CN1993089A - 以膝沟藻毒素治疗伤口的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供含有三环3，4－propino－全氢化嘌呤的药物组合物，及其在治疗伤口、肛裂、弛缓不能、上部和下部食道括约肌失调、胃轻瘫、肥厚性幽门狭窄、痔疮、痉挛性肛部痛、肠易激综合征、肌肉痉挛、血管痉挛病、与子宫有关的病症、或膀胱痉挛、Oddi括约肌功能障碍、和短节段先天性巨结肠中的应用。本发明还提供将本发明的组合物局部或注射施用至肌肉或肌肉附近，治疗伤口和肌肉病症的方法。

Description

以膝沟藻毒素治疗伤口的方法

技术领域

本发明涉及含有杂环胍型化合物的药物组合物，及其在治疗伤口中的应用。更具体地，本发明涉及三环3，4-propino-全氢化嘌呤，及其在治疗伤口中的应用，特别是用于治疗肛裂和其他疾病。

背景技术

麻痹性贝类中毒(PSP)由藻类毒素的混合物导致，所述藻类毒素与可兴奋细胞中发现的位于电压门控钠通道上的受体位点可逆结合。主要临床症状是急性麻痹性疾病。藻类毒素或蛤蚌毒素由微小的浮游藻类产生。这些毒素聚集在滤食性生物中，如双壳类。食用被藻类毒素污染的贝类在人类中会导致六种疾病：PSP，腹泻性贝毒中毒(DSP)，失忆性贝毒中毒(ASP)，神经毒性贝毒中毒(NSP)，雪卡毒素(ciguatera)中毒(CP)和兰细菌(cyanobacterial)中毒(CNP)。

引起PSP的藻类毒素有一个共同结构，3，4，6-三烷基(trialquil)四氢嘌呤。二十六个天然产生的藻类毒素已被描述。这些藻类毒素是非蛋白、分子量介于280和450道尔顿之间的低分子量化合物。在贝类提取物中发现的这些藻类毒素中，膝沟藻毒素(gonyautoxin)(GTX)量最大，占总体毒素含量的80％以上。

这些藻类毒素的高度毒性是由于对可兴奋细胞中位于电压门控钠通道上的受体位点可逆性结合，因此阻断了钠离子的流入，并防止了神经和肌肉细胞产生动作电位，从而阻断了神经传递并通过呼吸骤停和心血管休克导致哺乳动物死亡。少量应用这些藻类毒素能产生横纹肌的无力性麻痹，时程依赖于剂量。

肌张力对于组织康复可能有负影响，并且是确定疤痕形成程度的主要因素之一。外科医生已在寻找减少疤痕过度形成的方法，并通过采取步骤克服肌张力对伤口愈合过程的影响来寻找促进伤口愈合的方法，包括各种缝合技术、类固醇注射、破坏伤口边缘和把切口形成平行于松驰的表皮张力线。

肛裂是肛管中的伤口或破裂，可以从皮肤与粘膜交界处延伸至齿状线。这种常见问题导致了相当高的死亡率，在两性中的发生率几乎相等，并且不加以干预难以愈合。典型症状是排便期间或之后疼痛，这种疼痛可能很重并持续数小时。很多情况下，厕纸上可出现鲜血。同完全治愈的动因一样，慢性肛裂的原因不明。这种病症的主要特性，包括好发于后正中线以及在肛裂部位缺少肉芽组织，也没有得到解释。

肛门内括约肌的痉挛与肛裂有关。治疗方法集中于缓解括约肌的张力亢进。慢性肛裂的最常见治疗是侧方内括约肌切断术。该手术方法的根本问题在于永久改变了对气体、粘液和粪便的控制。用于暂时产生括约肌切断术作用的药物治疗能降低肛门张力。此类方法包括注射BoTox和局部应用硝酸甘油或硝苯地平药膏。

硝酸甘油治疗慢性肛裂，在二至六个月内治愈率为36至60％。安慰剂治疗慢性肛裂的治愈率为50％。用硝酸甘油治疗导致中度至重度头痛，长期治疗(超过三个月)导致MRP降低17至38％，但对MVCP没有显著改变。

局部应用硝苯地平，在六周内产生的治愈率为50至94.55。局部应用不产生明显副作用，并将MRP从基线减少了11％，而未导致MVCP有任何改变。在两种药膏治疗中，复发是经常的问题，硝酸甘油治疗的患者有31％的复发率，硝苯地平的患者有42％的复发率。

BoTox用在特发性肛裂患者中，两至六个月的治愈率为60至96％。治愈率与用药剂量有关，使用两种剂量的Botox能产生96％的治愈。该治疗导致所有患者在注射后5天的肛门张力降低。注射BoTox两个月后，MRP降低28.4％，MVCP没有明显改变。BoTox治疗可产生3个月以上的化学去神经作用，以及10％的暂时性大便失禁和20％的复发率。

对于伤口愈合和/或降低疤痕组织形成，一直存在着安全、有效和可以长期治疗的需求。

发明概述

根据本发明的目的，提供了应用麻痹性贝类毒素的新方法。

本发明的一个方面，提供了以包含一种或多种三环3，4-propino-全氢化嘌呤的本发明组合物治疗伤口的方法。

本发明的另一个方面，提供了治疗肛裂的方法。

本发明的另一个方面，在本发明的方法及本发明组合物中，与有效量的另一种神经毒素和/或局部麻醉剂合用。

发明详细描述

根据本发明，已发现包含杂环胍型化合物，更具体为三环3，4-propino-全氢化嘌呤的组合物，能用于某些临床应用，以避免或最小化对手术的需求，或者防止发生副作用、过敏、免疫注射或血肿，或使其最小化。某些方面，本发明部分基于减少或消除通过肌肉对伤口发挥作用的张力。某些方面，本发明部分基于由本发明各种方法中的某些杂环胍类化合物提供的、令人惊异的持久作用。

某些方面，本发明依赖于给药化学去神经剂(chemodenervatingagent)，松弛或麻痹能施加张力的肌肉，从而提供改进的伤口愈合或肌肉相关病症的治疗。其他优势，如出人意料的持久作用，以及避免采取其他措施降低肌张力的能力，已被本发明的某些方面所认识。

在详细描述本发明之前，应认识到本发明并不局限于特定给药系统、装置的结构、增强剂或载体。还要认识到本文所用的术语仅为了描述具体实施方式的目的，不是为了限定。

必须要注意，本说明书和权利要求书中所用的单数形式包括复数的指示物，除非文中另有明确指示。因此，举例来说，提到“一种药学活性剂”包括两种或多种活性剂的混合物，提及“一种增强剂”包括两种或多种增强剂，等等。

在描述和主张本发明中，下列术语将根据以下表述的定义使用。

术语“处理”和“治疗”用于本文指减少症状的严重度和/或频率、消除症状和/或潜在病因、预防症状出现和/或其潜在病因以及伤害的改善或纠正。本方法的“处理”患者，作为用在本文的术语，因而涵盖了在易感个体中预防一种或多种症状或者潜在病因，以及在出现临床症状的个体中治疗一种或多种症状或者潜在病因。

术语“活性”、“活性剂”、“药物”和“药学活性剂”本文可交互使用，指诱导所需作用的化学物质或化合物，并包括有治疗作用、预防作用、或美容作用的药剂。还包括这些化合物的衍生物、代谢物和类似物，或者特别提及的也能引起所需作用的化合物的类别。

“治疗有效”量意即活性剂的无毒但充分的量，以提供所需的治疗作用。

“经皮”给药意即给药到个体的皮肤表面，致使药物通过皮肤组织进入个体血流，从而产生全身作用。术语“经皮”旨在包括“经粘膜”给药，即，给药药物到个体的粘膜(如，舌下，口腔，阴道，直肠)表面，使药物通过粘膜组织进入个体血流。

术语“局部用药”采用了其传统意思，意即药学活性剂局部给药至皮肤或粘膜，举例的正如在各种皮肤病症的治疗中。局部给药，与经皮给药相反，提供的是局部的而不是全身的作用。除了其他的明指或暗示，术语“局部给药”和“经皮给药”可交互使用。

如本文所用，“有效量”是指足以干扰神经元传递的量，干扰神经元传递的方法是通过至少部分阻断神经肌肉板中神经递质乙酰胆碱的突触前释放，从而干扰传递，麻痹肌肉并防止其收缩，或使收缩的肌肉松弛。

给药量以活性单位计。一个活性单位对应的本发明的组合物的量，必须阻断20克重的CF1白化症小鼠或BALB-C种系小鼠的腿部股二头肌的肌肉收缩达1.5至2.0小时。毒素经肌内注射到小鼠右腿的股二头肌，体积为0.5ml。左腿用作对照。

为了测定用于每个剂量的毒素量，可以执行高效液相色谱(HPLC)分析并联用荧光检测(HPLC-FLD)。该方法可在任何混合物、提取物或药学制剂中测定每种毒素的质量。

本文所用的“载体”或“媒介物”指适于经皮给药的载体物质。本文中有用的载体和媒介物包括本领域已知的任何物质，其无毒并且不与组合物中的其他成分以有害的方式相互作用。

术语“含水的”指制剂或给药系统含水，或者在施用到皮肤或粘膜组织后变得含水。

本发明的方法可用于伤口愈合。更具体地，本发明的方法对病症治疗有用包括，但不限于，改善伤口愈合、迟缓不能和肛裂。

本发明的组合物包含有效量的至少一种三环3，4-propino-全氢化嘌呤，由如下所示的式(I)代表：

                        式(I)

其中R₁和R₅独立选自-H和-OH；R₂和R₃独立选自-H和-SO₃；R₄选自-H、-OH、-COONH₂、-COONHSO^- ₃和-COOCH₃，条件是R₂和R₃的其中之一必须为-SO^- ₃，或者R₄必须为-COONHSO^- ₃，和药学可接受的局部载体。

根据本发明，优选的三环3，4-propino-全氢化嘌呤是如下表所示的式(I)的膝沟藻毒素(gonyautoxin)(以下为“GTX)。

化合物	R1	R2	R3	R4	R5
						膝沟藻毒素1	-OH	-H	-SO- 3	-COONH2	-OH
膝沟藻毒素2	-H	-H	-SO- 3	-COONH2	-OH
						膝沟藻毒素3	-H	-SO- 3	-H	-COONH2	-OH
膝沟藻毒素4	-OH	-SO- 3	-H	-COONH2	-OH
						膝沟藻毒素5	-H	-H	-H	-COONHSO- 3	-OH

在本发明的一个方面中，本发明的药物组合物包含至少一种GTX化合物，选自GTX1、GTX2、GTX3、GTX4和GTX5。在本发明的另一方面，药物组合物包括三环3，4-propino-全氢化嘌呤的混合物。举例来说，可以考虑两种或多种GTX化合物的混合物。本发明的一种实施方式采用了比率大约为2∶1的GTX2和GTX3的混合物。本发明的另一种实施方式采用了GTX1、GTX2、GTX3和GTX4的混合物。本领域技术人员应当认识到，在上述式(I)所说明的条件下，三环3，4-propino-全氢化嘌呤的其他混合物以及组合物，也在本发明的范围内。

与A型肉毒毒素不同，这些制剂在室温下稳定，不需要冷藏，可消毒，基本上是非致敏性的，性质不是肽类，基本上立即发挥作用，可以多次使用而没有明显的、严重的副作用。

式(I)的化合物可以从涡鞭毛藻(dinoflagellate)或兰细菌中提纯，也可以通过被高度污染的软体动物收集，从中还可以提纯。可以用任何药学可接受的载体，包括，但不限于，水、醋酸、和盐溶液。醋酸和0.09％的氯化钠溶液是优选的载体物质。

另外，本发明的药物组合物至少包括上面讨论的GTX化合物，以及还包括至少一种化合物，选自蛤蚌毒素(STX)、新蛤蚌毒素、脱氨甲酰蛤蚌毒素、破伤风毒素、和A型肉毒毒素。组合可用于本发明组合物所用的任何应用。

另一个方面，本发明的组合物可以与有效量的局部麻醉剂联用。在此方面，本发明的药物组合物包含有效量的局部麻醉剂如苯佐卡因、丁卡因、甲哌卡因、丙胺卡因、替卡因、布比卡因、利多卡因或类似的局麻剂及其组合，以及有效量的至少一种三环3，4-propino-全氢化嘌呤。需要的话，本发明的组合物还可以和一种或多种神经毒素以及一种或多种局麻药联用。

不受理论的约束，局部应用时，这些化合物通过与存在于所有神经元和可兴奋细胞中的唯一生物分子受体，即压力门控钠通道可逆结合，阻断神经脉冲的扩散，或神经元传递，从而表现出影响解痉作用。通过与该通道结合，钠不再进入神经细胞，不再发生去极化，从而停止了冲动的传播。该作用机制在神经肌肉板中，至少部分阻滞了神经递质乙酰胆碱的突触前释放，从而干扰了神经肌肉传递，麻痹肌肉并防止其收缩，或松弛由病理原因产生的肌肉收缩。

本发明的药学制剂可以以任何适当的方式应用，如局部、经皮或注射。在优选实施方式中，本发明的制剂局部应用在需要麻痹或防止收缩的肌肉附近。所用的量应当是每剂足以向肌肉提供1-1000个活性单位，更优选每剂10-1000个活性单位。作用立即出现，一般发生在活性化合物通过皮肤渗透后最多30秒至5分钟以内。最大作用一般在活性化合物透入皮肤后15分钟内达到。该作用时程取决于给药剂量、施药的肌肉、以及给药体积和具体给药的组合物。这是所有的临床应用和病症的模式。

令人惊讶地发现，本发明的某些方法不仅提供了实际上的即时麻醉作用和肌肉松弛作用，还把有益的肌肉松弛作用提供了出乎意料的长时间。结果是，由于已发现出乎意料的较长时期的肌松作用能促进愈合过程，本发明的某些方法尤为适合伤口愈合和上述其它适应症的治疗。

更优选每剂包括超过32活性单位直至最高为约5000活性单位。甚至更优选每剂包括超过32至约1000活性单位，更优选从超过40至约1000活性单位，并且更优选从约50至约500活性单位。更优选每剂包括约75活性单位至约200活性单位。需要的话，剂量可以不时重复，以保持肌肉松弛直至达到所需作用。

根据本发明的一个方法，哺乳动物的治疗是将本发明的组合物直接局部注射进肌肉或肌肉附近。在一些实施方式中，注射部位的肌肉显出张力提高或痉挛，虽然对于所有的治疗有效性而言，这不是必然的。

每次注射可以限于不超过两毫升的组合物，包括溶剂、佐剂和/或载体物质。给药可以，举例，使用带有27至30号针的一毫升结核菌素型一次性注射器。另外，对于某些方法，可能需要使用诸如美国专利No.5,674,205所描述的内窥镜给药，其公开内容在此引作参考，为本发明方法所适用的内窥镜提供详情。

另外，本发明的药物组合物可以以局部制剂的形式局部应用。为了形成局部制剂，有效量的本发明药物组合物被加至药理可接受的局部载体中。该组合物局部应用时，可以是适合体表应用的任何形式，并可以包括，举例，膏剂、乳剂、溶液、凝胶、油膏、糊剂等等，和/或还可制备使之含有脂质体、胶束、和/或微球。以制剂重量为基准，局部制剂可以包括从约0.0001重量％至约0.01重量％的GTX化合物。此外，以制剂重量为基准，局部制剂可包括从约0.001重量％至约0.01重量％的GTX化合物。

组合物可以直接应用至体表，或可参与给药装置的使用。因此，制剂或蓄药库可以是水性的，即含水，或者是非水性的并与封闭覆盖层合用，从而在给药期间，体表蒸发的水分可以保留在制剂或经皮系统内。但是某些情况下，如用封闭凝胶，使用非水制剂可以具有或不具有封闭层。

在后面的实施例中，“剂量”指对患者一次给药期间所用的毒素量。剂量可以用至一个或多个部位。“治疗”指患者施用后达到所需作用的剂量总数。通过小鼠分析测定的100单位GTX2和GTX3的混合物，与通过HPLC-FLD测定的25μg GTX2和GTX3相当。

实施例1

对24和48岁之间、括约肌张力正常的10名健康成年男性(肛管直肠测压法测得静息压力低于72mmHg)进行研究。检查的受试者没有肛管直肠病状，如痔疮、瘘管或脓肿。在介入之前，进行的检查包括肛管直肠测压法、肌电图、血象、基础代谢板(basic metabolic panel)和尿液分析。

GTX2和GTX3以比率大约2∶1组合后的100活性单位的剂量，总体积1.0ml，用胰岛素注射器局部浸润肛门内括约肌的两侧(每侧0.5ml)。GTX2和GTX3混合物是用标准纯化方法，从智利的Patagonia海湾收集的贝类中提纯的，该贝类已发现被PSP毒素高度污染。

注射后两分钟进行肛管直肠测压。测定和记录静息和自发收缩压，与基础测定值比较。在注射毒素之前和之后，每位参加者还进行了直肠-肛门和皮层-肛门反射的测定和记录。肛管压力是通过带有充水微囊的定点牵拉技术和外部转换器(PVB)灌注设备来记录。追踪的记录和分析以计算机化的系统进行(8道多导生理记录仪(Polygraph ID)，Metronic Polygraph with Polygram 98 ver.2.2)。

肛门静息压力用定点牵拉技术记录为水银的毫米数和计算机识别平均压。通过测定每名参加者的肛门括约肌的自发收缩，评价最大自发收缩。幅度表达为水银的毫米数。

在24和48小时、一周后和12天后，对参加者进行评定。注射后一周采集每名参加者的血尿样本进行化验室分析。尿中的毒素水平在注射后4小时测定。每次访问记录脉搏和血压，以及任何副作用和疼痛分数。注射的疼痛分数和注射后两分钟的疼痛通过采用1-10分的疼痛标度，询问参加者判定，10分是最大疼痛分值。

通过与参加者个人交流以及通过询问参加者进行临床检查，在中位随访值为12个月后，测定远期结果。

没有参加者从研究中退出，并且无人有不良的或负性的副作用。化验室检查没有任何显著改变，注射后4小时采集的尿样中没有测到毒素。毒素的检测通过分析用高效液相色谱(HPLC)联用荧光检测进行；该方法的检测限是1mg/10ml。这也与事实相对应，即PSP毒素，一旦注射，立即进入细胞外基质产生稀释。

表1是检查结果的汇总。如表1所示，所有的参加者显示出注射后30秒内肛门括约肌松弛，这在注射期间通过临床肛管直肠检查测定，然后在两分钟后用肛管直肠测压法测定。参加者都陈述他们感到肛门麻木，平均时间为59.5分钟±7.12分钟(平均值±标准差)，以及括约肌低张力的感觉，平均时间为40.0±4.20分钟。没有参加者显示出排气失禁或短暂的大便失禁。

表1  症状和副作用

健康成年志愿者	10
		注射期间的疼痛(在1-10分标度上)	5.55±0.4
注射后2分钟的疼痛	100％无痛
		肛门麻木感(时间)	59.50±7.12分钟(n＝9)
括约肌松弛感	40.0±4.20分钟(n＝9)
		排气失禁	无
大便失禁	无
		临床评价	立即松弛
副作用	无
		其他	24小时后均无症状

表2是肛管直肠测压记录的汇总。测压记录显示肛门最大自发收缩压显著降低。注射后两分钟，压力为基线值的55.2±6.2％(平均值±标准差)，减小了44.8％。注射后24小时，肛门最大自发收缩压的下降增至基线值的53％。注射后15天，所有的肛门最大自发收缩压力恢复至基线值。注射前和注射后记录的肌电图(EMG)指示，注射几乎消除了肌肉的活性。在12个月的随访检查中(长期随访)，没有参加者显示出任何不良的或全身的副作用(即肛管直肠问题)。

表2肛管直肠测压记录

最大静息压	66±5.8mmHg(n＝10)
		最大自发收缩压(MVCP)
注射前	126±11.5mmHg(n＝10)
		注射后2分钟	69.5±5.8mmHg(n＝10)
注射后24小时	59.2±7.2mmHg(n＝5)
		注射后2分钟的％MVCP	55.2±6.2％(n＝9)
注射后24小时的％MVCP	47.0±6.8％(n＝5)
		直肠-肛门反射(60cc后)	100％保留
皮层-肛门反射	100％保留

从表2可见，给药GTX-2和GTX-3混合物之后，在参加者中100％立即实现完全的肛门括约肌松弛。这表明局部注射这些毒素产生括约肌的局部麻痹。该松弛被注射期间肛肠医师(coloproctologist)进行的肛门临床评价所证实。注射毒素不产生任何持久的副作用如排气或大便失禁，并且直肠-肛门反射和皮层-肛门反射保持正常。注射的毒素水平阻断了多余的肌肉收缩，但留下了足够的力量提供正常性能。

毒素的局部外周应用干扰了神经肌肉的传递，改变了动作电位，导致括约肌的暂时麻痹。GTX的作用方式涉及注射的肌肉，该部位的其他肌肉不受影响。局部麻痹作用表明，括约肌的局部注射持续12天。由于没有副作用，用该毒素局部注射是安全有效的，特别是用于肛门括约肌中。愈合组织的不动性是基本的治疗原理，麻痹性毒素治疗在减轻其他病症中也是有效的，如面部痉挛、抽搐、震颤、磨牙症、一侧面痉挛、颈张力障碍、脑瘫、肌肉痉挛痛如作家或音乐家抽筋、手颤、间歇性肌张力障碍，这只列举了导致僵直和难控制的运动的肌肉高张力的一些病症。

实施例2

50名年龄在18和70岁之间、患有症状性肛裂的成年人，入选研究进行评价，通过降低肛门张力以改善愈合过程、消除手术介入的需求、以及提供安全有效的药膏替代品，从而检验GTX局部浸润的疗效在治疗肛裂中的作用。

按照下列入选标准对患者进行评价：前侧、后侧或双侧外切溃疡，内侧肛门括约肌水平纤维的边缘和后侧硬化，有便后或持久疼痛的症状，出血或兼有前者。有两次肛裂病史或病程过月的患者为慢性。表3包含了研究选择的患者的详情。年龄小于18或大于70的患者，与那些妊娠的患者，或者肛裂涉及其它病状如痔疮、瘘管或肛门脓肿的患者一样被排除出本研究。

表3肛裂患者的特点

特点	患者(N＝50)
		性别(M/F)	17/33
平均年龄(岁)	35.9±13.1
		自发疼痛(患者数)	46
便后痛(患者数)	50
		出血(患者数)	49
症状的平均时程(月)	24.4±39.7
		急性/慢性	17/33
定位(后侧/前侧/双侧)	32/8/5
		便秘史(患者数)	42
之前的保守治疗(人数)	36
		之前的手术治疗(人数)	2

本研究的治愈标准和主要终点是疼痛减轻和裂处上皮形成。参加者被充分告知GTX的作用和机制，所有入选患者均提供了书面的知情同意书。研究为随机双盲试验，其中患者经诊断和注射GTX-2和GTX-3的混合物或0.9％氯化钠的安慰剂溶液。治疗三周后，15名安慰剂处理的患者其状况没有改善甚或加重，而注射GTX的患者显示出明显的改善，为了人道和伦理的原因，研究被开放。

试验剂量由1.0ml体积中100活性单位的GTX-2和GTX-3的混合物构成，以等体积局部浸润至内肛门括约肌中的肛裂两侧。注射以胰岛素针(25号)完成。

按上述方法测定和记录肛压。注射后7、14和28天进行患者的临床评价。通过询问患者评价注射时和两分钟的疼痛，在1至10分标度上对其疼痛分级，10分是最大疼痛值。没有处方大便软化剂、大块轻泻剂或坐浴。长期结果将在12个月的随访检查中判定。

表4.患者治疗后的症状和副作用

需要的剂量数	2.6±1.3
		平均治愈时间(天)	1 7.6±9.0
注射时的疼痛	5.8±2.3
		注射后2分钟的疼痛	1.6±1.2
出血时程(第一次注射后，天)	1.2±0.9
		疼痛时程(第一次注射后，天)	2.1±0.7
排气失禁	无
		大便失禁	无
指诊(即刻括约肌松弛)	100
		副作用	患者100％无

表5肛管直肠测压记录

最大静息压(MRP)(N＝50患者)
		注射前	108.8±24.9
注射后2分钟	61.1±22.8
		注射后2分钟的％MRP	56.2±1 2.5
最大自发收缩压(MVCP)(N＝50患者)
		注射前(mmHg)	159.9±32.8

注射后2分钟	118.8±12.7
		注射后2分钟的％MVCP	74.3±13.1
反射
		直肠-肛门(％保持)	100
皮层(％保持)	100

试验期间或之后，50名本研究入选患者无人有任何不良的或负面的副作用。如表5所示，指诊和肛管直肠测压法检测到，患者100％显示出注射后即刻肛门括约肌松弛。指诊期间，肛肠医师检测到肛门张力降低，并且所有的患者主诉注射后感觉肛门麻木。注射后七天的检查显示，所有患者的肛门张力大幅降低。没有发现失禁现象，并且所有患者保持着直肠肛门和皮层-肛门反射(参见表4)。

表5表明，如测压记录所告知，所有患者的最大静息压(MRP)明显降低。MRP记录从108.8±24.9mmHg降至61.1±22.8mmHg(平均值±标准差)，降为MRP基线值的56.2±12.5。这代表平均降低了43.8％。类似地，最大自发收缩压(MVCP)也降至MVCP基线值的74.3±13.1，平均降低了25.7％。

急性肛裂患者在注射后48小时内出血停止。在注射后7天的检查中，患者显示出患处的上皮形成，仅在排便后有轻度疼痛。在注射后14天的检查中，患者均显示出有疤痕形成的完全上皮生成。

慢性肛裂患者也在48小时内出血停止。在注射后7天的指诊中，50％的慢性肛裂患者显示出与急性患者类似的上皮形成。然而，在注射后14天的检查中，上皮形成变得明显，在注射后28天的检查中，98％的慢性肛裂患者完成了上皮形成。所有患者均没有便后疼痛，并且没有症状。

一名患者注射后3个月复发，需要手术介入。该患者是名59岁的女性，有8年反复肛裂史，伴有剧痛和出血周期，并因小裂隙的侵入和出血倾向而进一步复杂。其肛管直肠压力的基线读出显示，MRP为118mmHg，MVCP为171mmHg。研究中的其他患者保持无症状和健康。随访38个月后，只有两名患者出现肛裂复发，需要不同的治疗。

结果表明，患者100％经历了浸润后即刻的肛门括约肌松弛。内括约肌产生局部麻痹，并且肛门张力同时降低。没有观察到排气或大便失禁，所有患者保持肛门功能和皮层-肛门反射，这意味着浸润阻断了多余的肌肉收缩，但保留了正常肌肉性能的充分力量。重复注射不产生任何问题或副作用。局部麻痹作用持续超过一周。在12个月检查时，没有发现副作用。

在研究的50名患者中，3名急性和33名慢性患者之前接受过保守治疗如坐浴、大便软化剂、高纤维饮食、肠调节和局部敷药膏，但没有作用(未愈)。本研究28天内所有患者的治愈率为98％，其中有17名急性患者在15天内痊愈。这些结果显示疗效较其他药物治疗(BoTox，硝酸甘油或硝苯地平(nifedipine))为高。

本实施例强调了组织的不动性是治愈的根本治疗原理。毒素治疗造成了化学去神经作用，在局部注射毒素时，产生了肌肉麻痹。由于只需要20天治愈肛裂，产生三个或更多个月的化学去神经作用就显得不必要了。GTX治疗减少了化学去神经作用诱导时间周期。GTX，在给药以100活性单位剂量时，产生为期12天的可逆性化学去神经作用，与BoTox治疗比较，其产生为期三个月或以上的不可逆化学去神经作用，并伴有蛋白水解的结构损害。肌肉失活持续至新的原纤维从神经中长出，在肌细胞壁上的新部位形成新的连接板。

表6已发表的用药膏、肉毒杆菌毒素和PSP毒素治疗慢性肛裂患者的结果的比较

患者数	剂量	3个月治愈率(％)		短暂失禁(％)	复发(％)	并发症(％)	参考文献
								药膏+保守治疗
2625	硝酸甘油硝酸甘油	36606周治愈率(％)			3112	中度至重度头痛头痛	Dis Colon Rectum2002；46：805-8N Eng J Med1999；341：65-9
								141	硝苯地平	50			5		Dis Colon Rectum1999；42：1011-15
55	硝苯地平	94.5			5.4		Dis Colon Rectum2002；45：1468-75
								手术
250		100		1			Dis Colon Rectum1995；38：378-82
								696		100		24(32排气)	13		Colo-Proctology1987；9：49-53
829		100		14(26排气)			Br J Surg 1989；76：431-4
								毒素      单位          6周治愈率(％)
10	15 BOTOX		70	10	20	10	Lancet1994；344：1127-28
								12	5 BOTOX		83	0	8	0	Dis Colon Rectum1994；37：1321-4
54	5 BOTOX		78	6	6	11	Dis Colon Rectum1995；38：781
								5	NrDYSPORT		60	0	0	0	82

100	5 BOTOX	82	7	6	0	Dis Colon Rectum1997；40：1029-32
							36	10/15BOTOX	65/81	0	0	0	83
25	20 BOTOX	88	4	0	0	N Eng JMed1998；338：217-20
							57	15/20BOTOX	44/68	0	0	0	Ann Surg1998；228：664-9
69	10-21BOTOX	48-70	0	37-52	0	Dis Colon Rectum1999；42：1016-21
							50	20/40DYSPORT	76/80	4/12	4/8	0	Dig Dis Sci199；44：1588-9
25	20 BOTOX	96(2剂量，6个月)	0	0	0	N Eng JMe d1999；341：65-69
							50	20 BOTOX	743周治愈率	0	0	0	Am J Surg2000；179：46-50
82	100 PSP毒素	98.8(1/82)	0	0	0

因此，如表6所证实，GTX为治愈急慢性肛裂，提供了比当前治疗方法如BoTox或手术更为安全的治疗方案。GTX治疗不产生排气或大便失禁的不便，也不需要5至7周的治愈时间。GTX治疗不会产生导致长期住院的永久括约肌伤害。

实施例3

一个活性单位对应的本发明组合物的量，必须把20克的CF1白化病种系小鼠腿部股二头肌的肌肉收缩阻断1.5至2.0小时。毒素以0.5ml体积肌内注射至小鼠右腿的股二头肌。左腿用作对照。这在三只小鼠中进行，前两个小时每30分钟测定麻痹作用一次，然后是每2、4、8小时和过夜测定。根据注射的剂量，麻痹作用可以持续24小时或更长。

本实施例证实，本发明毒素作用的可逆性质，并表明作用时间可以通过改变毒素剂量来控制。

实施例4

如实施例2所用，GTX2和GTX3混合物的200单位至5,000单位剂量，通过注射被给药到正常志愿者的肛门内括约肌中。这些剂量耐受性好，没有不良或负性副作用。局部注射较大剂量的毒素期间或之后，志愿者保持健康。

实施例5-治疗肛裂的药膏

凡士林                 75.000％w/w

倍半油酸失水山梨醇酯   10.000％w/w

白蜡                   10.000％w/w

毒素GTX2/GTX3          0.01-0.0001％w/w

水                     加至100％

配料的用意：

凡士林：润肤的药膏基质

倍半油酸失水山梨醇酯：乳化剂，渗透增强剂

白蜡：增稠剂，稳定剂

配置方法：

60摄氏度下熔化凡士林、倍半油酸失水山梨醇酯和白蜡，混合至均匀。缓慢注入毒素的水溶液，继续混合至药膏凝结。

20名肛裂患者入选研究，方案与实施例2所述相同，除了所采用的制剂不同和毒素给药方式不同。在本情况下，药膏含有10至200单位的GTX2/GTX3混合物，被施用至肛门括约肌部位，该部位位于包括肛裂所在疼痛区的肌肉组织周围。内科医师，以10分钟的按摩，完成此次局部给药。

肛管-直肠测压在施用药膏之前和之后10分钟进行。压力测定值显示施用药膏后没有明显改变。患者带药和说明书回家，每天用药两次(早晨和晚上，大约相隔12小时)。患者每周访问内科医师进行随访。根据肛裂的类型(急性或慢性或后侧，前侧，双侧)，患者在第一、第二、和第三周后，开始出现裂处的上皮再生，治疗的第三至第五周完成痊愈。

之前对本发明的详细描述仅为了展示解释和说明的目的，不能解释为限制本发明。本发明的范围根据此处所附的权利要求确定。

Claims (20)

1.一种促进伤口愈合的方法，包括给需要这种治疗的患者施以足量组合物的步骤，所述组合物包含至少一种下式(I)代表的三环3，4-propino-全氢化嘌呤：

                 式(I)

其中R₁和R₅独立选自-H和-OH；R₂和R₃独立选自-H和-SO₃；R₄选自-H、-OH、-COONH₂、-COONHSO^- ₃和-COOCH₃，条件是R₂和R₃的其中之一必须为-SO^- ₃，或者R₄必须为-COONHSO^- ₃，和药学可接受的载体。

2.根据权利要求1所述的方法，其中组合物注射至肌肉。

3.根据权利要求1所述的方法，其中该方法应用到罹患肛裂的患者。

4.根据权利要求1所述的方法，其中至少一种式(I)的化合物选自：GTX1、GTX2、GTX3、GTX4和GTX5。

5.根据权利要求1所述的方法，其中组合物包含GTX-2和GTX-3二者。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述组合物的有效量含有约1至约1000活性单位。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述组合物的有效量含有超过32至约1000活性单位。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述组合物的有效量含有约50至约1000活性单位。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述组合物的有效量含有约50至约500活性单位。

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述组合物的有效量含有约75至约200活性单位。

11.根据权利要求1所述的方法，其中所述组合物进一步含有选自蛤蚌毒素、新蛤蚌毒素、脱氨甲酰蛤蚌毒素、破伤风毒素和A型肉毒毒素的神经毒素。

12.根据权利要求1所述的方法，其中所述组合物进一步含有局部麻醉剂。

13.根据权利要求12所述的方法，其中局部麻醉剂选自：苯佐卡因、丁卡因、甲哌卡因、丙胺卡因、替卡因、布比卡因、利多卡因。

14.根据权利要求1所述的方法，其中组合物注射至肛门内括约肌。

15.根据权利要求1所述的方法，其中该方法应用的患者罹患至少一种选自弛缓不能和肛裂的病症。

16.根据权利要求1所述的方法，其中该方法为了促进伤口愈合的目的，施用于有伤口的患者。

17.根据权利要求15所述的方法，其中所述组合物的有效量含有约50至约1000活性单位。

18.根据权利要求16所述的方法，其中所述组合物的有效量含有约50至约1000活性单位。

19.根据权利要求1所述的方法，其中所述组合物被局部用药。

20.根据权利要求19所述的方法，其中局部组合物以组合物的总重量为基准包含约0.0001重量％至约0.01重量％的一种或多种式(I)的化合物。