CN1997385A - 膜联蛋白v用于预防动脉血栓和斑块破裂 - Google Patents

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Abstract

动脉粥样硬化可被看作是对损伤的反应，并且动脉粥样硬化本身并不严重，而一些导致动脉粥样斑块破裂的因子导致严重后果。在本发明中，我们鉴定出了这样的因子。在有动脉粥样血栓形成病史的患者中发现膜联蛋白V与内皮的结合降低。本发明提出，用天然的膜联蛋白V或N端片段活性成分或者免疫球蛋白的亚组份制备药物组合物来改善上述结合。膜联蛋白V，N端片段或免疫球蛋白用于增加膜联蛋白V与颈动脉斑块的结合的用途，体现了预防动脉粥样血栓形成的新机制。

Description

膜联蛋白V用于预防动脉血栓和斑块破裂
技术领域
本发明涉及动脉粥样硬化(atherosclerosis)和动脉血栓(atherothrombosis)。本发明涉及一种新的预防或抑制动脉血栓及斑块破裂(plaque rupture)的机制。
背景技术
动脉粥样硬化与动脉血栓有关。动脉粥样硬化具有炎性疾病的许多特点，包括在损伤部位存在大量的炎性细胞并生成促炎细胞因子1，2。
心血管疾病，特别是系统性红斑狼疮(SLE)患者的心血管疾病，主要的临床问题是致死风险增加。系统性红斑狼疮患者的心血管疾病既与传统风险因子有关，如血脂异常(dyslipidemia)，也与非传统风险因子有关，包括低密度脂蛋白(oxLDL)氧化的增加，肿瘤坏死因子系统(TNF，与血脂异常密切相关)中的活性的增加，由CRP、同型半胱氨酸和抗磷脂抗体(aPL)等指标确定的全身炎症反应3-7。抗磷脂可能导致抗磷脂抗体综合征(APS)，在SLE患者中常见，表现为习惯性流产和反复发生的血栓(thrombosis)8，9。在一般人群的心血管疾病中也发现了不同形式的抗磷脂反应10，11。
众多膜联蛋白(Annexin)都可以与钙及带负电的磷脂结合，后两者都是凝血过程必需的成分。近来在APS中发现了膜联蛋白V，因为一些aPL破坏了胎盘中的膜联蛋白-V抗栓屏障(antithrombotic shield)，由此引起胎盘微栓塞和习惯性流产12-14。
膜联蛋白-V与激活的血小板以及与损伤的细胞相结合或许能解释该蛋白在血栓中的选择性滞留现象。在动脉和静脉血栓的实验动物模型中有这种表现15，由此提出将标记的膜联蛋白用于人血管栓塞的医学影像检测可以减少噪声并增加安全性16。
膜联蛋白V在凝血障碍中的治疗性应用遇到的一个主要问题是其在循环中半衰期短，用实验动物估算值为5-15分钟15，17；膜联蛋白V在人体的循环半衰期短。
在EP1379266“修饰的膜联蛋白及预防血栓的方法”中，要求保护经过聚乙二醇修饰的膜联蛋白，用于预防血栓形成而不增加出血。在一项预防血栓形成所必须的凝血酶原复合物结合的方法中，用PEG交联法使膜联蛋白V的半衰期延长。
在本发明中，我们发现，膜联蛋白V可以稳定动脉粥样硬化的斑块。施用(优选静脉注射)本发明的膜联蛋白V或膜联蛋白V的N端片段时，它在首次通过时与内皮斑块结合。EP1379266所述的膜联蛋白V在循环中半衰期短的情况就不成问题了。含有膜联蛋白V或膜联蛋白VN端片段并含有或不含添加成分的注射用组合物因与斑块直接结合，稳定颈动脉帽，从而防止血栓形成。
免疫球蛋白G或IgG是成人体内的一类蛋白，正常浓度在900mg/dl到2400mg/dl之间。大约占血清或血浆总蛋白的20％。IgG的半衰期为23天，它提供对细菌，病毒，寄生虫及一些真菌的免疫力，在组织中发挥抗体作用。IgG能激活补体，进而触发炎症反应，并作用于自身。IgG对多种病毒有防御作用，动物通过免疫接种或农场内自然接触病原体可以获得。一旦接触过病原体会产生免疫记忆，让机体能够迅速产生所需的抗体对抗特定的感染。人类的IgG通过胎盘传递给胎儿。哺乳动物如果没有IgG或IgG量少，对所接触的感染原的抵抗力就会差。
静脉注射用免疫球蛋白制剂(如IGIV；Baxter及其他制剂)，是高度纯化的商品化IgG，用于治疗那些无抗体产生，或抗体产生水平非常低的患者。免疫球蛋白制剂现有下列生产厂商：Baxter(美国)eg Gammagard，Isiven(Antimo Naples，意大利)，Omrix(Tel-Hashomer，以色列)，Miles(BiologicalProducts Division，West Heaven，CT)，Sclavo(Lucca，意大利)，Sandoz(Novartis，Basel，瑞士 eg Sandoglobulin)，Biotest Diagnostic Corporation(Deville，NJ)。免疫球蛋白制剂类产品有：Gamrnagard S/D，Gammar IV，Gammar-P IV，Gammimune N，Iveegam，Panglobulin，Polygam S/D，Sandoglobulin，Venoglobulin。免疫球蛋白制剂一般含有IgG和一些IgM。Gammagard中有痕量的IgM。Pentaglobin(Biotest)是富含IgM的制剂，用于治疗SARS。
这种从众多捐献者血浆中汇集的静脉注射用免疫球蛋白制剂(IvIg)也常用于自身免疫病，其已知作用机制之一是存在抗独特型抗体，即，与其他致病性抗体反应并中和它们的抗体。
US6613328中描述了一种方法，用von Willebrand因子的特异性抗体治疗血栓疾病。其中具体制备了人源化抗体。但是没有查到关于目前容易得到的免疫球蛋白，如IGIV，或其它免疫球蛋白亚组分能够用于预防动脉血栓或斑块破裂的信息。此外，在文献中没有查到IgG能抑制抗体与天然(native)膜联蛋白V结合，而这有可能是膜联蛋白V与内皮结合减少的原因，此观点在本发明中提出。
发明概览
本发明提供了通过给药能恢复膜联蛋白V与斑块的结合的化合物来预防动脉血栓和斑块破裂以及治疗动脉血栓并发症的新方法，所述化合物可通过抑制那些阻止上述结合的免疫球蛋白来实现恢复。该治疗通过给予膜联蛋白V或N端片段药物(优选通过静脉注射给药)来实现；或通过静脉给予能促进膜联蛋白V与斑块结合(可以是通过抑制膜联蛋白V与抗体结合来促进膜联蛋白V与斑块结合)的免疫球蛋白或免疫球蛋白亚组分来实现。本领域已知能治疗或预防感染和严重自身免疫病的免疫球蛋白(IGIV；Baxter)或其他商品制剂(产品举例见前文)以及亲和纯化的亚组分都可以使用。亲和纯化的免疫球蛋白亚组分更优选。
本发明所述方法中，活性成分(膜联蛋白V，膜联蛋白V的N端片段，或免疫球蛋白亚组分)以具有有效量的该活性成分的药物组合物的形式，给予有动脉血栓风险的受试者。药物组合物可通过静脉给药或者通过其他途径给药，作为风险组患者的治疗措施之一。更优选风险组是SLE患者组。另一个风险组患有或曾经罹患(或有相应风险)能引起抗磷脂相关抗体水平增加的上呼吸道感染或其他感染(包括肺炎球菌感染)。所述治疗按最佳时间间隔重复多次。
发明详述
当抗体抑制膜联蛋白V-斑块结合，导致膜联蛋白V与内皮结合下降，这时动脉血栓和板块破裂风险明显增加。通过给予膜联蛋白V(或片段)来恢复膜联蛋白V的结合，或者通过给予能抑制其他降低斑块-膜联蛋白结合的抗体(即膜联蛋白V-结合抗体)的免疫球蛋白，优选免疫球蛋白亚组分(如上文提到的免疫球蛋白汇集物制剂的亚组分)来恢复膜联蛋白V的结合，这为治疗动脉血栓，特别是斑块破裂-这一心血管疾病的主要原因，提供了新方法。
本发明一方面提供膜联蛋白V蛋白或膜联蛋白V的N端片段(非必需含盐)用于制备预防动脉血栓和/或斑块破裂的药物组合物的用途。
术语膜联蛋白V为本领域技术人员熟知并常用在，例如，上述引用文献中，例如，EP1379266。对本领域技术人员来说，显然膜联蛋白V的N端片段已经大得足以被本领域技术人员认为是膜联蛋白V(而不是其它膜联蛋白)的片段。
药物组合物可含有有效量的膜联蛋白V蛋白或膜联蛋白V的N端片段，非必需有载体和添加成分。本领域技术人员会了解那些适宜的可用的载体和添加成分，包括EP1379266中用到的实例。盐可以是制药上允许使用的酸加成盐，其反离子(counter ion)为，例如，氯离子，醋酸根离子。
膜联蛋白V在药物组合物中的有效量可由膜联蛋白V-内皮结合情况的诊断性分析来确定。因此，可通过评估患者的膜联蛋白V-内皮结合状况来确定剂量。因此，膜联蛋白V-内皮结合情况可通过评估患者血清对膜联蛋白V与内皮的结合的影响而评估，例如使用诸如实施例中使用的技术来评价患者血浆对膜联蛋白V与培养的内皮细胞的结合的影响(见“ 培养与膜 联蛋白V结合的内皮细胞”及“ 结果”章节)。也可以对患者活检斑块材料进行免疫组化染色(见实施例的“  人动脉粥样硬化斑块的免疫组化染色”章节)。也可以采用使用标记的膜联蛋白的影像学技术(见上文参考文献16的讨论部分(WO95/34315))。本领域技术人员将会理解，那些膜联蛋白V结合水平很低的患者，与膜联蛋白V结合水平接近正常人的患者相比，需要更大剂量的膜联蛋白V(或其片段)。
本发明的另一方面提供一种治疗方法，用于治疗有动脉血栓和/或斑块破裂风险的受试者，其特征在于，对所述受试者给予药物组合物，该组合物含有有效量的膜联蛋白V或膜联蛋白V的N端片段，非必需以盐形式。
有风险的受试者可以为SLE患者。SLE患者可以还有上文提到的风险因子，例如，血脂异常，oxLDL氧化增加，TNF系统(与血脂异常密切相关)中的活性增加，由CRP、同型半胱氨酸、aPL等指标判定的全身炎症反应。SLE患者还可以表现出复发血栓或频繁发生的动脉血栓，或有心血管疾病的一或多种表现，例如，血栓栓塞性而不是出血性或脉管炎性中风，心肌梗塞，心绞痛或间歇性跛行(intermittent claudication)。有风险的受试者可以是罹患或曾经罹患肺炎球菌感染者，或有罹患肺炎球菌感染风险者；或者，可以是根据表明即将患心血管疾病(如不稳定性心绞痛，其他类型严重心绞痛，或短暂缺血发作(TIA))的症状和临床评估可被鉴定为有不稳定斑块的患者。上文所述的膜联蛋白V-内皮结合水平评估方法可以用于评估风险。
本发明的另一方面提供一种纯化的免疫球蛋白亚组分(即，前述的免疫球蛋白汇集物制品的纯化亚组分)，其具有抑制与膜联蛋白V结合的抗体的能力。这样的亚组分可以通过前述技术制备，例如，使用亲和纯化方法。纯化的亚组分可以是抗IgG抗体亚组分，例如，通过结合IgG(尤其是结合IgG恒定区)的亲和力而选出的亚组分。
本发明的另一方面提供一种纯化的免疫球蛋白亚组分(例如，前述免疫球蛋白汇集物制品的纯化亚组分)，其能促进膜联蛋白V与内皮(或内皮细胞，例如，培养的内皮细胞)相结合。这种亚组分可以用前述技术制备，例如，用亲和纯化法。该亚组分可以是抗IgG抗体亚组分，例如，通过结合IgG(尤其是结合IgG恒定区)的亲和力而选出的亚组分。该亚组分可含有抗aPAF，抗aLPC，抗aPS或抗肺炎球菌疫苗抗体，以降低aPAF，aLPC，aLPC，aPS或抗肺炎球菌疫苗的抗体的水平，有人发现，缺少这些成分会增加膜联蛋白V的结合(见实施例)。所述亚组分促进膜联蛋白V与内皮结合的能力可以用前述及实施例中提到的膜联蛋白V-内皮结合检测方法评估。例如，合适的亚组分可以指能降低SLE患者血浆(血清高抗磷脂抗体(aPL)滴度)对膜联蛋白V与内皮细胞结合的抑制作用的亚组分。该亚组分可基于其与磷酸胆碱偶联物(例如PC-BSA或PC-KLH)结合，通过亲和纯化来制备，例如见实施例。这类亚组分可以具有比起始免疫球蛋白制剂更高的抗磷酸胆碱(aPC)抗体(如aPC IgG和/或aPC IgM)水平。如实施例中所述，我们发现aPC-BSA和aPC-KLH水平与膜联蛋白V结合之间存在统计学相关性。据认为，aPC IgG和/或IgM可与一些IgG结合(见，例如，Halpern et al(1991)J Clin Invest 88(2)，476-482)，且最有可能由B1细胞产生，此B1细胞是一种B细胞亚型，它也能中和B2细胞，后者可产生IgG。
本发明的另一方面提供本发明的纯化亚组分的医药用途，例如，用于预防动脉血栓和/或斑块破裂。
本发明的另一方面提供本发明的纯化亚组分或商品免疫球蛋白制剂(即，前述的免疫球蛋白汇集物制剂)用于制备预防动脉血栓和/或斑块破裂的药物的用途。
本发明的另一方面提供治疗有动脉血栓和/或斑块破裂风险的受试者的方法，包括将含有有效量的免疫球蛋白(即，前述免疫球蛋白汇集物制剂)或免疫球蛋白纯化亚组分(实例见前文)的药物组合物给予所述受试者。
对接受治疗的受试者(或用药对象)的选择见上文。受试者可以是，例如，SLE患者，或者罹患或曾经罹患或有可能罹患肺炎球菌感染的患者，或者有不稳定斑块和/或不稳定心绞痛的患者。
在下述实施例和附图且不仅限于这些的帮助下，将对本发明进行更详细的描述。
参考文献将以引用的方式并入本文中。
附图：
图1：抗磷脂抗体(aPL)高滴度的血清与人免疫球蛋白汇集物Gammagard预孵育对膜联蛋白V与人脐静脉内皮细胞(HUVECs)结合的影响：培养24小时后流式细胞学分析。
与IVIG预孵育的血清浓度 膜联蛋白V结合的平均荧光强度(MFI)
0mg/ml 649
2.5mg/ml 913
5mg/ml 1269
10mg/ml 1382
图2：抗磷脂抗体(aPL)高滴度的血清与肺炎球菌荚膜多糖预孵育对膜联蛋白V与人脐静脉内皮细胞(HUVECs)结合的影响：培养24小时后流式细胞学分析。
与肺炎球菌荚膜多糖预孵育的血清aPL浓度 膜联蛋白V结合的平均荧光强度(MFI)
0μg/ml 806
10μg/ml 905
100μg/ml 1860
图3：抗磷脂抗体(aPL)高滴度的血清与LysoPC及PAF预孵育对膜联蛋白V与人脐静脉内皮细胞(HUVECs)结合的影响：培养24小时后流式细胞学分析。
LysoPC  APS均值％(mean％)  APS中值％(median％)
10μg/ml  123.6156.9169.5  121.88138.23178.5
Av  150  146
标准差(SD)  24  29
100μg/ml  114.7195.12158.1  115.4174.65175.39
Av  156  155
标准差(SD)  40  34
 PAF  APS均值％(mean％)  APS中值％(median％)
 10μg/ml  100155.6149.8  99134164
 Av  135  132
 标准差(SD)  31  33
 100μg/ml  151122139  145116147
 Av  137  136
 标准差(SD)  15  17
图4：抗磷脂抗体(aPL)高滴度的血清与无关抗原(破伤风类毒素)预孵育对膜联蛋白V与人脐静脉内皮细胞(HUVECs)结合的影响：培养24小时后流式细胞学分析。
文件名： APS 24 hrs on HUVEC.001
门化事件数(gated events)： 10000
总事件数： 13067
％门化率  均值 Geo均值 中值(median) 峰值Ch
100  80.93 11.73 4.66 1
36.90  213.84 172.37 205.35 259
文件名： TT100 24 hrs on HUVEC.006
门化事件数： 10000
总事件数： 13328
％门化率 均值 Geo均值 中值(median) 峰值Ch
100 155.14 47.62 133.42 1
66.69 230.12 173.93 212.88 222
图5：抗磷脂抗体(aPL)高滴度的血清与LysoPC预孵育对膜联蛋白V与人脐静脉内皮细胞(HUVECs)结合的影响：培养24小时后流式细胞学分析。
文件名： APS 24 hrs on HUVEC.001
门化事件数： 10000
总事件数： 13067
％门化率 均值 Geo均值 中值(median) 峰值Ch
100 80.93 11.73 4.66 1
36.90 213.84 172.37 205.35 259
  文件名：   LPC100 24 hrs on HUVEC.014
  门化事件数：   10000
总事件数： 13163
％门化率 均值 Geo均值 中值(median) 峰值Ch
100 275.37 62.95 153.99 1
67.03 408.50 268.96 352.27 453
实验
研究组
研究组由以下人员组成：26例SLE妇女，她们都有心血管疾病的一或多种表现，为血栓栓塞性而不是出血性或脉管炎性中风(n＝15)，(由计算机断层成像(CT)或磁共振成像(MRI)证实)；心肌梗塞(n＝7)，(由心电图及肌酸激酶的升高所证实)；心绞痛(n＝9)，(由运动负荷试验(exercise stress test)证实)或者间歇性跛行(n＝4)(由血管造影证实外周动脉粥样硬化)，26例年龄相当的患有SLE且没有心血管疾病临床症状的妇女，以及26例年龄相当的健康妇女。
所有患者均符合1982年修订的美国风湿病协会SLE16标准。本研究获得卡罗林斯卡医学院(Karolinska Hospital)伦理委员会批准。所有参与者参加本研究前均签订知情同意书。
颈动脉超声
右侧及左侧颈动脉用双向扫描仪(duplex scanner，Acuson Sequoia，Mountain View，California，USA)检查，动脉粥样硬化程度用内膜-中膜厚度(intima-media thickness，IMT)确定。
培养与膜联蛋白V结合的内皮细胞
汇集的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)经低温保存的第二代培养物购自Cascade Biologics公司(Portland，OR，USA)，在无酚红的EGMTM培养基(Clonetics，San Diego，CA，USA)中维持，该培养基含2％胎牛血清及添加成分。细胞在75cm2培养瓶(TPP，AG，Trasadingen，瑞士)中于5％CO2、37℃的湿境中孵育。所有实验采用第三代到第四代细胞。HUVEC按接种密度2×104个细胞/ml接种至12孔培养板中(NUNC，Inc，Naperville，IL，美国)，用于流式细胞学检查；按密度为1×104个细胞/孔/100μl接种到96孔板(TPP)用于MTT检测；按密度为8×103个细胞/ml接种到24孔板(NUNC)用于DNA fragmentation ELISA。使细胞贴壁12-24小时，用无血清培养基(SFM)小心地洗细胞，将细胞在SFM中静置至少12小时，然后进行处理。各研究组的血浆加肝素保存，按SFM中10％的浓度加入到单层细胞上。
细胞不经酶处理，而是用细胞分离液(Cell Dissociation Solution，CDS；Sigma-Aldrich，St.Louis，MO，USA)进行收获。HUVEC小心地从上清中收集，以免选择性失去脱壁后漂浮的内皮细胞(EC)，然后在1200rpm离心7分钟。在100μl膜联蛋白V结合缓冲液(Molecular Probes Inc，Eugene，OR，美国)中重悬后，样品用5mg/ml膜联蛋白V-FITC(Mol.Probes)染色并冰浴15分钟。加入1mg/ml碘化丙啶(PI；R&DSystems Europe Ltd，Abingdon，UK)，之后迅速采样(acquisition)。使用配备有CellQuestTM软件的FACScan流式细胞仪(BD Biosciences，San Jose，CA，美国)进行分析。采样期间，设门(gate)，以排除在线性FCS和SSC scale中小于230的事件。每个样品收集10000个事件。
人动脉粥样硬化斑块的免疫组化染色
对人的斑块进行免疫染色，特征如前。斑块取自12位在暂时性缺血发作后行颈动脉内膜切除术的患者。所有样本均有进展期动脉粥样硬化病变。对照为取自无关肠切除术后目测为健康的肠系膜动脉。冰冻切片用2％多聚甲醛(paraformaldehyde)的PBS溶液(Sigma Chemicals)4℃固定20分钟，于-70℃储存。封闭内源性过氧化物酶后，切片与小鼠IgG2a型抗膜联蛋白V单克隆抗体(Alexis Biochemicals，Corp.，Lausen，瑞士)，抗CD68(DakoCytomation，Glostrup，丹麦)或抗CD31(Monosan，Uden，TheNetherlands)孵育过夜。无关的小鼠IgG2a(Serotec Ltd，Oxford，英国)作为阴性对照。所有抗体用1％BSA-0.02％NaN3的PBS溶液稀释。冲洗后，使用1％正常马血清的PBS溶液。加入第二抗体-生物素标记的马抗小鼠免疫球蛋白(VectorLaboratories，Burlingame，CA，美国)。使用ABC过氧化物酶EliteTM试剂盒(Vector Laboratories)。染色使用二氨基联苯胺(diaminobenzidine，VectorLaboratories)，复染使用苏木精。所有切片均用Leica DMRXA显微镜(Leica，Wetzlar，Germany)分析。
aPC的制备
用HiTrap IgM或IgG柱(Amersham Biosciences)将总IgM或IgG级分从市售的人免疫球蛋白汇集物(Gammagard)中分离，浓度50mg/ml。将IgM或IgG级分加载至结合了PC-KLH(1或5mg/ml)或PC-BSA(1mg/ml)的NHS-Sepharose柱，接着加载至仅结合BSA的柱，从而将抗磷酸胆碱抗体洗脱下来。PC-BSA(磷酸胆碱-牛血清白蛋白)及PC-KLH购自BiosearchTechnologies，INC(Ca，美国)。洗脱下来的级分更换缓冲液后加载至PD-10柱，用Millipore Centricone装置浓缩。根据厂家说明书进行操作。制备的IgM aPC的浓度一般为50μg/ml，IgG aPC的浓度一般为30μg/ml。
膜联蛋白V与内皮细胞结合
添加了肝素、具有较强的抑制膜联蛋白V结合的能力的血浆，以SFM中10％的浓度添加至单层HUVEC。24小时后，细胞用细胞分离液(CDS；Sigma-Aldrich，St.Louis，MO，USA)收获，小心地从上清中收集，以免选择性失去脱壁后漂浮的细胞，然后在1200rpm离心7分钟。在100μl膜联蛋白V结合缓冲液(Molecular Probes Inc，Eugene，OR，美国)中重悬后，样品用2μl5mg/ml膜联蛋白V-FITC(Mol.Probes)染色并冰浴15分钟。加入lmg/ml碘化丙啶(PI；活体染料，R&DSystems Europe Ltd，Abingdon，UK)，之后迅速采样。分析按照上文所述的方法进行。
结果
免疫球蛋白IgG耗竭对膜联蛋白V结合的影响
免疫球蛋白IgG亚类耗竭导致膜联蛋白V结合的荧光强度(FI)增长最多2.7-2.6倍(全血清平均FI：267.95±vs.709.91±；中值FI：222.67±vs567.42±)。在已耗竭的血清中重构IgG级分能降低上述荧光强度，而含有IgG洗脱物的培养物则使膜联蛋白V结合的荧光强度与全血清的荧光强度相当。
在24小时后，SLE病例的血浆的膜联蛋白V结合明显低于对照组(SLE病例组对(vs.)一般对照p＝0.002；SLE病例组对SLE对照组p＝0.02)。将具有较强的抑制膜联蛋白V结合的能力的血清中总IgG耗竭后，能完全恢复上述膜联蛋白V结合。在众多SLE病例中，膜联蛋白V的结合与动脉粥样硬化程度呈显著正相关(R＝0.73，p＜0.001)。免疫染色发现在12例被检斑块中11例有膜联蛋白V存在。
蛋白G亲和柱层析
具有较强的抑制膜联蛋白V与EC结合的能力的血清汇集物经0.45μm过滤后，用等体积的内皮细胞基础培养基稀释。HiTrap蛋白G HP购自Amersham Biosciences(Uppsala，瑞典)，其1ml柱具有结合25mg人IgG/ml凝胶的能力，按厂家说明书使用。该柱用0.1M甘氨酸-HCl，pH2.7洗脱，获得IgG级分。用1M Tris-HCl，pH9.0进行中和。在分离当天，全血清、流出液(effluate)和洗脱液在SFM中按1∶10稀释后与HUVEC孵育。
测量与内皮细胞结合的膜联蛋白V
测定膜联蛋白V染色呈阳性的HUVEC的比率，表示为双变量点图中膜联蛋白V+/PI-细胞的百分率，或直方图中膜联蛋白V+细胞的百分率。在有已知可降低膜联蛋白V与HUVEC的结合的血清存在且已与IVIG预孵育的条件下测定该结合。与IVIG预孵育可以恢复膜联蛋白的结合，表明IVIG中的抗体能中和该结合(图1)。
在众多有心血管疾病(CVD)病史的SLE患者中，aPC-BSA和aPC-KLH都与膜联蛋白V-EC结合显著相关(分别为r＝0.45；p＝0.02和r＝0.03)。aPC-BSA和aPC-KLH水平用标准方法测定，例如，使用以下试剂。PolysorpF96微量免疫滴定板购自Nunc(Roskilde Danmark)，PC-BSA(磷酸胆碱-牛血清白蛋白)购自Biosearch Technologies，INC(美国)。BSA、偶联了山羊抗人IgG(r链特异性)的碱性磷酸酶、偶联了山羊抗人IgM(u链特异性)的碱性磷酸酶、PNPP(碱性磷酸酶底物)都购自Sigma(St.Louis，MO，美国)。例如，抗PC-BSA的IgG和IgM抗体用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定。从17例抗磷脂综合征患者汇集的血清被用作内部标准并在每个板上进行检测。当抗原浓度为10μg/ml时达到抗体结合的平台期。F96微量滴定polysorp板用PC-BSA的PBS溶液(10μg/ml)按照50μl/孔进行包被。包被后的板4℃孵育过夜。这些板用PBS清洗5次后，用2％BSA-PBS室温封闭2小时，如上述洗板。血清样本用0.2％BSA-PBS稀释(1∶30)，按照50μl/孔水平加样。
用肺炎球菌疫苗(Statens Serum Institute，丹麦)，PAF，具有较强的诱导降低结合之能力的血清中的磷脂酰丝氨酸或溶血磷脂酰胆碱预孵育，有引起血清与抗原结合下降的作用；并能恢复膜联蛋白V的结合(图2，3，5)。相反，PC没有明显影响。这说明，与肺炎球菌疫苗、PAF、磷脂酰丝氨酸、溶血磷脂酰胆碱结合的抗体可能参与减弱膜联蛋白V与内皮细胞的结合。
总之，膜联蛋白V存在于动脉粥样硬化损伤的多个部位，特别是那些容易发生斑块破裂的部位。当膜联蛋白V的结合不理想，甚至由于抗体干扰膜联蛋白-斑块结合而导致该结合降低时，动脉血栓和斑块破裂的风险就会猛增。因此，恢复膜联蛋白V结合是治疗动脉血栓特别是斑块破裂(这是心血管疾病的主要原因)的可能的新方法。本发明提供了两种方法。一种基于使用最佳剂量的膜联蛋白V或其盐，优选静脉注射给药；另一种方法基于使用现有免疫球蛋白或其经过亲和纯化的亚组分(也可注射给药)。
每剂药中膜联蛋白V(或免疫球蛋白)的有效量可通过对当前(current)膜联蛋白V-斑块结合的诊断分析来确定。该结合可用前文所述分析方法确定。
用含有所述活性成分的药物组合物进行的治疗，优先给予那些有风险的受试者。有风险的受试者是指多次反复发生动脉血栓的SLE患者。还有一种有风险的受试者是指罹患或曾经罹患肺炎球菌感染，或有罹患肺炎球菌感染风险者。
参考文献
1.Ross R.Atherosclerosis--an inflammatory disease.N Engl J Med.1999；340：115-26.
2.Frostegard J，Ulfgren AK，Nyberg P，Hedin U，Swedenborg J，AnderssonU，Hansson GK.Cytokine expression in advanced human atherosclerotic plaques：dominance of pro-inflammatory(Th1)and macrophage-stimulating cytokines.Atherosclerosis.1999；145：33-43.
3.Manzi S，Selzer F，Sutton-Tyrrell K，Fitzgerald SG，Rairie JE，Tracy RP，Kuller LH.Prevalence and risk factors of carotid plaque in women with systemiclupus erythematosus.Arthritis Rheum.1999；42：51-60.
4.Petri M，Roubenoff R，Dallal GE，Nadeau MR，Selhub J，Rosenberg IH.Plasma homocysteine as a risk factor for atherothrombotic events in systemiclupus erythematosus.Lancet.1996；348：1120-4.
5.Svenungsson E，Jensen-Urstad K，Heimburger M，Silveira A，Hamsten A，de Faire U，Witztum JL，Frostegard J.Risk factors for cardiovascular disease insystemic lupus erythematosus.Circulation.2001；104：1887-93.
6.Svenungsson E，Fei GZ，Jensen-Urstad K，de Faire U，Hamsten A，Frostegard J.TNF-alpha：a link between hypertriglyceridaemia and inflammationin SLE patients with cardiovascular disease.Lupus.2003；12：454-61.
7.Svenungsson E GI，Fei G，Lundberg IE，Klareskog L，Frostegard J.Blood lipids and TNF-a are closely related markers of Disease Activity andDisease Damage in Systemic Lupus Erythematosus.Arthritis&Rheumatism inpress.2003.
8.Hughes G.Thrombosis，abortion，cerebral disease and the lupusantikoagulant.British Medical Journal.1983；287：1088-1089.
9.Asherson RA，Khamashta MA，Ordi-Ros J，Derksen RH，Machin SJ，Barquinero J，Outt HH，Harris EN，Vilardell-Torres M，Hughes GR.The″primary″antiphospholipid syndrome：major clinical and serological features.Medicine(Baltimore).1989；68：366-74.
10.Wu R，Lemne C，De Faire U，Frostegard J.Antibodies toplatelet-activating  factor are associated with borderline hypertension，earlyatherosclerosis and the metabolic syndrome.J Intern Med.1999；246：389-97.
11.Vaarala O，Mnttri M，Manninen V，Tenkanen L，Puurunen M，AhoK，T P.Anti-Cardiolipin Antibodies and Risk of Myocardial Infarction in aProspective Cohort of Middle-Aged Men.Circulation.1995；91：23-27.
12.Rand JH，Wu XX，Quinn AS，Chen PP，McCrae KR，Bovill EG，Taatjes DJ.Human monoclonal antiphospholipid antibodies disrupt the膜联蛋白A5 anticoagulant crystal shield on phospholipid bilayers：evidence fromatomic force microscopy and functional assay.Am J Pathol.2003；163：1193-200.
13.Rand JH，Wu XX，Guller S，Scher J，Andree HA，Lockwood CJ.Anti phospholipid immunoglobulin G antibodies reduce膜联蛋白-V levels onsyncytiotrophoblast apical membranes and in culture media of placental villi.AmJ Obstet Gynecol.1997；177：918-23.
14.Rand JH.Antiphospholipid antibody-mediated disruption of the膜联蛋白-V antithrombotic shield：a thrombogenic mechanism for theantiphospholipid syndrome.J Autoimmun.2000；15：107-11.
15.Stratton et al.，Circulation 92：3113-3121(1995)；Thiagarajan andBenedict，Circulation 96：23392347(1997)
16.Reno and Kasina，International Patent Application PCT/US95/07599(WO95/34315)
17.Romisch et al.，Thrombosis Res.61：93-104(1991)

Claims (11)

1.膜联蛋白V蛋白或膜联蛋白V的N端片段用于制备预防动脉血栓和/或斑块破裂的药物组合物的用途，所述膜联蛋白V蛋白或膜联蛋白V的N端片段可选是其盐形式。
2.根据权利要求1所述用途，其中药用组合物包括有效量的膜联蛋白V蛋白或膜联蛋白V的N端片段，可选还有载体或添加成分。
3.根据权利要求1或权利要求2所述用途，其中药物组合物中膜联蛋白V的有效量由膜联蛋白V与内皮结合情况的诊断性分析所确定。
4.一种治疗有动脉血栓和/或斑块破裂风险的受试者的方法，其特征在于，给与所述受试者一种药物组合物，该组合物包括有效量的膜联蛋白V或膜联蛋白V的N端片段或其盐类。
5.根据权利要求4所述方法，其中有风险的受试者为系统性红斑狼疮(SLE)患者。
6.免疫球蛋白汇集物的纯化的亚组份，有抑制与膜联蛋白V结合的抗体的能力。
7.免疫球蛋白汇集物的纯化的亚组份，有促进膜联蛋白V与内皮结合的能力。
8.根据权利要求6或7的纯化亚组份的用途或市售免疫球蛋白汇集物制剂的用途，用于制备预防动脉血栓和/或斑块破裂的药物。
9.根据权利要求6或7的纯化的亚组份，用于医药。
10.一种治疗有动脉血栓和/或斑块破裂风险的受试者的方法，其特征在于，给与所述受试者一种药物组合物，该组合物含有有效量的免疫球蛋白汇集物或免疫球蛋白汇集物的亚组份。
11.根据权利要求10所述方法，其中具有风险的受试者为系统性红斑狼疮(SLE)患者。
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102690345A (zh) * 2011-03-24 2012-09-26 江苏靶标生物医药研究所有限公司 人膜联蛋白v变体及其表达、制备和应用
CN105327042A (zh) * 2015-12-16 2016-02-17 刘爱玲 一种治疗颈动脉斑块的中药药膏及制备方法
CN108159421A (zh) * 2018-02-05 2018-06-15 苏州大学 磷脂酰丝氨酸阻断剂在制备治疗血小板数量减少相关疾病药物中的用途
WO2023143463A1 (en) * 2022-01-30 2023-08-03 Nanjing Reju Therapeutics , Inc. Fusion protein and application thereof

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7645739B2 (en) 2001-02-21 2010-01-12 Alavita Pharmaceuticals, Inc. Modified annexin compositions and methods of using same
WO2009077764A1 (en) * 2007-12-18 2009-06-25 Athera Biotechnologies Ab Compounds and methods for the treatment of vascular disease
ES2733902T3 (es) * 2008-02-22 2019-12-03 Annexin Pharmaceuticals Ab Compuestos y procedimientos para la prevención o tratamiento de reestenosis
CA2739445A1 (en) 2008-10-03 2010-04-08 Advanced Proteome Therapeutics, Inc. Site specific n-terminal modifications of proteins and conjugate formation
CA2740557C (en) 2008-10-17 2020-04-14 London Health Sciences Centre Research Inc. Annexin and its use to treat inflammatory disorders
AU2009328507A1 (en) * 2008-12-19 2011-07-14 Medirista Biotechnologies Ab Oxidized cardiolipin as a novel pro-inflammatory factor
WO2011160845A2 (en) 2010-06-24 2011-12-29 Medirista Biotechnologies Ab Oxidized phospholipids and lipoproteins, and antibodies thereto, as biomarkers of inflammatory conditions and methods of treatment
WO2012136819A1 (en) 2011-04-05 2012-10-11 Athera Biotechnologies Ab Therapeutic and prophylactic methods, uses and compositions comprising anexin a5
WO2013109144A1 (en) * 2012-01-18 2013-07-25 Stichting Katholieke Universiteit Annexin a5 snp in atherosclerosis
GB2552853B (en) * 2015-09-17 2018-11-21 Annexin Pharmaceuticals Ab Purification of Annexin A5 from a composition that includes a calcium ion chelator
GB2542391A (en) 2015-09-17 2017-03-22 Annexin Pharmaceuticals Ab Process of manufacture
GB2552724B (en) * 2015-09-17 2020-05-06 Annexin Pharmaceuticals Ab Purification of Annexin A5 by anion exchange and affinity chromatography
GB201702144D0 (en) 2017-02-09 2017-03-29 Annexin Pharmaceuticals Ab Therapeutic compositions
TW202146042A (zh) * 2020-03-06 2021-12-16 瑞典商阿斯特捷利康公司 用於治療動脈和靜脈血栓形成的協同且靶向的組成物
CN117897399A (zh) 2021-06-14 2024-04-16 Inserm(法国国家健康医学研究院) 突变的膜联蛋白a5多肽及其在治疗目的中的用途

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5632986A (en) * 1991-05-09 1997-05-27 The University Of Washington Phospholipid-targeted thrombolytic agents
US5968477A (en) * 1994-01-24 1999-10-19 Neorx Corporation Radiolabeled annexin conjugates with hexose and a chelator
US5767247A (en) * 1994-11-11 1998-06-16 Noboru Kaneko Anti-annexin-V monoclonal antibodies, and preparation and use thereof
US6284475B1 (en) * 1997-07-11 2001-09-04 Mount Sinai School Of Medicine Of The City Of New York Assays for diagnosis of thrombophilic disease
US5932712A (en) * 1997-07-31 1999-08-03 Incyte Pharmaceuticals, Inc. Annexin binding protein
US6228360B1 (en) * 1998-08-19 2001-05-08 Ajinomoto Co., Inc. Antithrombotic agent and humanized anti-von Willebrand factor monoclonal antibody
IL149145A0 (en) * 1999-11-05 2002-11-10 Warner Lambert Co Prevention of plaque rupture by acat inhibitors
WO2001066124A2 (en) * 2000-03-10 2001-09-13 Medinnova Sf Composition for the treatment of heart failure
GB0005867D0 (en) * 2000-03-10 2000-05-03 Medinnova Sf Method
ME00554B (me) * 2000-05-05 2012-03-20 Serono Lab KORIŠĆENJE IL-18 INHIBITORA ZA LIJEČENJE l/ILI PREVENCIJU ATEROSKLEROZE
IL135993A0 (en) * 2000-05-05 2001-05-20 Omrix Biopharmaceuticals Pharmaceutical composition for the treatment of fibrosis
EP1379266B1 (en) * 2001-02-21 2007-04-18 SurroMed, Inc. Modified annexin proteins and prevention and treatment of thrombosis
US20050013778A1 (en) * 2001-04-03 2005-01-20 Theseus Imaging Corporation Methods and compositions for predicting the response to a therapeutic regimen in a subject having a disease associated with cell death
US20040203083A1 (en) * 2001-04-13 2004-10-14 Biosite, Inc. Use of thrombus precursor protein and monocyte chemoattractant protein as diagnostic and prognostic indicators in vascular diseases
ATE439588T1 (de) * 2001-05-04 2009-08-15 Biosite Inc Diagnostische marker für akute herzerkrankungen und verfahren des gebrauchs
US20030152513A1 (en) * 2001-09-06 2003-08-14 Imetrix, Inc. Intravascular delivery of therapeutic and imaging agents to stressed and apoptotic cells using annexin V as a targeting vector
US20040042959A1 (en) * 2002-08-28 2004-03-04 Michael Montalto Imaging cell death in vivo using non-radionuclide contrast agents

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102690345A (zh) * 2011-03-24 2012-09-26 江苏靶标生物医药研究所有限公司 人膜联蛋白v变体及其表达、制备和应用
CN102690345B (zh) * 2011-03-24 2014-03-19 江苏靶标生物医药研究所有限公司 人膜联蛋白v变体及其表达、制备和应用
CN105327042A (zh) * 2015-12-16 2016-02-17 刘爱玲 一种治疗颈动脉斑块的中药药膏及制备方法
CN108159421A (zh) * 2018-02-05 2018-06-15 苏州大学 磷脂酰丝氨酸阻断剂在制备治疗血小板数量减少相关疾病药物中的用途
CN108159421B (zh) * 2018-02-05 2021-05-18 苏州大学 磷脂酰丝氨酸阻断剂在制备治疗血小板数量减少相关疾病药物中的用途
WO2023143463A1 (en) * 2022-01-30 2023-08-03 Nanjing Reju Therapeutics , Inc. Fusion protein and application thereof

Also Published As

Publication number Publication date
AU2005232436C1 (en) 2010-08-26
PT1755642E (pt) 2010-04-20
WO2005099744A1 (en) 2005-10-27
CA2563408C (en) 2015-08-25
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DE602005018914D1 (de) 2010-03-04
ES2356364T3 (es) 2011-04-07
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AU2005232436B2 (en) 2010-03-11
CA2563408A1 (en) 2005-10-27
CY1109959T1 (el) 2014-09-10
ATE454898T1 (de) 2010-01-15
JP2012136536A (ja) 2012-07-19
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DK1755642T3 (da) 2010-05-10
EP1755642A1 (en) 2007-02-28

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