CN203203992U

CN203203992U - 包含溶血磷脂酶抑制剂的血液收集装置

Info

Publication number: CN203203992U
Application number: CN2012200757338U
Authority: CN
Inventors: D·克拉夫特; P·阿普特
Original assignee: Becton Dickinson and Co
Current assignee: Becton Dickinson and Co
Priority date: 2011-03-04
Filing date: 2012-03-02
Publication date: 2013-09-18
Anticipated expiration: 2022-03-02
Also published as: US20140030754A1; AU2012225810A1; CN103477224B; EP2681554B1; WO2012121998A1; JP2014513276A; MX347230B; AU2012225810B2; BR112013022662A2; EP2681554A1; MX2013010168A; RU2013144421A; US9459187B2; CN103477224A; CA2828761C; ES2645022T3; RU2623049C2; JP5844826B2; ZA201306591B; BR112013022662B1

Abstract

本实用新型的名称是包含溶血磷脂酶抑制剂的血液收集装置。公开了用于收集和稳定全血或其成分的收集装置，其包括第一端和第二端以及至少一个限定贮器的内壁，其中所述贮器包含稳定剂，所述稳定剂包括溶血磷脂酶(LysoPLA)抑制剂。也公开了制造和使用该装置的方法。

Description

包含溶血磷脂酶抑制剂的血液收集装置

技术领域

本实用新型涉及血液收集装置，特别涉及收集和稳定血液或其成分的收集装置。

背景技术

本申请要求2011年3月4日提交的美国临时专利申请61/449,337的申请日的权益，其公开内容在此通过引用并入本文。

糖尿病是紊乱代谢的综合征，通常是由于遗传和环境原因结合引起，导致异常高的血糖水平(高血糖)。血液葡萄糖水平由体内多种化学物质和激素的复杂相互作用控制，包括在胰腺的β细胞中产生的激素胰岛素。糖尿病指由于体内胰岛素分泌或胰岛素作用的缺陷导致高血液葡萄糖水平的疾病类型。

由于胰岛素的产生降低(在I型中)或抗胰岛素的作用(在II和妊娠期中)，患上糖尿病。两者都导致高血糖，这在很大程度上引起糖尿病的急性征兆，即过多的尿产生，导致补偿性的口渴和增加的流体摄入、模糊的视力、不能解释的体重降低、昏睡和能量代谢的改变。

用注射器、胰岛素泵或胰岛素笔进行的注射递送胰岛素，其为I型糖尿病的基本治疗。II型糖尿病利用饮食治疗、锻炼、药物和胰岛素补充的结合进行控制。因为胰岛素成为医学上可得的，所以所有形式的糖尿病已经变得可治疗，但还是没有治愈。

根据世界卫生组织(World Health Organization)在2000年报道，世界范围内至少171,000,000人或人口的2.8%正在遭受糖尿病的痛苦。其发生率正在快速增加，然而，估计到2030年，该数字将几乎翻倍。糖尿病发生遍及世界，但在越发达国家越普遍(尤其是II型)。然而，流行的最大增加预计会发生在亚洲和非洲，在那里大多数患者将有可能到2030年被发现。

胰高血糖素样肽(GLP-1)、胃抑制肽(GIP)、胰高血糖素和生长素释放肽已经作为代谢疾病例如糖尿病的肽生物标志进行了报道。在肠中发现体内GLP-1的主要来源。循环中GLP-1典型的正常血液浓度处于3-85皮摩尔的范围内。GLP-1具备数种生理性质，使其作为糖尿病的潜在治疗成为广泛研究的主题。Gautier等,Diabetes Met.31:233-42(2005)。已知GLP-1增加胰腺的胰岛素分泌，降低胰腺的胰高血糖素分泌，增加β细胞物质和胰岛素基因表达，抑制胃中的酸分泌和胃排空，并通过增加满足感降低食物摄入。Baggio等,J.Gastroenterol.132:2131-57(2007)。然而，已经报道，一旦处于循环中，由于包括二肽基肽酶(DPP)-IV的蛋白酶引起的蛋白水解降解，GLP-1显示大约1.5-5分钟的短生物半衰期(Hui等,Eur.J.Endocrinol.146:863-9(2002))。

GIP的活性形式为由以下序列表示的42-氨基酸多肽：YAEGTFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQKGKKNDKHNITGQ(“GIP_(1-42)”)。GIP_(1-42)由在十二指肠粘膜和胃肠道的空肠中发现的K细胞合成。认为，GIP_(1-42)通过涉及胰腺β细胞上GIP和7个跨膜GIP_(1-42)受体之间相互作用的机制诱导胰岛素分泌。血浆中GIP_(1-42)的正常禁食浓度为大约6-12pmol/L，而正常非禁食浓度为大约80-300pmol/L。已经报道GIP_(1-42)显示循环中大约5分钟的半衰期。

胰高血糖素，一种29-氨基酸肽，涉及碳水化合物代谢。其由胰腺产生，当血液中的葡萄糖水平低(低血糖)时被释放。其结合肝脏细胞(肝细胞)上的受体，引起肝脏将所储存的糖原转化为葡萄糖并释放，随后将葡萄糖释放到血流中。因为这些储存耗尽，胰高血糖素随后刺激肝脏中额外葡萄糖的合成。因此胰高血糖素的作用与胰岛素的作用相反，后者命令体内细胞从血液中取得葡萄糖。胰高血糖素也通过已知为脂解作用的过程，调节葡萄糖产生的速度。循环中胰高血糖素的典型正常血液浓度为11-17皮摩尔。一旦处于循环中，胰高血糖素具有大约8-18分钟的半衰期。

生长素释放肽是主要由衬在人胃胃底的P/D1细胞和刺激食欲的胰腺的ε细胞产生的激素。典型正常血液浓度也处于皮摩尔范围中。生长素释放肽为具有以下序列的28-氨基酸肽：NH₂-GSSFLSPEHQRVQQRKESKKPPAKLQPR-COOH。该肽的生物学活性形式之一，已知为酰化生长素释放肽，包含在Ser3上的正辛酰基(即，-CH₃(CH₂)₆COO-)。该肽发挥内分泌作用，例如刺激从脑垂体释放生长激素(GH)，以及发挥各种生理作用，例如由于食欲刺激作用和增加的食物摄入诱导脂肪(增加了脂肪组织)和体重增加，以及刺激胃酸的分泌和活动性。Kojima等,Trends Endocrinol.Metab.12：118-122(2001)；Kojima等,Physiol.Rev.85：495-532(2005)。因此，除了糖尿病以外，酰化生长素释放肽还是相关病症例如饮食诱导的体重减轻和禁食的已知代谢生物标志。另一种形式的生长素释放肽已知为去酰基生长素释放肽，其为具有自身功能的非代谢活性形式，所述自身功能包括调节细胞增殖(Baldanzi等,J.Cell Biol.159：1029-37(2002)；Ariyasu等,Endocrinol.2005：355-64(2005))和形成脂肪(Muccioli等，Eur.J.Pharmacol.498：27-35(2004))。包括活性和非活性形式的生长素释放肽的正常血浆浓度在大约300至大约700pg/ml的范围内(或大约0.08至大约0.19nM或大约0.09至大约0.19fmol/μl)，并随时间波动。生长素释放肽的主要循环形式为去酰基生长素释放肽[Hosoda等,Biochim.Biophys.Res.Comm.279：909-13(2000)]，因此该量的大多数没有以更准确的代谢生物标志的形式存在。一旦处于循环中，生长素释放肽具有大约30分钟的半衰期。

例如，Yi等,J.Proteome Res.6(5):1768-81(2007)报道，由内在蛋白酶引起的血清和血浆蛋白质的蛋白分解降解发生在样品收集和处理的最初片刻(first minutes)期间(这表明快速的离体蛋白分解降解)。在随后的出版物中，Yi等,J.Proteome Res.7(12)：5112-8(2008)报道，尽管因为蛋白质组学技术变得更强大并更广泛地可用，血液流体中疾病标记的发现继续加快，但在将这些发现转变为临床使用中，明显地很少有成功，这促进了对理解该转变的障碍不断增长的关注。除了血浆中GLP-1、GIP、胰高血糖素和生长素释放肽(并且特别是其生物学上的活性形式)的短半衰期和相当小的浓度之外，由于预分析的变化性，特别是在血液收集和早期样品处理期间，引起复杂性。Yi(2008)也报道，在某些肽生物标志的情况中，蛋白分解降解发生在大约几秒钟内。

实用新型内容

生长素释放肽包含肽骨架和包含8碳酯基团的侧链，二者分别对存在于人血浆中的内源性蛋白酶和酯酶敏感。如在工作实施例中显示，申请人已经发现，与蛋白酶或酯酶的抑制剂相反，通过包含溶血磷脂酶(LysoPLA)抑制剂，生长素释放肽能被更有效地在所收集的血液或流体成分（如血清或血浆）样品中稳定。事实上，申请人的数据显示，在体外，酯酶抑制剂的附加存在减弱或消除了生长素释放肽的稳定性。除了生长素释放肽的侧链是“酯”基团这一事实外，这些发现是令人惊讶和出乎意料的，特别是鉴于在胃和肠中但不是在血浆中检测LysoPLA活性的报道。因此，本发明提供相对更长的血液或流体成分的保存稳定性，以便进行可靠的临床测试，例如测量生物标志如生长素释放肽。

因此，本发明的第一方面涉及收集和稳定全血或其成分的收集装置，其包括第一端和第二端以及至少一个限定贮器的内壁，其中贮器包含稳定剂，该稳定剂包括溶血磷脂酶(LysoPLA)抑制剂。在某些实施方式中，稳定剂也包括另一类型酶的至少一种抑制剂，该另一类型酶通常存在于血液中并降解代谢疾病的诊断标记。这些酶包括酯酶和蛋白酶。因此，在其他实施方式中，血液收集管也可包括酯酶的抑制剂，例如丁基胆碱脂酶(BChE)或乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制剂，和/或蛋白酶的抑制剂(例如，丝氨酸蛋白酶的抑制剂、外肽酶的抑制剂、二肽基肽酶的抑制剂，和其两种或更多种的结合)。

在某些实施方式中，本发明提供包含溶血磷脂酶抑制剂的血液收集装置，其特征在于包括第一端和第二端以及至少一个限定贮器的内壁，其中所述贮器包含作为所述溶血磷脂酶抑制剂的甲基花生酰基氟磷酸酯、乙基辛基氟磷酸酯、异丙基十二烷基氟磷酸酯、正十二烷基-苯并二氧杂2-氧化磷、溴烯醇内酯、棕榈基三氟甲基酮或棕榈酰肉毒碱中的一种。

在一些实施方式中，所述收集装置为管。在一些实施方式中，所述管进一步包括可由用于向所述贮器供应血液的针刺穿的封闭物。在一些实施方式中，所述装置（例如管）为至少部分被排空的管。在一些实施方式中，所述装置（例如管）为无菌的。在一些实施方式中，所述装置（例如管）的内壁包含塑料或玻璃。在一些实施方式中，所述装置（例如管）包括分隔元件。

也提供了为了收集和保存全血或其成分（一种或多种）的目的制造和使用该装置的方法。

本发明进一步的方面涉及诊断疾病或监测具有疾病例如代谢疾病(例如，糖尿病)的个体的治疗的方法，其包括用创造性的血液收集装置，在从患者收集的血液样品或其成分中，随时间(或在至少一个预定时间或时间间隔)测量疾病的一种或多种标记的存在或量，该标记包括生物(代谢)活性生长素释放肽。在某些实施方式中，该方法也包括测量至少一个另外的代谢疾病标记，选自：胰高血糖素、GIP、生长素释放肽和GLP-1(其包括GLP-1-(7-36)NH₂和GLP-1-(7-37))及其两种或更多种的结合。

本发明还进一步的方面涉及监测已经施用包含脂族酯侧链基团（例如酰基）的前药治疗的个体中该前药的血液水平的方法，其包括用创造性的血液收集装置从患者收集血液样品，和测量样品或其成分中该前药和/或其活性代谢物的存在或量。可测量前药和前药的活性代谢物的存在或量。例如在预定时间间隔内，可进行多于一次的前药和/或代谢物血液水平的测量。

附图说明

图1为本发明典型血液收集装置的透视图。

图2为显示在四个不同的血液收集管中30hrs期间酰基-生长素释放肽稳定性的比较的曲线图，四个不同的血液收集管包含：1)LysoPLA抑制剂甲基花生酰基氟磷酸酯(MAFP)、EDTA、酯酶抑制剂、他克林和蛋白酶抑制剂L-苏-异亮氨酰噻唑烷、苯丁抑制素和亮抑酶肽(创造性的稳定剂“ISA”，在图中表示为▲)；2)包括抗凝结剂EDTA和MAFP的另一种创造性的稳定剂(在图中表示为x)；3)EDTA和酯酶抑制剂以及蛋白酶抑制剂(比较性的稳定剂“CSA”，在图中表示为◆)；和4）仅EDTA(在图中表示为■)，随后掺加1pg/uL酰基-生长素释放肽。

图3为曲线图，其显示血液样品中生长素释放肽的稳定性，所述血液样品是随时间从禁食人对象收集的，并被收集和保存在本发明的掺加(◆)和未掺加(■)EDTA的管和包含代表性稳定剂(包括MAFP作为LysoPLA抑制剂)的收集管(掺加(▲)和未掺加(x))中。

具体实施方式

本发明的收集装置用于收集和稳定全血或其成分，例如红细胞浓缩物、血小板浓缩物、白细胞浓缩物、以及血液的流体成分，包括血浆和血清。

广义上，本发明的血液样品收集装置可包括任何收集装置，包括管，例如试管和离心管；封闭系统血液收集装置，例如收集袋；注射器，特别是预装注射器；导管；微量滴定器和其他多孔板；阵列；管材；实验室器皿，例如烧瓶、旋转烧瓶、滚瓶、小瓶、显微镜载玻片、显微镜载玻片组件、盖玻片、膜和多孔基底和组件；吸液管和吸液管端；组织和其他生物学样品收集容器；和适于容纳生物学样品的任何其他容器，以及涉及转移样品的容器和元件。几种这样的装置的实例和说明在Stevens等共有的美国专利7,309,468中公开。

也在美国专利7,309,468中图解的图1显示了可用于本发明的典型血液收集装置10，其包括限定内室或贮器14的容器12。在图解的实施方式中，容器12为具有侧壁16、封闭底端18和开放顶端20的中空管。任选地，分隔构件13提供在容器室14内。分隔构件13用于协助分离血液样品的成分，例如通过离心过滤。容器12被制成用于收集合适体积血液的尺寸。在要求无菌产品的情况，用于盖住开放端20以封闭容器12的封闭物构件22是必需的。在某些实施方式中，管被配置用于螺丝帽。然而，在其中管被至少部分排空或排空的实施方式中，如在贮器包含BChE抑制剂但不包含蛋白酶抑制剂的情况下，通常使用紧密装配的弹性塞子，以便在所要求的保存时间期间包含真空。优选地，封闭物22形成能有效封闭容器12并保留室14中生物学样品的密封。封闭物22——其可被针刺透——可为多种形式之一，包括但不限于橡胶封闭物、HEMOGUARD^TM封闭物、金属密封、金属结合的橡胶密封和不同聚合物和设计的密封。保护罩24可位于封闭物22上。

容器12可由任何适于实验室器皿的材料组成，包括例如塑料(例如，聚烯烃、聚酰胺、聚酯、聚硅氧烷、聚氨酯、环氧树脂、丙烯酸树脂、聚丙烯酸酯、聚酯、聚砜、聚甲基丙烯酸酯、PEEK、聚酰亚胺和含氟聚合物)和玻璃产品，包括二氧化硅玻璃。优选地，容器12是透明的。用于容器12的合适的透明热塑性材料的例子包括聚碳酸酯、聚乙烯、聚丙烯和聚对苯二甲酸乙二醇酯。塑性材料可为不透氧材料或可包含不透氧或半渗透层。可选地，容器12可由可渗透水和空气的塑性材料制成。

可选择室14中的压力，以将预定体积的生物学样品吸入室14。优选地，封闭物22由弹性材料制成，所述弹性材料能够维持内部压差在大气压和小于大气压的压力之间。封闭物22是这样的：其可由针26或其他套管刺穿，以便将生物学样品引入容器12，如本领域中已知的。优选地，封闭物22为可再密封的。用于封闭物22的合适的材料包括，例如，有机硅橡胶、天然橡胶、丁苯橡胶、乙烯-丙烯共聚物和氯丁橡胶。

容器12的合适例子包括单壁和多层管。合适的容器12的更具体例子在美国专利5,860,937中公开。

容器12也可包含分离器，例如凝胶、机械分隔器或其他类型的分隔构件(例如，滤纸或类似物)。分隔器可用于血液血浆制备，特别是从人或动物全血中分离血浆。凝胶期望地为触变聚合凝胶制剂。凝胶可为均聚物或共聚物并且可包括基于硅氧烷的凝胶，例如聚硅氧烷，或基于有机烃的凝胶，例如聚丙烯酸、聚酯、聚烯烃、氧化的顺式聚丁二烯、聚丁烯、环氧大豆油和氯化烃的共混物、二酸和丙二醇的共聚物、氢化环戊二烯和α-烯烃与马来酸二烷基酯的共聚物。可用于本发明的机械分隔器的例子在美国专利6,516,953、6,406,671、6,409,528和6,497,325中描述。

容器12也可适于将淋巴细胞和单核细胞从全血样品的较重相离心分离。在这样的实施方式中，该装置也可包含液体密度梯度介质和用于防止液体密度梯度介质与血液样品在离心过滤前混合的构件。合适的淋巴细胞/单核细胞收集管的例子在美国专利5,053,134中公开。

除图1中图解的实施方式之外，适于在本发明中使用的其他商业可得的血液收集管包括以下管，所有都由Becton,Dickinson and Company,Franklin Lakes,N.J.销售，所有的注册商标和商标都属于 Becton,Dickinson and Company:

血液学管(例如，目录号367650-1、367661、6405、6385、6564、367653、367665、367658、367669、6450-8、6535-37和367662)；K₂EDTA管(例如，目录号367841-2、367856和367861)；

PST管(例如，目录号367793-4、6698、6595和6672)；

CPT管(例如，目录号362753和362760-1)；

SST管(例如，目录号367782-89、6509-17和6590-92)；和

ACD管(例如，目录号367756、364012和4816)，和具有BD Microgard^TM封闭物的非排空BD

管(例如，365987、365965和365974)或传统BD

管(例如，365956、365957、365958、365959、365971和365973)。很多商业血液收集管具有标准体积，通常在250微升至大约10.0ml的范围内并包括大约10.0ml，并且在某些情况达到16ml。典型的体积包括250、400和500微升，以及2.0ml、3.5ml、4.0ml、5.0ml、8.0ml、8.5ml和10.0ml。

在其他实施方式中，该装置可包括整合在测试盒内的贮器，该贮器能够容纳2至200微升范围内的全血体积，更优选50–150微升。这种盒例如以商标名称i-STAT Point of Care System，由Abbott Laboratories(Abbott Park,Illinois)销售，并且可用能够连接该盒的手持分析器使用。可与本发明一起使用的这种盒和手持分析器的例子分别包括i-STAT CHEM8+盒和

1手持分析器。这样的装置在例如美国专利5,096,669、5,112,455、5,821,399、5,628,961、7,419,821、6,750,053和US D337,164中教导。

溶血磷脂酶(LysoPLA)是水解溶血磷脂(LysoPL)并具体在羧酸酯键处水解的酶，溶血磷脂为磷脂代谢中洗涤剂样的中间体，并在很多生理和病理过程中起到必不可少的作用。溶血磷脂胆碱(LysoPC)，细胞膜的一种常见成分并且其被认为起到脂质信使的作用、转换从膜受体发起的信号，是LysoPLA的内源性底物。人LysoPLA的氨基酸和相应的核酸序列在本领域中是已知的。见例如美国专利5,858,756、6,004,792和7,294,496。根据在美国专利7,294,496中显示的一份证据，LysoPLA mRNA广泛分布在很多组织中，心脏、胎盘和骨骼肌肉是最丰富的组织，随后为肝脏、胰腺、肾、脑和肺，并且在另一份证据中(其包含来自更多组织的信使)，观察到相似的模式，尽管一些组织的相对密度改变，其中胎盘和睾丸是hLysoPLA最丰富的来源，随后为肾上腺和唾液腺、肝脏、心脏、骨骼肌肉和气管结肠(trachea colon)。也报道溶血磷脂酶存在于很多同种型中。

可适于在本发明中使用的LysoPLA抑制剂的代表性例子包括乙基辛基氟磷酸酯、异丙基十二烷基氟磷酸酯、正十二烷基-苯并二氧杂2-氧化磷、棕榈酰肉毒碱、溴烯醇内酯、棕榈基三氟甲基酮和甲基花生酰基氟磷酸酯(MAFP)。其他抑制剂可利用本领域中已知的检验方法进行识别。见例如美国专利7,294,496。

LysoPLA抑制剂以有效量存在于收集装置中，以稳定可能存在于生物学样品中的各种内源性蛋白质，例如生长素释放肽，和生物学活性需要脂族酯基团的其他蛋白质和肽。因此，除是代谢疾病例如糖尿病的标记的生长素释放肽之外，收集装置提供用于稳定其他神经肽。LysoPLA抑制剂通过抑制脂族酯基团的裂解而起作用。确定包括在血液收集装置中的LysoPLA抑制剂的量取决于几个因素，包括效力、水中溶解度、血液收集装置的体积和非特异性相互作用的性质和程度(例如，由于血液中其他蛋白质例如血清白蛋白的存在)。因此，针对本发明的目的，LysoPLA抑制剂的量(和可能存在的另外稳定剂的量)更方便地用浓度范围来表达(从浓度范围可容易计算抑制剂的实际量)。LysoPLA抑制剂的浓度通常在大约0.1μM至大约10mM的范围内，在某些实施方式中在大约10μM至大约1mM的范围内，和在一些实施方式中，从大约100μM至大约1mM（即10,000,000nM）。也考虑所有这些范围内的子范围。如与在此公开的所有浓度值相关使用的术语“大约”指的是50%的变化性(加/减值)。

尽管不意欲被理论所限制，但本发明人相信LysoPLA抑制剂可提供双重益处，因为在保护脂族酯基团不被LysoPLA裂解中，通常在血液中发现的内在蛋白酶将在空间上阻碍降解肽的氨基酸链。

在某些实施方式中，创造性的血液收集容器可包括至少一个另外稳定剂，例如酯酶例如羧基酯酶如丁基胆碱脂酶和乙酰胆碱酯酶的抑制剂。这些稳定剂可提供额外的保护，抵抗生物学活性需要脂族酯基团的蛋白质和肽的离体降解。因此，除是代谢疾病例如糖尿病的标记的生长素释放肽之外，酯酶抑制剂可提供其他神经肽增强的稳定。然而，在一些实施方式中，稳定剂（以及作为整体的装置）不包括酯酶抑制剂。取决于例如分析物的性质、测定形式和工作流程（即，分析之前处理和保存所收集的血液样品）这些因素，本发明的血液收集装置可提供生物化学标记例如生长素释放肽比不含LysoPLA抑制剂的类似装置长数小时或者甚至一天或多天的稳定性。

丁基胆碱脂酶(BChE)(E.C.3.1.1.8)，也已知为血清或血浆胆碱酯酶，被认为在身体代谢可卡因和其他药物例如琥珀酰胆碱和阿司匹林的能力上起作用。见Lockridge,“Genetic Variants of Human Serum Butyrylcholinesterase influence the metabolism of the muscle relaxant succinylcholine.”Kalow(ed.)Pharmacogenetics of Drug Metabolism New York:Pergamon Press,Inc,at pp.15-50。BChE通常以大约5mg/l(或大约5U/ml)的量存在于人血浆中。用于本发明的BChE抑制剂具有不大于大约0.5μM(500nM)的Ki值，或在某些实施方式中具有不大于大约0.05μM(50nM)的Ki，或还在其他实施方式中，具有不大于大约0.010μM(10nM)的Ki(并包括其中所有子范围)。Ki为动力学变量(与物理性质例如分子量、熔沸点等相反)，并因此可经历相对宽的变化，特别是取决于用于确定该值的方法。因此，如与在此关于Ki值使用的术语“大约”指的是50%的变化性(即，加/减值)。

用于本发明的BChE抑制剂为化合物9-氨基-1,2,3,4-四氢吖啶，也已知为他克林(和其衍生物)。见美国专利4,816,456。他克林为起主要作用的胆碱酯酶抑制剂，其由FDA批准用于治疗阿耳茨海默氏病。其由Sciele Pharma在商标名称COGNEX下销售。可适于在本发明中使用的他克林衍生物的代表性例子在美国专利4,754,050教导，如下式所示：

其中n为1、2或3；X为氢、低级烷基、低级烷氧基、卤素、羟基、硝基、三氟甲基、NHCOR₂——其中R₂为低级烷基、或NR₃R₄——其中R₃和R₄独立地为氢或低级烷基；R为氢或低级烷基；R₁为氢、低级烷基、二低级烷基氨基低级烷基、芳基低级烷基、二芳基低级烷基、呋喃基低级烷基、噻吩基低级烷基、氧桥连的芳基低级烷基、氧桥连的二芳基低级烷基、氧桥连的呋喃基低级烷基或氧桥连的噻吩基低级烷基；Y为C=O或CR₅OH，其中R₅为氢或低级烷基；Z为CH₂或C=CR₆R₇，其中R₆和R₇独立地为氢或低级烷基；或Y和Z在一起为CR₅=CH，其中CR₅和CH分别对应于Y和Z；其光学对映体，或其药学可接受的酸加成盐。

由该式包括的具体的他克林衍生物包括以下：9-氨基-3,4-二氢吖啶-1(2H)-酮；9-氨基-3,4-二氢-6-甲基吖啶-1(2H)-酮；9-氨基-3,4-二氢-6-甲氧基吖啶-1(2H)-酮；9-氨基-3,4-二氢-6-氟吖啶-1(2H)-酮；9-氨基-6-氯-3,4-二氢吖啶-1(2H)-酮；9-氨基-7-氯-3,4-二氢吖啶-1(2H)-酮；9-氨基-3,4-二氢-6-三氟甲基吖啶-1(2H)-酮；9-氨基-3,4-二氢-7-硝基吖啶-1(2H)-酮；7,9-二氨基-3,4-二氢吖啶-1(2H)-酮；N-[9-氨基-3,4-二氢-1(2H)-氧代吖啶-7-基]乙酰胺；3,4-二氢-9-甲基氨基吖啶-1(2H)-酮；3,4-二氢-9-甲基氨基-7-硝基吖啶-1(2H)-酮；3,4-二氢-9-丙基氨基吖啶-1(2H)-酮；3,4-二氢-9-[2-(二甲基氨基)乙基]氨基吖啶-1(2H)-酮；9-苄基氨基-3,4-二氢吖啶-1(2H)-酮；9-苄基氨基-3,4-二氢-6-甲基吖啶-1(2H)-酮；9-苄基氨基-3,4-二氢-6-氟吖啶-1(2H)-酮；9-苄基氨基-6-氯-3,4-二氢吖啶-1(2H)-酮；9-苄基氨基-3,4-二氢-6-三氟甲基吖啶-1(2H)-酮；3,4-二氢-9-(2-甲基苄基氨基)吖啶-1(2H)-酮；3,4-二氢-9-(3-甲基苄基氨基)吖啶-1(2H)-酮；3,4-二氢-9-(4-甲基苄基氨基)吖啶-1(2H)-酮；3,4-二氢-9-(2-甲氧基苄基氨基)吖啶-1(2H)-酮；3,4-二氢-9-(3-甲氧基苄基氨基)吖啶-1(2H)-酮；3,4-二氢-9-(4-甲氧基苄基氨基)吖啶-1(2H)-酮；3,4-二氢-9-(2-氟苄基氨基)吖啶-1(2H)-酮；3,4-二氢-9-(3-氟苄基氨基)吖啶-1(2H)-酮；3,4-二氢-9-(4-氟苄基氨基)吖啶-1(2H)-酮；6-氯-3,4-二氢-9-(4-氟苄基氨基)吖啶-1(2H)-酮；9-(2-氯苄基氨基)-3,4-二氢吖啶-1(2H)-酮；9-(3-氯苄基氨基)-3,4-二氢吖啶-1(2H)- 酮；9-(4-氯苄基氨基)-3,4-二氢吖啶-1(2H)-酮；3,4-二氢-9-[(2,3,4,5,6-五氟苄基)氨基]吖啶-1(2H)-酮；3,4-二氢-9-(2-三氟甲基苄基氨基)吖啶-1(2H)-酮；3,4-二氢-6-氟-9-(2-三氟甲基苄基氨基)吖啶-1(2H)-酮；3,4-二氢-9-(3-三氟甲基苄基氨基)吖啶-1(2H)-酮；3,4-二氢-9-(4-三氟甲基苄基氨基)吖啶-1(2H)-酮；3,4-二氢-9-苯乙基氨基吖啶-1(2H)-酮；3,4-二氢-9-(4,4-二苯基丁基)氨基吖啶-1(2H)-酮；3,4-二氢-9-(4,4-二苯基丁基氨基)-6-三氟甲基吖啶-1(2H)-酮；9-[4,4-双(3-氟苯基)丁基氨基]-3,4-二氢吖啶-1(2H)-酮；9-[4,4-双(4-氟苯基)丁基氨基]-3,4-二氢吖啶-1(2H)-酮；3,4-二氢-9-(3-苯氧基丙基氨基)吖啶-1(2H)-酮；9-[2-[双(4-氟苯基)甲氧基]乙基氨基-3,4-二氢吖啶-1(2H)-酮；9-[4-(苄氧基)苄基氨基]-3,4-二氢吖啶-1(2H)-酮；3,4-二氢-9-[(2-噻吩基)甲基氨基]吖啶-1(2H)-酮；9-氨基-2,3-二氢-环戊[b]喹啉-1-酮；9-氨基-1,2,3,4-四氢吖啶-1-醇；9-氨基-6-氯-1,2,3,4-四氢吖啶-1-醇；9-氨基-7-氯-1,2,3,4-四氢吖啶-1-醇；9-氨基-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢吖啶-1-醇；9-氨基-6-氟-1,2,3,4-四氢吖啶-1-醇；9-氨基-1,2,3,4-四氢-6-三氟甲基吖啶-1-醇；9-甲基氨基-1,2,3,4-四氢吖啶-1-醇；9-丙基氨基-1,2,3,4-四氢吖啶-1-醇；9-[2-(二甲基氨基)乙基]氨基-1,2,3,4-四氢吖啶-1-醇；9-苄基氨基-1,2,3,4-四氢吖啶-1-醇；9-苄基氨基-6-甲基-1,2,3,4-四氢吖啶-1-醇；9-苄基氨基-6-氟-1,2,3,4-四氢吖啶-1-醇；9-苄基氨基-6-氯-1,2,3,4-四氢吖啶-1-醇；9-苄基氨基-1,2,3,4-四氢-6-三氟甲基吖啶-1-醇；9-(2-甲基苄基氨基)-1,2,3,4-四氢吖啶-1-醇；9-(3-甲基苄基氨基)-1,2,3,4-四氢吖啶-1-醇；9-(4-甲基苄基氨基)-1,2,3,4-四氢吖啶-1-醇；9-(2-甲氧基苄基氨基)-1,2,3,4-四氢吖啶-1-醇；9-(3-甲氧基苄基氨基)-1,2,3,4-四氢吖啶-1-醇；9-(4-甲氧基苄基氨基)-1,2,3,4-四氢吖啶-1-醇；9-(2-氟苄基氨基)-1,2,3,4-四氢吖啶-1-醇；9-(3-氟苄基氨基)-1,2,3,4-四氢吖啶-1-醇；9-(4-氟苄基氨基)-1,2,3,4-四氢吖啶-1-醇；6-氯-9-(4-氟苄基氨基)-1,2,3,4-四氢吖啶-1-醇；9-(2-氯苄基氨基)-1,2,3,4-四氢吖啶-1-醇；9-(3-氯苄基氨基)-1,2,3,4-四氢吖啶-1-醇；9-(4-氯苄基氨基)-1,2,3,4-四氢吖啶-1-醇；1,2,3,4-四氢-9-(2-三氟甲基苄基)氨基吖啶-1-醇；6-氟-1,2,3,4-四氢-9-(2-三氟甲基苄基氨基)吖啶-1-醇；1,2,3,4-四氢-9-(3-三氟甲基苄基氨基)吖啶-1-醇；1,2,3,4-四氢-9-(4-三氟甲基苄基氨基)吖啶-1-醇；9-[(2,3,4,5,6-五氟苄基)氨基]-1,2,3,4-四氢吖啶-1-醇；9-苯乙基氨基-1,2,3,4-四氢吖啶-1-醇；9-(4,4-二苯基丁基)氨基-1,2,3,4-四氢吖啶-1-醇；9-[4,4-双(3-氟苯基)丁基氨基]-1,2,3,4-四氢吖啶-1-醇；9-[4,4-双(4-氟苯基)丁基氨基]-1,2,3,4-四氢吖啶-1-醇；9-(3-苯氧基丙基氨基)-1,2,3,4-四氢吖啶-1-醇；9-[[2-[双(4-氟苯基)甲氧基]乙基]氨基]-1,2,3,4-四氢吖啶-1-醇；9-[4-(苄氧基)苄基氨基]-1,2,3,4-四氢吖啶-1-醇；9-[(2-噻吩基)甲基氨基]-1,2,3,4-四氢吖啶-1-醇；9-氨基-3,4-二氢吖啶；9-氨基-1-甲基-1,2,3,4-四氢吖啶-1-醇；9-氨基-3,4-二氢-2-亚甲基吖啶-1(2H)-酮；9-氨基-1,2,3,4-四氢-环戊[b]喹啉-1-醇；2-(3-氧代亚环己-1-基)氨基苯甲腈；和4-氯-2-(3-氧代亚环己-1-基)氨基苯甲腈。

可适于在本发明中使用的其他丁酰胆碱酯酶抑制剂包括他克林二聚物，例如二乙丙苯嗪(即，N,N,N-二乙基-α-甲基-10H-吩噻嗪-10-乙胺；10-(2-二乙基氨基-2-甲基乙基)吩噻嗪；或爱普巴嗪(phenopropazine))，和其衍生物。见例如美国专利2,607,773和4,833,138。二乙丙苯嗪盐酸盐已经由FDA批准用于治疗帕金森氏病。

还有其他丁酰胆碱酯酶抑制剂包括他克林和(-)-石杉碱甲(其为从石松属(Lycopodium)种石杉科(Huperziaceae)的石松蛇足石杉(Huperzia serrata)中分离的对映体石松定生物碱)的杂化物。石杉碱甲-他克林杂化物的例子在本领域中已知为化合物5a、5b和5c以及Huprine X。它们相应的化学名称如下：((9E)-N1-(7-(1,2,3,4-四氢吖啶-9-基氨基)庚基)-9-亚乙基-4,4,7-三甲基双环[3.3.1]-壬-6-烯-1,3-二胺)(5a)；((9E)-N1-(7-(1,2,3,4-四氢吖啶-9-基氨基)庚基)-9-亚乙基-47-甲基双环[3.3.1]-壬-6-烯-1,3-二胺)(5b)；((9E)-N1-(7-(1,2,3,4-四氢吖啶-9-基氨基)庚基氨基)-9-亚乙基-3-甲基双环[3.3.1]-壬-3-烯-1-羧酸甲基酯)(5c)；和(1S)-7-氯-15-乙基-10-氮杂四环[11.3.1.0^{2,11}.0^{4,9}]十七烷-2(11),3,5,7,9,14-己-3-胺)(Huprine X)。合成这些化合物的方法在Gemma等,J.Med.Chem.49(11):3421-25(2006)(5a、5b和5c)，和Camps等,Mol.Pharmacol.57:409-17(2000)(Huprine X)中公开。

BChE的浓度通常在大约5μM至大约500mM(即，5×10⁸nM)的范围内，在某些实施方式中，在大约0.5μM至大约50mM的范围内，还在其他实施方式中，从大约0.1μM至大约10mM。也考虑这些范围内的所有子范围。如在Ki值的情况，关于在此公开的所有浓度值使用的术语“大约”指的是50%的变化性(加/减值)。

稳定剂也可包括另一种类型的血清酯酶的抑制剂，具体为另一种B-酯酶的抑制剂(其中BChE为一员)。这些酯酶包括乙酰胆碱酯酶(AChE)(EC3.1.1.7)和非特异性羧基酯酶(EC3.1.1.1)。AChE的抑制剂对胆碱酯酶起作用并抑制其分解在体内作为神经传递物起作用的乙酰胆碱。某些BChE抑制剂例如他克林和石杉碱甲也已知抑制乙酰胆碱酯酶。他克林具有报道的对AChE为6.9nm的Ki(Bencharit等,Chem.Biol.10:341-9(2003))。石杉碱甲具有报道的对AChE为47nm的Ki(Gemma等,J.Med.Chem.49:3421-5(2006))。如果BChE构成人血清中总酯酶活性的重要部分(即，与0.008mg/L的AChE相比，大约5mg/L的BChE)，则血液收集管中包含抑制剂是任选的。

适于在本发明中使用的AChE抑制剂的Ki通常为大约500nm或更小，并且在其他实施方式中，小于大约400nm、300nm、200nm、100nm、50nm或10nm。如在此公开的，可根据标准测定技术确定给定AChE抑制剂的Ki值。

因此，可用于本发明的其他AChE抑制剂包括以下：Huprine X((1S)-7-氯-15-乙基-10-氮杂四环[11.3.1.0^{2,11}.0^{4,9}]十七烷-2(11),3,5,7,9,14-己-3-胺)(0.026nm的Ki)；他克林二聚物4a(甲基双[3-(1,2,3,4-四氢吖啶-9-基氨基)丙基]胺)(0.06nm的Ki)；他克林二聚物4d(2-{双[3-(1,2,3,4-四氢吖啶-9-基氨基)丙基]氨基}乙-1-醇|N,N-双[3-[(1,2,3,4-四氢吖啶-9-基)氨基]丙基]-N-羟基乙基胺)(0.65nm的Ki)；他克林衍生物2-(6,8-二氯-1,2,3,4-四氢吖啶-9-胺)(1.0nm的Ki)；他克林二聚物3b(均二聚他克林类似物3b|N-[7-(1,2,3,4-四氢吖啶-9-基氨基)庚基]-1,2,3,4-四氢吖啶-9-胺|他克林均二价化合物3a)(1.3nm的Ki)；他克林二聚物4c(N,N-双[3-[(1,2,3,4-四氢吖啶-9-基)氨基]丙基]-N-丙烯胺|丙-2-烯-1-基双[3-(1,2,3,4-四氢吖啶-9-基氨基)丙基]胺)(1.6nm的Ki)；他克林二聚物3c(均二聚他克林类似物3c|N-[8-(1,2,3,4-四氢吖啶-9-基氨基)辛基]-1,2,3,4-四氢吖啶-9-胺)(1.9nm的Ki)；他克林二聚物4b(N,N-双[3-[(1,2,3,4-四氢吖啶-9-基)氨基]丙基]-N-乙胺|乙基双[3-(1,2,3,4-四氢吖啶-9-基氨基)丙基]胺)(2.8nm的Ki)；他克林杂二价化合物3c(N-{7-[(6,8-二氯-1,2,3,4-四氢吖啶-9-基)氨基]庚基}-1,2,3,4-四氢吖啶-9-胺)(6.0nm的Ki)；石杉碱甲-他克林杂化物5c((9E)-7-(7-(1,2,3,4-四氢吖啶-9-基氨基)庚基氨基)-9-亚乙基-3-甲基双环[3.3.1]-壬-3-烯-1-羧酸甲基酯|甲基(1S)-9-亚乙基-3-甲基-7-{[7-(1,2,3,4-四氢吖啶-9-基氨基)庚基]氨基}双环[3.3.1]-壬-3-烯-1-羧酸酯)(6.4nm的Ki)；他克林二聚物4j(N-甲基-N-(1,2,3,4-四氢吖啶-9-基)-N-[3-(1,2,3,4-四氢吖啶-9-基硫烷基)丙基]-1,3-丙二胺|甲基[3-(1,2,3,4-四氢吖啶-9-基氨基)丙基][3-(1,2,3,4-四氢吖啶-9-基硫烷基)丙基]胺)(9.1nm的Ki)；石杉碱甲-他克林杂化物5b((9E)-N1-(7-(1,2,3,4-四氢吖啶-9-基氨基)庚基)-9-亚乙基-7-甲基双环[3.3.1]-壬-6-烯-1,3-二胺|N-(7-{[(1S)-1-氨基-9-亚乙基-7-甲基双环[3.3.1]壬-6-烯-3-基]氨基}庚基)-1,2,3,4-四氢吖啶-9-胺)(15.70nm的Ki)；石杉碱甲-他克林杂化物5a(9E)-N1-(7-(1,2,3,4-四氢吖啶-9-基氨基)庚基)-9-亚乙基-4,4,7-三甲基双环[3.3.1]-壬-6-烯-1,3-二胺|N-(7-{[(1S)-1-氨基-9-亚乙基-4,4,7-三甲基双环[3.3.1]壬-6-烯-3-基]氨基}庚基)-1,2,3,4-四氢吖啶-9-胺)(16.50nm的Ki)；AP22383-(4-{[苄基(甲基)氨基]甲基}-苯基)-6,7-二甲氧基-2H-2-色烯酮|3-(4-{[苄基(甲基)氨基]甲基}苯基)-6,7-二甲氧基-2H-色烯酮-2-酮)(21.70nm的Ki)；他克林二聚物4i(N-(1,2,3,4-四氢吖啶-9-基)-N-[8-(1,2,3,4-四氢吖啶-9-基)辛-1-基]胺|N-[8-(1,2,3,4-四氢吖啶-9-基)辛基]-1,2,3,4-四氢吖啶-9-胺)(30nm的Ki)；他克林杂二价化合物3g(6,8-二氯-N-[7-(1,2,3,4-四氢吖啶-9-基硫烷基)庚基]-1,2,3,4-四氢吖啶-9-胺)(41nm的Ki)；他克林二聚物4m(N-[3-(1,2,3,4-四氢吖啶-9-基氨基)丙基]-N-[4-(1,2,3,4-四氢吖啶-9-基硫烷基)丁基]乙酰胺)(47nm的Ki)；9-氨基-6-氯-2-甲氧基吖啶e(6-氯-2-甲氧基吖啶-9-胺)(49nm的Ki)；他克林二聚物4k(N-[3-(1,2,3,4-四氢吖啶-9-基氨基)丙基]-N-[3-(1,2,3,4-四氢吖啶-9-基硫烷基)丙基]乙酰胺)(50nm的Ki)；他克林杂二价化合物3i(N-[6-(1,2,3,4-四氢吖啶-9-基硫烷基)己基]-1,2,3,4-四氢吖啶-9-胺)(100nm的Ki)；他克林均二价化合物3b(6,8-二氯-N-{7-[(6,8-二氯-1,2,3,4-四氢吖啶-9-基)氨基]庚基}-1,2,3,4-四氢吖啶-9-胺)(150nm的Ki)；他克林二聚物3a(N-[5-(1,2,3,4-四氢吖啶-9-基氨基)戊基]-1,2,3,4-四氢吖啶-9-胺)(210nm的Ki)；他克林二聚物4g(N-[8-(1,2,3,4-四氢吖啶-9-基硫烷基)辛基]-1,2,3,4-四氢吖啶-9-胺)(250nm的Ki)；他克林杂二价化合物3f(N-{7-[(6,8-二氯-1,2,3,4-四氢吖啶-9-基)硫烷基]庚基}-1,2,3,4-四氢吖啶-9-胺)(290nm的Ki)；1,2-二酮基化合物，8(1,2-二氢萘-1,2-二酮|1,2-萘醌)(320nM的Ki)；他克林二聚物4f(N-[7-(1,2,3,4-四氢吖啶-9-基硫烷基)庚基]-1,2,3,4-四氢吖啶-9-胺|他克林杂二价化合物3e)(340nm的Ki)；和6,9-二氨基-2-乙氧吖啶(7-乙氧吖啶-3,9-二胺)(490nm的Ki)。在此公开的上述AchE抑制剂的Ki值在Gemma等,J.Med.Chem.49:3421-5(2006)；Campiani等,J.Med.Chem.48:1919-29(2005);Wong等,J.Am.Chem.Soc.125:363-73(2003)；Savini等,Bioorg.Med.Chem.Lett.11:1779-82(2001)；Piazzi等,J.Med.Chem.46:2279-82(2003)；Bencharit,supra.；和Hyatt等,J.Med.Chem.50:5727-34(2007)中报道。

可用于本发明的AChE抑制剂更进一步的例子包括以下：有机磷酸酯类(例如，美曲磷酯、二乙氧膦酰硫胆碱、二异丙基氟磷酸酯、环沙林(Cyclosarin)、乐果、沙林(Sarin)、索曼(Soman)、塔崩(Tabun)、VX、VE、VG、VM、二嗪农(Diazinon)、马拉硫磷(Malathion)和对硫磷(Parathion))；氨基甲酸酯类(例如，毒扁豆碱、新斯的明、吡啶斯的明、阿伯农、地美溴铵、利凡斯的明、涕灭威、恶虫威、合杀威、西维因、多菌灵、长杀草、虫螨威、氯草灵、氯苯胺灵、杀虫丹、伐虫脒、灭虫威、灭多虫、草氨酰、苯敌草、Pinmicarb、抗蚜威、霜霉威、苯胺灵和残杀威)；菲衍生物(例如，加兰他敏)；哌啶类(例如，多奈哌齐(E2020)(2.9nm的Ki))；滕喜隆；和天然化合物(例如，加兰他敏和Onchidal)。

因为某些BChE抑制剂也显示了潜在的AChE抑制活性，所以本发明的实施方式可包括同时具备BChE和AChE抑制活性的单一酯酶抑制剂。

可能存在于血液收集装置中的另外血清酯酶抑制剂的浓度通常在大约0.1μM至大约70mM的范围内，在某些实施方式中，从大约1mM至大约7mM。

稳定剂也可包括蛋白酶抑制剂。可用于本发明的蛋白酶抑制剂显示抵抗一种或多种类型蛋白酶——包括例如丝氨酸蛋白酶、外肽酶和二肽基肽酶——的抑制活性。因此，装置可包含两种或更多种这样的抑制剂的混合物，包括例如丝氨酸蛋白酶的抑制剂和外肽酶的抑制剂的混合物，丝氨酸蛋白酶的抑制剂和二肽基肽酶的抑制剂的混合物，外肽酶的抑制剂和二肽基肽酶的抑制剂的混合物，以及丝氨酸蛋白酶的抑制剂、外肽酶的抑制剂和二肽基肽酶的抑制剂的混合物。见例如Stevens等的美国专利7,309,468。

丝氨酸蛋白酶抑制剂的代表性例子包括抗痛素(antipain)、抑酶肽、抗凝血酶、胰凝乳蛋白酶抑制素、DFP、弹性蛋白酶抑制剂(elastatinal)、APMSF、苯甲磺酰氟(PMSF)、AEBSF、TLCK、TPCK、亮抑酶肽、胰蛋白酶和大豆胰蛋白酶抑制剂。丝氨酸蛋白酶抑制剂的浓度通常在大约0.1μM至大约100μM的范围内。

可用于本发明的外肽酶抑制剂的代表性例子包括抑氨肽酶肽、苯丁抑制素、抑二肽素(diprotin)A和抑二肽素B。外肽酶抑制剂的浓度通常在大约0.01mM至大约1mM的范围内。

存在于循环中的二肽基肽酶活性(其包括DPP-IV和DPP-IV样活性)在从生物活性肽的N-末端释放二肽中是高度特异性的，所述生物活性肽在肽底物的N-末端序列的倒数第二位置上具有脯氨酸或丙胺酸。葡萄糖依赖性促胰岛素多肽GIP_1-42和GLP-1_7-36是DPP-IV的底物，其增强胰腺的葡萄糖诱导的胰岛素分泌(肠降血糖素)。DPP-IV酶在体外和体内都从这些肽的N-末端上释放二肽，分别为酪氨酰丙氨酸和组氨酰丙氨酸。Mentlein等,Eur.J.Biochem.214,829(1993)。可用于本发明的二肽基肽酶IV(DPP-IV)抑制剂的代表性例子包括维格列汀(vildagliptin)、西他列汀(sitagliptin)、沙格列汀(saxagliptin)、利拉利汀(linagliptin)和阿格列汀(alogliptin)。其他DPP-IV抑制剂包括由氨基酸例如异亮氨酸、Asn、Asp、Glu、His、Pro和Val以及噻唑烷或吡咯烷基团形成的二肽化合物，和立体异构体例如其L-苏和L-别形式，及其无机和有机盐(例如，磷酸盐、硫酸盐、醋酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐和延胡索酸盐)。二肽化合物的具体例子包括L-苏-异亮氨酰噻唑烷、L-别-异亮氨酰噻唑烷、L-苏-异亮氨酰吡咯烷和L-别-异亮氨酰吡咯烷。二肽基肽酶抑制剂的浓度通常在大约0.01mM至大约1mM的范围内。

稳定剂可进一步包含其他类型蛋白酶的抑制剂。因此，在进一步的实施方式中，血液收集装置也可包含以下物质的抑制剂：半胱氨酸蛋白酶(例如，IAA(吲哚乙酸)和E-64)，丝氨酸/半胱氨酸蛋白酶(例如，亮抑酶肽、TPCK、PLCK-HCL、2-庚酮-HCL和抗痛素-HCl)，天冬氨酸蛋白酶(例如，抑胃酶肽和VdLPFFVdL)，金属蛋白酶(例如，EDTA、苯丁抑制素、1,10-二氮杂菲和phosphoramodon)，巯基蛋白酶，天冬氨酸/钙蛋白酶(例如，抑胃酶肽、N-乙酰基-亮氨酸-亮氨酸-正亮氨醛和N-乙酰基-亮氨酸-亮氨酸-甲硫氨醛)，胱天蛋白酶，内切肽酶(例如，α₂-巨球蛋白(称为通用内切肽酶抑制剂)，α₁-抗胰蛋白酶和硫芬(thiorphan))，和其两种或更多种的结合。蛋白酶抑制剂的另外例子包括大豆或利马豆胰蛋白酶抑制剂、胰腺蛋白酶抑制剂、卵清卵固蛋白(ovostatin)和卵清半胱氨酸蛋白酶抑制剂。蛋白质组学领域技术人员理解，给出的抑制剂可显示对相同类型蛋白酶中一种或多种蛋白酶的抑制活性，以及对不同类型蛋白酶中一种或多种蛋白酶的抑制活性。例如，苯丁抑制素和抑氨肽酶肽显示对金属蛋白酶以及外肽酶的抑制活性。

例如除了LysoPLA抑制剂、蛋白酶抑制剂或BChE抑制剂和蛋白酶抑制剂，本发明实施方式还使用多种稳定剂——在本文也称为稳定剂混合物。

稳定剂可以任何合适的形式存在，包括液体(例如，溶液和悬浮液)和固体(例如，丸剂、片剂、胶囊、喷雾干燥材料、冷冻干燥材料、粉末、颗粒、晶体和冻干材料)和半固体(例如，凝胶)。冻干法可特别有用，因为它提供良好稳定性(例如，由于最大化稳定剂的贮存期)，并且也允许随后的杀菌。例如，稳定剂可以以液体组合物的形式引入装置的容器中，并随后通过标准技术冻干。冷冻干燥例如需要冷冻液体组合物并随后在冷冻后缓慢升温，同时使用真空，以便冻干粉末保留在收集装置中。各种添加剂例如PVP或海藻糖可在冷冻干燥前加入到液体组合物中，以便于将稳定剂制成丸，并且在接触血液后重构冻干剂。也可在加入液体组合物后使用真空干燥。在其他实施方式中，稳定剂形成为液体或固体气溶胶并被喷洒到容器内部的一个或多个表面上。以片剂的形式封装或配制稳定剂保护其远离光暴露，并防止抑制剂和容器中其他元件之间其他不期望的相互作用。用于制备在样品收集后溶解的片剂和胶囊的封装材料和赋形剂在本领域中熟知。

除了放置在贮器中以外，稳定剂可被放置在与所收集的血液相接触的收集装置的任何表面上（例如，其可被涂布或喷雾干燥至收集装置的内壁的至少一部分上）。例如，稳定剂也可位于用于封闭装置的瓶塞和密封上，或位于机械上，或位于其他置于装置内的插入物上。

除了稳定剂以外，本发明的装置也可包含载体介质(例如，水或醇)、稳定或重构介质(例如，聚乙烯基吡咯酮、海藻糖，甘露醇等)和/或用于处理生物学样品的一种或多种其他添加剂。典型添加剂包括苯酚，苯酚/氯仿混合物，醇类，醛，酮，有机酸，有机酸的盐，卤化物的碱金属盐，有机螯合剂，荧光染料，抗体，结合剂，抗凝结剂如柠檬酸钠、肝素、EDTA和其盐(例如，EDTA钾)（例如，其可被涂布或喷雾干燥至收集装置的内壁的至少一部分上），抗氧化剂，还原剂和缓冲剂。优选地，载体和添加剂不降解蛋白质。当抑制剂为片剂形式时，如有需要，可包括本领域技术人员已知的药用片剂崩解材料。

用于本发明装置的有用的制造过程涉及获得收集容器，例如管；向容器加入稳定剂(例如，LysoPLA抑制剂和蛋白酶抑制剂)；冻干抑制剂；排空容器；和消毒容器。如有需要，可向容器加入分隔构件。合适的冻干法/排空法的例子如下：将容器在大约-40°C的温度下、大约760mm的压力下冷冻大约6至8小时；当温度从-40°C增加到大约25°C时，在大约0.05mm的压力下干燥容器大约8至10小时；以及随后在大约25°C的温度和大约120mm的压力下排空容器大约0.1小时。优选地，杀菌技术使用钴60放射。

全血或其成分（一种或多种）可直接从患者取出放入血液收集装置，没有任何其间的过程步骤。已经发现，从患者直接收集全血并将样品直接引入包含稳定剂的装置大大防止了蛋白质降解和/或分裂，否则当样品与稳定剂结合前保存时发生这种蛋白质降解和/或分裂。本发明的方法对于敞口的收集装置和开口由封闭构件封闭的封闭收集装置都可用。

在优选实施方式中，收集装置为管，其用于从患者直接吸取全血样品，以在收集点立即稳定蛋白质。该收集管可为被排空的用于收集血液的系统。可选地，该管可为部分排空或非排空的用于收集血液的系统。被排空系统的合适的例子为封闭管。手动注射器吸取为部分排空和非排空系统的合适例子。非排空系统也可包括自动吸取系统。被排空的系统是特别优选的。

本发明的血液收集装置特别适于稳定包含脂族酯侧链的蛋白质，例如生长素释放肽，并且特别适于在包括蛋白酶抑制剂、疾病的另外蛋白质生物标志如GLP-1、GIP和胰高血糖素的实施方式中，这些生物标志也是代谢疾病例如糖尿病的生物标志。因此，该收集装置可用于提供可靠的标准，其中为了便于设计测定法例如允许在10^-9–10^-11M范围内检测这些蛋白质的ELISA，其包括健康个体中这些蛋白质的循环水平以及治疗水平。因此，除了诊断疾病例如代谢障碍（其中相对于对照（例如源于非病态供体的统计学有意义群体的已建立医学标准和/或浓度范围）标记的水平提高指示存在疾病）的方法外，它们可允许用于监测遭受疾病例如代谢障碍的患者中治疗的方法，其中这些蛋白质的量的正常化（或趋向正常化）是成功治疗的指示。

本发明的血液收集装置也可用于收集和保存已经服用酰化的前药(在此也称为具有脂族酯侧链的前药)的患者血液的目的，用于治疗目的，例如，作为疾病或炎症病症的治疗方案的一部分。通常理解前药指的是一种活性药剂，其与药剂的活性部分（其可以是代谢物）相比实际上是治疗上非活性或显著少活性的药物前体形式。在给药例如口服后，很多前药经由内在溶血磷脂酶通过裂解酯键被转化为活性药物/代谢物。例如，依那普利被转化为活性代谢物依那普利拉，并且前药伐昔洛韦被转化为活性药物/代谢物阿昔洛韦。海洛因被去乙酰化为活性药物/代谢物吗啡。在临床环境中，特别是在临床试验中，在一段时间期间监测患者体内前药以及活性代谢物的血液水平是有利的，例如从安全性、有效性、生物活性和生物等效性的一种或多种观点看。

例如，在生物活性研究中——其测定从药品吸收活性成分或活性部分并在作用部位变得有用的速率和程度，建议对母体药物和代谢物的浓度和活性均测定。在生物等效性研究中（其研究当在相似条件下以相同摩尔剂量施用时，药物等效物或替代物中成分或活性部分在药物作用部位变得有用的速率和程度的差异程度），一般建议测定母体（前药）形式（以下情形除外：母体药物水平太低，以致对于足够长的时间不允许在血液、血清或血浆中进行可靠分析测量，或者当代谢物非常有意义贡献于安全性和/或有效性时——在该情况下前药和代谢物的浓度和活性都进行测定）。

利用创造性的血液收集装置，从已经处于这种疗法中的患者(包括目前正在经历这种疗法的患者)收集的血液的定性或定量分析提高了任何这样的分析的准确性，因为所收集血液中前药的离体酯酶催化降解在保存期间被抑制。可根据标准技术进行血液样品的处理，例如，从所收集的血液提取血浆，和分离前药和活性代谢物，以及随后测量这些实体。例如，前药和活性代谢物可由反相HPLC进行分离。可根据标准技术例如质谱法进行前药和活性代谢物的存在或相对量的检测，随后例如通过加权二次回归或线性回归分析结果。见例如Wiltshire等,J.Chromatogr.B745:373-88(2000)(以及其中引用的参考文献)。可与之比较测量值的对照包括校准和质量对照样品（在上述Wiltshire文献中称为校准曲线）。

现在将通过参考以下的非限制性实施例描述本发明。除非另有说明，所有份数和百分数都基于重量。

实施例1–血浆样品中生长素释放肽的比较性稳定性

血液被收集到4个分离管中，它们包含：1)LysoPLA抑制剂甲基花生酰基氟磷酸酯(MAFP)、EDTA、酯酶抑制剂、他克林和蛋白酶抑制剂L-苏-异亮氨酰噻唑烷、苯丁抑制素和亮抑酶肽(创造性的稳定剂“ISA”，在图中表示为▲)，2)包括抗凝结剂EDTA和MAFP的另一种创造性的稳定剂(在图中表示为x)，3)EDTA和酯酶抑制剂以及蛋白酶抑制剂(比较性的稳定剂“CSA”，在图中表示为◆)，和4）仅EDTA(在图中表示为■)，随后掺加1pg/uL酰基-生长素释放肽。所有的四个管都从该实验的相同对象直接进行吸取，并同样处理。在图2中图示的数据清楚表明，在管3和4中，酰基-生长素释放肽随时间被降解。然而，包含MAFP的两个管(1和2号)显示了在30hr血浆温育时间期间稳定。含有MAFP和EDTA的管2优于含有酯酶抑制剂和蛋白酶抑制剂的管1。

在分离实验中，血液从禁食对象吸取在EDTA和EDTA+MAFP中。该实验中最终的MAFP管浓度为0.1mM。从每个管中将血浆分离进入两个分离小瓶。一个小瓶被掺加1pg/uL的生长素释放肽，而另一个不掺加。来自EDTA和EDTA+MAFP的经掺加和未经掺加的血浆在室温下温育30小时。图3显示在特定时间间隔测量的生长素释放肽水平。该数据明确说明包含MAFP的管中酰基-生长素释放肽稳定性更好。

所有的专利出版物和非专利出版物都表示与本发明有关的领域中技术人员的水平。所有这些出版物在此通过引用并入，引用程度如同每个单独的出版物被具体和单独地指明通过引用并入。

尽管本发明在此已经参考具体实施方式进行了描述，但将理解，这些实施方式仅仅是说明本发明原理和应用。因此将理解，可对说明性实施方式进行很多修改，并且可设计其他布置，而不脱离由所附权利要求限定的本发明精神和范围。

Claims

1.包含溶血磷脂酶抑制剂的血液收集装置，其特征在于包括第一端和第二端以及至少一个限定贮器的内壁，其中所述贮器包含作为所述溶血磷脂酶抑制剂的甲基花生酰基氟磷酸酯、乙基辛基氟磷酸酯、异丙基十二烷基氟磷酸酯、正十二烷基-苯并二氧杂2-氧化磷、溴烯醇内酯、棕榈基三氟甲基酮或棕榈酰肉毒碱中的一种。

2.根据权利要求1所述的装置，其特征在于所述装置为管。

3.根据权利要求2所述的装置，其特征在于所述管进一步包括可由用于向所述贮器供应血液的针刺穿的封闭物。

4.根据权利要求3所述的装置，其特征在于所述管为至少部分被排空的管。

5.根据权利要求4所述的装置，其特征在于所述管为无菌的。

6.根据权利要求1-5任一项所述的装置，其特征在于所述内壁包含塑料或玻璃。

7.根据权利要求2-5任一项所述的装置，其特征在于所述贮器包括分隔元件。

8.根据权利要求1所述的装置，其特征在于所述溶血磷脂酶抑制剂是冻干的。