KR100525722B1

KR100525722B1 - 피부외용제

Info

Publication number: KR100525722B1
Application number: KR10-2003-0013953A
Authority: KR
Inventors: 유영효; 정상수
Original assignee: 주식회사 바이오사포젠
Priority date: 2003-03-06
Filing date: 2003-03-06
Publication date: 2005-11-02
Also published as: KR20040079051A

Abstract

효소처리법을 이용해서 생산된 진세노사이드 Rh₂ 및/ 또는 진세노사이드 Rg₃를 배합함으로써 피부면역 정상화 효과가 높으며, 또한 세포활성 효과 등 피부에 유용한 피부외용제를 본 발명자가 검토, 개발했다.

[해결수단]

진세노사이드 Rh₂및 / 또는 진세노사이드Rg₃를 배합하는 것을 특징으로 하는 피부외용제를 이용함으로써 상기 과제가 해결되었다.

Description

피부외용제{Topical constituents of ginsenoside Rh2 and ginsenoside Rg3}

본 발명은 세포활성 작용이 있는 의약품, 의약부외품이나 화장품에 관한 것이며, 특히 피부면역 조절작용이 있는 피부외용제에 관한 것이다.

보다 상세하게는 효소처리법에 의해 생산된 진세노사이드 Rh₂ 및/ 또는 진세노사이드 Rg₃ 의 추출물을 함유하는 안전하고 유효한 피부외용제에 관한 것이다.

고려인삼, 약용인삼 등은 고래로부터, 생약으로서 이용되어 왔으며, 화장품등의 피부외용제에도 함유되어 있다. (일본특허공개 소화50-95416호, 일본특허공개 소화55-127317호, 일본특허공개 소화58-113116호, 일본특허공개 소화60-38314호, 일본특허공개 소화60-199810호, 일본특허공개 소화60-222409호, 일본특허공개 소화60-255715호)

화장품에의 이용은 세포의 활성을 주목적으로 첨가되어 왔다. 또한 최근의 연구에서 약용인삼이 면역 조절 작용이 있으며, 암 치료에 유용하다는 것이 알려졌다. 이중에서, 특히 야생의 약용인삼에 많이 함유되어 있는 진세노사이드 Rh₂, 진세노사이드 Rg₃ 의 효과가 강력하다는 것도 최근의 연구에서 밝혀졌다.

화장품을 필두로 하는 피부외용제는 장기간에 걸쳐 연용되고, 피부라고 하는 면적이 넓은 장기에 적용되기 때문에, 안정성이 가장 중시된다.

또한, 피부외용제에 있어 필요한 유효성은 여러 가지가 있지만, 피부의 노화방지, 색소침착방지 등의 효과가 추구되고 있다. 또한 한국인등의 유색인종은 피부가 하얀 것이 미의 기준이 되고 있어 미백은 피부외용제에서 추구되는 커다란 효과이다. 또한 피부가 갖고 있는 기능은 건조한 대기중에서도 활성될 수 있도록 체내로부터 수분이 손실되지 않도록 보호하거나 외부의 물리적인 방어기능은 물론 있으며 최근의 연구에 의하면 피부의 각화세포, 랑게르한스 세포, 진피의 수상세포, 혈관내피세포, 마크로파지등으로 구성되어 있으며, 외부에서 이물질인 항원의 침입에 대해서 신속하게 접촉해서 처리하고, 임파절로 이동해서 T세포에 항원을 제시하여 이후의 일련의 면역작용을 일으키게 한다고 알려졌다. 그리고 자외선을 씌는 것과 스트레스에 의해 면역기능이 저하하는 것도 알려져 있으며, 발암까지는 이르지 않지만 여러 종류의 질환 (질환에 이르지 않는 것을 포함하는 피부의 이상)을 발생시킬 우려가 있는 피부면역의 정상화는 충분히 고려되어야 할 항목이다. 그리고 피부에서의 면역의 움직임은 다른 장기와 크게 다르며, 다른 면역에 관계하는 것이 알려져 있으며, 피부에서의 움직임은 다른 것이 많다.

안전성과 피부에의 유효성을 고려하고, 예의 검토한 결과, 인삼등의 식물에 함유되어 있는 유효성분인 진세노사이드 Rh₂ 및/ 또는 진세노사이드 Rg₃를 이용한 피부외용제가 본 발명의 목적에 최적인 것으로 판명되었다.

본 발명에서는 진세노사이드 Rh₂ 및/ 또는 진세노사이드 Rg₃ 는 진세노사이드류를 함유하는 식물의 전체 또는 일부분을 그대로 이용해서 혹은 가공처리(예를 들어, 건조, 절단, 증기가열, 또는 분말화)한 것에서 추출하는 것이 가능하다. 그러나 약용인삼에 그 함유량이 높기 때문에, 약용인삼으로부터 추출하는 것이 바람직하다. 그 종류를 예를 들면 오가과의 고려 인삼(Panax ginseng C.A. Meyer; Panax schinseng Nees), 죽절 인삼 (Panaxjaponicus C. A. Meyer; Panax schinseng Nees var. japonicum Makino; Panax pseudo-ginseng(Will.) subsp. japonicus Hara), 산치 인삼 (Panax notoginseng(Burkill) F.H. Chen; Panax sanchi Hoo; Panaxseudo-ginseng Wallich var.notoginseng(Burkill) Hoo et Tseng), 또는 아메리카 인삼(Panax quinquefolium L.)등을 들수 있다.

또한 약용인삼에서 진세노사이드 Rh₂ 및/ 또는 진세노사이드 Rg₃ 가 많이 함유되어 있는 세포를 선택해서 배양하여 대량으로 얻는 것도 가능하다.

예를 들어 고려 인삼의 뿌리의 성장점을 배양하고, 그 중에서 수량이 많은 세포를 선택하면 대량으로 얻는 것이 가능하다.

또한 일본특허공개 평성 8-208688호에 공개되 바와 같이 데레페노이드계로부터 합성하는 것도 가능하다.

본 발명에서는, 진세노사이드 Rh₂ 및/ 또는 진세노사이드 Rg₃를 많이 함유하는 식물을 효소처리 후 추출함으로써 대량의 진세노사이드 Rh₂ 및/ 또는 진세노사이드 Rg₃를 얻었다.

Rh₂ (1,400 ~ 1,500mg), Rg₃(280 ~ 300mg) 함유하는 인삼조성물을 아래의 방법으로 얻었다.

통상의 액체배지에 밀기울 3%, 인삼분말 1%를 첨가하고 Aspergillus 속의 국균을 접종한 것을 20 ~ 30℃, 60 ~ 80 시간 호기적으로 배양한다. 그 후 원심분리하여 균체를 제거하고, 배양액에 50 ~ 80%의 에탄올 용액을 첨가해서 효소단백질을 침전, 회수한다. 이어서 얻어진 효소 단백질을 회수한 량에 따라서 0.02M 초산 나트륨(pH5.0)에 재 용해해서 원심분리법으로 불순물을 제거한 후, 상등액으로서 효소처리액을 얻는다.

효소처리용액에 조사포닌을 적당량 첨가하여 18 ~ 24시간 반응시키고, 그 후, 에탄올에서 불순물을 침전처리한 후, 상등액을 감압농축한다. 농축액을 50 ~ 70% 초산 수용액에서 20배로 희석하고 4 ~ 8시간 반응시킨 후, 얻어진 반응액을 동결건조시켜 인삼 조성물을 얻는다.

약용인삼(또는 조직배양물)에서의 추출방법은 공지의 방법을 이용해도 좋다.

이하에서 그 일례를 든다.

필요에 따라 유기용매 예를 들어 헥산, 석유 에테르를 이용해서 탈지한 후, 물 또는 저급 지방족 알코올 (예를 들어 메탄올, 에탄올) 또는 물과 저급지방족 알코올을 이용해서 추출하고, 용매를 제거한 후, n-부탄올을 가해서 용해하고, 여기에 물을 가한 후 잘 교반해서 n-부탄올층을 끄집어 낸뒤, 증발건조한다. 잔류물을 저급 지방족 알코올에 용해시키고 에테르 안에서 교반 주입하고, 얻어진 석출물을 취한다. 이것을 크로마토그래피를 이용해서 진세노사이드 Rh₂ 및/ 또는 진세노사이드 Rg₃를 얻는다.

또한 합성하는 것도 가능하며 일례를 든다면 일본특허공개 평성 3-208688와 같은 제조방법으로 얻는 것도 가능하다.

진세노사이드 Rh₂ 및/ 또는 진세노사이드 Rg₃를 피부외용제로 배합하며, 추출방법이나 배합목적등에 따라서 변화하나 배합량은 고형분으로서 0.0001 ~ 10.0%가 바람직하다.

또한 다른 배합하는 원료는 한정하지는 않기 때문에 자유롭게 선택할 수 있으며, 본 발명의 안전하고 유효성있는 피부외용제라고 하는 취지에 반하지 않는 원료를 선택하는 것은 당연하다. 이를 위해 미백이나 항산화, 세포활성 (세포노화방지), 보습, 피부거침방지 및 그의 개선등에 효과가 있는 각종 약제와 병용하는 것은 본 발명의 목적을 더욱 효과적으로 한다.

또한 용도에 따라서, 크림, 유액, 로숀, 팩, 스프레이, 젤 등 임의의 제형으로 선택하는 것은 문제가 없다.

이하에서 실제의 추출방법의 예인 제조예와 제조예를 배합한 실시예를 기재하나, 여기에 한정되는 것은 아니다.

[제조예 1]

효소처리 후, 120℃에서 2시간 가열처리한 고려인삼 200g을 에탄올 500ml로 추출해서 에탄올 추출물을 얻은 후, 에탄올을 증발시켜 제거한 후, 남은 잔류물에 물을 200ml로 현탁시켜 에테르 200ml씩 3회 추출한 후, 남은 물층을 물로 포화시킨 부탄올 200ml씩 3회 추출해서 사포닌이 함유된 부탄올 추출액을 얻었다. 이 부탄올 추출액을 건조해서 초산 에틸/메탄올/물 (20:1:1)의 혼합용매를 용출제로 해서 실리카겔 칼럼 크로마토그래피시켜 목적으로 하는 진세노사이드 Rg₃를 60% 함유하는 분획 2.7g을 수득했다.

[제조예2]

제조예1과 동일한 방법으로 진세노사이드 Rh₂를 0.13g 얻었다.

실시예에서는 표1에 나타낸 처방으로, A, B를 모두 80℃에서 가온 용해하고, B를 A에 교반하면서 서서히 유화한다. 교반하면서 냉각하여 35℃에서 교반을 멈추고 방치하여 크림을 제조했다.

		실시예1	실시예2	실시예3	실시예4	비교예
A	스쿠알렌	10.0	10.0	10.0	10.0	10.0
	팔미틴산 세틸	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0
	2-에틸헥산 산 세틸	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0
	트리 2-에틸헥산 산 글리세린	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0
	올리브유	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0
	비닐알코올	4.0	4.0	4.0	4.0	4.0
	스테아린산	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0
	메틸폴리실록산(300cSt)	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2
	수소첨가 대두 인 지질	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2
	모노스테아린산 POE(15) 글리세릴	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2
	친유형 모노스테아린산 글리세릴	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0
	모노스테아린산 POE(20) 솔비탄	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
	테트라올레인산 POE(40) 솔비톨	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
B	정제수	61.2	62.1	62.19	60.8	62.2
	1,3-부틸렌글리콜	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0
	파라옥시 안식향산 메틸	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2
	글리세린	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0
	제조예1	1.0		0.01	1.0
	제조예2		0.1		0.4

효과를 확인하기 위해, 이하의 실험을 수행했다.

[시험1] 피부면역기능 회복시험

8주령의 C3H/HeN 수컷 마우스를 4군으로 나누고, 제1군 ~ 제3군의 마우스의 복부를 제모한 후, 10mJ/cm²/일의 양으로 4일간 연속 자외선을 조사하였다. 1일째, 2일째, 3일째, 4일째의 조사 직후에, 제1군 ~ 제2군의 마우스의 조사부위에 각각 제조예 1 ~ 2의 2% 용액(용매는 에탄올)을 50㎕/일 도포했다. 제3군의 마우스의 조사부위에는 아무것도 도포하지 않았다. 또한 제4군에는 자외선을 조사하지 않았다. 조사종료 1일 후에 조사부위 (제4군의 마우스에는 제1 ~ 제3군 마우스의 조사부위와 동일한 복부)에 있어서 디니트로플루오르벤젠(DNFB)에 의한 접촉 알러지 감작을 수행했다. 그래서 감작 5일 후 양 이개에 야기하고, 1일 후에 양 이개의 종창의 값(야기 1일후 이개의 두께에서 야기전 이개의 두께를 뺀 값)을 측정하여 접촉 알레르기의 반응의 회복율(%)을 다음 식에 의해 산출한다.

회복율 = (a-b) X 100 / (c-b)

단, a는 제1군 ~ 제2군의 이개종창의 값을, b는 제3군의 이개종창의 값을, c는 제4군의 이개종창의 값을 나타낸다. 결과는 표2에 나타내었다.

시험군(제조예)	회복율(%)
제1군 (제조예1)	88.7
제2군 (제조예2)	90.5

[실험2] 사람에서의 유용성 평가시험

21세에서 46세의 여성 자원자 40명을 무작위로 4군으로 나누었다. 오른쪽 안면에는 실시예, 왼쪽 안면에는 비교예를 1일 3회 좌우 동량으로 사용해서 발랐다. (특별히 양의 제한은 없었다) 3개월 후에 피부의 상태에 대하여 아래와 같이 평가했다.

자각적 평가

이하의 기준으로, 피부의 하얀정도, 피부거침정도, 피부땡김, 샤워개선효과, 화장의 먹음에 대해서 조사했다. 결과를 표3에 나타내었다. (또한 시험기간중에는 피부의 이상을 호소하는 사람은 없었다. 또한 표의 숫자는 평균값을 나타낸다)

사용전에 비교해서 매우 개선되었다 3

사용전에 비교해서 개선되었다 2

사용전에 비교해서 조금 개선되었다 1

사용전과 변화없다 0

사용전에 비교해서 조금 악화되었다 -1

사용전에 비교해서 악화되었다 -2

사용전에 비교해서 매우 악화되었다 -3

	실 시 예				비 교 예
	피부거침 개선효과	피부땡김	샤워개선효과	화장먹음	피부거침개선효과	피부땡김	샤워개선효과	화장먹음
제1군(실시예1)	2.6	2.5	2.3	2.4	0.2	0.1	0.2	0.3
제2군(실시예2)	2.3	2.4	2.4	1.9	0.3	0.2	0.2	0.2
제3군(실시예3)	2.1	2.1	2.0	2.0	0.3	0.3	0.2	0.1
제4군(실시예4)	2.7	2.8	2.7	2.7	0.1	-0.1	0.1	0.1

[시험3] 안전성 시험

이하와 같이 안전성 시험을 수행했다.

3-1 피부 일차 자극성 시험

배부를 제모한 백색 수컷 집토끼 (1군 3마리)의 피부에 적용했다. 판정은 적용 후 24, 48, 72시간에 일차 자극성 평점법으로 홍반 및 부종을 지표로 해서 수행했다. 검체는 제조예2와 3을 각 0.5% 수용액을 이용했다. 그 결과 모든 동물에서 홍반 및 부종이 나타나지 않아 음성으로 판정되었다.

3-2 피부 누적 자극성 시험

측복부를 제모한 햄토리계 모르모트(암컷, 1군 5마리)의 피부에 1일 1회, 주5회, 0.5ml/마리를 도포했다. 도포는 2주간 수행했으며, 제모는 매주 최종 도포일에 수행했다. 판정은, 각 도포일 및 최종 도포일의 다음날에 일차 자극성 평점법으로 홍반 및 부종을 지표로 해서 수행했다. 검체는 제조예 2와 3을 각 0.5% 수용액을 이용했다. 그 결과 모든 동물에서 2주간에 걸쳐 어떠한 홍반 또는 부종이 나타나지 않아 음성으로 판정했다.

3-3 감작성 시험

배부를 제모한 햄토리계 모르모트(암컷, 1군 5마리) 체중 330 ~ 400g의 햄토리계의 암컷 모르모트 10마리의 배부를 제모하고, 제조예 0.5% 수용액 20℃를 도포해서 애쥬번드 패치 뎨스트를 수행했다. 결과는 제조예 2와 3의 모든 동물에서 홍반 및 부종이 나타나지 않아 음성으로 판정했다.

3-4 히트 패치 테스트

23세에서 46세의 여성 자원자 30명에게 제조예 0.5% 수용액 20℃를 통상적인 방법으로 패치 테스트를 수행했다. (부착시간 24시간) 결과는 제조예 2 및 3의 30인 모두에게서 부착부위에 어떠한 자극성도 나타나지 않아 히트 피부에 대한 자극성은 음성으로 판정되었다.

3-5 급성독성시험

4시간 절식시킨 ddy계 마우스(수컷 및 암컷, 1군 5마리, 5주령)에 제조예를 200mg/kg 경구 투여하고, 독성증상의 발현, 정도등을 경시적으로 관찰했다. 그 결과 제조예2, 3의 모든 마우스에서 14일간 어떠한 이상도 없었으며, 해부결과도 이상이 없었다.

본 발명의 상기 시험으로 피부면역의 기능을 회복하고 정상화하는 기능을 갖고, 실제로 진세노사이드Rh₂및 / 또는 진세노사이드Rg₃를 이용한 피부외용제는, 피부거침효과, 피부의 땡김, 샤워개선효과, 화장의 먹음이 개선되고, 피부외용제로서 유효성이 높은 것이 밝혀졌다. 또한 종래로부터 식용되어 왔으며 또한 각종 시험을 수행한 결과로부터 안전성도 높고 문제가 없다.

Claims

진세노사이드 Rh₂ 및 진세노사이드 Rg₃를 배합한 것을 특징으로 하는 피부외용 화장품 조성물
제1항에 있어서 제형은 크림제, 스프레이제, 겔제, 유액제 또는 로숀제 중에서 선택됨을 특징으로 하는 피부 외용 화장품 조성물
제2항에 있어서 진세노사이드 Rh₂ 및 진세노사이드 Rg₃가 제형당 고형분으로서 0.0001 내지 10% 함유되어 있음을 특징으로 하는 피부 외용 화장품 조성물
제1항 내지 제 3항에 있어 피부면역 정상화 효과 또는 세포활성 효과 등 피부에 유용함을 특징으로 하는 피부 외용 화장품 조성물