛋白抗原，质控线7上包被的是0.5mg/ml羊抗兔抗体。
在本实施例中，将待检样本100µl加入到样品孔10后，与金标垫3上的猪瘟E2蛋白抗原胶体金复合物沿层析膜移动。若待检血液样本中存在猪瘟抗体时，此猪瘟抗体先于胶体金标记的猪瘟E2蛋白抗原结合，当流经对照线5时，猪瘟抗体被固定在硝酸纤维素膜4上的对照线5上的猪瘟E2蛋白抗原捕获，形成“猪瘟抗原-猪瘟抗体-胶体金标记的猪瘟抗原”的复合物，由于胶体金标记的猪瘟E2蛋白抗原上的胶体金颗粒聚集而显示红色线条，若检测样本中的猪瘟抗体含量高，超过了对照线5上的抗原结合量，多余的抗体-胶体金标记的猪瘟抗原继续沿层析膜移动，当流经检测线6时，猪瘟抗体被固定在硝酸纤维素膜4上的检测线6上的猪瘟E2蛋白抗原捕获，形成“猪瘟抗原-猪瘟抗体-胶体金标记的猪瘟抗原”复合物，由于胶体金标记的猪瘟E2蛋白抗原上的胶体金颗粒聚集而显示红色线条，形成的“猪瘟抗原-猪瘟抗体-胶体金标记的猪瘟抗原”复合物越多，检测线6颜色就越深，只要检测线6线的颜色比对照线5 颜色深或者等同于对照线5，就表明猪体内有足够量的猪瘟抗体，猪只免疫合格。如果检测线6没有线条，或者检测线6有线条但显色明显浅于对照线5，就表明猪只免疫不合格，需要加强免疫。
以上结合最佳实施例对本实用新型进行了描述，但本实用新型并不局限于以上揭示的实施例，而应当涵盖各种根据本实用新型的本质进行的修改、等效组合。
Claims (3)
1.一种猪瘟抗体半定量检测卡，包括卡壳(9)和卡壳(9)内的试纸条，卡壳(9)上设有加样孔(10)和视窗孔(11)，其特征在于,所述试纸条包括底板(1)，所述底板(1)上依次衔接有样品垫(2)、金标垫(3)、硝酸纤维素膜(4)和吸水纸(8)；所述硝酸纤维素膜(4)上设有猪瘟E2蛋白抗原对照线(5)、猪瘟E2蛋白抗原检测线(6)和羊抗兔抗体质控线(7)；所述金标垫(3)上设有用胶体金标记的猪瘟E2蛋白抗原和胶体金标记的兔抗羊抗体的混合物喷涂层。
2.根据权利要求1所述的一种猪瘟抗体半定量检测卡，其特征在于，所述硝酸纤维素膜(4)两端分别与金标垫(3)和吸水纸(8)相互交叠连接，所述样品垫(2)压贴在金标垫(3)上。
3.根据权利要求1所述的一种猪瘟抗体半定量检测卡，其特征在于，所述样品垫(2)为全血滤膜。
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