CN1313315A - 具有抑制癌细胞生长功能的新的人蛋白及其编码序列 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一类新的具有抑癌功能的人蛋白,编码此多肽的多核苷酸和经重组技术产生该多肽的方法。本发明还公开了此多肽用于治疗多种疾病如癌症等的方法。本发明还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明还公开了编码这类新的具有抑癌功能的人蛋白的多核苷酸的用途。

Description

具有抑制癌细胞生长功能的新的人蛋白及其编码序列
本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明涉及新的编码具有抑癌功能的人蛋白的多核苷酸，以及此多核苷酸编码的多肽。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的用途和制备。
人基因组学研究目前是国际上的热点，除人染色体DNA大规模测序，表达序列测序(EST)的方法外，还缺少从功能开始的筛选具有功能基因的高通量的方法。
癌症是危害人类健康的主要疾病之一。为了有效地治疗和预防肿瘤，目前人们已越来越关注肿瘤的基因治疗。因此，本领域迫切需要开发研究具有抑癌功能的人蛋白及其激动剂/抑制剂。
本发明的目的是提供一类新的具有抑癌功能的人蛋白多肽以及其片段、类似物和衍生物。
本发明的另一目的是提供编码这些多肽的多核苷酸。
本发明的另一目的是提供生产这些多肽的方法以及该多肽和编码序列的用途。
在本发明的第一方面，提供新颖的分离出的具有抑癌功能的蛋白多肽，它包含具有选自下组的氨基酸序列的多肽：SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ IDNO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:26；或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。
较佳地，该多肽是具有选自下组的氨基酸序列的多肽：SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ IDNO:23、SEQ ID NO:26。
在本发明的第二方面，提供了一种分离的多核苷酸，它包含一核苷酸序列，该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少85％相同性：(a)编码上述的具有抑癌功能的蛋白多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。较佳地，该多核苷酸编码的多肽具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ IDNO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:26。更佳地，该多核苷酸的序列选自下组：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:27的编码区序列或全长序列。
在本发明的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的载体，以及被该载体转化或转导的宿主细胞或者被上述多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞。
在本发明的第四方面，提供了制备具有具有抑癌功能的蛋白活性的多肽的制备方法，该方法包含：(a)在适合表达具有抑癌功能的蛋白的条件下，培养上述被转化或转导的宿主细胞；(b)从培养物中分离出具有具有抑癌功能的蛋白活性的多肽。
在本发明的第五方面，提供了与上述的具有抑癌功能的蛋白多肽特异性结合的抗体。还提供了可用于检测的核酸分子，它含有上述的多核苷酸中连续的10-800个核苷酸。
在本发明的第六方面，提供了一种药物组合物，它含有安全有效量的本发明的具有抑癌功能的蛋白多肽以及药学上可接受的载体。这些药物组合物可治疗癌症以及细胞异常增殖等病症。
本发明的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。
本发明采用大规模cDNA克隆转染癌细胞，在获得具有抑癌作用的基础上，经测序证明为新的基因，进一步得到全长cDNA克隆。DNA转染试验证明，本发明的具有抑癌功能的蛋白对癌细胞(肝癌细胞)具有抑制克隆形成的作用，其抑制率在50％或50％以上。
如本文所用，“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质，原始环境即是天然环境)。如活体细胞内的天然状态下的多聚核苷酸和多肽是没有分离纯化的，但同样的多聚核苷酸或多肽如从天然状态中同存在的其他物质中分开，则为分离纯化的。
如本文所用，“分离的具有抑癌功能的蛋白或多肽”是指具有抑癌功能的蛋白多肽基本上不含天然与其相关的其它蛋白、脂类、糖类或其它物质。本领域的技术人员能用标准的蛋白质纯化技术纯化具有抑癌功能的蛋白。基本上纯的多肽在非还原聚丙烯酰胺凝胶上能产生单一的主带。具有抑癌功能的蛋白多肽的纯度能用氨基酸序列分析。
本发明的多肽可以是重组多肽、天然多肽、合成多肽，优选重组多肽。本发明的多肽可以是天然纯化的产物，或是化学合成的产物，或使用重组技术从原核或真核宿主(例如，细菌、酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞)中产生。根据重组生产方案所用的宿主，本发明的多肽可以是糖基化的，或可以是非糖基化的。本发明的多肽还可包括或不包括起始的甲硫氨酸残基。
本发明还包括具有抑癌功能的人蛋白的片段、衍生物和类似物。如本文所用，术语“片段”、“衍生物”和“类似物”是指基本上保持本发明的天然具有抑癌功能的人蛋白相同的生物学功能或活性的多肽。本发明的多肽片段、衍生物或类似物可以是(ⅰ)有一个或多个保守或非保守性氨基酸残基(优选保守性氨基酸残基)被取代的多肽，而这样的取代的氨基酸残基可以是也可以不是由遗传密码编码的，或(ⅱ)在一个或多个氨基酸残基中具有取代基团的多肽，或(ⅲ)成熟多肽与另一个化合物(比如延长多肽半衰期的化合物，例如聚乙二醇)融合所形成的多肽，或(ⅳ)附加的氨基酸序列融合到此多肽序列而形成的多肽(如前导序列或分泌序列或用来纯化此多肽的序列或蛋白原序列)。根据本文的教导，这些片段、衍生物和类似物属于本领域熟练技术人员公知的范围。
本发明的多核苷酸可以是DNA形式或RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因组DNA或人工合成的DNA。DNA可以是单链的或是双链的。DNA可以是编码链或非编码链。以SP82蛋白(在本申请中，蛋白质的命名采用其克隆编号)为例，编码成熟多肽的编码区序列可以与SEQ ID NO:3所示的编码区序列相同或者是简并的变异体。如本文所用，“简并的变异体”在本发明中是指编码具有SEQ ID NO:2的蛋白质，但与SEQ ID NO:3所示的编码区序列有差别的核酸序列。以SP192蛋白(在本申请中，蛋白质的命名采用其克隆编号)为例，编码成熟多肽的编码区序列可以与SEQ ID NO:6所示的编码区序列相同或者是简并的变异体。如本文所用，“简并的变异体”在本发明中是指编码具有SEQ IDNO:5的蛋白质，但与SEQ ID NO:6所示的编码区序列有差别的核酸序列。对于其他具有抑癌功能的蛋白，可依此类推。对于其他具有抑癌功能的蛋白，可依此类推。
编码成熟多肽的多核苷酸包括：只编码成熟多肽的编码序列；成熟多肽的编码序列和各种附加编码序列；成熟多肽的编码序列(和任选的附加编码序列)以及非编码序列。
术语“编码多肽的多核苷酸”可以是包括编码此多肽的多核苷酸，也可以是还包括附加编码和/或非编码序列的多核苷酸。
本发明还涉及上述多核苷酸的变异体，其编码与本发明有相同的氨基酸序列的多肽或多肽的片段、类似物和衍生物。此多核苷酸的变异体可以是天然发生的等位变异体或非天然发生的变异体。这些核苷酸变异体包括取代变异体、缺失变异体和插入变异体。如本领域所知的，等位变异体是一个多核苷酸的替换形式，它可能是一个或多个核苷酸的取代、缺失或插入，但不会从实质上改变其编码的多肽的功能。
本发明还涉及与上述的序列杂交且两个序列之间具有至少50％，较佳地至少70％，更佳地至少80％相同性的多核苷酸。本发明特别涉及在严格条件下与本发明所述多核苷酸可杂交的多核苷酸。在本发明中，“严格条件”是指：(1)在较低离子强度和较高温度下的杂交和洗脱，如0.2×SSC,0.1％SDS,60℃；或(2)杂交时加有变性剂，如50％(v/v)甲酰胺，0.1％小牛血清/0.1％Ficoll,42℃等；或(3)仅在两条序列之间的相同性至少在95％以上，更好是97％以上时才发生杂交。并且，可杂交的多核苷酸编码的多肽与SEQ IDNO:2所示的成熟多肽有相同的生物学功能和活性。
本发明还涉及与上述的序列杂交的核酸片段。如本文所用，“核酸片段”的长度至少含15个核苷酸，较好是至少30个核苷酸，更好是至少50个核苷酸，最好是至少100个核苷酸以上。核酸片段可用于核酸的扩增技术(如PCR)以确定和/或分离编码具有抑癌功能的蛋白的多聚核苷酸。
本发明中的多肽和多核苷酸优选以分离的形式提供，更佳地被纯化至均质。
本发明的DNA序列能用几种方法获得。例如，用本领域熟知的杂交技术分离DNA。这些技术包括但不局限于：1)用探针与基因组或cDNA文库杂交以检出同源性核苷酸序列，和2)表达文库的抗体筛选以检出具有共同结构特征的克隆的DNA片段。
编码具有抑癌功能的蛋白的特异DNA片段序列产生也能用下列方法获得：1)从基因组DNA分离双链DNA序列；2)化学合成DNA序列以获得所需多肽的双链DNA。
上述提到的方法中，分离基因组DNA最不常用。当需要的多肽产物的整个氨基酸序列已知时，DNA序列的直接化学合成是经常选用的方法。如果所需的氨基酸的整个序列不清楚时，DNA序列的直接化学合成是不可能的，选用的方法是cDNA序列的分离。分离感兴趣的cDNA的标准方法是从高表达该基因的供体细胞分离mRNA并进行逆转录，形成质粒或噬菌体cDNA文库。提取mRNA的方法已有多种成熟的技术，试剂盒也可从商业途径获得(Qiagene)。而构建cDNA文库也是通常的方法(Sambrook,et al.,Molecular Cloning,A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory.New York,1989)。还可得到商业供应的cDNA文库，如Clontech公司的不同cDNA文库。当结合使用聚合酶反应技术时，即使极少的表达产物也能克隆。
可用常规方法从这些cDNA文库中筛选本发明的基因。这些方法包括(但不限于)：(1)DNA-DNA或DNA-RNA杂交；(2)标志基因的功能出现或丧失；(3)测定具有抑癌功能的蛋白的转录本的水平；(4)通过免疫学技术或测定生物学活性，来检测基因表达的蛋白产物。上述方法可单用，也可多种方法联合应用。
在第(1)种方法中，杂交所用的探针是与本发明的多核苷酸的任何一部分同源，其长度至少15个核苷酸，较好是至少30个核苷酸，更好是至少50个核苷酸，最好是至少100个核苷酸。此外，探针的长度通常在2kb之内，较佳地为1kb之内。此处所用的探针通常是在本发明的基因DNA序列信息的基础上化学合成的DNA序列。本发明的基因本身或者片段当然可以用作探针。DNA探针的标记可用放射性同位素，荧光素或酶(如碱性磷酸酶)等。
在第(4)种方法中，检测具有抑癌功能的蛋白基因表达的蛋白产物可用免疫学技术如Western印迹法，放射免疫沉淀法，酶联免疫吸附法(ELISA)等。
应用PCR技术扩增DNA/RNA的方法(Saiki,et al.Science 1985；230:1350-1354)被优选用于获得本发明的基因。特别是很难从文库中得到全长的cDNA时，可优选使用RACE法(RACE-cDNA末端快速扩增法)，用于PCR的引物可根据本文所公开的本发明的序列信息适当地选择，并可用常规方法合成。可用常规方法如通过凝胶电泳分离和纯化扩增的DNA/RNA片段。
如上所述得到的本发明的基因，或者各种DNA片段等的核苷酸序列的测定可用常规方法如双脱氧链终止法(Sanger et al.PNAS,1977,74:5463-5467)。这类核苷酸序列测定也可用商业测序试剂盒等。为了获得全长的cDNA序列，测序需反复进行。有时需要测定多个克隆的cDNA序列，才能拼接成全长的cDNA序列。
本发明也涉及包含本发明的多核苷酸的载体，以及用本发明的载体或具有抑癌功能的蛋白编码序列经基因工程产生的宿主细胞，以及经重组技术产生本发明所述多肽的方法。
通过常规的重组DNA技术，可利用本发明的多聚核苷酸序列可用来表达或生产重组的具有抑癌功能的蛋白多肽(Science,1984；224:1431)。一般来说有以下步骤：
(1)．用本发明的编码具有抑癌功能的人蛋白的多核苷酸(或变异体)，或用含有该多核苷酸的重组表达载体转化或转导合适的宿主细胞；
(2)．在合适的培养基中培养的宿主细胞；
(3)．从培养基或细胞中分离、纯化蛋白质。
本发明中，具有抑癌功能的人蛋白多核苷酸序列可插入到重组表达载体中。术语“重组表达载体”指本领域熟知的细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒如腺病毒、逆转录病毒或其他载体。在本发明中适用的载体包括但不限于：在细菌中表达的基于T7的表达载体(Rosenberg,et al.Gene,1987,56:125)；在哺乳动物细胞中表达的pMSXND表达载体(Lee and Nathans,J Bio Chem.263:3521,1988)和在昆虫细胞中表达的来源于杆状病毒的载体。总之，只要能在宿主体内复制和稳定，任何质粒和载体都可以用。表达载体的一个重要特征是通常含有复制起点、启动子、标记基因和翻译控制元件。
本领域的技术人员熟知的方法能用于构建含具有抑癌功能的人蛋白编码DNA序列和合适的转录/翻译控制信号的表达载体。这些方法包括体外重组DNA技术、DNA合成技术、体内重组技术等(Sambroook,et al.Molecular Cloning,a Laboratory Manual,coldSpring Harbor Laboratory.New York,1989)。所述的DNA序列可有效连接到表达载体中的适当启动子上，以指导mRNA合成。这些启动子的代表性例子有：大肠杆菌的lac或trp启动子；λ噬菌体PL启动子；真核启动子包括CMV立即早期启动子、HSV胸苷激酶启动子、早期和晚期SV40启动子、反转录病毒的LTRs和其他一些已知的可控制基因在原核或真核细胞或其病毒中表达的启动子。表达载体还包括翻译起始用的核糖体结合位点和转录终止子。
此外，表达载体优选地包含一个或多个选择性标记基因，以提供用于选择转化的宿主细胞的表型性状，如真核细胞培养用的二氢叶酸还原酶、新霉素抗性以及绿色荧光蛋白(GFP)，或用于大肠杆菌的四环素或氨苄青霉素抗性。
包含上述的适当DNA序列以及适当启动子或者控制序列的载体，可以用于转化适当的宿主细胞，以使其能够表达蛋白质。
宿主细胞可以是原核细胞，如细菌细胞；或是低等真核细胞，如酵母细胞；或是高等真核细胞，如哺乳动物细胞。代表性例子有：大肠杆菌，链霉菌属；鼠伤寒沙门氏菌的细菌细胞；真菌细胞如酵母；植物细胞；果蝇S2或Sf9的昆虫细胞；CHO、COS或Bowes黑素瘤细胞的动物细胞等。
本发明的多核苷酸在高等真核细胞中表达时，如果在载体中插入增强子序列时将会使转录得到增强。增强子是DNA的顺式作用因子，通常大约有10到300个碱基对，作用于启动子以增强基因的转录。可举的例子包括在复制起始点晚期一侧的100到270个碱基对的SV40增强子、在复制起始点晚期一侧的多瘤增强子以及腺病毒增强子等。
本领域一般技术人员都清楚如何选择适当的载体、启动子、增强子和宿主细胞。
用重组DNA转化宿主细胞可用本领域技术人员熟知的常规技术进行。当宿主为原核生物如大肠杆菌时，能吸收DNA的感受态细胞可在指数生长期后收获，用CaCl2法处理，所用的步骤在本领域众所周知。可供选择的是用MgCl2。如果需要，转化也可用电穿孔的方法进行。当宿主是真核生物，可选用如下的DNA转染方法：磷酸钙共沉淀法，常规机械方法如显微注射、电穿孔、脂质体包装等。
获得的转化子可以用常规方法培养，表达本发明的基因所编码的多肽。根据所用的宿主细胞，培养中所用的培养基可选自各种常规培养基。在适于宿主细胞生长的条件下进行培养。当宿主细胞生长到适当的细胞密度后，用合适的方法(如温度转换或化学诱导)诱导选择的启动子，将细胞再培养一段时间。
在上面的方法中的重组多肽可包被于细胞内、细胞外或在细胞膜上表达或分泌到细胞外。如果需要，可利用其物理的、化学的和其它特性通过各种分离方法分离和纯化重组的蛋白。这些方法是本领域技术人员所熟知的。这些方法的例子包括但并不限于：常规的复性处理、用蛋白沉淀剂处理(盐析方法)、离心、渗透破菌、超处理、超离心、分子筛层析(凝胶过滤)、吸附层析、离子交换层析、高效液相层析(HPLC)和其它各种液相层析技术及这些方法的结合。
重组的具有抑癌功能的人蛋白或多肽有多方面的用途。这些用途包括(但不限于)：直接做为药物治疗具有抑癌功能的蛋白功能低下或丧失所致的疾病，和用于筛选促进或对抗具有抑癌功能的蛋白功能的抗体、多肽或其它配体。例如，抗体可用于激活或抑制具有抑癌功能的人蛋白的功能。用表达的重组具有抑癌功能的人蛋白筛选多肽库可用于寻找有治疗价值的能抑制或刺激具有抑癌功能的人蛋白功能的多肽分子。
本发明也提供了筛选药物以鉴定提高(激动剂)或阻遏(拮抗剂)具有抑癌功能的人蛋白的药剂的方法。激动剂提高具有抑癌功能的人蛋白刺激细胞增殖等生物功能，而拮抗剂阻止和治疗与细胞过度增殖有关的紊乱如各种癌症。例如，能在药物的存在下，将哺乳动物细胞或表达具有抑癌功能的人蛋白的膜制剂与标记的具有抑癌功能的人蛋白一起培养。然后测定药物提高或阻遏此相互作用的能力。
具有抑癌功能的人蛋白的拮抗剂包括筛选出的抗体、化合物、受体缺失物和类似物等。具有抑癌功能的人蛋白的拮抗剂可以与具有抑癌功能的人蛋白结合并消除其功能，或是抑制具有抑癌功能的人蛋白的产生，或是与多肽的活性位点结合使多肽不能发挥生物学功能。具有抑癌功能的人蛋白的拮抗剂可用于治疗用途。
在筛选作为拮抗剂的化合物时，可以将具有抑癌功能的蛋白加入生物分析测定中，通过测定化合物影响具有抑癌功能的蛋白和其受体之间的相互作用来确定化合物是否是拮抗剂。用上述筛选化合物的同样方法，可以筛选出起拮抗剂作用的受体缺失物和类似物。
本发明的多肽可直接用于疾病治疗，例如，各种恶性肿瘤、和细胞异常增殖等。
本发明的多肽，及其片段、衍生物、类似物或它们的细胞可以用来作为抗原以生产抗体。这些抗体可以是多克隆或单克隆抗体。多克隆抗体可以通过将此多肽直接注射动物的方法得到。制备单克隆抗体的技术包括杂交瘤技术，三瘤技术，人B-细胞杂交瘤技术，EBV-杂交瘤技术等。
可以将本发明的多肽和拮抗剂与合适的药物载体组合后使用。这些载体可以是水、葡萄糖、乙醇、盐类、缓冲液、甘油以及它们的组合。组合物包含安全有效量的多肽或拮抗剂以及不影响药物效果的载体和赋形剂。这些组合物可以作为药物用于疾病治疗。
本发明还提供含有一种或多种容器的药盒或试剂盒，容器中装有一种或多种本发明的药用组合物成分。与这些容器一起，可以有由制造、使用或销售药品或生物制品的政府管理机构所给出的指示性提示，该提示反映出生产、使用或销售的政府管理机构许可其在人体上施用。此外，本发明的多肽可以与其它的治疗化合物结合使用。
药物组合物可以以方便的方式给药，如通过局部、静脉内、腹膜内、肌内、皮下、鼻内或皮内的给药途径。具有抑癌功能的蛋白以有效地治疗和/或预防具体的适应症的量来给药。施用于患者的具有抑癌功能的蛋白的量和剂量范围将取决于许多因素，如给药方式、待治疗者的健康条件和诊断医生的判断。
具有抑癌功能的人蛋白的多聚核苷酸也可用于多种治疗目的。基因治疗技术可用于治疗由于具有抑癌功能的蛋白的无表达或异常/无活性的具有抑癌功能的蛋白的表达所致的细胞增殖、发育或代谢异常。重组的基因治疗载体(如病毒载体)可设计成表达变异的具有抑癌功能的蛋白，以抑制内源性的具有抑癌功能的蛋白活性。例如，一种变异的具有抑癌功能的蛋白可以是缩短的、缺失了信号传导功能域的具有抑癌功能的蛋白，虽可与下游的底物结合，但缺乏信号传导活性。因此重组的基因治疗载体可用于治疗具有抑癌功能的蛋白表达或活性异常所致的疾病。来源于病毒的表达载体如逆转录病毒、腺病毒、腺病毒相关病毒、单纯疱疹病毒、细小病毒等可用于将具有抑癌功能的蛋白基因转移至细胞内。构建携带具有抑癌功能的蛋白基因的重组病毒载体的方法可见于已有文献(Sambrook,et al.)。另外重组具有抑癌功能的人蛋白基因可包装到脂质体中转移至细胞内。
抑制具有抑癌功能的人蛋白mRNA的寡聚核苷酸(包括反义RNA和DNA)以及核酶也在本发明的范围之内。核酶是一种能特异性分解特定RNA的酶样RNA分子，其作用机制是核酶分子与互补的靶RNA特异性杂交后进行核酸内切作用。反义的RNA和DNA及核酶可用已有的任何RNA或DNA合成技术获得，如固相磷酸酰胺化学合成法合成寡核苷酸的技术已广泛应用。反义RNA分子可通过编码该RNA的DNA序列在体外或体内转录获得。这种DNA序列已整合到载体的RNA聚合酶启动子的下游。为了增加核酸分子的稳定性，可用多种方法对其进行修饰，如增加两侧的序列长度，核糖核苷之间的连接应用磷酸硫酯键或肽键而非磷酸二酯键。
多聚核苷酸导入组织或细胞内的方法包括：将多聚核苷酸直接注入到体内组织中；或在体外通过载体(如病毒、噬菌体或质粒等)先将多聚核苷酸导入细胞中，再将细胞移植到体内等。
本发明的多肽还可用作肽谱分析，例如，多肽可用物理的、化学或酶进行特异性切割，并进行一维或二维或三维的凝胶电泳分析。
本发明还提供了针对具有抑癌功能的人蛋白抗原决定簇的抗体。这些抗体包括(但不限于)：多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、单链抗体、Fab片段和Fab表达文库产生的片段。
抗具有抑癌功能的人蛋白的抗体可用于免疫组织化学技术中，检测活检标本中的具有抑癌功能的人蛋白。
与具有抑癌功能的人蛋白结合的单克隆抗体也可用放射性同位素标记，注入体内可跟踪其位置和分布。这种放射性标记的抗体可作为一种非创伤性诊断方法用于肿瘤细胞的定位和判断是否有转移。
本发明中的抗体可用于治疗或预防与具有抑癌功能的人蛋白相关的疾病。给予适当剂量的抗体可以刺激或阻断具有抑癌功能的人蛋白的产生或活性。
抗体也可用于设计针对体内某一特殊部位的免疫毒素。如具有抑癌功能的人蛋白高亲和性的单克隆抗体可与细菌或植物毒素(如白喉毒素，蓖麻蛋白，红豆碱等)共价结合。一种通常的方法是用巯基交联剂如SPDP，攻击抗体的氨基，通过二硫键的交换，将毒素结合于抗体上，这种杂交抗体可用于杀灭具有抑癌功能的人蛋白阳性的细胞。
多克隆抗体的生产可用具有抑癌功能的人蛋白或多肽免疫动物，如家兔，小鼠，大鼠等。多种佐剂可用于增强免疫反应，包括但不限于弗氏佐剂等。
具有抑癌功能的人蛋白单克隆抗体可用杂交瘤技术生产(Kohler and Milstein.Nature,1975,256:495-497)。将人恒定区和非人源的可变区结合的嵌合抗体可用已有的技术生产(Morrison et al,PNAS,1985,81:6851)。而已有的生产单链抗体的技术(U.S.PatNo.4946778)也可用于生产抗具有抑癌功能的人蛋白的单链抗体。
能与具有抑癌功能的人蛋白结合的多肽分子可通过筛选由各种可能组合的氨基酸结合于固相物组成的随机多肽库而获得。筛选时，必须对具有抑癌功能的人蛋白分子进行标记。
本发明还涉及定量和定位检测具有抑癌功能的人蛋白水平的诊断试验方法。这些试验是本领域所熟知的，且包括FISH测定和放射免疫测定。试验中所检测的具有抑癌功能的人蛋白水平，可以用作解释具有抑癌功能的人蛋白在各种疾病中的重要性和用于诊断具有抑癌功能的蛋白起作用的疾病。
具有抑癌功能的蛋白的多聚核苷酸可用于具有抑癌功能的蛋白相关疾病的诊断和治疗。在诊断方面，具有抑癌功能的蛋白的多聚核苷酸可用于检测具有抑癌功能的蛋白的表达与否或在疾病状态下具有抑癌功能的蛋白的异常表达。如具有抑癌功能的蛋白DNA序列可用于对活检标本的杂交以判断具有抑癌功能的蛋白的表达异常。杂交技术包括Southern印迹法，Northern印迹法、原位杂交等。这些技术方法都是公开的成熟技术，相关的试剂盒都可从商业途径得到。本发明的多核苷酸的一部分或全部可作为探针固定在微阵列(Microarray)或DNA芯片(又称为“基因芯片”)上，用于分析组织中基因的差异表达分析和基因诊断。用具有抑癌功能的蛋白特异的引物进行RNA-聚合酶链反应(RT-PCR)体外扩增也可检测具有抑癌功能的蛋白的转录产物。
检测具有抑癌功能的蛋白基因的突变也可用于诊断具有抑癌功能的蛋白相关的疾病。具有抑癌功能的蛋白突变的形式包括与正常野生型具有抑癌功能的蛋白DNA序列相比的点突变、易位、缺失、重组和其它任何异常等。可用已有的技术如Southern印迹法、DNA序列分析、PCR和原位杂交检测突变。另外，突变有可能影响蛋白的表达，因此用Northern印迹法、Western印迹法可间接判断基因有无突变。
本发明的序列对染色体鉴定也是有价值的。该序列会特异性地针对某条人染色体具体位置且并可以与其杂交。目前，需要鉴定染色体上的各基因的具体位点。现在，只有很少的基于实际序列数据(重复多态性)的染色体标记物可用于标记染色体位置。根据本发明，为了将这些序列与疾病相关基因相关联，其重要的第一步就是将这些DNA序列定位于染色体上。
简而言之，根据cDNA制备PCR引物(优选15-35bp)，可以将序列定位于染色体上。然后，将这些引物用于PCR筛选含各条人染色体的体细胞杂合细胞。只有那些含有相应于引物的人基因的杂合细胞会产生扩增的片段。
体细胞杂合细胞的PCR定位法，是将DNA定位到具体染色体的快捷方法。使用本发明的的寡核苷酸引物，通过类似方法，可利用一组来自特定染色体的片段或大量基因组克隆而实现亚定位。可用于染色体定位的其它类似策略包括原位杂交、用标记的流式分选的染色体预筛选和杂交预选，从而构建染色体特异的cDNA库。
将cDNA克隆与中期染色体进行荧光原位杂交(FISH)，可以在一个步骤中精确地进行染色体定位。此技术的综述，参见Verma等，Human Chromosomes:a Manual of BasicTechniques,Pergamon Press,New York(1988)。
一旦序列被定位到准确的染色体位置，此序列在染色体上的物理位置就可以与基因图数据相关联。这些数据可见于例如，V.Mckusick,Mendelian Inheritance in Man(可通过与Johns Hopkins University Welch Medical Library联机获得)。然后可通过连锁分析，确定基因与业已定位到染色体区域上的疾病之间的关系。
接着，需要测定患病和未患病个体间的cDNA或基因组序列差异。如果在一些或所有的患病个体中观察到某突变，而该突变在任何正常个体中未观察到，则该突变可能是疾病的病因。比较患病和未患病个体，通常涉及首先寻找染色体中结构的变化，如从染色体水平可见的或用基于cDNA序列的PCR可检测的缺失或易位。根据目前的物理作图和基因定位技术的分辨能力，被精确定位至与疾病有关的染色体区域的cDNA，可以是50至500个潜在致病基因间之一种(假定1兆碱基作图分辨能力和每20kb对应于一个基因)。
本发明的具有抑癌功能的蛋白核苷酸全长序列或其片段通常可以用PCR扩增法、重组法或人工合成的方法获得。对于PCR扩增法，可根据本发明所公开的有关核苷酸序列，尤其是开放阅读框序列来设计引物，并用市售的cDNA库或按本领域技术人员已知的常规方法所制备的cDNA库作为模板，扩增而得有关序列。当序列较长时，常常需要进行两次或多次PCR扩增，然后再将各次扩增出的片段按正确次序拼接在一起。
一旦获得了有关的序列，就可以用重组法来大批量地获得有关序列。这通常是将其克隆入载体，再转入细胞，然后通过常规方法从增殖后的宿主细胞中分离得到有关序列。
此外，还可用人工合成的方法来合成有关序列，尤其是片段长度较短时。通常，通过先合成多个小片段，然后再进行连接可获得序列很长的片段。
目前，已经可以完全通过化学合成来编码本发明蛋白(或其片段，或其衍生物)的DNA序列。然后可将该DNA序列引入本领域中的各种DNA分子(如载体)和细胞中。此外，还可通过化学合成将突变引入本发明蛋白序列中。
此外，由于本发明的具有抑癌功能的蛋白具有源自人的天然氨基酸序列，因此，与来源于其他物种的同族蛋白相比，预计在施用于人时将具有更高的活性和/或更低的副作用(例如在人体内的免疫原性更低或没有)。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring Harbor LaboratoryPress,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1：cDNA基因的获得及对癌细胞克隆形成的抑制作用
SP82,SP192，来自于GIBCO BRL公司购得肝cDNA文库(cat,NO.10422-012)PP79,PP1009,PP1045,PP1195,PP1345,PP1744和PP1757是通过用常规方法构建人胎盘cDNA文库获得的。取3、6、10月龄的胎盘组织，用Trizol试剂(GIBCO BRL公司)按厂方说明书提取总RNA，用mRNA提纯试剂盒(pharmacia公司)提取mRNA。用pCMV-script TMXR cDNA文库构建试剂盒(Stratagene公司)构建上述mRNA的cDNA文库。其中反转录酶改用MMLV-RT-SuperscriptⅡ(GIBCO BRL)，反转录反应在42℃进行。转化XL 10-Gold感受细胞，获得了1×106cfu/μg cDNA滴度的cDNA文库。第一轮随机挑取cDNA克隆，其后以高丰度cDNA克隆和已证明有抑癌细胞生长功能的cDNA克隆为探针，杂交筛选cDNA文库，挑取弱阳性及阴性克隆。用Qiagen96孔板质粒抽提试剂盒，按厂家说明书进行质粒DNA的提取。质粒DNA和空载体同时转染肝癌细胞系7721。100ng DNA酒精沉淀干燥后，加6μl H2O溶解，待转染。每份DNA样品中加0.74μl脂质体及9.3μl无血清培液，混匀后，室温放置10分钟。每管中加150μl无血清培液，均分加入3孔生长于96孔板的7721细胞中，37℃放置2小时，每孔再加50μl无血清培液，37℃24小时。每孔换100μl全培液，37℃24小时，换含G418的全培液100μl，37℃24～48小时，边观察，边换G418浓度不等的培液。约2～3次后，直到镜检细胞有克隆形成，计数。发现上述克隆有抑制细胞克隆形成作用，结果如下表所示。
                   cDNA克隆转染细胞(7721)克隆形成情况
cDNA克隆名称 CDNA克隆数(三个重复)空载体克隆数(三个重复)
    SP82SP192PP79PP1009PP1045PP1195PP1345PP1744PP1757     17   32    31   16    15    234    3     4    17    12    718   31    15   38    12    401    1     1    54    45    402    1     0    32    39    3722   26    4    30    37    4115   13    12   34    31    304    2     6    10    18    96    6     2    10    18    9
对cDNA克隆采用双脱氧终止法，在ABI377 DNA自动测序仪上测定其一端近500bp的核苷酸序列。分析后，确定为新基因克隆，进行另一端测序，仍未获得全长cDNA序列，设计引物，再次进行测序，直到获得全长序列(SEQ ID N0:1、4、7、10、13、16、19、22、25)。
实施例2：从胎盘cDNA中PCR获得全长基因：
取3、6、10月龄的胎盘组织，用Trizol试剂(GIBCO BRL公司)按厂方说明书提取总RNA，用mRNA提纯试剂盒(pharmacia公司)提取mRNA。用MMLV-RT-SuperscriptⅡ(GIBCO BRL)反转录酶在42℃进行反转录反应，获得胎盘cDNA。利用各个基因的转异引物(如下表所示)，按90℃3分钟1个循环：94℃30秒，60℃30秒，72℃1分钟，共35个循环；72℃10分钟，1个循环，进行PCR扩增，获得含有完整开放阅读框序列的各蛋白基因的扩增产物。扩增产物经测序验证，与实施例1测得的序列相符，随后用常规技术将扩增产物转入宿主细胞，以获得重组蛋白。
                         基因特异引物
克隆名称     特异引物1(5′→3′)     特异引物2(5′→3′)
 SP82SP192PP79PP1009PP1045PP1195PP1345PP1744PP1757 TCAAAAAGGCACCCCAACCTTGCTCTGGGATCCTGGCCATGAGGTTAGCCACCATGCCAGGCCCTCTTATGAGATTACCGACGAGCCGCCTTTCAGCCCAGCTCCTCTGCTGACACATCCTGCTCCATGAAGGCCGACCCCGGGCACTTGAGCTCCTCATAAGGTGGAGGTGCATCAAGAGCCCCTGGGATCATGCTGATGTGGCCC GAGGGTTGGGGACTTAGGGCAGGGTGAGTGCCCCAAGGGCTGGTAGGGGTGAGTGTCCAAGGTCAGCGAGACGCCCATCTGGTTTACCGCTCGGATTCAGGGGGTGTCTGGGGTCTGGGCAGCACGCACTCTCTGTTCGGCAGCACAGGATGGTGTCCACTGAGGCCGTTTCTCCTCACAGGCTGCCTGGGTGCTCCTGGAGGTTCT
实施例3：cDNA克隆序列分析
1．SP82A：核苷酸序列：(SEQ ID NO:1)长度：1918bp1  CCCAGAGCAA  GCCGATTCTC  TACACACTGC  CTTCCCTTCC  TGTAAGACTC51  ATCAAAAAGG  CACCCCAACC  TTGCATGGAT  CTGCTGTTGG  TATTCCTTGG101  GGTGAAGCCA  GAAGTCAGGC  TTTCCACAGA  GAGACGGGAC  TACATGGCCA151  CCTGGGAAGG  CTAGGGAGTC  AAAGGGCCTG  AGGAATGACT  ACTTCCCTCC201  ACAAGGGCAT  TCCCTGCCCT  GCTCTGCTTC  CTGGGGGCTT  CAGCAAGCCT251  TCCTTCTAGA  GCTCCTAGAA  CCCTCCCATG  GTCAACACAA  CAGCAGCCCA301  GACAATGAGA  TGCAAGAGGC  CTGAGCTCAC  AGGCCATTCA  GGTCTTCTAG351  ATGCCTTCTT  GAGGCTGCTT  GTGGCCACCC  ACAGACACTT  GTAAGGAGGA401  GAGAAGTCAG  CCTGGCAGAG  AGACTCTGAA  ATGAGGGATT  AGAGGTGTTC451  AAGGAGCAAG  AGCTTCAGCC  TGAAGACAAG  GGAGCAGTCC  CTGAAGACGC501  TTCTACTGAG  AGGTCTGCCA  TGGCCTCTCT  TGGCCTCCAA  CTTGTGGGCT551  ACATCCTAGG  CCTTCTGGGG  CTTTTGGGCA  CACTGGTTGC  CATGCTGCTC601  CCCAGCTGGA  AAACAAGTTC  TTATGTCGGT  GCCAGCATTG  TGACAGCAGT651  TGGCTTCTCC  AAGGGCCTCT  GGATGGAATG  TGCCACACAC  AGCACAGGCA701  TCACCCAGTG  TGACATCTAT  AGCACCCTTC  TGGGCCTGCC  CGCTGACATC751  CAGGCTGCCC  AGGCCATGAT  GGTGACATCC  AGTGCAATCT  CCTCCCTGGC 801  CTGCATTATC TCTGTGGTGG GCATGAGATG CACAGTCTTC TGCCAGGAAT851  CCCGAGCCAA AGACAGAGTG GCGGTAGCAG GTGGAGTCTT TTTCATCCTT901  GGAGGCCTCC TGGGATTCAT TCCTGTTGCC TGGAATCTTC ATGGGATCCT951  ACGGGACTTC TACTCACCAC TGGTGCCTGA CAGCATGAAA TTTGAGATTG1001  GAGAGGCTCT TTACTTGGGC ATTATTTCTT CCCTGTTCTC CCTGATAGCT1051  GGAATCATCC TCTGCTTTTC CTGCTCATCC CAGAGAAATC GCTCCAACTA1101  CTACGATGCC TACCAAGCCC AACCTCTTGC CACAAGGAGC TCTCCAAGGC1151  CTGGTCAACC TCCCAAAGTC AAGAGTGAGT TCAATTCCTA CAGCCTGACA1201  GGGTATGTGT GAAGAACCAG GGGCCAGAGC TGGGGGGTGG CTGGGTCTGT1251  GAAAAACAGT GGACAGCACC CCGAGGGCCA CAGGTGAGGG ACACTACCAC1301  TGGATCGTGT CAGAAGGTGC TGCTGAGGAT AGACTGACTT TGGCCATTGG1351  ATTGAGCAAA GGCAGAAATG GGGGCTAGTG TAACAGCATG CAGGTTGAAT1401  TGCCAAGGAT GCTCGCCATG CCAGCCTTTC TGTTTTCCTC ACCTTGCTGC1451  TCCCCTGCCC TAAGTCCCCA ACCCTCAACT TGAAACCCCA TTCCCTTAAG1501  CCAGGACTCA GAGGATCCCT TTGCCCTCTG GTTTACCTGG GACTCCATCC1551  CCAAACCCAC TAATCACATC CCACTGACTG ACCCTCTGTG ATCAAAGACC1601  CTCTCTCTGG CTGAGGTTGG CTCTTAGCTC ATTGCTGGGG ATGGGAAGGA1651  GAAGCAGTGG CTTTTGTGGG CATTGCTCTA ACCTACTTCT CAAGCTTCCC1701  TCCAAAGAAA CTGATTGGCC CTGGAACCTC CATCCCACTC TTGTTATGAC1751  TCCACAGTGT CCAGACTAAT TTGTGCATGA ACTGAAATAA AACCATCCTA1801  CGGTATCCAG GGAACAGAAA GCAGGATGCA GGATGGGAGG ACAGGAAGGC1851  AGCCTGGGAC ATTTAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA1901  AAAAAAAAAA AAAAAAAAB：氨基酸序列：(SEQ ID NO:2)长度：230个氨基酸1   MASLGLQLVG YILGLLGLLG TLVAMLLPSW KTSSYVGASI VTAVGFSKGL51   WMECATHSTG ITQCDIYSTL LGLPADIQAA QAMMVTSSAI SSLACIISVV101   GMRCTVFCQE SRAKDRVAVA GGVFFILGGL LGFIPVAWNL HGILRDFYSP151   LVPDSMKFEI GEALYLGIIS SLFSLIAGII LCFSCSSQRN RSNYYDAYQA201   QPLATRSSPR PGQPPKVKSE FNSYSLTGYVC．核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO:3)克隆号和蛋白名称：     SP82起始编码子：520 ATG    终止编码子：1212 TGA蛋白质分子量：24574.311  CCC AGA GCA AGC CGA TTC TCT ACA CAC TGC CTT CCC TTC CTG TAA GAC      4849  TCA TCA AAA AGG CAC CCC AAC CTT GCA TGG ATC TGC TGT TGG TAT TCC      9697  TTG GGG TGA AGC CAG AAG TCA GGC TTT CCA CAG AGA GAC GGG ACT ACA     144145  TGG CCA CCT GGG AAG GCT AGG GAG TCA AAG GGC CTG AGG AAT GAC TAC     192193  TTC CCT CCA CAA GGG CAT TCC CTG CCC TGC TCT GCT TCC TGG GGG CTT     240241  CAG CAA GCC TTC CTT CTA GAG CTC CTA GAA CCC TCC CAT GGT CAA CAC     288289  AAC AGC AGC CCA GAC AAT GAG ATG CAA GAG GCC TGA GCT CAC AGG CCA     336337  ITC AGG TCT TCT AGA TGC CTT CTT GAG GCT GCT TGT GGC CAC CCA CAG     384385  ACA CTT GTA AGG AGG AGA GAA GTC AGC CTG GCA GAG AGA CTC TGA AAT     432433  GAG GGA TTA GAG GTG TTC AAG GAG CAA GAG CTT CAG CCI GAA GAC AAG     480481  GGA GCA GTC CCT GAA GAC GCT TCT ACT GAG AGG TCT GCC ATG GCC TCT     5281                                                      Met Ala Ser       3529  CTT GGC CTC CAA CTT GTG GGC TAC ATC CTA GGC CTT CTG GGG CTT TTG     5764  Leu Gly Leu Gln Leu Val Gly Tyr Ile Leu Gly Leu Leu Gly Leu Leu      19 577  GGC ACA CTG GTT GCC ATG CTG CTC CCC AGC TGG AAA ACA AGT TCT TAT     62420  Gly Thr Leu Val Ala Met Leu Leu Pro Ser Trp Lys Thr Ser Ser Tyr      35625  GTC GGT GCC AGC ATT GTG ACA GCA GTT GGC TTC TCC AAG GGC CTC TGG     67236  Val Gly Ala Ser Ile Val Thr Ala Val Gly Phe Ser Lys Gly Leu Trp      51673  ATG GAA TGT GCC ACA CAC AGC ACA GGC ATC ACC CAG TGT GAC ATC TAT     72052  Met Glu Cys Ala Thr His Ser Thr Gly Ile Thr Gln Cys Asp Ile Tyr      67721  AGC ACC CTT CTG GGC CTG CCC GCT GAC ATC CAG GCT GCC CAG GCC ATG     76868  Ser Thr Leu Leu Gly Leu Pro Ala Asp Ile Gln Ala Ala Gln Ala Met      83769  ATG GTG ACA TCC AGT GCA ATC TCC TCC CTG GCC TGC ATT ATC TCT GTG     81684  Met Val Thr Ser Ser Ala Ile Ser Ser Leu Ala Cys Ile Ile Ser Val      99817  GTG GGC ATG AGA TGC ACA GTC TTC TGC CAG GAA TCC CGA GCC AAA GAC     864100  Val Gly Met Arg Cys Thr Val Phe Cys Gln Glu Ser Arg Ala Lys Asp     115865  AGA GTG GCG GTA GCA GGT GGA GTC TTT TTC ATC CTT GGA GGC CTC CTG     912116  Arg Val Ala Val Ala Gly Gly Val Phe Phe Ile Leu Gly Gly Leu Leu     131913  GGA TTC ATT CCT GTT GCC TGG AAT CTT CAT GGG ATC CTA CGG GAC TTC     960132  Gly Phe Ile Pro Val Ala 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        |||||||||||||||||Sbjct: 748  ggggccagagctggggg 7642．SP192A：核苷酸序列：(SEQ ID NO:4)长度：2390bp1  TGCTTCATCA TAAGTCGTGC TGCCGGCCAG GTTACTTAAG CACCCTTTTA51  ACAAGGAAAC CTTGTGGGAG ATCCAGCTGG CCGACTCGAG TTCAGAAACG101  GGACCACAGA GGTTACACTC TGGGATCCTG GCCATGAGGT TGGATGCCTC151  ACCTTACTGA AAGGAGACAC TGGACCTAAA TGGCGCAGCA TGATTTTGTT201  CCTGCTTGGC TAAATTTCTC AACACCACAG TCAGCTAAGT CACCTACTGC251  CACCTTCGAA AAACACGGAG AGCACCTACC CAGAGGAGAA GGTAGATTTG301  GAGTAAGCCG CCGTCGACAT AATTCCTCTG ATGGTTTTTT TAACAATGGT351  CCCCTACGAA CTGCAGGAGA TTCTTGGCAC CAGCCCTCCC TGTTCCGCCA401  TGATTCTGTG GACTCTGGTG TCTCTAAGGG AGCATATGCT GGAATCACAG451  GGAACCCATC TGGTTGGCAT AGCTCTTCCC GAGGTCATGA TGGCATGAGC501  CAACGTAGTG GAGGTGGCAC AGGGAACCAT CGCCATTGGA ATGGCAGCTT551  CCACTCCCGG AAAGGGTGTG CTTTTCAGGA AAAGCCACCT ATGGAGATTA601  GGGAAGAAAA GAAAGAAGAC AAGGTGGAAA AGTTGCAGTT TGAAGAGGAG651  GACTTTCCTT CCTTGAATCC AGAAGCTGGC AAACAGCATC AGCCATGCAG701  ACCTATTGGG ACACCTTCTG GAGTATGGGA AAACCCGCCT AGTGCCAAGC751  AACCCTCCAA GATGCTAGTT ATCAAAAAAG TTTCCAAAGA GGATCCTGCT801  GCTGCCTTCT CTGCTGCATT CACCTCACCA GGATCTCACC ATGCAAATGG851  GAACAAATTG TCATCCGTGG TTCCAAGTGT CTATAAGAAC CTGGTTCCTA 901  AGCCTGTACC ACCTCCTTCC AAGCCTAATG CATGGAAAGC TAACAGGATG951  GAGCACAAGT CAGGATCCCT TTCCTCTAGC CGGGAGTCTG CTTTTACCAG1001  TCCAATCTCT GTTACCAAAC CAGTGGTACT GGCTAGTGGT GCAGCTCTGA1051  GTTCTCCCAA AGAGAGTCCC TCCAGCACCA CCCCTCCAAT TGAGATCAGC1101  TCCTCTCGTC TGACCAAGTT GACCCGCCGA ACCACCGACA GGAAGAGTGA1151  GTTCCTGAAA ACTCTGAAGG ATGACCGGAA TGGAGACTTC TCAGAGAATA1201  GAGACTGTGA CAAGCTGGAA GATTTGGAGG ACAACAGCAC ACCTGAACCA1251  AAGGAAAATG GGGAGGAAGG CTGTCATCAA AATGGTCTTG CCCTCCCTGT1301  AGTGGAAGAA GGGGAGGTTC TCTCACACTC TCTAGAAGCA GAGCACAGGT1351  TATTGAAAGC TATGGGTTGG CAGGAATATC CTGAAAATGA TGAGAATTGC1401  CTTCCCCTCA CAGAGGATGA GCTCAAGGAG TTCCACATGA AGACAGAGCA1451  GCTGAGAAGA AATGGCTTTG GAAAGAATGG CTTCTTGCAG AGCCGCAGTT1501  CCAGCCTGTT CTCCCCTTGG AGAAGCACTT GCAAAGCAGA GTTTGAGGAC1551  TCAGACACCG AAACCAGTAG CAGTGAAACA TCAGATGACG ATGCCTGGAA1601  GTAGGCATAT AAATGCTCAC AGTTAAATCT GACCCAGTAA ACTCTGTGTG1651  TTTAGGGAGT ATACAAAAGA AATCGTTCTT FTCCTTTTCT TATGTTGTTG1701  AATACTTCAT TCACAAGGGA AATAATCATA TCCCAAAGAG AGAGCAATTG1751  GCTTGTTTTG CTTTTGTTAT TGTTCTTCCC TGTTATCTGC TTTATAGAGA1801  GAAGTTTGTG TGGTGGGACA GATTTTTTAA ACACACTCAT ACACACACAC1851  ACATACACAC CCAGTATATA TGGGGCGATG CACAGGTAGG AGCTGGCAGT1901  GCAGGGAAGA GGAGACACTG GTCTGCAGCA ACAGCTTCTA CTACCAGCCC1951  TTGGGGCACT CACCCCTGTG ATCAAGCAAT CATTGTCAAT GACAAAGTGA2001  CTATTGAAGT TATAATTGTA TTAAATTAAT GCTAATAATT TGGATATTTT2051  ATTTTATTTT TGGCTGCTCG GGTAACTTTA GCCCTTAACC AAGCATATGT2101  GGGTTTTTTT GGTTGTTTTT TTGTTTTTGT TTTTTTTTTC TTTTTCCTTT2151  TTGGGTACAG CTGTAAAATA TTTGGATATA GGAAATGTTG TGTTATTCTT2201  GCAGCCTTGA TATTCAGGGT GGATTGTAAA ATATAAATTT TTGTGAGATT2251  TCAAAGATTA AGATTATTTT GATAACATTA TTTACAGATT TAAAAGATGT2301  GGTTATCACA AGTCTCGAGG GGGAAACTAC TGCATAAAAT AACTAACTTG2351  GAATAAATAT TTTGCATCAG TTAAAAAAAA AAAAAAAAAAB：氨基酸序列：(SEQ ID NO:5)长度：474个氨基酸1  MAQHDFVPAW LNFSTPQSAK SPTATFEKHG EHLPRGEGRF GVSRRRHNSS51  DGFFNNGPLR TAGDSWHQPS LFRHDSVDSG VSKGAYAGIT GNPSGWHSSS101  RGHDGMSQRS GGGTGNHRHW NGSFHSRKGC AFQEKPPMEI REEKKEDKVE151  KLQFEEEDFP SLNPEAGKQH QPCRPIGTPS GVWENPPSAK QPSKMLVIKK201  VSKEDPAAAF SAAFTSPGSH HANGNKLSSV VPSVYKNLVP KPVPPPSKPN251  AWKANRMEHK SGSLSSSRES AFTSPISVTK PVVLASGAAL SSPKESPSST301  TPPIEISSSR LTKLTRRTTD RKSEFLKTLK DDRNGDFSEN RDCDKLEDLE351  DNSTPEPKEN GEEGCHQNGL ALPVVEEGEV LSHSLEAEHR LLKAMGWQEY401  PENDENCLPL TEDELKEFHM KTEQLRRNGF GKNGFLQSRS SSLFSPWRST451  CKAEFEDSDT ETSSSETSDD DAWKC：核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO:6)克隆号和蛋白名称：PP192起始编码子：180 ATG    终止编码子：1604 TAG蛋白质分子量：52298.771    TG  CTT  CAT  CAT  AAG  TCG  TGC  TGC  CGG  CCA  GGT  TAC  TTA  AGC  ACC  CTT       4748   TTA  ACA  AGG  AAA  CCT  TGT  GGG  AGA  TCC  AGC  TGG  CCG  ACT  CGA  GTT  CAG       95 96  AAA CGG GAC CAC AGA GGT TAC ACT CTG GGA TCC TGG CCA TGA GGT TGG     143144  ATG CCT CAC CTT ACT GAA AGG AGA CAC TGG ACC TAA ATG GCG CAG CAT     1911                                                  Met Ala Gln His       4192  GAT TTT GTT CCT GCT TGG CTA AAT TTC TCA ACA CCA CAG TCA GCT AAG     2395  Asp Phe Val Pro Ala Trp Leu Asn Phe Ser Thr Pro Gln Ser Ala Lys      20240  TCA CCT ACT GCC ACC TTC GAA AAA CAC GGA GAG CAC CTA CCC AGA GGA     28721  Ser Pro Thr Ala Thr Phe Glu Lys His Gly Glu His Leu Pro Arg Gly      36288  GAA GGT AGA TTT GGA GTA AGC CGC CGT CGA CAT AAT TCC TCT GAT GGT     33537  Glu Gly Arg Phe Gly Val Ser Arg Arg Arg His Asn Ser Ser Asp Gly      52336  TTT TTT AAC AAT GGT CCC CTA CGA ACT GCA GGA GAT TCT TGG CAC CAG     38353  Phe Phe Asn Asn Gly Pro Leu Arg Thr Ala Gly Asp Ser Trp His Gln      68384  CCC TCC CTG TTC CGC CAT GAT TCT GTG GAC TCT GGT GTC TCT AAG GGA     43169  Pro Ser Leu Phe Arg His Asp Ser Val Asp Ser Gly Val Ser Lys Gly      84432  GCA TAT GCT GGA ATC ACA GGG AAC CCA TCT GGT TGG CAT AGC TCT TCC     47985  Ala Tyr Ala Gly Ile Thr Gly Asn Pro Ser Gly Trp His Ser Ser Ser     100480  CGA GGT CAT GAT GGC ATG AGC CAA CGT AGT GGA GGT GGC ACA GGG AAC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3．PP79A：核苷酸序列：(SEQ ID NO:7)长度：1626bp1  CTGACCTCAA GTGATCCACC CACCTCTACC TCCCAAAGTG CTGGGATTAC51  AGGTGTGAGC CACCATGCCA GGCCCTCTTA ACCTCTTCAA GTCTGTTTTC101  TCATCTGCAA AACAGAGGTA ATAAGATCAG TATCTTCTTA ATGGAAGCAC151  CTGGACTACA TTTTTTTCAT TCATTGTTAT CATAAATGAG GACTAACCTG201  TCTCCCGTTG GGAGTTTTGA ACCTAGACCT CAT6TCTTCA TGACGTCATC251  ACTGCCCCAG GCCCAGCTGT GTCCCTACAC CAGCCCCAGC TGACGCATCT301  TCTTTTTCTG CCTGTAGAGA TGGTTACAAT GCCTGGCGTG ATGCATTCTG351  GCCTTCGCAG ATCCTGGCGG GGCTGTGCCA ACGCTGTGGC CTCCCTGCCC401  CTGAATACCG AGCCGGTGCT GTCAAGGTGG GCAGCAAAGT CTTCCTGACA451  CCACCGGAGA CCCTGCCCCC AGGGATCTCT TCACATGTGG ATTGACATCT501  TTCCTCAAGA TGTGCCTGCT CCACCCCCAG TTGACATCAA GCCTCGGCAG551  CCAATCAGCT ATGAGCTCAG AGTTGTCATC TGGAACACGG AGGATGTGGT601  TCTGGATGAC GAGAATCCAC TCACCGGAGA GATGTCGAGT GACATCTATG651  TGAAGAGCTG GGTGAAGGGG TTGGAGCATG ACAAGCAGGA GACAGACGTT701  CACTTCAACT CCCTGACTGG GGAGGGGAAC TTCAATTGGC GCTTTGTGTT751  CCGCTTTGAC TACCTGCCCA CGGAGCGGGA GGTGAGCGTC TGGCGCAGGT801  CTGGACCCTT TGCCCTGGAG GAGGCGGAGT TCCGGCAGCC TGCAGTGCTG851  GTCCTGCAGG TCTGGGACTA TGACCGCATC TCTGCCAATG ACTTCCTTGG901  ATCCCTGGAG TTGCAGCTAC CAGACATGGT GCGTGGGGCC CGGGGCCCCG951  AGCTCTGCTC TGTGCAGCTG GCCCGCAATG GGGCCGGGCC GAGGTGCAAT1001  CTGTTTCGCT GCCGCCGCCT GAGGGGCTGG TGGCCGGTAG TGAAGCTGAA1051  GGAGGCAGAG GACGTGGAGC GGGAGGCGCA GGAGGCTCAG GCTGGCAAGA1101  AGAAGCGAAA GCAGAGGAGG AGGAAGGGCC GGCCAGAAGA CCTGGAGTTC1151  ACAGACATGG GTGGCAATGT GTACATCCTC ACGGGCAAGG TGGAGGCAGA1201  GTTTGAGCTG CTGACTGTGG AGGAGGCCGA GAAACGGCCA GTGGGGAAGG1251  GGCGGAAGCA GCCAGAGCCT CTGGAGAAAC CCAGCCGCCC CAAAACTTCC1301  TTCAACTGGT TTGTGAACCC GCTGAAGACC TTTGTCTTCT TCATCTGGCG1351  CCGGTACTGG CGCACCCTGG TGCTGCTGCT ACTGGTGCTG CTCACCGTCT1401  TCCTCCTCCT GGTCTTCTAC ACCATCCCTG GCCAGATCAG CCAGGTCATC1451  TTCCGTCCCC TCCACAAGTG ACTCTCGCTG ACCTTGGACA CTCACCCAGG1501  GTGCCAACCC TTCAATGCCT GCTCCTGGAA GTCTTTCTTA CCCATGTGAG1551  CTACCCCAGA GTCTAGTGCT TCCTCTGAAT AAACCTATCA CAGCCCCTGA1601  AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAB：氨基酸序列：(SEQ ID NO:8)长度：328个氨基酸1   MWIDIFPQDV PAPPPVDIKP RQPISYELRV VIWNTEDVVL DDENPLTGEM51   SSDIYVKSWV KGLEHDKQET DVHFNSLTGE GNFNWRFVFR FDYLPTEREV101   SVWRRSGPFA LEEAEFRQPA VLVLQVWDYD RISANDFLGS LELQLPDMVR151   GARGPELCSV QLARNGAGPR CNLFRCRRLR GWWPVVKLKE AEDVEREAQE201   AQAGKKKRKQ RRRKGRPEDL EFTDMGGNVY ILTGKVEAEF ELLTVEEAEK251   RPVGKGRKQP EPLEKPSRPK TSFNWFVNPL KTFVFFIWRR YWRTLVLLLL301   VLLTVFLLLV FYTIPGQISQ VIFRPLHKC．核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO:9)克隆号和蛋白名称：PP79起始编码子：485 ATG    终止编码子：1471 TAG蛋白质分子量：38386.241    C TGA CCT CAA GTG ATC CAC CCA CCT CTA CCT CCC AAA GTG CTG GGA      4647  TTA CAG GTG TGA GCC ACC ATG CCA GGC CCT CTT AAC CTC TTC AAG TCT      9495  GTT TTC TCA TCT GCA AAA CAG AGG TAA TAA GAT CAG TAT CTT CTT AAT     142143  GGA AGC ACC TGG ACT ACA TTT TTT TCA TTC ATT GTT ATC ATA AAT GAG     190191  GAC TAA CCT GTC TCC CGT TGG GAG TTT TGA ACC TAG ACC TCA TGT CTT     238239  CAT GAC GTC ATC ACT GCC CCA GGC CCA GCT GTG TCC CTA CAC CAG CCC     286287  CAG CTG ACG CAT CTT CTT TTT CTG CCT GTA GAG ATG GTT ACA ATG CCT     334335  GGC GTG ATG CAT TCT GGC CTT CGC AGA TCC TGG CGG GGC TGT GCC AAC     382383  GCT GTG GCC TCC CTG CCC CTG AAT ACC GAG CCG GTG CTG TCA AGG TGG     430431  GCA GCA AAG TCT TCC TGA CAC CAC CGG AGA CCC TGC CCC CAG GGA TCT     478479  CTT CAC ATG TGG ATT GAC ATC TTT CCT CAA GAT GTG CCT GCT CCA CCC     5261          Met Trp Ile Asp Ile Phe Pro Gln Asp Val Pro Ala Pro Pro      14527  CCA GTT GAC ATC AAG CCT CGG CAG CCA ATC AGC TAT GAG CTC AGA GTT     57415  Pro Val Asp Ile Lys Pro Arg Gln Pro Ile Ser Tyr Glu Leu Arg Val      30575  GTC ATC TGG AAC ACG GAG GAT GTG GTT CTG GAT GAC GAG AAT CCA CTC     62231  Val Ile Trp Asn Thr Glu Asp Val Val Leu Asp Asp Glu Asn Pro Leu      46623  ACC GGA GAG ATG TCG AGT GAC ATC TAT GTG AAG AGC TGG GTG AAG GGG     67047  Thr Gly Glu Met Ser Ser Asp Ile Tyr Val Lys Ser Trp Val Lys Gly      62671  TTG GAG CAT GAC AAG CAG GAG ACA GAC GTT CAC TTC AAC TCC CTG ACT     71863  Leu Glu His Asp Lys Gln Glu Thr Asp Val His Phe Asn Ser Leu Thr      78719  GGG GAG GGG AAC TTC AAT TGG CGC TTT GTG TTC CGC TTT GAC TAC CTG     76679  Gly Glu Gly ASn Phe Asn Trp Arg Phe Val Phe Arg Phe Asp Tyr Leu      94767  CCC ACG GAG CGG GAG GTG AGC GTC TGG CGC AGG TCT GGA CCC TTT GCC     81495  Pro Thr Glu Arg Glu Val Ser Val Trp Arg Arg Ser Gly Pro Phe Ala     110815  CTG GAG GAG GCG GAG TTC CGG CAG CCT GCA GTG CTG GTC CTG CAG GTC     862111  Leu Glu Glu Ala Glu Phe Arg Gln Pro Ala Val Leu Val Leu Gln Val     126863  TGG GAC TAT GAC CGC ATC TCT GCC AAT GAC TTC CTT GGA TCC CTG GAG     910127  Trp Asp Tyr Asp Arg Ile Ser Ala Asn Asp Phe Leu Gly Ser Leu Glu     142911  TTG CAG CTA CCA GAC ATG GTG CGT GGG GCC CGG GGC CCC GAG CTC TGC    958143  Leu Gln Leu Pro Asp Met Val Arg Gly Ala Arg Gly Pro Glu Leu Cys     158959  TCT GTG CAG CTG GCC CGC AAT GGG GCC GGG CCG AGG TGC AAT CTG TTT    1006159  Ser Val Gln Leu Ala Arg Asn Gly Ala Gly Pro Arg Cys Asn Leu Phe     1741007  CGC TGC CGC CGC CTG AGG GGC TGG TGG CCG GTA GTG AAG CTG AAG GAG    1054 175  Arg Cys Arg Arg Leu Ar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4．PP1009A：核苷酸序列：(SEQ ID NO:10)长度：1605bp1    CAACGGGGTC  CTATTGCCCT  TTTACGATCC  CGACTCCAGC  ATCGTCTACC51    TGTGTGGCAA  GGGCGACAGC  AGCATTCGGT  ACTTTGAGAT  TACCGACGAG101    CCGCCTTTCG  TGCACTACCT  GAACACGTTC  AGCAGCAAAG  AGCCGCAGCG151    GGGCATGGGT  TTCATGCCCA  AAAGGGGACT  GGATGTCAGC  AAGTGTGAGA201    TCGCCCGGTT  CTACAAGCTA  CACGAAAGAA  AGTGTGAACC  TATCATCATG251    ACTGTGCCCC  GCAAGTCAGA  CCTCTTCCAG  GACGATCTGT  ACCCGGATAC 301  GCCAGGCCCG GAGCCGGCCC TAGAAGCGGA CGAATGGCTA TCCGGCCAGG351  ACGCCGAACC CGTGCTCATT TCGCTGAGGG ACGGCTATGT GCCCCCCAAG401  CACCGCGAGC TCCGGGTCAC GAAGCGCAAC ATCCTGGACG TGCGCCCGCC451  CTCCGGCCCC CGCCGCAGCC AGTCGGCCAG CGACGCCCCC TTGTCGCAGC501  ACACCCTGGA GACGCTGCTG GAAGAGATCA AGGCCCTCCG CGAGCGGGTG551  CAGGCCCAGG AGCAGCGCAT CACGGCTCTG GAGAACATGC TGTGCGAGCT601  GGTGGACGGC ACGGACTAGC CCCGCGCGCC AGGCAGGCGG AGCGGGGCGG651  GGCGCACAAG CTCGGCCCCG CCCCGGCTTT TAGTCCCGAA CTCCGGACCC701  CGCCTTCTTG GGCTGGGCCC GGGGGCGGGA CTGGGGAGGG AACTCCGCCC751  CTCGCGGGAG ACCAGAACTC TTGGAGCTTA GGGGAGACCC ACGTCGCTCC801  AGCGGAGGCT GGACTGCGAG CCTCGTCTGG GACTCGGCTG GAGCTGGCCT851  AGGGAGGCCT GGGGTAACCT GGGGGGCTCA GCAATGGTGC TGCACGGCGA901  GGTGGTGTCC CCCTTTGTCC TCCGCCCAGG GCAGGGAAAG TGCTTAGTAT951  TAGCGTGATG CTTGGGGTTA TTGGAGCCTG AGCTTGACCT CAAACGGGTG1001  GCGATTTGAT GGGTACCCCC AGGCTGGGGA AAATGACAGC GCTTCTCCTA1051  ATCAGCTCAC TGGATTCCAT CACCCTGAGC GGTAAACCAG ATGGGCGTCA1101  CCCCAGTTCT GCAGACACAT ACACAACCCG TTTGCTGCAG AGCCGGACCC1151  AGTGGCTACA CCCACAGCGG TCTGTGGTAG AGAACTCTCT TCCTTCTTTC1201  CACCGACAGG GGCGAGGGGT GTTTCCTCGC GGCAGCCCCC GCGAAGAAAT1251  CTCGAGAGAA CTGGCATGAG GAGTTAGGTT CATCACAAAT ACACACACAC1301  TGCCCCCAAC CCTCTGCCGT TGCCTCTCTC AGAAAAACAA GACGTACTGA1351  ATGAAATATT TTACTAAGCG TTCAGTCTGT GCCTCCTGCA TGGGTGGGAG1401  TGAGGGGAAC GAGACCCCCA GCCTCTGCAA ATGCTACCCC CAGGCTCCTG1451  GGAGACCTGG CGATGCACTC CTGGGCTCAG GGTCCATCAG GCAGCCTCTT1501  ACCCTAGAGC TCTCTCCACT CTGAGGTTCA GAAGGACCCC AACCCACACC1551  GTAGGCGTTC CCCCCAAGTA AAGTTAGGTA GCAAAAAAAA AAAAAAAAAA1601  AAAAAB：氨基酸序列：(SEQ ID NO:11)长度：172个氨基酸1   MAIRPGRRTR AHFAEGRLCA PQAPRAPGHE AQHPGRAPAL RPPPQPVGQR51   RPLVAAHPGD AAGRDQGPPR AGAGPGAAHH GSGEHAVRAG GRHGLAPRAR101   QAERGGAHKL GPAPAFSPEL RTPPSWAGPG GGTGEGTPPL AGDQNSWSLG151   ETHVAPAEAG LRASSGTRLE LAC．核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO:12)克隆号和蛋白名称：PP1009起始编码子：334 ATG    终止编码子：852 TAG蛋白质分子量：17387.351  CAA CGG GGT CCT ATT GCC CTT TTA CGA TCC CGA CTC CAG CAT CGT CTA     4849  CCT GTG TGG CAA GGG CGA CAG CAG CAT TCG GTA CTT TGA GAT TAC CGA     9697  CGA GCC GCC TTT CGT GCA CTA CCT GAA CAC GTT CAG CAG CAA AGA GCC    144145  GCA GCG GGG CAT GGG TTT CAT GCC CAA AAG GGG ACT GGA TGT CAG CAA    192193  GTG TGA GAT CGC CCG GTT CTA CAA GCT ACA CGA AAG AAA GTG TGA ACC    240241  TAT CAT CAT GAC TGT GCC CCG CAA GTC AGA CCT CTT CCA GGA CGA TCT    288289  GTA CCC GGA TAC GCC AGG CCC GGA GCC GGC CCT AGA AGC GGA CGA ATG    3361                                                              Met      1337  GCT ATC CGG CCA GGA CGC CGA ACC CGT GCT CAT TTC GCT GAG GGA CGG    3842  Ala Ile Arg Pro Gly Arg Arg Thr Arg Ala His Phe Ala Glu Gly Arg     17 385  CTA TGT GCC CCC CAA GCA CCG CGA GCT CCG GGT CAC GAA GCG CAA CAT     43218  Leu Cys Ala Pro Gln Ala Pro Arg Ala Pro Gly His Glu Ala Gln His      33433  CCT GGA CGT GCG CCC GCC CTC CGG CCC CCG CCG CAG CCA GTC GGC CAG     48034  Pro Gly Arg Ala Pro Ala Leu Arg Pro Pro Pro Gln Pro Val Gly Gln      49481  CGA CGC CCC CTT GTC GCA GCA CAC CCT GGA GAC GCT GCT GGA AGA GAT     52850  Arg Arg Pro Leu Val Ala Ala His Pro Gly Asp Ala Ala Gly Arg Asp      65529  CAA GGC CCT CCG CGA GCG GGT GCA GGC CCA GGA GCA GCG CAT CAC GGC     57666  Gln Gly Pro Pro Arg Ala Gly Ala Gly Pro Gly Ala Ala His His Gly      81577  TCT GGA GAA CAT GCT GTG CGA GCT GGT GGA CGG CAC GGA CTA GCC CCG     62482  Ser Gly Glu His Ala Val Arg Ala Gly Gly Arg His Gly Leu Ala Pro      97625  CGC GCC AGG CAG GCG GAG CGG GGC GGG GCG CAC AAG CTC GGC CCC GCC     67298  Arg Ala Arg Gln Ala Glu Arg Gly Gly Ala His Lys Leu Gly Pro Ala     113673  CCG GCT TTT AGT CCC GAA CTC CGG ACC CCG CCT TCT TGG GCT GGG CCC     720114  Pro Ala Phe Ser Pro Glu Leu Arg Thr Pro Pro Ser Trp Ala Gly Pro     129721  GGG GGC GGG ACT GGG GAG GGA ACT CCG CCC CTC GCG GGA GAC CAG AAC     768130  Gly Gly Gly Thr Gly Glu Gly Thr Pro Pro Leu Ala Gly Asp Gln Asn     145769  TCT TGG AGC TTA GGG GAG ACC CAC GTC GCT CCA GCG GAG GCT GGA CTG     816146  Ser Trp Ser Leu Gly Glu Thr His Val Ala Pro Ala Glu Ala Gly Leu     161817  CGA GCC TCG TCT GGG ACT CGG CTG GAG CTG GCC TAG GGA GGC CTG GGG     864162  Arg Ala Ser Ser Gly Thr Arg Leu Glu Leu Ala ***                      173865  TAA CCT GGG GGG CTC AGC AAT GGT GCT GCA CGG CGA GGT GGT GTC CCC     912913  CTT TGT CCT CCG CCC AGG GCA GGG AAA GTG CTT AGT ATT AGC GTG ATG     960961  CTT GGG GTT ATT GGA GCC TGA GCT TGA CCT CAA ACG GGT GGC GAT TTG    10081009  ATG GGT ACC CCC AGG CTG GGG AAA ATG ACA GCG CTT CTC CTA ATC AGC    10561057  TCA CTG GAT TCC ATC ACC CTG AGC GGT AAA CCA GAT GGG CGT CAC CCC    11041105  AGT TCT GCA GAC ACA TAC ACA ACC CGT TTG CTG 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5．PP1045A：核苷酸序列：(SEQ ID NO:13)长度：3108bp1  TCTGTGGCCA TTGCCACTCA CCTGGGAGCT CAGGTGTTGG GGGCTGAGCA  51  GCAGTGCCCC AGCGCGGAGC CTCCACGTGC TGTCCTCGTA CTTCCTTCGT101  GGGCGCCGCT GCTCCCCTGG GCGCCTCAGC CCAGCTCCTC TGCTGACAGC151  CAGCTGCTGT CTCTGCCTGG CTTTTTTGTT GTTGGTCGTC CTGGAGATCC201  AAGTGTCAAA TTACCGTCGC GAGGGGGAGC CCGAGGAAGC CCTGCTTGGG251  AACTTGTCCT CCAACTTCAT GTCCCGGTGC CTCACCTCTG CCCTGAGAGC301  GCTGCTCAGG GACAAGACAA GCTCTCTCTC TCCTCCTCCT TCCTCCTCCT351  CTCCCTCTCC CCGACTCCCA CGCCGTGGGC TGGGCCTGGG TTGGGAGCTG401  AAGAAAGAAG TCGGCTCTCT GCCTTCCTGG CCAGGAGGAC CCTGGGGAGG451  CTCCACCTGA GCCTGTGGAG GGGAGTCCTG CAGCGCTCTC AGGTCTGGGG501  CACCCACCCT GCCCTCAGGA AGGCCACCCC TTCTGTCCCT CTGGCCACTC551  CCTGGCTGGT CCCTCCCTCT GGCCTCTCTC AGGAACAACA GTAAACAGTG601  GGGAGCTGGT GGCCCTCTCA AGCTGAGCAG GAGGCTTTGC AACCAGTCCC651  TGGGGAGGCC CTTGTGCCGC TCAGCATCTG AAGGCGTCTT GGGGGAGAAC701  TTGGAATCCT GAGTGACCTG GGAGTGGCCT GCGCGCCCGG CAAGGCGCCT751  CATGTTCCTT GTGAGGTGCC GCCATGCCGC CATTGCCAAG TACTTCGGGG801  ATGCGCTGCC TGCCTGCGCC AAAGGCTGCG ACCACTGCCA GAACCCCACG851  GCCGTGCGGA GGCGGCTGGA GGCCTTGGAG CGCAGCAGCA GCTGGAGCAA901  GACCTGCATC GGGCCCTCCC AGGGGAACGG CTTTGACCCC GAGCTGTACG951  AGGGAGGCCG CAAGGGCTAC GGGGACTTCA GCAGGTATGA CGAAGGTTCT1001  GGAGGCAGCG GGGATGAAGG CAGAGATGAG GCCCACAAGC GGGAGTGGAA1051  CCTCTTCTAT CAGAAGCAGA TGCAGCTGCG CAAGGGCAAA GACCCCAAGA1101  TAGAAGAATT TGTACCCCCA GATGAGAACT GTCCCCTGAA AGAGGCTTCT1151  AGCAGGAGGA TCCCCAGGCT GACTGTGAAG GCACGGGAGC ACTGCCTGCG1201  GCTTCTGGAG GAGGCGCTGA GCAGCAACCG CCAGTCAACA CGTACCGCTG1251  ATGAAGCTGA CCTCCGGGCC AAGGCCGTGG AGCTGGAACA TGAGACATTC1301  CGGAACGCCA AGGTGGCCAA CCTCTACAAG GCCAGCGTGC TGAAGAAGGT1351  GGCCGATATC CACAGAGCCT CCAAGGATGG GCAGCCCTAT GACATGGGAG1401  GCAGTGCCAA GAGCTGCAGT GCCCAAGCTG AGCCCCCGGA GCCCAATGAG1451  TATGACATTC CACCAGCCTC CCATGTGTAC TCGCTCAAAC CCAAGCGGGT1501  GGGAGCTGGT TTCCCCAAAG GCTCCTGCCC GTTCCAGACG GCCACGGAAC1551  TGATGGAGAC GACTCGGATC AGGGAGCAAG CCCCCCAGCC CGAGCGGGGA1601  GGCGAGCATG AGCCCCCGAG CCGGCCCTGT GGCCTCCTGG ATGAGGATGG1651  GAGTGAGCCC CTCCCTGGGC CCAGAGGGGA GGTCCCTGGA GGCAGCGCTC1701  ACTATGGGGG GCCCTCCCCT GAGAAGAAGG CAAAAAGTTC CTCTGGGGGC1751  AGCTCCCTTG CCAAGGGCCG GGCTAGCAAG AAACAGCAGC TCCTAGCCAC1801  AGCGGCCCAC AAGGATTCTC AGAGCATCGC CCGCTTCTTC TGCCGAAGGG1851  TGGAAAGCCC AGCTCTGCTG GCATCAGCCC CAGAGGCAGA AGGTGCCTGC1901  CCCTCCTGTG AGGGGGTTCA GGGACCCCCG ATGGCCCCAG AGAAGTACAC1951  AGGGGAGGAA GATGGAGCCG GGGGACATTC GCCTGCCCCT CCCCAGACTG2001  AGGAGTGCCT CAGGGAGAGG CCAAGCACCT GCCCGCCCAG AGACCAGGGC2051  ACCCCTGAAG TCCAGCCCAC CCCTGCAAAG GACACATGGA AGGGCAAGCG2101  GCCTCGATCC CAGCAGGAGA ACCCAGAGAG CCAGCCTCAG AAGAGGCCAC2151  GCCCCTCAGC CAAGCCCTCC GTCGTAGCTG AGGTCAAGGG CAGCGTCTCG2201  GCCAGCGAAC AGGGCACCTT GAATCCCACG GCTCAAGACC CCTTCCAGCT2251  CTCCGCTCCT GGCGTCTCCT TGAAGGAGGC TGCAAATGTT GTGGTCAAGT2301  GCCTCACCCC TTTCTACAAG GAGGGCAAGT TTGCTTCCAA GGAGTTGTTT2351  AAAGGCTTTG CCCGCCACCT CTCACACTTG CTGACTCAGA AGACCTCTCC2401  TGGAAGGAGC GTGAAAGAAG AGGCCCAGAA CCTCATCAGG CACTTCTTCC2451  ATGGCCGGGC CCGGTGCGAG AGCGAAGCTG ACTGGCATGG CCTGTGTGGC2501  CCCCAGAGAT GACCAACTGC TGGCTGGGCA GGGCCCGCGT CCTCCCCCAG2551  ATTCTAGCAT GGGTCATCCT GGGCCTCACC TGCTGATGCC AGGGCCATCG2601  TCTTTTCTCA GTCCTTCTCC TTTCCAACCA TACTTGGCTT TGGGGATGAC2651    CCCAGACACC  CCCTGAATCC  AGGTCAGAGG  TCAGCCCACC  TTTCTTTCTG2701    CTTGCAAAGC  CTATAGACCC  TTCTCAGAGC  GGTCCTCATG  GCTGGGTTTT2751    CTGGGACACA  TGTCGAGGAC  AGAAGGTGGA  GGGTGGTGGA  GCTGCTGCTG2801    GAAGAAGGGG  AAGGAAGAGT  GGCCCCTCCC  CGAGTTCTAA  GTCAGGATGA2851    GGCCCACCTG  TCCAAGGTAT  CGGAACCTAC  CCAGGGGACC  CTCAGATCCT2901    CCACCCACTC  CCCCATCCAT  TACGATGCCA  GCTTCCAGCC  TTGCCCAGGT2951    CAGAGCTGTG  GCAGAGGAGA  GGCAGCCAGG  CCCTGTTCCT  GCTCAGCTCC3001    TGCTCAGGAA  GGCCAGGCCT  GACAGATGTT  TGGGAGAGGA  ATAAAGTTGT3051    GTTGTTGTGG  GGCATGCAGG  CGTGCACACA  GCCCTTTTCA  AAAAAAAAAA3101    AAAAAAAAB：氨基酸序列：(SEQ ID NO:14)长度：586个氨基酸1     MFLVRCRHAA  IAKYFGDALP  ACAKGCDHCQ  NPTAVRRRLE  ALERSSSWSK51     TCIGPSQGNG  FDPELYEGGR  KGYGDFSRYD  EGSGGSGDEG  RDEAHKREWN101     LFYQKQMQLR  KGKDPKIEEF  VPPDENCPLK  EASSRRIPRL  TVKAREHCLR151     LLEEALSSNR  QSTRTADEAD  LRAKAVELEH  ETFRNAKVAN  LYKASVLKKV201     ADIHRASKDG  QPYDMGGSAK  SCSAQAEPPE  PNEYDIPPAS  HVYSLKPKRV251     GAGFPKGSCP  FQTATELMET  TRIREQAPQP  ERGGEHEPPS  RPCGLLDEDG301     SEPLPGPRGE  VPGGSAHYGG  PSPEKKAKSS  SGGSSLAKGR  ASKKQQLLAT351     AAHKDSQSIA  RFFCRRVESP  ALLASAPEAE  GACPSCEGVQ  GPPMAPEKYT401     GEEDGAGGHS  PAPPQTEECL  RERPSTCPPR  DQGTPEVQPT  PAKDTWKGKR451     PRSQQENPES  QPQKRPRPSA  KPSVVAEVKG  SVSASEQGTL  NPTAQDPFQL501     SAPGVSLKEA  ANVVVKCLTP  FYKEGKFASK  ELFKGFARHL  SHLLTQKTSP551     GRSVKEEAQN  LIRHFFHGRA  RCESEADWHG  LCGPQRC．核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO:15)克隆号和蛋白名称：PP1045起始编码子：752 ATG终止编码子：2512 TGA蛋白质分子量：63841.111    T CTG TGG CCA TTG CCA CTC ACC TGG GAG CTC AGG TGT TGG GGG CTG      4647  AGC AGC AGT GCC CCA GCG CGG AGC CTC CAC GTG CTG TCC TCG TAC TTC      9495  CTT CGT GGG CGC CGC TGC TCC CCT GGG CGC CTC AGC CCA GCT CCT CTG     142143  CTG ACA GCC AGC TGC TGT CTC TGC CTG GCT TTT TTG TTG TTG GTC GTC     190191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8．PP1744A：核苷酸序列：(SEQ ID NO:22)长度：1996bp1     GGACGAGAGC  ACAAGGAGAT  CCACCAGCAG  AGGCAGGAGG  ACGAGGAGGA51     TAAACCCAGG  CAGGTGGAGG  TGCATCAAGA  GCCCGGGGCA  GCGGTGCCCA101     GAGGCCAGGA  GGCCCCTGAA  GGCAAGGCCA  GGGAGACGGT  GGAGAATCTG151     CCTCCCCTGC  CTTTGGACCC  TGTCCTCAGA  GCTCCTGGGG  GCCGCCCTGC201     TCCATCCCAG  GACCTTAACC  AGCGCTCCCT  GGAGCACTCT  GAGGGGCCTG251     TGGGCAGAGA  CCCTGCTGGC  CCTCCTGACG  GCGGCCCTGA  CACAGAGCCT301     CGGGCAGCCC  AGGGCAAGCT  GAGAGATGGC  CAGAAGGATG  CCGCCCCCAG351     GGCAGCTGGC  ACTGTGAAGG  AGCTCTGAGG  ACAGGGTCCT  CAGAGCTCCT401     GGGGGCCGCC  CTGCTCCATC  CCAGGACCTT  AACCAGCGCT  CCCTGGAGCA451     CTCTGAGGGG  CCTGTGGGCA  GAGACCCTGC  TGGCCCTCCT  GACGGCGGCC501     CTGACACAGA  GCCTCGGGCA  GCCCAGGGCA  AGCTGAGAGA  TGGCCAGAAG551     GATGCCGCCC  CCAGGGCAGC  TGGCACTGTG  AAGGAGCTCC  CCAAGGGCCC601     GGAGCAGGTG  CCCGTGCCAG  ACCCCGCCAG  GGAAGCCGGG  GGCCCAGAGG651     AGCGCCTCGC  AGAGGAATTC  CCTGGGCAAA  GTCAGGACGT  TACTGGCGGT701     TCCCAAGACA  GGAAAAAACC  TGGGAAGGAG  GTGGCAGCCA  CTGGCACCAG751     CATTCTGAAG  GAAGCCAACT  GGCTCGTGGC  AGGGCCAGGA  GCAGAGACGG801     GGGACCCTCG  CATGAAGCCC  AAGCAAGTGA  GCCGAGACCT  GGGCCTTGCA851     GCGGACCTGC  CCGGTGGGGC  GGAAGGAGCA  GCTGCACAGC  CCCAGGCTGT901     GTTACGCCAG  CCGGAACTGC  GGGTCATCTC  TGATGGCGAG  CAGGGTGGAC951     AGCAGGGCCA  CCGGCTGGAC  CATGGCGGTC  ACCTGGAGAT  GAGAAAGGCC1001     CGCGGGGGGG  ACCATGTGCC  TGTGTCCCAC  GAGCAGCCGA  GAGGCGGGGA1051     GGACGCTGCT  GTCCAGGAGC  CCAGGCAGAG  GCCAGAGCCA  GAGCTGGGGC1101     TCAAACGAGC  TGTCCCGGGG  GGCCAGAGGC  CGGACAATGC  CAAGCCCAAC1151     CGGGACCTGA  AACTGCAGGC  TGGCTCCGAC  CTCCGGAGGC  GACGGCGGGA1201     CCTTGGCCCT  CATGCAGAGG  GTCAGCTGGC  CCCGAGGGAT  GGGGTCATTG1251     GCCTTAACCC  CCTGCCTGAT  GTCCAGGTGA  ACGACCTCCG  TGGCGCCCTG1301     GATGCCCAGC  TCCGCCAGGC  TGCGGGGGGA  GCTCTGCAGG  TGGTCCACAG1351     CCGGCAGCTT  AGACAGGCGC  CTGGGCCTCC  AGAGGAGTCC  TAGCACCTGC1401     TGGCCATGAG  GGCCACGCCA  GCCACTGCCC  TCCTCGGCCA  GCAGCAGGTC1451     TGTCTCAGCC  GCATCCCAGC  CAAACTCTGG  AGGTCACACT  CGCCTCTCCC1501     CAGGGTTTCA  TGTCTGAGGC  CCTCACCAAG  TGTGAGTGAC  AGTATAAAAG1551     ATTCACTGTG  GCATCGTTTC  CAGAATGTTC  TTGCTGTCGT  TCTGTTGCAG1601     CTCTTAGTCT  GAGGTCCTCT  GACCTCTAGA  CTCTGAGCTC  ACTCCAGCCT1651     GTGAGGAGAA  ACGGCCTCCG  CTGCGAGCTG  GCTGGTGCAC  TCCCAGGCTC1701     AGGCTGGGGA  GCTGCTGCGT  CTGTGGTCAG  GCCTCCTGCT  CCTGCCAGGG1751     AGCACGCGTG  GTCTTCGGGT  TGAGCTCGCC  CGTGCGTGGA  GGTGCGCATG1801     GCTGCTCATG  GTCCCAACAC  AGGCTACTGT  GAGAGCCAGC  ATCCAACCCC1851     ACGCTTGCAG  TGACTCAGAA  TGATAATTAT  TATGACTGTT  TATCGATGCT1901     TCCCCCAGTG  TGGTAGAAAG  TCTTGAATAA  ACACTTTTGC  CTTCACCCAA1951     AAAAAAAAAA  AAAAAAAAAA  AAAAAAAAAA  AAAAAAAAAA  AAAAAAB：氨基酸序列：(SEQ ID NO:23)长度：193个氨基酸1  MKPKQVSRDL  GLAADLPGGA  EGAAAQPQAV  LRQPELRVIS  DGEQGGQQGH51  RLDHGGHLEM  RKARGGDHVP  VSHEQPRGGE  DAAVQEPRQR  PEPELGLKRA101  VPGGQRPDNA  KPNRDLKLQA  GSDLRRRRRD  LGPHAEGQLA  PRDGVIGLNP151  LPDVQVNDLR  GALDAQLRQA  AGGALQVVHS  RQLRQAPGPP  EESC：核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO:24)克隆号和蛋白名称：PP1744起始编码子：812 ATG    终止编码子：1393 TAG蛋白质分子量：20631.961    G GAC GAG AGC ACA AGG AGA TCC ACC AGC AGA GGC AGG AGG ACG AGG      4647  AGG ATA AAC CCA GGC AGG TGG AGG TGC ATC AAG AGC CCG GGG CAG CGG      9495  TGC CCA GAG GCC AGG AGG CCC CTG AAG GCA AGG CCA GGG AGA CGG TGG     142143  AGA ATC TGC CTC CCC TGC CTT TGG ACC CTG TCC TCA GAG CTC CTG GGG     190191  GCC GCC CTG CTC CAT CCC AGG ACC TTA ACC AGC GCT CCC TGG AGC ACT     238239  CTG AGG GGC CTG TGG GCA GAG ACC CTG CTG GCC CTC CTG ACG GCG GCC     286287  CTG ACA CAG AGC CTC GGG CAG CCC AGG GCA AGC TGA GAG ATG GCC AGA     334335  AGG ATG CCG CCC CCA GGG CAG CTG GCA CTG TGA AGG AGC TCT GAG GAC     382383  AGG GTC CTC AGA GCT CCT GGG GGC CGC CCT GCT CCA TCC CAG GAC CTT     430431  AAC CAG CGC TCC CTG GAG CAC TCT GAG GGG CCT GTG GGC AGA GAC CCT     478479  GCT GGC CCT CCT GAC GGC GGC CCT GAC ACA GAG CCT CGG GCA GCC CAG     526527  GGC AAG CTG AGA GAT GGC CAG AAG GAT GCC GCC CCC AGG GCA GCT GGC     574575  ACT GTG AAG GAG CTC CCC AAG GGC CCG GAG CAG GTG CCC GTG CCA GAC     622623  CCC GCC AGG GAA GCC GGG GGC CCA GAG GAG CGC CTC GCA GAG GAA TTC     670671  CCT GGG CAA AGT CAG GAC GTT ACT GGC GGT TCC CAA GAC AGG AAA AAA     718719  CCT GGG AAG GAG GTG GCA GCC ACT GGC ACC AGC ATT CTG AAG GAA GCC     766767  AAC TGG CTC GTG GCA GGG CCA GGA GCA GAG ACG GGG GAC CCT CGC ATG     8141                                                              Met       1815  AAG CCC AAG CAA GTG AGC CGA GAC CTG GGC CTT GCA GCG GAC CTG CCC     8622  Lys Pro Lys Gln Val Ser Arg Asp Leu Gly Leu Ala Ala Asp Leu Pro      17863  GGT GGG GCG GAA GGA GCA GCT GCA CAG CCC CAG GCT GTG TTA CGC CAG     91018  Gly Gly Ala Glu Gly Ala Ala Ala Gln Pro Gln Ala Val Leu Arg Gln      33911  CCG GAA CTG CGG GTC ATC TCT GAT GGC GAG CAG GGT GGA CAG CAG GGC     95834  Pro Glu Leu Arg Val Ile Ser Asp Gly Glu Gln Gly Gly Gln Gln Gly      49959  CAC CGG CTG GAC CAT GGC GGT CAC CTG GAG ATG AGA AAG GCC CGC GGG    100650  His Arg Leu Asp His Gly Gly His Leu Glu Met Arg Lys Ala Arg Gly      651007  GGG GAC CAT GTG CCT GTG TCC CAC GAG CAG CCG AGA GGC GGG GAG GAC    105466  Gly Asp His Val Pro Val Ser His Glu Gln Pro Arg Gly Gly Glu Asp      811055  GCT GCT GTC CAG GAG CCC AGG CAG AGG CCA GAG CCA GAG CTG GGG CTC    110282  Ala Ala Val Gln Glu Pro Arg Gln Arg Pro Glu Pro Glu Leu Gly Leu      971103  AAA CGA GCT GTC CCG GGG GGC CAG AGG CCG GAC AAT GCC AAG CCC AAC    115098  Lys Arg Ala Val Pro Gly Gly Gln Arg Pro Asp Asn Ala Lys Pro Asn     1131151  CGG GAC CTG AAA CTG CAG GCT GGC TCC GAC CTC CGG AGG CGA CGG CGG    1198114  Arg Asp Leu Lys Leu Gln Ala Gly Ser Asp Leu Arg Arg Arg Arg Arg     1291199  GAC CTT GGC CCT CAT GCA GAG GGT CAG CTG GCC CCG AGG GAT GGG GTC    1246130  Asp Leu Gly Pro His Ala Glu Gly Gln Leu Ala Pro Arg Asp Gly Val     1451247  ATT GGC CTT AAC CCC CTG CCT GAT GTC CAG GTG AAC GAC CTC CGT GGC    1294146  Ile Gly Leu Asn Pro Leu Pro Asp Val Gln Val Asn Asp Leu Arg Gly     1611295  GCC CTG GAT GCC CAG CTC CGC CAG GCT GCG GGG GGA GCT CTG CAG GTG    1342162  Ala Leu Asp Ala Gln Leu Arg Gln Ala Ala Gly Gly Ala Leu Gln Val     1771343  GTC CAC AGC CGG CAG CTT AGA CAG GCG CCT GGG CCT CCA GAG GAG TCC    1390178  Val His Ser Arg Gln Leu Arg Gln Ala Pro Gly Pro Pro Glu Glu Ser     1931391  TAG CAC CTG CTG GCC ATG AGG GCC ACG CCA GCC ACT GCC CTC CTC GGC    1438194  ***                                                                 1941439  CAG CAG CAG GTC TGT CTC AGC CGC ATC CCA GCC AAA CTC TGG AGG TCA    14861487  CAC TCG CCT CTC CCC AGG GTT TCA TGT CTG AGG CCC TCA CCA AGT GTG    15341535  AGT GAC AGT ATA AAA GAT TCA CTG TGG CAT CGT TTC CAG AAT GTT CTT    15821583  GCT GTC GTT CTG TTG CAG CTC TTA GTC TGA GGT CCT CTG ACC TCT AGA    16301631  CTC TGA GCT CAC TCC AGC CTG TGA GGA GAA ACG GCC TCC GCT GCG AGC    16781679  TGG CTG GTG CAC TCC CAG GCT CAG GCT GGG GAG CTG CTG CGT CTG TGG    17261727  TCA GGC CTC CTG CTC CTG CCA GGG AGC AGG CGT GGT CTT CGG GTT GAG    17741775  CTC GCC CGT GCG TGG AGG TGC GCA TGG CTG CTC ATG GTC CCA ACA CAG    18221823  GCT ACT GTG AGA GCC AGC ATC CAA CCC CAC GCT TGC AGT GAC TCA GAA    18701871  TGA TAA TTA TTA TGA CTG TTT ATC GAT GCT TCC CCC AGT GTG GTA GAA    19181919  AGT CTT GAA TAA ACA CTT TTG CCT TCA CCC AAA AAA AAA AAA AAA AAA    19661967  AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA                             1996
9．PP1757A：核苷酸序列：(SEQ ID NO:25)长度：2279bp1  GCATTCTAGT GCGACCTTGT TTACACCTCC CCTGGCTCAG TCACACAGCT51  GTGTGGTAGG CTACTAGAAG TGTTTAGTAG TTGTCACTGG GATCATGCTG101  ATGTGGCCCC ATCCCCGCCT CTCCCTGCCC TGTGATATCG GAGGAAACCT151  GACAGAGCAA ATTGGCCATG GCCAAGAAAA AGGAAAAGAA AGAGTGCCAC201  CAAAAGCAGG GAGCCCTAAG GGAGCAGTTA CAGGTCCTCT TTGGATTCCA251  GCACGACGCA TCAAACCATA CCATGACGTG ACTAGGACCC AACCTAGAAA301  TGAAGGAACT GACCCTACAG GACTCACAAC CCTGGATAAT GCAGTGTCCT351  CGGACGGCAA CAAGCTCTGG ACATTACCTG GGGGATGCTG AAGGCGGCAA401  CTGAGGAGGC TGAATGAATC CTGCTCCAGA CACAGACACC ATTCACTCCA451  GATAATTTGT TGCTTGCTAT GCTCTCTGTT GTACATTGCA ACTCGCATAG501  GGATGCAAAG CCGGAATAAG AGCAATGACC ACCATGCCTG ACAGACCTGT551  TGCTGCGCAC ACCTGTACTC TCCAATGAAC AAGACTGAAT GCAAAAAAAA601  CAGAAAATGG GGAGATTTAG GGGATCAGTC AGTGTGGTTG GAAAATTGTA651  AGATGAAGTT ACAGGATATA GACACAAACC TTCTTGGAAG GCCAGAAGGT 701  TTGCATAGCT  TCAGTAAAGG  ATTTGGCTGA  AATCCTTTTT  ACCTCTAATC751  CCCTTTACCT  TGAGTTGATA  GCAATAGAGC  AAATAACATG  GGAATGTGGG801  GGAGTTTATC  TGAATAGCTT  GTTTACTCAT  GTGGTCCTAA  GACCAACCTT851  TGATTATCCG  CAGGTGCATG  ATTGCTCTCT  ACCTGGGGGC  AGGGGGAGTT901  AATTACCCAC  AGGTGGAGCT  GAAGAGCCAG  GAGGCTCAGA  GTCTGCAGCA951  GCAGCAGGAC  CAGTACCTGG  GTCATCTGCA  GCAGTATGTG  GCCACCTATC1001  AGCAGCAGGT  GGTCACCTAT  CAGCAGCTGA  CCTCTGAGGA  GGAGGAGCTG1051  CACAACCAGT  TACTGCTGCA  GACCCAGCTC  GTGGACCGGC  TGCAGCAGCA1101  GAAAGCTCAA  AGCAAAGCTG  TGGCCAAGAT  GGGCTGCCAA  GAGTTGCGGG1151  AGACCCAGGA  GCACCTGGAA  GCTATCAGCC  AGCAGAACCA  GCAGCCTCAG1201  GCCCAGTTGA  GCCTCATGGC  TCTCCCTGGG  GAAGGAGATG  GACAGTGAGG1251  AGGAGGAGGA  GGTGCCTCAG  CCCATGCCAA  GCATCCCGGA  GGATCTAGAG1301  AGCCAGAAGG  CCATGGTGGC  ATTTTTCAAC  TCAGCTGTAG  CTAGTGCCGA1351  GGAGGAGCAG  GCACGGCTAT  GTGGGCAGCT  GAAGGAGTGC  ACTGCCAGCG1401  CCTGGCTCAT  CTGTTGGCCT  CGGCCCAGAA  GGAACCTGAG  GCAGCAGCCC1451  CAGCCCCAAG  AACTGGGGGT  GATCCCATGT  GTGGGGAGAC  CCACCAGGCC1501  CTGCAGGGGG  CCATGGAGAA  GCTGTGGGAG  AGTACATCGC  ACTGTACCAG1551  AGCCAGAGGG  CAGTGCGGAA  GGAGGAGGAG  TGCATCAGCA  GGCTGGCCCA1601  GGACAAGGGA  GAGGTGAAGG  TGAAGCTGCT  GGAGCTGGCG  TGGCTTGTGG1651  ACGACTGCAA  CAAGTGGCAT  AGCAGATTCC  TGGCAGCTGC  CCAGAACCCT1701  GCTGATGAGC  CCACTCCAGG  GGCCCCCGCC  CCCCAGTAGC  TTGGGGCTAC1751  TGACAAGCCA  GGGTAGTGAG  TAGAGTCCTC  AGGCACAGTG  GGCACGCAGG1801  AGCAGGGGAG  GGCTCCCACA  GCACCCTGCC  TCCCTCTCTC  CAAAGATCTT1851  TGTGAGGTGA  GCCTTGCCAG  CAGTGGGGAG  TCTGCACAAG  GAGAGGCGGG1901  GAAGCATTCT  CCCTGTGACA  ACCCCACTGA  GCAGCAGATC  ATGCAACTGC1951  TTCATGAGAT  GCAGAACCTC  CAGGAGCACC  CAGGCTTGGG  CAGCAGCCCT2001  TGCATTCCTT  TTTTGTACCA  GACTGATGAG  AACAATGAGG  TGAAGATCAC2051  CATCATCTAA  AAGCCGGCCA  CTGTCAGCAA  AACCTGGGGA  AGTGGGGCTG2101  GAGGCTCTGC  CCCTACCATG  TCCCTACCAC  CCCTTCCCAG  TCAACCCTTT2151  ACCCTCACAG  TAGCAAGCAT  AAGACCCCTG  TCTAATGTGG  GGAGACAGGT2201  GGAGATGAGG  TGAAGATCAC  CATAATCTAA  AAGGCCACTA  AATAAAAAAA2251  TAAAAAATTT  TAAAAAAAAA  AAAAAAAAAB：氨基酸序列：(SEQ ID NO:26)长度：144个氨基酸1   MDSEEEEEVP  QPMPSIPEDL  ESQKAMVAFF  NSAVASAEEE  QARLCGQLKE51   CTASAWLICW  PRPRRNLRQQ  PQPQELGVIP  CVGRPTRPCR  GPWRSCGRVH101   RTVPEPEGSA  EGGGVHQQAG  PGQGRGEGEA  AGAGVACGRL  QQVAC：核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO:27)克隆号和蛋白名称：PP1757起始编码子：1238 ATG    终止编码子：1672 TAG蛋白质分子量：15481.601    G CAT TCT AGT GCG ACC TTG TTT ACA CCT CCC CTG GCT CAG TCA CAC      4647  AGC TGT GTG GTA GGC TAC TAG AAG TGT TTA GTA GTT GTC ACT GGG ATC      9495  ATG CTG ATG TGG CCC CAT CCC CGC CTC TCC CTG CCC TGT GAT ATC GGA     142143  GGA AAC CTG ACA GAG CAA ATT GGC CAT GGC CAA GAA AAA GGA AAA GAA     190191  AGA GTG CCA CCA AAA GCA GGG AGC CCT AAG GGA GCA GTT ACA GGT CCT     238239  CTT TGG ATT CCA GCA CGA CGC ATC AAA CCA TAC CAT GAC GTG ACT AGG     286287  ACC CAA CCT AGA AAT GAA GGA ACT GAC CCT ACA GGA CTC ACA ACC CTG     334 335  GAT AAT GCA GTG TCC TCG GAC GGC AAC AAG CTC TGG ACA TTA CCT GGG     382383  GGA TGC TGA AGG CGG CAA CTG AGG AGG CTG AAT GAA TCC TGC TCC AGA     430431  CAC AGA CAC CAT TCA CTC CAG ATA ATT TGT TGC TTG CTA TGC TCT CTG     478479  TTG TAC ATT GCA ACT CGC ATA GGG ATG CAA AGC CGG AAT AAG AGC AAT     526527  GAC CAC CAT GCC TGA CAG ACC TGT TGC TGC GCA CAC CTG TAC TCT CCA     574575  ATG AAC AAG ACT GAA TGC AAA AAA AAC AGA AAA TGG GGA GAT TTA GGG     622623  GAT CAG TCA GTG TGG TTG GAA AAT TGT AAG ATG AAG TTA CAG GAT ATA     67G671  GAC ACA AAC CTT CTT GGA AGG CCA GAA GGT TTG CAT AGC TTC AGT AAA     718719  GGA TTT GGC TGA AAT CCT TTT TAC CTC TAA TCC CCT TTA CCT TGA GTT     766767  GAT AGC AAT AGA GCA AAT AAC ATG GGA ATG TGG GGG AGT TTA TCT GAA     814815  TAG CTT GTT TAC TCA TGT GGT CCT AAG ACC AAC CTT TGA TTA TCC GCA     862863  GGT GCA TGA TTG CTC TCT ACC TGG GGG CAG GGG GAG TTA ATT ACC CAC     910911  AGG TGG AGC TGA AGA GCC AGG AGG CTC AGA GTC TGC AGC AGC AGC AGG     958959  ACC AGT ACC TGG GTC ATC TGC AGC AGT ATG TGG CCA CCT ATC AGC AGC    10061007  AGG TGG TCA CCT ATC AGC AGC TGA CCT CTG AGG AGG AGG AGC TGC ACA    10541055  ACC AGT TAC TGC TGC AGA CCC AGC TCG TGG ACC GGC TGC AGC AGC AGA    11021103  AAG CTC AAA GCA AAG CTG TGG CCA AGA TGG GCT GCC AAG AGT TGC GGG    11501151  AGA CCC AGG AGC ACC TGG AAG CTA TCA GCC AGC AGA ACC AGC AGC CTC    11981199  AGG CCC AGT TGA GCC TCA TGG CTC TCC CTG GGG AAG GAG ATG GAC AGT    12461                                                      Met Asp Ser       31247  GAG GAG GAG GAG GAG GTG CCT CAG CCC ATG CCA AGC ATC CCG GAG GAT    12944  Glu Glu Glu Glu Glu Val Pro Gln Pro Met Pro Ser Ile Pro Glu Asp      191295  CTA GAG AGC CAG AAG GCC ATG GTG GCA TTT TTC AAC TCA GCT GTA GCT    134220  Leu Glu Ser Gln Lys Ala Met Val Ala Phe Phe Asn Ser Ala Val Ala      351343  AGT GCC GAG GAG GAG CAG GCA CGG CTA TGT GGG CAG CTG AAG GAG TGC    139036  Ser Ala Glu Glu Glu Gln Ala Arg Leu Cys Gly Gln Leu Lys Glu Cys      511391  ACT GCC AGC GCC TGG CTC ATC TGT TGG CCT CGG CCC AGA AGG AAC CTG    143852  Thr Ala Ser Ala Trp Leu Ile Cys Trp Pro Arg Pro Arg Arg Asn Leu      671439  AGG CAG CAG CCC CAG CCC CAA GAA CTG GGG GTG ATC CCA TGT GTG GGG    148668  Arg Gln Gln Pro Gln Pro Gln Glu Leu Gly Val Ile Pro Cys Val Gly      831487  AGA CCC ACC AGG CCC TGC AGG GGG CCA TGG AGA AGC TGT GGG AGA GTA    153484  Arg Pro Thr Arg Pro Cys Arg Gly Pro Trp Arg Ser Cys Gly Arg Val      991535  CAT CGC ACT GTA CCA GAG CCA GAG GGC AGT GCG GAA GGA GGA GGA GTG    1582100  His Arg Thr Val Pro Glu Pro Glu Gly Ser Ala Glu Gly Gly Gly Val     1151583  CAT CAG CAG GCT GGC CCA GGA CAA GGG AGA GGT GAA GGT GAA GCT GCT   1630116  His Gln Gln Ala Gly Pro Gly Gln Gly Arg Gly G1u Gly Glu Ala Ala    1311631  GGA GCT GGC GTG GCT TGT GGA CGA CTG CAA CAA GTG GCA TAG CAG ATT    1678132  Gly Ala Gly Val Ala Cys Gly Arg Leu Gln Gln Val Ala ***             1451679  CCT GGC AGC TGC CCA GAA CCC TGC TGA TGA GCC CAC TCC AGG GGC CCC    17261727  CGC CCC CCA GTA GCT TGG GGC TAC TGA CAA GCC AGG GTA GTG AGT AGA    17741775  GTC CTC AGG CAC AGT GGG CAC GCA GGA GCA GGG GAG GGC TCC CAC AGC    18221823    ACC  CTG  CCT  CCC  TCT  CTC  CAA  AGA  TCT  TTG  TGA  GGT  GAG  CCT  TGC  CAG         18701871    CAG  TGG  GGA  GTC  TGC  ACA  AGG  AGA  GGC  GGG  GAA  GCA  TTC  TCC  CTG  TGA         19181919    CAA  CCC  CAC  TGA  GCA  GCA  GAT  CAT  GCA  ACT  GCT  TCA  TGA  GAT  GCA  GAA         19661967    CCT  CCA  GGA  GCA  CCC  AGG  CTT  GGG  CAG  CAG  CCC  TTG  CAT  TCC  TTT  TTT         20142015    GTA  CCA  GAC  TGA  TGA  GAA  CAA  TGA  GGT  GAA  GAT  CAC  CAT  CAT  CTA  AAA         20622063    GCC  GGC  CAC  TGT  CAG  CAA  AAC  CTG  GGG  AAG  TGG  GGC  TGG  AGG  CTC  TGC         21102111    CCC  TAC  CAT  GTC  CCT  ACC  ACC  CCT  TCC  CAG  TCA  ACC  CTT  TAC  CCT  CAC         21582159    AGT  AGC  AAG  CAT  AAG  ACC  CCT  GTC  TAA  TGT  GGG  GAG  ACA  GGT  GGA  GAT         22062207    GAS  GTG  AAG  ATC  ACC  ATA  ATC  TAA  AAG  GCC  ACT  AAA  TAA  AAA  AAT  AAA         22542255    AAA  TTT  TAA  AAA  AAA  AAA  AAA  AAA  A                                              2279

Claims (11)

1．一种分离的具有抑癌功能的人蛋白，其特征在于，它包含具有选自下组的氨基酸序列的多肽：SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:26；
或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。
2．如权利要求1所述的多肽，其特征在于，该多肽是具有选自下组的氨基酸序列的多肽：SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:26。
3．一种分离的多核苷酸，其特征在于，它包含一核苷酸序列，该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少85％相同性：
(a)编码如权利要求1和2所述多肽的多核苷酸；
(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。
4．如权利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，该多核苷酸编码的多肽具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:26。
5．如权利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，该多核苷酸的序列选自下组：
SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:27的编码区序列或全长序列。
6．一种载体，其特征在于，它含有权利要求3所述的多核苷酸。
7．一种遗传工程化的宿主细胞，其特征在于，它是选自下组的一种宿主细胞：
(a)用权利要求6所述的载体转化或转导的宿主细胞；
(b)用权利要求3所述的多核苷酸转化或转导的宿主细胞。
8．一种具有具有抑癌功能的人蛋白活性的多肽的制备方法，其特征在于，该方法包含：
(a)在适合表达具有抑癌功能的人蛋白的条件下，培养权利要求7所述的宿主细胞；
(b)从培养物中分离出具有具有抑癌功能的人蛋白活性的多肽。
9．一种能与权利要求1所述的具有抑癌功能的人蛋白特异性结合的抗体。
10．一种核酸分子，它含有权利要求3所述的多核苷酸中连续的10-800个核苷酸。
11、一种药物组合物，其特征在于，它含有安全有效量的权利要求1所述的多肽以及药学上可接受的载体。
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