CN1952133A

CN1952133A - 激活cre活性的多核苷酸及其编码多肽和用途

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Publication number: CN1952133A
Application number: CN 200510112973
Authority: CN
Inventors: 邓唯唯; 高霞; 马大龙; 石太平; 张晨颖; 马进京; 高鹏; 郭金海; 陆阳; 程华玲; 李娜; 于鹏; 蔡恬静; 王欣宇; 王峰; 童郁蓉
Original assignee: Sinogenomax Co Ltd
Current assignee: Sinogenomax Co Ltd
Priority date: 2005-10-18
Filing date: 2005-10-18
Publication date: 2007-04-25

Abstract

本发明公开了一类新的编码具有促进CRE活化的功能的人蛋白的多核苷酸及其编码的多肽，多肽的抗体。本发明也公开了这类新的多核苷酸在宿主细胞中外源表达促进CRE活化的应用。本发明还公开了所述多肽、抗体在制备预防和治疗神经性退行疾病或肿瘤的药物上的用途。

Description

激活CRE活性的多核苷酸及其编码多肽和用途

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及基因表达调控领域，具体地说，本发明涉及一类新的编码具有促进CRE活化功能的人蛋白的多核苷酸，及其编码的多肽，多肽的抗体。本发明还涉及这类新的多核苷酸在宿主细胞中外源表达促进CRE活化的应用。本发明还涉及所述多肽、抗体在制备预防和治疗神经性退行疾病或肿瘤的药物上的用途。

背景技术

CRE(cyclic AMP response element)通路由细胞外信号(神经递质、激素、膜的去极化、生长因子、神经营养因子)激活，通过蛋白激酶A(protein kinase A)、钙调蛋白依赖的蛋白激酶(calmodulin-dependent protein kinase CaMKII)、AKT(即蛋白激酶B)、p44/42MAP激酶、p90RSK、p38MAP激酶或MSK1使CREB(CRE binding protein)磷酸化(Ser133)，即激活了CREB的转录因子活性，使之结合于CRE顺式作用元件并表达下游基因。受cAMP信号分子调控的基因的启动子中一般都含有一个称为CRE的顺式作用元件，序列比较保守，通常为TGACGTCA和TGACG/CGTCA。而与其相互作用的反式因子属于一个保守的蛋白家族，通过其含有的DNA结合结构域与CRE元件结合，从而调控基因的表达(Masquilier D et al.，1993)。CREB(cAMP-responseelement binding protein)和CREM(cAMP-response element modulator)分别是这个蛋白家族的两个重要成员。CREB和CREM蛋白具有很高的序列保守性和同源性，一般均由2个富含谷氨酸的转录激活结构域(Q1，Q2)、激酶诱导结构域(kinase inducible domain，KID或者P box)、DNA结合结构域和亮氨酸拉链模体(bZIP)组成。其中转录激活结构域用于介导蛋白质-蛋白质之间的相互作用，比如介导CREB/CREM蛋白与CBP(CREB binding protein)蛋白的结合；P box结构域是蛋白激酶A(PKA)磷酸化的区域，，例如被PKA蛋白磷酸化的CREB蛋白的第113位丝氨酸或CREM蛋白的第117位丝氨酸就位于其中。研究发现维持CREM的活性需要至少一个富含谷氨酸的结构域和P box两部分。已报道的CRE靶基因有八十种以上(Nat Rev Mol Cell Biol.2001，2(8)：599-609)，Zhang等运用生物信息学方法在人基因组中找到了4084个CREB靶基因，有癌基因、转录因子、细胞周期调节因子以及物质代谢相关分子(Proc Natl Acad Sci U S A.2005，102(12)：4459-64)。

研究发现CRE信号通路与一些特殊的生理功能和疾病密切相关，如长期记忆、亨廷顿病(Huntington’s disease，HD)、阿尔茨海默氏病(Alzheimer’s disease)、肾上腺皮质瘤、黑色素瘤等等。详见下述：

1.记忆

通过对雨虎属(Aplysia)、果蝇、小鼠以及大鼠的研究表明，CREB家族转录因子对长期记忆(long-term memory，LTM)的形成十分重要，是将短期记忆(shaort-term memory，STM)转换成长期记忆的关键分子。在对Aplysia的研究中，将含有CRE元件的寡核苷酸导入神经元以干扰CREB的转录活性，结果STM未见异常，而LTM受阻。在果蝇体内，抑制CREB的表达也特异地阻断了LTM，而CREB的激活则促进了LTM。在CREB基因敲除小鼠中，STM表现正常，LTM则受到破坏。

2.亨廷顿病

亨廷顿病(Huntington’s disease，HD)是一种神经退行性病变，致病基因为Huntingtin(Htt)，Htt的外显子1中的谷氨酰胺密码子CAG重复次数超过一定限度(38)时导致亨廷顿病。研究发现Htt致病突变体显著降低了A2A-R(A2A adenosine receptor)的转录水平，而CREB活性突变体可挽救由Htt引起的A2A-R转录下调。进一步研究发现A2A-R的核心启动子区含CRE元件，CREB可与之结合并激活转录。Htt则阻碍CREB结合于A2A-R启动子，从而抑制A2A-R的表达。

CBP(CREB-binding protein)是CREB的协同作用分子。在亨廷顿病、阿尔茨海默氏病和Rubinstein-Taybi综合症中都发现CBP的功能丧失。体外实验还显示CBP可与Htt蛋白结合。在小鼠HD模型的神经元细胞核内包涵体中，CBP与Htt蛋白及泛素共存。

3.阿尔茨海默氏病

在家族性阿尔茨海默氏病(familial Alzheimer’s disease，FAD)病例中，发现淀粉样蛋白前体蛋白(amyloid precursor protein，APP695)642位氨基酸由缬氨酸突变为异亮氨酸或甘氨酸或苯丙氨酸。研究者发现三种FAD致病突变体(FAD-I642，FAD-G642，FAD-F642)的表达都明显抑制CRE的转录活性，而且这一抑制作用不依赖于腺苷酸环化酶。

4.癌症在肾上腺皮质瘤细胞系H295R和人恶性肾上腺皮质瘤组织中都发现CREB表达缺失以及CREMtau的代偿性过表达。Jean等发现CREB在转移的黑色素瘤中表达上调，显性负突变形式的CREB使黑色素瘤细胞在裸鼠体内的致瘤性和转移能力下降。

5.其他对CBP缺陷小鼠的研究发现其胰岛素敏感性增加，而且高脂饮食不能导致其体重的增加，这一发现有助于对糖尿病发生分子机制的理解。Rosenberg等发现CREB显性负突变转基因小鼠患有甲状腺发育不全。

发明内容

人基因组学研究目前是国际上的热点，除大规模测序的方法外，还缺少从功能研究开始的高通量筛选具有一定功能的基因的方法。针对这种现状及现有药物或试剂的不足，本发明的目的是提供一类新的编码具有促进CRE活化功能的人蛋白的多核苷酸CREIF1、2、3、4、5、6、7、8、9。

本发明的另一目的是提供这类多核苷酸所编码的多肽。

本发明的另一目的是提供含有这类多核苷酸的载体，和这类多核苷酸及其载体转化或转导的宿主细胞。

本发明的另一目的是提供这类多核苷酸所编码的多肽的抗体和用于检测的核酸分子。

本发明的另一目的是提供这类新的多核苷酸在宿主细胞中外源表达促进CRE活化的应用。

本发明的另一目的是提供生产这些多核苷酸和其编码的多肽的方法以及该多核苷酸及其编码的多肽的用途。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

在本发明的第一方面，提供新颖的分离的多核苷酸，它包含编码具有促进CRE活化的功能的蛋白的核苷酸序列，该核苷酸序列选自：(a)与编码含有SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ IDNO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQID NO：16、SEQID NO：18的氨基酸序列的多肽的多核苷酸有至少70％相似性的多核苷酸；(b)编码含有与SEQID NO.2、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO：10、SEQID NO：12、SEQ IDNO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18的氨基酸序列有至少70％相似性的氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸互补的多核苷酸。

较佳地，该多核苷酸编码的多肽具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18。

较佳地，该多核苷酸的序列与选自下组的核苷酸序列有至少85％相似性：(a)SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17的编码区序列或全长序列；(b)在遗传密码简并范围内相应于(a)中提到的序列的至少一个序列；(c)与(a)或(b)中提到的序列互补的序列杂交的至少一个序列。

更佳地，该多核苷酸的序列选自SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17的编码区序列或全长序列。

在本发明的第二方面，提供了上述核苷酸所编码的多肽，它包含具有选自下组中的氨基酸序列的多肽：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18；或与以上任一氨基酸序列具有至少90％以上相似性的多肽，或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。

较佳地，该多肽是具有选自下组的氨基酸序列的多肽：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ IDNO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQID NO：18。

在本发明的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的载体，以及被该载体转化或转导的宿主细胞，还提供了被上述多核苷酸转化或转导的宿主细胞。

在本发明的第四方面，提供了与上述多肽特异性结合的抗体，还提供了可用于检测的核酸分子，它含有上述任一多核苷酸中8-100个连续的核苷酸。

在本发明的第五方面，提供了上述多核苷酸在宿主细胞中外源表达促进CRE活化的应用。

在本发明的第六方面，提供了上述多核苷酸和多肽在制备预防和/或治疗神经性退行疾病或肿瘤的药物中的用途。较佳地，在制备预防和/或治疗亨廷顿病、阿尔茨海默氏病、肾上腺皮质瘤、黑色素瘤的药物中的用途。

在本发明地第七方面，提供了一种药物组合物，它含有安全有效量的本发明中的具有促进CRE活化功能的多肽及药学上可接受的载体。

在本发明的第八方面，提供了一种神经性退行疾病或肿瘤的体外检测方法，利用上述抗体或核酸片段来检测宿主样品中的多肽的存在或水平。

本发明的其他方面由于本文的技术的公开，对本领域技术人员而言是显而易见的。

如本文所用，“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质，原始环境即是天然环境)。如活体细胞内的天然状态下的多核苷酸和多肽是没有分离纯化的，但同样的多核苷酸或多肽如果从天然状态中与共同存在的其他物质分开，则为分离纯化的。这样的多核苷酸可能是某一载体的一部分，也可能这样的多核苷酸或多肽是某一组合物的一部分，既然载体或组合物不是它们的天然环境的成分，这些多核苷酸或多肽仍然是分离的。

如本文所用，“相似性”是指核苷酸或多肽序列比对过程中用来描述检测序列和目标序列之间相同DNA碱基或氨基酸残基顺序所占比例的高低，是一种直接的数量关系，通过部分相同或相似的百分比来度量核苷酸序列或者多肽序列之间相似的程度，此相似性百分比可以通过本领域已有的比对方法来计算，例子有两两序列间的比对方法FASTA程序(Pearson，W.R.and Lipman，D.J.1988.Improved tools for biological sequence comparison.Proc.Natl.Acad.Sci.85：2444-2448)，BLAST程序(Altschul，S.F.，et al.1990 Basic local alignment search tool.J.Mol.Biol.215：403-410)等，或多序列比对方法CLUSTAL W(CORPET，F.1998 Multiple sequencealignment with hierarchical clustering.Nucleic Acids Res.，16：10881-10890)等。同源序列是指从某一共同祖先经趋异进化而形成的不同序列，根据相似性百分比可以判断比对序列间的同源性。当基因或蛋白质间相似程度很高时，表示它们具有一段共同的进化历程，从而判断它们会具有相似的生物学功能。当具有至少50％的相似程度时，比较容易推测检测序列和目标序列可能是同源序列。较佳地，具有至少70％的相似程度；更佳地，具有至少85％的相似程度；最佳地，具有至少90％的相似程度。而当相似性程度低于20％时，就难以确定或者根本无法确定其是否具有同源性。

本发明的多核苷酸包括其互补链可以是DNA形式或RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因组DNA或人工合成的DNA。DNA可以是单链的或是双链的。DNA可以是编码链或非编码链。如本文所用，“编码具有诱导细胞凋亡功能的多肽的多核苷酸”可以是包括编码此多肽的多核苷酸，也可以是还包括附加编码序列和/或非编码序列的多核苷酸。以CREIF1所编码的多肽为例，编码成熟多肽的编码区序列可以与SEQ ID NO：1所示的编码区序列相同或者是遗传密码简并的变异体。如本文所用，“遗传密码简并”是指一个氨基酸有几个密码子的现象。例如在本发明中CREIF1所编码的多肽的遗传密码简并的变异体指编码具有SEQ ID NO：2的多肽的核苷酸，且此核苷酸与SEQ IDNO：1所示的编码区序列有差别。对于其他具有诱导人体细胞凋亡功能的多肽，可依此类推。

本发明还涉及上述多核苷酸的变异体，它编码与本发明有相同的氨基酸序列的多肽或多肽的片段、类似物和衍生物。该多核苷酸的变异体可以是天然发生的等位变异体或非天然发生的变异体。这些核苷酸变异体包括取代变异体、缺失变异体和插入变异体。如本领域所知的，等位变异体是一个多核苷酸的替换形式，它可能是一个或多个核苷酸的取代、缺失或插入，但不会从实质上改变其编码的多肽的功能。

本发明还涉及与本发明所述多核苷酸序列的互补序列杂交且两个序列间具有至少50％，较佳地至少70％，更佳地至少80％相同性的多核苷酸。本发明特别涉及在严格条件下与此多核苷酸序列的互补序列可杂交的多核苷酸。在本发明中，“严格条件”是指：(1)在较低离子强度和较高温度下的杂交和洗脱，如0.2×SSC，0.1％SDS，60℃：或(2)杂交时加有变性剂，如50％(v/v)甲酰胺，0.1％小牛血清/0.1％Ficoll，42℃等；或(3)仅在两条序列之间的相同性至少在95％以上，更好的是在97％以上时才发生杂交。并且，可杂交的多核苷酸编码的多肽与本发明所述的多肽有相同的生物学功能和活性。

本发明的多核苷酸序列能用本领域已有的方法获得。这些技术包括但不局限于：(1)通过杂交技术分离DNA序列；(2)人工化学合成DNA序列；(3)通过构建cDNA文库大规模获得所需的多核苷酸；(4)PCR扩增技术。

第一种方法是先构建基因组文库或者cDNA文库，然后通过分子杂交等技术从基因组文库或cDNA文库中筛选出目的基因或序列。当生物基因组比较小时，此方法较易成功；当生物基因组很大时，构建其完整的基因组文库较困难，再从庞大的文库中去克隆目的基因的工程量也很大。

第二种方法是按设计好的序列一次合成100-200bp长的DNA片段，再用这些合成的片段组合连接成完整的基因。这种合成长的基因序列的方法的价格十分昂贵。此方法主要用于合成作为引物、接头等的核酸片段。

第三种方法是用本领域通常的方法构建cDNA文库，多次测序后，结合生物信息学分析技术(Ota et al.Nat Genet.2004 Jan；36(1)：40-5)，大规模获得目的cDNA克隆。生物信息学分析技术包括但不限于用BLAST或BLAT与已有的公共数据库比对，如refseq数据库等；用Phred算法评估测序质量；用计算转录起始密码子ATG的出现概率的ATGpr算法筛选全长cDNA序列等。

第四种方法用PCR技术扩增DNA/RNA的方法(Saiki，et al.Science 1985；230：1350-1354)。用于PCR的引物可根据本文所公开的本发明的序列信息适当地选择，并可用常规方法合成。可用常规方法如通过凝胶电泳分离和纯化扩增的DNA/RNA片段。本发明优选应用的方法是两步法通量化RT-PCR技术在混合cDNA文库中扩增得到大量的cDNA克隆。混合cDNA文库包括现有的cDNA文库和肿瘤文库。

本发明的基因，或者各种DNA片段等核苷酸序列的测定可用常规方法，如双脱氧链终止法(Sanger et al.PNAS，1977，74：5463-5467)；也可用商业测序试剂盒等。为了获得全长的cDNA序列，测序需要反复进行。有时需要测定多个克隆的cDNA序列，才能拼接成全长的cDNA序列。

本发明的多肽可以是重组多肽、天然多肽、合成多肽，优选重组多肽。本发明的多肽可以是天然纯化的产物，或是化学合成的产物，或使用重组技术从原核或真核宿主(如细菌、酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞)中产生。本发明的多肽可以是糖基化的，也可以是非糖基化的。本发明的多肽可以包括或不包括起始的甲硫氨酸残基。

本发明还包括具有诱导人体细胞凋亡功能的多核苷酸编码的人蛋白多肽的片段、衍生物和类似物。术语“片段”、“衍生物”和“类似物”是指基本上保持与本发明的天然具有诱导人体细胞凋亡功能的人蛋白多肽相同的生物学功能或活性的多肽。本发明的多肽片段、衍生物和类似物可以是：(a)有一个或多个保守或非保守性氨基酸残基(优先保守性氨基酸残基)被取代的多肽，而这样取代的氨基酸残基可以是也可以不是由遗传密码编码的，或(b)在一个或多个氨基酸残基中具有取代基团的多肽，或(c)成熟多肽与另一个化合物(比如延长多肽半衰期的化合物)融合所形成的多肽，或(d)附加的氨基酸序列融合到此多肽序列而形成的多肽(如前导序列或分泌序列或用来纯化此多肽的序列或蛋白原序列)。

本发明的多肽可以通过常规的重组DNA技术，利用本发明的多核苷酸序列来表达或生产重组的具有诱导人体细胞凋亡功能的蛋白多肽(Science，1984；224：1431)。包括以下步骤：

(1)用本发明的多核苷酸(或其变异体)，或用含有此多核苷酸的表达载体转化或转导合适的宿主细胞；

(2)在合适的培养基中培养步骤(1)得到的宿主细胞；

(3)从培养基或细胞中分离、纯化所需的蛋白多肽。

本发明中的多核苷酸和多肽优选以分离的形式提供，更佳地被纯化至均质。

本发明也涉及包含本发明所述多核苷酸的载体。本发明中，编码具有诱导人体细胞凋亡功能的人蛋白多肽的多核苷酸序列可以插入到重组表达载体中。术语“重组表达载体”指本领域熟知的细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒，如腺病毒、逆转录病毒，或者其他载体。在本发明中适用的载体可以是原核表达载体，也可以是真核表达载体，如在细菌中表达的基于T7的表达载体(Rosenberg，et al.Gene，1987，56：125)，在哺乳动物细胞中高表达的真核表达载体pcDNA^TM3.1/myc-hisB(-)(Invitrogen)，pcDNA3.1/V5-His-TOPO(Invitrogen，以下缩写为pcDT)。本发明优选pcDT，它可以直接与PCR产物连接来构建真核表达载体，大大提高了规模化生产的效率。只要能在宿主体内复制和稳定，任何质粒和载体都可以应用。表达载体的一个重要特征是通常含有复制起点、启动子、标记基因和翻译控制元件。用本领域的技术人员熟知的方法来构建含有本发明所述多核苷酸序列和转录/翻译控制信号的表达载体即可。这些方法包括体外重组DNA技术、DNA合成技术、体内重组DNA技术等(Sambrook，et al.Molecular Cloning，a Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory.New York，1989)。

本发明的多核苷酸序列可有效地连接到表达载体中的适当的启动子上来指导mRNA合成。这些启动子的代表性例子有：大肠杆菌的lac或trp启动子；λ噬菌体的P_L启动子；真核启动子包括CMV立即早期启动子、HSV胸苷激酶启动子、早期和晚期SV40启动子、反转录病毒的LTRs和其他一些已知的可控制基因在原核或真核细胞或其病毒中表达的启动子。表达载体还包括翻译起始用的核糖体结合位点和转录终止子。表达载体优选的包含一个或多个选择性标记基因，以提供用于选择转化的宿主细胞的表型性状，如用于大肠杆菌的四环素或氨苄青霉素抗性、或真核细胞培养用的绿色荧光蛋白(GFP)、新霉素抗性及二氢叶酸还原酶。

本发明还涉及用上述载体或者本发明的多核苷酸经基因工程产生的宿主细胞。本发明的载体和多核苷酸可以用于转化适当的宿主细胞，以使其能够表达具有诱导人体细胞凋亡功能的蛋白质。宿主细胞可以是原核细胞，如细菌细胞；或是低等真核细胞，如酵母细胞；或是高等真核细胞，如哺乳动物细胞。代表性例子有：大肠杆菌；植物细胞；果蝇S2或Sf9的昆虫细胞；CHO、COS或Bowes黑素瘤细胞的动物细胞；293T、Hela细胞等。

本发明的多核苷酸在高等真核细胞中表达时，如果在载体中插入增强子序列时将会使转录增强。增强子是DNA的顺式作用因子，通常有10-300个碱基对，作用于启动子以增强基因的转录。例子有：在复制起始点下游的100-270个碱基对的SV40增强子、在复制起始点下游的多瘤增强子以及腺病毒增强子等。

本领域的普通技术人员都知道如何选择适当的载体、启动子、增强子和宿主细胞。

用重组DNA转化宿主细胞可用本领域技术人员熟知的常规技术进行。当宿主细胞为原核细胞如大肠杆菌时，能吸收DNA的感受态细胞可在指数生长期后收集，用CaCl₂法处理，所用步骤是本领域众所周知的。可供选择的是MgCl₂处理，也可用电穿孔的方法处理。当宿主是真核细胞时，可选择以下转染方法：磷酸钙共沉淀法、常规机械方法如显微注射、电穿孔、脂质体包装等。获得的转化子可以用常规方法培养，来表达本发明的多核苷酸所编码的多肽。根据所选的宿主细胞选择合适的常规培养基，在适于宿主细胞生长的条件下培养。当宿主细胞生长到适当的细胞密度后，用适当的方法如温度转化或化学诱导，来诱导选择的启动子，将细胞再培养一段时间。

上述方法中的重组多肽可包被于细胞内、细胞外或在细胞膜上表达或分泌到细胞外。如果需要，可利用其物理的、化学的和其他特性通过各种分离方法分离和纯化重组多肽。这些方法是本领域技术人员所熟知的，如常规的复性处理，用蛋白沉淀剂处理(盐析方法)、离心、渗透破菌、超声波处理、超离心、分子筛层析(凝胶过滤)、吸附层析、离子交换层析、高效液相层析和其它各种液相层析技术或这些方法的结合。

本发明还涉及与本发明多核苷酸的任何一部分同源的核酸片段。如本文所用，“核酸片段”的长度至少含有15个核苷酸，较好的是至少30个核苷酸，更好的是至少50个核苷酸，最好的是至少100个核苷酸。此核酸片段通常是在本发明的核苷酸序列信息的基础上化学合成的DNA序列。上述核酸片段可以用于PCR扩增技术(如作为引物)以确定和/或分离编码具有诱导人体细胞凋亡功能的多核苷酸；也可以作为杂交所用的探针。也可以用于RNA干扰技术。本发明的多核苷酸的一部分或全部也可作为探针固定在微阵列(Microarray)或DNA芯片上，用于分析组织中基因的差异表达和基因诊断。探针的标记可用放射性同位素，荧光素或酶(如碱性磷酸酶)等。

本发明的多肽可以直接作为药物治疗疾病，如与增殖或肌肉分化相关的肌肉系统疾病和肿瘤等；还可用于筛选促进或对抗具有促进CRE活化的功能的蛋白的抗体、多肽或其它配体，例如，筛选可用于促进或抑制本发明的蛋白的功能的抗体。用表达的重组的本发明的蛋白来筛选多肽库，用于寻找有治疗价值的能够促进或抑制本发明的蛋白的功能的多肽分子。

本发明的多肽可以单独使用或者与合适的药物载体组合后使用。组合物包含安全有效量的多肽或拮抗剂及不影响药物效果的载体和赋型剂。这些载体可以是水、葡萄糖、乙醇、盐类、缓冲液、甘油及它们的组合。药物组合物可以以方便的方式给药，如通过局部、静脉内、腹膜内、肌内、皮下、鼻内或皮内的给药途径。给药于患者的用量取决于许多因素，如给药方式、待治疗者的健康条件和诊断医生的判断。

本发明的多肽也可以通过在活体表达这些多肽来使用。例如患者的细胞可以通过在体外用编码本发明多肽的基因进行基因工程操作，然后将工程细胞提供给患者，使工程细胞在体内高表达这种多肽，从而达到治疗的目的。

具有促进CRE活化功能的人蛋白的多核苷酸也可用于多种治疗目的。可用在基因治疗技术中来治疗由于具有促进CRE活化的功能的人蛋白表达异常或活性异常导致的疾病。重组的基因治疗载体(如病毒载体)可设计成表达变异的具有促进CRE活化的功能的人蛋白，来抑制内源性的具有促进CRE活化功能的人蛋白的活性。重组的具有促进CRE活化功能的人蛋白基因也可包装到脂质体中转移至细胞内。

抑制本发明多肽mRNA的寡聚核苷酸(包括反义RNA和DNA)以及核酸也在本发明的范围之内。反义RNA和DNA以及核酸可用本领域已有的方法合成。为了增加核酸分子的稳定性，可用多种方法对其进行修饰，如增加两侧的序列长度，核糖核苷间的连接用磷酸硫酯键或肽键。

本发明的多肽及其片段、衍生物、类似物或表达它们的细胞可以作为抗原来生产抗体。这些抗体包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、嵌合抗体、单链抗体、Fab片段和Fab表达文库产生的抗体。本发明的多肽的抗体可用本领域公知的抗体制备方法来生产。例子有：单克隆抗体可用杂交瘤技术生产(Kohler and Milstein.Nature，1975，256：495-497)。多克隆抗体的生产可用本发明的多肽免疫动物，如家兔、小鼠、大鼠等。多种佐剂可用于增强免疫反应，包括但不限于弗氏佐剂。将人恒定区和非人源的可变区结合的嵌合抗体可用已有的技术产生(Morrison etal.PNAS，1985，81：6851)。单链抗体也可用已有的技术生产(U.S.Pat No.4946778)。

本发明的抗体可用于免疫组织化学技术中，检测活体标本中的具有诱导细胞凋亡功能的蛋白。还可以在临床上用于与具有诱导细胞凋亡功能的人蛋白相关的疾病的临床诊断、治疗、疗效评价等。例如用放射性同位素标记与本发明的多肽结合的单克隆抗体，然后注入体内跟踪其位置和分布，可以作为一种非创伤性诊断方法来定位肿瘤细胞，或判断肿瘤细胞是否转移。本发明中的抗体还可以用于治疗或预防与具有促进CRE活化功能的人蛋白相关的疾病。给予适当剂量的抗体可以刺激或阻断具有促进CRE活化功能的人蛋白的产生或活性。

本发明还涉及定量和定位检测具有促进CRE活化功能的蛋白水平的诊断试验方法。这些试验是本领域所熟知的，且包括FISH测定和放射免疫测定。实验中检测的具有促进CRE活化功能的蛋白水平，可以用作解释具有促进CRE活化功能的蛋白在各种疾病中的重要性和用于诊断具有促进CRE活化功能的蛋白起作用的疾病。

具有促进CRE活化功能的蛋白的多核苷酸可用于具有促进CRE活化功能的蛋白相关疾病的诊断和治疗。在诊断方面，具有促进CRE活化功能的蛋白的多核苷酸可用于检测具有促进CRE活化功能的蛋白的表达与否，或在疾病状态下具有促进CRE活化功能的蛋白的异常表达。如具有促进CRE活化功能的蛋白的DNA序列可用于对活检标本的杂交以判断具有促进CRE活化功能的蛋白的表达异常。杂交技术是本领域已公开的成熟技术，包括Southern印迹法、Northern印迹法、原位杂交等，相关的试剂盒可以从商业途径获得。本发明的多核苷酸的一部分或全部可作为探针固定在微阵列(Microarray)或DNA芯片上，用于分析组织中基因的差异表达和基因诊断。用具有促进CRE活化功能的蛋白特异的引物进行RNA-聚合酶链式反应(RT-PCR)体外扩增也可以检测具有促进CRE活化功能的蛋白的转录产物。

检测具有促进CRE活化功能的蛋白基因的突变也可用于诊断具有促进CRE活化功能的蛋白相关的疾病。具有促进CRE活化功能的蛋白基因的突变形式包括与正常野生型的具有促进CRE活化功能的蛋白的DNA序列相比的点突变、易位、缺失、重组和其它任何异常等。可用本领域已有的技术如Southern印迹法、DNA序列分析、PCR和原位杂交检测突变。另外，突变有可能影响蛋白的表达，因此用Northern印迹法、Westen印迹法可间接判断基因有无突变。

基因CREIF1、2、3、4、5、6、7、8、9在实验中所有用到的正常组织、胎儿组织、肿瘤组织中都有表达，说明其为人体自身重要的CRE影响因子；在不同的组织中表达量高低有差别，说明其在不同的组织中发挥功能的程度不同。

以下对本发明的实施方案进一步详细说明。

本发明通过对NCBI的refseq数据库进行人功能未知预测基因检索，获得人未知功能基因序列，进一步利用Human_est数据库通过BLASTn方法进行序列校正，根据校正后得到的序列设计基因特异引物，从混合人组织cDNA文库中通过两步法通量化RT-PCR技术扩增得到目的基因的编码区cDNA片段。此编码区cDNA片段与pcDT重组构建真核表达载体。然后采用双荧光素酶报告基因法检测CREIF1、2、3、4、5、6、7、8、9基因对CRE的影响。该方法采用的是体内信号转导途径顺式报导系统，其中所用的CRE-luc报告质粒载有萤火虫荧光素酶基因，该基因的表达由合成的启动子所调控，其中包含基本的启动子元件(TATA box)，以及转录因子CRE的结合位点，CRE-luc报告质粒的结构图如图2所示。当细胞内的CRE通过某种信号转导途径而被活化时，CRE便会结合于报告质粒CRE-luc的增强子元件，从而启动报告基因萤火虫荧光素酶基因的转录，进一步胞内翻译成荧光素酶，导致细胞内荧光素酶数量增加，活性增强；相反，当细胞内的CRE活化受到抑制的时候，荧光素酶的表达量及活性就低。所以，通过检测荧光素酶的活性，便可以反映不同刺激物以及共转染的目的基因对细胞内CRE是否具有促进活化或者抑制活化的功能。pRL-TK报告质粒载体如图2所示，含有水母荧光素酶基因，该基因的表达由猿猴病毒40(SV40)增强子/启动子所调控，转染哺乳动物细胞后可以产生较强的基本水平的水母荧光素酶的表达，且表达的活性不受CRE活化与否的调节，所以在实验中用作内对照报告基因。实验表明本发明的多肽具有显著、稳定的促进CRE活化的作用。

由于采用了以上技术方案，本发明具有如下优点：

1、提供了规模化克隆和筛选新基因的技术平台。

2、提供了人类新功能基因CREIF1、2、3、4、5、6、7、8、9的cDNA序列及其编码多肽：

3、首次发现人类新功能基因CREIF1、2、3、4、5、6、7、8、9具有促进CRE活化的作用，并且高效、稳定；

4、CREIF1、2、3、4、5、6、7、8、9在机体多数正常细胞表达，说明其为自身重要的CRE调控分子。

5、基于上述的4个优点，本发明为进一步研究CREIF1、2、3、4、5、6、7、8、9与CRE之间的调控关系，以及开发治疗与神经性退行疾病或肿瘤的新药物，为开创新的临床诊断、疗效评价及预后指标奠定必要的基础。

附图说明

图1、真核表达载体pcDT-CREIFx的构建示意图(x选自1、2、3、4、5、6、7、8、9之一)。

图2、pCRE-luc荧光素酶基因报告质粒的结构图(2A)和pRL-TK报告质粒结构图(2B)。

图3、CREIF1、2、3、4、5、6、7、8、9外源表达促进CRE的活化。

具体实施方式

下面结合具体实施例和附图，进一步阐述本发明。这些实施例和附图仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，如《分子克隆实验指南》(2002年第三版[美]萨姆布鲁克等箸，科学出版社)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

实施例1、两步法通量化RT-PCR技术扩增目的基因

(1)对NCBI的refseq数据库进行人功能未知预测基因检索，获得人未知功能基因序列，并利用Human_est数据库通过BLASTn方法进行序列校正，最终得到的序列设定为下组序列：SEQID NO.1、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17。根据此类序列设计基因CREIF1、2、3、4、5、6、7、8、9的特异引物：

基因名称	上游引物(5′-3′)	下游引物(5′-3′)
基因名称	上游引物(5′-3′)	下游引物(5′-3′)	CREIF1CREIF2CREIF3CREIF4CREIF5CREIF6CREIF7CREIF8CREIF9	agtgccaagatgtcgacggccagtcctcgtgcgaccgcagagttaaattatggcagagacaagtctgattcagggtgccaatgaccccggttcatccaaggcgcaggagcaacctgtccagaatccgtgacccacagaaggacgccgcatgtaccggctctctaacgtgctgaggctctgttgagaatcatgc	agctcaggcagccctcaagaccctaccgagacagaccaaggcccacatcccaacctgtcactcgctgggtgtgtcagggatggtggacatactagaggccctcggtcatcagagaaatcagaatggaaggatttaagtatcactctctgtccctcctaccatatcgcatgtctcatgttcgtccagctcagctacaagtcttcccc

(2)用上述引物，按目的基因的表达谱在现有的cDNA文库和肿瘤文库中选择模板，进行初扩。现有的文库包括12种人体正常组织(心、胰、睾丸、卵巢、前列腺、结肠、小肠、骨骼肌、胸腺、淋巴结、扁桃体、白细胞)；6种人肿瘤组织(肺癌、胰腺癌、卵巢癌、前列腺癌、结肠癌、乳腺癌)；和8种胎儿组积(胎肺、胎心、胎肝、胎脾、胎肾、胎脑、胎骨骼肌、胎胸腺)的cDNA文库(Clonetch，K1420-1，1241-1)。初扩反应条件如下：

50μl PCR反应：

cDNA混合库5’，3’引物10×Pyrobest buffer2.5mM dNTPsPyrobest双蒸水

各1.0μl终浓度为2pmol/μl5μl4μl1μl补足至50μl

PCR延伸时间根据所扩目的基因的最长片段，按50sec/Kb的原则进行扩增：

初扩产物纯化到30μl，以去除PCR反应体系中大量的引物及dNTPs等，并浓缩整个体系，得到对应目的基因序列的二级扩增库，作为二扩(大扩)的模板。

(3)将(2)中的纯化产物作为模板，分别对每个目的基因进行二扩，反应条件如下：

50μl PCR(每个基因)反应：

一扩纯化产物5’，3’引物10×Ex-Taq buffer2.5mM dNTPEx-Taq双蒸水

1.6μl终浓度为2pmol/μl5μl4μl0.5μl补足至50μl

得到的PCR产物取10μl上样电泳，挑选有扩增条带的PCR产物，进行等体积纯化(40μl)。通过两步PCR反应扩增出非单一条带的基因用Qiagen胶回收试剂盒切胶回收目的片段。扩增的结果表明，这些组织的细胞中都存在基因CREIF1、2、3、4、5、6、7、8、9的cDNA，说明CREIF1、2、3、4、5、6、7、8、9在这些组织的细胞中都产生了基因CREIF1、2、3、4、5、6、7、8、9的转录产物，有较广的表达图谱，在多种组织中参与转录因子的调节。

实施例2、目的基因真核表达载体的构建

将二扩纯化产物和真核表达载体pcDNA3.1/V5-His-TOPO(Invitrogen，缩写为pcDT)，按照试剂盒制造厂商建议的条件进行连接反应。连接产物电击法转化大肠杆菌DH5α，转化物在含氨苄青霉素的固体LB平板培养基上生长，挑选生长的单一克隆菌落，提取质粒，用EcoRI酶切，酶切产物用琼脂糖凝胶电泳鉴定，挑选有插入片段的阳性克隆，通过测序(ABI PRISM 3700 DNA分析仪)选出正确的正向插入克隆，各自命名为pcDT-CREIF1、2、3、4、5、6、7、8、9。

同时收集培养液，用SDS-PAGE分析沉淀蛋白，获得CREIF1、2、3、4、5、6、7、8、9多肽。

CREIF1、2、3、4、5、6、7、8、9蛋白分析结果显示：CREIF1、2、3、4、5、6、7、8、9蛋白序列如下组序列：SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18所示。

实施例3、双荧光素酶报告基因法测定目的基因对CRE活化的促进作用。

用目的基因和报告基因pCRE-luc，pRL-TK共转染人胚胎肾293T细胞，通过分别检测两种荧光素酶活性来测定CRE的活性。共转染的方法为阳离子非脂性转染法，采用威格拉斯生物技术(北京)有限公司，按产品说明书所述进行。

转染操作步骤如下：

(1)细胞培养：将293T细胞(ATCC Number：CRL-11268)(2.0×104)用含10％胎牛血清的DMEM(Dulbecco’s modified Eagle’s medium)培养基(Hyclone，SH0022.02)铺在96孔细胞培养板(Costar，3599)上，接种密度1.2万/孔，培养基体积100ul/孔，在5％CO2，37℃的培养箱中培养18-24小时。

(2)制备转染复合物：

取2.5μl生理盐水稀释40ng报告基因pCRE-luc，4ng pRL-TK和50ng目的质粒，缓慢混合均匀；同样用2.5μl生理盐水稀释适当量的vigofect(一般为0.04μl/孔)，缓慢混合均匀，在室温下放置5分钟，与稀释的DNA缓慢混合，室温放置15分钟，以形成转染复合物。

(3)转染：将转染复合物缓慢滴入细胞培养板(5μl/孔)，轻微摇匀。5％CO₂，37℃的培养箱中培养18-24小时。

检测时加入Passive Lysis Buffer(Promega，E1960)，放入-80℃冰箱30分钟以上，然后取出细胞板，室温下自然解冻，使细胞完全裂解，10μl细胞裂解液移至白色荧光板，加入Dual-luciferase双报告系统检测底物，用微孔板酶标仪(Genios Pro，Tecan)检测荧光素酶活性。

设定转染pcDB空载体、不加刺激物时细胞内的荧光素酶活性比值(萤火虫荧光素酶荧光强度/水母荧光素酶荧光强度表示)为100％，其他条件下细胞内的荧光素酶活性比值以此为标准，用相对值表示。结果参照图3，分别用待检质粒和pCRE-luc共转染293T细胞，待检质粒可明显促进CRE的活化，pCRE-luc荧光素酶活性明显上调，表明CREIF1、2、3、4、5、6、7、8、9在293T细胞中的表达产物对CRE活化有强的促进作用。

根据以上实验结果可以确定，当CRE表达水平的下调引起与某些疾病相关基因的转录表达相应减少时，CREIF1、2、3、4、5、6、7、8、9对CRE活化的促进作用可以阻止该疾病的发生和发展。因此，本发明可以用于制备预防和治疗由于CRE表达较少引起的神经性退行疾病或肿瘤的药物。

实施例4、抗体制备

抗原选用原核细胞或真核细胞表达的CREIF1、2、3、4、5、6、7、8、9蛋白全长或部分肽段，也可以合成多肽作为抗原。

多克隆抗体的制备：免疫动物选用成年雄性新西兰兔或BALb/c小鼠，初次免疫用200ug(新西兰兔)或20ug(BALb/c小鼠)抗原与等体积弗氏完全佐剂(FCA)充分乳化后，于背部皮下多点注射。初次免疫后21、42、63天，用弗氏不完全佐剂(FIA)完全乳化的抗原蛋白，各加强免疫1次，用量同前。每次免疫后7~10天，ELISA方法检测血清效价，达到1×10^-4时，放血分离血清.Western blot鉴定抗体特异性。

单克隆抗体制备：免疫BALb/c小鼠同前，取脾脏制成B细胞悬液，与对数生长期的骨髓瘤细胞SP2/0融合，通过HAT(H：次黄嘌呤；A：氨基喋呤；T：胸腺嘧啶核苷)选择性培养，获得杂交细胞系，再通过ELISA方法检测抗体效价，筛选出特定的杂交瘤细胞系，并得到单克隆抗体。

序列表

<110>北京诺赛基因组研究中心有限公司

<120>激活CRE活性的多核苷酸及其编码多肽和用途

<130>

<160>18

<170>PatentIn version 3.3

<210>1

<211>1350

<212>DNA

<213>人

<220>

<221>CDS

<222>(22)..(657)

<400>1

ggcacgaggg tcagtgccaa g atg tcg acg gcg gcg gtt ccg gag ctg aag 51

Met Ser Thr Ala Ala Val Pro Glu Leu Lys

1 5 10

cag atc agc cgg gtg gag gcg atg cgc cta ggg ccg ggc tgg agc cac 99

Gln Ile Ser Arg Val Glu Ala Met Arg Leu Gly Pro Gly Trp Ser His

15 20 25

tcg tgc cac gcc atg ctg tac gcc gcc aac cct ggg cag ctc ttc ggc 147

Ser Cys His Ala Met Leu Tyr Ala Ala Asn Pro Gly Gln Leu Phe Gly

30 35 40

cgc atc ccc atg cgc ttc tcg gtg ctg atg cag atg cgt ttc gac ggg 195

Arg Ile Pro Met Arg Phe Ser Val Leu Met Gln Met Arg Phe Asp Gly

45 50 55

ctg ctg ggc ttc ccc ggg ggc ttc gtg gac cgg cgc ttc tgg tcg ctg 243

Leu Leu Gly Phe Pro Gly Gly Phe Val Asp Arg Arg Phe Trp Ser Leu

60 65 70

gag gac ggc ctg aac cgg gtg ctg ggc ctg ggc ctg ggc tgc ctg cgc 291

Glu Asp Gly Leu Asn Arg Val Leu Gly Leu Gly Leu Gly Cys Leu Arg

75 80 85 90

ctc acc gag gcc gac tac ctg agc tcg cac ctg acc gag ggc cca cac 339

Leu Thr Glu Ala Asp Tyr Leu Ser Ser His Leu Thr Glu Gly Pro His

95 100 105

cgc gtc gtg gcg cac ctg tac gcg cgg cag ctg acg ctg gag cag ctg 387

Arg Val Val Ala His Leu Tyr Ala Arg Gln Leu Thr Leu Glu Gln Leu

110 115 120

cac gcc gtg gag atc agc gcg gtg cac tcg cgc gac cac ggc ctg gag 435

His Ala Val Glu Ile Ser Ala Val His Ser Arg Asp His Gly Leu Glu

125 130 135

gtg ctg ggc ctc gtg cgg gtc ccg ctg tac acc cag aag gac cga gtc 483

Val Leu Gly Leu Val Arg Val Pro Leu Tyr Thr Gln Lys Asp Arg Val

140 145 150

gga ggc ttc ccc aac ttc ctg agc aac gcc ttc gtg agc acg gct aag 531

Gly Gly Phe Pro Asn Phe Leu Ser Asn Ala Phe Val Ser Thr Ala Lys

155 160 165 170

tgc cag ctc ctc ttt gcc ctc aag gtg ctc aac atg atg ccc gag gag 579

Cys Gln Leu Leu Phe Ala Leu Lys Val Leu Asn Met Met Pro Glu Glu

175 180 185

aag ctg gtt gag gcc ctg gct gca gcc acc gag aag cag aag aag gcc 627

Lys Leu Val Glu Ala Leu Ala Ala Ala Thr Glu Lys Gln Lys Lys Ala

190 195 200

ctg gag aag ttg ctc ccg gcc tcc tct tga gggctgcctg agctggtggc 677

Leu Glu Lys Leu Leu Pro Ala Ser Ser

205 210

accctcccct gggccggaag actgggaatt cctgctaagt gtggcttcta gagtgtttgt 737

gtgtaccccg cttctgactg cctagggcga gtgggcatcc tgtcatcatc tccactgtcc 797

caagcagtca ctaggtggcg gccgggccag ctggaaccca gcccatcctc tcaggcagag 857

cagggtggtc cgggcacact gggcctgcct ctccagcctc aggatgctct tgtttattct 917

gggctcagac cctcctcttg tacgtctcat cacagctggt agagacccag gagtgcctga 977

ttgtcccaca ggggtggcgc acagctctgg gaccactcag aagatgggat gtgtgggtgg 1037

aggatgcctt gtctcggtca gctcattcct gcctccttcc tgagccagtt cagggcctgg 1097

gggagagcca gcttggggta ggaagttaat aatactgtta atttgggttg ttgttggatt 1157

tactttgcta gattttctct ttcaccacgt gtgaactgtg ggtgaggttt caaagtagct 1217

tcaccccacg tggcttggtt cccagggaca gtcagggcct cgggggccca gctatgtaca 1277

acgaagctgt cgaaggagaa gacaataaag tcgctccgca gctgcaaaaa aaaaaaaaaa 1337

aaaaaaaaaa aaa 1350

<210>2

<211>211

<212>PRT

<213>人

<400>2

Met Ser Thr Ala Ala Val Pro Glu Leu Lys Gln Ile Ser Arg Val Glu

1 5 10 15

Ala Met Arg Leu Gly Pro Gly Trp Ser His Ser Cys His Ala Met Leu

20 25 30

Tyr Ala Ala Asn Pro Gly Gln Leu Phe Gly Arg Ile Pro Met Arg Phe

35 40 45

Ser Val Leu Met Gln Met Arg Phe Asp Gly Leu Leu Gly Phe Pro Gly

50 55 60

Gly Phe Val Asp Arg Arg Phe Trp Ser Leu Glu Asp Gly Leu Asn Arg

65 70 75 80

Val Leu Gly Leu Gly Leu Gly Cys Leu Arg Leu Thr Glu Ala Asp Tyr

85 90 95

Leu Ser Ser His Leu Thr Glu Gly Pro His Arg Val Val Ala His Leu

100 105 110

Tyr Ala Arg Gln Leu Thr Leu Glu Gln Leu His Ala Val Glu Ile Ser

115 120 125

Ala Val His Ser Arg Asp His Gly Leu Glu Val Leu Gly Leu Val Arg

130 135 140

Val Pro Leu Tyr Thr Gln Lys Asp Arg Val Gly Gly Phe Pro Asn Phe

145 150 155 160

Leu Ser Asn Ala Phe Val Ser Thr Ala Lys Cys Gln Leu Leu Phe Ala

165 170 175

Leu Lys Val Leu Asn Met Met Pro Glu Glu Lys Leu Val Glu Ala Leu

180 185 190

Ala Ala Ala Thr Glu Lys Gln Lys Lys Ala Leu Glu Lys Leu Leu Pro

195 200 205

Ala Ser Ser

210

<210>3

<211>1834

<212>DNA

<213>人

<220>

<221>CDS

<222>(190)..(1371)

<400>3

ggcacgaggg aagccggggc cggggctgcg gggcgagttg tcggccctgg gccgggagct 60

ggagtcccag actcataggt cccggcccag cccccgaaga gccgcctcag ccggggggag 120

ttgctcggac tcaaacgtcc agtcctcgtg cgaccgcgct gggtcggaag tgagcaggct 180

gaggccacc atg gag cag tgt gcg tgc gtg gag aga gag ctg gac aag gtc 231

Met Glu Gln Cys Ala Cys Val Glu Arg Glu Leu Asp Lys Val

1 5 10

ctg cag aag ttc ctg acc tac ggg cag cac tgt gag cgg agc ctg gag 279

Leu Gln Lys Phe Leu Thr Tyr Gly Gln His Cys Glu Arg Ser Leu Glu

15 20 25 30

gag ctg ctg cac tac gtg ggc cag ctg cgg gct gag ctg gcc agc gca 327

Glu Leu Leu His Tyr Val Gly Gln Leu Arg Ala Glu Leu Ala Ser Ala

35 40 45

gcc ctc cag ggg acc cct ctc tca gcc acc ctc tct ctg gtg atg tca 375

Ala Leu Gln Gly Thr Pro Leu Ser Ala Thr Leu Ser Leu Val Met Ser

50 55 60

cag tgc tgc cgg aag atc aaa gat acg gtg cag aaa ctg gct tcg gac 423

Gln Cys Cys Arg Lys Ile Lys Asp Thr Val Gln Lys Leu Ala Ser Asp

65 70 75

cat aag gac att cac agc agt gta tcc cga gtg ggc aaa gcc att gac 471

His Lys Asp Ile His Ser Ser Val Ser Arg Val Gly Lys Ala Ile Asp

80 85 90

agg aac ttc gac tct gag atc tgt ggt gtt gtg tca gat gcg gtg tgg 519

Arg Asn Phe Asp Ser Glu Ile Cys Gly Val Val Ser Asp Ala Val Trp

95 100 105 110

gac gcg cgg gaa cag cag cag cag atc ctg cag atg gcc atc gtg gaa 567

Asp Ala Arg Glu Gln Gln Gln Gln Ile Leu Gln Met Ala Ile Val Glu

115 120 125

cac ctg tat cag cag ggc atg ctc agc gtg gcc gag gag ctg tgc cag 615

His Leu Tyr Gln Gln Gly Met Leu Ser Val Ala Glu Glu Leu Cys Gln

130 135 140

gaa tca acg ctg aat gtg gac ttg gat ttc aag cag cct ttc cta gag 663

Glu Ser Thr Leu Asn Val Asp Leu Asp Phe Lys Gln Pro Phe Leu Glu

145 150 155

ttg aat cga atc ctg gaa gcc ctg cac gaa caa gac ctg ggt cct gcg 711

Leu Asn Arg Ile Leu Glu Ala Leu His Glu Gln Asp Leu Gly Pro Ala

160 165 170

ttg gaa tgg gcc gtc tcc cac agg cag cgc ctg ctg gaa ctc aac agc 759

Leu Glu Trp Ala Val Ser His Arg Gln Arg Leu Leu Glu Leu Asn Ser

175 180 185 190

tcc ctg gag ttc aag ctg cac cga ctg cac ttc atc cgc ctc ttg gca 807

Ser Leu Glu Phe Lys Leu His Arg Leu His Phe Ile Arg Leu Leu Ala

195 200 205

gga ggc ccc gcg aag cag ctg gag gcc ctc agc tat gct cgg cac ttc 855

Gly Gly Pro Ala Lys Gln Leu Glu Ala Leu Ser Tyr Ala Arg His Phe

210 215 220

cag ccc ttt gct cgg ctg cac cag cgg gag atc cag gtg atg atg ggc 903

Gln Pro Phe Ala Arg Leu His Gln Arg Glu Ile Gln Val Met Met Gly

225 230 235

agc ctg gtg tac ctg cgg ctg ggc ttg gag aag tca ccc tac tgc cac 951

Ser Leu Val Tyr Leu Arg Leu Gly Leu Glu Lys Ser Pro Tyr Cys His

240 245 250

ctg ctg gac agc agc cac tgg gca gag atc tgt gag acc ttt acc cgg 999

Leu Leu Asp Ser Ser His Trp Ala Glu Ile Cys Glu Thr Phe Thr Arg

255 260 265 270

gac gcc tgt tcc ctg ctg ggg ctt tct gtg gag tcc ccc ctt agc gtc 1047

Asp Ala Cys Ser Leu Leu Gly Leu Ser Val Glu Ser Pro Leu Ser Val

275 280 285

agc ttt gcc tct ggc tgt gtg gcg ctg cct gtg ttg atg aac atc aag 1095

Ser Phe Ala Ser Gly Cys Val Ala Leu Pro Val Leu Met Asn Ile Lys

290 295 300

gct gtg att gag cag cgg cag tgc act ggg gtc tgg aat cac aag gac 1143

Ala Val Ile Glu Gln Arg Gln Cys Thr Gly Val Trp Asn His Lys Asp

305 310 315

gag tta ccg att gag att gaa cta ggc atg aag tgc tgg tac cac tcc 1191

Glu Leu Pro Ile Glu Ile Glu Leu Gly Met Lys Cys Trp Tyr His Ser

320 325 330

gtg ttc gct tgc ccc atc ctc cgc cag cag acg tca gat tcc aac cct 1239

Val Phe Ala Cys Pro Ile Leu Arg Gln Gln Thr Ser Asp Ser Asn Pro

335 340 345 350

ccc atc aag ctc atc tgt ggc cat gtt atc tcc cga gat gca ctc aat 1287

Pro Ile Lys Leu Ile Cys Gly His Val Ile Ser Arg Asp Ala Leu Asn

355 360 365

aag ctc att aat gga gga aag ctg aag tgt ccc tac tgt ccc atg gag 1335

Lys Leu Ile Asn Gly Gly Lys Leu Lys Cys Pro Tyr Cys Pro Met Glu

370 375 380

cag aac ccg gca gat ggg aaa cgc atc ata ttc tga ttcctacctg 1381

Gln Asn Pro Ala Asp Gly Lys Arg Ile Ile Phe

385 390

gaaggaattt tgttgaaagg ggttttcacc tgtgagcctt ggtctgtctc ggtagggtgg 1441

tcaacttcag tggactgtgg ttggtttcag agcgcctggc tgaggagttc cactgagggg 1501

agcactggag cagccctttg gcagaggctg aggagggaga tggaccagcc cacgcctggc 1561

acctggctcc atggcataag gaaagggaga tgctggcctc tgtgctcctg ctgtcttttc 1621

ctgtttctgt ttgcgtttga cttagtagca accgacagag tggcaaggga tttggtcttc 1681

agcagtagac atccttccac ccctgccctc agccaagtct cttgctgcca tgccaatgct 1741

atgtccaccc ttgcccctcg gcccaagagt gtccagcggt ggcccacctc ttcctcccac 1801

tacagcctca acagtaaaaa aaaaaaaaaa aaa 1834

<210>4

<211>393

<212>PRT

<213>人

<400>4

Met Glu Gln Cys Ala Cys Val Glu Arg Glu Leu Asp Lys Val Leu Gln

1 5 10 15

Lys Phe Leu Thr Tyr Gly Gln His Cys Glu Arg Ser Leu Glu Glu Leu

20 25 30

Leu His Tyr Val Gly Gln Leu Arg Ala Glu Leu Ala Ser Ala Ala Leu

35 40 45

Gln Gly Thr Pro Leu Ser Ala Thr Leu Ser Leu Val Met Ser Gln Cys

50 55 60

Cys Arg Lys Ile Lys Asp Thr Val Gln Lys Leu Ala Ser Asp His Lys

65 70 75 80

Asp Ile His Ser Ser Val Ser Arg Val Gly Lys Ala Ile Asp Arg Asn

85 90 95

Phe Asp Ser Glu Ile Cys Gly Val Val Ser Asp Ala Val Trp Asp Ala

100 105 110

Arg Glu Gln Gln Gln Gln Ile Leu Gln Met Ala Ile Val Glu His Leu

115 120 125

Tyr Gln Gln Gly Met Leu Ser Val Ala Glu Glu Leu Cys Gln Glu Ser

130 135 140

Thr Leu Asn Val Asp Leu Asp Phe Lys Gln Pro Phe Leu Glu Leu Asn

145 150 155 160

Arg Ile Leu Glu Ala Leu His Glu Gln Asp Leu Gly Pro Ala Leu Glu

165 170 175

Trp Ala Val Ser His Arg Gln Arg Leu Leu Glu Leu Asn Ser Ser Leu

180 185 190

Glu Phe Lys Leu His Arg Leu His Phe Ile Arg Leu Leu Ala Gly Gly

195 200 205

Pro Ala Lys Gln Leu Glu Ala Leu Ser Tyr Ala Arg His Phe Gln Pro

2l0 215 220

Phe Ala Arg Leu His Gln Arg Glu Ile Gln Val Met Met Gly Ser Leu

225 230 235 240

Val Tyr Leu Arg Leu Gly Leu Glu Lys Ser Pro Tyr Cys His Leu Leu

245 250 255

Asp Ser Ser His Trp Ala Glu Ile Cys Glu Thr Phe Thr Arg Asp Ala

260 265 270

Cys Ser Leu Leu Gly Leu Ser Val Glu Ser Pro Leu Ser Val Ser Phe

275 280 285

Ala Ser Gly Cys Val Ala Leu Pro Val Leu Met Asn Ile Lys Ala Val

290 295 300

Ile Glu Gln Arg Gln Cys Thr Gly Val Trp Asn His Lys Asp Glu Leu

305 310 315 320

Pro Ile Glu Ile Glu Leu Gly Met Lys Cys Trp Tyr His Ser Val Phe

325 330 335

Ala Cys Pro Ile Leu Arg Gln Gln Thr Ser Asp Ser Asn Pro Pro Ile

340 345 350

Lys Leu Ile Cys Gly His Val Ile Ser Arg Asp Ala Leu Asn Lys Leu

355 360 365

Ile Asn Gly Gly Lys Leu Lys Cys Pro Tyr Cys Pro Met Glu Gln Asn

370 375 380

Pro Ala Asp Gly Lys Arg Ile Ile Phe

385 390

<210>5

<211>3194

<212>DNA

<213>人

<220>

<221>CDS

<222>(232)..(1725)

<400>5

cgccgcgggg cgggggcgag gggaggagga aggagggagg cagcgctccg gcggctccgc 60

gccccgcact cccggacccg aagccgggaa gaaacgtatg tcaaacgagg atacagtgtc 120

tggaactatt ggttctaaga tataagtgga atgagcctgg atcaggagaa gtatgctgag 180

ctagagttga aggaagcttc tctttctaac aagagaaagc agagttaaat t atg gca 237

Met Ala

1

gag aca agt ctg tta gag gct ggg gcc tct gca gcc tct aca gct gcg 285

Glu Thr Ser Leu Leu Glu Ala Gly Ala Ser Ala Ala Ser Thr Ala Ala

5 10 15

gct ttg gag aac tta cag gtg gag gcg agc tgc tct gtg tgc ctg gag 333

Ala Leu Glu Asn Leu Gln Val Glu Ala Ser Cys Ser Val Cys Leu Glu

20 25 30

tat ctg aag gaa cct gtc atc att gag tgt ggg cac aac ttc tgc aaa 381

Tyr Leu Lys Glu Pro Val Ile Ile Glu Cys Gly His Asn Phe Cys Lys

35 40 45 50

gct tgc atc acc cgc tgg tgg gag gac cta gag agg gac ttc cct tgt 429

Ala Cys Ile Thr Arg Trp Trp Glu Asp Leu Glu Arg Asp Phe Pro Cys

55 60 65

cct gtc tgt cga aag aca tcc cgc tac cgc agt ctc cga cct aat cgg 477

Pro Val Cys Arg Lys Thr Ser Arg Tyr Arg Ser Leu Arg Pro Asn Arg

70 75 80

caa cta ggc agt atg gtg gaa att gcc aag cag ctc cag gcc gtc aag 525

Gln Leu Gly Ser Met Val Glu Ile Ala Lys Gln Leu Gln Ala Val Lys

85 90 95

cgg aag atc cgg gat gag agc ctc tgc ccc caa cac cat gag gcc ctc 573

Arg Lys Ile Arg Asp Glu Ser Leu Cys Pro Gln His His Glu Ala Leu

100 105 110

agc ctt ttc tgt tat gag gac cag gag gct gta tgc ttg ata tgt gca 621

Ser Leu Phe Cys Tyr Glu Asp Gln Glu Ala Val Cys Leu Ile Cys Ala

115 120 125 130

att tcc cac acc cac cgg gcc cac acc gtt gtg cca ctg gac gat gct 669

Ile Ser His Thr His Arg Ala His Thr Val Val Pro Leu Asp Asp Ala

135 140 145

aca cag gag tac aag gaa aaa ctg cag aag tgt ctg gag ccc ctg gaa 717

Thr Gln Glu Tyr Lys Glu Lys Leu Gln Lys Cys Leu Glu Pro Leu Glu

150 155 160

cag aag ctg cag gag atc act cgc tgc aag tcc tct gag gag aag aag 765

Gln Lys Leu Gln Glu Ile Thr Arg Cys Lys Ser Ser Glu Glu Lys Lys

165 170 175

cct ggt gag ctc aag aga cta gtg gaa agt cgc cga cag cag atc ttg 813

Pro Gly Glu Leu Lys Arg Leu Val Glu Ser Arg Arg Gln Gln Ile Leu

180 185 190

agg gag ttt gaa gag ctt cat agg cgg ctg gat gaa gag cag cag gtg 861

Arg Glu Phe Glu Glu Leu His Arg Arg Leu Asp Glu Glu Gln Gln Val

195 200 205 210

ttg ctt tca cga ctg gaa gaa gag gaa cag gac att ctg cag cga ctc 909

Leu Leu Ser Arg Leu Glu Glu Glu Glu Gln Asp Ile Leu Gln Arg Leu

215 220 225

cga gaa aat gct gct cac ctt ggg gac aag cgc cgg gac ctg gcc cac 957

Arg Glu Asn Ala Ala His Leu Gly Asp Lys Arg Arg Asp Leu Ala His

230 235 240

ttg gct gcc gag gtg gag ggc aag tgc tta cag tca ggc ttc gag atg 1005

Leu Ala Ala Glu Val Glu Gly Lys Cys Leu Gln Ser Gly Phe Glu Met

245 250 255

ctt aag gat gtc aaa agt acc ctg gaa aaa tgt gaa aag gtg aag acc 1053

Leu Lys Asp Val Lys Ser Thr Leu Glu Lys Cys Glu Lys Val Lys Thr

260 265 270

atg gag gtg act tca gta tcc ata gag ctg gaa aag aac ttc agc aat 1101

Met Glu Val Thr Ser Val Ser Ile Glu Leu Glu Lys Asn Phe Ser Asn

275 280 285 290

ttt ccc cga cag tac ttt gcc cta agg aaa atc ctt aaa cag cta att 1149

Phe Pro Arg Gln Tyr Phe Ala Leu Arg Lys Ile Leu Lys Gln Leu Ile

295 300 305

gct ccc cca ctc tgg ctt ctc ccg cca gcg gat gtg acc ctg gac cct 1197

Ala Pro Pro Leu Trp Leu Leu Pro Pro Ala Asp Val Thr Leu Asp Pro

310 315 320

gag aca gct cat cct aac cta gtc ctg tca gag gat cgt aag agc gtc 1245

Glu Thr Ala His Pro Asn Leu Val Leu Ser Glu Asp Arg Lys Ser Val

325 330 335

aag ttc gtg gag aca aga ctc cgg gat ctc cct gac aca cca agg cgt 1293

Lys Phe Val Glu Thr Arg Leu Arg Asp Leu Pro Asp Thr Pro Arg Arg

340 345 350

ttc acc ttc tac cct tgc gtc ctg gct act gag ggt ttc acc tca ggt 1341

Phe Thr Phe Tyr Pro Cys Val Leu Ala Thr Glu Gly Phe Thr Ser Gly

355 360 365 370

cga cac tac tgg gag gtg gag gtg ggc gac aag acc cac tgg gca gtg 1389

Arg His Tyr Trp Glu Val Glu Val Gly Asp Lys Thr His Trp Ala Val

375 380 385

ggt gta tgc cgg gac tcc gtg agc cga aag ggc gag ttg act cca ctc 1437

Gly Val Cys Arg Asp Ser Val Ser Arg Lys Gly Glu Leu Thr Pro Leu

390 395 400

cct gag act ggc tac tgg cgg gtg cgg cta tgg aat ggg gac aaa tat 1485

Pro Glu Thr Gly Tyr Trp Arg Val Arg Leu Trp Asn Gly Asp Lys Tyr

405 410 415

gca gcc acc acc aca cct ttt acc cct ttg cac atc aag gtg aaa ccc 1533

Ala Ala Thr Thr Thr Pro Phe Thr Pro Leu His Ile Lys Val Lys Pro

420 425 430

aag cgg gta ggc ata ttc cta gac tat gag gcc ggc aca ctg tct ttc 1581

Lys Arg Val Gly Ile Phe Leu Asp Tyr Glu Ala Gly Thr Leu Ser Phe

435 440 445 450

tac aat gtc aca gac cgc tct cat atc tac acc ttc act gat act ttt 1629

Tyr Asn Val Thr Asp Arg Ser His Ile Tyr Thr Phe Thr Asp Thr Phe

455 460 465

act gag aaa ctt tgg ccc ctc ttc tac cca ggc atc cgg gct gga cgg 1677

Thr Glu Lys Leu Trp Pro Leu Phe Tyr Pro Gly Ile Arg Ala Gly Arg

470 475 480

aag aat gct gca cca ctt acc atc agg ccc cca aca gat tgg gag tga 1725

Lys Asn Ala Ala Pro Leu Thr Ile Arg Pro Pro Thr Asp Trp Glu

485 490 495

caggttggga tgtgggaatg actggggtga ggcagggtca agtgctacgg gcctccttcc 1785

cgtgtcctgc tggaacgtct tcgtgtccac ctgggtccag tcctgaatca tcttggagaa 1845

acaccttggt ttctaggatg gttttgtgtg gagggggagg taggactggg ctggatgaga 1905

gagcacagct gtgacttcct cctaactgtc agggtgggga gctggttccc agaggattgt 1965

ctaccctgaa gtccatcagg ttttctgttg cacaaggacg ggtcaggaag gaaggagagg 2025

cttttccaga aacaaaaaat ctgtgagggt ctgacttgct caaaccagag gaggaaacag 2085

aaacccctgc acatcttttt agggggttct ttgacccagg atagtcttgc ttcttgaggt 2145

agatcacagg ggtctgtgta cctctgaatt catgagagat gaatgacaga tgctctcatg 2205

ggtctagata ttgaggagtt tttctgaggg cagagattgg acatcaacaa ggctagaagg 2265

gtcagggaag tgggctaaag gaacagattc ctagagatta atgaagagga gggaggtttc 2325

tttggtcttc tattccaagg gtaaggttgc gattatgggt aagattggcc agaggtagga 2385

atgtggggag aaggagaggc tgaaaagaaa gcagaggaga acccaggtcc ctgcctcagc 2445

cttcagcaga gttggcttat tgcctgcctc tataccaata agtcagtcac cttgctcctc 2505

tccagaggca aagtggaaga gatcctgcaa gacacatcta tcctttcaca gtgttcccaa 2565

gggaacttgg aaaggagagt caggtattag aggaaagaga agggtatttg tatacaaagc 2625

cctggcctta aagaatgtta cttagtagct actcccaaat tgtcagcctt cttacctggc 2685

caaggtgtcc aagccagaaa ggaaaaaagg ttatggagtc tttctcaccc taaggacagg 2745

gtggaagagg gtggtatata gggaagggcc agataggcaa cttcatttgg cttgtgtgca 2805

tctggcctgg aactggtgtt aagccaggct tttgcttgtt tgttgccatc cctcaccctt 2865

tgccatttcc cttttcagag aatgtaaatg attttcatgt taggccaaaa taaacaactt 2925

atagggtaca tatgttgtca taaaaggtaa aagtgatgca tgccaaacca aactaaacca 2985

atttggatta tctgctattc gggtaatctt cacagaaatg actgagagaa gaatctgcag 3045

tttactgagg gcatttcagt tcctcctacc acctcaacag gactttgtcc agactctcct 3105

cctcttacct ttgtgccttg actgtggttc tttgtggcaa gatactttgg ttggttaaaa 3165

taatatggaa caaaaaaaaa aaaaaaaaa 3194

<210>6

<211>497

<212>PRT

<213>人

<400>6

Met Ala Glu Thr Ser Leu Leu Glu Ala Gly Ala Ser Ala Ala Ser Thr

1 5 10 15

Ala Ala Ala Leu Glu Asn Leu Gln Val Glu Ala Ser Cys Ser Val Cys

20 25 30

Leu Glu Tyr Leu Lys Glu Pro Val Ile Ile Glu Cys Gly His Asn Phe

35 40 45

Cys Lys Ala Cys Ile Thr Arg Trp Trp Glu Asp Leu Glu Arg Asp Phe

50 55 60

Pro Cys Pro Val Cys Arg Lys Thr Ser Arg Tyr Arg Ser Leu Arg Pro

65 70 75 80

Asn Arg Gln Leu Gly Ser Met Val Glu Ile Ala Lys Gln Leu Gln Ala

85 90 95

Val Lys Arg Lys Ile Arg Asp Glu Ser Leu Cys Pro Gln His His Glu

100 105 110

Ala Leu Ser Leu Phe Cys Tyr Glu Asp Gln Glu Ala Val Cys Leu Ile

115 120 125

Cys Ala Ile Ser His Thr His Arg Ala His Thr Val Val Pro Leu Asp

130 135 140

Asp Ala Thr Gln Glu Tyr Lys Glu Lys Leu Gln Lys Cys Leu Glu Pro

145 150 155 160

Leu Glu Gln Lys Leu Gln Glu Ile Thr Arg Cys Lys Ser Ser Glu Glu

165 170 175

Lys Lys Pro Gly Glu Leu Lys Arg Leu Val Glu Ser Arg Arg Gln Gln

180 185 190

Ile Leu Arg Glu Phe Glu Glu Leu His Arg Arg Leu Asp Glu Glu Gln

195 200 205

Gln Val Leu Leu Ser Arg Leu Glu Glu Glu Glu Gln Asp Ile Leu Gln

210 215 220

Arg Leu Arg Glu Asn Ala Ala His Leu Gly Asp Lys Arg Arg Asp Leu

225 230 235 240

Ala His Leu Ala Ala Glu Val Glu Gly Lys Cys Leu Gln Ser Gly Phe

245 250 255

Glu Met Leu Lys Asp Val Lys Ser Thr Leu Glu Lys Cys Glu Lys Val

260 265 270

Lys Thr Met Glu Val Thr Ser Val Ser Ile Glu Leu Glu Lys Asn Phe

275 280 285

Ser Asn Phe Pro Arg Gln Tyr Phe Ala Leu Arg Lys Ile Leu Lys Gln

290 295 300

Leu Ile Ala Pro Pro Leu Trp Leu Leu Pro Pro Ala Asp Val Thr Leu

305 310 315 320

Asp Pro Glu Thr Ala His Pro Asn Leu Val Leu Ser Glu Asp Arg Lys

325 330 335

Ser Val Lys Phe Val Glu Thr Arg Leu Arg Asp Leu Pro Asp Thr Pro

340 345 350

Arg Arg Phe Thr Phe Tyr Pro Cys Val Leu Ala Thr Glu Gly Phe Thr

355 360 365

Ser Gly Arg His Tyr Trp Glu Val Glu Val Gly Asp Lys Thr His Trp

370 375 380

Ala Val Gly Val Cys Arg Asp Ser Val Ser Arg Lys Gly Glu Leu Thr

385 390 395 400

Pro Leu Pro Glu Thr Gly Tyr Trp Arg Val Arg Leu Trp Asn Gly Asp

405 410 415

Lys Tyr Ala Ala Thr Thr Thr Pro Phe Thr Pro Leu His Ile Lys Val

420 425 430

Lys Pro Lys Arg Val Gly Ile Phe Leu Asp Tyr Glu Ala Gly Thr Leu

435 440 445

Ser Phe Tyr Asn Val Thr Asp Arg Ser His Ile Tyr Thr Phe Thr Asp

450 455 460

Thr Phe Thr Glu Lys Leu Trp Pro Leu Phe Tyr Pro Gly Ile Arg Ala

465 470 475 480

Gly Arg Lys Asn Ala Ala Pro Leu Thr Ile Arg Pro Pro Thr Asp Trp

485 490 495

Glu

<210>7

<211>1942

<212>DNA

<213>人

<220>

<221>CDS

<222>(320)..(1033)

<400>7

gcgcgggacg ccgagcccac gcgcgcctgc cgggacaagt ggagacgagg ccggcgagcg 60

gacgccccga ggtgcccggg caggcagtgg gccgccgagc gggagttgag gttggcgaag 120

gagctgtggc cgggtcccct tcttatccag cccgagacac tgcgctccgg tgggcgtccc 180

tgcgctggga atccctctcg gagtttttcc aggcccggcc gggttgctcc gggaaaggcc 240

ctgttggggg aggtgggccc ggagctggca ggtctacaat ccggttggaa gggctcgcag 300

tgggtgattc agggtgcca atg acc tcc ccg cga acg gga acg ccc gca cta 352

Met Thr Ser Pro Arg Thr Gly Thr Pro Ala Leu

1 5 10

gac aac cag ccc cag acc ggc att ccc aga gcc gca ggc ggg agg gac 400

Asp Asn Gln Pro Gln Thr Gly Ile Pro Arg Ala Ala Gly Gly Arg Asp

15 20 25

gca ggg act ccg gga cag caa atc ccc ggg gga gaa ggg aag ggg gaa 448

Ala Gly Thr Pro Gly Gln Gln Ile Pro Gly Gly Glu Gly Lys Gly Glu

30 35 40

ggc ggg aca ggg gag gcc cac cct cct tgg gct ccg cta gcg acc agc 496

Gly Gly Thr Gly Glu Ala His Pro Pro Trp Ala Pro Leu Ala Thr Ser

45 50 55

cag cgc ccc ttc aga cgc agc ctt cct ggc tcc gga ccc cgg ctt tct 544

Gln Arg Pro Phe Arg Arg Ser Leu Pro Gly Ser Gly Pro Arg Leu Ser

60 65 70 75

gct ccg gtc ctc gtc cca atg ccc ccc aag gtc ccc agc aga ggc att 592

Ala Pro Val Leu Val Pro Met Pro Pro Lys Val Pro Ser Arg Gly Ile

80 85 90

cag gtt cct cct cgc ccc gcc cag acg cag ctt ctt tgg gta tgg gtg 640

Gln Val Pro Pro Arg Pro Ala Gln Thr Gln Leu Leu Trp Val Trp Val

95 100 105

aca gca ctc ctg agc gtc gct gtc cct att cgc tgc cgt tgc cag ctc 688

Thr Ala Leu Leu Ser Val Ala Val Pro Ile Arg Cys Arg Cys Gln Leu

110 115 120

cga ttc cgc gaa acc tct ccg gca cca cct cgg aag ccc cgc cca ggg 736

Arg Phe Arg Glu Thr Ser Pro Ala Pro Pro Arg Lys Pro Arg Pro Gly

125 130 135

cga tgg tcc ggg cct aac ctg ccg gcc ccg ccc acc cgg ccc ttg ggc 784

Arg Trp Ser Gly Pro Asn Leu Pro Ala Pro Pro Thr Arg Pro Leu Gly

140 145 150 155

tcc ctg agg ccc gcc cag cag act cga gga acg ctt gac aaa gtg gcg 832

Ser Leu Arg Pro Ala Gln Gln Thr Arg Gly Thr Leu Asp Lys Val Ala

160 165 170

aag gag ccc tac ggg agt ccc gga ttg gac cct gct cct tcg gtc cct 880

Lys Glu Pro Tyr Gly Ser Pro Gly Leu Asp Pro Ala Pro Ser Val Pro

175 180 185

cag cct cgg caa gcc gcg gtc tcc tgg ccc ttg gcc tgg gtc acc tta 928

Gln Pro Arg Gln Ala Ala Val Ser Trp Pro Leu Ala Trp Val Thr Leu

190 195 200

gga ggc agg agg aga tgt ggt cag tgt ggg agc ttg gag ggg cca tgc 976

Gly Gly Arg Arg Arg Cys Gly Gln Cys Gly Ser Leu Glu Gly Pro Cys

205 210 215

act tcc gga gaa gac cac cga ctc atg gct ttg gtg gag ggg cgc cgg 1024

Thr Ser Gly Glu Asp His Arg Leu Met Ala Leu Val Glu Gly Arg Arg

220 225 230 235

cag att tag ttaagctctc ccccatccct gacacaccca gccggggcgg 1073

Gln Ile

gagcggggct tgtgaccact ccggagagct ttgagggccc ctgctttggg actccgcacg 1133

gacagtcact gtctcagagt gcattctcca ggggccactc tcttggggac actgtagggg 1193

tcacagggca ggtgggcagc ctctctcggg gggcggcgtg agagccggag agcagggggc 1253

gggggcgggc ccggctcggg ctcacgtctg cgttgaagcc gctggggaag gggagagaaa 1313

ccgagagaac cggttccccc gccttgacag cggaggcccc cacaccaagg cccttggact 1373

aagcggggca gggacagcct ccaggtagag ctgttcgccg gggcgcctgc agagcccgca 1433

tcccaaccct gaccccgggg ccggggcgca ggctcctgga gggaggcgtc caggcgggac 1493

agggcccggg gagcggcagg aaatgggctg ctcttcccac ttgactgacg ggaaaactaa 1553

ggcacggtca actatcaagc aagcgtggtg tcgaccttag agcaggtaat cacccctcgt 1613

tttaaagcca aagtttccct cgcagtcgat ttggaccaag actacccaca atctccccac 1673

cgcaggactg aagcgaggct gaaatcttag aatcaacccc acggaatgaa gaggttgtcc 1733

taattccagc actgagtgta agaatggaag ccttgcatgt gattttattc aagtcctcat 1793

tttagaaatg ggaaaactga ggcccgaagg cgaacggcaa gtgcagcatc gggactcgaa 1853

cccaagtctc tcctcgagtg ctgggctatt ccgggctcag tggtcttgac ttccgcggcc 1913

ctcttccttg ttgcctgcag gaaaatgcc 1942

<210>8

<211>237

<212>PRT

<213>人

<400>8

Met Thr Ser Pro Arg Thr Gly Thr Pro Ala Leu Asp Asn Gln Pro Gln

1 5 10 15

Thr Gly Ile Pro Arg Ala Ala Gly Gly Arg Asp Ala Gly Thr Pro Gly

20 25 30

Gln Gln Ile Pro Gly Gly Glu Gly Lys Gly Glu Gly Gly Thr Gly Glu

35 40 45

Ala His Pro Pro Trp Ala Pro Leu Ala Thr Ser Gln Arg Pro Phe Arg

50 55 60

Arg Ser Leu Pro Gly Ser Gly Pro Arg Leu Ser Ala Pro Val Leu Val

65 70 75 80

Pro Met Pro Pro Lys Val Pro Ser Arg Gly Ile Gln Val Pro Pro Arg

85 90 95

Pro Ala Gln Thr Gln Leu Leu Trp Val Trp Val Thr Ala Leu Leu Ser

100 105 110

Val Ala Val Pro Ile Arg Cys Arg Cys Gln Leu Arg Phe Arg Glu Thr

115 120 125

Ser Pro Ala Pro Pro Arg Lys Pro Arg Pro Gly Arg Trp Ser Gly Pro

130 135 140

Asn Leu Pro Ala Pro Pro Thr Arg Pro Leu Gly Ser Leu Arg Pro Ala

145 150 155 160

Gln Gln Thr Arg Gly Thr Leu Asp Lys Val Ala Lys Glu Pro Tyr Gly

165 170 175

Ser Pro Gly Leu Asp Pro Ala Pro Ser Val Pro Gln Pro Arg Gln Ala

180 185 190

Ala Val Ser Trp Pro Leu Ala Trp Val Thr Leu Gly Gly Arg Arg Arg

195 200 205

Cys Gly Gln Cys Gly Ser Leu Glu Gly Pro Cys Thr S0er Gly Glu Asp

210 215 220

His Arg Leu Met Ala Leu Val Glu Gly Arg Arg Gln Ile

225 230 235

<210>9

<211>1191

<212>DNA

<213>人

<220>

<221>CDS

<222>(96)..(719)

<400>9

gcggccgccc ctcgcgcacc acgtgctagg ggagcgggcg ggcagatggc tgtgtctgta 60

agcgggaggc gtgcccggtt catccaaggc gcaag atg gcg ctg ctt ttt gca 113

Met Ala Leu Leu Phe Ala

1 5

cgt tct ttg cgc ttg tgc cgc tgg gga gcc aaa cga ttg gga gtt gcc 161

Arg Ser Leu Arg Leu Cys Arg Trp Gly Ala Lys Arg Leu Gly Val Ala

10 15 20

tcc aca gag gcc cag aga ggc gtc agt ttc aaa ctg gaa gaa aaa acc 209

Ser Thr Glu Ala Gln Arg Gly Val Ser Phe Lys Leu Glu Glu Lys Thr

25 30 35

gcc cac agc agc ctg gca ctc ttc aga gat gat acg ggt gtc aaa tat 257

Ala His Ser Ser Leu Ala Leu Phe Arg Asp Asp Thr Gly Val Lys Tyr

40 45 50

ggc ttg gtg gga ttg gag ccc acc aag gtg gcc ttg aat gtg gag cgc 305

Gly Leu Val Gly Leu Glu Pro Thr Lys Val Ala Leu Asn Val Glu Arg

55 60 65 70

ttc cgg gag tgg gca gtg gtg ctg gca gac aca gcg gtc acc agt ggc 353

Phe Arg Glu Trp Ala Val Val Leu Ala Asp Thr Ala Val Thr Ser Gly

75 80 85

aga cac tac tgg gaa gtg aca gtg aag cgc tcc cag cag ttc cgg ata 401

Arg His Tyr Trp Glu Val Thr Val Lys Arg Ser Gln Gln Phe Arg Ile

90 95 100

gga gtg gca gat gtg gac atg tcc cgg gat agc tgc att ggt gtt gat 449

Gly Val Ala Asp Val Asp Met Ser Arg Asp Ser Cys Ile Gly Val Asp

105 110 115

gat cgt tcc tgg gtg ttc acc tat gcc cag cgc aag tgg tac acc atg 497

Asp Arg Ser Trp Val Phe Thr Tyr Ala Gln Arg Lys Trp Tyr Thr Met

120 125 130

ttg gcc aac gag aaa gcc cca gtt gag ggt att ggg cag cca gag aag 545

Leu Ala Asn Glu Lys Ala Pro Val Glu Gly Ile Gly Gln Pro Glu Lys

135 140 145 150

gtg ggg ctg ttg ctg gag tat gag gcc cag aag ctg agc ctg gtg gat 593

Val Gly Leu Leu Leu Glu Tyr Glu Ala Gln Lys Leu Ser Leu Val Asp

155 160 165

gtg agc cag gtc tct gtg gtt cac acg cta cag aca gat ttc cgg ggt 641

Val Ser Gln Val Ser Val Val His Thr Leu Gln Thr Asp Phe Arg Gly

170 175 180

cca gtg gtg cct gcc ttt gct ctc tgg gat ggg gag ctg ctg acc cat 689

Pro Val Val Pro Ala Phe Ala Leu Trp Asp Gly Glu Leu Leu Thr His

185 190 195

tca ggg ctt gag gtg ccc gag ggc ctc tag tatgtccatt actggagtcc 739

Ser Gly Leu Glu Val Pro Glu Gly Leu

200 205

ctaatcacgc ctttggccag cctccttttg aaagtgtccg aagccttttt actttgcctc 799

aagcaacctc tagctcccac aattcagtgt tgggtcctct gtgcaatatc atgatcatct 859

tcctcatccc ctaccttgtg aaagctaggc atacagccaa accctccttt tccccaccca 919

ccaacactac tgccaatttc ctaggctacc atgggtgtat cttccttgac ctgcttcctt 979

cagtccctct gcctcccttt gcccaggcct ttctcagact gtattccatc ctggggtctt 1039

atcattcagc tttgtttgaa tttattaatc accatgatac ctctccctcc ctttgtccac 1099

atgtaacttg ttcttggggc tctaccagat ggctgaagag taaatccttt ctacctctgg 1159

ccaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aa 1191

<210>10

<211>207

<212>PRT

<213>人

<400>10

Met Ala Leu Leu Phe Ala Arg Ser Leu Arg Leu Cys Arg Trp Gly Ala

1 5 10 15

Lys Arg Leu Gly Val Ala Ser Thr Glu Ala Gln Arg Gly Val Ser Phe

20 25 30

Lys Leu Glu Glu Lys Thr Ala His Ser Ser Leu Ala Leu Phe Arg Asp

35 40 45

Asp Thr Gly Val Lys Tyr Gly Leu Val Gly Leu Glu Pro Thr Lys Val

50 55 60

Ala Leu Asn Val Glu Arg Phe Arg Glu Trp Ala Val Val Leu Ala Asp

65 70 75 80

Thr Ala Val Thr Ser Gly Arg His Tyr Trp Glu Val Thr Val Lys Arg

85 90 95

Ser Gln Gln Phe Arg Ile Gly Val Ala Asp Val Asp Met Ser Arg Asp

100 105 110

Ser Cys Ile Gly Val Asp Asp Arg Ser Trp Val Phe Thr Tyr Ala Gln

115 120 125

Arg Lys Trp Tyr Thr Met Leu Ala Asn Glu Lys Ala Pro Val Glu Gly

130 135 140

Ile Gly Gln Pro Glu Lys Val Gly Leu Leu Leu Glu Tyr Glu Ala Gln

145 150 155 160

Lys Leu Ser Leu Val Asp Val Ser Gln Val Ser Val Val His Thr Leu

165 170 175

Gln Thr Asp Phe Arg Gly Pro Val Val Pro Ala Phe Ala Leu Trp Asp

180 185 190

Gly Glu Leu Leu Thr His Ser Gly Leu Glu Val Pro Glu Gly Leu

195 200 205

<210>11

<211>1080

<212>DNA

<213>人

<220>

<221>CDS

<222>(242)..(844)

<400>11

agcccccgcg cccgcccgcc cgccctgcgg tccggtcctg gcgcccgcgc agaaccagct 60

gtctgagctg cccgggcagc gggggagcag cgagcgggct tccgcgagcc ggagaaggca 120

caggcctgtc ccgggtcccg gcaggtctgc gcgtctgttc ccagcgctct gcgaggccta 180

aaaaggagga gcaacctgtc cagaatccct gcaggacagg aaaaggaggg gaaatctcga 240

c atg gaa aaa ccc tac aat aaa aat gaa gga aac ctg gaa aac gag gga 289

Met Glu Lys Pro Tyr Asn Lys Asn Glu Gly Asn Leu Glu Asn Glu Gly

1 5 10 15

aag cca gaa gat gaa gta gag cct gat gat gaa gga aag tca gac gag 337

Lys Pro Glu Asp Glu Val Glu Pro Asp Asp Glu Gly Lys Ser Asp Glu

20 25 30

gaa gaa aag cca gac gtg gag ggg aag aca gaa tgc gag gga aag aga 385

Glu Glu Lys Pro Asp Val Glu Gly Lys Thr Glu Cys Glu Gly Lys Arg

35 40 45

gag gat gag gga gag cca ggt gat gag gga caa ctg gaa gat gag gga 433

Glu Asp Glu Gly Glu Pro Gly Asp Glu Gly Gln Leu Glu Asp Glu Gly

50 55 60

agc cag gaa aag cag ggc agg tcc gaa ggt gag ggc aag cca caa ggc 481

Ser Gln Glu Lys Gln Gly Arg Ser Glu Gly Glu Gly Lys Pro Gln Gly

65 70 75 80

gag ggc aag cca gcc tcc cag gca aag cca gag agc cag ccg cgg gcc 529

Glu Gly Lys Pro Ala Ser Gln Ala Lys Pro Glu Ser Gln Pro Arg Ala

85 90 95

gcc gaa aag cgc ccg gct gaa gat tat gtg ccc cgg aaa gca aaa aga 577

Ala Glu Lys Arg Pro Ala Glu Asp Tyr Val Pro Arg Lys Ala Lys Arg

100 105 110

aaa acg gac agg ggg acg gac gat tcc ccc aag gac tct cag gag gac 625

Lys Thr Asp Arg Gly Thr Asp Asp Ser Pro Lys Asp Ser Gln Glu Asp

115 120 125

tta cag gaa agg cat ctg agc agt gag gag atg atg aga gaa tgt gga 673

Leu Gln Glu Arg His Leu Ser Ser Glu Glu Met Met Arg Glu Cys Gly

130 135 140

gat gtg tca agg gct caa gag gag cta agg aaa aaa cag aaa atg ggt 721

Asp Val Ser Arg Ala Gln Glu Glu Leu Arg Lys Lys Gln Lys Met Gly

145 150 155 160

ggt ttt cat tgg atg caa aga gat gta cag gat cca ttc gcc cca agg 769

Gly Phe His Trp Met Gln Arg Asp Val Gln Asp Pro Phe Ala Pro Arg

165 170 175

gga caa cgg ggt gtc agg gga gtg agg ggt gga ggt agg ggc cag agg 817

Gly Gln Arg Gly Val Arg Gly Val Arg Gly Gly Gly Arg Gly Gln Arg

180 185 190

ggc tta cac gat atc cca tac ctt taa tgcctttggc cttccattct 864

Gly Leu His Asp Ile Pro Tyr Leu

195 200

gatttctctg atgagaatat tgctggccct gctttccctg gtaggtattt gccaggccca 924

atgctttaac cttaagctga tactttgctt tagatgtcag tctcgttacc agcagccttt 984

tgacccaact acggcgctct atattttagt agaggatttt cacccatgtg catggaaaag 1044

atgttcatgg tacattgtaa aaaaaaaaaa aaaaaa 1080

<210>12

<211>200

<212>PRT

<213>人

<400>12

Met Glu Lys Pro Tyr Asn Lys Asn Glu Gly Asn Leu Glu Asn Glu Gly

1 5 10 15

Lys Pro Glu Asp Glu Val Glu Pro Asp Asp Glu Gly Lys Ser Asp Glu

20 25 30

Glu Glu Lys Pro Asp Val Glu Gly Lys Thr Glu Cys Glu Gly Lys Arg

35 40 45

Glu Asp Glu Gly Glu Pro Gly Asp Glu Gly Gln Leu Glu Asp Glu Gly

50 55 60

Ser Gln Glu Lys Gln Gly Arg Ser Glu Gly Glu Gly Lys Pro Gln Gly

65 70 75 80

Glu Gly Lys Pro Ala Ser Gln Ala Lys Pro Glu Ser Gln Pro Arg Ala

85 90 95

Ala Glu Lys Arg Pro Ala Glu Asp Tyr Val Pro Arg Lys Ala Lys Arg

100 105 110

Lys Thr Asp Arg Gly Thr Asp Asp Ser Pro Lys Asp Ser Gln Glu Asp

115 120 125

Leu Gln Glu Arg His Leu Ser Ser Glu Glu Met Met Arg Glu Cys Gly

130 135 140

Asp Val Ser Arg Ala Gln Glu Glu Leu Arg Lys Lys Gln Lys Met Gly

145 150 155 160

Gly Phe His Trp Met Gln Arg Asp Val Gln Asp Pro Phe Ala Pro Arg

165 170 175

Gly Gln Arg Gly Val Arg Gly Val Arg Gly Gly Gly Arg Gly Gln Arg

180 185 190

Gly Leu His Asp Ile Pro Tyr Leu

195 200

<210>13

<211>1601

<212>

<213>人

<220>

<221>CDS

<222>(75)..(767)

<400>13

gacttaggct gtgacccaca gaaggacgcc agaaagtact caagacattc acggtgcccc 60

ggtcagcact cgcc atg acg aag act tct aca tgc ata tac cac ttc ctt 110

Met Thr Lys Thr Ser Thr Cys Ile Tyr His Phe Leu

1 5 10

gtt ctg agc tgg tat act ttc ctc aat tat tac atc tca cag gaa gga 158

Val Leu Ser Trp Tyr Thr Phe Leu Asn Tyr Tyr Ile Ser Gln Glu Gly

15 20 25

aaa gac gag gtg aaa ccc aaa atc ttg gca aat ggt gca agg tgg aaa 206

Lys Asp Glu Val Lys Pro Lys Ile Leu Ala Asn Gly Ala Arg Trp Lys

30 35 40

tat atg acg ctg ctt aat ctg ctc ttg cag acc att ttc tac ggg gtc 254

Tyr Met Thr Leu Leu Asn Leu Leu Leu Gln Thr Ile Phe Tyr Gly Val

45 50 55 60

acc tgc ctg gat gat gtg ctg aaa aga acc aaa ggg gga aaa gac att 302

Thr Cys Leu Asp Asp Val Leu Lys Arg Thr Lys Gly Gly Lys Asp Ile

65 70 75

aag ttc cta act gcc ttc aga gac ctg ctt ttc acc act ctg gct ttt 350

Lys Phe Leu Thr Ala Phe Arg Asp Leu Leu Phe Thr Thr Leu Ala Phe

80 85 90

cct gta tcc acg ttt gta ttt ttg gca ttc tgg atc ctc ttt ctc tac 398

Pro Val Ser Thr Phe Val Phe Leu Ala Phe Trp Ile Leu Phe Leu Tyr

95 100 105

aat cga gat ctc att tac ccc aag gtc cta gat act gtc atc ccc gtg 446

Asn Arg Asp Leu Ile Tyr Pro Lys Val Leu Asp Thr Val Ile Pro Val

110 115 120

tgg ctg aat cat gca atg cac act ttc ata ttc ccc atc aca ttg gct 494

Trp Leu Asn His Ala Met His Thr Phe Ile Phe Pro Ile Thr Leu Ala

125 130 135 140

gaa gtc gtc ctc agg cct cac tcc tat cca tca aag aag aca gga ctc 542

Glu Val Val Leu Arg Pro His Ser Tyr Pro Ser Lys Lys Thr Gly Leu

145 150 155

acc ttg ctg gct gct gcc agc att gct tac atc agc cgc atc cta tgg 590

Thr Leu Leu Ala Ala Ala Ser Ile Ala Tyr Ile Ser Arg Ile Leu Trp

160 165 170

ctc tac ttt gag acg ggt acc tgg gtg tat cct gtg ttt gcc aaa ctc 638

Leu Tyr Phe Glu Thr Gly Thr Trp Val Tyr Pro Val Phe Ala Lys Leu

175 180 185

agc ctc ttg ggt cta gca gct ttc ttc tct ctc agc tac gtc ttc atc 686

Ser Leu Leu Gly Leu Ala Ala Phe Phe Ser Leu Ser Tyr Val Phe Ile

190 195 200

gcc agc atc tac cta ctt gga gag aag ctc aac cac tgg aaa tgg ggt 734

Ala Ser Ile Tyr Leu Leu Gly Glu Lys Leu Asn His Trp Lys Trp Gly

205 210 215 220

gac atg agg cag cca cgg aag aag agg aag taa ttgcacacca ttttccaaga 787

Asp Met Arg Gln Pro Arg Lys Lys Arg Lys

225 230

accaagaaag aagaaaacac aagagatttt tctcatcttt tttttttttt ttctggtgga 847

gggaggtggt ggaggaacat agcaaagtag gagggaeaga gagtgatact taaatttaat 907

aagaggttcg tgaaggtagc ttaacttgag aactcttggt tttttgaaag gttgactgca 967

catgccaaaa acaactcctg ctatctcaga attaattatc tttgaccttc gtggaggatg 1027

gtctctggtt aaaatctggc caaagaaact cacataaact tggtgttaga gaacatctag 1087

agagagagag aggaacttag agtcatttaa actcttcagt ttacagagaa ggatgctgag 1147

gacctagatg agaagttacc tgcaaaaggc aaaagggtta cttagtgtca gaaccaaggc 1207

aatgacttct ctctcccaga tctcctagct actggtcctg ggccattttt ttttttttaa 1267

ataatcccaa cttttcttta aaagacaagc atttcagtaa gctagttatt ttcatgggtt 1327

gctcatccat ttttttcagt gatctaaaaa tgtagggaga tggctactac tgaagttgtc 1387

tgtctacttg ggataatagc aaattaattg aagacaatgg gaaagtaagt tataaaaaat 1447

actgggaaat ctgtttctct tctgagcaag cattcagggc aggtataaac atcaaacata 1507

gtgacattgt caaaacctct tccatttgaa cattgattaa ttcatcaaat aaatggtata 1567

gtaataaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaa 1601

<210>14

<211>230

<212>PRT

<213>

<400>14

Met Thr Lys Thr Ser Thr Cys Ile Tyr His Phe Leu Val Leu Ser Trp

1 5 10 15

Tyr Thr Phe Leu Asn Tyr Tyr Ile Ser Gln Glu Gly Lys Asp Glu Val

20 25 30

Lys Pro Lys Ile Leu Ala Asn Gly Ala Arg Trp Lys Tyr Met Thr Leu

35 40 45

Leu Asn Leu Leu Leu Gln Thr Ile Phe Tyr Gly Val Thr Cys Leu Asp

50 55 60

Asp Val Leu Lys Arg Thr Lys Gly Gly Lys Asp Ile Lys Phe Leu Thr

65 70 75 80

Ala Phe Arg Asp Leu Leu Phe Thr Thr Leu Ala Phe Pro Val Ser Thr

85 90 95

Phe Val Phe Leu Ala Phe Trp Ile Leu Phe Leu Tyr Asn Arg Asp Leu

100 105 110

Ile Tyr Pro Lys Val Leu Asp Thr Val Ile Pro Val Trp Leu Asn His

115 120 125

Ala Met His Thr Phe Ile Phe Pro Ile Thr Leu Ala Glu Val Val Leu

130 135 140

Arg Pro His Ser Tyr Pro Ser Lys Lys Thr Gly Leu Thr Leu Leu Ala

145 150 155 160

Ala Ala Ser Ile Ala Tyr Ile Ser Arg Ile Leu Trp Leu Tyr Phe Glu

165 170 175

Thr Gly Thr Trp Val Tyr Pro Val Phe Ala Lys Leu Ser Leu Leu Gly

180 185 190

Leu Ala Ala Phe Phe Ser Leu Ser Tyr Val Phe Ile Ala Ser Ile Tyr

195 200 205

Leu Leu Gly Glu Lys Leu Asn His Trp Lys Trp Gly Asp Met Arg Gln

210 215 220

Pro Arg Lys Lys Arg Lys

225 230

<210>15

<211>2147

<212>DNA

<213>人

<220>

<221>CDS

<222>(253)..(705)

<400>15

ggcctactga gggtcacaag ggagatgtcc gcccccagtc gtagcctcgg acggtttctg 60

agcgttggtg tttggcacgc gccaccctct cttgctttgg ttccgccatg ccgatgtacc 120

aggtaaaacc ttatcacggg cgcggcgcgc ctctccgtgt ggagcttccc acctgcatgt 180

accggctctc taacgtgcaa ggcaggagcg gcggcccagc gcccggcgtt ggccacctac 240

agtctttggt ag atg agt ggc tgg ata gct aca agc aag acc agg atg cag 291

Met Ser GlyTrp Ile Ala Thr Ser Lys Thr Arg Met Gln

1 5 10

gat ttc tgg agc ttg tta act ttt tca tct gat ctt gtg gat gta aag 339

Asp Phe Trp Ser Leu Leu Thr Phe Ser Ser Asp Leu Val Asp Val Lys

15 20 25

gac tcg ggg gac tat cct ctg aca gct cca ggt cta tcc tgg aag aag 387

Asp Ser Gly Asp Tyr Pro Leu Thr Ala Pro Gly Leu Ser Trp Lys Lys

30 35 40 45

ttc cag ggc agc ttc tgt gag ttt gtg ggg aca ttg gtc tgt cgg tgc 435

Phe Gln Gly Ser Phe Cys Glu Phe Val Gly Thr Leu Val Cys Arg Cys

50 55 60

cag tac atc ctc ctc cat gat gac ttc cct atg gac aac ctc atc tcc 483

Gln Tyr Ile Leu Leu His Asp Asp Phe Pro Met Asp Asn Leu Ile Ser

65 70 75

ctg ctc act ggc ttc tca gac tca caa gtc tgc gcc ttc tgt cac act 531

Leu Leu Thr Gly Phe Ser Asp Ser Gln Val Cys Ala Phe Cys His Thr

80 85 90

agc acc ctg gct gct atg aaa ctg atg acc tcc ctg gta aga gtt gcc 579

Ser Thr Leu Ala Ala Met Lys Leu Met Thr Ser Leu Val Arg Val Ala

95 100 105

ctc caa ctg agt ctg cac gaa gat atc aat cag cgt cag tat gag gct 627

Leu Gln Leu Ser Leu His Glu Asp Ile Asn Gln Arg Gln Tyr Glu Ala

110 115 120 125

gaa aga aac aag ggg cca ggg cag agg gca cct gag cgg ctg gag agc 675

Glu Arg Asn Lys Gly Pro Gly Gln Arg Ala Pro Glu Arg Leu Glu Ser

130 135 140

ctg ttg gag aaa cac aaa gag ctg cat taa tactacattg tcaaagacaa 725

Leu Leu Glu Lys His Lys Glu Leu His

145 150

agacgaacat gagacatgcg atatgagttt taaaaggaga gaagagcaaa aaaacaatac 785

agctatccaa ggagcaagtg ctgagcttgt gaaaaaacag cttctatttt attaaataat 845

agtgttcctg cagggatgtc tgaagtactc tgcaaggcta attaggacag atcaatgtac 905

acttacctct ccagaaggct gaaaggtgtg tagtgactat gtgtcattaa aaatttactt 965

gaccatgggc aacagatgtc catgaaagaa tgaccctggt gagtgctcta agttttcatt 1025

ttactcatgt catcctcaat gcatcataaa tgccatagac accattacta tcacgtaggc 1085

tcatagcagc tgatgtgctg tatatgcttg agagggtggt atcaattaac tatattatct 1145

ataaagccat acttgcaatt actaccactt cacaatttat cattaacgca tttggcagat 1205

ttttttttct ccaaagtaac atttatttaa aggtttatca aaattcttag tacagcattt 1265

attataatgt gatttttgat aattgactaa atcagtggct cttaaaaaca ccctcatctc 1325

agtcccgctc agtatacacc acagtgccat ttggggaaaa gaaatacata ttagaaatgt 1385

tcatttcaga cctcgtcatg gaagatcata tattaatgta atcaggtggt acgtttacat 1445

gctcattagt aatccatcat tagtccaaat gctcactatt aggaataaat gtacaacgag 1505

ttattcagaa tacccagaaa gagtatttct tatttaaaca ttcaggacaa gctgactgaa 1565

ataagtgcac accttgaatt tgaactttca aggcacatca ctaaagtcaa tcagttatgt 1625

caggacactc ttctataata atctcaatta taaaattcct gcctctccct aacacaggag 1685

ttggagggag ttccaatatc tgaatctttc taattcactg taactgcaaa aaaatcttga 1745

tgaagtgtgt atttaaattt catgccttaa tacatagcat gccactaaaa ccacattagt 1805

tatgctttat gctgcttaat catacgtcaa aatctgtaaa atctgctctt gcatgctaag 1865

gtaatttaac tgcaattaat caattaagaa aaataaaatg taataaatgc caaataatgt 1925

aacttctttt aaacagacca ctatctaeac atttattccc caaatactta ttagctgaca 1985

ccatataagg aaaacataat aaaaagtaga cttcactgag cctttctccc attggtagct 2045

tgctctaaac ttacaaatgt tttagagaat tctttggcat gatctgactt tccaactaaa 2105

atgtgagcaa cttgaaaaaa aaaaaaaaaa aaggccacat gt 2147

<210>16

<211>150

<212>PRT

<213>人

<400>16

Met Ser Gly Trp Ile Ala Thr Ser Lys Thr Arg Met Gln Asp Phe Trp

1 5 10 15

Ser Leu Leu Thr Phe Ser Ser Asp Leu Val Asp Val Lys Asp Ser Gly

20 25 30

Asp Tyr Pro Leu Thr Ala Pro Gly Leu Ser Trp Lys Lys Phe Gln Gly

35 40 45

Ser Phe Cys Glu Phe Val Gly Thr Leu Val Cys Arg Cys Gln Tyr Ile

50 55 60

Leu Leu His Asp Asp Phe Pro Met Asp Asn Leu Ile Ser Leu Leu Thr

65 70 75 80

Gly Phe Ser Asp Ser Gln Val Cys Ala Phe Cys His Thr Ser Thr Leu

85 90 95

Ala Ala Met Lys Leu Met Thr Ser Leu Val Arg Val Ala Leu Gln Leu

100 105 110

Ser Leu His Glu Asp Ile Asn Gln Arg Gln Tyr Glu Ala Glu Arg Asn

115 120 125

Lys Gly Pro Gly Gln Arg Ala Pro Glu Arg Leu Glu Ser Leu Leu Glu

130 135 140

Lys His Lys Glu Leu His

145 150

<210>17

<211>1598

<212>DNA

<213>人

<220>

<221>CDS

<222>(121)..(690)

<400>17

ctgacgctct gctgtcttct cagggagact ctgaggctct gttgagaatc atgctttgga 60

ggcagctcat ctattggcaa ctgctggctt tgtttttcct ccctttttgc ctgtgtcaag 120

atg aat aca tgg agt ctc cac aaa ccg gag gac tac ccc cag act gca 168

Met Asn Thr Trp Ser Leu His Lys Pro Glu Asp Tyr Pro Gln Thr Ala

1 5 10 15

gta agt gtt gtc atg gag act aca gct ttc gag gct acc aag gcc ccc 216

Val Ser Val Val Met Glu Thr Thr Ala Phe Glu Ala Thr Lys Ala Pro

20 25 30

ctg ggc cac cgg gcc ctc ctg gca ttc cag gaa acc atg gaa aca atg 264

Leu Gly His Arg Ala Leu Leu Ala Phe Gln Glu Thr Met Glu Thr Met

35 40 45

gca aca atg gag cca ctg gtc atg aag gag cca aag att gca ttc atg 312

Ala Thr Met Glu Pro Leu Val Met Lys Glu Pro Lys Ile Ala Phe Met

50 55 60

gct tct ctg gca acc cac ttc agc aat cag aac agt ggg att atc ttc 360

Ala Ser Leu Ala Thr His Phe Ser Asn Gln Asn Ser Gly Ile Ile Phe

65 70 75 80

agc agt gtt gag acc aac att gga aac ttc ttt gat gtc atg act ggt 408

Ser Ser Val Glu Thr Asn Ile Gly Asn Phe Phe Asp Val Met Thr Gly

85 90 95

aga ttt ggg gcc cca gta tca ggt gtg tat ttc ttc acc ttc agc atg 456

Arg Phe Gly Ala Pro Val Ser Gly Val Tyr Phe Phe Thr Phe Ser Met

100 105 110

atg aag cat gag gat gtt gag gaa gtg tat gtg tac ctt atg cac aat 504

Met Lys His Glu Asp Val Glu Glu Val Tyr Val Tyr Leu Met His Asn

115 120 125

ggc aac aca gtc ttc agc atg tac agc tat gaa atg aag ggc aaa tca 552

Gly Asn Thr Val Phe Ser Met Tyr Ser Tyr Glu Met Lys Gly Lys Ser

130 135 140

gat aca tcc agc aat cat gct gtg ctg aag cta gcc aaa ggg gat gag 600

Asp Thr Ser Ser Asn His Ala Val Leu Lys Leu Ala Lys Gly Asp Glu

145 150 155 160

gtt tgg ctg cga atg ggc aat ggc gct ctc cat ggg gac cac caa cgc 648

Val Trp Leu Arg Met Gly Asn Gly Ala Leu His Gly Asp His Gln Arg

165 170 175

ttc tcc acc ttt gca gga ttc ctg ctc ttt gaa act aag taa 690

Phe Ser Thr Phe Ala Gly Phe Leu Leu Phe Glu Thr Lys

180 185

atatatgact agaatagctc cactttgggg aagacttgta gctgagctga tttgttacga 750

tctgaggaac attaaagttg agggttttac attgctgtat tcaaaaaatt attggttgca 810

atgttgttca cgctacaggt acaccaataa tgttggacaa ttcaggggct cagaagaatc 870

aaccacaaaa tagtcttctc agatgacctt gactaatata ctcagcatct ttatcactct 930

ttccttggca cctaaaagat aattctcctc tgacgcaggt tggaaatatt tttttctatc 990

acagaagtca tttgcaaaga attttgacta ctctgctttt aatttaatac cagttttcag 1050

gaacccctga agttttaagt tcattattct ttataacatt tgagagaatc ggatgtagtg 1110

atatgacagg gctggggcaa gaacaggggc actagctgcc ttattagcta atttagtgcc 1170

ctccgtgttc agcttagcct ttgacccttt ccttttgatc cacaaaatac attaaaactc 1230

tgaattcaca tacaatgcta ttttaaagtc aatagatttt agctataaag tgcttgacca 1290

gtaatgtggt tgtaattttg tgtatgttcc cccacatcgc ccccaacttc ggatgtgggg 1350

tcaggaggtt gaggttcact attaacaaat gtcataaata tctcatagag gtacagtgcc 1410

aatagatatt caaatgttgc atgttgacca gagggatttt atatctgaag aacatacact 1470

attaataaat accttagaga aagattttga cctggcttta gataaaactg tggcaagaaa 1530

aatgtaatga gcaatatatg gaaataaaca cacctttgaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1590

aaaaaaaa 1598

<210>18

<211>189

<212>PRT

<213>人

<400>18

Met Asn Thr Trp Ser Leu His Lys Pro Glu Asp Tyr Pro Gln Thr Ala

1 5 10 15

Val Ser Val Val Met Glu Thr Thr Ala Phe Glu Ala Thr Lys Ala Pro

20 25 30

Leu Gly His Arg Ala Leu Leu Ala Phe Gln Glu Thr Met Glu Thr Met

35 40 45

Ala Thr Met Glu Pro Leu Val Met Lys Glu Pro Lys Ile Ala Phe Met

50 55 60

Ala Ser Leu Ala Thr His Phe Ser Asn Gln Asn Ser Gly Ile Ile Phe

65 70 75 80

Ser Ser Val Glu Thr Asn Ile Gly Asn Phe Phe Asp Val Met Thr Gly

85 90 95

Arg Phe Gly Ala Pro Val Ser Gly Val Tyr Phe Phe Thr Phe Ser Met

100 105 110

Met Lys His Glu Asp Val Glu Glu Val Tyr Val Tyr Leu Met His Asn

115 120 125

Gly Asn Thr Val Phe Ser Met Tyr Ser Tyr Glu Met Lys Gly Lys Ser

130 135 140

Asp Thr Ser Ser Asn His Ala Val Leu Lys Leu Ala Lys Gly Asp Glu

145 150 155 160

Val Trp Leu Arg Met Gly Asn Gly Ala Leu His Gly Asp His Gln Arg

165 170 175

Phe Ser Thr Phe Ala Gly Phe Leu Leu Phe Glu Thr Lys

180 185

Claims

1.一种分离的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸含有编码具有促进CRE活化功能的多肽的核苷酸序列，该核苷酸序列选自：

(a)与编码含有SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18的氨基酸序列的多肽的多核苷酸有至少70％相似性的多核苷酸；

(b)编码含有与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18的氨基酸序列有至少70％相似性的氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸互补的多核苷酸。

2.如权利要求1所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码的多肽具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ IDNO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18。

3.如权利要求1所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸的序列与选自下组的核苷酸序列有至少85％相似性：

(a)SECQID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ IDNO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17的编码区序列或全长序列；

(b)在遗传密码简并范围内相应于(a)中提到的序列的至少一个序列；

(c)与(a)或(b)中提到的序列互补的序列杂交的至少一个序列。

4.如权利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸的序列选自SEQ ID NO：1、SEQ IDNO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ IDNO：15、SEQ ID NO：17的编码区序列或全长序列。

5.权利要求1所述的多核苷酸编码的多肽，其特征在于，所述多肽包含选自下组中的氨基酸序列的多肽：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18；或与以上任一氨基酸序列具有至少90％相似性的多肽；或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。

6.权利要求5所述的多肽，其特征在于，所述多肽具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18。

7.一种载体，其特征在于，所述载体含有权利要求1所述的多核苷酸。

8.一种遗传工程宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞选自：

(a)用权利要求7所述的载体转化或转导的宿主细胞；

(b)用权利要求1所述的多核苷酸转化或转导的宿主细胞。

9.一种抗体，其特征在于，所述抗体是能与权利要求5所述的多肽特异性结合的抗体。

10.一种核酸片段，其特征在于，所述核酸片段含有权利要求1所述的任一多核苷酸中8-100个连续的核苷酸。

11.一种分离的多核苷酸在促进CRE活化中的应用，其特征在于所述多核苷酸选自权利要求1所述的多核苷酸，该多核苷酸在宿主细胞中外源表达会促进CRE的活化。

12.权利要求1所述的多核苷酸或权利要求5所述的多肽在制备预防和/或治疗神经性退行疾病或肿瘤的药物中的用途。

13.权利要求14所述的用途，其中所述疾病选自亨廷顿病、阿尔茨海默氏病、肾上腺皮质瘤、黑色素瘤。

14.含有权利要求5所述的多肽和药学上可接受的载体的药物组合物。

15.一种神经性退行疾病或肿瘤的体外检测方法，其特征在于，利用权利要求9所述的抗体或权力要求10所述的核酸片段来检测宿主样品中的多肽的存在或水平。