CN103169723A - 一种齐墩果酸双糖皂苷类成分的制备方法及其用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种齐墩果酸三糖皂苷类成分3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖齐墩果酸皂苷的制备方法及其该成分抗肿瘤的用途。本发明还涉及来自白头翁(Pulsatillachinensis (Bunge)Regel)根茎的含有该化合物的提取物作为抗上述肿瘤的用途。上述肿瘤包括肺癌、肝癌、胃癌、结肠癌、胶质瘤、乳腺癌、宫颈癌、白血病、淋巴癌等。
Description
技术领域
本发明属于医药、兽药技术领域，涉及一种齐墩果酸皂苷类成分3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷的制备方法及其该成分抗肿瘤的用途，如用于肺癌、肝癌、胃癌、结肠癌、胶质瘤、乳腺癌、宫颈癌、白血病、淋巴癌等。
本发明还涉及来自白头翁 (Pulsatilla chinensis (Bunge) Regel) 根茎的含有该化合物的提取物作为抗上述肿瘤的用途。
背景技术
白头翁药材取自毛茛科白头翁属植物白头翁的干燥根，味苦，性寒。归胃、大肠经，具清热解毒，凉血止痢之功。用于热毒血痢，阴痒带下，阿米巴痢。据文献报道，白头翁中含原白头翁素（Protoanemonin）、白头翁素（Anemonin）、白头翁灵（Okinalin，C32H46O2）、白头翁英（Okinalein，C4H602）等，近年来国内外学者从白头翁属植物中分离鉴定出几十种五环三萜皂苷成分，这些皂苷主要为齐墩果烷型和羽扇豆烷型两种。白头翁属植物具有广泛的药理及生物活性，主要表现在抗肿瘤、抗炎抗菌、抗病毒、细胞凋亡、抗生物酶、杀虫、杀精等作用。
经过反复研究发现，白头翁的水提液、醇提液及其碱水解产物均具有抗肿瘤活性，尤其是碱水解产物，活性更强，经过进一步成分分析研究，发现其中均含有一系列的齐墩果酸皂苷类成分。
发明内容
本发明利用现代分离技术及鉴定手段对白头翁进行系统的化学成分分离，从中分离得到一种齐墩果酸皂苷类成分：3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷，通过体外抗肿瘤活性筛选研究，发现该化合物具有显著的抗肿瘤作用，然而，该成分在白头翁药材中的含量不高；同时研究发现，白头翁的水提物和醇提物均具有一定的抗肿瘤作用，而其碱水解产物的活性明显强于水解前，成分分析发现，碱水解后产物中3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷的含量较水解前大大提高。白头翁药材资源丰富，水解产物活性明确，制备工艺简单易行，适合工业化大量生产，可作为制备抗肿瘤药物，具有广阔的市场前景和开发价值。
本发明的技术方案如下：
1、3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷在制备抗肿瘤药物中的应用。
2、含有3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷的白头翁提取物在制备抗肿瘤药物中的应用。
3、3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷在制备抗肺癌、肝癌、胃癌、结肠癌、胶质瘤、乳腺癌、宫颈癌、白血病、淋巴癌药物中的应用。
4、含有3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷的白头翁提取物在制备抗肺癌、肝癌、胃癌、结肠癌、胶质瘤、乳腺癌、宫颈癌、白血病、淋巴癌药物中的应用。
5、3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷的制备方法，包括以下步骤：
第一步，将白头翁药材粉碎成粗粉，用水或0.1-95%乙醇浸泡0.5-2h，6-12倍量加热回流提取2-3次，每次1-3h，过滤，合并滤液。上述滤液于50-70℃减压浓缩至0.5-1.0g生药材/mL，无醇味，0-4℃冷藏过夜，析胶，滤过，即得白头翁提取物。
第二步，白头翁提取物水溶液中加入氢氧化钠溶液调到PH10-13，加热沸腾4-10小时，每30-60分钟测PH，保持在PH10-13，放冷，加盐酸溶液，调PH 3-7，离心，去沉淀，即得白头翁提取物水解液
第三步，白头翁提取物水解液，经过D101或AB-8或ADS-17大孔树脂吸附，依次用水、30-40%乙醇、50-80%乙醇、95%乙醇洗脱，收集50-80%乙醇洗脱部分,即得BTW58组分。经抗肿瘤药理实验，证明BTW58组分为白头翁抗肿瘤有效部位。
第四步、白头翁抗肿瘤有效部位经ODS反相硅胶柱，用甲醇和水（6:4-9:1）的混合液进行梯度洗脱，梯度洗脱液依次有五组，其体积配比分别为
第一组甲醇6份：水4份；
第二组甲醇7份：水3份；
第三组甲醇8份：水2份；
第四组甲醇85份：水15份；
第五组甲醇9份：水1份；
第五步、经对照品比较，将甲醇9份：水1份的洗脱部分中含有3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷的流份富集，经甲醇重结晶，得到化合物I，经波谱检测，该化合物为3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷。
本发明所述的齐墩果酸皂苷类成分是单一成分的化合物，其化学名称为3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷。
附图说明：
图1是3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷的分子结构式；
图2是BTW58组分的HPLC分析图；
图3是3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷的核磁共振氢谱图；
图4是3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷的核磁共振碳谱图；
具体实施例：
3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷的制备方法为：
实施案例1
第一步，将白头翁药材粉碎成粗粉，用水浸泡0.5-2h，6-12倍量加热回流提取2-3次，每次1-3h，过滤，合并滤液。上述滤液于50-70℃减压浓缩至0.5-1.0g生药材/mL，0-4℃冷藏过夜，析胶，滤过，即得白头翁提取物。
第二步，白头翁提取物水溶液中加入氢氧化钠溶液调到PH10-13，加热沸腾4-10小时，每30-60分钟测PH，保持在PH10-13，放冷，加盐酸溶液，调PH 3-7，离心，去沉淀，即得白头翁提取物水解液
第三步，白头翁提取物水解液，经过D101或AB-8或ADS-17大孔树脂吸附，依次用水、30-40%乙醇、50-80%乙醇、95%乙醇洗脱，收集50-80%乙醇洗脱部分,即得BTW58组分。经抗肿瘤药理实验，证明BTW58组分为白头翁抗肿瘤有效部位。
第四步、白头翁抗肿瘤有效部位经ODS反相硅胶柱，用甲醇和水（6:4-9:1）的混合液进行梯度洗脱，梯度洗脱液依次有五组，其体积配比分别为
第一组甲醇6份：水4份；
第二组甲醇7份：水3份；
第三组甲醇8份：水2份；
第四组甲醇85份：水15份；
第五组甲醇9份：水1份；
第五步、经对照品比较，将甲醇9份：水1份的洗脱部分中含有3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷的流份富集，经甲醇重结晶，得到化合物I，经波谱检测，该化合物为3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷。
实施案例2
第一步，将白头翁药材粉碎成粗粉，用10%乙醇浸泡0.5-2h，6-12倍量加热回流提取2-3次，每次1-3h，过滤，合并滤液。上述滤液于50-70℃减压浓缩至0.5-1.0g生药材/mL，无醇味，0-4℃冷藏过夜，析胶，滤过，即得白头翁提取物。
第二步，白头翁提取物水溶液中加入氢氧化钠溶液调到PH10-13，加热沸腾4-10小时，每30-60分钟测PH，保持在PH10-13，放冷，加盐酸溶液，调PH 3-7，离心，去沉淀，即得白头翁提取物水解液
第三步，白头翁提取物水解液，经过D101或AB-8或ADS-17大孔树脂吸附，依次用水、30-40%乙醇、50-80%乙醇、95%乙醇洗脱，收集50-80%乙醇洗脱部分,即得BTW58组分。经抗肿瘤药理实验，证明BTW58组分为白头翁抗肿瘤有效部位。
第四步、白头翁抗肿瘤有效部位经ODS反相硅胶柱，用甲醇和水（6:4-9:1）的混合液进行梯度洗脱，梯度洗脱液依次有五组，其体积配比分别为
第一组甲醇6份：水4份；
第二组甲醇7份：水3份；
第三组甲醇8份：水2份；
第四组甲醇85份：水15份；
第五组甲醇9份：水1份；
第五步、经对照品比较，将甲醇9份：水1份的洗脱部分中含有3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷的流份富集，经甲醇重结晶，得到化合物I，经波谱检测，该化合物为3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷。
实施案例3
第一步，将白头翁药材粉碎成粗粉，用20%乙醇浸泡0.5-2h，6-12倍量加热回流提取2-3次，每次1-3h，过滤，合并滤液。上述滤液于50-70℃减压浓缩至0.5-1.0g生药材/mL，无醇味，0-4℃冷藏过夜，析胶，滤过，即得白头翁提取物。
第二步，白头翁提取物水溶液中加入氢氧化钠溶液调到PH10-13，加热沸腾4-10小时，每30-60分钟测PH，保持在PH10-13，放冷，加盐酸溶液，调PH 3-7，离心，去沉淀，即得白头翁提取物水解液
第三步，白头翁提取物水解液，经过D101或AB-8或ADS-17大孔树脂吸附，依次用水、30-40%乙醇、50-80%乙醇、95%乙醇洗脱，收集50-80%乙醇洗脱部分,即得BTW58组分。经抗肿瘤药理实验，证明BTW58组分为白头翁抗肿瘤有效部位。
第四步、白头翁抗肿瘤有效部位经ODS反相硅胶柱，用甲醇和水（6:4-9:1）的混合液进行梯度洗脱，梯度洗脱液依次有五组，其体积配比分别为
第一组甲醇6份：水4份；
第二组甲醇7份：水3份；
第三组甲醇8份：水2份；
第四组甲醇85份：水15份；
第五组甲醇9份：水1份；
第五步、经对照品比较，将甲醇9份：水1份的洗脱部分中含有3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷的流份富集，经甲醇重结晶，得到化合物I，经波谱检测，该化合物为3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷。
实施例4、
第一步，将白头翁药材粉碎成粗粉，用40%乙醇浸泡0.5-2h，6-12倍量加热回流提取2-3次，每次1-3h，过滤，合并滤液。上述滤液于50-70℃减压浓缩至0.5-1.0g生药材/mL，无醇味，0-4℃冷藏过夜，析胶，滤过，即得白头翁提取物。
第二步，白头翁提取物水溶液中加入氢氧化钠溶液调到PH10-13，加热沸腾4-10小时，每30-60分钟测PH，保持在PH10-13，放冷，加盐酸溶液，调PH 3-7，离心，去沉淀，即得白头翁提取物水解液
第三步，白头翁提取物水解液，经过D101或AB-8或ADS-17大孔树脂吸附，依次用水、30-40%乙醇、50-80%乙醇、95%乙醇洗脱，收集50-80%乙醇洗脱部分,即得BTW58组分。经抗肿瘤药理实验，证明BTW58组分为白头翁抗肿瘤有效部位。
第四步、白头翁抗肿瘤有效部位经ODS反相硅胶柱，用甲醇和水（6:4-9:1）的混合液进行梯度洗脱，梯度洗脱液依次有五组，其体积配比分别为
第一组甲醇6份：水4份；
第二组甲醇7份：水3份；
第三组甲醇8份：水2份；
第四组甲醇85份：水15份；
第五组甲醇9份：水1份；
第五步、经对照品比较，将甲醇9份：水1份的洗脱部分中含有3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷的流份富集，经甲醇重结晶，得到化合物I，经波谱检测，该化合物为3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷。
实施例5、
第一步，将白头翁药材粉碎成粗粉，用60%乙醇浸泡0.5-2h，6-12倍量加热回流提取2-3次，每次1-3h，过滤，合并滤液。上述滤液于50-70℃减压浓缩至0.5-1.0g生药材/mL，无醇味，0-4℃冷藏过夜，析胶，滤过，即得白头翁提取物。
第二步，白头翁提取物水溶液中加入氢氧化钠溶液调到PH10-13，加热沸腾4-10小时，每30-60分钟测PH，保持在PH10-13，放冷，加盐酸溶液，调PH 3-7，离心，去沉淀，即得白头翁提取物水解液
第三步，白头翁提取物水解液，经过D101或AB-8或ADS-17大孔树脂吸附，依次用水、30-40%乙醇、50-80%乙醇、95%乙醇洗脱，收集50-80%乙醇洗脱部分,即得BTW58组分。经抗肿瘤药理实验，证明BTW58组分为白头翁抗肿瘤有效部位。
第四步、白头翁抗肿瘤有效部位经ODS反相硅胶柱，用甲醇和水（6:4-9:1）的混合液进行梯度洗脱，梯度洗脱液依次有五组，其体积配比分别为
第一组甲醇6份：水4份；
第二组甲醇7份：水3份；
第三组甲醇8份：水2份；
第四组甲醇85份：水15份；
第五组甲醇9份：水1份；
第五步、经对照品比较，将甲醇9份：水1份的洗脱部分中含有3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷的流份富集，经甲醇重结晶，得到化合物I，经波谱检测，该化合物为3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷。
实施例6、
第一步，将白头翁药材粉碎成粗粉，用70%乙醇浸泡0.5-2h，6-12倍量加热回流提取2-3次，每次1-3h，过滤，合并滤液。上述滤液于50-70℃减压浓缩至0.5-1.0g生药材/mL，无醇味，0-4℃冷藏过夜，析胶，滤过，即得白头翁提取物。
第二步，白头翁提取物水溶液中加入氢氧化钠溶液调到PH10-13，加热沸腾4-10小时，每30-60分钟测PH，保持在PH10-13，放冷，加盐酸溶液，调PH 3-7，离心，去沉淀，即得白头翁提取物水解液
第三步，白头翁提取物水解液，经过D101或AB-8或ADS-17大孔树脂吸附，依次用水、30-40%乙醇、50-80%乙醇、95%乙醇洗脱，收集50-80%乙醇洗脱部分,即得BTW58组分。经抗肿瘤药理实验，证明BTW58组分为白头翁抗肿瘤有效部位。
第四步、白头翁抗肿瘤有效部位经ODS反相硅胶柱，用甲醇和水（6:4-9:1）的混合液进行梯度洗脱，梯度洗脱液依次有五组，其体积配比分别为
第一组甲醇6份：水4份；
第二组甲醇7份：水3份；
第三组甲醇8份：水2份；
第四组甲醇85份：水15份；
第五组甲醇9份：水1份；
第五步、经对照品比较，将甲醇9份：水1份的洗脱部分中含有3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷的流份富集，经甲醇重结晶，得到化合物I，经波谱检测，该化合物为3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷。
实施例7、
第一步，将白头翁药材粉碎成粗粉，用95%乙醇浸泡0.5-2h，6-12倍量加热回流提取2-3次，每次1-3h，过滤，合并滤液。上述滤液于50-70℃减压浓缩至0.5-1.0g生药材/mL，无醇味，0-4℃冷藏过夜，析胶，滤过，即得白头翁提取物。
第二步，白头翁提取物水溶液中加入氢氧化钠溶液调到PH10-13，加热沸腾4-10小时，每30-60分钟测PH，保持在PH10-13，放冷，加盐酸溶液，调PH 3-7，离心，去沉淀，即得白头翁提取物水解液
第三步，白头翁提取物水解液，经过D101或AB-8或ADS-17大孔树脂吸附，依次用水、30-40%乙醇、50-80%乙醇、95%乙醇洗脱，收集50-80%乙醇洗脱部分,即得BTW58组分。经抗肿瘤药理实验，证明BTW58组分为白头翁抗肿瘤有效部位。
第四步、白头翁抗肿瘤有效部位经ODS反相硅胶柱，用甲醇和水（6:4-9:1）的混合液进行梯度洗脱，梯度洗脱液依次有五组，其体积配比分别为
第一组甲醇6份：水4份；
第二组甲醇7份：水3份；
第三组甲醇8份：水2份；
第四组甲醇85份：水15份；
第五组甲醇9份：水1份；
第五步、经对照品比较，将甲醇9份：水1份的洗脱部分中含有3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷的流份富集，经甲醇重结晶，得到化合物I，经波谱检测，该化合物为3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷。
研究发现，在白头翁的乙醇提取物中，含有3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷，但含量明显低于经碱水解后的BTW58组分。
BTW58组分HPLC分析：
色谱柱，未加预柱,压力偏大：Kromasil（C18,250*4.6mm，5um）；流速：1ml/min；柱温：35℃；进样量：20ul；洗脱系统：甲醇-水系统
ELSD：SHIMADZU ELSD-LT Ⅱ;柱温：40℃；Press：350Kpa
梯度条件：时间（min） 甲醇（%）
0.01 65
10 70
30 70
50 100
55 100
55.01 STOP
化合物I结构解析：
白色无定形粉末，硫酸乙醇显紫红色斑点，醋酐-浓硫酸反应阳性，Molish反应阳性，提示该化合物可能为皂苷类化合物。化合物I用2N TFA完全酸水解得到齐墩果酸皂苷元和单糖，糖经衍生化后进行GC分析，检测到L-阿拉伯糖、L-鼠李糖的存在。
13C NMR谱共显示41个碳信号，包括30个苷元碳信号。其中苷元碳信号与齐墩果酸苷元基本一致。3位碳向低场位移至δ 88.89，28位羰基碳信号在δ 180.45，说明该化合物的糖是连在苷元的3位上。13C NMR谱中出现了两个糖信号，结合NMR数据和水解衍生化后的GC分析结果，证明其分别为L-阿拉伯糖、L-鼠李糖。另外，13C NMR谱中显示，在δ104.97和101.88位置出现两个糖对应的端基碳信号。经过对其13C NMR谱和1H NMR谱数据进行综合分析，确定化合物I的结构为3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷。13C NMR谱数据归属见表1。
表1 化合物I的碳谱数据（ Pyridine-d6）
| No | δ (ppm) | No | δ (ppm) | No | δ (ppm) |
| 1 | 38.99 | 16 | 23.91 | Ara-1′ | 104.97 |
| 2 | 26.63 | 17 | 46.65 | 2′ | 76.06 |
| 3 | 88.89 | 18 | 42.16 | 3′ | 73.94 |
| 4 | 39.61 | 19 | 46.65 | 4′ | 68.80 |
| 5 | 56.04 | 20 | 31.1 | 5′ | 64.82 |
| 6 | 18.65 | 21 | 34.39 | Rha-1′′ | 101.88 |
| 7 | 33.41 | 22 | 33.3 | 2′′ | 72.54 |
| 8 | 39.86 | 23 | 28.21 | 3′′ | 72.72 |
| 9 | 48.17 | 24 | 17.12 | 4′′ | 74.20 |
| 10 | 37.16 | 25 | 15.64 | 5′′ | 70.00 |
| 11 | 23.91 | 26 | 17.52 | 6′′ | 18.69 |
| 12 | 122.6 | 27 | 26.29 | ||
| 13 | 145.0 | 28 | 180.45 | ||
| 14 | 42.3 | 29 | 33.41 | ||
| 15 | 28.21 | 30 | 23.91 |
抗肿瘤药理研究：
从整体、细胞水平，体内体外实验相结合，全面观察了化合物I的抗肿瘤作用，体外实验结果表明，化合物I对体外人肺癌、肝癌、胃癌、结肠癌、胶质瘤、乳腺癌、白血病等19种肿瘤细胞均有较好的抑制作用；体内试验表明，化合物I对人肺癌、肝癌、胃癌、结肠癌等体内裸鼠异体移植瘤呈现较强的抗癌活性。
1. 化合物I对体外人19肿瘤细胞的半效抑制浓度
采用MTT法，选择19种人肿瘤细胞系，考察不同浓度的化合物I对人肿瘤细胞增殖的影响。收集对数期各肿瘤细胞，调整细胞悬液浓度至1×106个/mL，于96孔板每孔加入100 μL，置于5% CO2，37℃孵箱中孵育24 h后，至细胞单层铺满孔底（96孔平底板），加入浓度梯度的药物皂苷（1.5625、3.125、6.25、12.5、25μg/mL），每个浓度设5个复孔。待药物与细胞作用48 h后，计算药物对细胞生长的抑制率（%）。
实验结果提示，化合物I对各种受试细胞的生长抑制效应均呈现出良好的浓度依赖关系，对各种受试细胞的半效抑制浓度(IC50)范围:4.13—29.41μg/ml见表2 ，从实验结果可以看出化合物I在体外对肺癌、肝癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、胶质瘤、白血病等细胞株的生长抑制作用较显著。
表2 化合物I对各种受试细胞生长的半效抑制浓度（IC50,μg/mL）
| 细胞株 | 化合物I 的IC50 |
| 肺癌A549 | 6.36 |
| 肺癌NCI-H460 | 7.26 |
| 人胶质瘤细胞SHG-44 | 4.43 |
| 人肝细胞性肝癌BEL-7402 | 9.88 |
| 人肝细胞性肝癌SMMC-7721 | 10.57 |
| 人胶质瘤细胞U251 | 4.11 |
| 人红白血病细胞K-562 | 13.79 |
| 人中分化胃腺癌SGC-7901 | 14.32 |
| 人乳腺癌SK-BR-3 | 18.56 |
| 人宫颈癌Hela | 17.32 |
| 人低分化胃腺BGC-823 | 11.46 |
| 人早幼粒细胞性白血病HL-60 | 20.77 |
| 鼻咽癌 | 25.67 |
| 人786-O 肾透明细胞腺癌细胞 | 29.41 |
| 人结肠腺癌HCT-116 | 4.13 |
| 人结肠腺癌HT-29 | 3.93 |
| 人乳腺癌 MCF-7 | 12.48 |
| 小鼠黑色素瘤B-16 | 8.86 |
| 前列腺癌 | 15.79 |
2. 利用小鼠移植性肿瘤模型研究了化合物I对肝癌H22的影响。
取接种H22肉瘤细胞7d的小鼠,脱颈椎处死,无菌条件下抽取腹水,用无菌生理盐水调整瘤细胞浓度为2×107 /ml,每只小鼠右侧腋窝消毒后皮下接种0.2 ml瘤细胞悬液。小鼠接种瘤细胞24 h后开始给药,正常组及荷瘤模型组每天灌服PBS 0.5ml/只;阳性对照组腹腔注射环磷酰胺40mg/kg,隔日1次; 化合物I 50mg/kg，连续给药14天。最后一次给药后24 h ,称量各组KM鼠的体重、胸腺重量、胸腺重量，剥离肿瘤组织称重,并无菌取脾脏称重。
实验结果，化合物I能明显降低H22小鼠瘤重，对小鼠肝癌生长的抑制率为58%。
3. 利用体内裸鼠异体移植瘤模型观察化合物I对人胃癌SGC-7901的影响
从人癌种鼠皮下无菌取出肿瘤块，用生理盐水冲洗净血液，选择生长良好的肿瘤组织剪成小块，约米粒大小，将小组织块接种于裸鼠右侧腋窝皮下，接种后待移植肿瘤生长至一定大小后（100mm3以上）开始分组给药，按瘤体积分组，分模型组、阳性药环磷酰胺组（40mg/kg，ip）、化合物I 50mg/kg，每组各7只。实验结束时，剥取瘤块，称瘤重，计算瘤重抑制率。
实验结果，化合物I对胃癌有较好的抑制作用，抑瘤率达61.3%。
4. 利用体内裸鼠异体移植瘤模型观察化合物I对人结肠癌HCT-116的影响
从人癌种鼠皮下无菌取出肿瘤块，用生理盐水冲洗净血液，选择生长良好的肿瘤组织剪成小块，约米粒大小，将小组织块接种于裸鼠右侧腋窝皮下，接种后待移植肿瘤生长至一定大小后（100mm3以上）开始分组给药，按瘤体积分组，分模型组、阳性药环磷酰胺组（40mg/kg，ip）、化合物I 50mg/kg，每组各7只。实验结束时，剥取瘤块，称瘤重，计算瘤重抑制率。
实验结果，化合物I对结肠癌有较好的抑制作用，抑瘤率达66.7%。
5. 利用体内裸鼠异体移植瘤模型观察化合物I对人肺癌A549的影响
从人癌种鼠皮下无菌取出肿瘤块，用生理盐水冲洗净血液，选择生长良好的肿瘤组织剪成小块，约米粒大小，将小组织块接种于裸鼠右侧腋窝皮下，接种后待移植肿瘤生长至一定大小后（100mm3以上）开始分组给药，按瘤体积分组，分模型组、阳性药环磷酰胺组（40mg/kg，ip）、化合物I 50mg/kg，每组各7只。实验结束时，剥取瘤块，称瘤重，计算瘤重抑制率。
实验结果，化合物I对肺癌有较好的抑制作用，抑瘤率达56.7%。
Claims (6)
1.3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷在制备抗肿瘤药物中的应用。
2.含有3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷的白头翁提取物在制备抗肿瘤药物中的应用。
3.3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷在制备抗肺癌、肝癌、胃癌、结肠癌、胶质瘤、乳腺癌、宫颈癌、白血病、淋巴癌药物中的应用。
4.含有3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷的白头翁提取物在制备抗肺癌、肝癌、胃癌、结肠癌、胶质瘤、乳腺癌、宫颈癌、白血病、淋巴癌药物中的应用。
5.3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
第一步，将白头翁药材粉碎成粗粉，用水或0.1-95%乙醇浸泡0.5-2h，6-12倍量加热回流提取2-3次，每次1-3h，过滤，合并滤液，上述滤液于50-70℃减压浓缩至0.5-1.0g生药材/mL，无醇味，0-4℃冷藏过夜，析胶，滤过，即得白头翁提取物；
第二步，白头翁提取物水溶液中加入氢氧化钠溶液调到PH10-13，加热沸腾4-10小时，每30-60分钟测PH，保持在PH10-13，放冷，加盐酸溶液，调PH 3-7，离心，去沉淀，即得白头翁提取物水解液；
第三步，白头翁提取物水解液，经过D101或AB-8或ADS-17大孔树脂吸附，依次用水、30-40%乙醇、50-80%乙醇、95%乙醇洗脱，收集50-80%乙醇洗脱部分,即得BTW58组分，经抗肿瘤药理实验，证明BTW58组分为白头翁抗肿瘤有效部位；
第四步、白头翁抗肿瘤有效部位经ODS反相硅胶柱，用甲醇和水（6:4-1:0）的混合液进行梯度洗脱，梯度洗脱液依次有五组，其体积配比分别为
第一组甲醇6份：水4份；
第二组甲醇7份：水3份；
第三组甲醇8份：水2份；
第四组甲醇85份：水15份；
第五组甲醇9份：水1份；
第五步、经对照品比较，将甲醇9份：水1份的洗脱部分中含有3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷的流份富集，经甲醇重结晶，得到化合物I，经波谱检测，该化合物为3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷。
6.根据权利要求2的用途，其中通过用乙醇水溶液提取白头翁，获得的含3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷的白头翁提取物，以及通过用乙醇水溶液提取白头翁，并且通过碱水解反应获得而获得的含3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷的白头翁提取物。
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| CN106619851A (zh) * | 2017-02-04 | 2017-05-10 | 徐修山 | 一种用于治疗癌症的药物组合物、药物试剂盒及用途 |
| CN106749490A (zh) * | 2017-02-04 | 2017-05-31 | 青岛大学 | 一种鹰嘴豆提取物及其制备方法 |
| CN111171105A (zh) * | 2020-02-17 | 2020-05-19 | 九江学院 | 一种从中药中分离的新化合物及制备方法 |
| CN111875662A (zh) * | 2020-08-19 | 2020-11-03 | 中国人民解放军空军军医大学 | 一种美花铁线莲茎化学提取物的提取方法和应用 |
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| CN102247393A (zh) * | 2011-05-30 | 2011-11-23 | 江西本草天工科技有限责任公司 | 一种齐墩果酸皂苷类成分的制备方法及其用途 |
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2011
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