CN1960703B - 由扇扁豆糖提取物和扇扁豆肽提取物组成的扇扁豆总提取物及其生产和使用方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及含有扇扁豆总提取物的一种组合物，所述扇扁豆总提取物由扇扁豆糖提取物和扇扁豆肽提取物组成，其中以干性物质重量计，扇扁豆糖提取物含至少50％低聚半乳糖。所述组合物也含有苯并二氢吡喃衍生物和苯并吡喃衍生物。本发明还涉及含有所述扇扁豆总提取物的医药和/或美容性组合物，有利地用作消炎剂，可以修复皮肤屏障和创伤，尤其用于预防和/或治疗红斑。
Description
技术领域
本发明涉及一种组合物，其含有包含丰富的低聚半乳糖的扇扁豆糖提取物和扇扁豆肽提取物。该组合物可用作消炎药，来修复皮肤屏障和创伤，尤其用于预防和/或治疗伴有皮肤屏障破裂或未破裂的红斑病。
背景技术
尿布疹是婴儿频发的一种皮肤病。50％以上的婴儿患此疾病，在出生后四周内发生率为25％，九至十二月为高峰。这是由于婴儿臀部表皮的角质层受到了损坏，有双重原因：
-尿布的浸渍使尿酶和粪酶活跃起来，
-尿布在皮肤上摩擦的摩损效应。
在婴儿时代，尿液对皮肤而言只是一个小刺激物。对母乳喂养的婴儿调查表明刺激主要是由粪便中的酯酶、蛋白酶和脲酶引起的，这些酶在母乳喂养婴儿身上的活跃程度低于在牛奶喂养的婴儿身上的活跃程度。
由于胃微生物区产生更强的代谢酸，因此婴儿粪便的pH更呈酸性。较高pH激活了在母乳喂养婴儿身上发现的粪酶，该粪酶随之对皮肤更具侵袭性。皮肤刺激的始作俑者乃粪酶，对粪便加热可以说明这一点：加热后的粪便对动物皮肤没有刺激性；如果在粪便上加入胰蛋白酶和胰脂酶，刺激性便可恢复。
另外，粪脂酶促进皮肤的蛋白水解侵袭，并增加胆汁盐的渗透。然而，动物实验已经证明脂酶本身无刺激。
因此，pH的增加在尿布疹的病理生理学方面起决定性作用。粪便尿液结合似乎危害最大。确实，尿液中的尿素由粪便脲酶分解成氨水。形成的氨水造成pH的碱化，由此为粪酶的作用埋下了伏笔。
这样，经脲酶降解尿素时形成的氨水在出汗和尿布疹方面起了很大的作用。特别是在尿布疹方面，氨水的形成不是红斑的直接原因，但是造成了pH的增加，而pH增加促进粪脂酶和蛋白酶活性的增加，从而造成对皮肤的刺激。
一些治疗尿布疹并作为除臭剂的抗脲酶药已为人所知，例如异羟肟酸和羟肟酸。一般说来，多羟基苯酚和苯醌的抗脲酶功能也已为人所知。
绿原酸衍生物和角豆树的缩合鞣质在抗脲酶的美容或皮肤病学的组合物中的使用也已众所周知。所用的缩合鞣质可能是一种金缕梅提取物。
最后，法国专利申请FR 2 778 102公开了将原花青素(procyanodolic)和花青素用作抗脲酶剂的用途。
关于扇扁豆(lupin)，国际专利申请WO 00/62789描述了扇扁豆肽提取物用于抑制有机蛋白酶的用途。该申请描述了扇扁豆肽提取物在治疗关节病、牙周病、皮肤损害、炎症，以及愈合不足、牙釉质受侵袭、肿瘤或病理性血管生成引起的疾病的组合物中的用途。该专利申请也描述了使用这样的扇扁豆肽提取物治疗因皮肤内在老化、阳光辐射导致的老化，以及烟、污染和压力等有害作用引起的皮肤损害。
Piotr Gulewicz等人题为“Biological Activity ofα-galactosidePreparations from Lupinus angustifolius L.and Pisum sativum L.Seeds”，J.Agric.Food Chem.2002 Jan.16，50(2)：384-9的论文描述了含有丰富的低聚半乳糖和蔗糖的扇扁豆提取物。文章告诉我们扇扁豆低聚半乳糖不是细胞毒性的，它们让两叉细菌的数量和生物质量增加。
专利申请EP 1 361 854描述了当类黄酮类化合物，如染料木素事先溶解在合适的溶剂如聚乙二醇、聚丙二醇、其衍生物、脂肪醇、乙氧基多元醇或其混合物中时，其光保护活性，特别是抗红斑、抗氧化、抗自由基、消炎和vasculotropic活性明显增加。该申请中描述的组合物特别用于制备一种能降低和/或防止红斑的药，尤其是UVA和/或UVB照射引起的光化红斑。
除了现有技术提出的所有这些抗脲酶组合物外，还需要制备出能治疗红斑、特别是尿布疹的新组合物。
发明内容
出人意料的是，发明人发现了一种包含总扇扁豆提取物的组合物，即含有丰富的低聚半乳糖的扇扁豆糖提取物和扇扁豆肽提取物，这种总扇扁豆提取物可以用于预防和/或治疗皮肤炎症和/或皮肤屏障损害，特别是红斑。
出人意料的是，发明人发现包含总扇扁豆提取物的组合物比含有丰富的低聚半乳糖的单一扇扁豆糖提取物或只含有扇扁豆肽的提取物更有效，特别是作为消炎剂。因此，扇扁豆糖和肽之间有着协同效应。
因此，本发明的目的是含有扇扁豆总提取物的组合物，该扇扁豆总提取物由扇扁豆糖提取物和扇扁豆肽提取物组成，其中，以干物质总重量计，扇扁豆糖提取物含有至少50重量％低聚半乳糖。
低聚半乳糖是含有半乳糖单元的、聚合程度为3-10的低聚糖。
如大豆一样，扇扁豆含有大量的蛋白质(平均为40重量％)和油(9-20重量％)。在众多扇扁豆品种中，软白扇扁豆(lupinus albus)具有在组成和苦性方面的最佳平衡，因为与安第扇扁豆(Andean lupin)不同，软白扇扁豆基本不含有生物碱。
软白扇扁豆含有38-45重量％的蛋白质。白扇扁豆的蛋白质组分中的主要氨基酸是谷氨酰胺(20重量％)、天冬酰胺和精氨酸(分别为15重量％和10重量％)。但是，扇扁豆缺少色氨酸以及蛋氨酸、胱氨酸和半胱氨酸之类的含硫氨基酸。
白扇扁豆含有29-30重量％的碳水化物。白扇扁豆的糖组分由水苏糖(这是主要糖，约55重量％)、其次蔗糖(约25重量％)、毛蕊花糖(约10重量％)和棉子糖(约10重量％)组成。这些糖中的很大部分是由低聚半乳糖组成的。
最后，扇扁豆包括6-17重量％的脂质，其看起来像清澈的油，显示的桔黄色是由于存在维生素原A(胡萝卜素)。这种油高度不饱和，分别包含ω3、6、9型必需脂肪酸、油酸、亚油酸和α-亚油酸。
在本发明范围内，扇扁豆糖提取物是一种含有丰富的低聚半乳糖的提取物。
作为本发明优选的可选择方案，以糖的所述提取物的干物质的重 量计，扇扁豆糖提取物有利地含有55-90重量％，更有利地含有57-85重量％，进一步有利地含有60-80重量％，进一步更有利地含有65-75重量％的低聚半乳糖。
低聚半乳糖有利地选自毛蕊花糖、水苏糖或棉子糖。
毛蕊花糖时一种C30H52O26糖，对应下面的通式：
棉子糖是C18H32O16糖，对应下面的通式：
水苏糖是一种C25H44O21糖，其通式如下：
于是，以对应半乳糖-半乳糖-蔗糖-果糖链的水苏糖为例，其中半乳糖-半乳糖和半乳糖-蔗糖之间的键可以通过水解酶、α-半乳糖酶进行断裂，而蔗糖和果糖之间的键可以通过水解酶、蔗糖酶进行断裂。
根据本发明有利的可选择方案，所述扇扁豆糖提取物可以通过包括下列步骤的方法获得：
a)通过合适的溶剂从扇扁豆种子中提取脂质，并回收扇扁豆中的蛋白质和糖组分；然后
b)通过超滤从步骤a)回收的组分中分离含有扇扁豆糖的组分，并回收 所述糖组分；
c)必要时，对步骤b)之后回收的含有扇扁豆糖的组分予以物理性提炼；
d)在步骤b)或c)之后，获得含有丰富的低聚半乳糖的扇扁豆糖提取物。
在步骤a)中，通过公认为非毒食品溶剂的溶剂，如乙醇，从扇扁豆种子中提取脂质。
超滤是一种在本领域技术人员所熟悉的液相分离办法，通过在压力梯度的作用下通过渗透通过半渗透膜进行。
在超滤步骤中，膜的临界阈值有利地为10,000道尔顿。
如有必要，对步骤b)之后获得的含有扇扁豆糖的成分予以物理性提炼，以获得一种无色、完总软化的、高度富含低聚半乳糖的溶液。
在本发明的范围内，以肽提取物总重量计，扇扁豆肽提取物包含至少50％，优选至少70％，优选至少80重量％的肽。所述肽提取物可为国际专利申请WO 00/62789中发明者描述的扇扁豆肽提取物。
本发明描述的扇扁豆肽提取物能通过包括下列步骤的方法获得：
i)通过合适的溶剂从扇扁豆种子中提取脂质，并回收扇扁豆的蛋白质和糖组分；
ii)通过超滤提取蛋白质组分，并回收所述蛋白质组分；
iii)将步骤ii)之后回收的蛋白质通过酶水解成肽；
iv)通过超滤对步骤iii)之后获得的肽进行纯化；
v)通过将水部分或总部蒸发来浓缩步骤iv)之后获得的提取物，并回收肽提取物。
用于步骤i)中的合适的溶剂有利地选自非毒食品溶剂，如乙醇。
本发明优选的可选择的方式是，扇扁豆肽提取物具有下述表1所述的氨基酸组成(以氨基酸总重量计的重量百分比)：
| 氨基酸 | 以氨基酸的总重量计重量％ |
| ASP | 11,3 |
| GLU | 23,2 |
| SER | 5,1 |
| HIS | 1,7 |
| GLY | 3,4 |
| THR | 3,2 |
| ALA | 2,8 |
| ARG | 10,3 |
| TIR | 6,1 |
| CYS-CYS | 2,4 |
| VAL | 3,8 |
| MET | 0,2 |
| PHE | 16,0 |
| ILE | 3,3 |
| LEU | 7,9 |
| LYS | 3,7 |
| PRO | 4,4 |
表1
在本发明优选的另一方式中，在扇扁豆总提取物(扇扁豆糖和肽)中，扇扁豆糖提取物中的干物质和扇扁豆肽提取物中的干物质的质量比为1-10，有利地为1.5-5，更有利地为2-3，优选是约2.5。
在本发明优选的另一方式中，在扇扁豆总提取物(扇扁豆糖和肽)中，低聚半乳糖和扇扁豆肽的质量比为1-10，有利地为1.5-5，更有利地为2-3，优选该比为约2.5。在最初的扇扁豆种子中，低聚半乳糖和肽的质量比为约0.75。
这样，在本发明的范围内，以所述总提取物的干物质的重量计，总扇扁豆提取物包含25-80重量％的低聚半乳糖，以总扇扁豆提取物的干物质的重量计，有利地包含30-75重量％的低聚半乳糖，更有利地为33-68重量％的低聚半乳糖，更有利地是为40-60重量％的低聚半乳糖，更有利的是43-53重量％的低聚半乳糖，进一步有利的是45-51重量％的低聚半乳糖，。
在本发明的范围内，扇扁豆选自窄叶白羽扇豆(lupinusangustifolius)，白羽扇豆(lupius albus)，黄羽扇豆(lupinus luteus)，珍珠羽扇豆(lupinus mutabilis)，优选的扇扁豆为白羽扇豆类。作为软白扇扁豆品种(lupius albus)的例子，要特别提到含有低生物碱含量的品种Ares。
任选地，根据本发明所述的组合物可以进一步包含苯并二氢吡喃或苯并吡喃衍生物，如通式(I)所示。
其中，虚线表示另一条键或没有另外的一条键；
R1表示氢、羟基、甲氧基、苯基、经1、2或3个羟基取代的苯基，经1、2或3个甲氧基团取代的苯基，或经由通式如下的黄酮取代的苯基：
R2表示氢、羟基、甲氧基、苯基、苯基、经1、2或3个羟基取代的苯基，或经1、2或3个甲氧基取代的苯基，或者R1和R2一起形成苯环；
R3表示氢、羟基或酮基；
R4、R5和R6，无论是否相同，表示氢、羟基、甲氧基、苯基、经1、2或3个羟基取代的苯基，或经1、2或3个甲氧基取代的苯基。
在本发明一个特别的实施方案中，苯并二氢吡喃或苯并吡喃衍生物选自色酮、占吨酮或类黄酮。根据本发明，苯并二氢吡喃或苯并吡喃衍生物有利地为类黄酮。
本发明中的术语“类黄酮”指包含通过三个碳原子键连在一起的两 个芳烃环的化合物，这些碳原子形成一个类似氧化的杂环。根据本发明，所述类黄酮有利地选自由黄酮、黄酮醇、二氢-2，3-黄酮醇、黄烷醇、黄烷双醇、异类黄酮或双类黄酮。
本发明中的术语“黄烷醇”指羟基-3-黄烷或羟基-4-黄烷。
本发明中的术语“黄烷”指具有下述通式的化合物：
本发明中的术语“黄烷双醇”指二羟基-3，4-黄烷。
本发明中的术语“异黄酮”指异黄酮、以及带有结构通式3-苯基-4-酮-二氢-2，3-苯并吡喃的异黄酮。
本发明中的术语“双类黄酮”指具有下述通式的化合物：
根据本发明，所述类黄酮有利地为异黄酮或异黄酮的混合物。本发明使用的异黄酮可以通过化学合成获得，或为从天然产物如植物中提取得到的天然物质。后者可分为糖苷配基形式、异黄酮及糖基化形式。这些不同形式由下述通式说明。
具有如下通式的糖苷配基形式：
其中，R′1表示氢或羟基，R′2表示氢或甲氧基，R′3表示羟基。
有利地，根据本发明，R′1、R′2和R′3表示：
R′1 R′2 R′3 化合物名称
H H OH 大豆甙元(daidzein)
OH H OH 染料木素(genistein)
H OCH3 OH 黄豆黄素(glycitein)
通式如下的糖基化形式：
其中，R′4表示氢或羟基，R′5表示氢或甲氧基，R′6表示氢。
有利地，根据本发明，R′4、R′5和R′6表示：
R′4 R′5 R′6 化合物名称
H H OH 大豆甙
OH H OH 染料木甙
H OCH3 OH 黄豆黄甙
异黄酮的糖基化形式在自然界中最为丰富。然而，糖苷配基的生物活性远远优于其糖基化同系物。天然异黄酮如染料木素、大豆甙元或黄豆黄素的情况即是如此。
根据本发明，异黄酮选自染料木素、大豆甙元或黄豆黄素，有利地，所述类黄酮为染料木素。尤其是，本发明使用的染料木素是一个植物源产品，其滴定率为85-90重量％。
本发明的目的还包括美容性和/或医药组合物，该组合物包含以前定义过的组合物，即包含总扇扁豆提取物(扇扁豆糖提取物和扇扁豆肽提取物)，此外任选地含有苯并二氢吡喃或苯并吡喃衍生物。
所述美容及性和/或医药组合物有利地供局部外用，而且其可以包含美容性的和/或医药上可以接受的载体。
可以根据本发明使用的这个美容性的和/或医药组合物可采用各种剂量用于局部外用应用中。根据本发明，该组合物有利地为含水的、水醇的或油性溶液，水包油或油包水乳液，或复乳液、含水或油性凝胶、液体、浆状或固体无水产品，或通过小球体分散在水相中的油分散体，该小球体可能是聚合物纳米粒子如纳米球体和纳米胶囊，或离子和/或非离子型脂质泡囊。所述美容性组合物可以或多或少的为流体、可以呈白色或彩色乳油状、香脂状、乳状、露状、膏状、清液状、浆 状、泡沫、气溶胶，或黏贴。
可以根据本发明使用的这个美容性和/或医药组合物可以另外包括美容性和/或医药领域的常用辅料，如亲水或亲脂性的胶凝剂、亲水或亲脂的活性剂、防腐剂、抗氧剂、溶剂、香水、填料、化学或矿物填料、颜料、螯合剂、吸味剂、热水和着色材料。这些不同辅料的用量是它们在美容性和/或医药组合物中通常使用的量，例如，以美容性和/或医药组合物总重量计，它们的量为0.01％-20重量％。根据它们的特性，这些辅料可以引入脂肪相、水相、脂质泡囊核/或纳米粒子中。
当根据本发明描述的组合物是一个乳液时，以美容性和/或医药组合物总重量计，脂肪相的比率可以为5％-80重量％，优选为5-50重量％。作为乳液用于美容性和/或医药组合物中的油、乳化剂、辅助乳化剂选自常规用于该相关领域的那些物质。乳化剂和辅助乳化剂在组合物中比例占美容性组合物总重量的0.3％-30重量％，优选0.5％-20重量％。
在本发明可以使用的油中，优选使用矿物油、植物来源的油(杏仁油、葵花油、李子油)、动物来源的油、合成油、有机硅油和氟化油(全氟聚醚)。脂肪醇，如十六烷基醇、脂肪酸或蜡，如蜂蜡，也可用作本发明描述的脂肪材料。
在本发明可以使用的乳化剂和辅助乳化剂中，优选使用脂肪酸和聚乙二醇酯，如硬脂酸PEG-40酯或硬脂酸PEG-100酯、脂肪酸和多元醇酯，如硬脂酸甘油酯和三硬脂酸脱水山梨糖醇酯。
在本发明可以使用的亲水胶凝剂中，优选使用羧乙烯聚合物(卡波姆)、丙烯酸共聚物如丙烯酸酯-烷基丙烯酸酯共聚物、聚丙烯酰胺、多糖、天然果胶和粘土。在亲脂性凝胶剂中，优选使用经改性的粘土物质如苯酮、脂肪酸金属盐、疏水硅胶和聚乙烯。
根据本发明描述的美容性和/或医药组合物亦可配置成人体卫生产品，如个人卫生产品。这样的产品的例子包括但不限于抗汗产品、喷雾或凝胶型除臭剂、洗发水，如抗头屑洗发水、肥皂和牙齿卫生产品。
本发明的目的还包括包含扇扁豆糖提取物的组合物作为抗炎药物的用途，该组合物含有占干物质总重量至少50重量％的低聚半乳糖，有利地含有占干物质总重量为55-90重量％，更有利地为57-85重量％， 更有利地为60-80重量％，更有利地为65-75重量％的低聚半乳糖。
事实上，发明人业已发现本发明描述的扇扁豆糖提取物具有消炎的功能。因此它可用于制备药物，如治疗或防止皮肤和/或粘膜过敏、炎症和/或刺激反应或病变的药物。尤其是，炎症病变可能是炎症皮肤病，如牛皮癣、刺激性皮炎、自体免疫疾病、光免疫遏抑，或移植排斥。本发明所述“光免疫遏抑”指阳光紫外线诱导的免疫响应降低，尤其是紫外线B。
根据本发明的一个实施方案，包含扇扁豆糖提取物的药物用于治疗和预防过敏性、反应性、不适性、不耐受性皮肤和/或粘膜，患有同内部、外部(太阳、污染)或激素老化有关的皮肤屏蔽失调和/或免疫失衡。
根据本发明另一个可选择的方案，扇扁豆糖提取物也用于降低组合物如医药制剂、美容品制剂或香水的致敏性及/或刺激性。致敏性指所述组合物中含有的某些化合物具有作为变应原的潜能，即能迅速引发过敏和/或炎症反应的化合物。
本发明涉及针对过敏性、刺激性、不耐受性、易过敏性、老化的，患有皮肤屏障、皮肤红斑、紊乱或与内部、外部或激素老化有关的非病理免疫失衡的皮肤和/或粘膜的美容治疗方法，该方法的特征在于将包含扇扁豆糖提取物的美容性组合物涂敷在皮肤和/或粘膜上。
本发明也涉及包含总扇扁豆提取物(扇扁豆糖提取物和扇扁豆肽提取物，并且进一步任选地，含有苯并二氢吡喃或苯并吡喃衍生物的组合物在制备药物中的使用。该药物用于预防和/或治疗红斑，特别是治疗尿布疹或阳光红斑、红斑痤疮，以及下述情况导致的皮肤炎症：
i)外部侵蚀；和/或
ii)皮肤新陈代谢功能失调或皮肤结构功能失调。
在本发明的范围内，“皮肤新陈代谢功能失调或皮肤结构功能失调”表达中(其中术语“皮肤”表示角质化皮肤或口腔、龈龈、鼻腔或阴道粘膜)是指造成不舒适或病变的皮肤屏蔽的各种侵蚀、失衡、异常，这些症状可能因外部情况或内在因素(如干燥、鳞癣、溃疡...)而加剧；所述表达也指造成或集中在退化的皮肤屏蔽上的炎症性皮肤疾病：遗 传性过敏症、牛皮癣、皮脂溢皮炎、粉刺、赤红斑疹或红斑疹，以及易导致病理或非病理细菌感染的疾病或功能失调，或由后者造成的疾病或功能失调。这些病变没有特定特性，因为屏蔽、炎症和细菌或真菌繁殖经常会发生变化。
在本发明的范围内，所述外部侵袭可以是UVA和/或UVB辐射诱导的侵袭。对于太阳红斑，可以将本发明描述的美容性组合物或药物在阳光照射前后或期间直接涂于皮肤上，有利地是在皮肤出现红斑后涂用。外部侵袭可以是各种气候侵袭(寒冷、刮风)以及接触刺激物、化学或天然变应原或发红药剂。还可以是婴儿尿布、妇女或老人反复的摩擦，但也可以是由医疗或手术治疗(激光、脱皮、电动脱毛、电絮凝)导致的。另外，也可以是腋襞和腋窝受到浸渍，或因阻塞、细菌繁殖和炎症导致的粘膜病加重。
根据本发明描述的组合物包含总扇扁豆提取物，具有三重抗酶功能，即组合的抗蛋白酶活性、抗酯酶活性和抗脲酶活性。
所以，根据本发明描述的组合物可以制备用于预防和/或治疗皮肤和/或粘膜过敏、炎症和/或刺激反应或病变的药物。根据本发明描述的组合物也可用作愈合助剂。
本发明涉及针对过敏性、刺激性、不耐受性、易过敏性、老化的，患有皮肤屏障、皮肤红斑、紊乱或与内部、外部或激素老化有关的非病理免疫失衡的皮肤和/或粘膜的美容治疗方法，该方法的特征在于将包含扇扁豆糖提取物的美容性组合物涂敷在皮肤和/或粘膜上。
本发明也涉及控制皮肤pH的美容治疗方法，其表征是将总扇扁豆糖提取物或含有该提取物的美容性组合物涂敷在皮肤和/或粘膜上。
最后，本发明涉及修复皮肤表面状态的美容治疗方法，即修复皮肤屏蔽损害，其表征是将扇扁豆糖提取物或含有该提取物的美容性组合物涂敷于皮肤上。当皮肤受到：i)外部侵袭；ii)其新陈代谢或其结构功能失调时，其表面会有变化和/或可以观察到皮肤屏障受到损害。
下述例子只用于说明本发明。
图1说明角化细胞随时间释放的IL-1α量(释放动力学)。
图2说明实施例3中例举的配方的抗脲酶活性，通过加入脲酶溶液后pH值对时间的变化进行说明。
图3说明对于或多或少经稀释的受试溶液来说，与对照相比酶活性抑制的百分比。给出的值(1/1200，1/120，1/48和1/12)对应于受试溶液的稀释液(v/v)。
实施例
实施例1：本发明的总扇扁豆提取物组合物
| 组合物标准 | |
| 外观 | 淡黄色水溶液 |
| 干物质(DM)含量 | 35％ |
| 总肽含量 | 10％ |
| α氨化的氮(亮氨酸/DM当量)％ | 5.5 |
| 扇扁豆低聚半乳糖含量(CLHP/DM％) | 48％ |
| pH | 6.5 |
| 在420nm处的吸收在550nm处的吸收 | 0.4200.024 |
| 防腐剂 | 0.45％ |
表2
干物质(DM)由扇扁豆肽和糖组成，因此，以提取物的总重量计，所述总扇扁豆提取物含25重量％的糖。所以，在这个总扇扁豆提取物中，扇扁豆糖提取物对扇扁豆肽提取物的比率为2.5。以所述总提取物的干物质的总重量计，这个总扇扁豆提取物含48重量％的低聚半乳糖。因此，以所述糖提取物的干物质的总重量计，该扇扁豆糖提取物含67.2重量％的低聚半乳糖。
实施例2：本发明描述的总扇扁豆提取物的制备方法
A)扇扁豆糖提取物的制备方法
a)用乙醇去脂质
将9.9kg扇扁豆粉和85L乙醇混在一起，将该混合物在室温下搅拌
1小时。然后将混合物放到倾析器中，然后除去乙醇组分。
a)糖组分的回收：
i)分散在水中并调整pH
在被倾析出的组分中加入90L水，用碱将pH值调整到8.5。
ii)用板式过滤器离心和过滤
这样得到的溶液在Westfalia型连续倾析器上离心，然后再在板式过滤器上过滤。收集滤液。
iii)用10kDa临界阈值膜超滤并浓缩
滤液浓缩因子为2。然后用2体积软水(即140L软水)恒滤，回收超滤液，然后用200Da临界阈值膜(浓缩因子等于8)浓缩超滤液，即经浓缩的糖的总容积为15L。
b)糖组分的物理提炼；
i)软化与浓缩
将所得到的浓缩糖通过串联安装的两根离子交换树脂柱(分别是阳离子交换和阴离子交换)，然后经纳米过滤器(临界阈值为200Da的膜)浓缩。回收浓缩后的经软化(去矿物质的)的糖(4L，17g/L的糖)。
ii)活性炭的脱色
将0.1kg炭加入4L糖溶液中。将其在室温下反应一小时，然后用板式过滤器过滤。
iii)最后浓缩
回收的滤液用具有200Da临界阈值膜的纳米过滤器予以浓缩。最后获得2.46kg、275g/L的糖溶液。
B)扇扁豆肽提取物的制备方法
a)扇扁豆蛋白质的提取和提纯
这一步骤包括在pH呈碱性情况下可溶解成分的水溶解，然后不溶解物被分离：
从经脱脂质和研磨的扇扁豆饼进行蛋白质的提取，pH为9.0(通过加入碱调整pH)，粉/水比率等于1/10(p/p)。将溶液在室温搅拌状态下放置一小时。通过排放将饼的不溶解部分同可溶解部分分离开来。清洗得到的饼。包含可溶解蛋白质和糖的可溶解组分在临界阈值为10,000道尔顿的超滤模件上恒滤，以将蛋白质(保留物)与可溶解糖(超滤液)分离开来。
h)经酶水解进行的肽的生产与提纯：
将包含蛋白质的超滤液保留物调整到100g/l的浓度，然后在葡聚糖酶存在下在55℃pH为8.0时水解三小时。水解后，通过在85℃加热15分钟使酶变性。溶液一降温，加入盐酸予以中和。所得的肽通过在临界阈值为10,000道尔顿的超滤模件上恒滤予以纯化。然后将所得到的溶液纳米过滤，以便去盐(去除氯化钠)，及浓缩肽组分。该肽溶液最后由3％活性炭脱色(50℃1小时)，过滤除去炭。
然后将待脱水的该浓缩液作为微雾注入到塔顶，同时抽入热气。最后，将得到的粉末回收、喷干，然后调节。
C)总扇扁豆提取物的制备
将扇扁豆肽提取物、扇扁豆糖提取物和防腐剂搅拌在一起。这样，在搅拌状态下，下述成分混和在一起：
-2.46kg扇扁豆糖，DM为275克/L，即0.676kgDM；
-0.32kg扇扁豆肽提取物，DM为95％，即0.304kgDM；和
-12.5g防腐剂(0.4％w/w)。
这样得到的总扇扁豆提取物中扇扁豆糖DM/扇扁豆肽提取物DM的质量比率为2.22。
然后，在机械搅拌下进行均化，接下来是消毒微滤和调节：
-2-步过滤：用板式过滤器，然后在无菌条件下，用临界阈值为0.2μm的灭菌筒，；
-调节
-产出量：2.6kg，DM为36.2％.
表3给出了根据上述方法制备的总扇扁豆提取物的组成：
| 外观 | 淡桔色溶液 | |
| 分析标准 | ||
| 干材料 | 36.2％ | |
| pH(1/4稀释) | 6.69 | |
| 在420nm处的吸收 | 0.6 | |
| 在550nm处的吸收 | 0.053 | |
| 干物质的组成 | ||
| α-氨基化的氮 | DM为5.1％w/w | |
| 总提取物的w/w％ | 总提取物的DM的w/w％ |
| 单糖 | 3.6 | 10 |
| 蔗糖 | 4 | 11 |
| 水苏糖 | 12.9 | 35.6 |
| 毛蕊花糖 | 2 | 5.5 |
| 棉子糖 | 2.5 | 6.9 |
| 全部糖 | 25 | 69 |
| 全部低聚半乳糖 | 17.4 | 48 |
实施例3：用于预防和/或治疗尿布疹的配方：
纯净水 56.6％
氧化锌 10.0％
辛酰基乙二醇 5.0％
流体凡士林油 5.0％
辛酸丙二醇酯 4.0％
甲基葡萄糖二油酸酯 4.0％
亲有机二氧化钛 3.0％
共聚物PEG-45/十二烷基乙二醇 3.0％
微晶蜡 2.0％
总扇扁豆提取物 2.0％
右旋戊醇 2.0％
35％天然维生素F 1.0％
榭树油 1.0％
山梨酸钾 0.5％
甲基对羟基二苯酸酯 0.3％
硫酸镁 0.3％
丙基对羟基二苯酸酯 0.3％
染料木素 0.10％
实施例4：个人卫生洗乳配方
成分 ％w/w
水 QSP 100
椰油基-葡糖苷 10.00
十二烷基磺基琥珀酸二钠 2.00
椰油基羟乙基磺酸钠 2.00
玉米淀粉 2.00
十六烷基醇 2.00
羟丙基瓜尔胶 2.00
柠檬酸 QS pH
总扇扁豆提取物 0.1-10
染料木素 0.1-10
甘油 0.45
聚季铵盐 100.30
EDTA(乙二胺四乙酸)四钠 0.20
二氧化钛 0.10
防腐剂QS
实施例5：个人卫生泡沫配方
成分 ％w/w
水 QSP100
十二烷基两性醋酸钠 10.00
(sodium lauroamphoacetate)
椰油基-葡糖苷 10.00
十二烷基硫酸镁 5.00
PEG-40椰子酸甘油酯 2.50
PEG-150二硬酯酸酯 1.00
椰油醇聚醚硫酸钠 1.00
总扇扁豆提取物 0.1-10
染料木素 0.1-10
柠檬酸 QS pH
香水 SA
防腐剂 QS
实施例6：治疗和/或防治尿布症配方
纯水 56.7％
氧化锌 10.0％
辛酰乙二醇 5.0％
流体凡士林油 5.0％
二辛酸丙二醇酯 4.0％
二油酸甲基葡萄糖酯 4.0％
亲有机二氧化钛 3.0％
共聚物PEG-45/十二烷基乙二醇 3.0％
微晶蜡 2.0％
总扇扁豆提取物 2.0％
右旋戊醇 2.0％
35％中性维生素F 1.0％
榭树油 1.0％
山梨酸甲 0.5％
甲基对羟基苯酸酯 0.3％
硫酸镁 0.3％
丙基对羟基苯酸酯 0.2％
实施例7：扇扁豆糖的消炎活性
加入SDS(十二烷基硫酸钠)在体外建立炎症模型。SDS能诱导βIL-1的产生，而βIL-1由角质细胞分泌，为炎症反应的主要介体。因此，对应于SDS的由角质细胞分泌的βIL-1量与炎症响应的深度成正比例。
事先估计细胞胞毒性(中性红色试验)以便确定细胞的无毒工作剂量。因此，抑制浓度50 IC50(诱导细胞50％死亡率的浓度，相对于细胞总数)在24小时和48小时为扇扁豆糖提取物的约10％。用不同浓度的扇扁豆糖提取物溶液(0.5％、1％和5％，即低聚半乳糖的0.375％、0.75％和3.75％)对细胞做24小时预处理，然后将细胞与SDS(20μg/mL)一起放置16小时。βIL-1的量由ELISA试验(免疫剂量)在培育媒介中测定。
以下表4显示得到的结果。
| 对照细胞 | SDS | 0.5％扇扁豆 糖提取物 | 1％扇扁豆 糖提取物 | 5％扇扁豆 糖提取物 | |
| β IL-1(pg/mL) | 0.26 | 10.42 | 5.25 | 6.33 | 3.83 |
表4
这样，扇扁豆糖能减少发炎的角质细胞分泌的βIL-1量的50-60％(对于最大浓度，即5％)。因此，扇扁豆糖具有非常显著的消炎活性。
实施例8：总扇扁豆提取物(含有丰富低聚半乳糖的扇扁豆糖和扇扁豆肽)的消炎活性
试验方案与实施例7相同。结果表述为对由经处理的细胞分泌的βIL-1合成的抑制百分比(糖+肽+SDS)，同未经处理的细胞相比(仅SDS)。
| 低聚半乳糖百分比 | 0.375 | 0.75 | 3.75 | 0.01 | 0.375 | 0.75 | 3.75 |
| 肽的百分比 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0.01 | 0.01 | 0.01 |
| 抑制％ | 49 | 39 | 63 | 18 | 90 | 88.5 | 95 |
所以，扇扁豆肽本身就有一定的消炎活性。出乎意料之外，当扇扁豆肽和糖同时使用时，会使糖的消炎活性增强，对于肽来说也是如此。因此，扇扁豆糖和肽协同抑制SDS诱发的炎症。
实施例9：含有总扇扁豆提取物(含有丰富的低聚半乳糖的扇扁豆糖和扇扁豆肽)和苯丙二氢吡喃和苯丙吡喃衍生物的组合物的消炎功能
对实施例3的配方进行测试。
在体外在再生表皮模式上(Skinethic)建立炎症模型，该再生表皮经SLS(十二烷基硫酸钠)作用。作为由角质细胞释放的、刺激和消 炎现象的主要媒质的αIL-1的量增大了几倍(释放动力学)。
将制剂在加入SLS之前(对防止性功能的评估)或加入SLS之后(治疗功能的评估)，涂敷在表皮上。
SLS以时间依赖形式诱导产生αIL-1。在最初的八个小时内，受测试制剂能减少40％αIL-1的生产和/或释放，具有相同的预防和/或治疗效率。
超过八小时后，治疗效果(50％抑制)似乎大于预防效果(30％抑制)。
附图1说明了得到的结果(αIL-1pg/mL随时间(小时)的产生)。
附图说明：
受试制剂，然后SLS
总之，该试验表明所述制剂可以限制SLS在再生表皮上诱发的炎症反应。其功能既是治疗性的，又是防止性的。
实施例10：含有总扇扁豆提取物(含有丰富的低聚半乳糖的扇扁豆糖和扇扁豆肽)和苯丙二氢吡喃和苯丙吡喃衍生物的组合物的抗脲酶活性。
对实施例3所述制剂进行测试。方案建立在pH测量的基础上。将待试验的产品装入一个小瓶中，加入pH＝6的缓冲，然后加入尿素溶液。然后加入脲酶溶液，每小时测量水相pH。尿素在有脲酶存在下降解成氨水，pH增加。抗脲酶活性表达为pH的稳定性。附图2显示了得到的结果(pH对用小时表示的时间)。
附图说明：
本发明制剂
对照对应于尿素和脲酶溶液，不含任何活性产品。脲酶将尿素降解成氨水。
最终产品的抗脲酶活性可以由本试验说明。实际上，当对照溶液 的pH增加时，包含实施例3制剂的溶液的pH保持稳定。
实施例11：总扇扁豆提取物(富含低聚半乳糖的扇扁豆糖和扇扁豆肽)以及苯丙二氢吡喃和苯丙吡喃衍生物的组合物的抗脂酶活性
以溶液总重量计，包含2重量％本发明描述的总扇扁豆提取物(富含低聚半乳糖的扇扁豆糖和扇扁豆肽，扇扁豆糖提取物的干物质和扇扁豆肽提取物的干物质的质量比率为2.5)和0.1重量％染料木素的溶液的抗脂酶活性在试管内得到评估(生化模型：脂酶+基体+试验产品)试验不同的稀释液。
附图3表明得到的结果(与对照相比，脂酶功能受控制抑制的百分比，不同稀释液为：1/1200、1/120、1/48和1/12)。总扇扁豆提取物+染料木素混合物具有高度的抗脂酶活性。该活性属剂量依赖型的，对于非常低的稀释度也有效(从1/1200到1/12)。
实施例12：医疗控制下的消费者试验；三种美容产品对婴儿尿布症护理的对比评估
在儿科进行了本调查，包括127个儿童。儿童的平均年龄为10.6月，其中30％患有臀部浅度皮炎刺激，70％患有中度刺激(88％属于干性刺激，12％属于渗出性刺激)。
初次就医后，医师开出方案中的2个乳油的一个，不知其名：A＝实施例3的制剂，B＝没有活性配料的实施例3制剂，即不含总扇扁豆提取物和异黄酮。
定期在换上干净尿布后涂用乳油，持续10-30天。在就诊后，在零天、15天、30天时医师临床检查，并填写问卷调查。也建议用户(母亲)填写自我评估问卷。
数据分析使用独立于每个变量的Khi2试验、Kruskal和Wallis、Mann和Whitney无参数试验。儿童以下列方式分布：A：87个受试婴儿，B：40个受试婴儿。
a)臀部皮炎的消失
每次换尿布后使用制剂A，85％的受试婴儿在4.9天后尿布疹完总 消失了。每次换尿布后使用制剂B，73％的受试婴儿在5.1天后尿布疹完总消失了。因此，制剂A获得了臀部皮炎的红斑、屏蔽功能失调和刺激完总消失的最高比率。
在其余受试儿童中，伤口发展的情况是有利的，但是部分的。
b)用户(母亲)自我评估问卷的结果
制剂A和B的表现如表6所示。将两者做比较，可以确定其数据意义优于大部分评估标准。
表3
| 评估标准效率 | ||
| A | A/B | |
| 产品使刺激缓和下来 | 92％ | S |
| 促进损害的修复 | 91％ | S |
| 减少红斑的复发 | 80％ | S |
美容性认可
| 厚度和覆盖的一致性 | 97％ | S |
| 换尿布之间的适当的坚持 | 94％ | S |
| 换尿布时可以适当照料婴儿 | 94％ | S |
| 对产品的满意度 | 94％ | S |
表6
S：标准，两种产品的区别具有统计学上的意义。
结论：在85％的案例中，使用制剂A 4.9天后，红斑和损害迅速完全消失。
Claims (20)
1.一种抗炎组合物，其包含扇扁豆糖提取物和扇扁豆肽提取物，其中以糖提取物的干物质的重量计，扇扁豆糖提取物含有至少50重量％的聚合度为3-10的低聚半乳糖，所述低聚半乳糖选自毛蕊花糖、水苏糖或棉子糖；其中所述扇扁豆肽提取物具有以下所示的氨基酸组成；并且所述低聚半乳糖和所述扇扁豆肽的质量比为1-10；其中所述肽提取物包含至少50％的肽，所述扇扁豆选自窄叶白羽扇豆、白羽扇豆、黄羽扇豆或珍珠羽扇豆
氨基酸 以氨基酸的总重量计，重量％
ASP 11.3
GLU 23.2
SER 5.1
HIS 1.7
GLY 3.4
THR 3.2
ALA 2.8
ARG 10.3
TIR 6.1
CYS-CYS 2.4
VAL 3.8
MET 0.2
PHE 16.0
ILE 3.3
LEU 7.9
LYS 3.7
PRO 4.4
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征为以糖提取物的干物质的重量计，所述糖提取物包含55-90重量％的聚合度为3-10的低聚半乳糖。
3.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征为所述糖提取物通过包含下述步骤的方法获得：
a)通过乙醇溶剂从扇扁豆种子中提取脂质，并回收扇扁豆中的蛋白质和糖组分；然后
b)通过超滤从步骤a)回收的组分中分离包含扇扁豆糖的组分，并回收所述糖组分；和
c)在步骤b)之后，获得含有丰富低聚半乳糖的扇扁豆糖提取物。
4.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征为所述糖提取物通过包含下述步骤的方法获得：
a)通过乙醇溶剂从扇扁豆种子中提取脂质，并回收扇扁豆中的蛋白质和糖组分；然后
b)通过超滤从步骤a)回收的组分中分离包含扇扁豆糖的组分，并回收所述糖组分；
c)对步骤b)之后回收的含有扇扁豆糖的组分进行物理提炼；
d)在步骤c)之后，获得含有丰富低聚半乳糖的扇扁豆糖提取物。
5.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征为所述低聚半乳糖和所述扇扁豆肽的质量比为2-3。
6.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征为所述扇扁豆肽提取物通过包含下列步骤的方法获得：
i)通过乙醇溶剂从扇扁豆种子中提取脂质，并回收扇扁豆的蛋白质和糖组分；
ii)通过超滤提取蛋白质组分，并回收蛋白质组分；
iii)将步骤ii)之后回收的蛋白质经酶水解成肽；和
iv)通过超滤纯化步骤iii)之后获得的肽；
v)通过水的部分或全部蒸发来浓缩步骤iv)之后获得的提取物，并回收肽提取物。
7.根据权利要求1所述的组合物，其特征为所述扇扁豆为白羽扇豆。
8.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征为该组合物进一步包含如下通式(I)所示的苯并二氢吡喃或苯并吡喃衍生物：
其中，
虚线表示含有另外一条键或没有另外一条键；
R1表示氢、羟基、甲氧基、苯基，经1、2或3个羟基取代的苯基或经1、2或3个甲氧基取代的苯基，或经如下通式所示的黄酮取代的苯基
R2表示氢、羟基、甲氧基、苯基，经1、2或3个羟基取代的苯基，或经1、2或3个甲氧基取代的苯基，
或者，R1和R2一起形成苯环；
R3表示氢、羟基或酮基；
R4、R5、R6相同或不同，表示氢、羟基、甲氧基、苯基，经1、2或3个羟基取代的苯基，或经1、2或3个甲氧基取代的苯基。
9.根据权利要求8所述的组合物，其特征为所述通式I所示的化合物选自色酮、占吨酮或类黄酮。
10.根据权利要求9所述的组合物，其特征为所述通式I所示的化合物是类黄酮。
11.根据权利要求10所述的组合物，其特征为所述类黄酮选自黄酮、黄酮醇、二氢-2，3-黄酮醇、黄烷酮、黄烷醇、黄烷双醇、异类黄酮或双类黄酮。
12.根据权利要求10所述的组合物，其特征为所述类黄酮是一个异黄酮或异黄酮的混合物。
13.根据权利要求12所述的组合物，其特征为所述异黄酮选自染料木素、大豆甙元或黄豆黄素。
14.一种美容性组合物或医药组合物，其含有权利要求1或2所述的组合物和其可接受的赋形剂。
15.根据权利要求14所述的组合物在制备用于美容治疗过敏性、刺激性、不耐受性、易过敏性、老化的，患有皮肤屏障、皮肤红斑、紊乱或与内部、外部或激素老化有关的非病理免疫失衡的皮肤和/或粘膜的药物中的用途。
16.根据权利要求14所述的组合物在制备用于控制皮肤pH的药物中的用途。
17.根据权利要求14所述的组合物在制备用于修复皮肤表面状况的药物中的用途。
18.根据权利要求14所述的组合物在制备用于修复皮肤屏蔽损害的药物中的用途。
19.根据权利要求14所述的组合物在制备用于预防和/或治疗红斑、红斑痤疮，或由于以下原因导致的任何皮肤炎症的药物中的用途：i)外部侵蚀；和/或ii)新陈代谢功能失调或皮肤结构的功能失调。
20.根据权利要求14所述的组合物在制备用于预防和/或治疗尿布疹或太阳红斑的药物中的用途。
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