CN206208907U - 一种用于肌钙蛋白elisa检测的试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本实用新型涉及一种用于肌钙蛋白ELISA检测的试剂盒,包括盒体和盒盖,盒体内设置有试剂固定板、酶标板和盛装物品的空腔,试剂固定板上设置有标准品管、标准品稀释液管、红细胞保护试剂管、样品稀释液管、酶标试剂管、显色剂A液管、显色剂B液管、终止液管和浓缩洗涤液管,酶标板的侧面设置有温度指示卡,盛装物品的空腔内放置有封板覆膜。红细胞保护试剂管盛装有红细胞保护试剂,其可以减少样品离心过程中红细胞的破裂,克服标本溶血对检测结果的影响。酶标板上贴有温度指示卡,其能够避免温育时间不足影响检测结果。
Description
技术领域
本实用新型涉及一种用于肌钙蛋白ELISA检测的试剂盒,属于免疫学检测技术领域。
背景技术
心肌肌钙蛋白I(Cardiactropnin I,cTnI)于20世纪80年代末首次报道应用于急性心肌梗死的临床诊断。cTnI分子量小,释放入血时程短,且与骨骼肌无交叉反应,具有高度的心肌特异性和灵敏度,因此,其作为心肌疾病病情检测、疗效观察及预后评估的最佳标志物(李玉芹,李会强;肌钙蛋白I的检测方法及研究进展,哈尔滨医药.2013,33(3):231-232),应用于心肌损伤的非侵入性监测,已被临床广泛接受。目前cTnI测定方法较多,主要有胶体金免疫层析法、放射免疫法、化学发光法、酶联荧光分析法、胶乳增强免疫比浊法、酶联免疫吸附试验法等。
目前,酶联免疫吸附试验(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)法已成为检测cTnI的常规方法。常用的双抗体夹心ELISA法,用抗人cTnI抗体包被于酶标板上,实验时样品或标准品中的人cTnI会与包被抗体结合,游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人cTnI抗体和辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase,HRP)标记的亲和素。抗人cTnI抗体与结合在包被抗体上的人cTnI结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物TMB,TMB在HRP的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,cTnI浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中cTnI的浓度。ELISA法适用于批量标本的定量检测,但是该方法影响因素较多,存在分离和洗涤步骤繁琐、测定周期偏长等问题,限制了其应用。
ELISA试验中的影响因素较多,主要包括标本因素和操作因素。标本引起的假阳性以及假阴性结果主要由干扰物质所致。将含有干扰物质的标本,如溶血标本及混有红细胞的血清,采用ELISA法检测易产生假阳性。溶血标本因红细胞破坏溶解时释放出大量具有过氧化物酶活性的血红蛋白,在洗涤过程中往往难以洗脱,它可使H2O2释放出原生态氧,从而催化底物四甲基联苯胺生成可溶性的有色物质,在以辣根过氧化物酶为标记的ELISA测定中,会导致非特异性显色,呈假阳性,干扰测定结果。ELISA法的操作步骤包括标本的采集以及保存和加样再温育,接着洗板、显色、比色最后结果判断,每个操作步骤都有可能影响到最后的检测结果,如温育的温度和时间,如果温育时间不足或者温育温度不够,弱阳性标本难以检出。温育的温度和时间一般按照试剂盒的说明书操作即可,但是在实际操作时,经常会忽略从室温平衡温度逐步上升到温育温度如37℃所需时间,导致温育时间不足影响检测结果(董海新,金呈强,余维星.ELISA实验影响因素的研究进展,医学检验与临床.2015,26(4):82-83)。
实用新型内容
为克服标本采集中溶血的发生以及温育时间不足的影响,本实用新型提供了一种用于肌钙蛋白ELISA检测的试剂盒。具体的:
所述试剂盒包括盒体和盒盖,所述盒体内设置有试剂固定板、酶标板和盛装物品的空腔,所述试剂固定板上设置有标准品管、标准品稀释液管、红细胞保护试剂管、样品稀释液管、酶标试剂管、显色剂A液管、显色剂B液管、终止液管和浓缩洗涤液管,所述酶标板的侧面设置有温度指示卡,所述盛装物品的空腔内放置有封板覆膜。所述酶标板是由外框支撑架及放置其上的可拆卸的酶标反应微孔条组成,所述酶标反应微孔条的数量为10-12条。
所述酶标反应微孔条有反应孔,所述反应孔预包被了抗人cTnI抗体,所述反应孔的数量为8个。
所述温度指示卡设置在所述外框支撑架的外侧,所属温度指示卡和所述外框支撑架通过粘合剂相连接。使用酶标板进行温育时,能清楚直观的看到温度是否上升至温育温度,从而开始计算温育时间,避免温育时间不足影响检测结果。
所述温度指示卡为液晶测温卡,所述温度指示卡的温度指示范围为32-52℃。
所述红细胞保护试剂管用于盛装红细胞保护试剂,所述红细胞保护试剂为红细胞膜稳定剂,可以减少样品离心过程中红细胞的破裂,克服标本溶血对检测结果的影响。优选的红细胞膜稳定剂为甘露醇或蔗糖。
所述酶标试剂管用于盛装酶标试剂,优选的酶标试剂为生物素化的抗人cTnI抗体。
所述显色剂A液管用于盛装显色剂A液,优选的显色剂A液为辣根过氧化物酶标记的亲和素。
所述显色剂B液管用于盛装显色剂B液,优选的显色剂B液为TMB显色液。
本实用新型提供的肌钙蛋白ELISA检测试剂盒能够克服标本采集中溶血的发生以及温育时间不足所带来的影响。
附图说明
图1:试剂盒的整体结构示意图;
图2:试剂固定板的结构示意图;
图3:试剂盒的剖面示意图;
图4:酶标板的结构示意图。
1、盒体 2、盒盖 3、试剂固定板 4、标准品管 5、标准品稀释液管 6、红细胞保护试剂管 7、样品稀释液管 8、酶标试剂管 9、显色剂A液管 10、显色剂B液管 11、终止液管 12、浓缩洗涤液管 13、酶标板 14、产品说明书 15、产品质检报告 16、封板覆膜 17、温度指示卡
具体实施方式
为了对本实用新型的技术特征、目的和有益效果有更清楚的理解,先参照说明书附图对本实用新型的技术方案进行以下详细说明,但不能理解为对本实用新型的可实施范围的限定。
实施例1
本实施例提供了一种肌钙蛋白ELISA检测试剂盒,结合附图对本实用新型作进一步说明:
该试剂盒如图1所示,由盒体1和盒盖2组成,试剂盒内包含酶标板13、标准品管4、标准品稀释液管5、红细胞保护试剂管6、样品稀释液管7、酶标试剂管8、显色剂A液管9、显色剂B液管10、终止液管11、浓缩洗涤液管12和盛装物品的空腔,所述盛装物品的空腔可以用于放置ELISA检测试剂盒需要其他部件,在本实施例中盛装物品的空腔放置了酶标板13、封板覆膜16、产品说明书14和产品质检报告15。
酶标板13是由外框支撑架及放置其上的可拆卸的12条酶标反应微孔条组成,酶标反应微孔条有8个酶标反应孔,每个反应孔预包被了抗人cTnI抗体。
酶标板外框支撑架外侧贴有温度指示卡17,温度指示卡17为液晶测温卡,温度指示卡17的温度指示范围为32-52℃。
红细胞保护试剂管6用于盛装红细胞膜稳定剂。红细胞膜稳定剂可以选择本领域技术人员常用的那些,如甘露醇等。红细胞膜稳定剂可以减少样品离心过程中红细胞的破裂,克服标本溶血对检测结果的影响。
酶标试剂管8用于盛装酶标试剂。酶标试剂可以采用本领域技术人员常采用的那些,如生物素化的抗人cTnI抗体。
显色剂A液管9用于盛装显色剂A液,显色剂B液管10用于盛装显色剂B液。显色剂A液和显色剂B液均可以采用本领域技术人员常采用的那些,如显色剂A液采用辣根过氧化物酶标记的亲和素,显色剂B液采用TMB显色液。
使用实施例1所述的试剂盒进行人血清肌钙蛋白ELISA检测的步骤方法可以按照以下步骤进行:
样品处理:全血样品加入红细胞保护试剂管6中的红细胞保护试剂后放置2小时后于1000g离心20分钟,取上清即可检测。
操作步骤:
1、提前20分钟从冰箱中取出试剂盒的外包装,平衡至室温。
2、将浓缩洗涤液用双蒸水按1∶25稀释,按试验需要量配制洗涤液,当日使用。
3、标准品的稀释:根据需要使用标准品稀释液对标准品进行倍比稀释,配制成以下浓度:10、5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0.156、0ng/mL。
4、加样:试验中分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μL,标准孔加标准品100μL,待测样品孔加待测样品100μL,注意不要有气泡,加样时将样品加于酶标板反应孔的底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
5、温育:给酶标板13加盖封板覆膜16,放入37℃恒温箱中,观察酶标板侧面的温度指示卡17,温度上升至37℃后孵育90分钟。
6、加酶:小心揭开封板覆膜16,弃去液体,甩干,每孔加入酶标试剂100μL,空白孔除外。
7、温育:给酶标板13加盖封板覆膜16,放入37℃恒温箱中,观察酶标板13的侧面温度指示卡17,温度上升至37℃后孵育60分钟。
8、洗涤:小心揭开封板覆膜16,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,大约350μL/孔,甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。
9、温育:每孔加显色剂A液100μL,加盖酶标板覆膜16,放入37℃恒温箱中,观察温度指示卡17,温度上升至37℃后孵育30分钟。
10、洗涤:小心揭开封板覆膜16,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,大约350μL/孔,甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。
11、显色:每孔加显色剂B液90μL,给加盖封板覆膜16,放入37℃恒温箱中,观察温度指示卡17,温度上升至37℃后孵育15分钟。
12、终止:小心揭开封板覆膜16,每孔加终止液50μL,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
13、测定:立即使用酶标仪在450nm波长测量各孔的吸光度(OD值),测定应在加终止液后15分钟内进行。
Claims (9)
1.一种用于肌钙蛋白ELISA检测的试剂盒,包括盒体和盒盖,其特征在于,
所述盒体内设置有试剂固定板、酶标板和盛装物品的空腔,
所述试剂固定板上设置有标准品管、标准品稀释液管、红细胞保护试剂管、样品稀释液管、酶标试剂管、显色剂A液管、显色剂B液管、终止液管和浓缩洗涤液管,
所述酶标板的侧面设置有温度指示卡,
所述盛装物品的空腔内放置有封板覆膜。
2.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述酶标板由外框支撑架和设置在所述外框支撑架上的可拆卸的酶标反应微孔条组成,所述酶标反应微孔条的数量为10-12条。
3.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于,所述酶标反应微孔条上设置有反应孔,所述反应孔包被有抗人cTnI的抗体,所述反应孔的数量为8个。
4.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于,所述温度指示卡设置在所述外框支撑架的外侧,所述温度指示卡和所述外框支撑架通过粘合剂相连接。
5.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述温度指示卡为液晶测温卡,所述温度指示卡的温度指示范围为32-52℃。
6.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述红细胞保护试剂管用于盛装红细胞保护试剂,所述红细胞保护试剂为红细胞膜稳定剂。
7.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述酶标试剂管用于盛装酶标试剂。
8.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述显色剂A液管用于盛装显色剂A液。
9.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述显色剂B液管用于盛装显色剂B液。
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