CN204594992U - 牛奶中黄曲霉毒素m1吸附亲和柱检测装置 - Google Patents
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Abstract
本实用新型公开了一种牛奶中黄曲霉毒素M1吸附亲和柱检测装置，属于检测设备技术领域。该检测装置由免疫亲和微柱、接收瓶和荧光分光光度计组成，免疫亲和微柱其中包括注射器、聚合物微球和玻璃纤维，利用聚合物微球作为亲和柱的载体，将免疫活性抗体AFM1通过适当的方法偶联到载体上。将注射器、玻璃纤维滤层、偶联黄曲霉毒素M1抗体的免疫亲和聚合物微球填料进行恰当的结构设计，组成亲和微柱。能够使整个微柱净化过程实现高效、快速的操作，从进样到洗脱达到污染少，对操作人员安全的条件。配套荧光光度计，用于检测洗脱液中的AFM1的浓度。
Description
技术领域
本实用新型涉及一种牛奶中黄曲霉毒素M1吸附亲和柱检测装置，属于检测设备技术领域。
背景技术
黄曲霉毒素是霉菌毒素中毒性最大、对人类健康危害极为突出的一类霉菌毒素，所以对农作物、食物中黄曲霉毒素含量的检测就十分重要，常用的检测方法有：黄曲霉毒素免疫检测方法，如黄曲霉毒素免疫亲和层析分离纯化与大型仪器联用法检测技术、时间荧光分辨分析方法、竞争微球酶联免疫分析方法等。
A．免疫亲和层析分离纯化与大型仪器联用法
采用免疫亲和层析柱对经简单提取的样品溶液过柱分离纯化后，直接采用高效液相色谱仪或荧光分光光度计仪器进行检测黄曲霉毒素含量。这类分析方法样品前处理简单，特异性强、灵敏度高、结果准确。但免疫亲和层析对层析柱的技术要求高，层析过程复杂。
B. 免疫亲和荧光传感器检测技术
为了提高AFBI检测的自动化程度，美国学者carlson等研究设计了一种免疫亲和荧光传感器[Carlson MA，Bargeron CB，Benson RC，etal. An automated，handheld biosensor for aflactoxin． Biosensor& bioelectronics，2000，14：841-848]，通过向流动反应池泵入一定量免疫微球悬浮液，去除液体后，泵入提取样品溶液，洗去非特异性吸附物，再泵入甲醇洗脱黄曲霉毒素，最后用自带的微型荧光传感器检测，线性范围在0．1-50 ng/g。该方法成本高，技术含量高。
C. 竞争微球酶联免疫分析技术
英国学者Garden s．R． [Garden SR，StrachaIl NJC．Novel colorimetric immunoassay for the dctection of aflatoxion B1[J]．Analytic Chimica．Acta，2001，444：187-191]利用直径为98微米的微球替代传统的酶标板，将一定量已吸附了黄曲霉毒素与牛血清白蛋白连接物的免疫微球置于反应容器中，依照竞争酶联分析方法原理和程序检测黄曲霉毒素含量，检测限达0.2ng/mL，全过程仅需要2．5h。但该方法由于受样品杂质干扰严重，检测限只能达到4ng/mL，尚需要进一步完善。
免疫分析为基础的准确、快速、无污染、智能化检测技术成为黄曲霉毒素检测方法研究中的热点，免疫亲和技术与仪器分析联用的检测方法明显优于传统的方法，已被国内外农产品及食品检疫部门接受应用。然而，这类方法存在免疫亲和微柱纯化样品成本高、样品处理完全依赖手工操作，检测过程自动化和检测结果智能化程度低的问题。免疫亲和微球纯化结合快速专用检测仪器实现黄曲霉毒素M1的快速定量检测被认为是未来黄曲霉毒素快速检测技术发展的趋势。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本实用新型提供了一种牛奶中黄曲霉毒素M1吸附亲和柱检测装置，该检测装置以分离高效、快速及准确定量和成本低、操作简便为研究目标，设计研制偶联黄曲霉毒素M1抗体的聚合物微球，并制备成高效吸附亲和柱，并与净化操作装置及荧光分光光度计配套使用，达到快速检测黄曲霉毒素M1的目的。
本实用新型解决其技术问题所采用的技术方案是：一种牛奶中黄曲霉毒素M1吸附亲和柱检测装置由免疫亲和微柱、接收瓶和荧光分光光度计组成，免疫亲和微柱其中包括注射器、聚合物微球和玻璃纤维，免疫亲和微柱的制备方法为：将玻璃纤维用甲醇和水反复浸泡数次, 至浸泡液背景荧光值与甲醇背景荧光值相当, 取少量装入注射器底部作为滤层材料, 再用甲醇将整个微柱洗2次, 然后用纯水洗2次, 去除杂质。用电子天平多次称取少许聚合物微球载体，移取1ml含有AFM1抗体的清液，将聚合物微球放入其中，震荡，让聚合物微球载体与清液内的AFM1抗体偶联，放入4℃冰箱内过夜。次日，将清液与聚合物微球载体共同注入底部放有玻璃纤维的注射器内，上面再放置少许脱脂棉。推动注射器将里面压实，这样，载体与抗体便偶联完毕。将待检测的牛乳样液注入注射器内，推动注射器流经免疫亲和微柱中的聚合物微球部分，里面的毒素被微球上抗体捕获，然后用试剂将微球上的毒素洗脱进行检测。洗脱实验为，用1.0mL甲醇注入注射器中，推动注射器，并用接收瓶收集洗脱液,从收集的洗脱液中取0.6mL, 用荧光分光光度计测荧光值, 测定条件: 激发波长: 365nm, 发射波长: 440nm, 带宽均为5nm。
本实用新型的有益效果是：利用聚合物微球作为亲和柱的载体，将免疫活性抗体AFM1通过适当的方法偶联到载体上。将注射器、玻璃纤维滤层、偶联黄曲霉毒素M1抗体的免疫亲和聚合物微球填料进行恰当的结构设计，组成亲和微柱。能够使整个微柱净化过程实现高效、快速的操作，从进样到洗脱达到污染少，对操作人员安全的条件。配套荧光光度计，用于检测洗脱液中的AFM1的浓度。
附图说明
下面结合附图和具体实施方式对本实用新型进一步说明。
图1为本实用新型的结构示意图。
图中标号：
1、注射器，2、聚合物微球，3、玻璃纤维，4、接收瓶，5、荧光分光光度计。
具体实施方式
一种牛奶中黄曲霉毒素M1吸附亲和柱检测装置由免疫亲和微柱、接收瓶4和荧光分光光度计5组成，免疫亲和微柱其中包括注射器1、聚合物微球2和玻璃纤维3，免疫亲和微柱的制备方法为将玻璃纤维3用甲醇和水反复浸泡数次, 至浸泡液背景荧光值与甲醇背景荧光值相当, 取少量装入注射器1底部作为滤层材料, 再用甲醇将整个微柱洗2次, 然后用纯水洗2次, 去除杂质。用电子天平多次称取少许聚合物微球2载体，移取1ml含有AFM1抗体的清液，将微球放入其中，震荡，让聚合物微球2载体与清液内的AFM1抗体偶联，放入4℃冰箱内过夜。次日，将清液与聚合物微球载体共同注入底部放有玻璃纤维3的注射器内，上面再放置少许脱脂棉。推动注射器1将里面压实，这样，载体与抗体便偶联完毕。将待检测的牛乳样液注入注射器1内，推动注射器1流经免疫亲和微柱中的聚合物微球2部分，里面的毒素被微球上抗体捕获，然后用试剂将微球上的毒素洗脱进行检测。洗脱实验为，用1.0mL甲醇注入注射器1中，推动注射器1，并用接收瓶4收集洗脱液,从收集的洗脱液中取0.6mL, 用荧光分光光度计5测荧光值, 测定条件: 激发波长: 365nm, 发射波长: 440nm, 带宽均为5nm。
其主要操作流程为：第1步、抗体与微球的偶联，第2步、亲和微柱的装填，第3步注入含黄曲霉毒素M1的待检测牛乳，第4步、洗脱与亲和柱内微球结合的毒素，第5步，荧光法检测洗脱液中黄曲霉毒素M1，确定毒素的含量。
Claims (1)
1.一种牛奶中黄曲霉毒素M1吸附亲和柱检测装置，其特征在于：该检测装置由免疫亲和微柱、接收瓶（4）和荧光分光光度计（5）组成，免疫亲和微柱其中包括注射器（1）、聚合物微球（2）和玻璃纤维（3）。
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107188961A (zh) * | 2017-07-17 | 2017-09-22 | 齐齐哈尔大学 | 一种抗黄曲霉毒素m1单克隆抗体及免疫吸附剂、免疫亲和柱及其制备方法 |
| CN112997082A (zh) * | 2019-07-29 | 2021-06-18 | 澳德普济(枣庄)生物医药科技有限公司 | 抗体生产中滴度的在线测量 |
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2015
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