CN101411700B - 5,7,4'-三羟基二氢黄酮或其衍生物用于止痛的用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了5，7，4’-三羟基二氢黄酮或其衍生物用于止痛的用途。本发明研究发现5，7，4’-三羟基二氢黄酮及其衍生物柚皮苷等具有很好的止痛效果，能用于制备止痛药物，未见毒副作用，能很好地治疗临床中各种疼痛，并且具有质量稳定、服用量小、疗效迅速等特点。应用前景广阔。

Description

5，7，4’-三羟基二氢黄酮或其衍生物用于止痛的用途

技术领域

本发明涉及5，7，4′-三羟基二氢黄酮及其衍生物的新治疗用途。

背景技术

疼痛是最常见的临床症状，可分为生理性疼痛和病理性疼痛两大类。生理性疼痛属于身体的报警系统，它警示人们去注意和避免外在创伤，其特点是疼痛阈值高，即只有伤害性刺激才能引起疼痛，持续时间短。而病理性疼痛则由组织和神经损伤、恶性肿瘤、病毒感染糖尿病等引起的一种疾病，其特点是疼痛阈值低，非伤害性刺激引起疼痛，持续时间长，有人把慢性疼痛比喻为一种不死的癌症。中国科学院院士、北京大学神经科学研究所所长韩济生指出，从当今世界范围来看，疼痛已成为严重影响人类生活和生命质量的另一大杀手，也是造成人们劳动能力降低和出勤日减少的最普通、最直接的因素。用于疼痛治疗的费用每年以10％-20％的增长率递增。在美国成年人群中，慢性疼痛发病率达30％以上，估计我国成年人慢性疼痛发病率在30％左右，中国至少有一亿以上的慢性疼痛患者。据世界卫生组织统计，目前全世界平均每年新发癌症患者中30％～50％的人伴有不同程度的疼痛，而我国此项数据的调查显示则达51％～61.6％.在被调查的癌痛患者中，80％调查对象最为恐惧的不是死亡而是疼痛。因此，镇痛是医务工作者面临的重要任务。首个世界镇痛日提出的口号就是：“免除疼痛是患者的基本权利。”根据出现的时程和程度不同，疼痛可分为急性痛、慢性痛和轻、中、重痛等；根据引起疼痛的原因可区分出炎症痛、癌痛等。

对于疼痛的治疗，除了手术和我国传统的针刺外，最常用的是使用止痛药，目前临床上的止痛药大体可分三类：第一类是解热止痛抗炎药，常用的有阿司匹林、消炎痛、保泰松、扑热息痛等，止痛作用比较弱，虽没有成瘾性，但如果用法不当，也会造成不必要的损害。因使用范围广泛，临床报告的止痛药不良反应主要是这一类药物造成的；第二类是中枢性止痛药。以曲马多为代表，是人工合成的中枢性止痛药，其止痛机制与阿片类药不完全相同，故列为非麻醉性止痛药。曲马多的止痛作用较弱，为吗啡的十分之一。主要用于中等程度的各种急性疼痛及手术后疼痛等；第三类是麻醉性止痛药。以吗啡、杜冷丁等阿片类药为代表。这类药物止痛作用很强，但反复使用会成瘾。国家对这类药物有严格的管理制度，不能随便使用，主要用于晚期癌症病人。

由于止痛药在临床使用的增多，其引起的不良反应越来越增多。如目前药物引起的肾功能不全中，止痛药已占37％，且服药超过3个月就可出现。高效止痛药，长期应用易产生成瘾性。此外，止痛药还能引起哮喘、荨麻疹、过敏性鼻炎等过敏反应及损害胃黏膜；长期或过量服用，可对造血系统及白细胞造成损害，引起粒细胞减少、再生障碍性贫血、凝血障碍等疾病，并引起中毒性肝炎、肾功能不全和间质性肾炎和诱发肿瘤、心血管系统疾病等。美国食品药品监督管理局(FDA)曾发布所有消炎止痛药的最新用药指导，就如何使用消炎止痛药发表了声明，指出所有的非甾(zai)体消炎药均有潜在的心血管风险，包括比较常用的扶他林、芬必得、西乐葆等21种消炎止痛药。FDA已要求这些药品生产厂家在其说明书中加入黑框警示。如布洛芬被患者认为最安个的药物，然而根据研究，长期服用布洛芬将会增加患心脏病、中风等心血管疾病24％的概率。因此，研制出更为安全、有效的新止痛药具有十分重要的意义。

5，7，4′-三羟基二氢黄酮是柚皮苷的苷元，俗称为柚皮素，广泛存在于樱花的花蕾、梅的花蕾等植物原料组织中，是一种黄酮类物质，具有抗氧化、抗溃疡、抑制乳腺癌增生以及延迟乳房肿瘤的形成、治疗血管性疾病等方面的作用。其衍生物有柚皮苷等化合物，具体见后面。目前尚没有报道称5，7，4′-三羟基二氢黄酮及其衍生物具有止痛的活性。

5，7，4′-三羟基二氢黄酮的分子式为：C₁₅H₁₂O₅

5，7，4′-三羟基二氢黄酮的结构式如下：

          

           5，7，4′-三羟基二氢黄酮(naringenin)

柚皮苷的分子式为：C₂₇H₃₂O₁₄

柚皮苷的结构式如下：

            

                柚皮苷(naringin)

柚皮素-7，4’-二硫酸酯二钠的分子式为：C₁₅H₁₀O₁₁S₂Na₂

柚皮素-7，4’-二硫酸酯二钠的结构式如下：

           

                  柚皮素-7，4’-二硫酸酯二钠

柚皮素-4’-磷酸单酯钠的分子式为：C₁₅H₁₀O₈PNa

柚皮素-4’-磷酸单酯钠的结构式如下：

               

                      柚皮素-4’-磷酸单酯钠

柚皮素-4’-丁二酸单酯钠的分子式为：C₁₉H₁₅O₈Na

柚皮素-4’-丁二酸单酯钠的结构式如下：

                

                  柚皮素4’-丁二酸单酯钠

发明内容

本发明的目的是提供5，7，4’-三羟基二氢黄酮或其衍生物在制备用于止痛药物中的应用。

本发明经过大量的研究工作，发现5，7，4’-三羟基二氢黄酮或其衍生物能起到止痛的作用，能作为活性成分，添加药物上可接受的载体，用于制备止痛药物。

其有效治疗剂量0.1～500mg/kg体重/天。优选的日剂量为1～100mg/kg体重/天。

上述5，7，4’-三羟基二氢黄酮的衍生物优选是柚皮苷、柚皮素-7，4’-二硫酸酯二钠、柚皮素-4’-磷酸单酯钠或柚皮素-4’-丁二酸单酯钠。

5，7，4’-三羟基二氢黄酮，俗称柚皮素，是一种三羟基二氢黄酮类化合物，该化合物性质稳定，在进入人体内后以原形药物存在；柚皮苷是5，7，4’-三羟基二氢黄酮的衍生物，是在其7位上结合一双糖形成的苷，在进入人体后，由于在胃酸的作用下水解，故在人体内主要以柚皮素的形式发挥作用，有少量由于水解不完全而以柚皮苷原形的形式存在(见文章Kazuo Ishii，Takashi Furuta，YasujiKasuya.Determination of naringin and naringenin in human plasma byhigh-performance liquid chromatography.Journal of Chromatography B，683(1996)；225-229)。柚皮素衍生物在进入人体后，在机体的各种酶的作用下又转换为柚皮素从而发挥作用。

本发明通过药理药效实验证实，5，7，4’-三羟基二氢黄酮及其衍生物具有良好的止痛作用，对治疗临床中各种疼痛具有明显的疗效。

发明人对5，7，4’-三羟基二氢黄酮及其衍生物进行实验动物的止痛实验。结果表明：柚皮素及其衍生物能明显能提高小鼠对热刺激的痛阈值并抑制醋酸所致的小鼠疼痛，表明柚皮素及其衍生物有止痛作用；5，7，4’-三羟基二氢黄酮衍生物柚皮苷显著提高神经病理性疼痛模型大鼠的50％机械刺激撤足阈值，且止痛作用时间长(6小时)，提示柚皮苷具有良好止痛作用。

本发明的实验证明，5，7，4’-三羟基二氢黄酮及其衍生物不仅具有很好止痛作用，而且在小鼠动物实验中没有表现出毒性。动物实验表明：当5，7，4’-三羟基二氢黄酮、柚皮苷、柚皮素-7，4’-二硫酸酯二钠、柚皮素-4’-磷酸单酯钠、柚皮素-4’-丁二酸单酯钠分别以6.0g/kg、900mg/kg、10.5g/kg、8.24g/kg、8.7g/kg的剂量口服给予动物时，动物均未见毒性反应。

综上所述，表明5，7，4’-三羟基二氢黄酮及其衍生物具有很好的止痛效果，未见毒副作用，能很好地治疗临床中各种疼痛，并且具有质量稳定、服用量小、疗效迅速等特点。因此，可用于制备止痛药物。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步的说明。

各实施例中所涉及的固体混合物中之固体，液体中之液体，以及液体中之固体的百分比分别是以wt/wt、vol/vol、wt/vol计算，除非另有说明。

实施例1：柚皮苷药物止痛作用的量效实验

1.实验动物

SD大鼠，雄性，体重150-170g，清洁级标准，共81只。动物分笼饲养，自由饮食，给予足够的食物及水源，隔日更换垫料，室温保持在(20～25)℃和50-80％的湿度，12-12h白天-黑夜循环照明。所有实验步骤都尽量减轻动物的痛苦并按照有关实验动物的使用原则操作。

2.样品来源与处理：

1)正常对照组：与其余组同条件下测试，不进行手术的正常大鼠。

2)假手术组：暴露并分离出L5脊神经但不切断。

3)溶剂对照组：PEG400与生理盐水(NaCl含量0.9％)体积比1∶1配制而成。

4)加巴喷丁组：取加巴喷丁粉末300mg溶于15ml PEG400与生理盐水体积比1：1配制成的溶液中，得阳性对照加巴喷丁溶液，浓度为20mg/ml。

5)柚皮苷剂量1组：取柚皮苷11.25mg溶于15ml PEG400与生理盐水体积比1：1配制成的溶液中，得柚皮苷浓度0.75mg/ml。

6)柚皮苷剂量2组：取柚皮苷22.5mg溶于上述同样溶剂15ml中，得柚皮苷浓度1.5mg/ml。

7)柚皮苷剂量3组：取柚皮苷45mg溶于上述同样溶剂15ml中，得柚皮苷浓度3mg/ml。

8)柚皮苷剂量4组：取柚皮苷90mg溶于上述同样溶剂15ml中，得柚皮苷浓度6mg/ml。

9)柚皮苷剂量5组：取柚皮苷180mg溶于上述同样溶剂15ml中，得柚皮苷浓度12mg/ml。

3.实验方法：

1)神经病理性疼痛模型的制作

本研究借鉴经典的神经病理性疼痛模型制作方法，10％水合氯醛(3.5ml/kgi.p.)麻醉下，实验大鼠经备皮、2％碘酒和75％酒精消毒后，沿左侧脊柱旁肌约L4-S2脊髓节段处做一纵行切口，用咬骨钳移去左侧L6横突部后暴露L4、L5脊神经，分离左侧L5脊神经，用3-0医用缝合线结扎切断，逐层缝合切口，待动物苏醒后，与术前相同条件下喂养。

2)50％机械性撤足阈值的测定

为了使大鼠熟悉并适应测试环境，消除大鼠心理因素对测试结果的影响，本研究在撤足阈值和撤足潜伏期的基础值测定前1周，每日将大鼠放置于下述测试装置内：透明有机玻璃箱(18×25×18cm)，箱底为金属网制成(网格为0.8×0.8cm)，通过网孔用von Frey hair可以对大鼠足底部皮肤施加机械性刺激，此装置用于测量大鼠50％机械性撤足阈值(g)。大鼠在上述装置内放置的时间不少于20分钟，直至大鼠洗脸、搔抓、直立、行走等活动完全停止，处于安静状态时止。至大鼠体重在(230±20)g时开始进行实验。按照下述方法每天检测一次，术前测2次后，随机选出正常对照组与假手术组，其余行神经病理性疼痛动物模型的制备，术后第4天开始测试两次，模型成功的大鼠再随机分为溶剂对照组，加巴喷丁组，柚皮苷剂量1组，柚皮苷剂量2组，柚皮苷剂量3组，柚皮苷剂量4组，柚皮苷剂量5组。

测试时，采用Up-Down方法，选8根强度呈对数递增方式的von Frey hair(0.41、0.70、1.20、2.04、3.63、5.50、8.51、15.14g)分别对大鼠后肢左右脚足心部进行机械性刺激，每次刺激持续时间为6-8s。以2.041g刺激强度为初始刺激强度，若撤足反应为阴性则选用刺激强度呈对数递增的相邻von Frey hair继续刺激，若撤足反应为阳性，则选择相邻递减的刺激强度给予刺激；若撤足反应为阴性，则选择相邻递增的刺激强度给予刺激。如此反复，以第一个转折点的前一点为起点连续6次的刺激结果(撤足反应呈持续阳性则为5次刺激，撤足反应呈持续阴性则为4次刺激，刺激次数最多为9次)为最终的撤足反应模式(表1)。

表1

 

	1	2	3	4	5	6	7	8	9
										0.407
0.692
										1.202
2.041	○				○		○
										3.63		○		×		×
5.495			×
										8.511
15.136
										String	○	○	×	×	○	×	○

表1采用Up-Down方法检测大鼠50％撤足阈值的示例(“×”代表撤足反应阳性，“O”代表撤足反应阴性，“String”为撤足反应模式)

撤足阈值的计算公式：50％(g)threshold＝(10^(Xf+kδ))/10,000

式中Xf＝最末次测试von Frey hair的对数值；K值可根据撤足反应模式查表2得出；δ＝8根von Frey hairs间对数差值的均值。

表2

撤足阳性反应的判定：(1)测试时Hair垂直，微弯，在大鼠足心部停留的6-8s内，出现快速撤足为阳性反应；(2)撤离Hair刺激作用的瞬间大鼠出现撤足，亦为阳性反应；(3)在刺激期间大鼠行走，为可疑反应，待大鼠安静后重新检测。

4.统计方法

所有行为学测试结果均采用非参数检验进行分析。同一组大鼠不同测试时间点的数据先用Friedman ANONA检验差异，然后再用两组相关数据的秩和检验分析。统计学分析通过SPSS 10.0(SPSS Inc，USA)进行，所有数据用均数±标准误(Mean±SE)表示，P<0.05认为差异有显著性。

5.结果

与溶剂对照组相比，柚皮苷剂量4组和柚皮苷剂量5组柚皮苷口服给药可显著提高模型大鼠50％机械刺激撤足阈值，而柚皮苷剂量4柚皮苷剂量5组两个剂量组之间没有显著性差异。

表3 各组动物撤足阈值

注：与空白对照组比较，^＊P<0.05，^＊＊P<0.01，^＊＊＊p<0.001

实施例2：柚皮苷药物的止痛作用的时效实验

1.实验动物

SD大鼠，雄性，体重150-170g，清洁级标准，共66只。动物分笼饲养，自由饮食，给予足够的食物及水源，隔日更换垫料，室温保持在(20～25)℃和50-80％的湿度，12-12h白天-黑夜循环照明。所有实验步骤都尽量减轻动物的痛苦并按照有关实验动物的使用原则操作。

2.样品来源与处理：

1)正常对照组：与其余组同条件下测试，不进行手术的正常大鼠。

2)假手术组：暴露并分离出L5脊神经但不切断。

3)溶剂对照组：PEG400与生理盐水(NaCl含量0.9％)体积比1∶1配制而成。

4)加巴喷丁组：取加巴喷丁粉末300mg溶于15ml PEG400与生理盐水体积比1∶1配制成的溶液中，得阳性对照加巴喷丁溶液，浓度为20mg/ml。

5)柚皮苷低剂量组：取柚皮苷30mg溶于15ml PEG400与生理盐水体积比1∶1配制成的溶液中，得柚皮苷浓度2mg/ml。

6)柚皮苷中剂量组：取柚皮苷90mg溶于上述同样溶剂15ml中，得柚皮苷浓度6mg/ml。

7)柚皮苷高剂量组：取柚皮苷270mg溶于上述同样溶剂15ml中，得柚皮苷浓度18mg/ml。

3.实验方法：具体方法同实施例1。

4.统计方法：实施例1。

5.结果

由表4可见，低剂量(10mg/kg)组柚皮苷对模型鼠50％机械刺激撤足阈值没有影响，中剂量(30mg/kg)与高剂量(90mg/kg)柚皮苷都可明显提高模型鼠50％机械刺激撤足阈值(p<0.05)。中剂量与高剂量柚皮苷对模型鼠不同时间点50％机械刺激撤足阈值间没有显著性差异。药物作用时间6～9小时。

表4 各组不同时间撤足阈值

注：与空白对照组比较，^＊P<0.05，^＊＊P<0.01，^＊＊＊p<0.001

实施例3：5，7，4’-三羟基二氢黄酮(表中为书写方便写为柚皮素)及其衍生物药物的止痛药理学实验

(一)对醋酸所致小鼠扭体反应的影响(扭体法)

1.实验动物

昆明种小鼠，体重20～24g，SPF级，由第一军医大学实验动物中心提供，动物合格证号：2004A063号。

2.样品来源与处理：

1)空白对照组：PEG400与生理盐水(NaCl含量0.9％)体积比1∶1配制而成的溶液。

2)阳性对照组：取阿司匹林片，用PEG400与生理盐水(NaCl含量0.9％)体积比1∶1配制而成的溶液配成浓度为20mg/ml的溶液。

3)柚皮素组：取柚皮素42mg溶于10ml PEG400与生理盐水体积比1∶1配制成的溶液中，得柚皮素浓度为4.2mg/ml。

4)柚皮素-7，4’-二硫酸酯二钠组：取柚皮素-7，4’-二硫酸酯二钠73.5mg溶于10mlPEG400与生理盐水体积比1∶1配制成的溶液中，得柚皮素-7，4’-二硫酸酯二钠溶液浓度为7.35mg/ml。

5)柚皮素-4’-磷酸单酯钠组：取柚皮素-4’-磷酸单酯钠58mg溶于10ml PEG400与生理盐水体积比1∶1配制成的溶液中，得柚皮素-4’-磷酸单酯钠溶液浓度为5.8mg/ml。

6)柚皮素-4’-丁二酸单酯钠组：取柚皮素-4’-丁二酸单酯钠61mg溶于10mlPEG400与生理盐水体积比1∶1配制成的溶液中，得柚皮素-4’-丁二酸单酯钠溶液浓度为6.1mg/ml。

3.实验方法：

取昆明种小鼠72只，雌雄各半，随机分为空白对照组、阳性对照(阿司匹林)组、柚皮素组、柚皮素-7，4’-二硫酸酯二钠组、柚皮素-4’-磷酸单酯钠组、柚皮素-4’-丁二酸单酯钠组，共6组，每组12只，实验前小鼠禁食不禁水12h，然后各组小鼠按0.1mL/10g体重灌胃给药，1次/d，共7d，其中空白对照组给等体积PEG400与生理盐水(NaCl含量0.9％)体积比1∶1配制而成的溶液。末次给药后30min，每只小鼠腹腔注射0.6％醋酸溶液0.2ml，记录小鼠30min内扭体反应次数(以小鼠出现腹部内凹、躯干与后肢伸张，臀部高起为扭体反应)，计算镇痛率。

4.统计学处理

实验数据以“均数±标准差”表示，采用SPSS统计软件进行统计学处理。

5.结果

由表5可见，柚皮素及其三个衍生物药物柚皮素-7，4’-二硫酸酯二钠、柚皮素-4’-磷酸单酯钠、柚皮素-4’-丁二酸单酯钠均能减少醋酸所致小鼠的扭体次数(与空白对照组比较P均<0.01)，提示柚皮素及其三个衍生物药物柚皮素-7，4’-二硫酸酯二钠、柚皮素-4’-磷酸单酯钠、柚皮素-4’-丁二酸单酯钠均具有止痛作用。

表5 柚皮素及其衍生物药物对醋酸所致小鼠扭体反应的影响(n＝12)

注：与空白对照组比较，^＊P<0.05，^＊＊P<0.01

(二)对热板致痛小鼠的镇痛作用(热板法)：

1.实验动物

昆明种小鼠，雄性，体重20～24g，SPF级，由第一军医大学实验动物中心提供，动物合格证号：2004A063号。

2.样品来源与处理：

1)空白对照组：PEG400与生理盐水(NaCl含量0.9％)体积比1∶1配制而成的溶液。

2)阳性对照组：取阿司匹林肠溶片6片，加蒸馏水定容至35ml。

3)柚皮素组：取柚皮素42mg溶于10ml PEG400与生理盐水体积比1∶1配制成的溶液中，得柚皮素浓度为4.2mg/ml。

4)柚皮素-7，4’-二硫酸酯二钠组：取柚皮素-7，4’-二硫酸酯二钠73.5mg溶于10mlPEG400与生理盐水体积比1∶1配制成的溶液中，得柚皮素-7，4’-二硫酸酯二钠溶液浓度为7.35mg/ml。

5)柚皮素-4’-磷酸单酯钠组：取柚皮素-4’-磷酸单酯钠58mg溶于10ml PEG400与生理盐水体积比1∶1配制成的溶液中，得柚皮素-4’-磷酸单酯钠溶液浓度为5.8mg/ml。

6)柚皮素-4’-丁二酸单酯钠组：取柚皮素-4’-丁二酸单酯钠61mg溶于10mlPEG400与生理盐水体积比1∶1配制成的溶液中，得柚皮素-4’-丁二酸单酯钠溶液浓度为6.1mg/ml。

3.实验方法

取健康昆明种雌性小鼠，实验前于热板测痛仪上测定痛阈值3次(以出现舔后足反应为观察指标)，挑选3次平均痛阈值在5s～30s内的小鼠72只，随机将合格小鼠分为正常对照组、阳性对照组、柚皮素组、柚皮素-7，4’-二硫酸酯二钠组、柚皮素-4’-磷酸单酯钠组、柚皮素-4’-丁二酸单酯钠组，共6组，每组12只。然后各组小鼠按0.1mL/10g体重灌胃给药，1次/d，共7d，其中空白对照组给等体积PEG400与生理盐水(NaCl含量0.9％)体积比1∶1配制而成的溶液。各组末次给药1h后，分别于测定并记录小鼠对热刺激的痛阈值，进行统计分析。

4.统计学处理

实验数据以“均数±标准差”表示，采用SPSS统计软件进行统计学处理。

5.结果

由表6可见，柚皮素及其三个衍生物药物柚皮素-7，4’-二硫酸酯二钠、柚皮素-4’-磷酸单酯钠、柚皮素-4’-丁二酸单酯钠均能明显提高小鼠对热板致痛的痛阈值(各给药组给药后痛阈值与空白对照组比较P均<0.01；各给药组给药后痛阈值与给药前痛阈值比较P均<0.01)，提示柚皮素及其三个衍生物药物柚皮素-7，4’-二硫酸酯二钠、柚皮素-4’-磷酸单酯钠、柚皮素-4’-丁二酸单酯钠均具有显著镇痛作用。

表6 柚皮素及其衍生物药物对热板致痛小鼠的镇痛作用(n＝12)

注：与空白对照组比较，^＊P<0.05，^＊＊P<0.01；给药后痛阈值与给药前痛阈值比较，^△P<0.05，^△△P<0.01

实施例4：柚皮苷药物的毒理学实验

在24±1℃的温度，65±5％的湿度条件下，选取7—8周龄，健康的清洁级NTH小鼠20只，雌雄各半，体重在20—22g。将饲料和水消毒，试验前和试验的观察期内，均按正常饲料条件饲养。

将柚皮苷溶解在0.5％Tween80中，浓度为900mg/ml，将该液体经口给药小鼠，给药剂量为0.2ml/20g小鼠体重。给药后观察1，4，8，12，小时，以后每12小时观察一次。观察死亡情况，每天记录小鼠体重变化以及其它的症状。第10天，断颈处死小鼠，取各器官进行病理检查。

在第10天，全部小鼠存活，900mg/kg剂量的柚皮苷未见毒性反应。小鼠各器官病理检查正常，没有发现病变，10天内小鼠体重未见减轻。因此，说明本发明的柚皮苷药物在口服给药动物未见毒性。

实施例5：柚皮素药物的毒理学实验

在24±1℃的温度，65±5％的湿度条件下，选取7-8周龄，健康的清洁级昆明小鼠20只，雌雄各半，体重在19～21g。将饲料和水消毒，试验前和试验的观察期内，均按正常饲料条件饲养。

将柚皮素溶解在0.5％Tween80中，浓度为300mg/ml，将该液体经口给药小鼠，给药剂量为0.4ml/20g小鼠体重。给药后观察1，4，8，12小时，以后每12小时观察一次。观察死亡情况，每天记录小鼠体重变化以及其它的症状。第10天，断颈处死小鼠，取各器官进行病理检查。

在第10天，全部小鼠存活，6.0g/kg剂量的柚皮素未见毒性反应。该剂量相当于人正常服用剂量的460倍。小鼠各器官病理检查正常，没有发现病变，10天内小鼠体重未见减轻。因此，说明本发明的柚皮素药物在口服给药动物时未见毒性。

实施例6：柚皮素-7，4’-二硫酸酯二钠的毒理学实验

在24±1℃的温度，65±5％的湿度条件下，选取7-8周龄，健康的清洁级昆明小鼠20只，雌雄各半，体重在19～21g。将饲料和水消毒，试验前和试验的观察期内，均按正常饲料条件饲养。

将柚皮素-7，4’-二硫酸酯二钠溶解在0.5％Tween80中，浓度为525mg/ml，将该液体经口给药小鼠，给药剂量为0.4ml/20g小鼠体重。给药后观察1，4，8，12小时，以后每12小时观察一次。观察死亡情况，每天记录小鼠体重变化以及其它的症状。第10天，断颈处死小鼠，取各器官进行病理检查。

在第10天，全部小鼠存活，10.5g/kg剂量的柚皮素未见毒性反应。该剂量相当于人正常服用剂量的460倍。小鼠各器官病理检查正常，没有发现病变，10天内小鼠体重未见减轻。因此，说明本发明的柚皮素药物在口服给药动物时未见毒性。

实施例7：柚皮素-4’-磷酸单酯钠的毒理学实验

在24±1℃的温度，65±5％的湿度条件下，选取7-8周龄，健康的清洁级昆明小鼠20只，雌雄各半，体重在19～21g。将饲料和水消毒，试验前和试验的观察期内，均按正常饲料条件饲养。

将柚皮素溶解在0.5％Tween80中，浓度为412mg/ml，将该液体经口给药小鼠，给药剂量为0.4ml/20g小鼠体重。给药后观察1，4，8，12小时，以后每12小时观察一次。观察死亡情况，每天记录小鼠体重变化以及其它的症状。第10天，断颈处死小鼠，取各器官进行病理检查。

在第10天，全部小鼠存活，8.24g/kg剂量的柚皮素未见毒性反应。该剂量相当于人正常服用剂量的460倍。小鼠各器官病理检查正常，没有发现病变，10天内小鼠体重未见减轻。因此，说明本发明的柚皮素药物在口服给药动物时未见毒性。

实施例8：柚皮素-4’-丁二酸单酯钠的毒理学实验

在24±1℃的温度，65±5％的湿度条件下，选取7-8周龄，健康的清洁级昆明小鼠20只，雌雄各半，体重在19～21g。将饲料和水消毒，试验前和试验的观察期内，均按正常饲料条件饲养。

将柚皮素溶解在0.5％Tween80中，浓度为435mg/ml，将该液体经口给药小鼠，给药剂量为0.4ml/20g小鼠体重。给药后观察1，4，8，12小时，以后每12小时观察一次。观察死亡情况，每天记录小鼠体重变化以及其它的症状。第10天，断颈处死小鼠，取各器官进行病理检查。

在第10天，全部小鼠存活，8.7g/kg剂量的柚皮素未见毒性反应。该剂量相当于人正常服用剂量的460倍。小鼠各器官病理检查正常，没有发现病变，10天内小鼠体重未见减轻。因此，说明本发明的柚皮素药物在口服给药动物时未见毒性。

Claims (1)

1.5，7，4’-三羟基二氢黄酮衍生物在制备用于止痛药物中的应用，所述的5，7，4’-三羟基二氢黄酮衍生物为柚皮素-7，4’-二硫酸酯二钠、柚皮素-4’-磷酸单酯钠或柚皮素-4’-丁二酸单酯钠。