CN1368510A - 具有抑制癌细胞生长功能的新的人蛋白及其编码序列 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一类新的具有抑癌功能的人蛋白,编码此多肽的多核苷酸和经重组技术产生该多肽的方法。本发明还公开了此多肽用于治疗多种疾病如癌症等的方法。本发明还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明还公开了编码这类新的具有抑癌功能的人蛋白的多核苷酸的用途。
Description
本发明属于生物技术领域,具体地说,本发明涉及新的编码具有抑癌功能的人蛋白的多核苷酸和此多核苷酸编码的多肽。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的用途和制备。
人基因组学研究目前是国际上的热点,除人染色体DNA大规模测序,表达序列测序(EST)的方法外,还缺少从功能开始的筛选具有功能基因的高通量的方法。
癌症是危害人类健康的主要疾病之一。为了有效地治疗和预防肿瘤,目前人们已越来越关注肿瘤的基因治疗。因此,本领域迫切需要开发研究具有抑癌功能的人蛋白及其激动剂/抑制剂。
本发明的目的是提供一类新的具有抑癌功能的人蛋白多肽以及其片段、类似物和衍生物。
本发明的另一目的是提供编码这些多肽的多核苷酸。
本发明的另一目的是提供生产这些多肽的方法以及该多肽和编码序列的用途。
在本发明的第一方面,提供新颖的分离出的具有抑癌功能的蛋白多肽,它包含具有选自下组的氨基酸序列的多肽:SEQ ID NO:2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35;或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。
较佳地,该多肽是具有选自下组的氨基酸序列的多肽:SEQ ID NO:2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35。
在本发明的第二方面,提供了一种分离的多核苷酸,它包含一核苷酸序列,该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少85%相同性:(a)编码上述的具有抑癌功能的蛋白多肽的多核苷酸;(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。较佳地,该多核苷酸编码的多肽具有选自下组的氨基酸序列:SEQ ID NO:2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35。更佳地,该多核苷酸的序列选自下组:SEQ ID NO:3、6、9、12、15、18、21、24、27、30、33、36的编码区序列或全长序列。
在本发明的第三方面,提供了含有上述多核苷酸的载体,以及被该载体转化或转导的宿主细胞或者被上述多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞。
在本发明的第四方面,提供了制备具有抑癌功能的蛋白活性的多肽的制备方法,该方法包含:(a)在适合表达具有抑癌功能的蛋白的条件下,培养上述被转化或转导的宿主细胞;(b)从培养物中分离出具有抑癌功能的蛋白活性的多肽。
在本发明的第五方面,提供了与上述的具有抑癌功能的蛋白多肽特异性结合的抗体。还提供了可用于检测的核酸分子,它含有上述的多核苷酸中连续10个核苷酸至全长核苷酸,较佳地它含有连续的约10-800个核苷酸。
在本发明的第六方面,提供了一种药物组合物,它含有安全有效量的本发明的具有抑癌功能的蛋白多肽以及药学上可接受的载体。这些药物组合物可治疗癌症以及细胞异常增殖等病症。
本发明的其它方面由于本文的公开内容,对本领域的技术人员而言是显而易见的。
本发明采用大规模cDNA克隆转染癌细胞,在获得具有抑癌作用的基础上,经测序证明为新的基因,进一步得到全长cDNA克隆。DNA转染试验证明,本发明的具有抑癌功能的蛋白对癌细胞(肝癌细胞)具有抑制克隆形成的作用,其抑制率在50%或50%以上。
如本文所用,“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质,原始环境即是天然环境)。如活体细胞内的天然状态下的多聚核苷酸和多肽是没有分离纯化的,但同样的多聚核苷酸或多肽如从天然状态中同存在的其他物质中分开,则为分离纯化的。
如本文所用,“分离的具有抑癌功能的蛋白或多肽”是指具有抑癌功能的蛋白多肽基本上不含天然与其相关的其它蛋白、脂类、糖类或其它物质。本领域的技术人员能用标准的蛋白质纯化技术纯化具有抑癌功能的蛋白。基本上纯的多肽在非还原聚丙烯酰胺凝胶上能产生单一的主带。
本发明的多肽可以是重组多肽、天然多肽、合成多肽,优选重组多肽。本发明的多肽可以是天然纯化的产物,或是化学合成的产物,或使用重组技术从原核或真核宿主(例如,细菌、酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞)中产生。根据重组生产方案所用的宿主,本发明的多肽可以是糖基化的,或可以是非糖基化的。本发明的多肽还可包括或不包括起始的甲硫氨酸残基。
本发明还包括具有抑癌功能的人蛋白的片段、衍生物和类似物。如本文所用,术语“片段”、“衍生物”和“类似物”是指基本上保持本发明的天然具有抑癌功能的人蛋白相同的生物学功能或活性的多肽。本发明的多肽片段、衍生物或类似物可以是(i)有一个或多个保守或非保守性氨基酸残基(优选保守性氨基酸残基)被取代的多肽,而这样的取代的氨基酸残基可以是也可以不是由遗传密码编码的,或(ii)在一个或多个氨基酸残基中具有取代基团的多肽,或(iii)成熟多肽与另一个化合物(比如延长多肽半衰期的化合物,例如聚乙二醇)融合所形成的多肽,或(iv)附加的氨基酸序列融合到此多肽序列而形成的多肽(如前导序列或分泌序列或用来纯化此多肽的序列或蛋白原序列)。根据本文的教导,这些片段、衍生物和类似物属于本领域熟练技术人员公知的范围。
本发明的多核苷酸可以是DNA形式或RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因组DNA或人工合成的DNA。DNA可以是单链的或是双链的。DNA可以是编码链或非编码链。以PP579蛋白(在本申请中,蛋白质的命名采用其克隆编号)为例,编码成熟多肽的编码区序列可以与SEQ ID NO:3所示的编码区序列相同或者是简并的变异体。如本文所用,“简并的变异体”在本发明中是指编码具有SEQ ID NO:2的蛋白质,但与SEQ ID NO:3所示的编码区序列有差别的核酸序列。再以PP730蛋白(在本申请中,蛋白质的命名采用其克隆编号)为例,编码成熟多肽的编码区序列可以与SEQ ID NO:6所示的编码区序列相同或者是简并的变异体。如本文所用,“简并的变异体”在本发明中是指编码具有SEQ ID NO:5的蛋白质,但与SEQ ID NO:6所示的编码区序列有差别的核酸序列。对于其他具有抑癌功能的蛋白,可依此类推。
编码成熟多肽的多核苷酸包括:只编码成熟多肽的编码序列;成熟多肽的编码序列和各种附加编码序列;成熟多肽的编码序列(和任选的附加编码序列)以及非编码序列。
术语“编码多肽的多核苷酸”可以是包括编码此多肽的多核苷酸,也可以是还包括附加编码和/或非编码序列的多核苷酸。
本发明还涉及上述多核苷酸的变异体,其编码与本发明有相同的氨基酸序列的多肽或多肽的片段、类似物和衍生物。此多核苷酸的变异体可以是天然发生的等位变异体或非天然发生的变异体。这些核苷酸变异体包括取代变异体、缺失变异体和插入变异体。如本领域所知的,等位变异体是一个多核苷酸的替换形式,它可能是一个或多个核苷酸的取代、缺失或插入,但不会从实质上改变其编码的多肽的功能。
本发明还涉及与上述的序列杂交且两个序列之间具有至少50%,较佳地至少70%,更佳地至少80%相同性的多核苷酸。本发明特别涉及在严格条件下与本发明所述多核苷酸可杂交的多核苷酸。在本发明中,“严格条件”是指:(1)在较低离子强度和较高温度下的杂交和洗脱,如0.2×SSC,0.1%SDS,60℃;或(2)杂交时加有变性剂,如50%(v/v)甲酰胺,0.1%小牛血清/0.1%Ficoll,42℃等;或(3)仅在两条序列之间的相同性至少在95%以上,更好是97%以上时才发生杂交。并且,可杂交的多核苷酸编码的多肽与SEQ ID NO:2所示的成熟多肽有相同的生物学功能(以PP579蛋白为例)和活性。
本发明还涉及与上述的序列杂交的核酸片段。如本文所用,“核酸片段”的长度至少含15个核苷酸,较好是至少30个核苷酸,更好是至少50个核苷酸,最好是至少100个核苷酸以上。核酸片段可用于核酸的扩增技术(如PCR)以确定和/或分离编码具有抑癌功能的蛋白的多聚核苷酸。
本发明中的多肽和多核苷酸优选以分离的形式提供,更佳地被纯化至均质。
本发明的DNA序列能用几种方法获得。例如,用本领域熟知的杂交技术分离DNA。这些技术包括但不局限于:1)用探针与基因组或cDNA文库杂交以检出同源性核苷酸序列,和2)表达文库的抗体筛选以检出具有共同结构特征的克隆的DNA片段。
编码具有抑癌功能的蛋白的特异DNA片段序列产生也能用下列方法获得:1)从基因组DNA分离双链DNA序列;2)化学合成DNA序列以获得所需多肽的双链DNA。
上述提到的方法中,分离基因组DNA最不常用。当需要的多肽产物的整个氨基酸序列已知时,DNA序列的直接化学合成是经常选用的方法。如果所需的氨基酸的整个序列不清楚时,DNA序列的直接化学合成是不可能的,选用的方法是cDNA序列的分离。分离感兴趣的cDNA的标准方法是从高表达该基因的供体细胞分离mRNA并进行逆转录,形成质粒或噬菌体cDNA文库。提取mRNA的方法已有多种成熟的技术,试剂盒也可从商业途径获得(Qiagene)。而构建cDNA文库也是通常的方法(Sambrook,et al.,Molecular Cloning,A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory.New York,1989)。还可得到商业供应的cDNA文库,如Clontech公司的不同cDNA文库。当结合使用聚合酶反应技术时,即使极少的表达产物也能克隆。
可用常规方法从这些cDNA文库中筛选本发明的基因。这些方法包括(但不限于):(1)DNA-DNA或DNA-RNA杂交;(2)标志基因的功能出现或丧失;(3)测定具有抑癌功能的蛋白的转录本的水平;(4)通过免疫学技术或测定生物学活性,来检测基因表达的蛋白产物。上述方法可单用,也可多种方法联合应用。
在第(1)种方法中,杂交所用的探针是与本发明的多核苷酸的任何一部分同源,其长度至少15个核苷酸,较好是至少30个核苷酸,更好是至少50个核苷酸,最好是至少100个核苷酸。此外,探针的长度通常在2kb之内,较佳地为lkb之内。此处所用的探针通常是在本发明的基因DNA序列信息的基础上化学合成的DNA序列。本发明的基因本身或者片段当然可以用作探针。DNA探针的标记可用放射性同位素,荧光素或酶(如碱性磷酸酶)等。
在第(4)种方法中,检测具有抑癌功能的蛋白基因表达的蛋白产物可用免疫学技术如Western印迹法,放射免疫沉淀法,酶联免疫吸附法(ELISA)等。
应用PCR技术扩增DNA/RNA的方法(Saiki,et al.Science 1985;230:1350-1354)被优选用于获得本发明的基因。特别是很难从文库中得到全长的cDNA时,可优选使用RACE法(RACE-cDNA末端快速扩增法),用于PCR的引物可根据本文所公开的本发明的序列信息适当地选择,并可用常规方法合成。可用常规方法如通过凝胶电泳分离和纯化扩增的DNA/RNA片段。
如上所述得到的本发明的基因,或者各种DNA片段等的核苷酸序列的测定可用常规方法如双脱氧链终止法(Sanger et al.PNAS,1977,74:5463-5467)。这类核苷酸序列测定也可用商业测序试剂盒等。为了获得全长的cDNA序列,测序需反复进行。有时需要测定多个克隆的cDNA序列,才能拼接成全长的cDNA序列。
本发明也涉及包含本发明的多核苷酸的载体,以及用本发明的载体或具有抑癌功能的蛋白编码序列经基因工程产生的宿主细胞,以及经重组技术产生本发明所述多肽的方法。
通过常规的重组DNA技术(Science,1984;224:1431),可利用本发明的多聚核苷酸序列可用来表达或生产重组的具有抑癌功能的蛋白多肽。一般来说有以下步骤:
(1).用本发明的编码具有抑癌功能的人蛋白的多核苷酸(或变异体),或用含有该多核苷酸的重组表达载体转化或转导合适的宿主细胞;
(2).在合适的培养基中培养的宿主细胞;
(3).从培养基或细胞中分离、纯化蛋白质。
本发明中,具有抑癌功能的人蛋白多核苷酸序列可插入到重组表达载体中。术语“重组表达载体”指本领域熟知的细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒如腺病毒、逆转录病毒或其他载体。在本发明中适用的载体包括但不限于:在细菌中表达的基于T7的表达载体(Rosenberg,et al.Gene,1987,56:125);在哺乳动物细胞中表达的pMSXND表达载体(Lee and Nathans,J Bio Chem.263:3521,1988)和在昆虫细胞中表达的来源于杆状病毒的载体。总之,只要能在宿主体内复制和稳定,任何质粒和载体都可以用。表达载体的一个重要特征是通常含有复制起点、启动子、标记基因和翻译控制元件。
本领域的技术人员熟知的方法能用于构建含具有抑癌功能的人蛋白编码DNA序列和合适的转录/翻译控制信号的表达载体。这些方法包括体外重组DNA技术、DNA合成技术、体内重组技术等(Sambroook,et al.)。所述的DNA序列可有效连接到表达载体中的适当启动子上,以指导mRNA合成。这些启动子的代表性例子有:大肠杆菌的lac或trp启动子;λ噬菌体PL启动子;真核启动子包括CMV立即早期启动子、早期和晚期SV40启动子、反转录病毒的LTRs和其他一些已知的可控制基因在原核或真核细胞或其病毒中表达的启动子。表达载体还包括翻译起始用的核糖体结合位点和转录终止子。
此外,表达载体优选地包含一个或多个选择性标记基因,以提供用于选择转化的宿主细胞的表型性状,如真核细胞培养用的二氢叶酸还原酶、新霉素抗性以及绿色荧光蛋白(GFP),或用于大肠杆菌的四环素或氨苄青霉素抗性。
包含上述的适当DNA序列以及适当启动子或者控制序列的载体,可以用于转化适当的宿主细胞,以使其能够表达蛋白质。
宿主细胞可以是原核细胞,如细菌细胞;或是低等真核细胞,如酵母细胞;或是高等真核细胞,如哺乳动物细胞。代表性例子有:大肠杆菌,链霉菌属;鼠伤寒沙门氏菌的细菌细胞;真菌细胞如酵母;植物细胞;果蝇S2或Sf9的昆虫细胞;CHO、COS或Bowes黑素瘤细胞的动物细胞等。
本发明的多核苷酸在高等真核细胞中表达时,如果在载体中插入增强子序列时将会使转录得到增强。增强子是DNA的顺式作用因子,通常大约有10到300个碱基对,作用于启动子以增强基因的转录。可举的例子包括在复制起始点晚期一侧的100到270个碱基对的SV40增强子、在复制起始点晚期一侧的多瘤增强子以及腺病毒增强子等。
本领域一般技术人员都清楚如何选择适当的载体、启动子、增强子和宿主细胞。
用重组DNA转化宿主细胞可用本领域技术人员熟知的常规技术进行。当宿主为原核生物如大肠杆菌时,能吸收DNA的感受态细胞可在指数生长期后收获,用CaCl2法处理,所用的步骤在本领域众所周知。可供选择的是用MgCl2。如果需要,转化也可用电穿孔的方法进行。当宿主是真核生物,可选用如下的DNA转染方法:磷酸钙共沉淀法,常规机械方法如显微注射、电穿孔、脂质体包装等。
获得的转化子可以用常规方法培养,表达本发明的基因所编码的多肽。根据所用的宿主细胞,培养中所用的培养基可选自各种常规培养基。在适于宿主细胞生长的条件下进行培养。当宿主细胞生长到适当的细胞密度后,用合适的方法(如温度转换或化学诱导)诱导选择的启动子,将细胞再培养一段时间。
在上面的方法中的重组多肽可包被于细胞内、细胞外或在细胞膜上表达或分泌到细胞外。如果需要,可利用其物理的、化学的和其它特性通过各种分离方法分离和纯化重组的蛋白。这些方法是本领域技术人员所熟知的。这些方法的例子包括但并不限于:常规的复性处理、用蛋白沉淀剂处理(盐析方法)、离心、渗透破菌、超处理、超离心、分子筛层析(凝胶过滤)、吸附层析、离子交换层析、高效液相层析(HPLC)和其它各种液相层析技术及这些方法的结合。
重组的具有抑癌功能的人蛋白或多肽有多方面的用途。这些用途包括(但不限于):直接做为药物治疗具有抑癌功能的蛋白功能低下或丧失所致的疾病,和用于筛选促进或对抗具有抑癌功能的蛋白功能的抗体、多肽或其它配体。例如,抗体可用于激活或抑制具有抑癌功能的人蛋白的功能。用表达的重组具有抑癌功能的人蛋白筛选多肽库可用于寻找有治疗价值的能抑制或刺激具有抑癌功能的人蛋白功能的多肽分子。
本发明也提供了筛选药物以鉴定提高(激动剂)或阻遏(拮抗剂)具有抑癌功能的人蛋白的药剂的方法。激动剂提高具有抑癌功能的人蛋白刺激细胞增殖等生物功能,而拮抗剂阻止和治疗与细胞过度增殖有关的紊乱如各种癌症。例如,能在药物的存在下,将哺乳动物细胞或表达具有抑癌功能的人蛋白的膜制剂与标记的具有抑癌功能的人蛋白一起培养。然后测定药物提高或阻遏此相互作用的能力。
具有抑癌功能的人蛋白的拮抗剂包括筛选出的抗体、化合物、受体缺失物和类似物等。具有抑癌功能的人蛋白的拮抗剂可以与具有抑癌功能的人蛋白结合并消除其功能,或是抑制具有抑癌功能的人蛋白的产生,或是与多肽的活性位点结合使多肽不能发挥生物学功能。具有抑癌功能的人蛋白的拮抗剂可用于治疗用途。
在筛选作为拮抗剂的化合物时,可以将本发明蛋白加入生物分析测定中,通过测定化合物影响具有抑癌功能的蛋白和其受体之间的相互作用来确定化合物是否是拮抗剂。用上述筛选化合物的同样方法,可以筛选出起拮抗剂作用的受体缺失物和类似物。
本发明的多肽可直接用于疾病治疗,例如,各种恶性肿瘤、和细胞异常增殖等。
本发明的多肽,及其片段、衍生物、类似物或它们的细胞可以用来作为抗原以生产抗体。这些抗体可以是多克隆或单克隆抗体。多克隆抗体可以通过将此多肽直接注射动物的方法得到。制备单克隆抗体的技术包括杂交瘤技术,三瘤技术,人B-细胞杂交瘤技术,EBV-杂交瘤技术等。
可以将本发明的多肽和拮抗剂与合适的药物载体组合后使用。这些载体可以是水、葡萄糖、乙醇、盐类、缓冲液、甘油以及它们的组合。组合物包含安全有效量的多肽或拮抗剂以及不影响药物效果的载体和赋形剂。这些组合物可以作为药物用于疾病治疗。
本发明还提供含有一种或多种容器的药盒或试剂盒,容器中装有一种或多种本发明的药用组合物成分。与这些容器一起,可以有由制造、使用或销售药品或生物制品的政府管理机构所给出的指示性提示,该提示反映出生产、使用或销售的政府管理机构许可其在人体上施用。此外,本发明的多肽可以与其它的治疗化合物结合使用。
药物组合物可以以方便的方式给药,如通过局部、静脉内、腹膜内、肌内、皮下、鼻内或皮内的给药途径。具有抑癌功能的蛋白以有效地治疗和/或预防具体的适应症的量来给药。施用于患者的具有抑癌功能的蛋白的量和剂量范围将取决于许多因素,如给药方式、待治疗者的健康条件和诊断医生的判断。
具有抑癌功能的人蛋白的多聚核苷酸也可用于多种治疗目的。基因治疗技术可用于治疗由于具有抑癌功能的蛋白的无表达或异常/无活性的具有抑癌功能的蛋白的表达所致的细胞增殖、发育或代谢异常。重组的基因治疗载体可用于治疗具有抑癌功能的蛋白表达或活性异常所致的疾病。来源于病毒的表达载体如逆转录病毒、腺病毒、腺病毒相关病毒、单纯疱疹病毒、细小病毒等可用于将具有抑癌功能的蛋白基因转移至细胞内。构建携带具有抑癌功能的蛋白基因的重组病毒载体的方法可见于已有文献(Sambrook,et al.)。另外重组具有抑癌功能的人蛋白基因可包装到脂质体中转移至细胞内。
抑制具有抑癌功能的人蛋白mRNA的寡聚核苷酸(包括反义RNA和DNA)以及核酶也在本发明的范围之内。核酶是一种能特异性分解特定RNA的酶样RNA分子,其作用机制是核酶分子与互补的靶RNA特异性杂交后进行核酸内切作用。反义的RNA和DNA及核酶可用已有的任何RNA或DNA合成技术获得,如固相磷酸酰胺化学合成法合成寡核苷酸的技术已广泛应用。反义RNA分子可通过编码该RNA的DNA序列在体外或体内转录获得。这种DNA序列已整合到载体的RNA聚合酶启动子的下游。为了增加核酸分子的稳定性,可用多种方法对其进行修饰,如增加两侧的序列长度,核糖核苷之间的连接应用磷酸硫酯键或肽键而非磷酸二酯键。
多聚核苷酸导入组织或细胞内的方法包括:将多聚核苷酸直接注入到体内组织中;或在体外通过载体(如病毒、噬菌体或质粒等)先将多聚核苷酸导入细胞中,再将细胞移植到体内等。
本发明的多肽还可用作肽谱分析,例如,多肽可用物理的、化学或酶进行特异性切割,并进行一维或二维或三维的凝胶电泳分析。
本发明还提供了针对具有抑癌功能的人蛋白抗原决定簇的抗体。这些抗体包括(但不限于):多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、单链抗体、Fab片段和Fab表达文库产生的片段。这些抗体可用常规方法制备。抗具有抑癌功能的人蛋白的抗体可用于免疫组织化学技术中,检测活检标本中的具有抑癌功能的人蛋白。
与具有抑癌功能的人蛋白结合的单克隆抗体也可用放射性同位素标记,注入体内可跟踪其位置和分布。本发明中的抗体可用于治疗或预防与具有抑癌功能的人蛋白相关的疾病。给予适当剂量的抗体可以刺激或阻断具有抑癌功能的人蛋白的产生或活性。
抗体也可用于设计针对体内某一特殊部位的免疫毒素。如具有抑癌功能的人蛋白高亲和性的单克隆抗体可与细菌或植物毒素(如白喉毒素,蓖麻蛋白,红豆碱等)共价结合。
多克隆抗体的生产可用具有抑癌功能的人蛋白或多肽免疫动物,如家兔,小鼠,大鼠等。多种佐剂可用于增强免疫反应,包括但不限于弗氏佐剂等。
具有抑癌功能的人蛋白单克隆抗体可用杂交瘤技术生产(Kohler and Milstein.Nature,1975,256:495-497)。将人恒定区和非人源的可变区结合的嵌合抗体可用已有的技术生产(Morrison et al,PNAS,1985,81:6851)。而已有的生产单链抗体的技术(U.S.PatNo.4946778)也可用于生产抗具有抑癌功能的人蛋白的单链抗体。
能与本发明蛋白结合的多肽分子可通过筛选由各种可能组合的氨基酸结合于固相物组成的随机多肽库而获得。筛选时,必须对具有抑癌功能的人蛋白分子进行标记。
本发明还涉及定量和定位检测具有抑癌功能的人蛋白水平的诊断试验方法。这些试验是本领域所熟知的,且包括FISH测定和放射免疫测定。试验中所检测的具有抑癌功能的人蛋白水平,可以用作解释具有抑癌功能的人蛋白在各种疾病中的重要性和用于诊断具有抑癌功能的蛋白起作用的疾病。
具有抑癌功能的蛋白的多聚核苷酸可用于具有抑癌功能的蛋白相关疾病的诊断和治疗。在诊断方面,具有抑癌功能的蛋白的多聚核苷酸可用于检测具有抑癌功能的蛋白的表达与否或在疾病状态下具有抑癌功能的蛋白的异常表达。如具有抑癌功能的蛋白DNA序列可用于对活检标本的杂交以判断具有抑癌功能的蛋白的表达异常。杂交技术包括Southern印迹法,Northern印迹法、原位杂交等。这些技术方法都是公开的成熟技术,相关的试剂盒都可从商业途径得到。本发明的多核苷酸的一部分或全部可作为探针固定在微阵列(Microarray)或DNA芯片(又称为“基因芯片”)上,用于分析组织中基因的差异表达分析和基因诊断。用具有抑癌功能的蛋白特异的引物进行RNA-聚合酶链反应(RT-PCR)体外扩增也可检测具有抑癌功能的蛋白的转录产物。
检测具有抑癌功能的蛋白基因的突变也可用于诊断具有抑癌功能的蛋白相关的疾病。具有抑癌功能的蛋白突变的形式包括与正常野生型具有抑癌功能的蛋白DNA序列相比的点突变、易位、缺失、重组和其它任何异常等。可用已有的技术如Southern印迹法、DNA序列分析、PCR和原位杂交检测突变。另外,突变有可能影响蛋白的表达,因此用Northern印迹法、Western印迹法可间接判断基因有无突变。
本发明的序列对染色体鉴定也是有价值的。这些序列会特异性地针对某条人染色体具体位置且并可以与其杂交。目前,需要鉴定染色体上的各基因的具体位点。然而现在只有很少的基于实际序列数据(重复多态性)的染色体标记物可用于标记染色体位置。为了将这些序列与疾病相关基因相关联。第一步就是将本发明DNA序列定位于染色体上。
简而言之,根据cDNA制备PCR引物(优选15-35bp),可以将序列定位于染色体上。然后,将这些引物用于PCR筛选含各条人染色体的体细胞杂合细胞。只有那些含有相应于引物的人基因的杂合细胞会产生扩增的片段。
体细胞杂合细胞的PCR定位法,是将DNA定位到具体染色体的快捷方法。使用本发明的的寡核苷酸引物,通过类似方法,可利用一组来自特定染色体的片段或大量基因组克隆而实现亚定位。可用于染色体定位的其它类似策略包括原位杂交、用标记的流式分选的染色体预筛选和杂交预选,从而构建染色体特异的cDNA库。
将cDNA克隆与中期染色体进行荧光原位杂交(FISH),可以在一个步骤中精确地进行染色体定位。此技术的综述,参见Verma等,Human Chromosomes:a Manual of BasicTechniques,Pergamon Press,New York(1988)。
一旦序列被定位到准确的染色体位置,此序列在染色体上的物理位置就可以与基因图数据相关联。这些数据可见于例如,V.Mckusick,Mendelian Inheritance in Man(可通过与Johns Hopkins University Welch Medical Library联机获得)。然后可通过连锁分析,确定基因与业已定位到染色体区域上的疾病之间的关系。
接着,需要测定患病和未患病个体间的cDNA或基因组序列差异。如果在一些或所有的患病个体中观察到某突变,而该突变在任何正常个体中未观察到,则该突变可能是疾病的病因。比较患病和未患病个体,通常涉及首先寻找染色体中结构的变化,如从染色体水平可见的或用基于cDNA序列的PCR可检测的缺失或易位。
本发明的具有抑癌功能的蛋白核苷酸全长序列或其片段通常可以用PCR扩增法、重组法或人工合成的方法获得。对于PCR扩增法,可根据本发明所公开的有关核苷酸序列,尤其是开放阅读框序列来设计引物,并用市售的cDNA库或按本领域技术人员已知的常规方法所制备的cDNA库作为模板,扩增而得有关序列。当序列较长时,常常需要进行两次或多次PCR扩增,然后再将各次扩增出的片段按正确次序拼接在一起。
一旦获得了有关的序列,就可以用重组法来大批量地获得有关序列。这通常是将其克隆入载体,再转入细胞,然后通过常规方法从增殖后的宿主细胞中分离得到有关序列。
此外,还可用人工合成的方法来合成有关序列,尤其是片段长度较短时。通常,通过先合成多个小片段,然后再进行连接可获得序列很长的片段。
目前,已经可以完全通过化学合成来编码本发明蛋白(或其片段,或其衍生物)的DNA序列。然后可将该DNA序列引入本领域中的各种DNA分子(如载体)和细胞中。此外,还可通过化学合成将突变引入本发明蛋白序列中。
此外,由于本发明的具有抑癌功能的蛋白具有源自人的天然氨基酸序列,因此,与来源于其他物种的同族蛋白相比,预计在施用于人时将具有更高的活性和/或更低的副作用(例如在人体内的免疫原性更低或没有)。
下面结合具体实施例,进一步阐述本发明。应理解,这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件如Sambrook等人,分子克隆:实验室手册(New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989)中所述的条件,或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1:cDNA基因的获得及对癌细胞克隆形成的抑制作用
PP579、PP730、PP791、PP1494、PP2386、PP6170、PP7684、PP7704、PP8407、PP8961、PP8985和PP9003是通过用常规方法构建人胎盘cDNA文库获得的。取3、6、10月龄的胎盘组织,用Trizol试剂(GIBCO BRL公司)按厂方说明书提取总RNA,用mRNA提纯试剂盒(Pharmacia公司)提取mRNA。用pCMV-script TMXRcDNA文库构建试剂盒(Stratagene公司)构建上述mRNA的cDNA文库。其中反转录酶改用MMLV-RT-Superscript II(GIBCO BRL),反转录反应在42℃进行。转化XL 10-Gold感受细胞,获得了1×106cfu/μg cDNA滴度的cDNA文库。第一轮随机挑取cDNA克隆,其后以高丰度cDNA克隆和已证明有抑癌细胞生长功能的cDNA克隆为探针,杂交筛选cDNA文库,挑取弱阳性及阴性克隆。用Qiagen 96孔板质粒抽提试剂盒,按厂家说明书进行质粒DNA的提取。质粒DNA和空载体同时转染肝癌细胞系7721。100ng DNA酒精沉淀干燥后,加6μl H2O溶解,待转染。每份DNA样品中加0.74μl脂质体及9.3μl无血清培液,混匀后,室温放置10分钟。每管中加150μl无血清培液,均分加入3孔生长于96孔板的7721细胞中,37℃放置2小时,每孔再加50μl无血清培液,37℃24小时。每孔换100μl全培液,37℃24小时,换含G418的全培液100μl,37℃24~48小时,边观察,边换G418浓度不等的培液。约2~3次后,直到镜检细胞有克隆形成,计数。发现以上克隆有抑制细胞克隆形成作用,结果如下表所示。
cDNA克隆转染细胞(7721)克隆形成情况
cDNA克隆名称 | cDNA克隆数(三个重复) | 空载体克隆数(三个重复) |
PP579PP730PP791PP1494PP2386PP6170PP7684PP7704PP8407PP8961PP8985PP9003 | 0 0 19 7 60 1 07 2 38 3 55 4 65 4 716 18 198 12 1411 9 1210 8 1117 16 18 | 37 38 4237 38 4237 38 4237 38 4223 28 2523 28 2523 28 2523 28 2523 28 2523 28 2523 28 2523 28 25 |
对cDNA克隆采用双脱氧终止法,在ABI377 DNA自动测序仪上测定其一端近500bp的核苷酸序列。分析后,确定为新基因克隆,进行另一端测序,仍未获得全长cDNA序列,设计引物,再次进行测序,直到获得全长序列(SEQ ID NO:1、4、7、10、13、16、19、22、25、28、31、34)。
实施例2:从胎盘cDNA中PCR获得全长基因:
取3、6、10月龄的胎盘组织,用Trizol试剂(GIBCO BRL公司)按厂方说明书提取总RNA,用mRNA提纯试剂盒(Pharmacia公司)提取mRNA。用MMLV-RT-SuperscriptII(GIBCO BRL),反转录酶在42℃进行反转录反应,获得胎盘cDNA。利用各个基因的转异引物(如下表所示),按97℃3′1个循环。94℃30″,60℃30″,72℃1′,35个循环,72℃10′1个循环进行PCR扩增,获得含有完整开放阅读框序列的各蛋白基因的扩增产物。扩增产物经测序验证,与实施例1测得的序列相符,随后用常规技术将扩增产物转入宿主细胞,获得重组蛋白(SEQ ID NO:2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35)。
基因特异引物
实施例3:cDNA克隆序列分析
克隆名称 | 特异引物1(5′→3′) | 特异引物2(5′→3′) |
PP579PP730PP791PP1494PP2386PP6170PP7684PP7704PP8407PP8961 | TCTGCAGTTTTCTCGTGGTGTCCCATGACTTGACTCTGGACGTGTACTGGTTCTGCCTGTCGGGCTTTTAGGACACACTCCACGTCTGTCGCGTTATGAGTACTTTGAGCTGGAGGTGCGCATCCATTCTCCACGGATTCGCGTCTGTTTCCTTCGATTCAGCTCCTGTGGAAGTTGCTCAGCTACAGGGCTCTCATCCA | GGAGGGAAAGGTGTCTTCCTTTCAGCGATGTGTTTGGTGTTTGCAGCCCAGTCACAGTAGTCATCAGTGCTTTGACTGCCGGCTGTACAGGCTGAAGGATGCGTCCTGTTCCAATGACTTATAGGAGATGGTGTCCGGTGTCAATCATTGGTTTCGGGATTGAAGCACACTATGTTCTGGAAGGTGCTCATGACGCAAAGGT |
PP8985PP9003 | GGTCGGGTGCACTGGTAGTTCTGTTACACAGGGCGGAT | CTCAGAGGCACTCTGGTGGCCTCCAGTTTGGCAACATCT |
1.PP579
A:核苷酸序列(SEQ ID NO:1)长度:24351 GGCAGTTCCC GGGTCCCTCG GCCACCGAAG CCACCCTGCC CTGGTGAAAG GGCTCCCGCA61 CCGCCCGGTG CTCCCCATCT GCCTGGCGTT GTGCGCAGAG CTGGAAAGCA TGGCTGTTAT121 AAATGAATTC TGATTTTGGG GAGCAGATGC CAACTTAGAG CCTCGTACCA ATCTCTCTGT181 CTTTAAAAGA TGAGGTGACT TGGTGATTTT CCTGGAAAAT TATAGGTGCC CAGCTAAGAC241 CTGAATGCCA TCACCCTCCC CAGGGCTCTG CAGTTTTCTC GTGGTGAACC CTTGATGGAT301 TTGTTGTTGC TTGAGAAATG GCGATGATCG AATTGGGGTT TGGAAGACAG AATTTTCATC361 CATTAAAGAG GAAGAGTTCA TTGCTGTTGA AACTCATAGC TGTTGTCTTT GCTGTGCTTC421 TATTTTGTGA ATTTTTAATC TATTACTTAG CGATCTTTCA GTGTAATTGG CCTGAAGTGA481 AAACCACAGC CTCTGATGGT GAACAGACCA CACGTGAGCC TGTGCTCAAA GCCATGTTTT541 TGGCTGACAC CCATTTGCTT GGGGAATTCC TAGGCCACTG GCTGGACAAA TTACGAAGGG601 AATGGCGGAT GGAGAGAGCG TTCCAGACAG CTCTGTGGTT GCTGCAGCCG GAAGTCGTCT661 TCATCCTGGG GGATATCTTT GATGAAGGGA AGTGGAGCAC CCCTGAGGCC TGGGCGGATG721 ATGTGGAGCG GTTTCAGAAA ATGTTCAGAC ACCCAAGTCA TGTACAGCTG AAGGTAGTTG781 CTGGAAACCA TGACATTGGC TTCCATTATG AGATGAACAC ATACAAAGTA GAACGCTTTG841 AGAAAGTGTT CAGCTCTGAA AGACTGTTTT CTTGGAAAGG CATTAACTTT GTGATGGTCA901 ACAGCGTGGC GCTGAACGGG GATGGCTGTG GCATCTGCTC TGAAACAGAA GCAGAGCTCA961 TTGAAGTTTC TCACAGACTG AACTGCTCCC GAGAGGCACG TGGCTCCAGC CGGTGTGGAC1021 CTGGGCCTCT GCTGCCCACG TCTGCCCCTG TCCTCCTGCA GCATTATCCT CTGTATCGGA1081 GAAGTGATGC TAACTGTTCT GGGGAAGACG CTGCTCCTCC AGAGGAAAGG GACATCCCAT1141 TTAAGGAGAA CTATGACGTG CTTTCACGGG AGGCATCACA AAAGCTGCTG TGGTGGCTCC1201 AGCCGCGCCT GGTTCTCAGT GGCCACACGC ACAGCGCCTG CGAGGTGCAC CACGGGGGCC1261 GAGTCCCCGA GCTCAGCGTC CCATCTTTCA GTTGGAGGAA CAGAAACAAC CCCAGTTTCA1321 TCATGGGAAC AGATGCTTAG TTGAGCATCA AGGGGCAGGA AGACACCTTT CCCTCCTTGT1381 TCCTCGCTGA CCGATGACCC TGGAACTCCA CGGTGCCTCT CTGAATCTCT GTTATGGATC1441 CCCCACTATA TTTGATGGGA ACCCAGTGAG CCAGGGGCCA GTTTTGACAG GGTAGCATCA1501 CGCCCACAGA CTACACCCTC TCCAAGTGCT ACCTCCCACG TGAGGATGTG GTTTTGATCA1561 TCTACTGTGG AGTGGTGGGC TTCCTTGTGG TCCTCACACT CACTCACTTT GGGCTTCTAG1621 CCTCACCTTT TCTTTCTGGT TTGAACTTGC TCGGAAAGCG TAAGACAAGA TGAAGAGCAG1681 GCGCCATTAT AAATATCAAA GCCCAAGAAA TGGAACTTTG GGCAGAGATC ATGTTAGAAT1741 CAAGTGGATG ATGAGACCAA TTACAGGCCG TCTCTCTGCA CAGCACAGAA ATTCTCAATC1801 ACTGAAATGA GTAACTGCAA AATAAATAGT TGATTGTACT GTTCTCATGC TATAAAAGTG1861 GACAGGTACT CTACAACAAA TCTGTTTTCT CATTTTTATC AAATATATGT ATCATCAAAG1921 GTTGCATCTG TACAGTATGT AAATGCTATT AATGTCGTCA CTCACATGCA CGACAGTCCT1981 TGTTCCCCCA GGAAGGGCCT GGTGGCCCCA GCACACACTT GGGATTATGT GTATACATAA2041 ATAAATATTG GGCTGTTTCC CTCTTCCTGT GAAGTGGTTC TCAAATTCCT ATGTACTGTA2101 AAGCTGTACC CTTAAAAGTA CAGATGTGGC CGGGCACAGT GGCTCACACC TGTAATCCCA2161 GCACTTTGGG AGGCTGAGGC GGGTGGATCA CTTGAGGTCA GGAGTTCAAG ACCAGCCTGG2221 CCAACATGGT GAAACCTCGT CTCCGCTAGA AATACAAAAA TTAGCCAAGC ATGGTAGCAA2281 GTGCCTATAA TACCAGCTGA GGCTGAGGCA GGAGAATCCC TTGAGCCCGG GAGGCGGAGG2341 TTGCAGTGAG CCAAGATCAT GCCACTGCAC TCTAGCCTGG GCAACAGAGT GAGACTCCGT2401 CTCAAAAAAA TATATTTAAA AAAAAAAAAA AAAAAB:氨基酸序列(SEQ ID NO:2)长度:3401 MAMIELGFGR QNFHPLKRKS SLLLKLIAVV FAVLLFCEFL IYYLAIFQCN WPEVKTTASD61 GEQTTREPVL KAMFLADTHL LGEFLGHWLD KLRREWRMER AFQTALWLLQ PEVVFILGDI121 FDEGKWSTPE AWADDVERFQ KMFRHPSHVQ LKVVAGNHDI GFHYEMNTYK VERFEKVFSS181 ERLFSWKGIN FVMVNSVALN GDGCGICSET EAELIEVSHR LNCSREARGS SRCGPGPLLP241 TSAPVLLQHY PLYRRSDANC SGEDAAPPEE RDIPFKENYD VLSREASQKL LWWLQPRLVL301 SGHTHSACEV HHGGRVPELS VPSFSWRNRN NPSFIMGTDAC.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO:3) 克隆号:PP579起始编码子:318 ATG 终止编码子:1338 TAG 蛋白质分子量:38984.57(注:(1)给出的是起始和终止编码子第一个核苷酸的位置,(2)分子量单位是道尔顿。)1 GG CAG TTC CCG GGT CCC TCG GCC ACC GAA GCC ACC CTG CCC TGG TGA 4748 AAG GGC TCC CGC ACC GCC CGG TGC TCC CCA TCT GCC TGG CGT TGT GCG 9596 CAG AGC TGG AAA GCA TGG CTG TTA TAA ATG AAT TCT GAT TTT GGG GAG 143144 CAG ATG CCA ACT TAG AGC CTC GTA CCA ATC TCT CTG TCT TTA AAA GAT 191192 GAG GTG ACT TGG TGA TTT TCC TGG AAA ATT ATA GGT GCC CAG CTA AGA 239240 CCT GAA TGC CAT CAC CCT CCC CAG GGC TCT GCA GTT TTC TCG TGG TGA 287288 ACC CTT GAT GGA TTT GTT GTT GCT TGA GAA ATG GCG ATG ATC GAA TTG 3351 Met Ala Met Ile Glu Leu 6336 GGG TTT GGA AGA CAG AAT TTT CAT CCA TTA AAG AGG AAG AGT TCA TTG 3837 Gly Phe Gly Arg Gln Asn Phe His Pro Leu Lys Arg Lys Ser Ser Leu 22384 CTG TTG AAA CTC ATA GCT GTT GTC TTT GCT GTG CTT CTA TTT TGT GAA 43123 Leu Leu Lys Leu Ile Ala Val Val Phe Ala Val Leu Leu Phe Cys Glu 38432 TTT TTA ATC TAT TAC TTA GCG ATC TTT CAG TGT AAT TGG CCT GAA GTG 47939 Phe Leu Ile Tyr Tyr Leu Ala Ile Phe Gln Cys Asn Trp Pro Glu Val 54480 AAA ACC ACA GCC TCT GAT GGT GAA CAG ACC ACA CGT GAG CCT GTG CTC 52755 Lys Thr Thr Ala Ser Asp Gly Glu Gln Thr Thr Arg Glu Pro Val Leu 70528 AAA GCC ATG TTT TTG GCT GAC ACC CAT TTG CTT GGG GAA TTC CTA GGC 57571 Lys Ala Met Phe Leu Ala Asp Thr His Leu Leu Gly Glu Phe Leu Gly 86576 CAC TGG CTG GAC AAA TTA CGA AGG GAA TGG CGG ATG GAG AGA GCG TTC 62387 His Trp Leu Asp Lys Leu Arg Arg Glu Trp Arg Met Glu Arg Ala Phe 102624 CAG ACA GCT CTG TGG TTG CTG CAG CCG GAA GTC GTC TTC ATC CTG GGG 671103 Gln Thr Ala Leu Trp Leu Leu Gln Pro Glu Val Val Phe Ile Leu Gly 118672 GAT ATC TTT GAT GAA GGG AAG TGG AGC ACC CCT GAG GCC TGG GCG GAT 719119 Asp Ile Phe Asp Glu Gly Lys Trp Ser Thr Pro Glu Ala Trp Ala Asp 134720 GAT GTG GAG CGG TTT CAG AAA ATG TTC AGA CAC CCA AGT CAT GTA CAG 767135 Asp Val Glu Arg Phe Gln Lys Met Phe Arg His Pro Ser His Val Gln 150768 CTG AAG GTA GTT GCT GGA AAC CAT GAC ATT GGC TTC CAT TAT GAG ATG 815151 Leu Lys Val Val Ala Gly Asn His Asp Ile Gly Phe His Tyr Glu Met 166816 AAC ACA TAC AAA GTA GAA CGC TTT GAG AAA GTG TTC AGC TCT GAA AGA 863167 Asn Thr Tyr Lys Val Glu Arg Phe Glu Lys Val Phe Ser Ser Glu Arg 182864 CTG TTT TCT TGG AAA GGC ATT AAC TTT GTG ATG GTC AAC AGC GTG GCG 911183 Leu Phe Ser Trp Lys Gly Ile Asn Phe Val Met Val Asn Ser Val Ala 198912 CTG AAC GGG GAT GGC TGT GGC ATC TGC TCT GAA ACA GAA GCA GAG CTC 959 199 Leu Asn Gly Asp Gly Cys Gly Ile Cys Ser Glu Thr Glu Ala Glu Leu 214960 ATT GAA GTT TCT CAC AGA CTG AAC TGC TCC CGA GAG GCA CGT GGC TCC 1007215 Ile Glu Val Ser His Arg Leu Asn Cys Ser Arg Glu Ala Arg Gly Ser 2301008 AGC CGG TGT GGA CCT GGG CCT CTG CTG CCC ACG TCT GCC CCT GTC CTC 105523l Ser Arg Cys Gly Pro Gly Pro Leu Leu Pro Thr Ser Ala Pro Val Leu 2461056 CTG CAG CAT TAT CCT CTG TAT CGG AGA AGT GAT GCT AAC TGT TCT GGG 1103247 Leu Gln His Tyr Pro Leu Tyr Arg Arg Ser Asp Ala Asn Cys Ser Gly 2621104 GAA GAC GCT GCT CCT CCA GAG GAA AGG GAC ATC CCA TTT AAG GAG AAC 1151263 Glu Asp Ala Ala Pro Pro Glu Glu Arg Asp Ile Pro Phe Lys Glu Asn 2781152 TAT GAC GTG CTT TCA CGG GAG GCA TCA CAA AAG CTG CTG TGG TGG CTC 1199279 Tyr Asp Val Leu Ser Arg Glu Ala Ser Gln Lys Leu Leu Trp Trp Leu 2941200 CAG CCG CGC CTG GTT CTC AGT GGC CAC ACG CAC AGC GCC TGC GAG GTG 1247295 Gln Pro Arg Leu Val Leu Ser Gly His Thr His Ser Ala Cys Glu Val 3101248 CAC CAC GGG GGC CGA GTC CCC GAG CTC AGC GTC CCA TCT TTC AGT TGG 1295311 His His Gly Gly Arg Val Pro Glu Leu Ser Val Pro Ser Phe Ser Trp 3261296 AGG AAC AGA AAC AAC CCC AGT TTC ATC ATG GGA ACA GAT GCT TAG TTG 1343327 Arg Asn Arg Asn Asn Pro Ser Phe Ile Met Gly Thr Asp Ala *** 3411344 AGC ATC AAG GGG CAG GAA GAC ACC TTT CCC TCC TTG TTC CTC GCT GAC 13911392 CGA TGA CCC TGG AAC TCC ACG GTG CCT CTC TGA ATC TCT GTT ATG GAT 14391440 CCC CCA CTA TAT TTG ATG GGA ACC CAG TGA GCC AGG GGC CAG TTT TGA 14871488 CAG GGT AGC ATC ACG CCC ACA GAC TAC ACC CTC TCC AAG TGC TAC CTC 15351536 CCA CGT GAG GAT GTG GTT TTG ATC ATC TAC TGT GGA GTG GTG GGC TTC 15831584 CTT GTG GTC CTC ACA CTC ACT CAC TTT GGG CTT CTA GCC TCA CCT TTT 16311632 CTT TCT GGT TTG AAC TTG CTC GGA AAG CGT AAG ACA AGA TGA AGA GCA 16791680 GGC GCC ATT ATA AAT ATC AAA GCC CAA GAA ATG GAA CTT TGG GCA GAG 17271728 ATC ATG TTA GAA TCA AGT GGA TGA TGA GAC CAA TTA CAG GCC GTC TCT 17751776 CTG CAC AGC ACA GAA ATT CTC AAT CAC TGA AAT GAG TAA CTG CAA AAT 18231824 AAA TAG TTG ATT GTA CTG TTC TCA TGC TAT AAA AGT GGA CAG GTA CTC 18711872 TAC AAC AAA TCT GTT TTC TCA TTT TTA TCA AAT ATA TGT ATC ATC AAA 19191920 GGT TGC ATC TGT ACA GTA TGT AAA TGC TAT TAA TGT CGT CAC TCA CAT 19671968 GCA CGA CAG TCC TTG TTC CCC CAG GAA GGG CCT GGT GGC CCC AGC ACA 20152016 CAC TTG GGA TTA TGT GTA TAC ATA AAT AAA TAT TGG GCT GTT TCC CTC 20632064 TTC CTG TGA AGT GGT TCT CAA ATT CCT ATG TAC TGT AAA GCT GTA CCC 21112112 TTA AAA GTA CAG ATG TGG CCG GGC ACA GTG GCT CAC ACC TGT AAT CCC 21592160 AGC ACT TTG GGA GGC TGA GGC GGG TGG ATC ACT TGA GGT CAG GAG TTC 22072208 AAG ACC AGC CTG GCC AAC ATG GTG AAA CCT CGT CTC CGC TAG AAA TAC 22552256 AAA AAT TAG CCA AGC ATG GTA GCA AGT GCC TAT AAT ACC AGC TGA GGC 23032304 TGA GGC AGG AGA ATC CCT TGA GCC CGG GAG GCG GAG GTT GCA GTG AGC 23512352 CAA GAT CAT GCC ACT GCA CTC TAG CCT GGG CAA CAG AGT GAG ACT CCG 23992400 TCT CAA AAA AAT ATA TTT AAA AAA AAA AAA AAA AAA 24352.PP730A:核苷酸序列(SEQ ID NO:4)长度:20571 GGACTCGCTT TCCGTGCGGT GCGGCGAGTG AGGCCCCGGT CTTCCTCCTC GTCCTGCCGC61 AGGGCCAGAA CCCCTGACGG TATTCAGCTG CGCGTAAGTC TGGCCGGTGC CATCTGTCTC 121 CGCAATGCCC CCCAAGAAAC AGGCTCAGGC CAGGGGCAGC AAAAAGGCGG AGCAAAAAAA181 GAAGGAGAAG ATTATCGAAG GCAAAACTTT CGGTTTGAAG AATAAGAAAG GAACAAAGCA241 ACAGAAGTTT ATCAAGGCTG TCACACATCA AGTTAAATTT GGTCAACAAA ATCCACGTCA301 GGTAGCACAG AGTGAAGCTG AAAAGAAATT GAAGAAGGAT GACAAGAAGA AAGAATTGCA361 GGAGCTAAAT GAGCTGTTCA AACCTGTAGT TGCTGCTCAA AAAAATAAGT AAAGGTGCAG421 ATCCCAAGTC TGTAGTATGT GCATTCTTCA AGCAAGGACA GTGTACTAAA GGAGATAAGT481 GTAAGTTCTC CCATGACTTG ACTCTGGAGA GAAAATGTGA AAAGCGAAGT GTTTACATTG541 ATGCAAGAGA TGAAGAACTT GAAAAAGATA CTATGGATAA TTGGGATGAG AAAAAGCTGG601 AAGAAGTAGT GAACAAGAAG CACGGTGAGG CGGAAAAGAA AAAACCAAAA ACTCAAATAG661 TGTGCAAGCA TTTCCTGGAA GCTATTGAAA ACAACAAGTA TGGCTGGTTT TGGGTATGCC721 CTGGAGGGGG TGATATTTGC ATGTATCGTC ATGCACTTCC TCCTGGATTT GTGTTGAAAA781 AAGATAAAAA GAAAGAAGAG AAAGAAGATG AAATTTCATT AGAAGATCTA ATTGAGAGAG841 AGCGTTCTGC CCTAGGTCCA AATGTTACCA AAATCACTCT AGAATCTTTT CTTGCCTGGA901 AGAAAAGGAA AAGACAAGAA AAGATTGATA AACTTGAACA AGATATGGAA AGAAGGAAAG961 CTGACTTCAA AGCAGGGAAA GCACTAGTGA TCAGTGGTCG TGAAGTGTTT GAATTTCGTC1021 CTGAACTGGT CAATGATGAT GATGAGGAAG CAGATGATAC ACGCTACACC CAGGGAACAG1081 GTGGTGATGA GGTTGATGAT TCAGTGAGTG TAAATGACAT AGATTTAAGC CTGTACATCC1141 CAAGAGATGT AGATGAAACA GGTATTACTG TAGCCAGTCT TGAAAGATTC AGCACATATA1201 CTTCAGATAA AGATGAAAAC AAATTAAGTG AAGCTTCTGG AGGTAGGGCT GAAAATGGCG1261 AAAGAAGTGA CTTGGAAGAG GACAACGAGA GGGAGGGAAC GGAAAATGGA GCCATTGATG1321 CTGTTCCTGT TGATGAAAAT CTTTTCACTG GAGAGGATTT GGATGAACTA GAAGAAGAAT1381 TAAATACACT TGATTTAGAA GAATGACACC AAACACATCG CTGAAAAAAT TAAGTCAGCT1441 CAGCACGAGT TGGAATTGAC TACATTAATT TCTTTCCACC TAGAATCAAC AGGATGTTTA1501 TTTCCTATGC TGATTCTGGA GGAGTTAACC TCCTGCAAAA AAGGCATCTT GTCCCTACAT1561 CTTCTCTTCT GACTTTGGCT ACATCTCATA GTAAGTTCAG AGTAGTTCAT GATAAATTGA1621 AAATATAATG GTCATTGCAG AAAATGATTG ATGTTGTAAC TGTCCACCCA AGTAAGAAGT1681 GTATCTGCCT TTCCATCTTT TGGTTTTCAT TTGGGCATGT GCTATTACCA GAAACAACAA1741 ACTTATATTT AAAATACCCT TCATTTGACA CAGTTTTTAA TGAGTGATTT AATTTCCTCT1801 GTATTTGTAT GTTTAGAAGA CTGCCTAAAA CATGAGCACT GTACTTCATA AAGGAAACTG1861 CGTATGCAGA TTCAGTATTG TGTATCTTTG GACAATTAGA TGGACATTTA AAATGGAACT1921 TCTTTTATCT GACAGGATCA GCTACAATGC CCTGTGTTAA ATTGTTTAAA AGTTTCCCTT1981 TTCTTTTTTG CCAATAAAGT TGTAAATAAA GACCATCATA CATTAAAATC CCAAAAAAAA2041 AAAAAAAAAA AAAAAAAB:氨基酸序列(SEQ ID NO:5)长度:2771 MDNWDEKKLE EVVNKKHGEA EKKKPKTQIV CKHFLEAIEN NKYG FWVCP GGGDICMYRH61 ALPPGFVLKK DKKKEEKEDE ISLEDLIERE RSALGPNVTK ITLESFLAWK KRKRQEKIDK121 LEQDMERRKA DFKAGKALVI SGREVFEFRP ELVNDDDEEA DDTRYTQGTG GDEVDDSVSV181 NDIDLSLYIP RDVDETGITV ASLERFSTYT SDKDENKLSE ASGGRAENGE RSDLEEDNER241 EGTENGAIDA VPVDENLFTG EDLDELEEEL NTLDLEEC.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO:6) 克隆号:PP730起始编码子:573 ATG 终止编码子:1404 TGA 蛋白质分子量:31669.201 GG ACT CGC TTT CCG TGC GGT GCG GCG AGT GAG GCC CCG GTC TTC CTC 4748 CTC GTC CTG CCG CAG GGC CAG AAC CCC TGA CGG TAT TCA GCT GCG CGT 9596 AAG TCT GGC CGG TGC CAT CTG TCT CCG CAA TGC CCC CCA AGA AAC AGG 143144 CTC AGG CCA GGG GCA GCA AAA AGG CGG AGC AAA AAA AGA AGG AGA AGA 191192 TTA TCG AAG GCA AAA CTT TCG GTT TGA AGA ATA AGA AAG GAA CAA AGC 239240 AAC AGA AGT TTA TCA AGG CTG TCA CAC ATC AAG TTA AAT TTG GTC AAC 287288 AAA ATC CAC GTC AGG TAG CAC AGA GTG AAG CTG AAA AGA AAT TGA AGA 335336 AGG ATG ACA AGA AGA AAG AAT TGC AGG AGC TAA ATG AGC TGT TCA AAC 383384 CTG TAG TTG CTG CTC AAA AAA ATA AGT AAA GGT GCA GAT CCC AAG TCT 431432 GTA GTA TGT GCA TTC TTC AAG CAA GGA CAG TGT ACT AAA GGA GAT AAG 479 480 TGT AAG TTC TCC CAT GAC TTG ACT CTG GAG AGA AAA TGT GAA AAG CGA 527528 AGT GTT TAC ATT GAT GCA AGA GAT GAA GAA CTT GAA AAA GAT ACT ATG 5751 Met 1576 GAT AAT TGG GAT GAG AAA AAG CTG GAA GAA GTA GTG AAC AAG AAG CAC 6232 Asp Asn Trp Asp Glu Lys Lys Leu Glu Glu Val Val Asn Lys Lys His 17624 GGT GAG GCG GAA AAG AAA AAA CCA AAA ACT CAA ATA GTG TGC AAG CAT 67118 Gly Glu Ala Glu Lys Lys Lys Pro Lys Thr Gln Ile Val Cys Lys His 33672 TTC CTG GAA GCT ATT GAA AAC AAC AAG TAT GGC TGG TTT TGG GTA TGC 71934 Phe Leu Glu Ala Ile Glu Asn Asn Lys Tyr Gly Trp Phe Trp Val Cys 49720 CCT GGA GGG GGT GAT ATT TGC ATG TAT CGT CAT GCA CTT CCT CCT GGA 76750 Pro Gly Gly Gly Asp Ile Cys Met Tyr Arg His Ala Leu Pro Pro Gly 65768 TTT GTG TTG AAA AAA GAT AAA AAG AAA GAA GAG AAA GAA GAT GAA ATT 81566 Phe Val Leu Lys Lys Asp Lys Lys Lys Glu Glu Lys Glu Asp Glu Ile 81816 TCA TTA GAA GAT CTA ATT GAG AGA GAG CGT TCT GCC CTA GGT CCA AAT 86382 Ser Leu Glu Asp Leu Ile Glu Arg Glu Arg Ser Ala Leu GIy Pro Asn 97864 GTT ACC AAA ATC ACT CTA GAA TCT TTT CTT GCC TGG AAG AAA AGG AAA 91198 Val Thr Lys Ile Thr Leu Glu Ser Phe Leu Ala Trp Lys Lys Arg Lys 113912 AGA CAA GAA AAG ATT GAT AAA CTT GAA CAA GAT ATG GAA AGA AGG AAA 959114 Arg Gln Glu Lys Ile Asp Lys Leu Glu Gln Asp Met Glu Arg Arg Lys 129960 GCT GAC TTC AAA GCA GGG AAA GCA CTA GTG ATC AGT GGT CGT GAA GTG 1007130 Ala Asp Phe Lys Ala Gly Lys Ala Leu Val Ile Ser Gly Arg Glu Val 1451008 TTT GAA TTT CGT CCT GAA CTG GTC AAT GAT GAT GAT GAG GAA GCA GAT 1055146 Phe Glu Phe Arg Pro Glu Leu Val Asn Asp Asp Asp Glu Glu Ala Asp 1611056 GAT ACA CGC TAC ACC CAG GGA ACA GGT GGT GAT GAG GTT GAT GAT TCA 1103162 Asp Thr Arg Tyr Thr Gln Gly Thr Gly Gly Asp Glu Val Asp Asp Ser 1771104 GTG AGT GTA AAT GAC ATA GAT TTA AGC CTG TAC ATC CCA AGA GAT GTA 1151178 Val Ser Val Asn Asp Ile Asp Leu Ser Leu Tyr Ile Pro Arg Asp Val 1931152 GAT GAA ACA GGT ATT ACT GTA GCC AGT CTT GAA AGA TTC AGC ACA TAT 1199194 Asp Glu Thr Gly Ile Thr Val Ala Ser Leu Glu Arg Phe Ser Thr Tyr 2091200 ACT TCA GAT AAA GAT GAA AAC AAA TTA AGT GAA GCT TCT GGA GGT AGG 1247210 Thr Ser Asp Lys Asp Glu Asn Lys Leu Ser Glu Ala Ser Gly Gly Arg 2251248 GCT GAA AAT GGC GAA AGA AGT GAC TTG GAA GAG GAC AAC GAG AGG GAG 1295226 Ala Glu Asn Gly Glu Arg Ser Asp Leu Glu Glu Asp Asn Glu Arg Glu 2411296 GGA ACG GAA AAT GGA GCC ATT GAT GCT GTT CCT GTT GAT GAA AAT CTT 1343242 Gly Thr Glu Asn Gly Ala Ile Asp Ala Val Pro Val Asp Glu Asn Leu 2571344 TTC ACT GGA GAG GAT TTG GAT GAA CTA GAA GAA GAA TTA AAT ACA CTT 1391258 Phe Thr Gly Glu Asp Leu Asp Glu Leu Glu Glu Glu Leu Asn Thr Leu 2731392 GAT TTA GAA GAA TGA CAC CAA ACA CAT CGC TGA AAA AAT TAA GTC AGC 1439274 Asp Leu Glu Glu *** 2781440 TCA GCA CGA GTT GGA ATT GAC TAC ATT AAT TTC TTT CCA CCT AGA ATC 14871488 AAC AGG ATG TTT ATT TCC TAT GCT GAT TCT GGA GGA GTT AAC CTC CTG 15351536 CAA AAA AGG CAT CTT GTC CCT ACA TCT TCT CTT CTG ACT TTG GCT ACA 15831584 TCT CAT AGT AAG TTC AGA GTA GTT CAT GAT AAA TTG AAA ATA TAA TGG 16311632 TCA TTG CAG AAA ATG ATT GAT GTT GTA ACT GTC CAC CCA AGT AAG AAG 16791680 TGT ATC TGC CTT TCC ATC TTT TGG TTT TCA TTT GGG CAT GTG CTA TTA 17271728 CCA GAA ACA ACA AAC TTA TAT TTA AAA TAC CCT TCA TTT GAC ACA GTT 17751776 TTT AAT GAG TGA TTT AAT TTC CTC TGT ATT TGT ATG TTT AGA AGA CTG 18231824 CCT AAA ACA TGA GCA CTG TAC TTC ATA AAG GAA ACT GCG TAT GCA GAT 18711872 TCA GTA TTG TGT ATC TTT GGA CAA TTA GAT GGA CAT TTA AAA TGG AAC 19191920 TTC TTT TAT CTG ACA GGA TCA GCT ACA ATG CCC TGT GTT AAA TTG TTT 19671968 AAA AGT TTC CCT TTT CTT TTT TGC CAA TAA AGT TGT AAA TAA AGA CCA 20152016 TCA TAC ATT AAA ATC CCA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA 20573.PP791A:核苷酸序列(SEQ ID NO:7)长度:40011 GGCTGTCCAG GGAGGCTGAG GCGAGAGGTA GCTGTCCGGG TGGGGAGCCC GCACTACCTT61 CTTCCTCTTC CTCCTCCTCC GGGTGAGGGG AGCGAAGGTT GGGGGTCCCC GAGCCCATGG121 ACCAGGAAGA GGCGGAGGCC GCCGAGAGCC GGGGCCCCGC TATGTGGCCC TGAGCCCCGT181 GTACTGGTTC TGCCTGTCTG GAGGGCCATG 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ACC CTT CCT GTG GAT AGC ACA ACC CTG GAT 2064604 Gly Pro Asp Lys Glu Leu Thr Leu Pro Val Asp Ser Thr Thr Leu Asp 6192065 GGC AGC AAG AGC TCA GAT GAT CAG AAA ATT ATC TCA TAT CTC TGG GAA 2112620 Gly Ser Lys Ser Ser Asp Asp Gln Lys Ile Ile Ser Tyr Leu Trp Glu 6352113 AAA AAC ACA GGG ACC TGA TGG GGT GCA GCT CGA GAA TGC TAA CAG CAG 2160636 Lys Asn Thr Gly Thr *** 6412161 TGT TGC TAC TGT GAC TGG GCT GCA AGT GGG GAC CTA TGT GTT CAC CTT 22082209 GAC TGT CAA AGA TGA GAG GAA CCT GCA AAG CCA GAG CTC TGT GAA TGT 22562257 CAT TGT CAA AGA AGA AAT AAA CAA ACC ACC TAT AGC CAA GAT AAC TGG 23042305 GAA TGT GGT GAT TAC CCT ACC CAC GAG CAC AGC AGA GCT GGA TGG CTC 23522353 TAA GTC CTC AGA TGA CAA GGG AAT AGT CAG CTA CCT CTG GAC TCG AGA 24002401 TGA GGG GAG CCC AGC AGC AGG GGA GGT GTT AAA TCA CTC TGA CCA TCA 24482449 CCC TAT CCT TTT TCT TTC AAA CCT GGT TGA GGG AAC CTA CAC TTT TCA 24962497 CCT GAA AGT GAC CGA TGC AAA GGG TGA GAG TGA CAC AGA CCG GAC CAC 25442545 TGT GGA GGT GAA ACC TGA TCC CAG GAA AAA CAA CCT 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31203121 TGA TGG ATA TCT ATA ATT GTA GAT TTT GTT TTT ACA AGC TAA TAC TGA 31683169 AGA CTC GAC TGA AAT ATT ATG TAT CTA GCC CAT AGT ATT GTA CTT AAC 32163217 TTT TAC AGG TGA GAA GAG AGT TCT GTG TTT GCA TTG ATT ATG ATA TTC 32643265 TGA ATA AAT ATG GAA TAT ATT TTA AAA AAA AAA AAA AAA AA 330510.PP8961A:核苷酸序列 (SEQ ID NO:28)长度:19711 GATGTCACCT CTGCCTCATT CTACTATCAA GGTGGTTGCA GGGACAGCCC AGGTTCAAAG61 GAAGGAGAAG TAGACTCCCC CTCTTTTGAC TGGCAAGGGG ACATTGCAAA AAATCCTGTC121 GTTTGGGGGG GATTGTTGTA GTCATCTTTG GAAACACAAT CTGCAACTTT GATGTTCATC181 AAAGAAATCT GCTTGAGCTG TGAGCTCAAC TGGTATTCGA CTTAAGAAAT CCACAAAATC241 GGTTCTGAAC TGCATTTTCA TCTCAGCGTT TGGCCACGGG CAATGAGAGC TTCATTCAGA301 AGAGTCACAA AATCGTTCTG ACCAAGACCA TTTTGTCTAG ATCAGTAATT TGGGGATTTG361 CCTGTCTCAG TGCCATCAGA AGCAACCACC TAACCCAGAA ATGCTAACAT TCCTCTTCTT421 TCAGCAGTCA CTGACTACCT ACATCCCTCA GCTCCCTCCC CATCTCACAT CACCCTCAGG481 GGCCTCCTGA GCACAGCATC ACCGAGGGGG CCACAGCAGC AGAACCTCCT ACCCAGATCT541 CTCTAGGCAC TGCCATCATG TGACTAAACT CCCCTCTCAA 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ACT CCC CCT CTT TTG ACT GGC 9495 AAG GGG ACA TTG CAA AAA ATC CTG TCG TTT GGG GGG GAT TGT TGT AGT 142143 CAT CTT TGG AAA CAC AAT CTG CAA CTT TGA TGT TCA TCA AAG AAA TCT 190191 GCT TGA GCT GTG AGC TCA ACT GGT ATT CGA CTT AAG AAA TCC ACA AAA 238239 TCG GTT CTG AAC TGC ATT TTC ATC TCA GCG TTT GGC CAC GGG CAA TGA 286287 GAG CTT CAT TCA GAA GAG TCA CAA AAT CGT TCT GAC CAA GAC CAT TTT 334335 GTC TAG ATC AGT AAT TTG GGG ATT TGC CTG TCT CAG TGC CAT CAG AAG 382383 CAA CCA CCT AAC CCA GAA ATG CTA ACA TTC CTC TTC TTT CAG CAG TCA 430431 CTG ACT ACC TAC ATC CCT CAG CTC CCT CCC CAT CTC ACA TCA CCC TCA 478479 GGG GCC TCC TGA GCA CAG CAT CAC CGA GGG GGC CAC AGC AGC AGA ACC 526527 TCC TAC CCA GAT CTC TCT AGG CAC TGC CAT CAT GTG ACT AAA CTC CCC 574575 TCT CAA CCA CAA CCT CCA GCT ACA GGG CTC TCA TCC AAG TCA AAA ATC 622623 CAA AGA CAG GCG TCT GGC TGG CTG CAG GAG TCC AGA GCC ATG AGT GTC 6701 Met Ser Val 3671 CCT AAA TTA GTC AAC CAT GGC TGG GAG ACA GAG CCA TGC AAT CCA GAC 7184 Pro Lys Leu Val Asn His Gly Trp Glu Thr Glu Pro Cys Asn Pro Asp 19719 CCA GCT CTT CTG CTC ACT GGG GCC GTT CCC GGA GAA GGA GAA ACC ACG 76620 Pro Ala Leu Leu Leu Thr Gly Ala Val Pro Gly Glu Gly Glu Thr Thr 35767 CTG GAG CGG GCA CTC CCA CGA GTT GTC GGG GAA CAA GAA CTC GGA TCC 81436 Leu Glu Arg Ala Leu Pro Arg Val Val Gly Glu Gln Glu Leu Gly Ser 51815 TGG CGG GAG ACA GCG AAC AGT ACA CCC GAG CGG CGG CTG TCA CCC GCT 86252 Trp Arg Glu Thr Ala Asn Ser Thr Pro Glu Arg Arg Leu Ser Pro Ala 67863 TTG AAA CAC GTA AGT GCC CGG CCA ACC AGC ATC CCA GAA ACG CCT GGG 91068 Leu Lys His Val Ser Ala Arg Pro Thr Ser Ile Pro Glu Thr Pro Gly 83911 GAG CGG GGC GCG CGG ACG AGG AGA GAC CGC GCT GGG AGG GCG CGG AAG 958 84 Glu Arg Gly Ala Arg Thr Arg Arg Asp Arg Ala Gly Arg Ala Arg Lys 99959 GGC GAG GGC GCT GCC CCC TCC ACG CTG AGC TCA CTG CGC GGG GCG GCC 1006100 Gly Glu Gly Ala Ala Ala Ser Thr Leu Ser Ser Leu Arg Gly Ala Ala 1151007 CCC GAG GCA GGG CGC GGG GCG GAG GCG CCC GAG TGG TCC GTC TCG GGA 1054116 Pro Glu Ala Gly Arg Gly Ala Glu Ala Pro Glu Trp Ser Val Ser Gly 1311055 GGC GCA GAC GCG GTT CCT CTC GAG GGC GCT CCC GCT GTG AGG AGC AAA 1102132 Gly Ala Asp Ala Val Pro Leu Glu Gly Ala Pro Ala Val Arg Ser Lys 1471103 TCC TAG GGA CCT TTG CGT CAT GAG CAC CCA ACG GGG CCC GCC CCC TTA 1150148 Ser *** 1491151 GGA CCT GCA CCT GCC TGA GGG GAA AAC CCG CCC ACC ACC CAC GGT CGC 11981199 CCG CAG CGC TTG CCT GCC AGC CTT CTC ATC TGC AAG CCG CCT CCT CCC 12461247 TGC CAA CCT CCT CCT CCC TGC CCA GCC TCT TTC TCT CTG CCA GCC TCC 12941295 TCC TCC CCC ATC GGC CGC CTC CTC TCC TGC CAG CCT CCT CCT CCC TGC 13421343 CAA CCT CCT CCT CTC CTG CCA GCC TCC TCC TCC CTG CCA ACC TCC TCC 13901391 TCT CCT GCC AGC CTC CTC CTC CCT GCA AGC CTC CTC CTT CCT GCC AGC 14381439 CTC TTT CTC CCT GCC AAC CTC CTC CTC TCC TGC CAG CCT CCT GCT CCC 14861487 TGC AAG CCT CCT CCT TCC TGC CAG CCT CTT TCT CCC TAC CAA CCT CCT 15341535 CCT CTC CTG TCA GCT TCC TCC TCC CTG CCA ACC TTT CTG TCC TGC CAC 15821583 CCC CCT CTT CCC TGC CAG TCT CCC CCT CTT CTG CCA GCC TCC TCC TCC 16301631 CCT GCC AGC CTC TTC CTT CTC ACC AGC CCC CTC CTC CCT TTT CAT CTA 16781679 AGA TCA TTT GAC CTG TCA TTC AAG GCC TAG TTG AAA TGT CAC CTC TGT 17261727 AGA AAA GTT TCT CCC CAG TTC TCT CTG ATA GTT AGT TCT TTC TCT CCT 17741775 TTG AGT GGG GTA GCA TGG TGC ACA TTT CTA TAT CAA GCT TCT TGG CCC 18221823 GGT TTT GGT ATT TAC ATG CTT ATC TCT CCC CTG CAA TAG GGA CAG TGC 18701871 TAA CTT TCT GTC ACA TTT CTT TTT AAT GCC TTC CTA AAA GAG TGA CCA 19181919 ACA CAT GGG TGA TAT TCA ACA AAT GAT TGA AAA AGA AAA AAA AAA AAA 19661967 AAA AA 197111.PP8985A:核苷酸序列(SEQ ID NO:31)长度:20201 GGTCAGCCGC GTCGCGAATG GGGCAGGAGC GAGCCTCTCT GGTCCCGACG CGGGTGGCCC61 GGGTCTCCTC GACTCCTGAG GAAAGCCCAC CGGGCGGGGC GGGAGGTGAA GAGGCTGGGG121 AAGTCAGAGG TTAACCTGGG CGTCAGGGGA CGTTGGAGTT GATCCGTCAG GGTCCCGGGG181 CGGTCTGGGG GCAGTAGAGA CGGGGCTTGG GCGCGGGGCC TGAGAGGTCA GGGGTCAGCA241 GGAGTGAGGC TGGGGCGTCC AGGTCCGAGA GGTCAGGGGT CAGCTGGAGA GGGGCTGGGG301 CGCCGGTTTC CCGGAGGTCA GGGGTCAGAA GGAACAGGGC TGCAGCGTCA GGGTCCGAGA361 GGTTAGGGGT CGGCAGAGGC GGAGCTGGGG CACTGGGGGT CAGGGGTCGG GGATCAGGGC421 GGGGTCGGGT GCACTGGTAG CCTGCGCATG GGCCTCCAGC TTCGCGCGCT GTTGGGAGCC481 TTCGGACGGT GGACCCTGCG CCTGGGACCG CGTCCGTCCT GCTCGCCGCG CATGGCCGGG541 AACGCGGAGC CGCCGCCCGC CGGAGCCGCA TGCCCCCAGG ACCGGAGGTC CTGCAGCGGC601 CGGGCCGGGG GCGACCGCGT CTGGGAGGAC GGAGAACATC CGGCGAAGAA GCTCAAGAGC661 GGTGGCGACG AGGAGCGGCG CGAGAAGCCG CCCAAGCGGA AGATCGTGCT GCTCATGGCC721 TATTCGGGCA AGGGCTACCA CGGCATGCAG AGGAATGTCG GGTCCTCACA ATTCAAAACA781 ATTGAAGATG ACTTGGTGTC CGCCCTCGTC CGGTCAGGCT GTATTCCTGA AAATCATGGT841 GAGGACATGA GGAAAATGTC CTTCCAGCGC TGCGCCCGGA CAGACAAGGG TGTGTCCGCA901 GCCGGCCAGG TGGTATCCCT GAAGGTGTGG CTGATTGACG ACATTCTAGA AAAGATCAAC961 AGCCACCTTC CCTCTCACAT TCGGATTCTG GGACTGAAGC GGGTCACGGG CGGGTTTAAC1021 TCCAAGAACA GATGTGATGC CAGGACCTAT TGCTACCTGC TGCCCACGTT TGCCTTTGCG1081 CACAAGGACC GGGACGTTCA GGATGAGACC TACCGCCTGA GCGCCGAGAC GCTGCAGCAG1141 GTCAACAGGC TCCTGGCCTG CTACAAGGGC ACGCACAACT TCCACAATTT CACCTCGCAG1201 AAGGGGCCGC AGGATCCCAG TGCCTGCCGC TACATCCTGG AGATGTACTG CGAGGAACCC1261 TTTGTGCGGG AGGGCCTGGA GTTTGCGGTG ATCAGGGTGA AGGGCCAGAG CTTCATGATG1321 CATCAGATCC GGAAGATGGT CGGCCTGGTG GTGGCCATTG TGAAGGGTTA TGCCCCTGAG1381 AGCGTGCTGG AGCGCAGCTG GGGCACAGAG AAGGTGGACG TGCCCAAGGC GCCCGGACTC1441 GGCCTGGTCC TGGAGAGGGT GCACTTCGAG AAGTACAACC AGCGCTTTGG CAACGATGGG1501 CTGCATGAGC CGCTGGACTG GGCGCAGGAG GAAGGAAAGG TCGCAGCCTT CAAGGAGGAG1561 CACATCTACC CCACCATCAT CGGCACCGAG CGGGACGAAC GCTCCATGGC CCAGTGGCTG1621 AGCACCTTGC CCATCCACAA CTTCAGTGCC ACCGCTCTCA CGGCAGGTGG CACGGGCGCC1681 AAGGTGCCCA GTCCCCTGGA AGGCAGTGAA GGGGACGGAG ACACTGACTG AGGCGATGGG1741 AGCTGCCCAC CAGAGTGCCT CTGAGCAGCT CACAGTGTGT GCCCAGATGT GCCACCCTCT1801 GTGGGCAGCA AGAAGCTGGG ATCGCTGCAG CCATGTTTTC CCGGCCATGC CGGCGTTGTA1861 ACCTCAGGAC CTTCCCTTGT AGGAACAGCC TTTCTCGAAT CTGTTTTCAG CTCTTGCATT1921 GCATAGATGA ACCTCAGCAT GTAAAGAACT ATTTTTTTAA AGAAGTGATT TTCTTATTAA1981 ACAAGTACAA ATTTTGCTTA GTCAAAAAAA AAAAAAAAAAB:氨基酸序列(SEQ ID NO:32)长度:4271 MGLQLRALLG AFGRWTLRLG PRPSCSPRMA GNAEPPPAGA ACPQDRRSCS GRAGGDRVWE61 DGEHPAKKLK SGGDEERREK PPKRKIVLLM AYSGKGYHGM QRNVGSSQFK TIEDDLVSAL121 VRSGCIPENH GEDMRKMSFQ RCARTDKGVS AAGQVVSLKV WLIDDILEKI NSHLPSHIRI181 LGLKRVTGGF NSKNRCDART YCYLLPTFAF AHKDRDVQDE TYRLSAETLQ QVNRLLACYK241 GTHNFHNFTS QKGPQDPSAC RYILEMYCEE PFVREGLEFA VIRVKGQSFM MHQIRKMVGL301 VVAIVKGYAP ESVLERSWGT EKVDVPKAPG LGLVLERVHF EKYNQRFGND GLHEPLDWAQ361 EEGKVAAFKE EHIYPTIIGT ERDERSMAQW LSTLPIHNFS ATALTAGGTG AKVPSPLEGS421 EGDGDTDC.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO:33) 克隆号:PP8985起始编码子:448 ATG 终止编码子:1729 TGA 蛋白质分子量:47467.611 GGT CAG CCG CGT CGC GAA TGG GGC AGG AGC GAG CCT CTC TGG TCC CGA 4849 CGC GGG TGG CCC GGG TCT CCT CGA CTC CTG AGG AAA GCC CAC CGG GCG 9697 GGG CGG GAG GTG AAG AGG CTG GGG AAG TCA GAG GTT AAC CTG GGC GTC 144145 AGG GGA CGT TGG AGT TGA TCC GTC AGG GTC CCG GGG CGG TCT GGG GGC 192193 AGT AGA GAC GGG GCT TGG GCG CGG GGC CTG AGA GGT CAG GGG TCA GCA 240241 GGA GTG AGG CTG GGG CGT CCA GGT CCG AGA GGT CAG GGG TCA GCT GGA 288289 GAG GGG CTG GGG CGC CGG TTT CCC GGA GGT CAG GGG TCA GAA GGA ACA 336337 GGG CTG CAG CGT CAG GGT CCG AGA GGT TAG GGG TCG GCA GAG GCG GAG 384385 CTG GGG CAC TGG GGG TCA GGG GTC GGG GAT CAG GGC GGG GTC GGG TGC 432433 ACT GGT AGC CTG CGC ATG GGC CTC CAG CTT CGC GCG CTG TTG GGA GCC 4801 Met Gly Leu Gln Leu Arg Ala Leu Leu Gly Ala 11481 TTC GGA CGG TGG ACC CTG CGC CTG GGA CCG CGT CCG TCC TGC TCG CCG 52812 Phe Gly Arg Trp Thr Leu Arg Leu Gly Pro Arg Pro Ser Cys Ser Pro 27529 CGC ATG GCC GGG AAC GCG GAG CCG CCG CCC GCC GGA GCC GCA TGC CCC 57628 Arg Met Ala Gly Asn Ala Glu Pro Pro Pro Ala Gly Ala Ala Cys Pro 43577 CAG GAC CGG AGG TCC TGC AGC GGC CGG GCC GGG GGC GAC CGC GTC TGG 62444 Gln Asp Arg Arg Ser Cys Ser Gly Arg Ala Gly Gly Asp Arg Val Trp 59625 GAG GAC GGA GAA CAT CCG GCG AAG AAG CTC AAG AGC GGT GGC GAC GAG 67260 Glu Asp Gly Glu His Pro Ala Lys Lys Leu Lys Ser Gly Gly Asp Glu 75673 GAG CGG CGC GAG AAG CCG CCC AAG CGG AAG ATC GTG CTG CTC ATG GCC 72076 Glu Arg Arg Glu Lys Pro Pro Lys Arg Lys Ile Val Leu Leu Met Ala 91 721 TAT TCG GGC AAG GGC TAC CAC GGC ATG CAG AGG AAT GTC GGG TCC TCA 76892 Tyr Ser Gly Lys Gly Tyr His Gly Met Gln Arg Asn Val Gly Ser Ser 107769 CAA TTC AAA ACA ATT GAA GAT GAC TTG GTG TCC GCC CTC GTC CGG TCA 816108 Gln Phe Lys Thr Ile Glu Asp Asp Leu Val Ser Ala Leu Val Arg Ser 123817 GGC TGT ATT CCT GAA AAT CAT GGT GAG GAC ATG AGG AAA ATG TCC TTC 864124 Gly Cys Ile Pro Glu Asn His Gly Glu Asp Met Arg Lys Met Ser Phe 139865 CAG CGC TGC GCC CGG ACA GAC AAG GGT GTG TCC GCA GCC GGC CAG GTG 912140 Gln Arg Cys Ala Arg Thr Asp Lys Gly Val Ser Ala Ala Gly Gln Val 155913 GTA TCC CTG AAG GTG TGG CTG ATT GAC GAC ATT CTA GAA AAG ATC AAC 960156 Val Ser Leu Lys Val Trp Leu Ile Asp Asp Ile Leu Glu Lys Ile Asn 171961 AGC CAC CTT CCC TCT CAC ATT CGG ATT CTG GGA CTG AAG CGG GTC ACG 1008172 Ser His Leu Pro Ser His Ile Arg Ile Leu Gly Leu Lys Arg Val Thr 1871009 GGC GGG TTT AAC TCC AAG AAC AGA TGT GAT GCC AGG ACC TAT TGC TAC 1056188 Gly Gly Phe Asn Ser Lys Asn Arg Cys Asp Ala Arg Thr Tyr Cys Tyr 2031057 CTG CTG CCC ACG TTT GCC TTT GCG CAC AAG GAC CGG GAC GTT CAG GAT 1104204 Leu Leu Pro Thr Phe Ala Phe Ala His Lys Asp Arg Asp Val Gln Asp 2191105 GAG ACC TAC CGC CTG AGC GCC GAG ACG CTG CAG CAG GTC AAC AGG CTC 1152220 Glu Thr Tyr Arg Leu Ser Ala Glu Thr Leu Gln Gln Val Asn Arg Leu 2351153 CTG GCC TGC TAC AAG GGC ACG CAC AAC TTC CAC AAT TTC ACC TCG CAG 1200236 Leu Ala Cys Tyr Lys Gly Thr His Asn Phe His Asn Phe Thr Ser Gln 2511201 AAG GGG CCG CAG GAT CCC AGT GCC TGC CGC TAC ATC CTG GAG ATG TAC 1248252 Lys Gly Pro Gln Asp Pro Ser Ala Cys Arg Tyr Ile Leu Glu Met Tyr 2671249 TGC GAG GAA CCC TTT GTG CGG GAG GGC CTG GAG TTT GCG GTG ATC AGG 1296268 Cys Glu Glu Pro Phe Val Arg Glu Gly Leu Glu Phe Ala Val Ile Arg 2831297 GTG AAG GGC CAG AGC TTC ATG ATG CAT CAG ATC CGG AAG ATG GTC GGC 1344284 Val Lys Gly Gln Ser Phe Met Met His Gln Ile Arg Lys Met Val Gly 2991345 CTG GTG GTG GCC ATT GTG AAG GGT TAT GCC CCT GAG AGC GTG CTG GAG 1392300 Leu Val Val Ala Ile Val Lys Gly Tyr Ala Pro Glu Ser Val Leu Glu 3151393 CGC AGC TGG GGC ACA GAG AAG GTG GAC GTG CCC AAG GCG CCC GGA CTC 1440316 Arg Ser Trp Gly Thr Glu Lys Val Asp Val Pro Lys Ala Pro Gly Leu 3311441 GGC CTG GTC CTG GAG AGG GTG CAC TTC GAG AAG TAC AAC CAG CGC TTT 1488332 Gly Leu Val Leu Glu Arg Val His Phe Glu Lys Tyr Asn Gln Arg Phe 3471489 GGC AAC GAT GGG CTG CAT GAG CCG CTG GAC TGG GCG CAG GAG GAA GGA 1536348 Gly Asn Asp Gly Leu His Glu Pro Leu Asp Trp Ala Gln Glu Glu Gly 3631537 AAG GTC GCA GCC TTC AAG GAG GAG CAC ATC TAC CCC ACC ATC ATC GGC 1584364 Lys Val Ala Ala Phe Lys Glu Glu His Ile Tyr Pro Thr Ile Ile Gly 3791585 ACC GAG CGG GAC GAA CGC TCC ATG GCC CAG TGG CTG AGC ACC TTG CCC 1632380 Thr Glu Arg Asp Glu Arg Ser Met Ala Gln Trp Leu Ser Thr Leu Pro 3951633 ATC CAC AAC TTC AGT GCC ACC GCT CTC ACG GCA GGT GGC ACG GGC GCC 1680 396 Ile His Asn Phe Ser Ala Thr Ala Leu Thr Ala Gly Gly Thr Gly Ala 4111681 AAG GTG CCC ACT CCC CTG GAA GGC AGT GAA GGG GAC GGA GAC ACT GAC 1728412 Lys Val Pro Ser Pro Leu Glu Gly Ser Glu Gly Asp Gly Asp Thr Asp 4271729 TGA GGC GAT GGG AGC TGC CCA CCA GAG TGC CTC TGA GCA GCT CAC AGT 1776428 *** 4281777 GTG TGC CCA GAT GTG CCA CCC TCT GTG GGC AGC AAG AAG CTG GGA TCG 18241825 CTG CAG CCA TGT TTT CCC GGC CAT GCC GGC GTT GTA ACC TCA GGA CCT 18721873 TCC CTT GTA GGA ACA GCC TTT CTC GAA TCT GTT TTC AGC TCT TGC ATT 19201921 GCA TAG ATG AAC CTC AGC ATG TAA AGA ACT ATT TTT TTA AAG AAG TGA 19681969 TTT TCT TAT TAA ACA AGT ACA AAT TTT GCT TAG TCA AAA AAA AAA AAA 20162017 AAA A 202012.PP9003A:核苷酸序列(SEQ ID NO:34)长度:20561 GAGACTTTCC TCCAGGGGCT TCCTCACTGG GGAATTGCCC GAAAGAGCAA ACAAAAAAGG61 CGCTGGTGTA GGCTCCAAAA TAAACACATC TGAATTCATG ATGGCATCGA CAGAGGCTCT121 TATTGGATTA AAAGTTTCAA AACAAACAAT AACGCTTTGG AAAAAGGGTT GAATGCACCC181 TCAGGCACGA CCATGGAGAA AGGTGGGAAC ATACAATTGG AGATTCCTGA CTTCAGCAAC241 TCTGTCCTGA GCCATCTAAA CCAGTTGCGC ATGCAGGGCC GTCTCTGTGA TATTGTGGTC301 AATGTGCAAG GACAAGCTTT TCGGGCTCAC AAAGTGGTGC TGGCTGCCAG CTCCCCCTAT361 TTCCGGGATC ACATGTCCTT GAATGAGATG AGTACAGTCT CCATTTCAGT CATCAAGAAC421 CCTACTGTTT TTGAACAGCT CCTTTCTTTC TGTTACACAG GGCGGATATG CCTGCAACTG481 GCAGATATCA TCAGCTACCT AACAGCTGCC AGTTTTCTGC AAATGGAGCA TATTATAGAC541 AAATGTACAC AGATCCTGGA GGGCATTCAT TTTCAAAAAT TAATGTGGCT GAGGTTGAAG601 CAGAATTAAG TCAAACAAGG ACAAAGCATC AAGAGAGACC TCCAGAGTCT CACAGGGTTA661 CACCAAATCT CAACCGCTCC CTTAGCCCAC GACATAATAC CCCAAAGGGA AACCGGCGAG721 GTCAGGTTAG TGCTGTGCTG GATATCAGAG AGCTAAGTCC TCCTGAGGAG TCCACCAGCC781 CTCAGATCAT TGAACCAAGT TCTGATGTAG AGAGCCGGGA GCCCATTCTT CGGATCAACC841 GAGCAGGACA GTGGTATGTG GAGACAGGAG TGGCGGACCG TGGGGGTCGG AGTGATGATG901 AAGTTAGAGT TCTTGGAGCA GTACACATCA AAACTGAAAA TCTGGAGGAG TGGCTTGGGC961 CTGAGAATCA GCCTTCTGGA GAAGATGGGA GTAGTGCAGA GGAAGTAACA GCCATGGTGA1021 TTGATACCAC AGGCCATGGT TCTGTACGAG AGGAAAATTA TACTTTAGGG TCTTCAGGAG1081 CCAAGGTGGC TCGGCCAACA AGCAGTGAAG TTGACAGATT TAGCCCCTCC GGCAGTGTTG1141 TTCCCTTGAC AGAGAGACAC AGAGCCAGAA GTGAGTCTRC TGGGAGAATG GATGAGCCTA1201 AGCAACCCAG CTCCCAGGTA GAAGAGTCAG CAATGATGGG AGTAAGTGGC TATGTGGAGT1261 ATCTCCGAGA GCAGGAAGTA TCTGAGCGGT GGTTCCGGTA CAACCCTCGT CTCACCTGCA1321 TCTATTGCGC CAAATCTTTC AACCAGAAGG GAAGCCTGGA CCGCCACATG CGCCTACACA1381 TGGGGATCAC ACCATTCGTC TGCCGGATGT GTCGCAAGAA GTATACCCCG AAAGATCAGC1441 TGGAGTATCA TATCCGCAAG CACACAGGCA ACAAGCCCTT TCACTGTCAT GTCTGTGGCA1501 AAAGTTTCCC CTTCCAGGCC ATCTTGAATC AGCACTTTCG CAAAAACCAC CCTGGCTGTA1561 TACCCCTGGA GGGGCCTCAC AGCATCTCCC CTGAAACAAC TGTCACATCT CGAGGACAAG1621 CTGAGGAAGA GTCACCTTCA CAGGAAGAGA CAGTTGCTCC TGGGGAAGCT GTCCAGGGCT1681 CTGTGTCCAC CACTGGGCCA GACTGAAACA TCCAGGGGGA GGGGGCTGAC CCTCTTCCCC1741 TTTGAGCCAT AAGCAGCCAG CATCAGAGCC ATGGGCTGAT ACTTAGATTC ACAAAATGCC1801 ACATCACTAG GCCAGAAGAT GCTCCCAAGA TGTTGCCAAA CTGGAGGATC AGCAACTTAC1861 ACAAAAGCAC TAAAGGCTCC TCCCTTCTTA TTGCCCGCCT CACACTTTGG AAAATAATCA1921 AGCAAATCAA CTTTCTAATT CAGGGATCAA CAGCCTTGGT TTGTTAACTT TATAAGAAAA1981 AAGGTTTTTT TAACAAAACG ATGATGATAA ATGGTCATTT ATCTATCAAA AAAAAAAAAA2041 AAAAAAAAAA AAAAAAB:氨基酸序列(SEQ ID NO:35)长度:412 1 MPATGRYHQL PNSCQFSANA AYYRQMYTDP GGHSFSKINV AEVEAELSQT RTKHQERPPE61 SHRVTPNLNR SLSPRHNTPK GNRRGQVSAV LDIRELSPPE ESTSPQIIEP SSDVESREPI121 LRINRAGQWY VETGVADRGG RSDDEVRVLG AVHIKTENLE EWLGPENQPS GEDGSSAEEV181 TAMVIDTTGH GSVGQENYTL GSSGAKVARP TSSEVDRFSP SGSVVPLTER HRARSESXGR241 MDEPKQPSSQ VEESAMMGVS GYVEYLREQE VSERWFRYNP RLTCIYCAKS FNQKGSLDRH301 MRLHMGITPF VCRMCGKKYT RKDQLEYHIR KHTGNKPFHC HVCGKSFPFQ AILNQHFRKN361 HPGCIPLEGP HSISPETTVT SRGQAEEESP SQEETVAPGE AVQGSVSTTG PDC.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO:36) 克隆号:PP9003起始编码子:468 ATG 终止编码子:1704 TGA 蛋白质分子量:45841.281 GA GAC TTT CCT CCA GGG GGT TCC TCA CTG GGG AAT TGC CGG AAA GAG 4748 CAA ACA AAA AAG GGG CTG GTG TAG GCT CCA AAA TAA ACA CAT CTG AAT 9596 TCA TGA TGG CAT CGA CAG AGG CTC TTA TTG GAT TAA AAG TTT CAA AAC 143144 AAA CAA TAA CGC TTT GGA AAA AGG GTT GAA TGC ACC CTC AGG CAC GAC 191192 CAT GGA GAA AGG TGG GAA CAT ACA ATT GGA GAT TCC TGA CTT CAG CAA 239240 CTC TGT CCT GAG CCA TCT AAA CCA GTT GCG CAT GCA GGG CCG TCT CTG 287288 TGA TAT TGT GGT CAA TGT GCA AGG ACA AGC TTT TCG GGC TCA CAA AGT 335336 GGT GCT GGC TGC CAG CTC CCC CTA TTT CCG GGA TCA CAT GTC CTT GAA 383384 TGA GAT GAG TAC AGT CTC CAT TTC AGT CAT CAA GAA CCC TAC TGT TTT 431432 TGA ACA GCT CCT TTC TTT CTG TTA CAC AGG GCG GAT ATG CCT GCA ACT 4791 Met Pro Ala Thr 4480 CCC AGA TAT CAT CAG CTA CCT AAC AGC TGC CAG TTT TCT GCA AAT GCA 5275 Gly Arg Tyr His Gln Leu Pro Asn Ser Cys Gln Phe Ser Ala Asn Ala 20528 GCA TAT TAT AGA CAA ATG TAC ACA GAT CCT GGA GGG CAT TCA TTT TCA 57521 Ala Tyr Tyr Arg Gln Met Tyr Thr Asp Pro Gly Gly His Ser Phe Ser 36576 AAA ATT AAT GTG GCT GAG GTT GAA GCA GAA TTA AGT CAA ACA AGG ACA 62337 Lys Ile Asn Val Ala Glu Val Glu Ala Glu Leu Ser Gln Thr Arg Thr 52624 AAG CAT CAA GAG AGA CCT CCA GAG TCT CAC AGG GTT ACA CCA AAT CTC 67153 Lys His Gln Glu Arg Pro Pro Glu Ser His Arg Val Thr Pro Asn Leu 68672 AAC CGC TCC CTT AGC CCA CGA CAT AAT ACC CCA AAG GGA AAC CGG CGA 71969 Asn Arg Ser Leu Ser Pro Arg His Asn Thr Pro Lys Gly Asn Arg Arg 84720 GGT CAG GTT AGT GCT GTG CTG GAT ATC AGA GAG CTA AGT CCT CCT GAG 76785 Gly Gln Val Ser Ala Val Leu Asp Ile Arg Glu Leu Ser Pro Pro Glu 100768 GAG TCC ACC ACC CCT CAG ATC ATT GAA CCA AGT TCT GAT GTA GAG AGC 815101 Glu Ser Thr Ser Pro Gln Ile Ile Glu Pro Ser Ser Asp Val Glu Ser 116816 CGG GAG CCC ATT CTT CGG ATC AAC CGA GCA GGA CAG TGG TAT GTG GAG 863117 Arg Glu Pro Ile Leu Arg Ile Asn Arg Ala Gly Gln Trp Tyr Val Glu 132864 ACA GGA GTG GCG GAC CGT GGG GGT CGG AGT GAT GAT GAA GTT AGA GTT 911133 Thr Gly Val Ala Asp Arg Gly Gly Arg Ser Asp Asp Glu Val Arg Val 148912 CTT GGA GCA GTA CAC ATC AAA ACT GAA AAT CTG GAG GAG TGG CTT GGG 959149 Leu Gly Ala Val His Ile Lys Thr Glu Asn Leu Glu Glu Trp Leu Gly 164960 CCT GAG AAT CAG CCT TCT GGA GAA GAT GGG AGT AGT GCA GAG GAA GTA 1007165 Pro Glu Asn Gln Pro Ser Gly Glu Asp Gly Ser Ser Ala Glu Glu Val 1801008 ACA GCC ATG GTG ATT GAT ACC ACA GGC CAT GGT TCT GTA GGA CAG GAA 1055181 Thr Ala Met Val Ile Asp Thr Thr Gly His Gly Ser Val Gly Gln Glu 1961056 AAT TAT ACT TTA GGG TCT TCA GGA GCC AAG GTG GCT CGG CCA ACA AGC 1103197 Asn Tyr Thr Leu Gly Ser Ser Gly Ala Lys Val Ala Arg Pro Thr Ser 2121104 AGT GAA GTT GAC AGA TTT AGC CCC TCC GGC AGT GTT GTT CCC TTG ACA 1151213 Ser Glu Val Asp Arg Phe Ser Pro Ser Gly Ser Val Val Pro Leu Thr 2281152 GAG AGA CAC AGA GCC AGA AGT GAG TCT RCT GGG AGA ATG GAT GAG CCT 1199229 Glu Arg His Arg Ala Arg Ser Glu Ser Xxx Gly Arg Met Asp Glu Pro 2441200 AAG CAA CCC AGC TCC CAG GTA GAA GAG TCA GCA ATG ATG GGA GTA AGT 1247245 Lys Gln Pro Ser Ser Gln Val Glu Glu Ser Ala Met Met Gly Val Ser 2601248 GGC TAT GTG GAG TAT CTC CGA GAG CAG GAA GTA TCT GAG CGG TGG TTC 1295261 Gly Tyr Val Glu Tyr Leu Arg Glu Gln Glu Val Ser Glu Arg Trp Phe 2761296 CGG TAC AAC CCT CGT CTC ACC TGC ATC TAT TGC GCC AAA TCT TTC AAC 1343277 Arg Tyr Asn Pro Arg Leu Thr Cys Ile Tyr Cys Ala Lys Ser Phe Asn 2921344 CAG AAG GGA AGC CTG GAC CGC CAC ATG CGC CTA CAC ATG GGG ATC ACA 1391293 Gln Lys Gly Ser Leu Asp Arg His Met Arg Leu His Met Gly Ile Thr 3081392 CCA TTC GTC TGC CGC ATG TGT GGC AAG AAG TAT ACC CGG AAA GAT CAG 1439309 Pro Phe Val Cys Arg Met Cys Gly Lys Lys Tyr Thr Arg Lys Asp Gln 3241440 CTG GAG TAT CAT ATC CGC AAG CAC ACA GGC AAC AAG CCC TTT CAC TGT 1487325 Leu Glu Tyr His Ile Arg Lys His Thr Gly Asn Lys Pro Phe His Cys 3401488 CAT GTC TGT GGC AAA AGT TTC CCC TTC CAG GCC ATC TTG AAT CAG CAC 1535341 His Val Cys Gly Lys Ser Phe Pro Phe Gln Ala Ile Leu Asn Gln His 3561536 TTT CGC AAA AAC CAC CCT GGC TGT ATA CCC CTG GAG GGG CCT CAC AGC 1583357 Phe Arg Lys Asn His Pro Gly Cys Ile Pro Leu Glu Gly Pro His Ser 3721584 ATC TCC CCT GAA ACA ACT GTC ACA TCT CGA GGA CAA GCT GAG GAA GAG 1631373 Ile Ser Pro Glu Thr Thr Val Thr Ser Arg Gly Gln Ala Glu Glu Glu 3881632 TCA CCT TCA CAG GAA GAG ACA GTT GCT CCT GGG GAA GCT GTC CAG GGC 1679389 Ser Pro Ser Gln Glu Glu Thr Val Ala Pro Gly Glu Ala Val Gln Gly 4041680 TCT GTG TCC ACC ACT GGG CCA GAC TGA AAC ATC CAG GGG GAG GGG GCT 1727405 Ser Val Ser Thr Thr Gly Pro Asp *** 4131728 GAC CCT CTT CCC CTT TGA GCC ATA AGC AGC CAG CAT CAG AGC CAT GGG 17751776 CTG ATA CTT AGA TTC ACA AAA TGC CAC ATC ACT AGG CCA GAA GAT GCT 18231824 CCC AAG ATG TTG CCA AAC TGG AGG ATC AGC AAC TTA CAC AAA AGC ACT 18711872 AAA GGC TCC TCC CTT CTT ATT GCC CGC CTC ACA CTT TGG AAA ATA ATC 19191920 AAG CAA ATC AAC TTT CTA ATT CAG GGA TCA ACA GCC TTG GTT TGT TAA 19671968 CTT TAT AAG AAA AAA GGT TTT TTT AAC AAA ACG ATG ATG ATA AAT GGT 20152016 CAT TTA TCT ATC AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AA 2056
Claims (10)
1.一种分离的具有抑癌功能的人蛋白,其特征在于,它包含具有选自下组的氨基酸序列的多肽:SEQ ID NO:2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35;
或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。
2.如权利要求1所述的多肽,其特征在于,该多肽是具有选自下组的氨基酸序列的多肽:SEQ ID NO:2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35。
3.一种分离的多核苷酸,其特征在于,它包含一核苷酸序列,该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少85%相同性:
(a)编码如权利要求1和2所述多肽的多核苷酸;
(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。
4.如权利要求3所述的多核苷酸,其特征在于,该多核苷酸编码的多肽具有选自下组的氨基酸序列:SEQ ID NO:2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35。
5.如权利要求3所述的多核苷酸,其特征在于,该多核苷酸的序列选自下组:
SEQ ID NO:3、6、9、12、15、18、21、24、27、30、33、36的编码区序列或全长序列。
6.一种载体,其特征在于,它含有权利要求3所述的多核苷酸。
7.一种遗传工程化的宿主细胞,其特征在于,它是选自下组的一种宿主细胞:
(a)用权利要求6所述的载体转化或转导的宿主细胞;
(b)用权利要求3所述的多核苷酸转化或转导的宿主细胞。
8.一种具有抑癌功能的人蛋白活性的多肽的制备方法,其特征在于,该方法包含:
(a)在适合表达具有抑癌功能的人蛋白的条件下,培养权利要求7所述的宿主细胞;
(b)从培养物中分离出具有抑癌功能的人蛋白活性的多肽。
9.一种能与权利要求1所述的具有抑癌功能的人蛋白特异性结合的抗体。
10.一种药物组合物,其特征在于,它含有安全有效量的权利要求1所述的多肽以及药学上可接受的载体。
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