CN202583208U - 一种胃蛋白酶原ⅱ生物素-链霉亲和素酶联免疫检测试剂盒 - Google Patents
一种胃蛋白酶原ⅱ生物素-链霉亲和素酶联免疫检测试剂盒 Download PDFInfo
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Abstract
一种胃蛋白酶原Ⅱ生物素-链霉亲和素酶联免疫检测试剂盒，属于体外试剂诊断技术领域。本实用新型基于双抗夹心方法，利用了抗原抗体特异性免疫反应，定量检测血清（浆）中胃蛋白酶原Ⅱ含量。试剂盒内组成包括：抗体反应板、PGⅡ标准品、生物素标记抗体、反应稀释液、链霉亲和素-HRP酶工作液、浓缩洗涤液、显色液和终止液。利用生物素-链霉亲和素的放大效应和高效价的单克隆抗体，达到血清不需要稀释直接反应检测，减轻工作量的目的；同时获得宽的测量范围，便于临床使用。本实用新型的积极意义在于：试剂盒灵敏度高、特异性好、测量范围宽、操作简单，利于大规模推广应用，有广阔的市场前景。
Description
技术领域
一种胃蛋白酶原Ⅱ生物素-链霉亲和素酶联免疫检测试剂盒，本实用新型涉及一种血清（血浆）中胃蛋白酶原Ⅱ检测试剂盒，属于体外试剂诊断领域中血清（浆）抗原的酶联免疫检测（ELISA）。
背景技术
胃蛋白酶原Ⅱ（简称PGⅡ）来源于全胃腺和远端十二指肠Brunner氏腺，胃粘膜合成的PGII约为总量的25%，PGⅡ大部分进入消化道，少量进入血液循环，因此被称为“反映胃部状态和功能的指针”。
国内外临床研究指出，PGⅡ与胃底粘膜病变的相关性较大，其升高与胃底腺管萎缩、肠上皮化生或假幽门腺化生、异型增生有关。测定PGⅡ含量有助检测出十二指肠溃疡、萎缩性胃炎、胃炎、胃癌等其他消化道疾病，供临床检测和体检筛查需求。在人群胃病筛查中，每个人做胃镜是不现实的，可通过非侵入性血清PG检测将浅表性胃炎、糜烂性胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡、胃癌等高危人群筛查出来，再进行胃镜检查是一种切实可行的方案。
目前，PG的检测方法主要有TRFIA、ELISA、生化法及化学发光法。但是或是存在检测仪器价格昂贵，或是检测准确度不能达到临床要求等问题，推广使用困难。而本实用新型选用了技术成熟、价格低廉，无技术壁垒的ELISA双抗夹心方法，其特点是加入了生物素-链霉亲和素放大体系，提高检测灵敏度和特异度，增加测量量程，能达到和符合临床使用要求。
实用新型内容
本实用新型的目的是提供一种新型的PGⅡ的生物素-链霉亲和素酶联免疫检测试剂盒，运用生物素-（链霉）亲和素的放大效应，将双抗夹心法的信号放大，达到高灵敏、特异性好、量程范围宽的目的。该试剂盒能够实现快速、简便的检测。
本实用新型的技术方案：一种血清胃蛋白酶原Ⅱ生物素-链霉亲和素酶联免疫检测试剂盒，试剂盒内设有抗体反应板（1），PGⅡ标准品（2），生物素-PGⅡ单克隆抗体（3），链霉亲和素-HRP酶工作液（4），显色液A液与B液各一瓶（5），反应终止液（6），样品稀释液（7），浓缩洗涤液（8）和盒体（9）组成；
抗体反应板（1）为胃蛋白酶原Ⅱ单克隆抗体包被，可拆卸96孔酶标板；生物素-PGⅡ单克隆抗体（3）为连有生物素的另一株胃蛋白酶原Ⅱ单克隆抗体；PGⅡ标准品（2）为不同浓度的胃蛋白酶原Ⅱ抗原冻干品一套；链霉亲和素-HRP酶工作液（4）是辣根过氧化物酶标记的亲和素。
该血清（浆）PGⅡ酶联免疫检测试剂盒，另附操作说明书。每个试剂盒的试剂足够96次测定，检测时包被抗体与生物素化另一株抗体与样本中的抗原构成夹心复合物，加入酶标链霉亲和素工作液后，用显色液显色，样品OD值与样品PGⅡ含量成正相关，根据标准曲线即获得相应PGⅡ浓度，操作简便。
本实用新型的有益效果：一、灵敏度高，血清（浆）样本不需要稀释，比普通ELISA方法高十倍左右；二、量程宽，样品浓度值介于0-50ng/mL的都能准确检测；三、检测时间短，从样品孵育到显色，1.5小时完成；四、加样量少，每次仅20μL。
附图说明
图1本实用新型的结构示意图。图中：1、包被有PGⅡ单克隆抗体的微孔板，即抗体反应板1块（96T）；2、PGⅡ标准品（0、5、10、20、30、50ng/mL，6瓶）；3、生物素-PGⅡ单克隆抗体（另一株，与包被抗体成对）1×0.5mL/瓶（用时1︰50稀释）；4、链霉亲和素-HRP酶工作液1×15mL/瓶；5、显色液A液与B液各一瓶；6、反应终止液1×10mL/瓶；7、样品稀释液1×20mL/瓶；8、浓缩洗涤液1×40mL/瓶；9、盒体。
具体实施方式
实施例1：PGⅡ的ELISA样品测定
检测：
1、加样：先向微孔板中加入20μL标准品或血清（浆）样品，再加入100μL/孔已稀释的生物素- PGⅡ单克隆抗体溶液。
2、37℃孵育45min。
3、加入洗涤液（使用时蒸馏水25倍稀释）洗板4次，拍干。
4、100μL/孔依次加入链霉亲和素-HRP酶工作液，37℃孵育15min。
5、加入洗涤液（使用时蒸馏水25倍稀释）洗板4次，拍干。
6、显色液A液、B液各一滴，37℃避光，孵育15min。
7、每孔依次滴加终止液，静置1min。
8、加入终止液后，20min内读数，酶标仪测量每孔荧光计数OD450。
结果处理：根据标准品浓度和对OD值绘制标准曲线，将样品的OD值代入标准曲线中，计算得到样品中PGⅡ含量(表1)。
表1
本实用新型所述实施例是指导性的，非限定性的，只是帮助理解本实用新型，因此本实用新型并不限于具体实施方式中所述的实施例，凡是由本领域技术人员根据本实用新型的技术方案得出的其他具体实施方式，同样属于本实用新型保护的范围。
Claims (1)
1.一种血清胃蛋白酶原Ⅱ生物素-链霉亲和素酶联免疫检测试剂盒，其特征是：试剂盒内设有抗体反应板（1），PGⅡ标准品（2），生物素-PGⅡ单克隆抗体（3），链霉亲和素-HRP酶工作液（4），显色液A液与B液各一瓶（5），反应终止液（6），样品稀释液（7），浓缩洗涤液（8）和盒体（9）组成；
抗体反应板（1）为胃蛋白酶原Ⅱ单克隆抗体包被，可拆卸96孔酶标板；生物素-PGⅡ单克隆抗体（3）为连有生物素的另一株胃蛋白酶原Ⅱ单克隆抗体；PGⅡ标准品（2）为不同浓度的胃蛋白酶原Ⅱ抗原冻干品一套；链霉亲和素-HRP酶工作液（4）是辣根过氧化物酶标记的亲和素。
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| CN103995127A (zh) * | 2013-10-16 | 2014-08-20 | 无锡宜偌维盛生物技术有限公司 | 一种pgi和pgii联合检测试剂盒 |
| CN104101711A (zh) * | 2013-04-07 | 2014-10-15 | 广州瑞博奥生物科技有限公司 | 一种改良的酶联免疫测定试剂盒及其检测方法 |
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