CN1977869A - 一种藤梨根提取物及其抗癌用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种藤梨根提取物，其为通过下述方法得到的：1)提取：按4～6ml/g藤梨根的量，向藤梨根中加入乙醇，回流提取，合并提取液，旋转蒸发，干燥后得到棕色膏状物；2)分离收集：将步骤1)得到的棕色膏状物利用二氯甲烷、甲醇和乙酸的混合物作为洗脱剂在硅胶色谱柱梯度淋洗进行分离；所述的藤梨根的上柱量和硅胶粉的重量比为1∶250～400；分别收集黄色和浅黄色两个色带的洗脱物；3)除去溶剂：将洗脱物分别除去溶剂，真空干燥，分别得到本发明的中极性和大极性的藤梨根提取物。本发明的上述藤梨根提取物分别包括了藤梨根中极性较大和中极性的物质，可用于制备治疗抗癌药物的用途。

Description

一种藤梨根提取物及其抗癌用途
技术领域
本发明属于医药领域，具体地说是涉及一种藤梨根提取物，及其在抗肿瘤方面的医药用途。
背景技术
藤梨根为猕猴桃科植物猕猴桃(Actinidia chinensis Planch)和软枣猕猴桃(A.argutaPlanch)的根，其性味苦、寒，具有清热解毒活血的功效。近年发现该属植物均具有抗癌、降血脂等活性，民间用其治疗胃癌、鼻咽癌、乳腺癌，取得一定疗效，尤其对消化道癌的作用更为明显。
近年来，通过对藤梨根提取物抗肿瘤作用的研究表明，藤梨根中含有多种生物活性成分。韦金育等人利用中越猕猴桃地上部分和根部提取物对肝癌细胞株BEL-7404的生长有抑制作用(韦金育等，中越猕猴桃根提取物抗肿瘤作用的实验研究，广西中医药，2003，26(6)：49)。藤梨根对胃低分化腺癌具有明显的杀伤作用，其抑瘤率达到88.19％(李昊等，藤梨根对胃癌细胞抑制作用的实验研究，河北中医，2004，26(4)：314-315)。除此之外，藤梨根提取物对白血病细胞株L1210和P388D1、宫颈癌细胞株Hela、人肝癌细胞株Hele-7404、黑色素瘤细胞株B16以及神经肿瘤细胞株NG108-15的生长均有不同程度的抑制作用(钟振国等，中越猕猴桃根提取物的体外抗肿瘤活性研究，中药材，2005，28(3)：215-218)。
现有的提取工艺一般是采用水或有机溶剂进行浸提，然后通过乙酸乙酯和正丁醇萃取，再利用石油醚-丙酮，氯仿-甲醇或者聚酰胺进行洗脱，最后得到藤梨根提取物。这样的提取工艺的缺点是工艺繁杂且需使用大量的有机溶剂，所得提取物中究竟是何种成分具有抗癌作用尚不明确，其抗癌机理还需进一步深入研究。
发明内容
本发明的目的在于克服现有的提取工艺繁杂、需使用大量的有机溶剂、且有效成分不明确的缺陷，从而提供一种工艺简便，适合工业化生产，有效成分较单一的藤梨根提取物。
本发明的另一目的在于提供上述藤梨根提取物的抗癌用途。
本发明的目的是通过如下的技术方案实现的：
本发明提供的藤梨根提取物是通过下述方法得到的：
1)提取：按4～6 ml/g藤梨根的量，向藤梨根中加入乙醇，回流提取，合并提取液，旋转蒸发，干燥后得到棕色膏状物；
回流提取时间为5～10小时；
回流提取的次数为1～3次；
所述的乙醇可以为工业乙醇；
2)分离收集：将步骤1)得到的棕色膏状物利用二氯甲烷、甲醇和乙酸的混合物作为洗脱剂在硅胶色谱柱梯度淋洗进行分离；所述的藤梨根的上柱量和硅胶粉的重量比为1∶250～400；
使用上述洗脱剂开始进行洗脱，硅胶柱从下至上依次呈现三个色带：棕红色、黄色和浅黄色，分别对应着低极性、中极性和大极性的洗脱物；按照常规的洗脱方法，逐渐增加洗脱剂的极性，分别收集黄色和浅黄色两个色带的洗脱物；
步骤2)中所用洗脱剂极性增加的顺序为：体积比为1∶3～30的二氯甲烷和甲醇混合溶液、纯甲醇溶液、体积比为1∶2～5的甲醇和乙酸的混合溶液；
3)除去溶剂：将经步骤2)收集到的洗脱物分别在30～40℃旋转蒸发除去溶剂，得到黄色粉状物，真空干燥24h，分别得到本发明的中极性和大极性的藤梨根提取物。
本发明的上述藤梨根提取物分别包括了藤梨根中极性较大和中极性的物质，可用于制备治疗抗癌药物的用途。该提取物有效成分较单一，有利于对提取物中究竟是何种成分具有抗癌作用进行进一步深入研究，而且使用本发明提供的制备方法提取藤梨根提取物，具有操作简便，分离效果好等优点。
具体实施方式
实施例1、
称取藤梨根120g，溶于480ml工业酒精，回流5小时，提取1次，将提取液旋转蒸发，干燥后得到4.86g棕红色膏体。称取0.1g藤梨根醇提取物，30g硅胶粉，进行硅胶柱色谱分离。利用二氯甲烷、甲醇和乙酸溶液进行梯度洗脱，其顺序为：二氯甲烷和甲醇的体积比依次为1∶3、1∶5、1∶10、1∶30、纯甲醇、甲醇和乙酸的体积比为1∶2、1∶3、1∶5的混合溶液。洗脱剂不断洗脱，分别收集黄色和浅黄色两个色带的洗脱物。在30℃旋转蒸发除去溶剂，分别得到0.045g和0.010g的黄色粉状物，真空干燥24h，分别得到本发明的中极性和大极性的藤梨根提取物。
实施例2、
称取藤梨根200g，溶于1200ml工业酒精，回流10小时，提取3次，合并提取液后，将其旋转蒸发，干燥后得到10.02g棕红色膏体。称取1.05g藤梨根醇提取物，420g硅胶粉，进行硅胶柱色谱分离。利用二氯甲烷、甲醇和乙酸溶液进行梯度洗脱，其顺序为：二氯甲烷和甲醇的体积比依次为1∶3、1∶5、1∶10、1∶30、纯甲醇、甲醇和乙酸的体积比为1∶2、1∶3、1∶5的混合溶液。洗脱剂不断洗脱，分别收集黄色和浅黄色两个色带的洗脱物。在40℃旋转蒸发除去溶剂，分别得到0.54g和0.15g的黄色粉状物，真空干燥24h，分别得到本发明的中极性和大极性的藤梨根提取物。
实施例3、
称取藤梨根100g，溶于500ml工业酒精，回流8小时，提取2次，合并提取液后旋转蒸发，干燥后得到4.68g棕红色膏体。称取2.00g藤梨根醇提取物，500g硅胶粉，进行硅胶柱色谱分离。利用二氯甲烷、甲醇和乙酸溶液进行梯度洗脱，其顺序为：二氯甲烷和甲醇的体积比依次为1∶3、1∶5、1∶10、1∶30、纯甲醇、甲醇和乙酸的体积比为1∶2、1∶3、1∶5的混合溶液。洗脱剂不断洗脱，分别收集黄色和浅黄色两个色带的洗脱物。在40℃旋转蒸发除去溶剂，分别得到0.98g和0.29g的黄色粉状物，真空干燥24h，分别得到本发明的中极性和大极性的藤梨根提取物。
实施例4、
将实施例1中得到的中极性和大极性的藤梨根提取物进行下述的抑制肿瘤的细胞实验。具体实验方法为：将癌细胞用胰酶消化后，悬浮于含5％小牛血清的培养液650μl中，利用玻璃滴管轻轻吹打成细胞悬液，显微镜下用细胞计数板计数活细胞。将肿瘤细胞接种于无菌的96孔培养平板，每孔加肿瘤细胞悬液200μl。将细胞置于37℃、5％CO2培养箱中预贴壁8～10小时后，弃去上清液，加入不同浓度的药物(实施例1中得到的中极性和大极性的藤梨根提取物)。在37℃、5％C02培养箱中孵化20小时，转移上清夜，在每孔中加入0.5mg/ml四唑盐(MTT)的无血清培养液100μl，37℃、5％CO2培养箱继续培养4小时，弃去上清夜，每孔加入100μl二甲亚砜(DMSO)终止反应，振荡5～10min，振荡均匀，在酶标以上以波长为570nm，测定各孔吸光度，按照下式计算平均抑制率，结果列于表1。
Figure A20051012643000061
表1、中极性和大极性的藤梨根提取物对肝癌、胃癌和宫颈癌细胞株的抑制实验
由表1的结果可以看出，在人肝癌细胞株QGY-7703、人胃癌细胞株BGC-823和人宫颈癌细胞株Hela的细胞毒作用实验中，本发明的藤梨根大、中极性提取物对上述三种肿瘤均有一定的抑制效果，并随剂量递增，抑瘤率提高。而且，中极性的藤梨根提取物对肝癌细胞株和宫颈癌细胞株的抑制效果更好，大极性的藤梨根提取物对胃癌细胞株的抑制效果更好。

Claims (6)

1、一种藤梨根提取物，其为通过下述方法得到的：
1)提取：按4～6ml/g藤梨根的量，向藤梨根中加入乙醇，回流提取，合并提取液，旋转蒸发，干燥后得到棕色膏状物；
2)分离收集：将步骤1)得到的棕色膏状物利用二氯甲烷、甲醇和乙酸的混合物作为洗脱剂在硅胶色谱柱梯度淋洗进行分离；所述的藤梨根的上柱量和硅胶粉的重量比为1∶250～400；
使用上述洗脱剂开始进行洗脱，硅胶柱从下至上依次呈现三个色带：棕红色、黄色和浅黄色，分别对应着低极性、中极性和大极性的洗脱物；按照常规的洗脱方法，逐渐增加洗脱剂的极性，分别收集黄色和浅黄色两个色带的洗脱物；
3)除去溶剂：将经步骤2)收集到的洗脱物分别在30～40℃旋转蒸发除去溶剂，得到黄色粉状物，真空干燥24h，分别得到本发明的中极性和大极性的藤梨根提取物。
2、如权利要求1所述的藤梨根提取物，其特征在于：所述步骤1)的回流提取时间为5～10小时。
3、如权利要求1所述的藤梨根提取物，其特征在于：所述步骤1)的回流提取的次数为1～3次。
4、如权利要求1所述的藤梨根提取物，其特征在于：所述步骤1)的乙醇为工业乙醇。
5、如权利要求1所述的藤梨根提取物，其特征在于：所述步骤2)中所用洗脱剂极性增加的顺序为：体积比为1∶3～30的二氯甲烷和甲醇混合溶液、纯甲醇溶液、体积比为1∶2～5的甲醇和乙酸的混合溶液。
6、权利要求1所述的藤梨根提取物在制备治疗抗癌药物中的用途。
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