CN1995978A - 一种苯酞类化合物总量的紫外定量测定方法及其应用 - Google Patents

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Abstract

一种苯酞类化合物总量的紫外定量测定方法及其应用。方法包括将已知纯度苯酞类化合物用醇类溶剂配制成一系列浓度为50～800μg/mL的对照品溶液；在对照品溶液中加入强碱溶液和醇类溶剂，置于10～60℃的水浴中10～60分钟，在290～340nm波长处测定吸光度，并以标准溶液的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线；将苯酞类化合物用醇类溶剂配成上述浓度范围内的溶液作为样品，然后按照上述方法测定吸光度；将样品吸光度用标准曲线计算出样品中苯酞类化合物的总量。本方法不需特殊仪器，操作过程简单、迅速、结果可靠，因此可用于含苯酞类化合物的植物、中药材和饮片、提取物及相关产品的实验室及工业分析和质量控制。

Description

一种苯酞类化合物总量的紫外定量测定方法及其应用
技术领域
本发明涉及一种紫外定量测定方法及其应用，特别是涉及一种苯酞类化合物总量的紫外定量测定方法及其应用。
背景技术
苯酞类化合物是指具有苯酞母核结构的一类化合物，是伞形科植物的特征性成分之一，分布在芹亚科的几个族中，尤以阿米芹族和西风芹族中分布最为集中，主要存在于芹属、蛇床属、藁本属、当归属、山芎和欧当归属等植物中。特别是藁本属中已研究过的植物都含有苯酞类成分，并且业已从中分离并鉴定出40余种苯酞类化合物。已知苯酞类成分是其相应植物的主导香味成分，并具有广泛的生物活性，其为诸如当归、川芎等许多常用中药的主要有效成分。当归是伞形科当归属中一种多年生草本植物，其干燥的根是我国一味常用中药材，药用历史悠久，历代本草均有记载，具有补血、和血、调经止痛、润肠滑肠之功效。当归中的主要活性成分为藁本内酯等苯酞类化合物。川芎是伞形科藁本属植物川芎的干燥根茎，具有活血行气、祛风止痛之功效，是古今中医极为常用的药材之一。现代研究表明，川芎的主要活性成分为内酯类成分，属于苯酞类化合物，具有明显的舒张血管、改善微循环、抑制血小板聚集、拮抗动脉粥样硬化的形成等作用。目前，当归和川芎等植物中苯酞类化合物的定量测定多采用GC-MS法、HPLC法或气相色谱-质谱法。由于GC-MS法所采用的温度太高，因此在进样过程中有些苯酞类化合物有可能产生分解，所以测定结果不太准确。虽然HPLC法和气相色谱-质谱法的测定结果比较准确，但测定过程中需要有各种成分纯度较高、稳定性较好的对照品，而且必须在分离较好的情况下才能进行定量测定，因此操作条件要求比较严格，另外，这两种方法的设备投资和日常分析的费用较大，而且对操作人员的要求也较高，因而工业化应用存在一定难度。此外，这两种方法只能测定某几种结构的苯酞类化合物含量，但目前已知结构的苯酞类化合物就有几十种，因此单纯用这几种结构的苯酞类化合物含量来表征苯酞类化合物的总量显然是不合理的。
发明内容
为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种测定结果准确、操作过程简单，因而适于工业化应用的苯酞类化合物总量的紫外定量测定方法及其应用。
为了达到上述目的，本发明提供的苯酞类化合物总量的紫外定量测定方法包括按顺序进行的下列步骤：
(1)准确称取一定量已知纯度的苯酞类化合物作为对照品，用1～4个碳的醇类溶剂溶解并定容而配制出一系列浓度为50～800μg/mL的对照品溶液；
(2)分别精确吸取步骤(1)配制的不同浓度的对照品溶液，加入4倍量1～5％浓度的强碱溶液，然后用1～4个碳的醇类溶剂稀释至所取对照品溶液体积的10倍，摇匀而作为试样，同时用上述1～4个碳的醇类溶剂做空白，将空白和试样置于10～60℃的水浴中保温反应10～60分钟，以空白为参比，利用紫外分光光度仪在290～340nm波长处测定吸光度，并以标准溶液的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线；
(3)将利用各种提取或分离方法获得的苯酞类化合物用1～4个碳的醇类溶剂配成浓度在50～800μg/mL范围内的溶液作为样品，然后按照步骤(2)的方法测定吸光度；
(4)将步骤(3)所得样品吸光度用步骤(2)所得的标准曲线计算出样品中苯酞类化合物的总量。
所述的已知纯度的苯酞类化合物选自瑟丹酸内酯、藁本内酯、正丁基苯酞、洋川芎内酯H、洋川芎内酯I、丁烯基苯酞或芹菜乙素。
所述的强碱为NaOH、KOH。
所述的强碱溶液浓度为2.5％～3.5％。
所述的反应温度为20～60℃。
所述的反应温度为25～35℃。
所述的1～4个碳的醇类溶剂为无水甲醇或无水乙醇。
所述的波长范围为300～310nm。
所述的波长为305nm。
本发明提供的苯酞类化合物总量的紫外定量测定方法在含苯酞类化合物的植物、医药产品、保健品、食品和化妆品的含量测定及质量控制中的应用。
本发明提供的苯酞类化合物总量的紫外定量测定方法不需要特殊的仪器，并且操作过程简单、迅速，而且结果可靠，因此可用于含苯酞类化合物的植物、中药材、中药饮片、提取物及相关产品的实验室及工业分析和质量控制。
具体实施方式
苯酞类化合物具有式I所示的结构母核，由结构母核及其取代衍生物和结构母核形成的低聚体及其取代衍生物组成，其结构母核中的A环至少应含有一个双键。
Figure A20061013041800061
式I
苯酞类化合物结构中六元环上的双键π电子通常与内酯环中氧原子形成共轭结构，在无水乙醇溶液中于波长280nm左右的紫外光下产生吸收峰，但由于各种苯酞类化合物的摩尔吸光系数相差很大，不适于采用紫外光谱法直接进行总量测定。苯酞类化合物中加碱后，其将发生水解，从而将内酯环打开，形成烯醇阴离子或类似结构形式，使吸收带向长波移动，吸收峰波长变为305nm左右，虽然吸收强度下降，但各内酯成分摩尔吸光系数趋于一致，因此该反应可用于此类化合物总量的准确测定。
下面结合具体实施例对本发明提供的苯酞类化合物总量的紫外定量测定方法进行详细说明。
实施例1：紫外定量测定方法测定川芎中苯酞类化合物总量
(1)准确称取纯度为98.10％的瑟丹酸内酯38.25mg，用无水乙醇定容至10mL。分别吸取0，250，370，500，620，750，870μL的上述溶液，并用无水乙醇稀释至10mL而得到浓度为0，93.80，138.82，187.60，232.62，281.40，326.42μg/mL的系列对照品标准溶液。
(2)精确吸取步骤(1)配制的对照品标准溶液1.0mL于10mL容量瓶中，加入4.0mL3％NaOH溶液，然后加入无水乙醇稀释至刻度，摇匀而制成试样，同时用无水乙醇做试剂空白进行对照。将试剂空白和试样置于30℃的水浴中保温反应30min，以无水乙醇为参比，利用紫外分光光度仪在305nm处测定吸光度，并以标准溶液的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。回归方程为A＝1.7C+25.1(mg/mL)，r＝0.9984(n＝6)，ε＝1.83×102L·mol-1·cm-1。
(3)分别称取4种不同产地的川芎细粉或饮片粉末120g，加入960mL70％乙醇水溶液，20℃下浸泡12小时，40℃水浴加热提取1小时，普通定性滤纸过滤，滤渣中加入720mL 70％乙醇水溶液，40℃水浴加热提取1小时，普通定性滤纸过滤，将两次提取滤液合并，50℃减压回收乙醇，共得4种提取浓缩液。
(4)分别在上述每种提取浓缩液中加入20mL水、75mL乙酸乙酯和15mL石油醚萃取5分钟，静置2小时，分层，下层再加入75mL乙酸乙酯和15mL石油醚萃取5分钟，静置2小时，分层，合并两次上层有机相，减压浓缩，将浓缩物在25℃下真空干燥至恒重。
(5)取上述川芎苯酞混合物42.69mg，用无水乙醇定容到10mL，精确吸取上述溶液1ml，用无水乙醇稀释到10mL。从稀释液中吸取1mL于10mL容量瓶中，加入4.0mL3％NaOH溶液，然后加入无水乙醇稀释至刻度，摇匀而作为样品，同时用无水乙醇做试剂空白进行对照。将试剂空白和样品置于30℃水浴中保温反应30min，以无水乙醇为参比，利用紫外分光光度仪在305nm处测定吸光度三次，并求出紫外吸收值的平均值。
6.将4种样品扣除空白后的平均紫外吸收值代入回归方程A＝1.7C+25.1(mg/mL)而计算出4种样品中的苯酞类化合物总量，结果见表1。
表1川芎饮片和药材中苯酞类化合物含量
    样品来源   川芎苯酞含量(mg/g)
    川芎饮片川芎药材1川芎药材2川芎药材3   22.9143.8331.9340.41
实施例2：紫外定量测定方法测定当归中苯酞类化合物总量
(1)准确称取纯度为98.10％的瑟丹酸内酯38.25mg，用无水乙醇定容至10mL。分别吸取0，250，370，500，620，750，870μL的上述溶液，并用无水乙醇稀释至10mL而得到浓度为0，93.80，138.82，187.60，232.62，281.40，326.42μg/mL的系列对照品标准溶液。
(2)精确吸取步骤(1)配制的对照品标准溶液1.0mL于10mL容量瓶中，加入4.0mL5％NaOH溶液，然后加入无水乙醇稀释至刻度，摇匀而制成试样，同时用无水乙醇做试剂空白进行对照。将试剂空白和试样置于10℃的水浴中保温反应60min，以无水乙醇为参比，利用紫外分光光度仪在305nm处测定吸光度，并以标准溶液的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。回归方程为A＝1.65C+21.5(mg/mL)，r＝0.9981(n＝6)，ε＝1.85×102 L·mol-1·cm-1。
(3)分别称取3种不同产地的当归药材粉末100g，加入950mL 70％乙醇水溶液，20℃下浸泡12小时，40℃水浴加热提取1小时，普通定性滤纸过滤，滤渣中加入700mL 70％乙醇水溶液，40℃水浴加热提取1小时，普通定性滤纸过滤，合并两次提取滤液，50℃减压回收乙醇，得3种当归提取浓缩液。
(4)在上述每种当归提取浓缩液中分别加入20mL水，混合均匀后加入90mL石油醚-乙酸乙酯(1∶3)的混合溶液，涡旋萃取5分钟，静置分层，下层按上述方法重复萃取一次，合并两次的有机相，减压浓缩，将浓缩物在25℃下真空干燥至恒重，得当归苯酞混合物。
(5)精密称取上述当归苯酞混合物约35mg，用无水乙醇定容到10mL，精密吸取上述溶液1ml，用无水乙醇稀释到10mL。从稀释液中吸取1mL于10mL容量瓶中，加入4.0mL5％NaOH溶液，然后加入无水乙醇稀释至刻度，摇匀而作为样品，同时用无水乙醇做试剂空白进行对照。将试剂空白和样品置于60℃水浴中保温反应10min，以无水乙醇为参比，利用紫外分光光度仪在305nm处测定吸光度三次，并求出紫外吸收值的平均值。
6.采用回归方程A＝1.65C+21.5(mg/mL)计算3种当归样品中的苯酞类化合物总量，结果见表2。
表2不同当归药材中苯酞类化合物含量
    样品来源   当归苯酞含量(mg/g)
    当归药材1当归药材2当归药材3   50.1243.8546.91
实施例3：紫外定量测定方法测定藁本中苯酞类化合物总量
(1)准确称取纯度为98.10％的瑟丹酸内酯38.25mg，用无水乙醇定容至10mL。分别吸取0，250，370，500，620，750，870μL的上述溶液，并用无水乙醇稀释至10mL而得到浓度为0，93.80，138.82，187.60，232.62，281.40，326.42μg/mL的系列对照品标准溶液。
(2)精确吸取步骤(1)配制的对照品标准溶液1.0mL于10mL容量瓶中，加入4.0mL3％NaOH溶液，然后加入无水乙醇稀释至刻度，摇匀而制成试样，同时用无水乙醇做试剂空白进行对照。将试剂空白和试样置于30℃的水浴中保温反应30min，以无水乙醇为参比，利用紫外分光光度仪在305nm处测定吸光度，并以标准溶液的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。回归方程为A＝1.7C+25.1(mg/mL)，r＝0.9984(n＝6)，ε＝1.83×102L·mol-1·cm-1。
(3)分别称取3种不同的藁本药材粉末120g，加入1000mL 70％乙醇在20℃下浸泡12小时，40℃水浴加热提取1小时，普通定性滤纸过滤，滤渣中加入800mL 70％乙醇于40℃水浴加热提取1小时，普通定性滤纸过滤，合并滤液，50℃减压回收乙醇，共得3种藁本提取浓缩液。
(4)在上述藁本提取浓缩液中分别加入20mL水、75mL乙酸乙酯和15mL石油醚涡旋萃取5分钟，静置分层；下层再加入75mL乙酸乙酯和15mL石油醚涡旋萃取5分钟，静置分层，合并有机相，减压浓缩，将浓缩物在25℃下真空干燥至恒重。
(5)精密称取上述藁本苯酞混合物约40mg，用无水乙醇定容到10mL，精密吸取上述溶液1ml，用无水乙醇稀释到10mL。从稀释液中吸取1mL于10mL容量瓶中，加入4.0mL3％NaOH溶液，然后加入无水乙醇稀释至刻度，摇匀而作为样品，同时用无水乙醇做试剂空白进行对照。将试剂空白和样品置于30℃水浴中保温反应30min，以无水乙醇为参比，利用紫外分光光度仪在305nm处测定吸光度三次，并求出紫外吸收值的平均值。
(6)将扣除空白后的平均紫外吸收值代入回归方程A＝1.7C+25.1(mg/mL)计算3种藁本样品中的苯酞类化合物总量，结果见表3。
表3不同藁本药材中苯酞类化合物含量
    样品来源     川芎苯酞含量(mg/g)
    藁本药材1藁本药材2藁本药材3     28.5731.6333.55
实施例4：紫外定量测定方法测定川芎挥发油中苯酞化合物总量
(1)准确称取纯度为98.10％的瑟丹酸内酯38.25mg，用无水乙醇定容至10mL。分别吸取0，250，370，500，620，750，870μL的上述溶液，并用无水乙醇稀释至10mL而得到浓度为0，93.80，138.82，187.60，232.62，281.40，326.42μg/mL的系列对照品标准溶液。
(2)精确吸取步骤(1)配制的对照品标准溶液1.0mL于10mL容量瓶中，加入4.0mL3％NaOH溶液，加入无水乙醇稀释至刻度，摇匀；采用无水乙醇做空白对照。将空白和试样置于30℃的水浴中保温反应30min，以无水乙醇为参比，利用紫外分光光度仪在305nm处测定吸光度，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。回归方程为A＝1.7C+25.1(mg/mL)，r＝0.9984(n＝6)，ε＝1.83×102L·mol-1·cm-1。
(3)分别精密称取2种川芎挥发油约40mg，用无水乙醇定容到10mL，精密吸取上述溶液1ml，用无水乙醇稀释到10mL。从稀释液中吸取1mL于10mL容量瓶中，加入4.0mL3％NaOH溶液，然后加入无水乙醇稀释至刻度，摇匀作为样品，同时用无水乙醇做试剂空白进行对照。将试剂空白和样品置于30℃水浴中保温反应30min，以无水乙醇为参比，利用紫外分光光度仪在305nm处测定吸光度三次，并求出紫外吸收值的平均值。
(4)将2种样品扣除空白后的平均紫外吸收值代入回归方程A＝1.7C+25.1(mg/mL)计算出2种样品中的苯酞类化合物总量，结果见表4。
表4不同川芎挥发油中苯酞类化合物总量
    样品来源   总苯酞含量(g/g)
    挥发油1挥发油2   0.65180.5961
实施例5：紫外定量测定法测定川芎内酯软胶囊中苯酞类化合物总量
(1)准确称取纯度为98.10％的瑟丹酸内酯38.25mg，用无水乙醇定容至10mL。分别吸取0，250，370，500，620，750，870μL的上述溶液，并用无水乙醇稀释至10mL而得到浓度为0，93.80，138.82，187.60，232.62，281.40，326.42μg/mL的系列对照品标准溶液。
(2)精确吸取步骤(1)配制的对照品标准溶液1.0mL于10mL容量瓶中，加入4.0mL3％NaOH溶液，然后加入无水乙醇稀释至刻度，摇匀而制成试样，同时用无水乙醇做试剂空白进行对照。将试剂空白和试样置于30℃的水浴中保温反应30min，以无水乙醇为参比，利用紫外分光光度仪在305nm处测定吸光度，并以标准溶液的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。回归方程为A＝1.7C+25.1(mg/mL)，r＝0.9984(n＝6)，ε＝1.83×102L·mol-1·cm-1。
(3)取30粒川芎内酯软胶囊内容物，混合均匀，精密称重；精密称取约80mg，用无水乙醇定容到10mL，精密吸取上述溶液1ml，用无水乙醇稀释到10mL。从稀释液中吸取1mL于10mL容量瓶中，加入4.0mL3％NaOH溶液，然后加入无水乙醇稀释至刻度，摇匀作为样品，同时用不含川芎内酯的胶囊内容物为空白对照。将空白和样品置于30℃水浴中保温反应30min，以无水乙醇为参比，利用紫外分光光度仪在305nm处测定吸光度三次，并求出紫外吸收值的平均值。
(4)将样品扣除空白后的平均紫外吸收值代入回归方程A＝1.7C+25.1(mg/mL)计算出川芎内酯软胶囊样品中苯酞类化合物含量为50.06mg/粒。

Claims (10)

1、一种苯酞类化合物总量的紫外定量测定方法，其特征在于：所述的苯酞类化合物总量的紫外定量测定方法包括按顺序进行的下列步骤：
(1)准确称取一定量已知纯度的苯酞类化合物作为对照品，用1～4个碳的醇类溶剂溶解并定容而配制出一系列浓度为50～800μg/mL的对照品溶液；
(2)分别精确吸取步骤(1)配制的不同浓度的对照品溶液，加入4倍量1～5％浓度的强碱溶液，然后用1～4个碳的醇类溶剂稀释至所取对照品溶液体积的10倍，摇匀而作为试样，同时用上述1～4个碳的醇类溶剂做空白，将空白和试样置于10～60℃的水浴中保温反应10～60分钟，以空白为参比，利用紫外分光光度仪在290～340nm波长处测定吸光度，并以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线；
(3)将利用各种提取分离方法获得的苯酞类化合物用1～4个碳的醇类溶剂配成浓度在50～800μg/mL范围内的溶液作为样品，然后按照步骤(2)的方法测定吸光度；
(4)将步骤(3)所得样品吸光度用步骤(2)所得的标准曲线计算出样品中苯酞类化合物的总量。
2、根据权利要求1所述的苯酞类化合物总量的紫外定量测定方法，其特征在于：所述的已知纯度的苯酞类化合物选自瑟丹酸内酯、藁本内酯、正丁基苯酞、洋川芎内酯H、洋川芎内酯I、丁烯基苯酞或芹菜乙素。
3、根据权利要求1所述的苯酞类化合物总量的紫外定量测定方法，其特征在于：所述的强碱为NaOH、KOH。
4、根据权利要求1所述的苯酞类化合物总量的紫外定量测定方法，其特征在于；所述的强碱溶液浓度为2.5％～3.5％。
5、根据权利要求1所述的苯酞类化合物总量的紫外定量测定方法，其特征在于：所述的反应温度为20～60℃。
6、根据权利要求1所述的苯酞类化合物总量的紫外定量测定方法，其特征在于：所述的反应温度为25～35℃。
7、根据权利要求1所述的苯酞类化合物总量的紫外定量测定方法，其特征在于：所述的1～4个碳的醇类溶剂为无水甲醇或无水乙醇。
8、根据权利要求1所述的苯酞类化合物总量的紫外定量测定方法，其特征在于：所述的波长范围为300～310nm。
9、根据权利要求1所述的苯酞类化合物总量的紫外定量测定方法，其特征在于：所述的波长为305nm。
10、一种如权利要求1所述的苯酞类化合物总量的紫外定量测定方法在含苯酞类化合物的植物、医药产品、保健品、食品和化妆品的含量测定及质量控制中的应用。
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