CN1313317A - 具有抑制癌细胞生长功能的新的人蛋白及其编码序列 - Google Patents
具有抑制癌细胞生长功能的新的人蛋白及其编码序列 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1313317A CN1313317A CN00111991A CN00111991A CN1313317A CN 1313317 A CN1313317 A CN 1313317A CN 00111991 A CN00111991 A CN 00111991A CN 00111991 A CN00111991 A CN 00111991A CN 1313317 A CN1313317 A CN 1313317A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- seq
- polypeptide
- sequence
- polynucleotide
- cag
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明公开了一类新的具有抑癌功能的人蛋白,编码此多肽的多核苷酸和经重组技术产生该多肽的方法。本发明还公开了此多肽用于治疗多种疾病如癌症等的方法。本发明还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明还公开了编码这类新的具有抑癌功能的人蛋白的多核苷酸的用途。
Description
本发明属于生物技术领域,具体地说,本发明涉及新的编码具有抑癌功能的人蛋白的多核苷酸,以及此多核苷酸编码的多肽。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的用途和制备。
人基因组学研究目前是国际上的热点,除人染色体DNA大规模测序,表达序列测序(EST)的方法外,还缺少从功能开始的筛选具有功能基因的高通量的方法。
癌症是危害人类健康的主要疾病之一。为了有效地治疗和预防肿瘤,目前人们已越来越关注肿瘤的基因治疗。因此,本领域迫切需要开发研究具有抑癌功能的人蛋白及其激动剂/抑制剂。
本发明的目的是提供一类新的具有抑癌功能的人蛋白多肽以及其片段、类似物和衍生物。
本发明的另一目的是提供编码这些多肽的多核苷酸。
本发明的另一目的是提供生产这些多肽的方法以及该多肽和编码序列的用途。
在本发明的第一方面,提供新颖的分离出的具有抑癌功能的蛋白多肽,它包含具有选自下组的氨基酸序列的多肽:SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ IDNO:11、SEQ ID NO:14;或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。
较佳地,该多肽是具有选自下组的氨基酸序列的多肽:SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14。
在本发明的第二方面,提供了一种分离的多核苷酸,它包含一核苷酸序列,该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少85%相同性:(a)编码上述的具有抑癌功能的蛋白多肽的多核苷酸;(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。较佳地,该多核苷酸编码的多肽具有选自下组的氨基酸序列:SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ IDNO:11、SEQ ID NO:14。更佳地,该多核苷酸的序列选自下组:SEQ ID NO:3、SEQ IDNO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15的编码区序列或全长序列。
在本发明的第三方面,提供了含有上述多核苷酸的载体,以及被该载体转化或转导的宿主细胞或者被上述多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞。
在本发明的第四方面,提供了制备具有具有抑癌功能的蛋白活性的多肽的制备方法,该方法包含:(a)在适合表达具有抑癌功能的蛋白的条件下,培养上述被转化或转导的宿主细胞;(b)从培养物中分离出具有具有抑癌功能的蛋白活性的多肽。
在本发明的第五方面,提供了与上述的具有抑癌功能的蛋白多肽特异性结合的抗体。还提供了可用于检测的核酸分子,它含有上述的多核苷酸中连续的10-800个核苷酸。
在本发明的第六方面,提供了一种药物组合物,它含有安全有效量的本发明的具有抑癌功能的蛋白多肽以及药学上可接受的载体。这些药物组合物可治疗癌症以及细胞异常增殖等病症。
本发明的其它方面由于本文的技术的公开,对本领域的技术人员而言是显而易见的。
本发明采用大规模cDNA克隆转染癌细胞,在获得具有抑癌作用的基础上,经测序证明为新的基因,进一步得到全长cDNA克隆。DNA转染试验证明,本发明的具有抑癌功能的蛋白对癌细胞(肝癌细胞)具有抑制克隆形成的作用,其抑制率在50%或50%以上。
如本文所用,“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质,原始环境即是天然环境)。如活体细胞内的天然状态下的多聚核苷酸和多肽是没有分离纯化的,但同样的多聚核苷酸或多肽如从天然状态中同存在的其他物质中分开,则为分离纯化的。
如本文所用,“分离的具有抑癌功能的蛋白或多肽”是指具有抑癌功能的蛋白多肽基本上不含天然与其相关的其它蛋白、脂类、糖类或其它物质。本领域的技术人员能用标准的蛋白质纯化技术纯化具有抑癌功能的蛋白。基本上纯的多肽在非还原聚丙烯酰胺凝胶上能产生单一的主带。具有抑癌功能的蛋白多肽的纯度能用氨基酸序列分析。
本发明的多肽可以是重组多肽、天然多肽、合成多肽,优选重组多肽。本发明的多肽可以是天然纯化的产物,或是化学合成的产物,或使用重组技术从原核或真核宿主(例如,细菌、酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞)中产生。根据重组生产方案所用的宿主,本发明的多肽可以是糖基化的,或可以是非糖基化的。本发明的多肽还可包括或不包括起始的甲硫氨酸残基。
本发明还包括具有抑癌功能的人蛋白的片段、衍生物和类似物。如本文所用,术语“片段”、“衍生物”和“类似物”是指基本上保持本发明的天然具有抑癌功能的人蛋白相同的生物学功能或活性的多肽。本发明的多肽片段、衍生物或类似物可以是(ⅰ)有一个或多个保守或非保守性氨基酸残基(优选保守性氨基酸残基)被取代的多肽,而这样的取代的氨基酸残基可以是也可以不是由遗传密码编码的,或(ⅱ)在一个或多个氨基酸残基中具有取代基团的多肽,或(ⅲ)成熟多肽与另一个化合物(比如延长多肽半衰期的化合物,例如聚乙二醇)融合所形成的多肽,或(ⅳ)附加的氨基酸序列融合到此多肽序列而形成的多肽(如前导序列或分泌序列或用来纯化此多肽的序列或蛋白原序列)。根据本文的教导,这些片段、衍生物和类似物属于本领域熟练技术人员公知的范围。
本发明的多核苷酸可以是DNA形式或RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因组DNA或人工合成的DNA。DNA可以是单链的或是双链的。DNA可以是编码链或非编码链。以PP565蛋白(在本申请中,蛋白质的命名采用其克隆编号)为例,编码成熟多肽的编码区序列可以与SEQ ID NO:3所示的编码区序列相同或者是简并的变异体。如本文所用,“简并的变异体”在本发明中是指编码具有SEQ ID NO:2的蛋白质,但与SEQ IDNO:3所示的编码区序列有差别的核酸序列。以PP712蛋白(在本申请中,蛋白质的命名采用其克隆编号)为例,编码成熟多肽的编码区序列可以与SEQ ID NO:6所示的编码区序列相同或者是简并的变异体。如本文所用,“简并的变异体”在本发明中是指编码具有SEQ ID NO:5的蛋白质,但与SEQ ID NO:6所示的编码区序列有差别的核酸序列。对于其他具有抑癌功能的蛋白,可依此类推。对于其他具有抑癌功能的蛋白,可依此类推。
编码成熟多肽的多核苷酸包括:只编码成熟多肽的编码序列;成熟多肽的编码序列和各种附加编码序列;成熟多肽的编码序列(和任选的附加编码序列)以及非编码序列。
术语“编码多肽的多核苷酸”可以是包括编码此多肽的多核苷酸,也可以是还包括附加编码和/或非编码序列的多核苷酸。
本发明还涉及上述多核苷酸的变异体,其编码与本发明有相同的氨基酸序列的多肽或多肽的片段、类似物和衍生物。此多核苷酸的变异体可以是天然发生的等位变异体或非天然发生的变异体。这些核苷酸变异体包括取代变异体、缺失变异体和插入变异体。如本领域所知的,等位变异体是一个多核苷酸的替换形式,它可能是一个或多个核苷酸的取代、缺失或插入,但不会从实质上改变其编码的多肽的功能。
本发明还涉及与上述的序列杂交且两个序列之间具有至少50%,较佳地至少70%,更佳地至少80%相同性的多核苷酸。本发明特别涉及在严格条件下与本发明所述多核苷酸可杂交的多核苷酸。在本发明中,“严格条件”是指:(1)在较低离子强度和较高温度下的杂交和洗脱,如0.2×SSC,0.1%SDS,60℃;或(2)杂交时加有变性剂,如50%(v/v)甲酰胺,0.1%小牛血清/0.1%Ficoll,42℃等;或(3)仅在两条序列之间的相同性至少在95%以上,更好是97%以上时才发生杂交。并且,可杂交的多核苷酸编码的多肽与SEQ IDNO:2所示的成熟多肽有相同的生物学功能和活性。
本发明还涉及与上述的序列杂交的核酸片段。如本文所用,“核酸片段”的长度至少含15个核苷酸,较好是至少30个核苷酸,更好是至少50个核苷酸,最好是至少100个核苷酸以上。核酸片段可用于核酸的扩增技术(如PCR)以确定和/或分离编码具有抑癌功能的蛋白的多聚核苷酸。
本发明中的多肽和多核苷酸优选以分离的形式提供,更佳地被纯化至均质。
本发明的DNA序列能用几种方法获得。例如,用本领域熟知的杂交技术分离DNA。这些技术包括但不局限于:1)用探针与基因组或cDNA文库杂交以检出同源性核苷酸序列,和2)表达文库的抗体筛选以检出具有共同结构特征的克隆的DNA片段。
编码具有抑癌功能的蛋白的特异DNA片段序列产生也能用下列方法获得:1)从基因组DNA分离双链DNA序列;2)化学合成DNA序列以获得所需多肽的双链DNA。
上述提到的方法中,分离基因组DNA最不常用。当需要的多肽产物的整个氨基酸序列已知时,DNA序列的直接化学合成是经常选用的方法。如果所需的氨基酸的整个序列不清楚时,DNA序列的直接化学合成是不可能的,选用的方法是cDNA序列的分离。分离感兴趣的cDNA的标准方法是从高表达该基因的供体细胞分离mRNA并进行逆转录,形成质粒或噬菌体cDNA文库。提取mRNA的方法已有多种成熟的技术,试剂盒也可从商业途径获得(Qiagene)。而构建cDNA文库也是通常的方法(Sambrook,et al.,Molecular Cloning,A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory.New York,1989)。还可得到商业供应的cDNA文库,如Clontech公司的不同cDNA文库。当结合使用聚合酶反应技术时,即使极少的表达产物也能克隆。
可用常规方法从这些cDNA文库中筛选本发明的基因。这些方法包括(但不限于):(1)DNA-DNA或DNA-RNA杂交;(2)标志基因的功能出现或丧失;(3)测定具有抑癌功能的蛋白的转录本的水平;(4)通过免疫学技术或测定生物学活性,来检测基因表达的蛋白产物。上述方法可单用,也可多种方法联合应用。
在第(1)种方法中,杂交所用的探针是与本发明的多核苷酸的任何一部分同源,其长度至少15个核苷酸,较好是至少30个核苷酸,更好是至少50个核苷酸,最好是至少100个核苷酸。此外,探针的长度通常在2kb之内,较佳地为1kb之内。此处所用的探针通常是在本发明的基因DNA序列信息的基础上化学合成的DNA序列。本发明的基因本身或者片段当然可以用作探针。DNA探针的标记可用放射性同位素,荧光素或酶(如碱性磷酸酶)等。
在第(4)种方法中,检测具有抑癌功能的蛋白基因表达的蛋白产物可用免疫学技术如Western印迹法,放射免疫沉淀法,酶联免疫吸附法(ELISA)等。
应用PCR技术扩增DNA/RNA的方法(Saiki,et al.Science 1985;230:1350-1354)被优选用于获得本发明的基因。特别是很难从文库中得到全长的cDNA时,可优选使用RACE法(RACE-cDNA末端快速扩增法),用于PCR的引物可根据本文所公开的本发明的序列信息适当地选择,并可用常规方法合成。可用常规方法如通过凝胶电泳分离和纯化扩增的DNA/RNA片段。
如上所述得到的本发明的基因,或者各种DNA片段等的核苷酸序列的测定可用常规方法如双脱氧链终止法(Sanger et al.PNAS,1977,74:5463-5467)。这类核苷酸序列测定也可用商业测序试剂盒等。为了获得全长的cDNA序列,测序需反复进行。有时需要测定多个克隆的cDNA序列,才能拼接成全长的cDNA序列。
本发明也涉及包含本发明的多核苷酸的载体,以及用本发明的载体或具有抑癌功能的蛋白编码序列经基因工程产生的宿主细胞,以及经重组技术产生本发明所述多肽的方法。
通过常规的重组DNA技术,可利用本发明的多聚核苷酸序列可用来表达或生产重组的具有抑癌功能的蛋白多肽(Science,1984;224:1431)。一般来说有以下步骤:
(1).用本发明的编码具有抑癌功能的人蛋白的多核苷酸(或变异体),或用含有该多核苷酸的重组表达载体转化或转导合适的宿主细胞;
(2).在合适的培养基中培养的宿主细胞;
(3).从培养基或细胞中分离、纯化蛋白质。
本发明中,具有抑癌功能的人蛋白多核苷酸序列可插入到重组表达载体中。术语“重组表达载体”指本领域熟知的细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒如腺病毒、逆转录病毒或其他载体。在本发明中适用的载体包括但不限于:在细菌中表达的基于T7的表达载体(Rosenberg,et al.Gene,1987,56:125);在哺乳动物细胞中表达的pMSXND表达载体(Lee and Nathans,J Bio Chem.263:3521,1988)和在昆虫细胞中表达的来源于杆状病毒的载体。总之,只要能在宿主体内复制和稳定,任何质粒和载体都可以用。表达载体的一个重要特征是通常含有复制起点、启动子、标记基因和翻译控制元件。
本领域的技术人员熟知的方法能用于构建含具有抑癌功能的人蛋白编码DNA序列和合适的转录/翻译控制信号的表达载体。这些方法包括体外重组DNA技术、DNA合成技术、体内重组技术等(Sambroook,et al.Molecular Cloning,a Laboratory Manual,coldSpring Harbor Laboratory.New York,1989)。所述的DNA序列可有效连接到表达载体中的适当启动子上,以指导mRNA合成。这些启动子的代表性例子有:大肠杆菌的lac或trp启动子;λ噬菌体PL启动子;真核启动子包括CMV立即早期启动子、HSV胸苷激酶启动子、早期和晚期SV40启动子、反转录病毒的LTRs和其他一些已知的可控制基因在原核或真核细胞或其病毒中表达的启动子。表达载体还包括翻译起始用的核糖体结合位点和转录终止子。
此外,表达载体优选地包含一个或多个选择性标记基因,以提供用于选择转化的宿主细胞的表型性状,如真核细胞培养用的二氢叶酸还原酶、新霉素抗性以及绿色荧光蛋白(GFP),或用于大肠杆菌的四环素或氨苄青霉素抗性。
包含上述的适当DNA序列以及适当启动子或者控制序列的载体,可以用于转化适当的宿主细胞,以使其能够表达蛋白质。
宿主细胞可以是原核细胞,如细菌细胞;或是低等真核细胞,如酵母细胞;或是高等真核细胞,如哺乳动物细胞。代表性例子有:大肠杆菌,链霉菌属;鼠伤寒沙门氏菌的细菌细胞;真菌细胞如酵母;植物细胞;果蝇S2或Sf9的昆虫细胞;CHO、COS或Bowes黑素瘤细胞的动物细胞等。
本发明的多核苷酸在高等真核细胞中表达时,如果在载体中插入增强子序列时将会使转录得到增强。增强子是DNA的顺式作用因子,通常大约有10到300个碱基对,作用于启动子以增强基因的转录。可举的例子包括在复制起始点晚期一侧的100到270个碱基对的SV40增强子、在复制起始点晚期一侧的多瘤增强子以及腺病毒增强子等。
本领域一般技术人员都清楚如何选择适当的载体、启动子、增强子和宿主细胞。
用重组DNA转化宿主细胞可用本领域技术人员熟知的常规技术进行。当宿主为原核生物如大肠杆菌时,能吸收DNA的感受态细胞可在指数生长期后收获,用CaCl2法处理,所用的步骤在本领域众所周知。可供选择的是用MgCl2。如果需要,转化也可用电穿孔的方法进行。当宿主是真核生物,可选用如下的DNA转染方法:磷酸钙共沉淀法,常规机械方法如显微注射、电穿孔、脂质体包装等。
获得的转化子可以用常规方法培养,表达本发明的基因所编码的多肽。根据所用的宿主细胞,培养中所用的培养基可选自各种常规培养基。在适于宿主细胞生长的条件下进行培养。当宿主细胞生长到适当的细胞密度后,用合适的方法(如温度转换或化学诱导)诱导选择的启动子,将细胞再培养一段时间。
在上面的方法中的重组多肽可包被于细胞内、细胞外或在细胞膜上表达或分泌到细胞外。如果需要,可利用其物理的、化学的和其它特性通过各种分离方法分离和纯化重组的蛋白。这些方法是本领域技术人员所熟知的。这些方法的例子包括但并不限于:常规的复性处理、用蛋白沉淀剂处理(盐析方法)、离心、渗透破菌、超处理、超离心、分子筛层析(凝胶过滤)、吸附层析、离子交换层析、高效液相层析(HPLC)和其它各种液相层析技术及这些方法的结合。
重组的具有抑癌功能的人蛋白或多肽有多方面的用途。这些用途包括(但不限于):直接做为药物治疗具有抑癌功能的蛋白功能低下或丧失所致的疾病,和用于筛选促进或对抗具有抑癌功能的蛋白功能的抗体、多肽或其它配体。例如,抗体可用于激活或抑制具有抑癌功能的人蛋白的功能。用表达的重组具有抑癌功能的人蛋白筛选多肽库可用于寻找有治疗价值的能抑制或刺激具有抑癌功能的人蛋白功能的多肽分子。
本发明也提供了筛选药物以鉴定提高(激动剂)或阻遏(拮抗剂)具有抑癌功能的人蛋白的药剂的方法。激动剂提高具有抑癌功能的人蛋白刺激细胞增殖等生物功能,而拮抗剂阻止和治疗与细胞过度增殖有关的紊乱如各种癌症。例如,能在药物的存在下,将哺乳动物细胞或表达具有抑癌功能的人蛋白的膜制剂与标记的具有抑癌功能的人蛋白一起培养。然后测定药物提高或阻遏此相互作用的能力。
具有抑癌功能的人蛋白的拮抗剂包括筛选出的抗体、化合物、受体缺失物和类似物等。具有抑癌功能的人蛋白的拮抗剂可以与具有抑癌功能的人蛋白结合并消除其功能,或是抑制具有抑癌功能的人蛋白的产生,或是与多肽的活性位点结合使多肽不能发挥生物学功能。具有抑癌功能的人蛋白的拮抗剂可用于治疗用途。
在筛选作为拮抗剂的化合物时,可以将具有抑癌功能的蛋白加入生物分析测定中,通过测定化合物影响具有抑癌功能的蛋白和其受体之间的相互作用来确定化合物是否是拮抗剂。用上述筛选化合物的同样方法,可以筛选出起拮抗剂作用的受体缺失物和类似物。
本发明的多肽可直接用于疾病治疗,例如,各种恶性肿瘤、和细胞异常增殖等。
本发明的多肽,及其片段、衍生物、类似物或它们的细胞可以用来作为抗原以生产抗体。这些抗体可以是多克隆或单克隆抗体。多克隆抗体可以通过将此多肽直接注射动物的方法得到。制备单克隆抗体的技术包括杂交瘤技术,三瘤技术,人B-细胞杂交瘤技术,EBV-杂交瘤技术等。
可以将本发明的多肽和拮抗剂与合适的药物载体组合后使用。这些载体可以是水、葡萄糖、乙醇、盐类、缓冲液、甘油以及它们的组合。组合物包含安全有效量的多肽或拮抗剂以及不影响药物效果的载体和赋形剂。这些组合物可以作为药物用于疾病治疗。
本发明还提供含有一种或多种容器的药盒或试剂盒,容器中装有一种或多种本发明的药用组合物成分。与这些容器一起,可以有由制造、使用或销售药品或生物制品的政府管理机构所给出的指示性提示,该提示反映出生产、使用或销售的政府管理机构许可其在人体上施用。此外,本发明的多肽可以与其它的治疗化合物结合使用。
药物组合物可以以方便的方式给药,如通过局部、静脉内、腹膜内、肌内、皮下、鼻内或皮内的给药途径。具有抑癌功能的蛋白以有效地治疗和/或预防具体的适应症的量来给药。施用于患者的具有抑癌功能的蛋白的量和剂量范围将取决于许多因素,如给药方式、待治疗者的健康条件和诊断医生的判断。
具有抑癌功能的人蛋白的多聚核苷酸也可用于多种治疗目的。基因治疗技术可用于治疗由于具有抑癌功能的蛋白的无表达或异常/无活性的具有抑癌功能的蛋白的表达所致的细胞增殖、发育或代谢异常。重组的基因治疗载体(如病毒载体)可设计成表达变异的具有抑癌功能的蛋白,以抑制内源性的具有抑癌功能的蛋白活性。例如,一种变异的具有抑癌功能的蛋白可以是缩短的、缺失了信号传导功能域的具有抑癌功能的蛋白,虽可与下游的底物结合,但缺乏信号传导活性。因此重组的基因治疗载体可用于治疗具有抑癌功能的蛋白表达或活性异常所致的疾病。来源于病毒的表达载体如逆转录病毒、腺病毒、腺病毒相关病毒、单纯疱疹病毒、细小病毒等可用于将具有抑癌功能的蛋白基因转移至细胞内。构建携带具有抑癌功能的蛋白基因的重组病毒载体的方法可见于已有文献(Sambrook,et al.)。另外重组具有抑癌功能的人蛋白基因可包装到脂质体中转移至细胞内。
抑制具有抑癌功能的人蛋白mRNA的寡聚核苷酸(包括反义RNA和DNA)以及核酶也在本发明的范围之内。核酶是一种能特异性分解特定RNA的酶样RNA分子,其作用机制是核酶分子与互补的靶RNA特异性杂交后进行核酸内切作用。反义的RNA和DNA及核酶可用已有的任何RNA或DNA合成技术获得,如固相磷酸酰胺化学合成法合成寡核苷酸的技术已广泛应用。反义RNA分子可通过编码该RNA的DNA序列在体外或体内转录获得。这种DNA序列已整合到载体的RNA聚合酶启动子的下游。为了增加核酸分子的稳定性,可用多种方法对其进行修饰,如增加两侧的序列长度,核糖核苷之间的连接应用磷酸硫酯键或肽键而非磷酸二酯键。
多聚核苷酸导入组织或细胞内的方法包括:将多聚核苷酸直接注入到体内组织中;或在体外通过载体(如病毒、噬菌体或质粒等)先将多聚核苷酸导入细胞中,再将细胞移植到体内等。
本发明的多肽还可用作肽谱分析,例如,多肽可用物理的、化学或酶进行特异性切割,并进行一维或二维或三维的凝胶电泳分析。
本发明还提供了针对具有抑癌功能的人蛋白抗原决定簇的抗体。这些抗体包括(但不限于):多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、单链抗体、Fab片段和Fab表达文库产生的片段。
抗具有抑癌功能的人蛋白的抗体可用于免疫组织化学技术中,检测活检标本中的具有抑癌功能的人蛋白。
与具有抑癌功能的人蛋白结合的单克隆抗体也可用放射性同位素标记,注入体内可跟踪其位置和分布。这种放射性标记的抗体可作为一种非创伤性诊断方法用于肿瘤细胞的定位和判断是否有转移。
本发明中的抗体可用于治疗或预防与具有抑癌功能的人蛋白相关的疾病。给予适当剂量的抗体可以刺激或阻断具有抑癌功能的人蛋白的产生或活性。
抗体也可用于设计针对体内某一特殊部位的免疫毒素。如具有抑癌功能的人蛋白高亲和性的单克隆抗体可与细菌或植物毒素(如白喉毒素,蓖麻蛋白,红豆碱等)共价结合。一种通常的方法是用巯基交联剂如SPDP,攻击抗体的氨基,通过二硫键的交换,将毒素结合于抗体上,这种杂交抗体可用于杀灭具有抑癌功能的人蛋白阳性的细胞。
多克隆抗体的生产可用具有抑癌功能的人蛋白或多肽免疫动物,如家兔,小鼠,大鼠等。多种佐剂可用于增强免疫反应,包括但不限于弗氏佐剂等。
具有抑癌功能的人蛋白单克隆抗体可用杂交瘤技术生产(Kohler and Milstein.Nature,1975,256:495-497)。将人恒定区和非人源的可变区结合的嵌合抗体可用已有的技术生产(Morrison et al,PNAS,1985,81:6851)。而已有的生产单链抗体的技术(U.S.PatNo.4946778)也可用于生产抗具有抑癌功能的人蛋白的单链抗体。
能与具有抑癌功能的人蛋白结合的多肽分子可通过筛选由各种可能组合的氨基酸结合于固相物组成的随机多肽库而获得。筛选时,必须对具有抑癌功能的人蛋白分子进行标记。
本发明还涉及定量和定位检测具有抑癌功能的人蛋白水平的诊断试验方法。这些试验是本领域所熟知的,且包括FISH测定和放射免疫测定。试验中所检测的具有抑癌功能的人蛋白水平,可以用作解释具有抑癌功能的人蛋白在各种疾病中的重要性和用于诊断具有抑癌功能的蛋白起作用的疾病。
具有抑癌功能的蛋白的多聚核苷酸可用于具有抑癌功能的蛋白相关疾病的诊断和治疗。在诊断方面,具有抑癌功能的蛋白的多聚核苷酸可用于检测具有抑癌功能的蛋白的表达与否或在疾病状态下具有抑癌功能的蛋白的异常表达。如具有抑癌功能的蛋白DNA序列可用于对活检标本的杂交以判断具有抑癌功能的蛋白的表达异常。杂交技术包括Southern印迹法,Northern印迹法、原位杂交等。这些技术方法都是公开的成熟技术,相关的试剂盒都可从商业途径得到。本发明的多核苷酸的一部分或全部可作为探针固定在微阵列(Microarray)或DNA芯片(又称为“基因芯片”)上,用于分析组织中基因的差异表达分析和基因诊断。用具有抑癌功能的蛋白特异的引物进行RNA-聚合酶链反应(RT-PCR)体外扩增也可检测具有抑癌功能的蛋白的转录产物。
检测具有抑癌功能的蛋白基因的突变也可用于诊断具有抑癌功能的蛋白相关的疾病。具有抑癌功能的蛋白突变的形式包括与正常野生型具有抑癌功能的蛋白DNA序列相比的点突变、易位、缺失、重组和其它任何异常等。可用已有的技术如Southern印迹法、DNA序列分析、PCR和原位杂交检测突变。另外,突变有可能影响蛋白的表达,因此用Northern印迹法、Western印迹法可间接判断基因有无突变。
本发明的序列对染色体鉴定也是有价值的。该序列会特异性地针对某条人染色体具体位置且并可以与其杂交。目前,需要鉴定染色体上的各基因的具体位点。现在,只有很少的基于实际序列数据(重复多态性)的染色体标记物可用于标记染色体位置。根据本发明,为了将这些序列与疾病相关基因相关联,其重要的第一步就是将这些DNA序列定位于染色体上。
简而言之,根据cDNA制备PCR引物(优选15-35bp),可以将序列定位于染色体上。然后,将这些引物用于PCR筛选含各条人染色体的体细胞杂合细胞。只有那些含有相应于引物的人基因的杂合细胞会产生扩增的片段。
体细胞杂合细胞的PCR定位法,是将DNA定位到具体染色体的快捷方法。使用本发明的的寡核苷酸引物,通过类似方法,可利用一组来自特定染色体的片段或大量基因组克隆而实现亚定位。可用于染色体定位的其它类似策略包括原位杂交、用标记的流式分选的染色体预筛选和杂交预选,从而构建染色体特异的cDNA库。
将cDNA克隆与中期染色体进行荧光原位杂交(FISH),可以在一个步骤中精确地进行染色体定位。此技术的综述,参见Verma等,Human Chromosomes:a Manual of BasicTechniques,Pergamon Press,New York(1988)。
一旦序列被定位到准确的染色体位置,此序列在染色体上的物理位置就可以与基因图数据相关联。这些数据可见于例如,V.Mckusick,Mendelian Inheritance in Man(可通过与Johns Hopkins University Welch Medical Library联机获得)。然后可通过连锁分析,确定基因与业已定位到染色体区域上的疾病之间的关系。
接着,需要测定患病和未患病个体间的cDNA或基因组序列差异。如果在一些或所有的患病个体中观察到某突变,而该突变在任何正常个体中未观察到,则该突变可能是疾病的病因。比较患病和未患病个体,通常涉及首先寻找染色体中结构的变化,如从染色体水平可见的或用基于cDNA序列的PCR可检测的缺失或易位。根据目前的物理作图和基因定位技术的分辨能力,被精确定位至与疾病有关的染色体区域的cDNA,可以是50至500个潜在致病基因间之一种(假定1兆碱基作图分辨能力和每20kb对应于一个基因)。
本发明的具有抑癌功能的蛋白核苷酸全长序列或其片段通常可以用PCR扩增法、重组法或人工合成的方法获得。对于PCR扩增法,可根据本发明所公开的有关核苷酸序列,尤其是开放阅读框序列来设计引物,并用市售的cDNA库或按本领域技术人员已知的常规方法所制备的cDNA库作为模板,扩增而得有关序列。当序列较长时,常常需要进行两次或多次PCR扩增,然后再将各次扩增出的片段按正确次序拼接在一起。
一旦获得了有关的序列,就可以用重组法来大批量地获得有关序列。这通常是将其克隆入载体,再转入细胞,然后通过常规方法从增殖后的宿主细胞中分离得到有关序列。
此外,还可用人工合成的方法来合成有关序列,尤其是片段长度较短时。通常,通过先合成多个小片段,然后再进行连接可获得序列很长的片段。
目前,已经可以完全通过化学合成来编码本发明蛋白(或其片段,或其衍生物)的DNA序列。然后可将该DNA序列引入本领域中的各种DNA分子(如载体)和细胞中。此外,还可通过化学合成将突变引入本发明蛋白序列中。
此外,由于本发明的具有抑癌功能的蛋白具有源自人的天然氨基酸序列,因此,与来源于其他物种的同族蛋白相比,预计在施用于人时将具有更高的活性和/或更低的副作用(例如在人体内的免疫原性更低或没有)。
下面结合具体实施例,进一步阐述本发明。应理解,这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件如Sambrook等人,分子克隆:实验室手册(New York:Cold Spring Harbor LaboratoryPress,1989)中所述的条件,或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1:cDNA基因的获得及对癌细胞克隆形成的抑制作用
PP565,PP712,PP1143,PP3241,PP3501是通过用常规方法构建人胎盘cDNA文库获得的。取3、6、10月龄的胎盘组织,用Trizol试剂(GIBCO BRL公司)按厂方说明书提取总RNA,用mRNA提纯试剂盒(pharmacia公司)提取mRNA。用pCMV-script TMXR cDNA文库构建试剂盒(Stratagene公司)构建上述mRNA的cDNA文库。其中反转录酶改用MMLV-RT-SuperscriptⅡ(GIBCO BRL),反转录反应在42℃进行。转化XL 10-Gold感受细胞,获得了1×106cfu/μg cDNA滴度的cDNA文库。第一轮随机挑取cDNA克隆,其后以高丰度cDNA克隆和已证明有抑癌细胞生长功能的cDNA克隆为探针,杂交筛选cDNA文库,挑取弱阳性及阴性克隆。用Qiagen 96孔板质粒抽提试剂盒,按厂家说明书进行质粒DNA的提取。质粒DNA和空载体同时转染肝癌细胞系7721。100ngDNA酒精沉淀干燥后,加6μlH2O溶解,待转染。每份DNA样品中加0.74μl脂质体及9.3μl无血清培液,混匀后,室温放置10分钟。每管中加150μl无血清培液,均分加入3孔生长于96孔板的7721细胞中,37℃放置2小时,每孔再加50μl无血清培液,37℃24小时。每孔换100μl全培液,37℃24小时,换含G418的全培液100μl,37℃24~48小时,边观察,边换G418浓度不等的培液。约2~3次后,直到镜检细胞有克隆形成,计数。发现上述克隆有抑制细胞克隆形成作用,结果如下表所示。
cDNA克隆转染细胞(7721)克隆形成情况
cDNA克隆名称 | CDNA克隆数(三个重复) | 空载体克隆数(三个重复) |
PP565 | 2 12 7 | 20 17 16 |
PP712 | 7 3 8 | 21 18 19 |
PP1143 | 9 10 6 | 42 40 56 |
PP3241 | 2 0 0 | 12 18 20 |
PP3501 | 0 0 0 | 28 35 25 |
对cDNA克隆采用双脱氧终止法,在ABI377 DNA自动测序仪上测定其一端近500bp的核苷酸序列。分析后,确定为新基因克隆,进行另一端测序,仍未获得全长cDNA序列,设计引物,再次进行测序,直到获得全长序列(SEQ ID NO:1、4、7、10、13)。
实施例2:从胎盘cDNA中PCR获得全长基因:
取3、6、10月龄的胎盘组织,用Trizol试剂(GIBCO BRL公司)按厂方说明书提取总RNA,用mRNA提纯试剂盒(pharmacia公司)提取mRNA。用MMLV-RT-SuperscriptⅡ(GIBCO BRL)反转录酶在42℃进行反转录反应,获得胎盘cDNA。利用各个基因的转异引物(如下表所示),按90℃3分钟1个循环;94℃30秒,60℃30秒,72℃1分钟,共35个循环;72℃10分钟,1个循环进行PCR扩增,获得含有完整开放阅读框序列的各蛋白基因的扩增产物。扩增产物经测序验证,与实施例1测得的序列相符,随后用常规技术将扩增产物转入宿主细胞,以获得重组蛋白。
基因特异引物
实施例3:cDNA克隆序列分析1.PP565A:核苷酸序列:(SEQ ID NO:1)长度:1932bp1 CTAATATTGA CTTAGACTCA TTTCAAAGTC CTAACATGAT CTTCAGCCTT51 CCTTTCAGAG AAACTAATTC TCTAAATATG TATTCCTAGA CCCACTATCA101 TTGTCTTTGT ACTGAATGAT TATTGACAGT TTTTTGGATT TCTAGAGACC151 TCTCCTGACA GAGAAATATC CTGGTCCCTA GGAAGCATTC TCTGTGATTT201 TGGTTGCTAT TGGTCTGTTA CTGGGCTTTG GTGGAAACCG AATGTTTGAC251 TATGGATCAT CAAGTCACCA TGCAACCTGA ACTACCTATC ATGAACTGGG301 TGCTTTCTGA CCTATCTAGC CATAAAGTGG GTCATGCACA GCAGCATTCC351 ATCATCAAAT GAAAGTATAC TTGATCGGGC TTGAGAAGGT CCTGAAGGCA401 CAAATAAGTT ACATGAAGAA GTGGCTCAAA TGCCCATGGT CTCCACTCCT451 GCCACCCTGC CTCCTCTCCC CTAGCCTGCA CCAGTGGCTT CATGGGGAGT501 TCCCTATGAT TAGTTGACAG AGGAAGAGAA GACTAAGGCC TGGTTCACAG551 ATGATTCTGC ATGATATGCA GGCACTACCT GAAAGTAGAC CACTGCATTA601 CAACCCTTTT CTAGGACATC CCTGAAGGAC AGCAGTGAAG GGAAATCTTC651 CCAGTGGGCA GAATTTCGAG CAGTGCACCT GGTTGTGTAC TTTGCCTGGA701 AGGAGAAATG TCCAGATGTG CGATTATATA CTGATTCATT GGCTGTAGCC751 AGTGGTTTGG CTGTATGGTC AGGGACTTGG AAGAAGTATG ATTGGAAAAT801 TGGTGACAAA GAAATTTGGG GAAGAGGTAA GTGGATGGAC CTTTCTGAGT851 GATTGAAAAC TGAAGATATT TGTATCTCAT GTGAGTGCTC ACCAATGGGT901 GACCTTGGCG GAGGAGGATT TCAATAATCA AGTGGATAGG ATGACCTGTT951 CTGTGGACAT CACTCAGCCT CTTTCCCCAG CCACCTCTCT TATTCCCCAG1001 TGGACCCATG AACTATGTGG TCATGGTGGC AAGGATGGAG GTTACACATG1051 GGCTCAGCAA CATGGACTTC CACTCACCAA GGCTGACCTG GCTACCGCCA1101 CTGCTGAGTG CCCAATTTGC CAGCAGCGGA TACCAACACT GAACCCTCGA1151 TATGGCGCCA TTCCTCAGAG TGATCAGCCA GCTACCTGGT GGCAGGTTGA1201 TTATATTGGA TCTCTTCCAT CATAGCAAGG GCAGAGGTTT GTCCTCACTG1251 GAACAGACAC TTACTCTGGA TATGGGTTTG CCTATCCTGC ATGCAATGTT1301 TCTGCCAAGA CTCCATCCAT GGATTCATGG AATGCATTAT CTGTTGTGGG1351 AAGTCAGGGA CCCTGAATAG AGGGACTGGG TGAAGCCACA GCAGAAGAAC1401 ATAAATTGTG AAGATTTCAT GGACATTTAT TAATTCCCTA AATTAATACT1451 TTTATAATTT CTTACGCCTG TCTTTACTGC AGTCTCTGAA CATAAATTGT1501 GAAGATTTCA TGGACATTTC TGACTTCTCA ATCAATACTC TTATAATTTC1551 CTATGCCTGT CTTTACTTTA ATCTCTTAAT CCCATCATCT TTGTAAAGTA1601 AGGATGTATG TCACCTCAGG ACCCTGTGAT GATTATGTTA TCTGTATAAA1651 TTGTTTGTAA AACATGCGTG TTTGAACAAT ATGAAATCTG GGCATCCTAA1701 AAGAACAGGA TAACAGTGAT TTTCAGGGAA CAAGGGAAAT AACCATAAAG1751 TCTGACTGCC CATTTGCCTT GTGATATTTT GTTGCCCTTG AAGCATGTGA1801 TTTCTGTGAC CCACACCCTA TTCGTACACC CCTCCCCTTT TGAAATCCAT1851 AATAAAAACT TGCTGGTTTT GTGGCTCAGG GGGCATCCCC AAAAAAAAAA1901 AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAB:氨基酸序列:(SEQ ID NO:2)长度:94个氨基酸1 MTCSVDITQP LSPATSLIPQ WTHELCGHGG KDGGYTWAQQ HGLPLTKADL51 ATATAECPIC QQRIPTLNPR YGAIPQSDQP ATWWQVDYIG SLPSC.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO:3)克隆号和蛋白名称:PP565起始编码子:941 ATG 终止编码子:1225 TAG蛋白质分子量:10188.931 C TAA TAT TGA CTT AGA CTC ATT TCA AAG TCC TAA CAT GAT CTT CAG 4647 CCT TCC TTT CAG AGA AAC TAA TTC TCT AAA TAT GTA TTC CTA GAC CCA 9495 CTA TCA TTG TCT TTG TAC TGA ATG ATT ATT GAC AGT TTT TTG GAT TTC 142143 TAG AGA CCT CTC CTG ACA GAG AAA TAT CCT GGT CCC TAG GAA GCA TTC 190191 TCT GTG ATT TTG GTT GCT ATT GGT CTG TTA CTG GGC TTT GGT GGA AAC 238239 CGA ATG TTT GAC TAT GGA TCA TCA AGT CAC CAT GCA ACC TGA ACT ACC 286287 TAT CAT GAA CTG GGT GCT TTC TGA CCT ATC TAG CCA TAA AGT GGG TCA 334335 TGC ACA GCA GCA TTC CAT CAT CAA ATG AAA GTA TAC TTG ATC GGG CTT 382383 GAG AAG GTC CTG AAG GCA CAA ATA AGT TAC ATG AAG AAG TGG CTC AAA 430431 TGC CCA TGG TCT CCA CTC CTG CCA CCC TGC CTC CTC TCC CCT AGC CTG 478479 CAC CAG TGG CTT CAT GGG GAG TTC CCT ATG ATT AGT TGA CAG AGG AAG 526527 AGA AGA CTA AGG CCT GGT TCA CAG ATG ATT CTG CAT GAT ATG CAG GCA 574575 CTA CCT GAA AGT AGA CCA CTG CAT TAC AAC CCT TTT CTA GGA CAT CCC 622623 TGA AGG ACA GCA GTG AAG GGA AAT CTT CCC AGT GGG CAG AAT TTC GAG 670671 CAG TGC ACC TGG TTG TGT ACT TTG CCT GGA AGG AGA AAT GTC CAG ATG 718719 TGC GAT TAT ATA CTG ATT CAT TGG CTG TAG CCA GTG GTT TGG CTG TAT 766767 GGT CAG GGA CTT GGA AGA AGT ATG ATT GGA AAA TTG GTG ACA AAG AAA 814815 TTT GGG GAA GAG GTA AGT GGA TGG ACC TTT CTG AGT GAT TGA AAA CTG 862863 AAG ATA TTT GTA TCT CAT GTG AGT GCT CAC CAA TGG GTG ACC TTG GCG 910911 GAG GAG GAT TTC AAT AAT CAA GTG GAT AGG ATG ACC TGT TCT GTG GAC 958
克隆名称 | 特异引物1(5′→3′) | 特异引物2(5′→3′) |
PP565 | TGGGCTTTGGTGGAAACCGAATG | CTGTGGCTTCACCCAGTCCCTCT |
PP712 | TTTCCCATGCTCCCTGCCTTTCC | AGCAGGGAAGGGGGATACCTGGG |
PP1143 | GGCTCTGAACCAAAGGAGCAGGA | GGGCTCTTGGACCACTGCCTCCT |
PP3241 | TTCAAGCCAGTGAACAACGCGGA | GGGGCTGTAGGAGATGGGTTGGC |
PP3501 | CGGGGTGACTGGTATACCCCCAA | AACCCTCAGGCAAGAGGCTGCAC |
1 Met Thr Cys Ser Val Asp 6959 ATC ACT CAG CCT CTT TCC CCA GCC ACC TCT CTT ATT CCC CAG TGG ACC 10067 Ile Thr Gln Pro Leu Ser Pro Ala Thr Ser Leu Ile Pro Gln Trp Thr 221007 CAT GAA CTA TGT GGT CAT GGT GGC AAG GAT GGA GGT TAC ACA TGG GCT 105423 His Glu Leu Cys Gly His Gly Gly Lys Asp Gly Gly Tyr Thr Trp Ala 381055 CAG CAA CAT GGA CTT CCA CTC ACC AAG GCT GAC CTG GCT ACC GCC ACT 110239 Gln Gln His Gly Leu Pro Leu Thr Lys Ala Asp Leu Ala Thr Ala Thr 541103 GCT GAG TGC CCA ATT TGC CAG CAG CGG ATA CCA ACA CTG AAC CCT CGA 115055 Ala Glu Cys Pro Ile Cys Gln Gln Arg Ile Pro Thr Leu Asn Pro Arg 701151 TAT GGC GCC ATT CCT CAG AGT GAT CAG CCA GCT ACC TGG TGG CAG GTT 119871 Tyr Gly Ala Ile Pro Gln Ser Asp Gln Pro Ala Thr Trp Trp Gln Val 861199 GAT TAT ATT GGA TCT CTT CCA TCA TAG CAA GGG CAG AGG TTT GTC CTC 124687 Asp Tyr Ile Gly Ser Leu Pro Ser *** 951247 ACT GGA ACA GAC ACT TAC TCT GGA TAT GGG TTT GCC TAT CCT GCA TGC 12941295 AAT GTT TCT GCC AAG ACT CCA TCC ATG GAT TCA TGG AAT GCA TTA TCT 13421343 GTT GTG GGA AGT CAG GGA CCC TGA ATA GAG GGA CTG GGT GAA GCC ACA 13901391 GCA GAA GAA CAT AAA TTG TGA AGA TTT CAT GGA CAT TTA TTA ATT CCC 14381439 TAA ATT AAT ACT TTT ATA ATT TCT TAC GCC TGT CTT TAC TGC AGT CTC 14861487 TGA ACA TAA ATT GTG AAG ATT TCA TGG ACA TTT CTG ACT TCT CAA TCA 15341535 ATA CTC TTA TAA TTT CCT ATG CCT GTC TTT ACT TTA ATC TCT TAA TCC 15821583 CAT CAT CTT TGT AAA GTA AGG ATG TAT GTC ACC TCA GGA CCC TGT GAT 16301631 GAT TAT GTT ATC TGT ATA AAT TGT TTG TAA AAC ATG CGT GTT TGA ACA 16781679 ATA TGA AAT CTG GGC ATC CTA AAA GAA CAG GAT AAC AGT GAT TTT CAG 17261727 GGA ACA AGG GAA ATA ACC ATA AAG TCT GAC TGC CCA TTT GCC TTG TGA 17741775 TAT TTT GTT GCC CTT GAA GCA TGT GAT TTC TGT GAC CCA CAC CCT ATT 18221823 CGT ACA CCC CTC CCC TTT TGA AAT CCA TAA TAA AAA CTT GCT GGT TTT 18701871 GTG GCT CAG GGG GCA TCC CCA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA 19181919 AAA AAA AAA AAA AA 1932D:Blastp结果Query=PP565AA (94个氨基酸)>SP_VI:002711 002711 murine endogenous retrovirus.pro-pol-dutpase
polyprotein(fragment).5/1999长度=1182分值=155 bits(387),预计值=1e-37相同性=70/94(74%),相似性=78/94(82%),缺口=1/94(1%)Query: 1 MTCSVDITQPLSPATSLIPQWTHELCGHGGKDGGYTWAQQHGLPLTKADLATATAECPIC 60
MT SVD +Q LSPA +I QW HE GHGG+DGGY WAQQHGLPLTKADLATA A+C ICSbjct: 753 MTRSVD-SQTLSPAIPVIAQWAHEQSGHGGRDGGYPWAQQHGLPLTKADLATAAADCQIC 811Query: 61 QQRIPTLNPRYGAIPQSDQPATWWQVDYIGSLPS 94
QQ+ PTL+PRYG IP+ DQPATWWQVDY+G LPSSbjct: 812 QQQKPTLSPRYGTIPRGDQPATWWQVDYVGPLPS 8452.PP712A:核苷酸序列:(SEQ ID NO:4)长度:1553bp1 CCTGGCTCTG CCCACAATCA CCAGGGCAGC TTGGTAAGGA TGAAGATGAC51 AAGGTCCATC CTCAGACTGA TGGAATCATG AACGAGCATC TTAGGATAGT101 GGCAGGGCTG GATGATGGCA TGTTTCCCAT GCTCCCTGCC TTTCCCAAGT151 CCTGCTGAGT ACAGACCCAA CTGCCCCTAG GTTGGTCCTG CCTCTAGCCT201 TCCCTAGAGT CTGGGGCGAT GGAAGCCTTG TGTGTGTGCT CACTCATGCC251 TCTTCATTGG TCCTGGATCC TTACAGCTTC CCATCTGGCT GCTTTTTTCC301 AGGGCTTCCG AAGTCTGGAA GACATCCGCA GCCAGGCCTC CCTGACAACC351 CAGCAGGCCA TCGGCCTGAA GCATTACAGT GACTTCCTGG AACGTATGCC401 CAGGGAGGAG GCTACAGAGA TTGAGCAGAC AGTCCAGAAA GCAGCCCAGG 451 CCTTTAACTC TGGGCTGCTG TGTGTGGCAT GTGGTTCATA CCGACGGGGA501 AAGGCGACCT GTGGTGATGT CGACGTGCTC ATCACTCACC CAGATGGCCG551 GTCCCACCGG GGTATCTTCA GCCGCCTCCT TGACAGTCTT CGGCAGGAAG601 GGTTCCTCAC AGATGACTTG GTGAGCCAAG AGGAGAATGG TCAGCAACAG651 AAGTACTTGG GGGTGTGCCG GCTCCCAGGG CCAGGGCGGC GGCACCGGCG701 CCTGGACATC ATCGTGGTGC CCTATAGCGA GTTTGCCTGT GCCCTGCTCT751 ACTTCACCGG CTCTGCACAC TTCAACCGCT CCATGCGAGC CCTGGCCAAA801 ACCAAGGGCA TGAGTCTGTC AGAACATGCC CTCAGCACTG CTGTGGTCCG851 GAACACCCAT GGCTGCAAGG TGGGGCCTGG CCGAGTGCTG CCCACTCCCA901 CTGAGAAGGA TGTCTTCAGG CTCTTAGGCC TCCCCTACCG AGAACCTGCT951 GAGCGGGACT GGTGACCCAT GGCTGGGGGT GCTGAGGAGA GCCGAGTTGG1001 ACTGGCTACC CCTCCTGGCC ACCCAGTACT CCCTCCAGCC TCAGCTGGCT1051 GAACCTCGCC GCTCCAACCA CCAGCTTCCT CAGCGAGCAG GGCCCAGGGC1101 TCTGGGCCTG AAGCAAGAGC CAGCCCGGCT CCCAGTGTCT GCCCGGCTCC1151 CAGTGTCTGC CCAGCCCTCT CCCAGACAGG AGCAGGCTGC CACCCCTTCT1201 ACCTCACCAC TGCCCCTCGA AGAATTTTGC AAATGGCCCC TTGCCCCATT1251 TTAAGCAGGA GCAGGTGGCT GGTTTGAAGC CCCAGGTATC CCCCTTCCCT1301 GCTATGGGAA AGGCCAAGCT GCTGGGTGGG GACAGAAGCT GCAGGGGAGA1351 GGGAAGCAGC CGTGCTGTCA ACATCATCCG GCACCCTCTG GGGTAGGAGA1401 ACAGCCATTC CACATGTGTT TCCCTCTATC CGTCCTGCTT CCTGGGCAGC1451 TGGTGGTGCT GGGAATGGGG TGCCCCAGCC TTGGTGAGGA CAGTGTTGGG1501 AGGCCCAGGG GCCCAGTAAA GTGCATTTGA CATTGAAALA AAAAAAAAAA1551 AAAB:氨基酸序列:PP712(SEQ ID NO:5)长度:248个氨基酸1 MEALCVCSLM PLHWSWILTA SHLAAFFQGF RSLEDIRSQA SLTTQQAIGL51 KHYSDFLERM PREEATEIEQ TVQKAAQAFN SGLLCVACGS YRRGKATCGD101 VDVLITHPDG RSHRGIFSRL LDSLRQEGFL TDDLVSQEEN GQQQKYLGVC151 RLPGPGRRHR RLDIIVVPYS EFACALLYFT GSAHFNRSMR ALAKTKGMSL201 SEHALSTAVV RNTHGCKVGP GRVLPTPTEK DVFRLLGLPY REPAERDWC:核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO:6)克隆号和蛋白名称:PP712起始编码子:219 ATG 终止编码子:965 TGA蛋白质分子量:27765.311 CC TGG CTC TGC CCA CAA TCA CCA GGG CAG CTT GGT AAG GAT GAA GAT 4748 GAC AAG GTC CAT CCT CAG ACT GAT GGA ATC ATG AAC GAG CAT CTT AGG 9596 ATA GTG GCA GGG CTG GAT GAT GGC ATG TTT CCC ATG CTC CCT GCC TTT 143144 CCC AAG TCC TGC TGA GTA CAG ACC CAA CTG CCC CTA GGT TGG TCC TGC 191192 CTC TAG CCT TCC CTA GAG TCT GGG GCG ATG GAA GCC TTG TGT GTG TGC 2391 Met Glu Ala Leu Cys Val Cys 7240 TCA CTC ATG CCT CTT CAT TGG TCC TGG ATC CTT ACA GCT TCC CAT CTG 2878 Ser Leu Met Pro Leu His Trp Ser Trp Ile Leu Thr Ala Ser His Leu 23288 GCT GCT TTT TTC CAG GGC TTC CGA AGT CTG GAA GAC ATC CGC AGC CAG 33524 Ala Ala Phe Phe Gln Gly Phe Arg Ser Leu Glu Asp Ile Arg Ser Gln 39336 GCC TCC CTG ACA ACC CAG CAG GCC ATC GGC CTG AAG CAT TAC AGT GAC 383 40 Ala Ser Leu Thr Thr Gln Gln Ala Ile Gly Leu Lys His Tyr Ser Asp 55384 TTC CTG GAA CGT ATG CCC AGG GAG GAG GCT ACA GAG ATT GAG CAG ACA 43156 Phe Leu Glu Arg Met Pro Arg Glu Glu Ala Thr Glu Ile Glu Gln Thr 71432 GTC CAG APA GCA GCC CAG GCC TTT AAC TCT GGG CTG CTG TGT GTG GCA 47972 Val Gln Lys Ala Ala Gln Ala Phe Asn Ser Gly Leu Leu Cys Val Ala 87480 TGT GGT TCA TAC CGA CGG GGA AAG GCG ACC TGT GGT GAT GTC GAC GTG 52788 Cys Gly Ser Tyr Arg Arg Gly Lys Ala Thr Cys Gly Asp Val Asp Val 103528 CTC ATC ACT CAC CCA GAT GGC CGG TCC CAC CGG GGT ATC TTC AGC CGC 575104 Leu Ile Thr His Pro Asp Gly Arg Ser His Arg Gly Ile Phe Ser Arg 119576 CTC CTT GAC AGT CTT CGG CAG GAA GGG TTC CTC ACA GAT GAC TTG GTG 623120 Leu Leu Asp Ser Leu Arg Gln Glu Gly Phe Leu Thr Asp Asp Leu Val 135624 AGC CAA GAG GAG AAT GGT CAG CAA CAG AAG TAC TTG GGG GTG TGC CGG 671136 Ser Gln Glu Glu Asn Gly Gln Gln Gln Lys Tyr Leu Gly Val Cys Arg 151672 CTC CCA GGG CCA GGG CGG CGG CAC CGG CGC CTG GAC ATC ATC GTG GTG 719152 Leu Pro Gly Pro Gly Arg Arg His Arg Arg Leu Asp Ile Ile Val Val 167720 CCC TAT AGC GAG TTT GCC TGT GCC CTG CTC TAC TTC ACC GGC TCT GCA 767168 Pro Tyr Ser Glu Phe Ala Cys Ala Leu Leu Tyr Phe Thr Gly Ser Ala 183768 CAC TTC AAC CGC TCC ATG CGA GCC CTG GCC AAA ACC AAG GGC ATG AGT 815184 His Phe Asn Arg Ser Met Arg Ala Leu Ala Lys Thr Lys Gly Met Ser 199816 CTG TCA GAA CAT GCC CTC AGC ACT GCT GTG GTC CGG AAC ACC CAT GGC 863200 Leu Ser Glu His Ala Leu Ser Thr Ala Val Val Arg Asn Thr His Gly 215864 TGC AAG GTG GGG CCT GGC CGA GTG CTG CCC ACT CCC ACT GAG AAG GAT 911216 Cys Lys Val Gly Pro Gly Arg Val Leu Pro Thr Pro Thr Glu Lys Asp 231912 GTC TTC AGG CTC TTA GGC CTC CCC TAC CGA GAA CCT GCT GAG CGG GAC 959232 Val Phe Arg Leu Leu Gly Leu Pro Tyr Arg Glu Pro Ala Glu Arg Asp 247960 TGG TGA CCC ATG GCT GGG GGT GCT GAG GAG AGC CGA GTT GGA CTG GCT 1007248 Trp *** 2491008 ACC CCT CCT GGC CAC CCA GTA CTC CCT CCA GCC TCA GCT GGC TGA ACC 10551056 TCG CCG CTC CAA CCA CCA GCT TCC TCA GCG AGC AGG GCC CAG GGC TCT 11031104 GGG CCT GAA GCA AGA GCC AGC CCG GCT CCC AGT GTC TGC CCG GCT CCC 11511152 AGT GTC TGC CCA GCC CTC TCC CAG ACA GGA GCA GGC TGC CAC CCC TTC 11991200 TAC CTC ACC ACT GCC CCT CGA AGA ATT TTG CAA ATG GCC CCT TGC CCC 12471248 ATT TTA AGC AGG AGC AGG TGG CTG GTT TGA AGC CCC AGG TAT CCC CCT 12951296 TCC CTG CTA TGG GAA AGG CCA AGC TGC TGG GTG GGG ACA GAA GCT GCA 13431344 GGG GAG AGG GAA GCA GCC GTG CTG TCA ACA TCA TCC GGC ACC CTC TGG 13911392 GGT AGG AGA ACA GCC ATT CCA CAT GTG TTT CCC TCT ATC CGT CCT GCT 14391440 TCC TGG GCA GCT GGT GGT GCT GGG AAT GGG GTG CCC CAG CCT TGG TGA 14871488 GGA CAG TGT TGG GAG GCC CAG GGG CCC AGT AAA GTG CAT TTG ACA TTG 15351536 AAA AAA AAA AAA AAA AAA 1553D:Blastp结果Query=PP712[基因=PP712](248个氨基酸)>SW:YA26_SCHPO Q09693 schizosaccharomyces pombe(fission yeast).
hypothetical dna polymerase beta-like protein c2f7.06c.
11/1995长度=506分值=80.8 bits(196),预计值=1e-14相同性=70/238(29%),相似性=110/238(45%),缺口=17/238(7%)Query: 20 ASHLAAFFQ-GFRSLEDIRSQA-SLTTQQAIGLKHYSDFLERMPREEATEIEQTVQKAAQ 77
ASH A ++Q G+R++E +R S T Q +GL+ Y DF + + EEATEI +T+Sbjct: 274 ASHAAEWYQKGWRTIEQVRKHKDSFTKQIKVGLEFYEDFCKTVTIEEATEIYETI---VS 330Query: 78 AFNSGLLCVAC--GSYRRGKATCGDVDVLITHPDGRSHRGIFSRLLDSLRQEGFLTDDLV 135
G+ +C G +RRGK DVD++++ S + + LL L +E VSbjct: 331 RMPDGIKIQSCLVGGFRRGKPVGADVDMVLSPSHTHSTKHLVDVLLRILDEEFQFRLISV 390Query: 136 SQEENGQQQKYLGVC-XXXXXXXXXXXXDIIVVPYSEFACALLYFTGSAHFNRSMRALAK 194
+ G ++ Y+ + DIIVVP + A+L ++G F R ++ ASbjct: 391 QEHSCGGKKGYVMLAVILSNSSKINRRVDIIVVPPAYIGSAVLGWSGGIFFLRDLKLYAN 450Query: 195 TK-GMSLSEHALSTAVVRNTHGCKVGPGRVL----PTPTEKDVFRLLGLPYREPAERD 247
+ G+S S ++ G + P P EKD+FR L Y EP R+Sbjct: 451 SHLGLSYD----SFEIINLKTGKDICPDEFNEWKDPVEAEKDIFRYFSLEYIEPKFRN 504>PIR2:S58150 hypothetical protein SPAC2F7.06c-fission yeast
(Schizosaccharomyces pombe)长度=506分值=80.8 bits(196),预计值=1e-14相同性=70/238(29%),相似性=110/238(45%),缺口=17/238(7%)Query: 20 ASHLAAFFQ-GFRSLEDIRSQA-SLTTQQAIGLKHYSDFLERMPREEATEIEQTVQKAAQ 77
ASH A ++Q G+R++E +R S T Q +GL+ Y DF + + EEATEI +T+Sbjct: 274 ASHAAEWYQKGWRTIEQVRKHKDSFTKQIKVGLEFYEDFCKTVTIEEATEIYETI---VS 330Query: 78 AFNSGLLCVAC--GSYRRGKATCGDVDVLITHPDGRSHRGIFSRLLDSLRQEGFLTDDLV 135
G+ +C G +RRGK DVD++++ S + + LL L +E VSbjct: 331 RMPDGIKIQSCLVGGFRRGKPVGADVDMVLSPSHTHSTKHLVDVLLRILDEEFQFRLISV 390Query: 136 SQEENGQQQKYLGVC-XXXXXXXXXXXXDIIVVPYSEFACALLYFTGSAHFNRSMRALAK 194
+ G ++ Y+ + DIIVVP + A+L ++G F R ++ ASbjct: 391 QEHSCGGKKGYVMLAVILSNSSKINRRVDIIVVPPAYIGSAVLGWSGGIFFLRDLKLYAN 450Query: 195 TK-GMSLSEHALSTAVVRNTHGCKVGPGRVL----PTPTEKDVFRLLGLPYREPAERD 247
+ G+S S ++ G + P P EKD+FR L Y EP R+Sbjct: 451 SHLGLSYD----SFEIINLKTGKDICPDEFNEWKDPVEAEKDIFRYFSLEYIEPKFRN 504
3.PP1143A:核苷酸序列:(SEQ ID NO:7)长度:2060bp1 CTCAGACAAG ATCTGCGTGG TCATCGACCT GGACGAGACC CTGGTGCACA51 GCTCCTTCAA GCCAGTGAAC AACGCGGACT TCATCATCCC TGTGGAGATT101 GATGGGGTGG TCCACCAGGT CTACGTGTTG AAGCGTCCTC ATGTGGATGA151 GTTCCTGCAG CGAATGGGCG AGCTCTTTGA ATGTGTGCTG TTCACTGCTA201 GCCTCGCCAA GTACGCAGAC CCAGTAGCTG ACCTGCTGGA CAAATGGGGG251 GCCTTCCGGG CCCGGCTGTT TCGAGAGTCC TGCGTCTTCC ACCGGGGGAA301 CTACGTGAAG GACCTGAGCC GGTTGGGTCG AGACCTGCGG CGGGTGCTCA351 TCCTGGACAA TTCACCTGCC TCCTATGTCT TCCATCCAGA CAATGCTGTA401 CCGGTGGCCT CGTGGTTTGA CAACATGAGT GACACAGAGC TCCACGACCT451 CCTCCCCTTC TTCGAGCAAC TCAGCCGTGT GGACGACGTG TACTCAGTGC501 TCAGGCAGCC ACGGCCAGGG AGCTAGTGAG GGTGATGGGG CCAGGACCTG551 CCCCTGACCA ATGATACCCA CACCTCCTCC CAGGAAGACT GCCCAGGCCT601 TTGTTAGGAA AACCCATGGG CCGCCGCCAC ACTCAGTGCC ATGGGGAAGC651 GGGCGTCTCC CCCACCAGCC CCACCAGGCG GTGTAGGGGC AGCAGGCTGC701 ACTGAGGACC GTGAGCTCCA GGCCCCGTGT CAGTGCCTTC AAACCTCCTC751 CCCTATTCTC AGGGGACCTG GGGGGCCCTG CCTGCTGCTC CCTTTTTCTG801 TCTCTGTCCA TGCTGCCATG TTTCTCTGCT GCCAAATTGG GCCCCTTGGC851 CCCTTCCGGT TCTGCTTCCT GGGGGCAGGG TTCCTGCCTT GGACCCCCAG901 TCTGGGAACG GTGGACATCA AGTGCCTTGC ATAGAGCCCC CTCTTCCCCG951 CCCAGCTTTC CCAGGGGCAC AGCTCTAGGC TGGGAGGGGA GAACCAGCCC1001 CTCCCCCTGC CCCACCTCCT CCCTTGGGAC TGAGAGGGCC CCTACCAACC1051 TTTGCCTCTG CCTTGGAGGG AGGGGAGGTC TGTTACCACT GGGGAAGGCA1101 GCAGGAGTCT GTCCTTCAGG CCCCACAGTG CAGCTTCTCC AGGGCCGACA1151 GCTGAGGGCT GCTCCCTGCA TCATCCAAGC AATGACCTCA GACTTCTGCC1201 TTAACCAGCC CCGGGGCTTG GCTCCCCCAG CTCTGAGCGT GGGGGCATAG1251 GCAGGACCCC CCTTGTGGTG CCATATAAAT ATGTACATGT GTATATAGAT1301 TTTTAGGGGA AGGAGAGAGG GAAGGGTCAG GGTAGAGACA CCCCTCCCTT1351 GCCCCTTTCC TGGGCCCAGA AGTTGGGGGG AGGGAGGGAA AGGATTTTTA1401 CATTTTTTAA ACTGCTATTT TCTGAATGGA ACAAGCTGGG CCAAGGGGCC1451 CAGGCCCTGT CCTCTGTCCC TCACACCCCT TTGCTCCGTT CATTCATTCA1501 AAAAAACATT TCTTGAGCAC CTTCTGTGCC CAGCATATGC TAGGCCCACC1551 AGCTAAGTGT GTGTGGGGGG TCTCTACGCC AGCTCATCAG TGCCTCCTTG1601 CCCATCCTTC ACCGGTGCCT TTGGGGGATC TGTAGGAGGT GGGACCTTCT1651 GTGGGGTTTG GGGATCTCCA GGAAGCCCGA CCAAGCTGTC CCCTTCCCCT1701 GTGCCAACCC ATCTCCTACA GCCCCCTGCC TGATCCCCTG CTGGCTGGGG1751 GCAGCTCCCA GGATATCCTG CCTTCCAACT GTTTCTGAAG CCCCTCCTCC1801 TAACATGGCG ATTCCGGAGG TCAAGGCCTT GGGCTCTCCC CAGGGTCTAA1851 CGGTTAAGGG GACCCACATA CCAGTGCCAA GGGGGATGTC AAGTGGTGAT1901 GTCGTTGTGC TCCCCTCCCC CAGAGCGGGT GGGCGGGGGG TGAATATGGT1951 TGGCCTGCAT CAGGTGGCCT TCCCATTTAA GTGCCTTCTC TGTGACTGAG2001 AGCCCTAGTG TGATGAGAAC TAAAGAGAAA GCCAGACCCC TAAAAAAAAA2051 AAAAAAAAAAB:氨基酸序列:(SEQ ID NO:8)长度:146个氨基酸1 MLPCFSAAKL GPLAPSGSAS WGQGSCLGPP VWERWTSSAL HRAPSSPPSF51 PRGTALGWEG RTSPSPCPTS SLGTERAPTN LCLCLGGRGG LLPLGKAAGV101 CPSGPTVQLL QGRQLRAAPC IIQAMTSDFC LNQPRGLAPP ALSVGAC:核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO:9)克隆号和蛋白名称:PP1143起始编码子:810 ATG 终止编码子:1250 TAG蛋白质分子量:14815.251 CT CAG ACA AGA TCT GCG TGG TCA TCG ACC TGG ACG AGA CCC TGG TGC 4748 ACA GCT CCT TCA AGC CAG TGA ACA ACG CGG ACT TCA TCA TCC CTG TGG 9596 AGA TTG ATG GGG TGG TCC ACC AGG TCT ACG TGT TGA AGC GTC CTC ATG 143144 TGG ATG AGT TCC TGC AGC GAA TGG GCG AGC TCT TTG AAT GTG TGC TGT 191192 TCA CTG CTA GCC TCG CCA AGT ACG CAG ACC CAG TAG CTG ACC TGC TGG 239240 ACA AAT GGG GGG CCT TCC GGG CCC GGC TGT TTC GAG AGT CCT GCG TCT 287288 TCC ACC GGG GGA ACT ACG TGA AGG ACC TGA GCC GGT TGG GTC GAG ACC 335336 TGC GGC GGG TGC TCA TCC TGG ACA ATT CAC CTG CCT CCT ATG TCT TCC 383384 ATC CAG ACA ATG CTG TAC CGG TGG CCT CGT GGT TTG ACA ACA TGA GTG 431432 ACA CAG AGC TCC ACG ACC TCC TCC CCT TCT TCG AGC AAC TCA GCC GTG 479480 TGG ACG ACG TGT ACT CAG TGC TCA GGC AGC CAC GGC CAG GGA GCT AGT 527528 GAG GGT GAT GGG GCC AGG ACC TGC CCC TGA CCA ATG ATA CCC ACA CCT 575576 CCT CCC AGG AAG ACT GCC CAG GCC TTT GTT AGG AAA ACC CAT GGG CCG 623624 CCG CCA CAC TCA GTG CCA TGG GGA AGC GGG CGT CTC CCC CAC CAG CCC 671672 CAC CAG GCG GTG TAG GGG CAG CAG GCT GCA CTG AGG ACC GTG AGC TCC 719720 AGG CCC CGT GTC AGT GCC TTC AAA CCT CCT CCC CTA TTC TCA GGG GAC 767768 CTG GGG GGC CCT GCC TGC TGC TCC CTT TTT CTG TCT CTG TCC ATG CTG 8151 Met Leu 2816 CCA TGT TTC TCT GCT GCC AAA TTG GGC CCC TTG GCC CCT TCC GGT TCT 8633 Pro Cys Phe Ser Ala Ala Lys Leu Gly Pro Leu Ala Pro Ser Gly Ser 18864 GCT TCC TGG GGG CAG GGT TCC TGC CTT GGA CCC CCA GTC TGG GAA CGG 91119 Ala Ser Trp Gly Gln Gly Ser Cys Leu Gly Pro Pro Val Trp Glu Arg 34912 TGG ACA TCA AGT GCC TTG CAT AGA GCC CCC TCT TCC CCG CCC AGC TTT 95935 Trp Thr Ser Ser Ala Leu His Arg Ala Pro Ser Ser Pro Pro Ser Phe 50960 CCC AGG GGC ACA GCT CTA GGC TGG GAG GGG AGA ACC AGC CCC TCC CCC 100751 Pro Arg Gly Thr Ala Leu Gly Trp Glu Gly Arg Thr Ser Pro Ser Pro 661008 TGC CCC ACC TCC TCC CTT GGG ACT GAG AGG GCC CCT ACC AAC CTT TGC 105567 Cys Pro Thr Ser Ser Leu Gly Thr Glu Arg Ala Pro Thr Asn Leu Cys 821056 CTC TGC CTT GGA GGG AGG GGA GGT CTG TTA CCA CTG GGG AAG GCA GCA 110383 Leu Cys Leu Gly Gly Arg Gly Gly Leu Leu Pro Leu Gly Lys Ala Ala 981104 GGA GTC TGT CCT TCA GGC CCC ACA GTG CAG CTT CTC CAG GGC CGA CAG 115199 Gly Val Cys Pro Ser Gly Pro Thr Val Gln Leu Leu Gln Gly Arg Gln 1141152 CTG AGG GCT GCT CCC TGC ATC ATC CAA GCA ATG ACC TCA GAC TTC TGC 1199115 Leu Arg Ala Ala Pro Cys Ile Ile Gln Ala Met Thr Ser Asp Phe Cys 1301200 CTT AAC CAG CCC CGG GGC TTG GCT CCC CCA GCT CTG AGC GTG GGG GCA 1247131 Leu Asn Gln Pro Arg Gly Leu Ala Pro Pro Ala Leu Ser Val Gly Ala 1461248 TAG GCA GGA CCC CCC TTG TGG TGC CAT ATA AAT ATG TAC ATG TGT ATA 1295 147 *** 1471296 TAG ATT TTT AGG GGA AGG AGA GAG GGA AGG GTC AGG GTA GAG ACA CCC 13431344 CTC CCT TGC CCC TTT CCT GGG CCC AGA AGT TGG GGG GAG GGA GGG AAA 13911392 GGA TTT TTA CAT TTT TTA AAC TGC TAT TTT CTG AAT GGA ACA AGC TGG 14391440 GCC AAG GGG CCC AGG CCC TGT CCT CTG TCC CTC ACA CCC CTT TGC TCC 14871488 GTT CAT TCA TTC AAA AAA ACA TTT CTT GAG CAC CTT CTG TGC CCA GCA 15351536 TAT GCT AGG CCC ACC AGC TAA GTG TGT GTG GGG GGT CTC TAC GCC AGC 15831584 TCA TCA GTG CCT CCT TGC CCA TCC TTC ACC GGT GCC TTT GGG GGA TCT 16311632 GTA GGA GGT GGG ACC TTC TGT GGG GTT TGG GGA TCT CCA GGA AGC CCG 16791680 ACC AAG CTG TCC CCT TCC CCT GTG CCA ACC CAT CTC CTA CAG CCC CCT 17271728 GCC TGA TCC CCT GCT GGC TGG GGG CAG CTC CCA GGA TAT CCT GCC TTC 17751776 CAA CTG TTT CTG AAG CCC CTC CTC CTA ACA TGG CGA TTC CGG AGG TCA 18231824 AGG CCT TGG GCT CTC CCC AGG GTC TAA CGG TTA AGG GGA CCC ACA TAC 18711872 CAG TGC CAA GGG GGA TGT CAA GTG GTG ATG TCG TTG TGC TCC CCT CCC 19191920 CCA GAG CGG GTG GGC GGG GGG TGA ATA TGG TTG GCC TGC ATC AGG TGG 19671968 CCT TCC CAT TTA AGT GCC TTC TCT GTG ACT GAG AGC CCT AGT GTG ATG 20152016 AGA ACT AAA GAG AAA GCC AGA CCC CTA AAA AAA AAA AAA AAA AAA 2060D:Blastp结果Query=PP1143[基因=PP1143] (146个氨基酸)>SW:RPB1_CAEEL P16356 caenorhabditis elegans.dna-directed rna
polymerase ii largest subunit(ec 2.7.7.6).12/1998长度=1859分值=30.9 bits(68),预计值=5.8相同性=21/77(27%),相似性=35/77(45%),缺口=1/77(1%)Query: 3 PCFSAAKLGPLAPSGSASWGQGSCLGPPVWERWTSSALHRAPSSPPSFPRGTALGWEGRT 62
P LG L+P + G + P +++ ++ H +P+SP P A G +Sbjct: 1557 PASPGDPLGALSPRTPSYGGMSPGVYSPSSPQFSMTSPHYSPTSPSYSPTSPAAG-QSPV 1615Query: 63 SPSPCPTSSLGTERAPT 79
SPS PTS + +P+Sbjct: 1616 SPSYSPTSPSYSPTSPS 1632分值=30.5 bits(67),预计值=7.6相同性=25/79(31%),相似性=37/79(46%),缺口=6/79(7%)Query: 6 SAAKLGPLAPSGSASWGQGSCLGP---PVWERWTSSALHRAPSSP---PSFPRGTALGWE 59
S+ K P +P+ S + S P P +++ S+ PSSP P+ PRG +Sbjct: 1726 SSPKYSPSSPTYSPTSPSYSPTSPQYSPTSPQYSPSSPTYTPSSPTYNPTSPRGFSSPQY 1785Query: 60 GRTSPSPCPTSSLGTERAP 78
TSP+ PTS T +PSbjct: 1786 SPTSPTYSPTSPSYTPSSP 1804>SP_IN:Q20090 Q20090 caenorhabditis elegans.c.elegans dna-directed
rna polymerase ii large subunit(ama-l)(sp:p16356).
11/1998长度=1862分值=30.9 bits(68),预计值=5.8相同性=21/77(27%),相似性=35/77(45%),缺口=1/77(1%)Query: 3 PCFSAAKLGPLAPSGSASWGQ3SCLGPPVWERWTSSALHRAPSSPPSFPRGTALGWEGRT 62
P LG L+P + G + P +++ ++ H +P+SP P A G +Sbjct: 1560 PASPGDPLGALSPRTPSYGGMSPGVYSPSSPQFSMTSPHYSPTSPSYSPTSPAAG-QSPV 1618Query: 63 SPSPCPTSSLGTERAPT 79
SPS PTS + +P+Sbjct: 1619 SPSYSPTSPSYSPTSPS 1635分值=30.5 bits(67),预计值=7.6相同性=25/79(31%),相似性=37/79(46%),缺口=6/79(7%)Query: 6 SAAKLGPLAPSGSASWGQGSCLGP---PVWERWTSSALHRAPSSP---PSFPRGTALGWE 59
S+ K P +P+ S + S P P +++ S+ PSSP P+ PRG +Sbjct: 1729 SSPKYSPSSPTYSPTSPSYSPTSPQYSPTSPQYSPSSPTYTPSSPTYNPTSPRGFSSPQY 1788Query: 60 GRTSPSPCPTSSLGTERAP 78
TSP+ PTS T +PSbjct: 1789 SPTSPTYSPTSPSYTPSSP 18074.PP3241A:核苷酸序列(SEQ ID NO:10)长度:1682bp1 GGAAAACAGA GGATAAAGAA GCCAAGTCTG GGAAGTTGGA AAAGGAGAAA51 GAAGCAAAGG AAGGCTCTGA ACCAAAGGAG CAGGAAGACC TTCAAGAGAA101 TGATGAGGAA GGCTCAGAAG ATGAAGCCTC GGAGACTGAC TACTCATCAG151 CTGATGAGAA CATCCTCACC AAAGCAGATA CACTCAAAGT AAAGGATCGG201 AAGAAGAAGA AGAAGAAAGG ACAGGAAGCA GGAGGATTTT TTTGAAGATG251 CATCTCAGTA CGATGAAAAC CTCTCGTTCC AGGACATGAA CCTTTCCCGC301 CCTCTTCTGA AGGCCATTAC AGCCATGGGC TTCAAGCAGC CCACCCCGAT351 CCAGAAGGCG TGCATACCTG TGGGTCTATT GGGGAAGGAC ATCTGTGCCT401 GTGCAGCCAC TGGGACAGGT AAAACTGCCG CCTTTGCCCT GCCTGTTTTG451 GAGCGTCTGA TTTATAAACC CCGCCAGGCT CCAGTCACCC GCGTGCTGGT501 GCTAGTGCCC ACCCGAGAGC TGGGCATCCA GGTGCACTCT GTCACCAGAC551 AGCTGGCCCA GTTCTGCAAC ATCACCACCT GCCTGGCTGT GGGCGGCTTG601 GATGTGAAGT CTCAGGAAGC AGCTCTTCGG GCAGCGCCTG ACATCCTCAT651 CGCCACCCCA GGCCGGCTCA TCGATCACCT CCACAACTGC CCTTCCTTCC701 ACCTGAGCAG CATCGAGGTG CTCATCCTGG ACGAGGCTGA CAGGATGCTG751 GATGAGTACT TTGAGGAGCA GATGAAGGAG ATCATCCGAA TGTGTTCCCA801 CCACCGCCAG ACCATGCTCT TCTCGGCCAC CATGACAGAC GAGGTGAAAG851 ATCTGGCTTC TGTCTCCTTG AAGAATCCTG TCCGGATATT TGTGAACAAG901 CAACACAGAT GTGGCTCCCT TCTGCGGCAG GAGTTCATCC GGATCCGGCC951 TAATCGTGAA GGAGACCGGG AAGCCATCGT GGCAGCTTTG TTGACGAGGA1001 CCTTCACTGA CCATGTGATG CTGTTCACGC AAACCAAGAA GCAGGCCCAC1051 CGCATGCACA TCCTCCTGGG GCTCATGGGG CTGCAGGTGG GTGAGCTCCA1101 TGGCAACTTG TCACAGACGC AGCGGCTGGA GGCCCTCCGG CGTTTTAAGG1151 ATGAACAGAT TGACATCCTC GTGGCCACTG ATGTGGCAGC CCGTGGACTT1201 GACATTGAGG GGTCAAAACG GTAATCAACT TCACAATGCC TAATACCATC1251 AAACATTATG TCCACCGGGT GGGGCGAACA GCACGTGCTG GCAGGGCTGG1301 GCGCTCAGTC TCTCTGGTGG GAGAAGATGA GCGGAAGATG CTGAAGGAGA1351 TTGTAAAAGC TGCCAAGGCC CCTGTGAAGG CCAGGATACT TCCCCAAGAT1401 GTCATCCTCA AATTCCGGGA CAAGATTGAG AAAATGGAGA AAGATGTGTA1451 TGCAGTTCTG CAGCTAGAGG CGGAGGAAAA AGAGATGCAG CAGTCAGAAG1501 CCCAGATCAA TACAGCAAAG CGGCTCCTGG AGAAGGGGAA GGAGGCAGTG1551 GTCCAAGAGC CCGAGAGGAG CTGGTTCCAG ACCAAAGAAG AGAGGAAGAA1601 GGAGAAAATT GCCAAAGCTC TGCAGGAATT TGACTTGGCC TTAAGAGGAA1651 AGAAGAAAAG GAAGAAGTTT ATGAAGGATG CCB:氨基酸序列(SEQ ID NO:11)长度:312个氨基酸1 MNLSRPLLKA ITAMGFKQPT PIQKACIPVG LLGKDICACA ATGTGKTAAF51 ALPVLERLIY KPRQAPVTRV LVLVPTRELG IQVHSVTRQL AQFCNITTCL101 AVGGLDVKSQ EAALRAAPDI LIATPGRLID HLHNCPSFHL SSIEVLILDE151 ADRMLDEYFE EQMKEIIRMC SHHRQTMLFS ATMTDEVKDL ASVSLKNPVR201 IFVNKQHRCG SLLRQEFIRI RPNREGDREA IVAALLTRTF TDHVMLFTQT251 KKQAHRMHIL LGLMGLQVGE LHGNLSQTQR LEALRRFKDE QIDILVATDV301 AARGLDIEGS KR
C:核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO:12)克隆号和蛋白名称:PP3241起始编码子:286 ATG 终止编码子:1224 TAA蛋白质分子量:34808.971 GGA AAA CAG AGG ATA AAG AAG CCA AGT CTG GGA AGT TGG AAA AGG AGA 4849 AAG AAG CAA AGG AAG GCT CTG AAC CAA AGG AGC AGG AAG ACC TTC AAG 9697 AGA ATG ATG AGG AAG GCT CAG AAG ATG AAG CCT CGG AGA CTG ACT ACT 144145 CAT CAG CTG ATG AGA ACA TCC TCA CCA AAG CAG ATA CAC TCA AAG TAA 192193 AGG ATC GGA AGA AGA AGA AGA AGA AAG GAC AGG AAG CAG GAG GAT TTT 240241 TTT GAA GAT GCA TCT CAG TAC GAT GAA AAC CTC TCG TTC CAG GAC ATG 2881 Met 1289 AAC CTT TCC CGC CCT CTT CTG AAG GCC ATT ACA GCC ATG GGC TTC AAG 3362 Asn Leu Ser Arg Pro Leu Leu Lys Ala Ile Thr Ala Met Gly Phe Lys 17337 CAG CCC ACC CCG ATC CAG AAG GCG TGC ATA CCT GTG GGT CTA TTG GGG 38418 Gln Pro Thr Pro Ile Gln Lys Ala Cys Ile Pro Val Gly Leu Leu Gly 33385 AAG GAC ATC TGT GCC TGT GCA GCC ACT GGG ACA GGT AAA ACT GCC GCC 43234 Lys Asp Ile Cys Ala Cys Ala Ala Thr Gly Thr Gly Lys Thr Ala Ala 49433 TTT GCC CTG CCT GTT TTG GAG CGT CTG ATT TAT AAA CCC CGC CAG GCT 48050 Phe Ala Leu Pro Val Leu Glu Arg Leu Ile Tyr Lys Pro Arg Gln Ala 65481 CCA GTC ACC CGC GTG CTG GTG CTA GTG CCC ACC CGA GAG CTG GGC ATC 52866 Pro Val Thr Arg Val Leu Val Leu Val Pro Thr Arg Glu Leu Gly Ile 81529 CAG GTG CAC TCT GTC ACC AGA CAG CTG GCC CAG TTC TGC AAC ATC ACC 57682 Gln Val His Ser Val Thr Arg Gln Leu Ala Gln Phe Cys Asn Ile Thr 97577 ACC TGC CTG GCT GTG GGC GGC TTG GAT GTG AAG TCT CAG GAA GCA GCT 62498 Thr Cys Leu Ala Val Gly Gly Leu Asp Val Lys Ser Gln Glu Ala Ala 113625 CTT CGG GCA GCG CCT GAC ATC CTC ATC GCC ACC CCA GGC CGG CTC ATC 672 114 Leu Arg Ala Ala Pro Asp Ile Leu Ile Ala Thr Pro Gly Arg Leu Ile 129673 GAT CAC CTC CAC AAC TGC CCT TCC TTC CAC CTG AGC AGC ATC GAG GTG 720130 Asp His Leu His Asn Cys Pro Ser Phe His Leu Ser Ser Ile Glu Val 145721 CTC ATC CTG GAC GAG GCT GAC AGG ATG CTG GAT GAG TAC TTT GAG GAG 768146 Leu Ile Leu Asp Glu Ala Asp Arg Met Leu Asp Glu Tyr Phe Glu Glu 161769 CAG ATG AAG GAG ATC ATC CGA ATG TGT TCC CAC CAC CGC CAG ACC ATG 816162 Gln Met Lys Glu Ile Ile Arg Met Cys Ser His His Arg Gln Thr Met 177817 CTC TTC TCG GCC ACC ATG ACA GAC GAG GTG AAA GAT CTG GCT TCT GTC 864178 Leu Phe Ser Ala Thr Met Thr Asp Glu Val Lys Asp Leu Ala Ser Val 193865 TCC TTG AAG AAT CCT GTC CGG ATA TTT GTG AAC AAG CAA CAC AGA TGT 912194 Ser Leu Lys Asn Pro Val Arg Ile Phe Val Asn Lys Gln His Arg Cys 209913 GGC TCC CTT CTG CGG CAG GAG TTC ATC CGG ATC CGG CCT AAT CGT GAA 960210 Gly Ser Leu Leu Arg Gln Glu Phe Ile Arg Ile Arg Pro Asn Arg Glu 225961 GGA GAC CGG GAA GCC ATC GTG GCA GCT TTG TTG ACG AGG ACC TTC ACT 1008226 Gly Asp Arg Glu Ala Ile Val Ala Ala Leu Leu Thr Arg Thr Phe Thr 2411009 GAC CAT GTG ATG CTG TTC ACG CAA ACC AAG AAG CAG GCC CAC CGC ATG 1056242 Asp His Val Met Leu Phe Thr Gln Thr Lys Lys Gln Ala His Arg Met 2571057 CAC ATC CTC CTG GGG CTC ATG GGG CTG CAG GTG GGT GAG CTC CAT GGC 1104258 His Ile Leu Leu Gly Leu Met Gly Leu Gln Val Gly Glu Leu His Gly 2731105 AAC TTG TCA CAG ACG CAG CGG CTG GAG GCC CTC CGG CGT TTT AAG GAT 1152274 Asn Leu Ser Gln Thr Gln Arg Leu Glu Ala Leu Arg Arg Phe Lys Asp 2891153 GAA CAG ATT GAC ATC CTC GTG GCC ACT GAT GTG GCA GCC CGT GGA CTT 1200290 Glu Gln Ile Asp Ile Leu Val Ala Thr Asp Val Ala Ala Arg Gly Leu 3051201 GAC ATT GAG GGG TCA AAA CGG TAA TCA ACT TCA CAA TGC CTA ATA CCA 1248306 Asp Ile Glu Gly Ser Lys Arg *** 3131249 TCA AAC ATT ATG TCC ACC GGG TGG GGC GAA CAG CAC GTG CTG GCA GGG 12961297 CTG GGC GCT CAG TCT CTC TGG TGG GAG AAG ATG AGC GGA AGA TGC TGA 13441345 AGG AGA TTG TAA AAG CTG CCA AGG CCC CTG TGA AGG CCA GGA TAC TTC 13921393 CCC AAG ATG TCA TCC TCA AAT TCC GGG ACA AGA TTG AGA AAA TGG AGA 14401441 AAG ATG TGT ATG CAG TTC TGC AGC TAG AGG CGG AGG AAA AAG AGA TGC 14881489 AGC AGT CAG AAG CCC AGA TCA ATA CAG CAA AGC GGC TCC TGG AGA AGG 15361537 GGA AGG AGG CAG TGG TCC AAG AGC CCG AGA GGA GCT GGT TCC AGA CCA 15841585 AAG AAG AGA GGA AGA AGG AGA AAA TTG CCA AAG CTC TGC AGG AAT TTG 16321633 ACT TGG CCT TAA GAG GAA AGA AGA AAA GGA AGA AGT TTA TGA AGG ATG 16801681 CC 1682E:Blastp结果Query=PP3241[基因=PP3241] (312个氨基酸)>SW:YAJ3_SCHPO Q09903 schizosaccharomyces pombe (fission yeast).
putative atp-dependent rna helicase c30d11.03.2/1996长度=754分值=316 bits(800),预计值=2e-85相同性=152/309(49%),相似性=212/309(68%)Query: 1 MNLSRPLLKAITAMGFKQPTPIQKACIPVGLLGKDIXXXXXXXXXXXXXXXLPVLERLIY 60
MNLSRP+LK ++ +GF+ PT IQ IP+ LLGKDI +P+LERL+YSbjct: 264 MNLSRPILKGLSNLGFEVPTQIQDKTIPLALLGKDIVGAAVTGSGKTAAFIVPILERLLY 323Query: 61 KPRQAPVTRVLVLVPTRELGIQVHSVTRQLAQFCNITTCLAVGGLDVKSQEAALRAAPDI 120
+P++ P TRVL+L PTREL +Q HSV ++A F +I CL +GGL +K QE LR PDISbjct: 324 RPKKVPTTRVLILCPTRELAMQCHSVATKIASFTDIMVCLCIGGLSLKLQEQELRKRPDI 383Query: 121 LIATPGRLIDHLHNCPSFHLSSIEVLILDEADRMLDEYFEEQMKEIIRMCSHHRQTMLFS 180
+IATPGR IDH+ N F + +IE++++DEADRML++ F +++ EII+ C RQTMLFSSbjct: 384 VIATPGRFIDHMRNSQGFTVENIEIMVMDEADRMLEDGFADELNEIIQACPKSRQTMLFS 443Query: 181 ATMTDEVKDLASVSLKNPVRIFVNKQHRCGSLLRQEFIRIRPNREGDREAIVAALLTRTF 240
ATMTD+V DL +SL PVR+FV+ + LL QEF+R+RP RE R A++ L FSbjct: 444 ATMTDKVDDLIRLSLNRPVRVFVDNKKTTAKLLTQEFVRVRPQRELLRPAMLIYLCKELF 503Query: 241 TDHVMLFTQTKKQAHRMHILLGLMGLQVGELHGNLSQTQRLEALRRFKDEQIDILVATDV 300
++F ++K AH+M ++ GL+ L E+HG+LSQ QR+ AL F+D + + L+ATDVSbjct: 504 HRRTIIFFRSKAFAHKMRVIFGLLSLNATEIHGSLSQEQRVRALEDFRDGKCNYLLATDV 563Query: 301 AARGLDIEG 309
A+RG+DI+GSbjct: 564 ASRGIDIKG 572>SW:DRS1_YEAST P32892 saccharomyces cerevisiae (baker’s yeast).
putative atp-dependent rna helicase drsl.11/1997长度=752分值=296 bits(749),预计值=2e-79相同性=144/311(46%),相似性=223/311(71%),缺口=5/311(1%)Query: 1 MNLSRPLLKAITAMGFKQPTPIQKACIPVGLLGKDIXXXXXXXXXXXXXXXLPVLERLIY 60
++LSRP+LK + ++G+ +P+PIQ A IP+ LLGKDI +P++ERL+YSbjct: 236 LSLSRPVLKGLASLGYVKPSPIQSATIPIALLGKDIIAGAVTGSGKTAAFMIPIIERLLY 295Query: 61 KPRQAPVTRVLVLVPTRELGIQVHSVTRQLAQFCN-ITTCLAVGGLDVKSQEAALRAAPD 119
KP + TRV+VL+PTREL IQV V +Q+A+F + IT LAVGGL+++ QE L++ PDSbjct: 296 KPAKIASTRVIVLLPTRELAIQVADVGKQIARFVSGITFGLAVGGLNLRQQEQMLKSRPD 355Query: 120 ILIATPGRLIDHLHNCPSFHLSSIEVLILDEADRMLDEYFEEQMKEIIRMCSHHRQTMLF 179
I+IATPGR IDH+ N SF++ S+E+L++DEADRML+E F++++ EI+ + +RQ +LFSbjct: 356 IVIATPGRFIDHIRNSASFNVDSVEILVMDEADRMLEEGFQDELNEIMGLLPSNRQNLLF 415Query: 180 SATMTDEVKDLASVSLKNPVRIFVNKQHRCGSLLRQEFIRIRPNREGDREAIVAALLTR- 238
SATM ++K L S+SLK PVRI ++ + + L QEF+RIR R+ + A++ L+ +Sbjct: 416 SATMNSKIKSLVSLSLKKPVRIMIDPPKKAATKLTQEFVRIR-KRDHLKPALLFNLIRKL 474Query: 239 --TFTDHVMLFTQTKKQAHRMHILLGLMGLQVGELHGNLSQTQRLEALRRFKDEQIDILV 296
T +++F K+ AHR+ I++GL+G+ VGELHG+L+Q QRL+++ +FK+ ++ +L+Sbjct: 475 DPTGQKRIVVFVARKETAHRLRIIMGLLGMSVGELHGSLTQEQRLDSVNKFKNLEVPVLI 534Query: 297 ATDVAARGLDI 307
TD+A+RGLDISbjct: 535 CTDLASRGLDI 5455.PP3501A:核苷酸序列:(SEQ ID NO:13)长度:1796bp1 CTGGGCTCGG GTGATCCTCC TGTCTTAGCC TTCCAAGGTG CTGGGATTAC51 AGGTGTGGGC CACCATGCCC AGCCACCATC TTGGTTTAAT TTCTTTCCTT101 GGAAATGGAG CAAAGGGCTT TCACTCTTCT TTTTCATGGC TGCATAGTAT151 TCCATAATTG TTTAAACAAT TGATAATAGA CACTGTATCG GGGTGACTGG201 TATACCCCCA AAATCACATC TGCCCAGAGC CTCAGGACAT GGCCTTGTTT251 GGAAATGGTT TTAGCAGATG CAGCTAAGAT GAGGTCACCC CGTGTTAGGA301 TGGCCCCGAA TCCAGTGCCT GGCACCCTTA TAAGGAGAGG GAAACTTGGA351 CGCAGACAGG AAGGCCGGGT GAAGACAGAA GCAGAGACCG GGGGCCAAGG401 AGTGCCTGGG GTTGCCCAGA GCCACCACGG GCTGCAAGAG GTGTGGGACA451 GACTCTCTCA GCCACAGAAG GGCCCAGCCC CGCACAGGCC TGGATTTCAG501 AGGGCGAACA TTTCTGTGGC CGAAGCTCCC AGTGCGTTTG CAGTCCTTGG551 AGACGGCCGC AGACACATTT GTTCTTGGCC TGTCTCCAGG TCTGTAGCCC601 CCACAGTGAG CGGCCACTGG CCGGAGGGGA ACAGGAAGAG CTGGAGGGGA651 CGTCACACAC ATGAGCCTTT TAGGAATAAC GAGTGACACG TGCAAGACCC701 CAAACCAAAC ACCATGTAAC CTGACACCCA GGGAGGGAGG GAGGGAGGGG751 CTGGGAGGGG CTCACCTGTA GGGAGGGGCT CACCTGTACA GCGGTGCTGG801 GAAGCTGGCC TCGAGGGTCC CCGAGGGGAT ACAGGGCCGT GCAGCCTCTT851 GCCTGAGGGT TTGCATGTCT GCCTGGATCC CCCGGGCTCC TGCCAGAAGG901 CCTCTGAGGC CACCGTTGAC AGCATAAAGG CCACCCAGTG TCTCGGCAAC951 CACGCTGACC ACTCCCTCCT CCCAGCTGCG GGGTGAGGTG GCCTCGAGGG1001 AAGGGCTGGA GAGTCGTTCT GAGTATTTAA CAACTGGGGG TGACACAGTG1051 TGGGTGGGCA AGGCCAGGGC CACTGCCAGG TGGGGTCCGT GGCCCTGAGC1101 CCCCAGCTCT ATGCACCCCC CACCTGGGGT CTGGCTTCTC CATCTCCACA1151 CCCCCTTGAG GGGCTTCTGT CTCCCCCTGC CCCTTCGATC GCAGGAGGCA1201 GTGCCTGGCC GGGGTCGCAG GCACCTGTCA CCCCAGCTCC TCACTCCTCA1251 CCCACTCACA TCCAGTCCGT TTGTAAAATA CACCCAGGAT GAGACCTGCA1301 CGCAAGTGGC TCACAGCAGC ACGATTTGTG ACAGCCCGAG GCGGAGAACA1351 CCGAACACCC AGTGAAGGTG AGGGGATCAG CACGGCGCGG CCACCCACGC1401 ACCCACGCGC TGGAATGAGA CTCAGCCACA AGGAGGTGCG AAGCTCTGAC1451 CCAGGCCACA GTGCGGATGC ACCTTGAGGA TGTCACGCTC AGTGAGAGAC1501 ACCAGACACA GAAGGGTACG CTGTGATCCC ACTTCTATGA AATGTCCAGG1551 ACAGACCAAT CCACAGAATC AGGGAGAGGA TTCGTGGGTG CCGGGACTGG1601 GGAGGGGGAC CTGGGGGTGA CTAGGTGACA TAATGGGGAC AGGGCTGCCT1651 TCTGGGTGAT GAGAATGTTC TGGAATCAGA TGGGATGGCT GCACGGCGTG1701 GTGAAGGTAC TGAACGCCAC CTCACTGTAA GACGGTAGAT TTTGTATTTT1751 ACCACAATAA ACAAAACAAA ACAAAACCAA AAAAAAAAAA AAAAAAB:氨基酸序列:(SEQ ID NO:14)长度:143个氨基酸1 MVLADAAKMR SPRVRMAPNP VPGTLIRRGK LGRRQEGRVK TEAETGGQGV51 PGVAQSHHGL QEVWDRLSQP QKGPAPHRPG FQRANISVAE APSAFAVLGD101 GRRHICSWPV SRSVAPTVSG HWPEGNRKSW RGRHTHEPFR NNEC:核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO:15)克隆号和蛋白名称:PP3501起始编码子:255 ATG 终止编码子:686 TGA蛋白质分子量:15739.001 CT GGG CTC GGG TGA TCC TCC TGT CTT AGC CTT CCA AGG TGC TGG GAT 4748 TAC AGG TGT GGG CCA CCA TGC CCA GCC ACC ATC TTG GTT TAA TTT CTT 9596 TCC TTG GAA ATG GAG CAA AGG GCT TTC ACT CTT CTT TTT CAT GGC TGC 143144 ATA GTA TTC CAT AAT TGT TTA AAC AAT TGA TAA TAG ACA CTG TAT CGG 191192 GGT GAC TGG TAT ACC CCC AAA ATC ACA TCT GCC CAG AGC CTC AGG ACA 239240 TGG CCT TGT TTG GAA ATG GTT TTA GCA GAT GCA GCT AAG ATG AGG TCA 2871 Met Val Leu Ala Asp Ala Ala Lys Met Arg Ser 11288 CCC CGT GTT AGG ATG GCC CCG AAT CCA GTG CCT GGC ACC CTT ATA AGG 33512 Pro Arg Val Arg Met Ala Pro Asn Pro Val Pro Gly Thr Leu Ile Arg 27336 AGA GGG AAA CTT GGA CGC AGA CAG GAA GGC CGG GTG AAG ACA GAA GCA 38328 Arg Gly Lys Leu Gly Arg Arg Gln Glu Gly Arg Val Lys Thr Glu Ala 43384 GAG ACC GGG GGC CAA GGA GTG CCT GGG GTT GCC CAG AGC CAC CAC GGG 43144 Glu Thr Gly Gly Gln Gly Val Pro Gly Val Ala Gln Ser His His Gly 59432 CTG CAA GAG GTG TGG GAC AGA CTC TCT CAG CCA CAG AAG GGC CCA GCC 47960 Leu Gln Glu Val Trp Asp Arg Leu Ser Gln Pro Gln Lys Gly Pro Ala 75480 CCG CAC AGG CCT GGA TTT CAG AGG GCG AAC ATT TCT GTG GCC GAA GCT 52776 Pro His Arg Pro Gly Phe Gln Arg Ala Asn Ile Ser Val Ala Glu Ala 91528 CCC AGT GCG TTT GCA GTC CTT GGA GAC GGC CGC AGA CAC ATT TGT TCT 57592 Pro Ser Ala Phe Ala Val Leu Gly Asp Gly Arg Arg His Ile Cys Ser 107576 TGG CCT GTC TCC AGG TCT GTA GCC CCC ACA GTG AGC GGC CAC TGG CCG 623108 Trp Pro Val Ser Arg Ser Val Ala Pro Thr Val Ser Gly His Trp Pro 123624 GAG GGG AAC AGG AAG AGC TGG AGG GGA CGT CAC ACA CAT GAG CCT TTT 671124 Glu Gly Asn Arg Lys Ser Trp Arg Gly Arg His Thr His Glu Pro Phe 139672 AGG AAT AAC GAG TGA CAC GTG CAA GAC CCC AAA CCA AAC ACC ATG TAA 719140 Arg Asn Asn Glu *** 144720 CCT GAC ACC CAG GGA GGG AGG GAG GGA GGG GCT GGG AGG GGC TCA CCT 767768 GTA GGG AGG GGC TCA CCT GTA CAG CGG TGC TGG GAA GCT GGC CTC GAG 815816 GGT CCC CGA GGG GAT ACA GGG CCG TGC AGC CTC TTG CCT GAG GGT TTG 863864 CAT GTC TGC CTG GAT CCC CCG GGC TCC TGC CAG AAG GCC TCT GAG GCC 911912 ACC GTT GAC AGC ATA AAG GCC ACC CAG TGT CTC GGC AAC CAC GCT GAC 959960 CAC TCC CTC CTC CCA GCT GCG GGG TGA GGT GGC CTC GAG GGA AGG GCT 10071008 GGA GAG TCG TTC TGA GTA TTT AAC AAC TGG GGG TGA CAC AGT GTG GGT 10551056 GGG CAA GGC CAG GGC CAC TGC CAG GTG GGG TCC GTG GCC CTG AGC CCC 11031104 CAG CTC TAT GCA CCC CCC ACC TGG GGT CTG GCT TCT CCA TCT CCA CAC 11511152 CCC CTT GAG GGG CTT CTG TCT CCC CCT GCC CCT TCG ATC GCA GGA GGC 11991200 AGT GCC TGG CCG GGG TCG CAG GCA CCT GTC ACC CCA GCT CCT CAC TCC 12471248 TCA CCC ACT CAC ATC CAG TCC GTT TGT AAA ATA CAC CCA GGA TGA GAC 12951296 CTG CAC GCA AGT GGC TCA CAG CAG CAC GAT TTG TGA CAG CCC GAG GCG 13431344 GAG AAC ACC GAA CAC CCA GTG AAG GTG AGG GGA TCA GCA CGG CGC GGC 13911392 CAC CCA CGC ACC CAC GCG CTG GAA TGA GAC TCA GCC ACA AGG AGG TGC 14391440 GAA GCT CTG ACC CAG GCC ACA GTG CGG ATG CAC CTT GAG GAT GTC ACG 14871488 CTC AGT GAG AGA CAC CAG ACA CAG AAG GGT ACG CTG TGA TCC CAC TTC 15351536 TAT GAA ATG TCC AGG ACA GAC CAA TCC ACA GAA TCA GGG AGA GGA ITC 15831584 GTG GGT GCC GGG ACT GGG GAG GGG GAC CTG GGG GTG ACT AGG TGA CAT 16311632 AAT GGG GAC AGG GCT GCC TTC TGG GTG ATG AGA ATG TTC TGG AAT CAG 16791680 ATG GGA TGG CTG CAC GGC GTG GTG AAG GTA CTG AAC GCC ACC TCA CTG 17271728 TAA GAC GGT AGA TTT TGT ATT TTA CCA CAA TAA ACA AAA CAA AAC AAA 17751776 ACC AAA AAA AAA AAA AAA AAA 1796
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考,就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解,在阅读了本发明的上述讲授内容之后,本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改,这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
Claims (11)
1.一种分离的具有抑癌功能的人蛋白,其特征在于,它包含具有选自下组的氨基酸序列的多肽:SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14;
或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。
2.如权利要求1所述的多肽,其特征在于,该多肽是具有选自下组的氨基酸序列的多肽:SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14。
3.一种分离的多核苷酸,其特征在于,它包含一核苷酸序列,该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少85%相同性:
(a)编码如权利要求l和2所述多肽的多核苷酸;
(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。
4.如权利要求3所述的多核苷酸,其特征在于,该多核苷酸编码的多肽具有选自下组的氨基酸序列:SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14。
5.如权利要求3所述的多核苷酸,其特征在于,该多核苷酸的序列选自下组:
SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15的编码区序列或全长序列。
6.一种载体,其特征在于,它含有权利要求3所述的多核苷酸。
7.一种遗传工程化的宿主细胞,其特征在于,它是选自下组的一种宿主细胞:
(a)用权利要求6所述的载体转化或转导的宿主细胞;
(b)用权利要求3所述的多核苷酸转化或转导的宿主细胞。
8.一种具有具有抑癌功能的人蛋白活性的多肽的制备方法,其特征在于,该方法包含:
(a)在适合表达具有抑癌功能的人蛋白的条件下,培养权利要求7所述的宿主细胞;
(b)从培养物中分离出具有具有抑癌功能的人蛋白活性的多肽。
9.一种能与权利要求1所述的具有抑癌功能的人蛋白特异性结合的抗体。
10.一种核酸分子,它含有权利要求3所述的多核苷酸中连续的10-800个核苷酸。
11、一种药物组合物,其特征在于,它含有安全有效量的权利要求1所述的多肽以及药学上可接受的载体。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CNB001119915A CN1169958C (zh) | 2000-03-13 | 2000-03-13 | 编码具有抑制癌细胞生长功能的人蛋白的多核苷酸 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CNB001119915A CN1169958C (zh) | 2000-03-13 | 2000-03-13 | 编码具有抑制癌细胞生长功能的人蛋白的多核苷酸 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN1313317A true CN1313317A (zh) | 2001-09-19 |
CN1169958C CN1169958C (zh) | 2004-10-06 |
Family
ID=4581887
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CNB001119915A Expired - Fee Related CN1169958C (zh) | 2000-03-13 | 2000-03-13 | 编码具有抑制癌细胞生长功能的人蛋白的多核苷酸 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN1169958C (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102851296A (zh) * | 2012-03-26 | 2013-01-02 | 广东医学院 | 一种抗肝癌蛋白质pp3501及其制备方法和应用 |
-
2000
- 2000-03-13 CN CNB001119915A patent/CN1169958C/zh not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102851296A (zh) * | 2012-03-26 | 2013-01-02 | 广东医学院 | 一种抗肝癌蛋白质pp3501及其制备方法和应用 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN1169958C (zh) | 2004-10-06 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN1313297A (zh) | 具有抑制癌细胞生长功能的新的人蛋白及其编码序列 | |
CN1313317A (zh) | 具有抑制癌细胞生长功能的新的人蛋白及其编码序列 | |
CN1368509A (zh) | 具有抑制癌细胞生长功能的新的人蛋白及其编码序列 | |
CN1368510A (zh) | 具有抑制癌细胞生长功能的新的人蛋白及其编码序列 | |
CN1403478A (zh) | 具有抑制癌细胞生长功能的新的人蛋白及其编码序列 | |
CN1309135A (zh) | 具有抑制癌细胞生长功能的新的人蛋白及其编码序列 | |
CN1323803A (zh) | 具有抑制癌细胞生长功能的新的人蛋白及其编码序列 | |
CN1351081A (zh) | 具有抑制癌细胞生长功能的新的人蛋白及其编码序列 | |
CN1351079A (zh) | 具有抑制癌细胞生长功能的新的人蛋白及其编码序列 | |
CN1329065A (zh) | 具有促进癌细胞生长功能的新的人蛋白及其编码序列 | |
CN1324819A (zh) | 具有抑制癌细胞生长功能的新的人蛋白及其编码序列 | |
CN1323802A (zh) | 具有抑制癌细胞生长功能的新的人蛋白及其编码序列 | |
CN1368511A (zh) | 具有抑癌功能的新的人蛋白及其编码序列 | |
CN1298945A (zh) | 新的人核糖核酸酶pH及其编码序列 | |
CN1313316A (zh) | 具有抑制癌细胞生长功能的新的人蛋白及其编码序列 | |
CN1421457A (zh) | 具有抑制癌细胞生长功能的新的人蛋白及其编码序列 | |
CN1324820A (zh) | 具有抑制癌细胞生长功能的新的人蛋白及其编码序列 | |
CN1351080A (zh) | 具有抑制癌细胞生长功能的新的人蛋白及其编码序列 | |
CN1292385A (zh) | 一种新的多肽——人dna-pk相互作用蛋白75和编码这种多肽的多核苷酸 | |
CN1369506A (zh) | 具有促进3t3细胞转化功能的新的人蛋白及其编码序列 | |
CN1302886A (zh) | 一种新的多肽——人细胞凋亡相关蛋白12和编码这种多肽的多核苷酸 | |
CN1477123A (zh) | 一种多肽——转录因子43和编码这种多肽的多核苷酸 | |
CN1458170A (zh) | 具有抑癌功能的新的人蛋白及其编码序列 | |
CN1351082A (zh) | 具有促进癌细胞生长功能的新的人蛋白及其编码序列 | |
CN1368508A (zh) | 具有抑癌功能的新的人蛋白及其编码序列 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
C19 | Lapse of patent right due to non-payment of the annual fee | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |