CN1993141A - 诱导针对肺炎链球菌多糖的免疫应答 - Google Patents
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Abstract
本发明提供pan DR结合肽与肺炎链球菌多糖的缀合物，和使用这样的缀合物预防和治疗与肺炎链球菌相关的疾病的方法。
Description
发明背景
通常已知针对具体的疫苗抗原引起的免疫应答的性质对于所述疫苗的总体效力是重要的。在碳水化合物抗原的情形中，研究了许多种方法，试图增强它们的免疫原性，所述方法包括化学修饰(Jennings，等.在TowardsBetter Carbohydrate Vaccines中，Bell和Torrigiani(eds)第11-17页，J.Wiley& Sons，London，1987)，与佐剂一起施用，与蛋白非共价复合，共价附着到免疫原性蛋白载体上(Schneerson，等.在Towards Better CarbohydrateVaccines中，如前所述，第307-327页)，和用蛋白复制品代替碳水化合物表位，所述蛋白复制品为重新合成的肽(所谓的模拟表位(mimitopes)，Geyson，等.在Towards Better Carbohydrate Vaccines中，如前所述，第103-118页)或抗独特型(antiidiotypic)抗体(Soederstroem在Towards BetterCarbohydrate Vaccines中，如前所述，第119-138页)。
将碳水化合物抗原共价附着到免疫原性T依赖的蛋白载体上是已知的(参见，例如，Schneerson，等.，152：361-376(1980)；Lepow，等.，J.Pediatr.106：185-189(1985)；Chu，等.，Infect.Immun.，50：245-256(1983)；Marborg等.，Am.Chem.Soc.108：5282-5287(1985)；Anderson等.，Infect.Immun.，39：233-238(1983)；Bartoloni，等.，Vaccine 13：463-470(1995)；和Wessels，等.，J Infect.Dis.171：879-884(1995))。
免疫原肽，其含有被T辅助细胞识别的表位，已经发现其有效地用于诱导免疫应答。例如，在Hervas-Stubbs，等.，Vaccine 12：867-871(1994)中描述了应用辅助肽来增强针对具体的决定簇的抗体应答。
尽管填充MHC等位基因的肽结合口袋的等位基因特异的多态性残基倾向于赋予每种等位基因结合独特系列的肽的能力，但是在许多情况下给定的肽表现出结合多于一种MHC等位基因。这在人DR同种型的情形中得到最好的证明，在所述人DR同种型的情形中，已经注意到一些DR等位基因似乎识别相似的基序，并且独立地，一些研究者报道在多种DR型的情况下简并结合和/或识别某些表位，这形成这样的观念，即，某些肽可能代表“通用的”表位(Busch，等.，Int.Immunol.2：443-451(1990)；Panina-Bordignon，等.，Eur.J Immunol.19：2237-2242(1989)；Sinigaglia，等.，Nature 336：778-780(1988)；O′Sullivan，等.，J.Immunol.147：2663-2669(1991)；Roache，等.，J Immunol.144：1849-1856(1991)；Hill，等.，J Immunol.147：189-197(1991))。尽管先前报道的肽的确具有结合几种DR等位基因的能力，但是它们决不是通用的。
例如，在WO 95/07707，Alexander，等.，Immunity 1：751-761(1994)和美国专利号6,413,935中描述了Pan-DR结合肽。已经表明这些肽在产生针对需要的抗原的CTL应答中起辅助作用。
通过它们的多糖被膜而免疫辨别的多于90种的肺炎链球菌血清型，可以潜在地引起疾病。(Pneumococcal disease.In：Epidemiology andprevention of vaccine-preventable diseases.第六版.Waldorf(MD)：PublicHealth Foundation；2000.第249-63页；Kalin M.，Thorax 53(3)：159-162(1998)；Hedlund J，等.Clin Infect Dis.21(4)：948-53(1995))。尽管抗生素已经成功地用于治疗肺炎链球菌感染，但是增加的抗生素抗性使得疾病的治疗变得复杂(Linares J等.，1992，Clin Infect Dis 15：99-105；Koornhof HF等.，1992，Clin Infect Dis 15：84-94；Zhanel GG等.，1999，Antimicrob AgentsChemother 43：2504-9)。
存在至少40种血清组，一些血清组包括免疫学上交叉反应性的多种血清型。现有的肺炎链球菌疫苗制剂是含有来自更常见的血清型的被膜多糖的混合物的组合疫苗，并且有效地抵抗较大年龄的儿童和成人中的侵入性疾病(Fedson DS，Musher DM，Eskola J Pneumococcal vaccine.In：PlotkinSA，Orenstein WA.Ed.VACCINES.第三版Philadelphia：WB Saunders，1998：553-607)。全世界许多制造者已经使得这种23价的肺炎链球菌多糖疫苗是可用的，并且在2岁或更年长的个体中有效：然而，由于它们激发不依赖T细胞的应答，所以这些疫苗在小于2岁的儿童中是无效的(EskolaJ，Anttila M.1999，18：543-51)。
目前，唯一可用的缀合物肺炎链球菌疫苗是一种7价的制剂，其针对
目前，唯一可用的缀合物肺炎链球菌疫苗是一种7价的制剂，其针对无毒的白喉变种(CRM197)，来自Wyeth的PREVNAR。
发明简述
本发明提供包括来自不同的肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)血清型至少2种肺炎链球菌被膜多糖的组合物，其中来自每种血清型的所述被膜多糖缀合到独立的多肽上，所述多肽包括pan DR结合肽序列。在一些实施方案中，所述pan DR结合肽序列独立地选自式R1-R2-R3-R4-R5，其中：
R1是两个氨基酸，其中在后的氨基酸为丙氨酸或赖氨酸；
R2是选自由酪氨酸、苯丙氨酸或环己环己丙氨酸(cyclohexylalanine)组成的组；
R3是3或4个氨基酸，其中每个氨基酸独立地选自由丙氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、谷氨酸和缬氨酸组成的组；
R4是选自由苏氨酸-亮氨酸-赖氨酸、赖氨酸-苏氨酸、或色氨酸-苏氨酸-亮氨酸-赖氨酸组成的组；和，
R5由由2-4个氨基酸组成的前面部分和由单独氨基酸组成的后面部分组成，其中2-4个氨基酸中的每个独立地选自由丙氨酸、丝氨酸和缬氨酸组成的组。
本发明还提供在哺乳动物中诱导免疫应答的方法。在一些实施方案中，所述方法包括给所述哺乳动物施用来自不同的肺炎链球菌血清型的至少2种肺炎链球菌被膜多糖的混合物，其中来自每种血清型的所述被膜多糖缀合到独立的pan DR结合肽序列上，所述pan DR结合肽序列选自式R1-R2-R3-R4-R5，其中：
R1是两个氨基酸，其中在后的氨基酸为丙氨酸或赖氨酸；
R2是选自由酪氨酸、苯丙氨酸或环己丙氨酸组成的组；
R3是3或4个氨基酸，其中每个氨基酸独立地选自由丙氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、谷氨酸和缬氨酸组成的组；
R4是选自由苏氨酸-亮氨酸-赖氨酸、赖氨酸-苏氨酸、或色氨酸-苏氨酸-亮氨酸-赖氨酸组成的组；和，
R5由由2-4个氨基酸组成的前面部分和由单独氨基酸组成的后面部分组成，其中2-4个氨基酸中的每个独立地选自由丙氨酸、丝氨酸和缬氨酸组成的组。
本发明还提供制备肺炎链球菌疫苗的方法。在一些实施方案中，所述方法包括将来自不同的肺炎链球菌血清型的至少2种肺炎链球菌被膜多糖缀合到2种独立的多肽上，每种多肽包括pan DR结合肽序列，其中所述pan DR结合肽序列选自式R1-R2-R3-R4-R5，其中：
R1是两个氨基酸，其中在后的氨基酸为丙氨酸或赖氨酸；
R2是选自由酪氨酸、苯丙氨酸或环己丙氨酸组成的组；
R3是3或4个氨基酸，其中每个氨基酸独立地选自由丙氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、谷氨酸和缬氨酸组成的组；
R4是选自由苏氨酸-亮氨酸-赖氨酸、赖氨酸-苏氨酸、或色氨酸-苏氨酸-亮氨酸-赖氨酸组成的组；和，
R5由由2-4个氨基酸组成的前面部分和由单独氨基酸组成的后面部分组成，其中2-4个氨基酸中的每个独立地选自由丙氨酸、丝氨酸和缬氨酸组成的组。
在一些实施方案中，所述组合物包括来自下述血清型的至少任意5种的被膜多糖：1，2，3，4，5，6B，7F，8，9N，9V，10A，11A，12F，14，15B，17F，18C，19A，19F，20，22F，23F，33F，6A，7A，7B，7C，9A，9L，12A，13，15A，15C，16F，18A，18B，18F，19B，19C，21，22A，23A，23B，24F，25，27，29，31，34，35，38，45，或46，其中每种多糖缀合到包括pan DR结合肽序列的独立的多肽上。在一些实施方案中，所述组合物包括来自血清型4，6B，9V，14，18C，19F，和23F的被膜多糖，其中每种多糖缀合到包括pan DR结合肽序列的独立的多肽上。在一些实施方案中，所述组合物包括来自血清型1，4，5，6B，9V，14，18C，19F，和23F的被膜多糖，其中每种多糖缀合到包括pan DR结合肽序列的独立的多肽上。在一些实施方案中，所述组合物包括来自血清型1，3，4，5，6B，7F，9V，14，18C，19F，和23F的被膜多糖，其中每种多糖缀合到包括pan DR结合肽序列的独立的多肽上。在一些实施方案中，所述组合物包括来自血清型1，2，3，4，5，6B，7F，8，9N，9V，10A，11A，12F，14，15B，17F，18C，19A，19F，20，22F，23F和33F的被膜多糖，其中每种多糖缀合到
在一些实施方案中，所述被膜多糖从每种血清型的细菌纯化并且缀合到所述多肽上。在一些实施方案中，来自每种血清型的被膜多糖独立地缀合到包括pan DR肽的多肽上，并且随后将所获得的缀合物组合，以形成缀合物的混合物。在一些实施方案中，将来自每种血清型的被膜多糖组合，以形成多糖的混合物，并且随后将所述混合物缀合到包括pan DR结合肽的多肽上。
在一些实施方案中，包括pan DR结合肽的多肽由50个或更少的氨基酸组成。在一些实施方案中，包括pan DR结合肽的多肽由25个或更少的氨基酸组成。在一些实施方案中，包括pan DR结合肽的多肽由15个或更少的氨基酸组成。
在一些实施方案中，包括pan DR结合肽的多肽包括氨基酸序列AKXVAAWTLKAAA(SEQ ID NO：5)，aKXVAAWTLKAAa，AKFVAAWTLKAAA(SEQ ID NO：6)，或aKFVAAWTLKAAa，其中X是环己丙氨酸。在一些实施方案中，包括pan DR结合肽的多肽由下列氨基酸序列组成：AKXVAAWTLKAAA(SEQ ID NO：5)，aKXVAAWTLKAAa，AKFVAAWTLKAAA(SEQ ID NO：6)，或aKFVAAWTLKAAa，其中X是环己丙氨酸。
在一些实施方案中，所述多糖和所述多肽通过连系物而连接在一起。
定义
“寡肽”或“肽”当用于本文时是指至少4个氨基酸或氨基酸模拟物的链，例如，至少6个，例如，8-10个，例如，11-14个残基，例如，少于约50个残基，例如，少于约25个残基，例如，少于15个，例如8-14个残基。所述寡肽或肽可以是各种长度，以其中性(不带电)形式或以盐的形式，并且没有修饰，诸如糖基化、侧链氧化、或磷酸化，或者包含这些修饰，但是满足这样的条件，即，所述修饰不应该破坏本文所述的多肽的生物活性。
当指肽、寡肽或蛋白中的氨基酸残基时，术语“氨基酸残基”，“氨基酸”和“残基”可互换地应用，当用于本文时，意指通过酰胺键或模拟酰胺键与至少1种其它氨基酸或氨基酸模拟物共价连接的氨基酸或氨基酸模拟物。
当用于本文时，术语“氨基酸”，当未限定时，是指“L-氨基酸”或L-氨基酸模拟物。
尽管所述肽可以基本上没有其它天然存在的蛋白和其片段，在一些实施方案中，所述肽可以被合成地缀合到其它肽或多肽上，例如，化学缀合或重组融合。
当用于本文时，术语“生物活性”意指结合适当的MHC分子的能力，并且，在用于刺激免疫应答的肽的情形中，诱导T辅助细胞应答的能力，所述T辅助细胞应答又帮助诱导针对目标免疫原或免疫原模拟物的免疫应答。在用于刺激抗体应答的肽的情形中，所述肽将诱导T辅助细胞应答，所述T辅助细胞应答又帮助诱导针对目标免疫原的体液应答。
本发明的“pan DR-结合肽”(也称为“PADRE肽”)是能够结合12种最常见的DR等位基因(DR1，2w2b，2w2a，3，4w4，4w14，5，7，52a，52b，52c，和53)中的至少约7种的肽。
术语“免疫原”和“抗原”可互换地应用，并且意指细胞或体液免疫应答所针对的任何化合物。
当用于本文时，术语“抗原决定簇”是可以激发、促进、或被诱导产生免疫应答的任何结构，例如碳水化合物表位、脂质、蛋白、肽、或其组合。
本发明的“CTL表位”是衍生于潜在的目标抗原，诸如衍生于链球菌的蛋白抗原，的所选的表位区域的一种表位。
本发明的“体液应答”是针对抗原决定簇的各种区域的抗体介导的免疫应答。有经验的人应该认识到，体液应答还可以被诱导指向pan DR结合肽，其中所述pan DR结合肽也将被包括在所述决定簇中。因此，所激发的免疫应答可以针对抗体诱导决定簇和所述pan DR结合肽。
当用于本文时，“碳水化合物表位”是指碳水化合物结构，表现为糖缀合物，例如，糖蛋白、糖肽、糖脂等，或多糖，寡糖，或单糖，针对其的免疫应答是需要的。所述碳水化合物表位可以诱导宽范围的免疫应答。有经验的人应该意识到，本文示例的各种碳水化合物结构可以按照标准方法进行不同的修饰，而没有不利地影响抗原性。例如，糖类的单糖单位可以用小的有机分子不同地取代或甚至是置换，所述小的有机分子作为单糖的模拟物。
当用于本文时，“血清型”是指本领域通常所知的作为血清型或血清组的那些。本文所描述的血清型是指它们的Danish名称。很好地确定了与Danish名称相对应的肺炎球菌类型。例如，下述表格提供了部分转换列表。
| 肺炎球菌类型 | Danish名称 |
| 1 | 1 |
| 2 | 2 |
| 3 | 3 |
| 4 | 4 |
| 5 | 5 |
| 8 | 8 |
| 9 | 9N |
| 12 | 12F |
| 14 | 14 |
| 17 | 17F |
| 19 | 19F |
| 20 | 20 |
| 22 | 22F |
| 23 | 23F |
| 25 | 25 |
| 26 | 6B |
| 34 | 10A |
| 43 | 11A |
| 51 | 7F |
| 54 | 15B |
| 56 | 18C |
| 57 | 19A |
| 68 | 9V |
| 70 | 33F |
短语“分离的”或“生物纯的”是指基本上或本质上没有通常如在其天然状态中发现的那样与其相伴随的成分。因此，本发明的肽不含通常与其原位环境相关的物质，例如，抗原呈递细胞的MHC I类分子。即使蛋白在电泳凝胶上被分离成均一的或占优势的条带，仍存在天然蛋白的5-10％范围的痕量污染物，其同需要的蛋白一起纯化出来。本发明分离的肽不含这样的内源共纯化蛋白。类似地，分离的多糖不包括多于痕量的蛋白或来自它们所来源的细菌的其它细胞成分。
当用于本文时，“连系物”是用于在2个官能团(例如，pan DR结合肽和需要的免疫原)之间提供共价连接和间隔的任何化合物。典型地，所述连系物包括中性分子，诸如脂肪族碳链、氨基酸或氨基酸模拟物，它们在生理条件下基本上不带电，并且可以具有线性或有分支的侧链。在一些情形中，所述连系物可以本身是免疫原性的，尽管不是治疗性针对的。用于本发明的各种连系物在下文中更详细地描述。另外，动词“连接”和“缀合”在本文可以互换的应用，并且是指2种或多种种类的共价附着。
当用于本文时，“T辅助肽”是指由T辅助细胞的T细胞受体识别的肽。本发明的pan DR结合肽是T辅助肽。
“来自肺炎链球菌血清型的被膜多糖”是指从所述血清型的肺炎链球菌细菌纯化的多糖(或至少其表位)或合成制备的多糖，所述合成的多糖具有同所述血清型的天然多糖相同的结构(或至少其表位)。
“将来自2种血清型的被膜多糖缀合到独立的肽上”是指这样的过程，即，所述过程导致来自第一种血清型的被膜多糖同第一种肽的缀合和来自第二种血清型被膜多糖同第二种肽的缀合。第一种和第二种肽可以具有相同的氨基酸序列，或可以具有不同的序列。
发明详述
本发明的组合物通常包括2种成分，即，pan DR结合肽和一种或多种细菌被膜多糖。一般地，将所述pan DR结合肽，或包括所述肽序列的多肽，缀合到例如来自肺炎链球菌(S.pneumoniae)血清型的细菌被膜多糖上。本发明还提供包括这样的缀合物的混合物的组合物，以致将来自至少2种血清型的多糖组合在所述组合物中(例如，缀合到一条pan DR结合肽的来自一种血清型的被膜多糖与缀合到第二条(相同的或不同的)panDR结合肽的来自第二种血清型的被膜多糖相混合)。本发明有效用于激发免疫应答，典型地，体液应答，其针对碳水化合物免疫原的抗原决定簇，并且特别地是肺炎链球菌的被膜多糖。
用来描述肽化合物的命名法遵循常规的惯例，其中所述氨基存在于每个氨基酸残基的左侧(N端)和羧基存在于右侧(C端)。在氨基酸结构式中，每个残基一般由标准的3个字母或单个字母命名而代表。氨基酸残基的L形式由大写的单个字母或三字母符号中大写第一个字母而代表，并且那些具有D形式的氨基酸的D形式由小写的单个字母或小写三字母符号而代表。甘氨酸没有不对称的碳原子，并且简单地写作″Gly″或G。
用来描述碳水化合物的命名法包括下述缩写：Ara＝阿拉伯糖基；Fru＝果糖基；Fuc＝岩藻糖基；Gal＝半乳糖基；GalNAc＝N-乙酰半乳糖基(N-acetylgalacto)；Glc＝葡糖基；GlcNAc＝N-乙酰葡糖基(N-acetylgluco)；Man＝甘露糖基；和NeuAc＝唾液酸(N-乙酰神经氨糖基)。
无论在还原端的糖类事实上是否为还原糖，认为碳水化合物具有还原端和非还原端。
本文所有的碳水化合物这样进行描述，即，用于非还原糖类的相同的名称或缩写(例如，Gal)，接着是糖苷键的构型(α或β)，环键，参与该键的还原糖类的环的位置，然后是还原糖类的的名称或缩写(例如，GIcNAc)。例如，2个糖之间的连接键可以表示为2，3，2→3，或(2，3)。每种糖是吡喃糖。
1.Pan DR-结合肽
本发明提供有效用于鉴定对于初始肽的修饰的方法，所述修饰扩大了初始肽的特异性。例如，国际申请公布号WO 92/02543描述了适用于鉴别能够结合DR分子的肽的方法。WO 92/02543描述了来自流感病毒的血凝素(″HA″)的应用，用作与HLA-DR特异性反应的肽的来源。筛选所述蛋白片段的反应性，以提供结合适当的DR分子的序列，适当的DR分子诸如DR1，DR4w4或DR4w14。
一旦鉴定了与所选择的MHC分子结合的免疫原或其肽，可以通过合成重叠的肽，和/或应用N端或C端删除(剪截)或加成而确定所述抗原或肽的“核心结合区域”。在确定核心结合区域和关键的接触残基时，具有单一的氨基酸取代的一系列肽可以用来确定静电荷、疏水性等对结合的作用。
在核心区域内，“关键的接触位点”，即，必须存在于肽中，以便保留结合MHC分子并且抑制向T细胞呈递的能力的那些残基(或它们的功能等价物)，可以通过单一氨基酸取代、删除、或插入而确定。另外，人们还可以用特异的氨基酸(例如，Ala)进行系统的扫描，以探测由关键的接触残基的侧链所做出的贡献。
除了在基本的MHC和TCR接触位点，本发明的肽对于使用中性氨基酸的单一氨基酸取代相对不敏感，并且已经发现本发明的肽耐受多种取代。示例性的多种取代是小的、相对中性的部分，诸如Ala，Gly，Pro，或类似的残基。取代或添加的残基的数目和类型取决于在基本接触点之间必需的间隔和所探寻的某些功能性质(例如，疏水性对亲水性)。与母本肽的亲和力相比较，对于MHC分子增加的结合亲和力还可以通过这样的取代而获得。无论如何，这样的“间隔”取代应该应用这样的氨基酸残基或其它分子片段，即，它们被选择来避免，例如，可能破坏结合的空间的和电荷的干扰。
单一氨基酸取代的作用还可以应用D-氨基酸进行探测。这样的取代可以应用公知的肽合成方法而进行，例如，所述合成方法如在Merrifield，Science 232：341-347(1986)，Barany和Merrifield，THE PEPTIDES，Gross和Meienhofer，eds.(N.Y.，Academic Press)，第1-284页(1979)；和Stewart和Young，SOLID PHASE PEPTIDE SYNTHESIS，(Rockford，III.，Pierce)，第二版.(1984)中描述。
本发明应用的所述肽不必要与本文所公开的肽相同，只要所述化合物能够结合适当的MHC分子或提供针对目标免疫原的体液或细胞毒性T淋巴细胞活性。因此，有经验的人应该意识到，可以进行许多保守取代，而基本上不影响所述肽的活性。保守取代，其中一个氨基酸残基被另一个生物和/或化学相似的氨基酸残基置换，例如，一个疏水性的置换另一个疏水性的，或一个极性的置换另一个极性的。所述取代包括组合，诸如Gly，Ala；Val，Ile，Leu，Met；Asp，Glu；Asn，Gln；Ser，Thr；Lys，Arg；和Phe，Tyr。
另外，所述肽或寡肽序列可以不同于天然序列，其通过应用末端-NH2酰化，例如，通过烷酰基(C1-C20)或巯基乙醇酰基乙酰化作用，末端羧基酰胺化作用，例如，氨，甲胺，等，而进行修饰。在一些实例中，这些修饰可以提供连接支持物或其它分子的位点。
可以应用另一种方法，其中将含有对于结合MHC关键的侧链的锚定残基插入到13个残基的聚丙氨酸肽。Jardetzky，等.，Nature 353：326-329(1990)已经应用了这种方法。他们证明用单个主要的MHC接触残基(Tyr)修饰的聚丙氨酸肽赋予所述肽对DR1的高亲和力结合能力。除了应用酪氨酸作为主要的MHC接触残基，还可以应用环己丙氨酸或苯丙氨酸。关于肽结合那些DR等位基因的能力，所述DR等位基因能够高亲和性结合HA肽，这些残基可以与Tyr互换，并且此外还允许与在DRβ链第86位残基含有G→V取代的MHC分子结合。这种变化影响II类MHC中B结合口袋的结合特异性，以致酪氨酸不再能够有效地结合，而环己丙氨酸，以及苯丙氨酸，可以结合。
上文所鉴定的肽的生物活性可以在各种系统中进行检测。例如，可以应用应答用所述肽免疫的CD4+细胞活性，例如，如在实施例中所描述的那样。备选地，检测抑制抗原特异性T细胞活化的能力。在一个示例性的流程中，将过量的肽与下列各项一起温育：已知表达MHC(例如，DR1)的抗原呈递细胞，和抑制抗原特异性(例如，破伤风毒素830-843)与MHC限制性(又是DR1)的T细胞集落，以及免疫原性肽本身(即，破伤风毒素830-843)。将检测的培养物温育足够的时间使得T细胞增殖，诸如4天，然后应用标准的方法测定增殖，诸如在温育的最后18小时期间使用[3H]-胸腺嘧啶核苷脉冲。然后计算与没有接受肽的对照相比较的抑制百分数。
体外检测中肽抑制抗原呈递的能力与所述肽在体内抑制免疫应答的能力相关。体内活性可以在动物模型中确定，例如，通过施用已知受限于由所述肽识别的具体的MHC分子的免疫原，和免疫调节性肽。随后，用剂量范围的免疫原将T淋巴细胞从所述动物和培养物中去除。刺激的抑制通过常规方法测定，例如，使用[3H]-胸腺嘧啶核苷脉冲，和与适当的对照相比较。同样参见，Adorini，等.，Nature 334：623-625(1988)，其通过参考并入本文。
大量的具有确定的MHC分子，特别是MHC II类分子的细胞是已知的，并且易于获得，例如，从美国典型培养物收藏中心(ATCC)(″细胞系和杂交瘤目录″，第六版，(1988))Rockville，Maryland，U.S.A。
本发明肽的一个示例性实施方案包括对N和C端残基的修饰。技术人员将容易理解，可以修饰N和C端以改变所述肽的物理或化学特性，诸如，例如，以影响结合、稳定性、生物利用度、连接的容易度、等。
例如，在N或C端，用各种氨基酸模拟物或D-氨基酸修饰肽，例如，有效地增加所述肽在体内的稳定性。这样的肽可以以“反转(inverso)”或“逆反转(retroinverso)”形式合成，即，通过用D-氨基酸置换L-氨基酸，或通过颠倒氨基酸的序列并且用D-氨基酸置换L-氨基酸。由于D肽可以更抗肽酶，并且因此与它们的L肽副本相比，在血清和组织中可以更稳定，因此，与相应的L肽相比，D肽在生理条件下的稳定性可以更多地补偿亲和性的差别。此外，有或没有取代的含有L-氨基酸的肽可以用D-氨基酸加帽，以抑制免疫原肽的外肽酶破坏。
稳定性可以在许多方法中检测。例如，应用肽酶和各种生物介质，诸如人血浆和血清，来检测稳定性。参见，例如，Verhoef，等.，Eur.J DrugMetab.Pharmacokin.11：291-302(1986)；Walter，等.，Proc.Soc.Exp.Biol.Med.148：98-103(1975)；Witter，等.，Neuroendocrinology 30：377-381(1980)；Verhoef，等.，J Endocrinology 110：557-562(1986)；Handa，等.，Eur.J.Pharmacol.70：531-540(1981)；Bizzozero，等.，Eur.J. Biochem.122：251-258(1982)；Chang，Eur.J Biochem.151：217-224(1985)。
还可以通过在肽的C和N端引入D-氨基酸而增加稳定性。先前的研究表明，当在含有血清的介质中温育时，通过在C和N端引入D-氨基酸而赋予所述肽对外肽酶活性的抗性，可以极大地延长含有L-氨基酸的肽在体内和体外的半衰期。
本发明的肽或类似物可以通过改变某些残基的顺序或组成而进行修饰，易于理解，对于生物活性重要的氨基酸残基，例如，在关键接触位点的那些，一般不可以被改变，从而对生物活性没有不利的影响。非关键性的氨基酸不必被限制为在蛋白中天然存在的那些，诸如Lα-氨基酸，或它们的D-异构体，但是还可以包括非蛋白氨基酸，诸如β-γ-δ氨基酸，以及许多L-α-氨基酸的衍生物。如所讨论的，本发明的肽通常可以包括L-氨基酸或D-氨基酸，但不是在核心结合区内的D-氨基酸。在本文所描述的任何序列中，肽的末端可以是D或L形式。
本发明的肽可以以广泛种类的方法进行制备。由于它们相对短的大小，所述肽可以按照常规技术在溶液中或在固体支持物上合成。许多自动化的合成仪可以商购获得，并且可以按照已知的流程应用。参见，例如，Stewart和Young，Solid Phase Peptide Synthesis，第二版，Pierce ChemicalCo.(1984)，如前所述。
备选地，可以应用重组DNA技术，其中将编码目的免疫原肽的核苷酸序列插入到表达载体中，转化或转染到适当的宿主细胞中，并且在适于表达的条件下培养。这些方法在本领域内通常是已知的，如一般在Sambrook，等.，Molecular Cloning，A Laboratory Manual，Cold Spring HarborPress，Cold Spring Harbor，New York(1989)中所描述的那样。因此，包括本发明的一种或多种肽序列的融合蛋白可以用来呈递适当的T细胞表位。本领域内公知，尽管包括一种或多种D-氨基酸残基的肽不能由重组DNA技术产生，但是其典型可接受的取代物可以通过结合编码与初始肽中的每个D-氨基酸残基相对应的L-氨基酸残基的DNA序列而产生。
由于本文预期长度的肽的编码序列可以通过化学技术而合成，例如，Matteucci，等.，J Am.Chem.Soc.103：3185(1981)的磷酸三酯方法，修饰可以简单地通过用适当的碱基取代编码天然肽序列的那些碱基而进行。然后，可以将编码适当的连系物的核酸序列添加到肽编码序列上，并且连接到本领域通常可获得的表达载体上，并且将所述载体用于转化适当的宿主以产生需要的融合蛋白。现在许多这样的载体和适当的宿主系统是可用的。对于融合蛋白的表达，所述编码序列可以具有可操作性连接的起始和终止密码子、启动子和终止子区域和使得表达载体在需要的细胞宿主中表达的常见的复制系统。例如，在质粒中提供与细菌宿主兼容的启动子序列，其含有便利的限制性位点用于插入所需要的编码序列。将所获得的表达载体转化到适当的细菌宿主中。当然，也可以应用酵母菌或哺乳动物细胞，应用适当的载体和控制序列。
本发明的示例性pan-DR肽包括，例如，少于50个氨基酸残基的寡肽，和抗原决定簇，其中所述寡肽和抗原决定簇任选地彼此共价附着。所述抗原决定簇可以来自细菌、病毒、癌细胞、真菌、或寄生虫。当所述pan DR结合寡肽和抗原决定簇彼此共价附着时，它们将直接连接或通过连接基团附着。
在一组实施方案中，所述pan DR结合肽选自由下列各项组成的组：
aAXAAAKTAAAAa， aAXAAAATLKAAa， aAXVAAATLKAAa，
aAXIAAATLKAAa， aKXVAAWTLKAAa， aKFVAAWTLKAAa，
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本发明提供用于激发针对免疫原性碳水化合物的免疫应答的组合物，所述组合物包括少于约50个氨基酸残基的pan DR结合寡肽和至少一种碳水化合物表位。在一些实施方案中，所述pan DR结合肽具有式R1-R2-R3-R4-R5，从N端到C端，其中R1由至少2个残基组成；R2选自由环己丙氨酸残基、酪氨酸残基、苯丙氨酸残基和对此的保守性取代组成的组；R3是3-5个氨基酸残基；R4选自由苏氨酸-亮氨酸-赖氨酸、赖氨酸-苏氨酸、和色氨酸-苏氨酸-亮氨酸-赖氨酸、以及对此的保守性取代组成的组；和R5由至少2个残基组成。在某些实施方案中，式R1-R2-R3-R4-R5代表的肽的每种氨基酸残基成分可以是D-氨基酸残基或L-氨基酸残基。
本发明的pan DR结合肽，除了促进针对第二决定簇的免疫应答，本身还可以作为目标免疫原。因此，例如，在包括pan DR结合肽序列的多糖与碳水化合物表位连接的情形中，免疫应答可以是针对pan DR结合肽和所述碳水化合物表位的，并且任选地针对所述多肽内的其它肽序列。
2.本发明的多糖
肺炎链球菌被膜多糖可以按照本发明的方法进行应用。目前已知多于90种血清型的肺炎链球菌。参见，例如，Pneumococcal disease.In：Epidemiology and prevention of vaccine-preventable diseases.第六版.Waldorf(MD)：Public Health Foundation；2000.第249-63页；Kalin M.，Thorax 53(3)：159-162(1998)；Hedlund J，等.Clin Infect Dis.21(4)：948-53(1995)。示例性的链球菌被膜多糖抗原包括，但不限于来自肺炎链球菌血清型1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36，37，38，39，40，41，42，43，44，45，46，47，48，49，50，51，52，53，54，55，56，57，58，59，60，61，62，63，64，65，66，67，68，69，70，71，72，73，74，75，76，77，78，79，80，81，82，83，84，85，86，87，88，89，90，91，92，93，94，或95的那些。
在一些实施方案中，本发明的组合物包括来自2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30或多种上文所列出的血清型的被膜多糖的混合物。在一些实施方案中，本发明的组合物包括本发明独立的pan DR肽与来自下列各项的被膜多糖的缀合物的混合物：2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30或更多下述血清型：1，2，3，4，5，6B，7F，8，9N，9V，10A，11A，12F，14，15B，17F，18C，19A，19F，20，22F，23F，33F，6A，7A，7B，7C，9A，9L，12A，13，15A，15C，16F，18A，18B，18F，19B，19C，21，22A，23A，23B，24F，25，27，29，31，34，35，38，45，或46。
包括不同的血清型的多糖的缀合物的混合物可以包括，下述血清型的一些或全部的组合：1，2，3，4，5，6B，7F，8，9N，9V，10A，11A，12F，14，15B，17F，18C，19A，19F，20，22F，23F，和33F。在一些实施方案中，链球菌被膜多糖抗原的组合包括来自肺炎链球菌血清型4，6B，9V，14，18C，19F，和23F的那些。在一些实施方案中，链球菌被膜多糖抗原的组合包括来自肺炎链球菌血清型1，4，5，6B，9V，14，18C，19F，和23F的那些。在一些实施方案中，链球菌被膜多糖抗原的组合包括来自肺炎链球菌血清型1，3，4，5，6B，7F，9V，14，18C，19F，和23F的那些。
在某些实施方案中，本发明的肺炎链球菌多糖/Pan DR结合肽缀合物由下述组成，或备选地包括，肺炎链球菌多糖，其选自肺炎链球菌血清型和/或血清组的下述列表：1，2，3，4，5，6，6A，6B，7，8，9，9V，10，11，12，14，15，15A，16，17，18，19，19A，19F，20，21，22，23，23F，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，35B，36，37，38，39，40，41，42，43，44，45，46，47，48，49，50，51，52，53，54，55，56，57，58，59，61，62，63，64，65，66，67，68，69，70，71，72，和73，应用本领域公知的和/或本文所描述的连接化学，将所述肺炎链球菌多糖缀合到Pan DR结合肽上，所述Pan DR结合肽选自下述列表(其中X＝环己丙氨酸)：aAXAAAKTAAAAa，
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AKFVAANTLKAAA(SEQ ID NO：138)，AKFVAANTLKAAA(SEQ ID NO：139)，
AKFVAAYTLKAAA(SEQ ID NO：140)，AKFVAAYTLKAAA(SEQ ID NO：141)，
AKFVAAWTLKAAA(SEQ ID NO：142)，AKFVAAKTLKAAA(SEQ ID NO：143)，
AKFVAAHTLKAAA(SEQ ID NO：144)，AKFVAAATLKAAA(SEQ ID NO：145)，和KSSAKFVMAATLKAAA(SEQ ID NO：146)。
因此，本发明的肺炎链球菌多糖/Pan DR结合肽缀合物的非限制性实例由下列各项组成，或任选地包括：6B-AKFVAAWTLKAAA(SEQ ID NO：6)(其中“6B”代表肺炎链球菌血清型6B，并且“AKFVAAWTLKAAA(SEQID NO：6)”代表包括氨基酸序列AKFVAAWTLKAAA(SEQ ID NO：6)的Pan DR结合肽)；6B-aKFVAAWTLKAAa；4-AKFVMAAWTLKAAA(SEQ IDNO：6)；4-aKFVAAWTLKAAa；9V-AKFVAAWTLKAAA(SEQ ID NO：6)；9V-aKFVAAWTLKAAa；14-AKFVAAWTLKAAA(SEQ ID NO：6)；14-aKFVAAWTLKAAa；
18C-AKFVAAWTLKAAA(SEQ ID NO：6)；18C-aKFVAAWTLKAAa；19F-AKFVAAWTLKAAA(SEQ ID NO：6)；19F-aKFVAAWTLKAAa；23F-AKFVAAWTLKAAA(SEQ ID NO：6)；23F-aKFVAAWTLKAAa；
6B-aKXVAAWTLKAAa；4-AKXVAAWTLKAAA(SEQ ID NO：5)；4-aKXVAAWTLKAAa；9V-AKXVAAWTLKAA(SEQ ID NO：5)；9V-aKXVAAWTLKAAa；14-AKXVAAWTLKAAA(SEQ ID NO：5)；14-aKXVAAWTLKAAa；18C-AKXVAAWTLKAAA(SEQ ID NO：5)；18C-aKXVAAWTLKAAa；19F-AKXVAAWTLKAAA(SEQ ID NO：5)；19F-aKXVAAWTLKAAa；23F-AKXVAAWTLKAAA(SEQ ID NO：5)；和23F-aKFVAAWTLKAAa。
许多不同的肺炎链球菌血清型可以从ATCC(P.O.Box 1549，Manassas，VA 20108)获得，其包括表1中所列出的那些。
表1：可从ATCC获得的代表性血清型细菌的列表
| 血清型 | ATCC No.或Nos. |
| 1 | 6301，9163 |
| 2 | 6302 |
| 3 | 6303 |
| 4 | 6304，BAA-334 |
| 5 | 6305，BAA-341 |
| 6 | 6306 |
| 6A | BAA-659 |
| 6B | BAA-342，BAA-612，BAA-658，51937，700670，700675，700903 |
| 7 | 6307 |
| 8 | 6308 |
| 9 | 6309 |
| 9V | 700671 |
| 10 | 6310 |
| 11 | 6311 |
| 12 | 6312 |
| 14 | 6314，BAA-340，51936，700672，700676，700678，700902 |
| 15 | 6315 |
| 15A | BAA-661 |
| 16 | 6316 |
| 17 | 6317 |
| 18 | 6318 |
| 19 | 6319 |
| 19A | 700673，700674，700678，700904，BAA-475 |
| 19F | 49619，700905，BAA-657 |
| 20 | 6320 |
| 21 | 6321 |
| 22 | 6322 |
| 23 | 6323 |
| 23F | 51938，700669，BAA-943 |
| 24 | 6324 |
| 25 | 6325 |
| 26 | 6326 |
| 27 | 6327 |
| 28 | 6328 |
| 29 | 6329 |
| 30 | 6330 |
| 31 | 6331 |
| 32 | 6332 |
| 33 | 8333 |
| 34 | 8334 |
| 35 | 8335 |
| 35B | BAA-660 |
| 36 | 8336 |
| 37 | 8337 |
| 38 | 8338 |
| 39 | 8339 |
| 40 | 8340 |
| 41 | 10341 |
| 42 | 10342 |
| 43 | 10343 |
| 44 | 10344 |
| 45 | 10345 |
| 46 | 10346 |
| 47 | 10347 |
| 48 | 10348 |
| 49 | 10349 |
| 50 | 10350 |
| 51 | 10351 |
| 52 | 10352 |
| 53 | 10353 |
| 54 | 10354 |
| 55 | 10355 |
| 56 | 10356 |
| 57 | 10357 |
| 58 | 10358 |
| 59 | 10359 |
| 61 | 10361 |
| 62 | 10362 |
| 63 | 10363 |
| 64 | 10364 |
| 65 | 10365 |
| 66 | 10336 |
| 67 | 10367 |
| 68 | 10368 |
| 69 | 10369 |
| 70 | 10370 |
| 71 | 10371 |
| 72 | 10372 |
| 73 | 10373 |
来自至少下列血清型的纯化的被膜多糖可以从ATCC获得：1，2，3，4，5，8，9N，12F，14，17F，19F，20，22F，23F，25，6B，10A，11A，7F，15B，18C，19A，9V，和33F。
已经确定了许多血清型被膜多糖的化学结构。例如，van Selm，等.，Infect.Immun.71(11)：6192-6198(2003)提供了血清型14，15B和15C被膜多糖的结构，如下：
其中“+0.7 OAc*”表明平均有70％的重复单位是O-乙酰化的。
Jiang等.，Infect.Immun.69(3)：1244-1255(2001)提供了血清型4，6B，8，或18C被膜多糖的结构，如下：
血清型4：
血清型6B：
血清型8：
Morona等.，J Bacterial.181(17)：5355-5364(1999)提供了血清型19F，19A，19B和19C的被膜多糖的结构，如下：
Karlsson等.，Eur.J Biochem.255：296-302(1998)提供了血清型32A和32F被膜多糖的结构，如下：
血清型32F R＝H
血清型32A R＝Ac
本发明所用的碳水化合物可以按照本领域技术人员已知的标准方法进行制备。通过本领域已知的方法，可以从它们各自的细菌菌株制备链球菌多糖。在示例性方法中，链球菌多糖从细菌菌株中纯化出来，其通过将细菌成分与碱性试剂相接触，以获得混合物，其中所述混合物的pH在大约，例如，9和14之间，(例如，其中pH＝9，pH＝9.5，pH＝10，pH＝10.5，pH＝11，pH＝11.5，pH＝12，pH＝12.5，pH＝13，pH＝13.5或pH＝14)，从细胞成分中分离出被膜多糖，并且回收基本上没有其它细胞成分的所述被膜多糖。参见，例如，美国专利号6,248,570。也参见，Wessels，M.R.，等.Infect.Immun.57：1089-1094(1989)；Wessels，M.R.，等.J Clin.Invest.86：1428-1433(1990)。
备选地，本发明的多糖可以通过形成配糖键从适当的单糖制备，或从天然来源分离并适当地修饰。例如，β-糖基键可以在带有1-卤取代基的一个糖和适当保护的第二个糖之间形成，所述的第二个糖具有至少1个未保护的羟基。典型地，这样的转化在碳酸银(Ag2CO3)或silver triflate存在下进行。
备选地，所述配糖键可以通过酶促手段形成，其应用国际专利申请公布号WO 96/32492中描述的方法进行。简要地，糖基转移酶，诸如唾液酸转移酶，可以用来构建具体的配糖键。
许多唾液酸转移酶为本领域内的技术人员所知。这种酶将唾液酸(NeuAc)转移到Gal，在这2种糖之间形成α-连接。糖间键(连接)是在NeuAc的位置2和Gal的位置3之间。
通常被叫作唾液酸转移酶的一种示例性的α(2，3)唾液酸转移酶(EC2.4.99.6)，将唾液酸转移到Galβ1→3G1c二糖或配糖的非还原末端Gal上。参见，例如，Van den Eijnden，等.，J Biol.Chem.，256：3159(1981)，Weinstein，等.，J Biol.Chem.，257：13845(1982)和Wen，等.，J Biol.Chem.，267：21011(1992)。另一种示例性α-2，3-唾液酸转移酶(EC 2.4.99.4)将唾液酸转移到二糖或配糖的非还原末端Gal上。参见，例如，Rearick，等.，J Biol.Chem.，254：4444(1979)和Gillespie，等.，J Biol.Chem.，267：21004(1992)。其它示例性酶包括Gal-β-1，4-GlcNAcα-2，6唾液酸转移酶。参见，例如，Kurosawa，等.Eur.J Biochem.219：375-381(1994)。
本领域的技术人员应该明白，其它糖基转移酶可以被取代进入相似的转移酶循环，如对于唾液酸转移酶所详细描述的那样。例如，糖基转移酶还可以是糖基转移酶类，例如，Alg8(Stagljov，等.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91：5977(1994))或Alg5(Heesen，等.Eur.J Biochem.224：71(1994))。适当的N-乙酰半乳糖胺转移酶包括α(1，3)N-乙酰半乳糖胺转移酶，β(1，4)N-乙酰半乳糖胺转移酶(Nagata，等.J Biol.Chem.267：12082-12089(1992)和Smith，等.J Biol Chem.269：15162(1994))和多肽N-乙酰半乳糖胺转移酶(Homa，等.J Biol Chem.268：12609(1993))。适当的N-乙酰半乳糖胺转移酶包括GnTI(2.4.1.101，Hull，等.，BBRC 176：608(1991))，GnTII，和GnTIII(Ihara，等.，J.Biolchem.113：692(1993))，GnTV(Shoreiban，等.，JBiol.Chem.268：15381(1993))，O-连接的N-乙酰半乳糖胺转移酶(Bierhuizen，等.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：9326(1992))，和乙酰透明质酸合成酶。适当的甘露糖基转移酶包括α(1，2)甘露糖基转移酶，α(1，3)甘露糖基转移酶，β(1，4)甘露糖基转移酶，Dol-P-Man合成酶，Ochl，和Pmtl。
在Ichikawa，等.，J.Am.Chem.Soc.114：9283(1992)，Wong，等.，J.Org.Chem.57：4343(1992)，DeLuca，等.，J.Am.Chem.Soc.117：5869-5870(1995)，和Ichikawa，等.，in Carbohydrates and Carbohydrate Polymers，Yaltami，ed.(ATL Press，1993)描述了其它适当的糖基转移酶循环。
对于上述糖基转移酶循环，过程中所用的各种反应物的浓度或用量取决于许多因素，包括反应条件，诸如温度和pH，和要被糖基化的受体糖的选择和用量。由于糖基化过程允许在存在催化用量的酶下再生活化的核苷酸、活化的供体糖并且清除所产生的焦磷酸，因此，所述过程受到前文所讨论的化学计量底物的浓度或用量的限制。按照本发明方法可以应用的反应物的浓度上限由所述反应物的溶解度决定。
包括附加的多肽(例如，来自肺炎链球菌衍生的多肽)的CTL肽还可以与本发明的多肽/多糖缀合物一起施用。可以合成包括适当的表位的CTL肽，并且然后在检测中检测它们结合MHC I类分子的能力，所述检测应用，例如，纯化的I类分子和碘化肽和/或表达空I类分子的细胞，通过，例如，免疫荧光染色和流动显微荧光检测，依赖肽的I类装配检测，和肽竞争对CTL识别的抑制。结合I类分子的那些肽可以进一步评估它们作为衍生于被感染的或免疫的个体的CTLs的靶点的能力，以及它们在体外或体内诱导初级CTL应答的能力，所述CTL应答可以使得CTL群体能够作为潜在的治疗剂与病毒感染的靶点细胞或肿瘤细胞反应。
在某些实施方案中，抗体诱导肽，即，包括抗体表位的肽，可以与本发明的多肽/多糖缀合物一起施用。
所述一种或多种CTL和/或抗体诱导肽可以与在混合物中的一种或多种pan DR肽一起施用，所述混合物可以或可以不包含肽间非共价缔合。例如，一种或多种肽可以被脂化(lipidated)。备选地，所述肽可以共价连接(例如，以重组融合形式)。
为了促进抗原决定簇与pan DR结合肽的缔合，可以将附加的氨基酸添加到所述肽的末端。所附加的残基还可以用于同载体、支持物或更大的肽而偶联，出于本文所讨论的原因，或为了修饰所述肽或寡肽的物理或化学特性，等。可以将氨基酸，诸如酪氨酸、半胱氨酸、赖氨酸、谷氨酸或天冬氨酸、等，引入所述肽或寡肽的C或N端。另外，所述肽或寡肽的序列可以不同于天然序列，通过末端-NH2酰化，例如，通过烷酰基(C1-C20)或巯基乙醇酰基乙酰化作用，末端羧基酰胺化作用，例如，氨、甲胺、等，而进行修饰。在一些实例中，这些修饰可以提供连接支持物或其它分子的位点。
关于pan DR结合肽，应该理解，抗原决定簇可以被修饰，以提供其它必要的特性，例如，改善的药理学特征，同时增加或至少基本上保留未修饰的肽的所有生物活性。例如，所述肽可以通过在所述肽氨基酸序列中延长、减少或取代而进行修饰，通过在从本文所公开的序列衍生的肽的氨基端或羧基端、或两端添加或删除氨基酸而实现。通常，除了其中附加的氨基酸可以被添加在任一端，出于修饰所述肽易于连接或偶联等的物理或化学特性的目的之外，意欲充分地模拟CTL-或抗体刺激表位的序列部分将不会与靶点抗原蛋白序列有多于约20％的差别。在发现所述肽序列的区域在病毒亚型中是多态性的情形中，可以必要地改变一个或多个具体的氨基酸，以更有效地模拟不同的病毒毒株或血清型的变化的细胞毒性T淋巴细胞表位。
本发明的肽可以通过连接形成聚合物(多聚体)而组合，或可以在没有连接的组合物中配制，作为混合物。在将肽连接到相同的肽上，由此形成均聚物的情形中，呈现出多个重复的表位单位。例如，多抗原肽(MAP)技术可以用来构建包含CTL和/或抗体肽和pan DR结合肽的聚合物。当所述肽不同时，例如，代表不同的病毒亚型、亚型内不同的表位、不同的HLA限制性特异性、或含有T辅助表位的肽的混合物，可以提供具有重复的单位的杂聚物。除了共价连接外，能够形成分子间和结构内键的非共价连接在考虑中。
3.缀合物的制备
可以通过许多方法将需要的多糖缀合到包括pan DR肽序列的多肽上。可以通过酶促或化学反应将多糖连接到本发明的多糖上。例如，在Hermanson，BIOCONJUGATE TECHNIQUES(Academic Press，1996)；Lockhart，″Conjugate Vaccines，″Expert Rev.Vaccines 2(5)：633-648(2003)中描述了广泛范围的连接策略。通过末端或通过赖氨酸的ε-氨基的离子相互作用是可能的。残基侧面基团和抗原决定簇之间的氢键也是可能的。
在一些实施方案中，多糖/pan DR结合肽缀合物通过间隔分子或连系物而连接。备选地，所述多糖可以无需连系物直接附着到pan DR结合肽上。
所述间隔或连系物可以由中性分子组成，诸如，脂肪族碳链、氨基酸或氨基酸模拟物，其在生理条件下基本不带电，并且可以具有线性或有分支的侧链。用于连接各种生物分子的许多组合物和方法是为本领域的技术人员所知的。将pan DR结合肽共价连接到，例如，碳水化合物表位上的具体方法可以是不同的。例如，适用于连接pan DR结合肽和碳水化合物抗原的方法在WO 93/21948中公开。
许多连系物是公知的，并且是可以商购获得的，或在科学文献中描述过。示例性的连系物包括，例如，同-或异-双功能连系物。本发明所用的连接分子任选地可以是充分的长度，足以允许分子的2部分独立地而且自由地同暴露于它们的分子相互作用。在碳水化合物表位的情形下，所述连接分子典型地为1-50个(例如，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36，37，38，39，40，41，42，43，44，45，46，47，48，49或50个)原子长。例如，所述连接分子可以是芳基乙炔、含有2-14个(例如，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13或14个)单体单位的乙二醇低聚物、二胺、二酸、氨基酸、或其组合。其它适当的连系物包括脂质分子，诸如神经酰胺和氨基酸残基，其中不同的碳水化合物部分通过所述氨基酸的侧链连接到所述氨基酸上。
可以基于其化学/物理特性而选择所用的具体的连接分子。所述连接分子在每端具有适当的官能团，一个基团适于附着到碳水化合物部分的反应位点上，和另一基团适于附着到氨基酸/肽部分。例如，适于附着到碳水化合物部分的基团是羧酸、酯、异氰酸盐、卤代烷、酰卤和异硫氰酸盐。类似的基团将用于附着到氨基酸部分。官能团的适当选择将取决于氨基酸或肽的反应部分的性质。
应用各种可以商购获得的连系物可以实现间接连接。反应末端可以是各种功能性中的任一种，其包括，但不限于：氨基活性末端，诸如N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活性酯、酰亚胺酯、醛、环氧化物、磺酰卤、异氰酸盐、异硫氰酸盐、和硝基芳基卤；和硫醇活性末端，诸如吡啶基二硫化物、顺丁烯二酰亚胺、硫代苯邻二甲酸亚胺，和活性卤。在Hermanson，G.T.，BIOCONJUGATE TECHNIQUES(Academic Press，Inc.1996)和thePIERCE(Pierce/Endogen)2001-2002目录中详细讨论了交联剂和其它生物缀合物。在一些实施方案中，所述多糖被转化成活化的酰肼(例如，在NaHCO3中使用己二酸二酰肼(adipic acid dihydrizde))。然后，通过多肽羧基碳二亚胺介导的缩合反应，可以将活化的多糖酰肼缀合到包括pan-DR结合肽序列的多肽上。
另外，一种双功能连系物，其具有一个与具体的配体上的基团反应的官能团，和与核酸结合分子反应的另一个基团，可以用来形成需要的缀合物。异双功能交联剂具有2个不同的活性末端，例如，氨基活性末端和硫羟活性末端，而同双功能试剂具有2个相似的活性末端，例如，双马来酰亚胺己烷(BMH)，其允许含有巯基的化合物交联。所述间隔可以是脂肪族或芳香族的。异双功能试剂包括可商购获得的活性卤-NHS活性酯偶联剂，诸如N-琥珀酰亚胺基溴乙酸和N-琥珀酰亚胺基(4-碘乙酸基)氨基苯甲酸酯(SIAB)，和磺基琥珀酰亚胺基衍生物，诸如磺基琥珀酰亚胺基(4-碘乙酸基)氨基苯甲酸酯(磺基-SIAB)(Pierce)。另一组偶联剂是异双功能的和硫醇分裂剂，诸如N-琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)(N-succinimidyl 3-(2-pyridyidithio)propionate)(Pierce)。其它双功能连系物包括，例如，ABH(对-叠氮苯甲酰肼)；BMPH(N-[b-Maleimidoproprionicacid]hydrazide TFA)，和KMUH(N-[k-马来酰亚胺基十一烷酸]酰肼，M2C2H(4-[N-马来酰亚胺基甲基]环己烷-1-careboxylhydrazide HCl 1/2二噁烷)，和MPBH(4-[4-N-马来酰亚胺基苯基]丁酸酰肼HCl)。
异双功能连系物，诸如马来酰亚胺-羟基琥珀酰亚胺酯，也可以用作选择性的连接(参见，例如，美国专利号5,851,527)。马来酰亚胺-羟基琥珀酰亚胺酯与多肽靶点的反应将在蛋白上产生胺基，并且所述衍生物然后可以与，例如，具有游离巯基的目的物反应。用于将各种化合物附着到蛋白上的许多其它方法和连系物分子是已知的。参见，例如，欧洲专利申请号188,256；美国专利号4,671,958；4,659,839；4,414,148；4,699,784；4,680,338；4,569,789；5,856,571；5,824,805；5,470,997；5,470,843；5,470,932；5,843,937和4,589,071；和Borlinghaus等.Cancer Res.47：4071-4075(1987)。
可商购获得的同双功能交联试剂的实例包括，但不限于，亚胺酸酯类，诸如二甲基己二酰亚胺酸二盐酸酯(dimethyl adipimidate dihydrochloride，DMA)；二甲基庚二酰亚胺酸二盐酸酯(dimethyl pimelimidatedihydrochloride，DMP)；和二甲基辛二酰亚胺酸二盐酸酯(dimethylsuberimidate dihydrochloride，DMS)。
在一组实施方案中，烷基或亚烷基可以用作连接基团，并且可以具有1-20个碳原子(例如，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19或20)。例如，可以应用包括聚乙二醇和相关结构的连系物。术语“聚乙二醇”用来指具有乙二醇重复单位的那些分子，例如，六乙二醇(HO-(CH2CH2O)5-CH2CH2OH)。当术语“聚乙二醇”用于指连接基团时，本领域的技术人员应该理解，也可以应用其它聚醚或多羟基化合物(即，聚丙二醇或乙二醇和丙二醇的混合物)。
在另一组实施方案中，所述烷基或亚烷基连接基团将被全氟化，使得它们对生物降解更不敏感。参见，美国专利号5,055,562。示例性的连接基团包括氨基己酸、4-羟基丁酸、4-巯基丁酸、3-氨基-1-丙醇、乙醇胺、全氟代乙醇胺、和全氟代羟基丁酸。在一组实施方案中，两部分通过聚乙二醇部分而连接。
在连系物处于pan DR结合肽和其它肽之间(例如，pan DR结合肽和CTL诱导肽)的情形中，所述间隔可以，例如，选自Ala，Gly，或非极性氨基酸或中性极性氨基酸的其它中性间隔。在本文的一些实施方案中，所述中性间隔是Ala。应该理解，任选地所述间隔不必要由相同的残基组成，并且因此可以是杂-或同-低聚物。示例性的间隔可以是Ala的同-低聚物。当存在间隔时，所述间隔通常为至少1个或2个残基，例如，3-6个残基(即，3，4，5或6个)。在其它实施方案中，所述pan DR结合肽缀合到CTL或抗体诱导肽上，优选地使得所述pan DR结合肽位于氨基端。所述肽可以通过中性连系物结合，诸如Ala-Ala-Ala，等，并且优选地还包含脂质残基，诸如棕榈酸等，其被附着到Lys残基的α和ε氨基上((PAM)2Lys)，其被附着到所述肽缀合物的氨基端，典型地通过Ser-Ser连接，等。
CTL或抗体诱导肽可以直接地或者通过在CTL肽氨基或羧基端的间隔而连接到pan DR结合肽上。所述CTL或抗体诱导肽或者所述pan DR结合肽的氨基端可以被酰化。另外，CTL肽/pan DR结合缀合物可以通过一种或多种连接残基，诸如Gly，Gly-Gly，Ser，Ser-Ser，如下文所描述的那样，被连接到某些烷酰基(C1-C20)脂质上。其它有用的脂质部分包括胆固醇、脂肪酸、等。
在一些实施方案中，理想地在本发明的药物组合物中包括至少一种辅助引发CTL的成分。已经将脂质鉴定为能够在体内辅助针对病毒抗原的引发CTL的制剂。例如，类固醇，诸如胆固醇，脂肪酸，诸如棕榈酸残基，可以附着到半胱氨酸残基的巯基上，Lys残基的α和ε氨基上，并且然后，例如，通过一种或多种连接残基，诸如Gly、Gly-Gly-、Ser、Ser-Ser等，连接到免疫原肽上，诸如pan DR结合肽。备选地，代替脂肪酸，长链烷基可以通过酯键连接到最末氨基酸上(例如，半胱氨酸残基)。
脂质化的肽可以以微团形式直接注射，结合到脂质体中或在佐剂，例如，不完全弗氏佐剂中乳化而注射。在一些实施方案中，一种特别有效的免疫原包括附着到Lys的α和ε氨基上的棕榈酸，其通过连接，诸如，Ser-Ser，附着到所述免疫原肽的氨基端。
作为CTL应答的脂质引发的另一个实例，大肠杆菌(E.coli)脂蛋白，诸如三棕榈酰-S-甘油基半胱氨酰丝氨酰-丝氨酸(P3CSS)，当共价附着到适当的肽上时，可以用来引发病毒特异的CTL。参见，Deres，等.，Nature 342：561-564(1989)。例如，可以将本发明的肽偶联到P3CSS上，并且将所述脂蛋白施用给个体，以特异性地引发针对目标抗原的CTL应答。此外，由于当将P3CSS缀合到展现出适当的表位的肽上时，还可以引发中和性抗体的诱导，所以可以将这2种组合物组合，以更有效地激发针对感染的体液和细胞介导的应答。
在pan DR结合肽缀合到碳水化合物表位上的情形中，所述脂质部分可以被连接到碳水化合物的相反末端(例如，碳水化合物连接到C端，和脂质连接到N端)。备选地，脂质和碳水化合物部分都可以连接到所述肽的同一端。例如，这两部分可以连接到N端的同一连系物上。
4.药物组合物
本发明的化合物，及其药物和疫苗组合物，可以施用给哺乳动物，特别是人，用于预防和/或治疗目的。本发明可以用于激发和/或增强针对多糖或肽免疫原的免疫应答。例如，链球菌多糖/pan DR结合肽混合物可以用来治疗和/或预防细菌感染。在一些实施方案中，本发明的链球菌多糖/pan DR结合肽缀合物用于治疗和/或预防中耳感染，肺炎，和与人或其它哺乳动物感染肺炎链球菌相关的脑膜炎。
本发明针对疫苗，所述疫苗含有免疫原性有效量的组合物作为活性成分，所述组合物包括至少一种如本文所讨论的本发明的缀合物。所述疫苗还含有生理学上耐受的(可接受的)稀释剂，诸如水、磷酸缓冲盐、或盐水，并且还典型地包括佐剂。佐剂，诸如不完全弗氏佐剂，铝胶Al(OH)3、磷酸铝、氢氧化铝、或明矾，是本领域内公知的物质。并且，如上文所提及的，免疫应答可以通过将本发明的组合物缀合到脂质，诸如P3CSS上而引发。一旦通过注射、气溶胶、口服、透皮或其它途径用本文所描述的组合物免疫时，宿主的免疫系统通过产生增强的免疫应答，体液的和/或细胞的，而应答。
本发明的疫苗组合物可以施用给易患或另外处于疾病危险中的患者，所述患者包括，例如，2岁以下儿童或老年人(大于65岁)，以激发和/或增强针对抗原决定簇的免疫应答。将这样的用量定义为“免疫原性有效剂量”，用于治疗或预防应用。在这种应用中，精确的用量又取决于患者的健康状况和体重、施用的模式、制剂的性质、等，但是通常在每70千克的患者约1.0μg-约5000μg的范围，更常见地从每70kg体重约10μg-约500μg。
在一些实例中，可以必要地将本发明的组合物与诱导针对其它感染和目的癌症的中和性抗体应答的疫苗组合。
当应用多次施用方案时，存在许多不同的技术用于免疫的时机。可能多于一次地应用本发明的组合物，以增加由所免疫的动物表达的免疫球蛋白全体表达的水平和多样性。典型地，如果给予多次免疫，它们应该间隔1-2月给予。
在治疗应用中，本发明施用给已经遭受癌症或感染了目的微生物的个体。处于疾病的潜伏期或急性期的那些患者可以用本发明独立地治疗或适当地与其它治疗联合治疗。
在治疗性应用中，本发明的组合物以充分的量施用给患者，所述量足以激发有效的针对所述微生物或肿瘤抗原的CTL应答或体液应答，并且足以治愈、或至少部分抑制，症状和/或并发症。足以实现这一效果的量定义为“治疗有效剂量”。有效用于这种应用的量将部分取决于所述肽组合物，施用的方式，治疗的疾病的阶段和严重度，患者的体重和健康的综合状态，以及开处方医师的判断。
对于用于治疗或预防性施用的初始免疫，本发明组合物的治疗有效量通常在对于70kg的患者约1.0μg-约10,000μg肽的范围，经常约100μg-约8000μg，并且优选地约200μg-约6000μg。
这些剂量之后是从约1.0μg-约1000μg肽的增强剂量，按照持续几周到几个月的增强方案，这取决于通过测量具体的免疫应答而确定的患者的反应和状况。
必须记住，本发明的组合物通常可以在严重疾病状况中应用，即，威胁生命或潜在地威胁生命的状况。在这样的情形中，考虑到将外源物质最弱化，和所述缀合物的相对无毒的性质，可能地并且感到有必要通过治疗医师施用基本上过量的这些组合物。此外，本发明可以预防性地应用，以预防和/或改善细菌感染、病毒感染、真菌感染、寄生虫感染和癌症。有效地用量如上文所描述。另外，疫苗领域内的普通技术人员应该也知道怎样适当地调节或改进预防性治疗，例如通过增强并且调整剂量和给药方案而实现。
治疗性施用可以在疾病的最初迹象时开始，或者发现或手术移除肿瘤时或者在急性感染病例中诊断之后立即开始。这之后是增强剂量，直到症状基本上消除，并且之后持续一段时间。在慢性感染中，可能需要在初始高剂量之后进行增强剂量。
用本发明的组合物治疗受感染的个体可以在急性感染个体中加速感染的消退。对于那些易于(或易倾向于)发展慢性感染的个体，所述组合物在用于防止从急性进展成慢性感染的方法中特别有效。例如，在感染之前或过程中确定易受感染的个体时，如本文所述，所述组合物可以针对他们，从而将对更大的人群的施用的需要减到最小。
本发明还可以用于慢性感染的治疗，并且在患有潜伏的感染的个体中刺激免疫系统清除被病毒感染的细胞。在制剂和施用方式中提供一定量的本发明的组合物是重要的，所述量足以有效地激发和/或增强免疫应答。因此，对于慢性感染的治疗，代表性的剂量对于70kg的患者每剂量在约1.0μg-约5000μg范围内，优选地约5μg-约1000μg。免疫剂量之后在确定的时间间隔进行增强剂量，例如，从1-4周，可能是需要的，延长的时间阶段可能有效地免疫个体。在慢性感染的情形中，施用应该持续到至少临床症状或实验室检测表明病毒感染已经被消除了或基本上被消除了，并且此后再持续一段时间。
用于治疗性或预防性治疗的药物组合物易于用于肠胃外、表面局部(topical，)、口服或局部(local)施用。典型地，所述药物组合物进行肠胃外施用，例如，静脉内、皮下地、皮内地、或肌内地施用。由于施用的容易性，本发明的疫苗组合物特别适用于口服施用。因此，本发明提供用于肠胃外施用的组合物，其包括溶解在或悬浮在可用载体，优选地水性载体中的所述肽或缀合物的溶液。可以应用各种水性载体，例如，水、缓冲的水、0.9％盐水、0.3％甘氨酸、透明质酸等。这些组合物可以通过常规、公知的杀菌技术进行灭菌，或可以进行灭菌过滤。由此获得的水性溶液可以进行包装以备按照包装的水性溶液的样子应用，或者进行冻干，所述冻干的制剂在施用前与无菌溶液组合。所述组合物可以含有药用辅助物质，所述药用辅助物质需要接近的生理条件，诸如缓冲剂、张力调节剂、湿润剂等，例如，醋酸钠、乳酸钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙、山梨聚糖单月桂酸酯、油酸合三乙醇胺、等。
本发明的组合物在所述药物制剂中的浓度可以变化很大，即，从低于约0.1重量％，通常在或至少约2重量％到多达20重量％-50重量％或者更多，并且按照具体的施用模式，主要通过流体体积、粘度等进行选择。
本发明还可以通过脂质体进行施用，其使得所述缀合物靶向特定的组织，诸如淋巴组织，或选择性地靶向被感染的细胞，以及增加所述肽组合物的半衰期。脂质体包括乳剂、泡沫、微团、不溶性单层、液晶、磷脂分散液、薄层等。在这些制剂中，要被递送的组合物作为脂质体的一部分而结合，所述制剂单独的或与某种分子结合，例如，所述分子结合在淋巴细胞中普通存在的受体。这些分子包括单克隆抗体，其结合CD45抗原，或者与其它治疗或免疫原性组合物一起。因此，可以将充满了本发明的需要的组合物的脂质体导向淋巴细胞位点，然后在那里所述脂质体递送所选择的治疗/免疫原性肽组合物。用于本发明的脂质体从标准的小泡形成脂质制成，其通常包括中性的和负电荷的磷脂和固醇，诸如胆固醇。脂质的选择通常通过考虑脂质体的大小、酸不稳定性和所述脂质体在血流中的稳定性而指导。许多方法可以用于制备脂质体，例如，如在Szoka，等.，Ann.Rev.Biophys.Bioeng.9：467(1980)，美国专利号4,235,871，4,501,728，4,837,028，和5,019,369中所描述的那样，其通过参考结合在本文中。
为了靶向免疫细胞，结合到脂质体上的配体包括对所需要的免疫系统细胞的细胞表面决定簇特异的抗体或其片段。含有本发明的组合物的脂质体混悬液可以进行静脉内、局部、表面局部等施用，以特别按照施用的方式、要递送的组合物、和所治疗的疾病的阶段而变化的剂量施用。
备选地，编码一种或多种pan DR结合肽，和含有一种或多种CTL表位或抗体诱导表位的多肽的DNA或RNA，可以被引入个体中，以获得针对所述核酸编码的多肽的免疫应答。Wolff，等.，Science 247：1465-1468(1990)描述了核酸编码的多肽的表达。
于固体组合物，可以应用常规无毒的固体载体。这些载体可以包括，例如，药物级别的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石、纤维素、葡萄糖、蔗糖、碳酸镁、等。对于口服施用，药用无毒组合物，通过将任何通常所用的赋形剂，诸如先前列出的那些载体，和通常10-95％的活性成分，即，一种或多种本发明的缀合物，并且更优选地以25-75％的浓度，相结合而制备。
对于气溶胶施用，本发明的组合物优选地以连同表面活性剂和推进剂的细粒形式提供。所述组合物典型的百分比是0.01-20重量％，优选地1-10％。当然，所述表面活性剂必须是无毒的，并且优选地可溶于所述推进剂。这样的试剂的典型是含有6-22个碳原子的脂肪酸与脂肪族多羟基醇或其环酐的酯或偏酯，所述脂肪酸诸如己酸、辛酸、月桂酸、棕榈酸、硬脂酸、亚油酸、亚麻酸、olesteric和油酸。可以应用混合的酯，诸如混合的或天然的甘油酯。所述表面活性剂可以组成所述组合物的0.1-20重量％，优选地0.25-5重量％。所述组合物的余量是常见的推进剂。如果需要的话，还可以包括载体，如同卵磷脂一起用于鼻内递送。
本发明的组合物还可以找到作为诊断试剂的用途。例如，本发明的组合物可以用于确定具体的个体对应用抗原决定簇的治疗方案的敏感性，并且因此可以有助于改进现有的治疗流程或为受影响的个体确定预后。另外，本发明的组合物还可以用于预测哪些个体基本上处于发展慢性感染的危险中。
实施例
下述实施例通过举例说明的方式并不是限制的方式提供。
生产了实验的碳水化合物-缀合物疫苗，其由13个氨基酸的通用PanHLA-DR表位和来自血清型14，6B和9V的肺炎链球菌被膜多糖组成。简单的碳二亚胺介导的缩合化学用于将pan DR结合合成的肽以1∶1的摩尔比与3种化学上不同的被膜多糖缀合。所述缀合物疫苗pan DR结合肽成分的免疫原性通过在C57BL/6小鼠免疫后诱导pan DR结合肽特异性的CD4+辅助T细胞(HTL)应答而证实。应用完全弗氏佐剂和铝胶Al(OH)3制剂，诱导对肺炎链球菌血清型14，6B和9V特异的高滴度抗体应答。所述HTL，或载体，pan DR结合合成肽的作用只有在应用pan DR结合肽-多糖缀合物时是明显的；pan DR结合肽和多糖的简单混合物基本上是没有免疫原性的。多糖特异性抗体的功能性或潜在的保护性价值作为对于6B血清型的调理噬菌细胞(opsonophagocytic)活性的函数而测量。在来自用含有2种佐剂的制剂免疫的小鼠血清中，测定高滴度的调理噬菌细胞活性。这些数据表明，pan DR结合合成肽可以诱导HTL应答，支持对缀合物疫苗中所用的细菌碳水化合物特异的抗体的发展需要所述HTL应答。这些实验的详情在下文中提供。
方法和材料
Pan DR结合肽合成和肺炎链球菌多糖的缀合
将pan DR结合肽设计成以中高亲和力结合最常见的HLA-DR等位基因产物，以表位的带电的或大的氨基酸作为T细胞受体(TCR)接触点(Alexander J，等.Immunity 1(9)：751-61(1994)；Alexander J，等.，J Immunol164(3)：1625-33(2000))。pan DR结合肽结合鼠I-Ab分子，并且在C57BL/6小鼠中是免疫原性的；这使得在可能在充分表征的动物模型种类中评估缀合物疫苗的体内免疫原性。所述pan DR结合合成肽，其具有AKXVAAWTLKAAA(SEQ ID NO：5)的序列，其中X＝环己丙氨酸，是应用标准F-moc固相合成方法(Ruppert J，等.Cell 74(5)：929-37(1993))而合成的。通过反相高压液相色谱，将pan DR结合肽纯化到＞95％的同质性，并且通过质谱进行特性分析。
来自血清型6B，9V和14的被膜多糖制剂(mwave，15,000)从美国典型培养物收藏中心(Rockville，MD)作为冻干的粉剂获得。将单个的被膜多糖制剂溶解于蒸馏H2O中，浓度为9mg/ml，并且用1mg的溴化氰(SigmaChemical Co.，St.Louis，MO)在pH 10.5和4℃活化6min。用0.2M HCl将pH调整到8.5后，将在NaHCO3(0.5M)中的己二酸二酰肼溶液添加到反应混合物中，以获得0.3M的碳水化合物终浓度。允许反应在8℃搅拌时进行过夜，并且将所述物质透析到0.2M NaCl中，持续24h。将所述溶液冻干，并且将所获得的固体溶解在蒸馏H2O中，并在用蒸馏H2O平衡的Biorad Bio-gel P2柱(Biorad Hercules，CA)上脱盐处理。将含有显著量的多糖的级分收集到一起并且冻干。
通过碳二亚胺介导的缩合反应，应用1-乙基-3-二甲基氨基丙基碳二亚胺(EDC)(Sigma)，将pan DR结合肽偶联到上述活化的被膜多糖酰肼上。将pan DR结合合成肽(7.4μmol/ml)和活化的碳水化合物(7μmol/ml)在H2O中混合，并且用0.2M HCl将pH调整到4.9。添加固体EDC至终浓度0.1M，并且将所述混合物在4℃搅拌3h。接着将反应环境在0.2M NaCl中过夜透析(mw截留，4,500)，接着进行第二次水中透析的步骤，并且随后将所述透析液冻干。应用用0.2M NaCl平衡的CL-6B琼脂糖柱(3×100cm)，通过层析，将这些缀合的物质同未结合的pan DR肽分离。检测柱洗脱液的碳水化合物和蛋白含量，对于碳水化合物应用Schiff检测，和对于pan DR结合肽含量应用Micro BCA蛋白检测试剂试剂盒(PierceRockford，IL)。
佐剂制剂和免疫
应用没有佐剂的制剂和基于完全和不完全弗氏佐剂(CFA/IFA)的制剂，评估疫苗制剂的免疫原性。将8-10周龄的3只C57BL/6小鼠组(JacksonLaboratories，Bar Harbor ME)，用配制在100μl体积的CFA中的50，5或0.5μg的实验疫苗在尾巴底部进行皮下免疫，并且在4wk后施用在IFA中的增强剂量。在初次免疫后4wk和增强免疫后2wk对小鼠采血。应用50μg未缀合的被膜多糖的免疫用来记录这些物质的基线免疫原性。
铝胶Al(OH)3(Superfos Biosector，Vedback，Denmark)用作适用于人的疫苗佐剂的典型代表。将50,5和0.5μg的实验疫苗剂量分别吸附到250μg的Al(OH)3中，并且用于免疫小鼠。
疫苗以100μl体积在尾巴底部通过皮下注射施用，3-4wk时间间隔进行2或3次。在免疫前和每月的时间间隔，通过尾静脉采血获得血液样品。
在CD4+-特异的ELISPOT测定的情形中，将pan DR结合肽-Ps9V缀合物在CFA中乳化，并且用100μl在尾巴底部对小鼠进行皮下免疫(最终100μg/小鼠)。所述pan DR结合肽表位(最终10μg/小鼠)和Ps9V(最终50μg/小鼠)对照相似地制备，并且用来免疫小鼠。免疫后11-14天，将小鼠处死，并且纯化脾细胞用于ELISPOT测定。所有的流程以与National Institutes of Health指导方针一致的方式，应用Institutional AnimalCare and Use Committee核准的动物方案而完成。
免疫应答的测定
应用ELISPOT检测来测定由CD4+淋病细胞应答所述pan DR结合肽而产生的干扰素-γ(IFN-γ)(Tangri S，等.J Exp Med 194(6)：833-46(2001))。应用HCV核心28表位(GQIVGGVYLLPRRGPR(SEQ ID NO：7)和来自免疫小鼠的脾细胞测定应答，并且未免疫小鼠针对pan DR结合肽的应答用来建立背景值。t-检验用来确定三重检验方式之间差异的显著性。
通过ELISA测定对链球菌多糖特异的抗体(Yu X，等.Clinical andDiagnostic Laboratory Immunology 6(4)：519-24(1999))。测定了全抗体水平和同种型特异性应答。对6B血清型(毒株DS2212)特异的调理噬菌细胞杀死检测被用来评估与保护活性相关的抗体功能(Nahm MH，等.Vaccine 18(24)：2768-71(2000))。
结果
pan DR结合肽在实验肺炎链球菌被膜多糖缀合物疫苗中的免疫原性
缀合到肺炎链球菌被膜多糖上后所述pan DR结合肽的完整性作为免疫原性的函数进行评估。来自用在CFA/IFA中乳化的pan DR结合肽-Ps9V缀合物免疫的小鼠的CD4+淋巴细胞特异性地并且有力地应答所述缀合物疫苗和所述pan DR结合肽。这些数据支持这样的结论，即，在应用己二酸二酰肼化学缀合到肺炎链球菌被膜多糖上之后，所述pan DR结合肽是有功能的。
针对pan DR结合肽-肺炎链球菌多糖缀合物疫苗的抗体应答
应用基于CFA/IFA的制剂，首次记录了所述pan DR结合肽-多糖缀合物疫苗的免疫原性。未缀合的多糖只有极少的免疫原性，而所述缀合物形式证明是有效的免疫原。所述产物的效力不同，血清型14是最多免疫原性的，和血清型9是最少免疫原性的。还在与人体应用相容的制剂中，特别是PBS或Al(OH)3中，评估实验疫苗。在吸附到Al(OH)3或在PBS中施用时，血清型14的产物免疫原性相等，而血清型6B和9V的产物在Al(OH)3制剂中更有免疫原性。
这些数据清楚地表明与所述多糖同所述pan DR结合肽缀合相关的免疫原性的增加，及其与可以用于人体疫苗产物的制剂形式的相容性。对于疫苗载体效果，对pan DR结合肽与多糖的缀合的要求
将pan DR结合肽和游离的碳水化合物吸附到Al(OH)3上。将相同的多糖的缀合形式混合，吸附到Al(OH)3上并且用作比较免疫原。直到未缀合的pan DR结合肽和多糖3次免疫后才检测到对所述多糖特异的抗体，具有相对低的滴度，在200-1,000范围内。相反，应用相同剂量的缀合到pan DR结合肽上并且吸附到Al(OH)3上的多糖，诱导了高滴度的多糖特异性抗体应答。这些数据证明了对于所述pan DR结合肽和多糖的缀合的完全需要，所述pan DR结合肽为所述免疫原的载体成分，所述多糖为B淋巴细胞表位成分。还要注意到，所述多糖-pan DR结合肽缀合物免疫原，以多价形式施用，同当单独施用时免疫原性相等；它们没有以任何显著的程度相互干涉或竞争。
抗体同种型和功能
在不存在佐剂时，所述实验缀合物疫苗诱导占优势的IgG1(37-82％)，具有分别由pan DR结合肽-Ps6B和pan DR结合肽-Ps9V诱导的IgM(44和58％)的显著贡献。将所述疫苗吸附到Al(OH)3上也导致IgG1作为所观察到的主要同种型应答。唯一的例外是高度免疫原性的pan DR结合肽-Ps14，其诱导显著量的IgG2b和IgG3，分别为总量的10.6％和6.8％。在CFA/IFA中乳化的实验疫苗的递送增加了相对量的IgG2b(7.2-25.2％)和IgG3(2.0-8.3％)。因此，IgG1是所产生的主要抗体同种型，但是有效的CFA/IFA佐剂的应用改变了应答。
在应答免疫中产生的抗体同种型提供了潜在的疫苗功效。对于抗肺炎链球菌保护，其中需要噬菌作用和杀伤作用的增加，IgG1应该是适当的同种型。为了直接评估这一结论，在存在来自接种小鼠的血清稀释物时，我们通过粒细胞测定了肺炎链球菌毒株6B的噬菌作用和杀伤作用，并且应用常规的调理噬菌作用检测补充。调理性滴度与全抗体滴度相关；在来自用未缀合的Ps6B免疫的小鼠血清中，它们是最低的，但是当应用实验缀合物疫苗时，它们显著地增加了。一个有趣的观察是，Al(OH)3证明是更好适用的佐剂，其比CFA/IFA诱导显著更高的调理性滴度。这些数据表明，由用PADRE-Ps6B免疫诱导的抗体是有功能的，并且在体内是有保护性的。
提供上述实施例举例说明本发明，但不是限制其范围。本发明的其它变化对于本领域的普通技术人员是显而易见的，并且包含在附上的权利要求中。本文所引用的所有的出版物、专利、和专利申请通过参考结合于此。
序列表
<110>J.L.亚历山大
A.塞特
M.J.纽曼
Epimmune，Inc.
<120>诱导针对肺炎链球菌多糖的免疫应答
<130>018623-016710PC
<140>WO PCT/US05/19467
<141>2005-06-03
<150>US 60/577,103
<151>2004-06-04
<160>171
<170>用于Windows版本4.0的FastSEQ
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<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>20
Ala Ala Xaa Ala Lys Ala Ala Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>21
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>21
Ala Ala Xaa Ala Glu Ala Ala Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>22
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>22
Ala Ala Xaa Ala Gln Ala Ala Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>23
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>23
Ala Ala Xaa Ala Val Ala Ala Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>24
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>24
Ala Ala Xaa Ala Phe Ala Ala Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
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<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>25
Ala Ala Xaa Ala Ala Lys Ala Thr Leu Lys Ala Ala Ala
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<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
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<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
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Ala Ala Xaa Ala Ala Gln Ala Thr Leu Lys Ala Ala Ala
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<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
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<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
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Ala Ala Xaa Ala Ala Phe Ala Thr Leu Lys Ala Ala Ala
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<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>30
Ala Ala Xaa Ala Ala Ala Lys Thr Leu Lys Ala Ala Ala
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<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
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<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
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<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
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<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
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Ala Ala Xaa Ala Ala Ala Phe Thr Leu Lys Ala Ala Ala
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<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>35
Ala Ala Xaa Ala Ala Ala Thr Thr Leu Lys Ala Ala Ala
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<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>36
Ala Ala Xaa Ala Ala Ala Ala Thr Lys Lys Ala Ala Ala
1 5 10
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<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>37
Ala Ala Xaa Ala Ala Ala Ala Thr Glu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>38
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>38
Ala Ala Xaa Ala Ala Ala Ala Thr Gln Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>39
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>39
Ala Ala Xaa Ala Ala Ala Ala Thr Val Lys Ala Ala Ala
1 5 10
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<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>40
Ala Ala Xaa Ala Ala Ala Ala Thr Phe Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>41
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>41
Ala Ala Xaa Ala Ala Ala Ala Thr Ile Lys Ala Ala Ala
1 5 10
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<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>42
Ala Ala Xaa Ala Ala Ala Ala Thr Leu Glu Ala Ala Ala
1 5 10
<210>43
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>43
Ala Ala Xaa Ala Ala Ala Ala Thr Leu Gln Ala Ala Ala
1 5 10
<210>44
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>44
Ala Ala Xaa Ala Ala Ala Ala Thr Leu Val Ala Ala Ala
1 5 10
<210>45
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>45
Ala Ala Xaa Ala Ala Ala Ala Thr Leu Phe Ala Ala Ala
1 5 10
<210>46
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>46
Ala Ala Xaa Ala Ala Ala Ala Thr Leu Arg Ala Ala Ala
1 5 10
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<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>47
Ala Ala Xaa Ala Ala Ala Ala Thr Leu Lys Lys Ala Ala
1 5 10
<210>48
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>48
Ala Ala Xaa Ala Ala Ala Ala Thr Leu Lys Glu Ala Ala
1 5 10
<210>49
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>49
Ala Ala Xaa Ala Ala Ala Ala Thr Leu Lys Gln Ala Ala
1 5 10
<210>50
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>50
Ala Ala Xaa Ala Ala Ala Ala Thr Leu Lys Val Ala Ala
1 5 10
<210>51
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>51
Ala Ala Xaa Ala Ala Ala Ala Thr Leu Lys Phe Ala Ala
1 5 10
<210>52
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>52
Ala Ala Xaa Ala Ala Ala Ala Thr Leu Lys Ile Ala Ala
1 5 10
<210>53
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>53
Ala Ala Xaa Ala Ala Ala Ala Thr Leu Lys Ala Lys Ala
1 5 10
<210>54
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>54
Ala Ala Xaa Ala Ala Ala Ala Thr Leu Lys Ala Glu Ala
1 5 10
<210>55
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>55
Ala Ala Xaa Ala Ala Ala Ala Thr Leu Lys Ala Gln Ala
1 5 10
<210>56
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>56
Ala Ala Xaa Ala Ala Ala Ala Thr Leu Lys Ala Val Ala
1 5 10
<210>57
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>57
Ala Ala Xaa Ala Ala Ala Ala Thr Leu Lys Ala Phe Ala
1 5 10
<210>58
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>58
Ala Lys Xaa Val Lys Ala Asn Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>59
<400>59
000
<210>60
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>60
Ala Lys Xaa Val Lys Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>61
<400>61
000
<210>62
<211>13
<212>PRT
<211>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>62
Ala Lys Xaa Val Trp Ala Asn Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>63
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>63
Ala Lys Xaa Val Trp Ala Tyr Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>64
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>64
Ala Lys Xaa Val Trp Ala Val Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>65
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>65
Ala Lys Xaa Val Tyr Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>66
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>66
Ala Arg Xaa Val Arg Ala Asn Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>67
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>67
Ala Lys Xaa Val Lys Ala His Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>68
<400>68
000
<210>69
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>69
Ala Lys Xaa Val Ala Ala Asn Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>70
<400>70
000
<210>71
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>71
Ala Lys Xaa Val Ala Ala Tyr Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>72
<400>72
000
<210>73
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>73
Ala Lys Xaa Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>74
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>74
Ala Lys Xaa Val Ala Ala Lys Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>75
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>75
Ala Lys Xaa Val Ala Ala His Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>76
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>76
Ala Lys Xaa Val Ala Ala Ala Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>77
<211>16
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(6)...(6)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>77
Lys Ser Ser Ala Lys Xaa Val Met Ala Ala Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10 15
<210>78
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>78
Ala Lys Phe Ala Ala Ala Ala Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>79
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>79
Ala Glu Phe Ala Ala Ala Ala Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>80
<400>80
000
<210>81
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>81
Ala Gln Phe Ala Ala Ala Ala Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>82
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>82
Ala Val Phe Ala Ala Ala Ala Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>83
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>83
Ala Phe Phe Ala Ala Ala Ala Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>84
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>84
Ala Ala Phe Lys Ala Ala Ala Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>85
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>85
Ala Ala Phe Glu Ala Ala Ala Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>86
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>86
Ala Ala Phe Gln Ala Ala Ala Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>87
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>87
Ala Ala Phe Phe Ala Ala Ala Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>88
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>88
Ala Ala Phe Leu Ala Ala Ala Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>89
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>89
Ala Ala Phe Ala Lys Ala Ala Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>90
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>90
Ala Ala Phe Ala Glu Ala Ala Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>91
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>91
Ala Ala Phe Ala Gln Ala Ala Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>92
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>92
Ala Ala Phe Ala Val Ala Ala Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>93
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>93
Ala Ala Phe Ala Phe Ala Ala Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>94
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>94
Ala Ala Phe Ala Ala Lys Ala Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>95
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>95
Ala Ala Phe Ala Ala Glu Ala Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>96
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>96
Ala Ala Phe Ala Ala Gln Ala Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>97
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>97
Ala Ala Phe Ala Ala Val Ala Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>98
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>98
Ala Ala Phe Ala Ala Phe Ala Thr Leu Lys Ala Ala Ala
l 5 10
<210>99
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>99
Ala Ala Phe Ala Ala Ala Lys Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>100
<211>l3
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>100
Ala Ala Phe Ala Ala Ala Glu Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>101
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>101
Ala Ala Phe Ala Ala Ala Gln Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>102
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>102
Ala Ala Phe Ala Ala Ala Val Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>103
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>103
Ala Ala Phe Ala Ala Ala Phe Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>104
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>104
Ala Ala Phe Ala Ala Ala Thr Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>105
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>105
Ala Ala Phe Ala Ala Ala Ala Thr Lys Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>106
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>106
Ala Ala Phe Ala Ala Ala Ala Thr Glu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>107
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>107
Ala Ala Phe Ala Ala Ala Ala Thr Gln Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>108
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>108
Ala Ala Phe Ala Ala Ala Ala Thr Val Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>109
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>109
Ala Ala Phe Ala Ala Ala Ala Thr Phe Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>110
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>110
Ala Ala Phe Ala Ala Ala Ala Thr Ile Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>111
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>111
Ala Ala Phe Ala Ala Ala Ala Thr Leu Glu Ala Ala Ala
1 5 10
<210>112
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>112
Ala Ala Phe Ala Ala Ala Ala Thr Leu Gln Ala Ala Ala
1 5 10
<210>113
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>113
Ala Ala Phe Ala Ala Ala Ala Thr Leu Val Ala Ala Ala
1 5 10
<210>114
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>114
Ala Ala Phe Ala Ala Ala Ala Thr Leu Phe Ala Ala Ala
1 5 10
<210>115
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>115
Ala Ala Phe Ala Ala Ala Ala Thr Leu Arg Ala Ala Ala
1 5 10
<210>116
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>116
Ala Ala Phe Ala Ala Ala Ala Thr Leu Lys Lys Ala Ala
1 5 10
<210>117
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>117
Ala Ala Phe Ala Ala Ala Ala Thr Leu Lys Glu Ala Ala
1 5 10
<210>118
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>118
Ala Ala Phe Ala Ala Ala Ala Thr Leu Lys Gln Ala Ala
1 5 10
<210>119
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>119
Ala Ala Phe Ala Ala Ala Ala Thr Leu Lys Val Ala Ala
1 5 10
<210>120
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>120
Ala Ala Phe Ala Ala Ala Ala Thr Leu Lys Phe Ala Ala
1 5 10
<210>121
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>121
Ala Ala Phe Ala Ala Ala Ala Thr Leu Lys Ile Ala Ala
1 5 10
<210>122
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>122
Ala Ala Phe Ala Ala Ala Ala Thr Leu Lys Ala Lys Ala
1 5 10
<210>123
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>123
Ala Ala Phe Ala Ala Ala Ala Thr Leu Lys Ala Glu Ala
1 5 10
<210>124
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>124
Ala Ala Phe Ala Ala Ala Ala Thr Leu Lys Ala Gln Ala
1 5 10
<210>125
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>125
Ala Ala Phe Ala Ala Ala Ala Thr Leu Lys Ala Val Ala
1 5 10
<210>126
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>126
Ala Ala Phe Ala Ala Ala Ala Thr Leu Lys Ala Phe Ala
1 5 10
<210>127
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>127
Ala Lys Phe Val Lys Ala Asn Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>128
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>128
Ala Lys Phe Val Lys Ala Asn Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>129
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>129
Ala Lys Phe Val Lys Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>130
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>130
Ala Lys Phe Val Lys Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>131
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>131
Ala Lys Phe Val Trp Ala Asn Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>132
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>132
Ala Lys Phe Val Trp Ala Tyr Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>133
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>133
Ala Lys Phe Val Trp Ala Val Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>134
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>134
Ala Lys Phe Val Tyr Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>135
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>135
Ala Arg Phe Val Arg Ala Asn Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>136
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>136
Ala Lys Phe Val Lys Ala His Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>137
<400>137
000
<210>138
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>138
Ala Lys Phe Val Ala Ala Asn Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>139
<400>139
000
<210>140
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>140
Ala Lys Phe Val Ala Ala Tyr Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>141
<400>141
000
<210>142
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>142
Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>143
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>143
Ala Lys Phe Val Ala Ala Lys Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>144
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>144
Ala Lys Phe Val Ala Ala His Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>145
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>145
Ala Lys Phe Val Ala Ala Ala Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>146
<211>16
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<400>146
Lys Ser Ser Ala Lys Phe Val Met Ala Ala Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10 15
<210>147
<211>14
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(1)...(1)
<223>Xaa＝任何氨基酸
<221>MOD_RES
<222>(2)...(2)
<223>Xaa＝Ala或Lys
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝Tyr，Phe或丙氨酸环己酯
<221>MOD_RES
<222>(4)...(6)
<223>Xaa＝Ala，Ile，Ser，Glu或Val
<221>MOD_RES
<222>(7)...(7)
<223>Xaa＝Ala，Ile，Ser，Glu或Val，位置7的Xaa可以存在或不存在
<221>MOD_RES
<222>(11)...(12)
<223>Xaa＝Ala，Ser或Val
<221>MOD_RES
<222>(13)...(14)
<223>Xaa＝Ala，Ser或Val，位置13和14的Xaa可以存在或不存在
<400>147
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Thr Leu Lys Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5 10
<210>148
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(1)...(1)
<223>Xaa＝任何氨基酸
<221>MOD_RES
<222>(2)...(2)
<223>Xaa＝Ala或Lys
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝Tyr，Phe或丙氨酸环己酯
<221>MOD_RES
<222>(4)...(6)
<223>Xaa＝Ala，Ile，Ser，Glu或Val
<221>MOD_RES
<222>(7)...(7)
<223>Xaa＝Ala，Ile，Ser，Glu或Val，位置7的Xaa可以存在或不存在
<221>MOD_RES
<222>(10)...(11)
<223>Xaa＝Ala，Ser或Val
<221>MOD_RES
<222>(12)...(13)
<223>Xaa＝Ala，Ser或Val，位置13和14的Xaa可以存在或不存在
<400>148
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Lys Thr Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5 10
<210>149
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(1)...(1)
<223>Xaa＝任何氨基酸
<221>MOD_RES
<222>(2)...(2)
<223>Xaa＝Ala或Lys
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝Tyr，Phe或丙氨酸环己酯
<221>MOD_RES
<222>(4)...(6)
<223>Xaa＝Ala，Ile，Ser，Glu或Val
<221>MOD_RES
<222>(7)...(7)
<223>Xaa＝Ala，Ile，Ser，Glu或Val，位置7的Xaa可以存在或不存在
<221>MOD_RES
<222>(12)...(13)
<223>Xaa＝Ala，Ser或Val
<221>MOD_RES
<222>(14)...(15)
<223>Xaa＝Ala，Ser或Val，位置13和14的Xaa可以存在或不存在
<400>149
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Trp Thr Leu Lys Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5 10 15
<210>150
<211>4
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>在pan DR结合肽式R1-R2-R3-R4-R5中的任选的R4
<400>150
Trp Thr Leu Lys
1
<210>151
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>151
Ala Ala Xaa Ala Ala Ala Lys Thr Ala Ala Ala Ala Ala
1 5 10
<210>152
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>152
Ala Ala Xaa Ala Ala Ala Ala Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>153
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>153
Ala Ala Xaa Val Ala Ala Ala Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>154
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>154
Ala Ala Xaa Ile Ala Ala Ala Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>155
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(1)...(2)
<223>Xaa＝任何氨基酸
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝Tyr，Phe或丙氨酸环己酯
<221>MOD_RES
<222>(4)...(6)
<223>Xaa＝任何氨基酸
<221>MOD_RES
<222>(7)...(8)
<223>Xaa＝任何氨基酸，位置7和8的Xaa可以存在或不存在
<221>MOD_RES
<222>(12)...(13)
<223>Xaa＝任何氨基酸
<400>155
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Thr Leu Lys Xaa Xaa
1 5 10
<210>156
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(1)...(2)
<223>Xaa＝任何氨基酸
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝Tyr，Phe或丙氨酸环己酯
<221>MOD_RES
<222>(4)...(6)
<223>Xaa＝任何氨基酸
<221>MOD_RES
<222>(7)...(8)
<223>Xaa＝任何氨基酸，位置7和8的Xaa可以存在或不存在
<221>MOD_RES
<222>(11)...(12)
<223>Xaa＝任何氨基酸
<400>156
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Lys Thr Xaa Xaa
1 5 10
<210>157
<211>14
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(1)...(2)
<223>Xaa＝任何氨基酸
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝Tyr，Phe或丙氨酸环己酯
<221>MOD_RES
<222>(4)...(6)
<223>Xaa＝任何氨基酸
<221>MOD_RES
<222>(7)...(8)
<223>Xaa＝任何氨基酸，位置7和8的Xaa可以存在或不存在
<221>MOD_RES
<222>(13)...(14)
<223>Xaa＝任何氨基酸
<400>157
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Trp Thr Leu Lys Xaa Xaa
1 5 10
<210>158
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>pan DR结合肽
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>158
Ala Lys Xaa Ala Ala Ala Ala Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>159
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>肺炎链球菌多糖6B/pan DR结合肽序列SEQ ID NO：6缀合物
<221>MOD_RES
<222>(1)...(1)
<223>Xaa＝Ala，其缀合到肺炎链球菌多糖6B上
<400>159
Xaa Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>160
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>肺炎链球菌多糖4/pan DR结合肽SEQ ID NO：6缀合物
<221>MOD_RES
<222>(1)...(1)
<223>Xaa＝Ala，其缀合到肺炎链球菌多糖4上
<400>160
Xaa Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>161
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>肺炎链球菌多糖9V/pan DR结合肽SEQ ID NO：6缀合物
<221>MOD_RES
<222>(1)...(1)
<223>Xaa＝Ala，其缀合到肺炎链球菌多糖9V上
<400>161
Xaa Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>162
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>肺炎链球菌多糖14/pan DR结合肽SEQ ID NO：6缀合物
<221>MOD_RES
<222>(1)...(1)
<223>Xaa＝Ala，其缀合到肺炎链球菌多糖14上
<400>162
Xaa Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>163
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>肺炎链球菌多糖18C/pan DR结合肽SEQ ID NO：6缀合物
<221>MOD_RES
<222>(1)...(1)
<223>Xaa＝Ala，其缀合到肺炎链球菌多糖18C上
<400>163
Xaa Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>164
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>肺炎链球菌多糖19F/pan DR结合肽SEQ ID NO：6缀合物
<221>MOD_RES
<222>(1)...(1)
<223>Xaa＝Ala，其缀合到肺炎链球菌多糖19F上
<400>164
Xaa Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>165
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>肺炎链球菌多糖23F/pan DR结合肽SEQ ID NO：6缀合物
<221>MOD_RES
<222>(1)...(1)
<223>Xaa＝Ala，其缀合到肺炎链球菌多糖23F上
<400>165
Xaa Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>166
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>肺炎链球菌多糖4/pan DR结合肽SEQ ID NO：5缀合物
<221>MOD_RES
<222>(1)...(1)
<223>Xaa＝Ala，其缀合到肺炎链球菌多糖4上
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>166
Xaa Lys Xaa Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>167
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>肺炎链球菌多糖9V/pan DR结合肽SEQ ID NO：5缀合物
<221>MOD_RES
<222>(1)...(1)
<223>Xaa＝Ala，其缀合到肺炎链球菌多糖9V上
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>167
Xaa Lys Xaa Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>168
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>肺炎链球菌多糖14/pan DR结合肽SEQ ID NO：5缀合物
<221>MOD_RES
<222>(1)...(1)
<223>Xaa＝Ala，其缀合到肺炎链球菌多糖14上
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>168
Xaa Lys Xaa Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>169
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>肺炎链球菌多糖18C/pan DR结合肽SEQ ID NO：5缀合物
<221>MOD_RES
<222>(1)...(1)
<223>Xaa＝Ala，其缀合到肺炎链球菌多糖18C上
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>169
Xaa Lys Xaa Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala A1a
1 5 10
<210>170
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>肺炎链球菌多糖19F/pan DR结合肽SEQ ID NO：5缀合物
<221>MOD_RES
<222>(1)...(1)
<223>Xaa＝Ala，其缀合到肺炎链球菌多糖19F上
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>170
Xaa Lys Xaa Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210>171
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>肺炎链球菌多糖23F/pan DR结合肽SEQ ID NO：5缀合物
<221>MOD_RES
<222>(1)...(1)
<223>Xaa＝Ala，其缀合到肺炎链球菌多糖23F上
<221>MOD_RES
<222>(3)...(3)
<223>Xaa＝丙氨酸环己酯
<400>171
Xaa Lys Xaa Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
Claims (17)
1.一种组合物，其包括来自不同的肺炎链球菌血清型的至少2种肺炎链球菌被膜多糖的混合物，其中来自每种血清型的所述被膜多糖缀合到独立的多肽上，所述多肽包括pan DR结合肽序列，所述pan DR结合肽序列独立地选自式R1-R2-R3-R4-R5，其中：
R1是两个氨基酸，其中在后的氨基酸为丙氨酸或赖氨酸；
R2是选自由酪氨酸、苯丙氨酸或环己丙氨酸组成的组；
R3是3或4个氨基酸，其中每个氨基酸独立地选自由丙氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、谷氨酸和缬氨酸组成的组；
R4是选自由苏氨酸-亮氨酸-赖氨酸、赖氨酸-苏氨酸、或色氨酸-苏氨酸-亮氨酸-赖氨酸组成的组；和，
R5由由2-4个氨基酸组成的前面部分和由单独氨基酸组成的后面部分组成，其中所述2-4个氨基酸中的每个独立地选自由丙氨酸、丝氨酸和缬氨酸组成的组。
2.权利要求1的组合物，其包括来自下述血清型的至少任意5种的被膜多糖：1，2，3，4，5，6B，7F，8，9N，9V，10A，11A，12F，14，15B，17F，18C，19A，19F，20，22F，23F，33F，6A，7A，7B，7C，9A，9L，12A，13，15A，15C，16F，18A，18B，18F，19B，19C，21，22A，23A，23B，24F，25，27，29，31，34，35，38，45，或46，其中每种多糖缀合到包括pan DR结合肽序列的独立的多肽上。
3.权利要求1的组合物，其中所述被膜多糖从每种血清型的细菌纯化而来并且缀合到所述多肽上。
4.权利要求3的组合物，其中来自每种血清型的被膜多糖独立地缀合到包括pan DR肽的多肽上，并且随后将由此获得的缀合物组合以形成缀合物的混合物。
5.权利要求3的组合物，其中来自每种血清型的被膜多糖组合形成多糖的混合物，并且随后将所述混合物缀合到包括pan DR结合肽的多肽上。
6.权利要求1的组合物，其中包括pan DR结合肽的多肽包括氨基酸序列AKXVAAWTLKAAA(SEQ ID NO：5)，aKXVAAWTLKAAa，AKFVAAWTLKAAA(SEQ ID NO：6)，或aKFVAAWTLKAAa，其中X是环己丙氨酸。
7.一种制备肺炎链球菌疫苗的方法，所述方法包括，
将来自不同的肺炎链球菌血清型的至少2种肺炎链球菌被膜多糖缀合到2种独立的多肽上，每种多肽包括pan DR结合肽序列，所述pan DR结合肽序列选自式R1-R2-R3-R4-R5，其中：
R1是两个氨基酸，其中在后的氨基酸为丙氨酸或赖氨酸；
R2是选自由酪氨酸、苯丙氨酸或环己丙氨酸组成的组；
R3是3或4个氨基酸，其中每个氨基酸独立地选自由丙氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、谷氨酸和缬氨酸组成的组；
R4是选自由苏氨酸-亮氨酸-赖氨酸、赖氨酸-苏氨酸、或色氨酸-苏氨酸-亮氨酸-赖氨酸组成的组；和，
R5由由2-4个氨基酸组成的前面部分和由单独氨基酸组成的后面部分组成，其中所述2-4个氨基酸中的每个独立地选自由丙氨酸、丝氨酸和缬氨酸组成的组。
8.权利要求7的方法，其包括来自下述血清型的至少任意5种的被膜多糖：1，2，3，4，5，6B，7F，8，9N，9V，10A，11A，12F，14，15B，17F，18C，19A，19F，20，22F，23F，33F，6A，7A，7B，7C，9A，9L，12A，13，15A，15C，16F，18A，18B，18F，19B，19C，21，22A，23A，23B，24F，25，27，29，31，34，35，38，45，或46，其中每种多糖缀合到包括pan DR结合肽序列的独立的多肽上。
9.权利要求7的方法，其中来自每种血清型的所述被膜多糖独立地缀合到包括pan DR结合肽的多肽上，并且随后将由此获得的缀合物组合以形成缀合物的混合物。
10.权利要求7的方法，其中来自每种血清型的被膜多糖组合形成多糖的混合物，并且随后将所述混合物缀合到包括pan DR结合肽的多肽上。
11.权利要求7的方法，其中每种所述多肽包括氨基酸序列AKXVAAWTLKAAA(SEQ ID NO：5)，aKXVAAWTLKAAa，AKFVAAWTLKAAA(SEQ ID NO：6)，或aKFVAAWTLKAAa，其中X是环己丙氨酸。
12.一种在哺乳动物中诱导免疫应答的方法，所述方法包括，
给所述哺乳动物施用来自不同的肺炎链球菌血清型的至少2种肺炎链球菌被膜多糖的混合物，其中来自每种血清型的所述被膜多糖缀合到独立的pan DR结合肽序列上，所述pan DR结合肽序列选自式R1-R2-R3-R4-R5，其中：
R1是两个氨基酸，其中在后的氨基酸为丙氨酸或赖氨酸；
R2是选自由酪氨酸、苯丙氨酸或环己丙氨酸组成的组；
R3是3或4个氨基酸，其中每个氨基酸独立地选自由丙氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、谷氨酸和缬氨酸组成的组；
R4是选自由苏氨酸-亮氨酸-赖氨酸、赖氨酸-苏氨酸、或色氨酸-苏氨酸-亮氨酸-赖氨酸组成的组；和，
R5由由2-4个氨基酸组成的前面部分和由单独氨基酸组成的后面部分组成，其中所述2-4个氨基酸中的每个独立地选自由丙氨酸、丝氨酸和缬氨酸组成的组。
13.权利要求12的方法，其包括来自下述血清型的至少任意5种的被膜多糖：1，2，3，4，5，6B，7F，8，9N，9V，10A，11A，12F，14，15B，17F，18C，19A，19F，20，22F，23F，33F，6A，7A，7B，7C，9A，9L，12A，13，15A，15C，16F，18A，18B，18F，19B，19C，21，22A，23A，23B，24F，25，27，29，31，34，35，38，45，或46，其中每种多糖缀合到包括pan DR结合肽序列的独立的多肽上。
14.权利要求12的方法，其中所述被膜多糖从适当的血清型的细菌纯化而来，并且缀合到所述多肽上。
15.权利要求12的方法，其中来自每种血清型的被膜多糖独立地缀合到包括pan DR结合肽的多肽上，并且随后将由此获得的缀合物组合以形成缀合物的混合物。
16.权利要求12的方法，其中来自每种血清型的被膜多糖组合形成多糖的混合物，并且随后将所述混合物缀合到包括pan DR结合肽的多肽上。
17.权利要求12的方法，其中包括pan DR结合肽的多肽包括氨基酸序列AKXVAAWTLKAAA(SEQ ID NO：5)，aKXVAAWTLKAAa，AKFVAAWTLKAAA(SEQ ID NO：6)，或aKFVAAWTLKAAa，其中X是环己丙氨酸。
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Cited By (2)
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| CN109771640A (zh) * | 2019-02-28 | 2019-05-21 | 北京智飞绿竹生物制药有限公司 | 多价肺炎球菌结合疫苗 |
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