CN1368508A - 具有抑癌功能的新的人蛋白及其编码序列 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一类新的具有抑癌功能的人蛋白,编码此多肽的多核苷酸和经重组技术产生该多肽的方法。本发明还公开了此多肽用于治疗多种疾病如癌症等的方法。本发明还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明还公开了编码这类新的具有抑癌功能的人蛋白的多核苷酸的用途。

Description

具有抑癌功能的新的人蛋白及其编码序列
本发明属于生物技术领域,具体地说,本发明涉及新的编码具有抑癌功能的人蛋白的多核苷酸和此多核苷酸编码的多肽。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的用途和制备。
人基因组学研究目前是国际上的热点,除人染色体DNA大规模测序,表达序列测序(EST)的方法外,还缺少从功能开始的筛选具有功能基因的高通量的方法。
癌症是危害人类健康的主要疾病之一。为了有效地治疗和预防肿瘤,目前人们已越来越关注肿瘤的基因治疗。因此,本领域迫切需要开发研究具有抑癌功能的人蛋白及其激动剂/抑制剂。
本发明的目的是提供一类新的具有抑癌功能的人蛋白多肽以及其片段、类似物和衍生物。
本发明的另一目的是提供编码这些多肽的多核苷酸。
本发明的另一目的是提供生产这些多肽的方法以及该多肽和编码序列的用途。
在本发明的第一方面,提供新颖的分离出的具有抑癌功能的蛋白多肽,它包含具有选自下组的氨基酸序列的多肽:SEQ ID NO:2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35;或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。
较佳地,该多肽是具有选自下组的氨基酸序列的多肽:SEQ ID NO:2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35。
在本发明的第二方面,提供了一种分离的多核苷酸,它包含一核苷酸序列,该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少85%相同性:(a)编码上述的具有抑癌功能的蛋白多肽的多核苷酸;(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。较佳地,该多核苷酸编码的多肽具有选自下组的氨基酸序列:SEQ ID NO:2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35。更佳地,该多核苷酸的序列选自下组:SEQ ID NO:3、6、9、12、15、18、21、24、27、30、33、36的编码区序列或全长序列。
在本发明的第三方面,提供了含有上述多核苷酸的载体,以及被该载体转化或转导的宿主细胞或者被上述多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞。
在本发明的第四方面,提供了制备具有抑癌功能的蛋白活性的多肽的制备方法,该方法包含:(a)在适合表达具有抑癌功能的蛋白的条件下,培养上述被转化或转导的宿主细胞;(b)从培养物中分离出具有抑癌功能的蛋白活性的多肽。
在本发明的第五方面,提供了与上述的具有抑癌功能的蛋白多肽特异性结合的抗体。还提供了可用于检测的核酸分子,它含有上述的多核苷酸中连续10个核苷酸至全长核苷酸,较佳地它含有连续的约10-800个核苷酸。
在本发明的第六方面,提供了一种药物组合物,它含有安全有效量的本发明的具有抑癌功能的蛋白多肽以及药学上可接受的载体。这些药物组合物可治疗癌症以及细胞异常增殖等病症。
本发明的其它方面由于本文的公开内容,对本领域的技术人员而言是显而易见的。
3T3细胞是一种小鼠成纤维细胞(J.Cell.Biol.,17:299,1963)。在癌症研究领域中,常将外源基因(尤其是人基因)引入3T3细胞,观察其对3T3细胞生长的影响情况。通常认为,对3T3细胞生长有影响的基因是癌症相关基因,其中对3T3细胞生长有抑制作用的基因大多是抑癌基因,而对3T3细胞生长有促进作用的基因大多是(原)癌基因。
本发明采用大规模cDNA克隆转染小鼠胚胎成纤维细胞,在获得具有抑癌作用的基础上,经测序证明为新的基因,进一步得到全长cDNA克隆。DNA转染试验证明,本发明的具有抑癌功能的蛋白对3T3细胞具有抑制克隆形成的作用,其抑制率≥50%。
如本文所用,“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质,原始环境即是天然环境)。如活体细胞内的天然状态下的多聚核苷酸和多肽是没有分离纯化的,但同样的多聚核苷酸或多肽如从天然状态中同存在的其他物质中分开,则为分离纯化的。
如本文所用,“分离的具有抑癌功能的蛋白或多肽”是指具有抑癌功能的蛋白多肽基本上不含天然与其相关的其它蛋白、脂类、糖类或其它物质。本领域的技术人员能用标准的蛋白质纯化技术纯化具有抑癌功能的蛋白。基本上纯的多肽在非还原聚丙烯酰胺凝胶上能产生单一的主带。
本发明的多肽可以是重组多肽、天然多肽、合成多肽,优选重组多肽。本发明的多肽可以是天然纯化的产物,或是化学合成的产物,或使用重组技术从原核或真核宿主(例如,细菌、酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞)中产生。根据重组生产方案所用的宿主,本发明的多肽可以是糖基化的,或可以是非糖基化的。本发明的多肽还可包括或不包括起始的甲硫氨酸残基。
本发明还包括具有抑癌功能的人蛋白的片段、衍生物和类似物。如本文所用,术语“片段”、“衍生物”和“类似物”是指基本上保持本发明的天然具有抑癌功能的人蛋白相同的生物学功能或活性的多肽。本发明的多肽片段、衍生物或类似物可以是(i)有一个或多个保守或非保守性氨基酸残基(优选保守性氨基酸残基)被取代的多肽,而这样的取代的氨基酸残基可以是也可以不是由遗传密码编码的,或(ii)在一个或多个氨基酸残基中具有取代基团的多肽,或(iii)成熟多肽与另一个化合物(比如延长多肽半衰期的化合物,例如聚乙二醇)融合所形成的多肽,或(iv)附加的氨基酸序列融合到此多肽序列而形成的多肽(如前导序列或分泌序列或用来纯化此多肽的序列或蛋白原序列)。根据本文的教导,这些片段、衍生物和类似物属于本领域熟练技术人员公知的范围。
本发明的多核苷酸可以是DNA形式或RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因组DNA或人工合成的DNA。DNA可以是单链的或是双链的。DNA可以是编码链或非编码链。以PP9457蛋白(在本申请中,蛋白质的命名采用其克隆编号)为例,编码成熟多肽的编码区序列可以与SEQ ID NO:3所示的编码区序列相同或者是简并的变异体。如本文所用,“简并的变异体”在本发明中是指编码具有SEQ ID NO:2的蛋白质,但与SEQ IDNO:3所示的编码区序列有差别的核酸序列。再以PP9943蛋白为例,编码成熟多肽的编码区序列可以与SEQ ID NO:6所示的编码区序列相同或者是简并的变异体。对于其他具有抑癌功能的蛋白,可依此类推。
编码成熟多肽的多核苷酸包括:只编码成熟多肽的编码序列;成熟多肽的编码序列和各种附加编码序列;成熟多肽的编码序列(和任选的附加编码序列)以及非编码序列。
术语“编码多肽的多核苷酸”可以是包括编码此多肽的多核苷酸,也可以是还包括附加编码和/或非编码序列的多核苷酸。
本发明还涉及上述多核苷酸的变异体,其编码与本发明有相同的氨基酸序列的多肽或多肽的片段、类似物和衍生物。此多核苷酸的变异体可以是天然发生的等位变异体或非天然发生的变异体。这些核苷酸变异体包括取代变异体、缺失变异体和插入变异体。如本领域所知的,等位变异体是一个多核苷酸的替换形式,它可能是一个或多个核苷酸的取代、缺失或插入,但不会从实质上改变其编码的多肽的功能。
本发明还涉及与上述的序列杂交且两个序列之间具有至少50%,较佳地至少70%,更佳地至少80%相同性的多核苷酸。本发明特别涉及在严格条件下与本发明所述多核苷酸可杂交的多核苷酸。在本发明中,“严格条件”是指:(1)在较低离子强度和较高温度下的杂交和洗脱,如0.2×SSC,0.1%SDS,60℃;或(2)杂交时加有变性剂,如50%(v/v)甲酰胺,0.1%小牛血清/0.1%Ficoll,42℃等;或(3)仅在两条序列之间的相同性至少在95%以上,更好是97%以上时才发生杂交。并且,可杂交的多核苷酸编码的多肽与SEQ IDNO:2所示的成熟多肽有相同的生物学功能(以PP9457蛋白为例)和活性。
本发明还涉及与上述的序列杂交的核酸片段。如本文所用,“核酸片段”的长度至少含15个核苷酸,较好是至少30个核苷酸,更好是至少50个核苷酸,最好是至少100个核苷酸以上。核酸片段可用于核酸的扩增技术(如PCR)以确定和/或分离编码具有抑癌功能的蛋白的多聚核苷酸。
本发明中的多肽和多核苷酸优选以分离的形式提供,更佳地被纯化至均质。
本发明的DNA序列能用几种方法获得。例如,用本领域熟知的杂交技术分离DNA。这些技术包括但不局限于:1)用探针与基因组或cDNA文库杂交以检出同源性核苷酸序列,和2)表达文库的抗体筛选以检出具有共同结构特征的克隆的DNA片段。
编码具有抑癌功能的蛋白的特异DNA片段序列产生也能用下列方法获得:1)从基因组DNA分离双链DNA序列;2)化学合成DNA序列以获得所需多肽的双链DNA。
当需要的多肽产物的整个氨基酸序列已知时,DNA序列的直接化学合成是经常选用的方法。如果所需的氨基酸的整个序列不清楚时,DNA序列的直接化学合成是不可能的,选用的方法是cDNA序列的分离。分离感兴趣的cDNA的标准方法是从高表达该基因的供体细胞分离mRNA并进行逆转录,形成质粒或噬菌体cDNA文库。提取mRNA的方法已有多种成熟的技术,试剂盒也可从商业途径获得(Qiagene)。而构建cDNA文库也是通常的方法(Sambrook,et al.,Molecular Cloning,A Laboratory Manual,Cold SpringHarbor Laboratory.New York,1989)。还可得到商业供应的cDNA文库,如Clontech公司的不同cDNA文库。当结合使用聚合酶反应技术时,即使极少的表达产物也能克隆。
可用常规方法从这些cDNA文库中筛选本发明的基因。这些方法包括(但不限于):(1)DNA-DNA或DNA-RNA杂交;(2)标志基因的功能出现或丧失;(3)测定具有抑癌功能的蛋白的转录本的水平;(4)通过免疫学技术或测定生物学活性,来检测基因表达的蛋白产物。上述方法可单用,也可多种方法联合应用。
在第(1)种方法中,杂交所用的探针是与本发明的多核苷酸的任何一部分同源,其长度至少15个核苷酸,较好是至少30个核苷酸,更好是至少50个核苷酸,最好是至少100个核苷酸。此外,探针的长度通常在2kb之内,较佳地为1kb之内。此处所用的探针通常是在本发明的基因DNA序列信息的基础上化学合成的DNA序列。本发明的基因本身或者片段当然可以用作探针。DNA探针的标记可用放射性同位素,荧光素或酶(如碱性磷酸酶)等。
在第(4)种方法中,检测具有抑癌功能的蛋白基因表达的蛋白产物可用免疫学技术如Western印迹法,放射免疫沉淀法,酶联免疫吸附法(ELISA)等。
应用PCR技术扩增DNA/RNA的方法(Saiki,et al.Science 1985;230:1350-1354)被优选用于获得本发明的基因。特别是很难从文库中得到全长的cDNA时,可优选使用RACE法(RACE-cDNA末端快速扩增法),用于PCR的引物可根据本文所公开的本发明的序列信息适当地选择,并可用常规方法合成。可用常规方法如通过凝胶电泳分离和纯化扩增的DNA/RNA片段。
如上所述得到的本发明的基因,或者各种DNA片段等的核苷酸序列的测定可用常规方法如双脱氧链终止法(Sanger et al.PNAS,1977,74:5463-5467)。这类核苷酸序列测定也可用商业测序试剂盒等。为了获得全长的cDNA序列,测序需反复进行。有时需要测定多个克隆的cDNA序列,才能拼接成全长的cDNA序列。
本发明也涉及包含本发明多核苷酸的载体,以及用本发明载体或具有抑癌功能的蛋白编码序列经基因工程产生的宿主细胞,以及经重组技术产生本发明所述多肽的方法。
通过常规的重组DNA技术(Science,1984;224:1431),可利用本发明的多聚核苷酸序列可用来表达或生产重组的具有抑癌功能的蛋白多肽。一般来说有以下步骤:
(1).用本发明的编码具有抑癌功能的人蛋白的多核苷酸(或变异体),或用含有该多核苷酸的重组表达载体转化或转导合适的宿主细胞;
(2).在合适的培养基中培养的宿主细胞;
(3).从培养基或细胞中分离、纯化蛋白质。
本发明中,具有抑癌功能的人蛋白多核苷酸序列可插入到重组表达载体中。术语“重组表达载体”指本领域熟知的细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒如腺病毒、逆转录病毒或其他载体。在本发明中适用的载体包括但不限于:在细菌中表达的基于T7的表达载体(Rosenberg,et al.Gene,1987,56:125);在哺乳动物细胞中表达的pMSXND表达载体(Lee and Nathans,J Bio Chem.263:3521,1988)和在昆虫细胞中表达的来源于杆状病毒的载体。总之,只要能在宿主体内复制和稳定,任何质粒和载体都可以用。表达载体的一个重要特征是通常含有复制起点、启动子、标记基因和翻译控制元件。
本领域的技术人员熟知的方法能用于构建含具有抑癌功能的人蛋白编码DNA序列和合适的转录/翻译控制信号的表达载体。这些方法包括体外重组DNA技术、DNA合成技术、体内重组技术等(Sambroook,et al.)。所述的DNA序列可有效连接到表达载体中的适当启动子上,以指导mRNA合成。这些启动子的代表性例子有:大肠杆菌的lac或trp启动子;λ噬菌体PL启动子;真核启动子包括CMV立即早期启动子、早期和晚期SV40启动子、反转录病毒的LTRs和其他一些已知的可控制基因在原核或真核细胞或其病毒中表达的启动子。表达载体还包括翻译起始用的核糖体结合位点和转录终止子。
此外,表达载体优选地包含一个或多个选择性标记基因,以提供用于选择转化的宿主细胞的表型性状,如真核细胞培养用的二氢叶酸还原酶、新霉素抗性以及绿色荧光蛋白(GFP),或用于大肠杆菌的四环素或氨苄青霉素抗性。
包含上述的适当DNA序列以及适当启动子或者控制序列的载体,可以用于转化适当的宿主细胞,以使其能够表达蛋白质。
宿主细胞可以是原核细胞,如细菌细胞;或是低等真核细胞,如酵母细胞;或是高等真核细胞,如哺乳动物细胞。代表性例子有:大肠杆菌,链霉菌属;鼠伤寒沙门氏菌的细菌细胞;真菌细胞如酵母;植物细胞;果蝇S2或Sf9的昆虫细胞;CHO、COS或Bowes黑素瘤细胞的动物细胞等。
本发明的多核苷酸在高等真核细胞中表达时,如果在载体中插入增强子序列时将会使转录得到增强。增强子是DNA的顺式作用因子,通常大约有10到300个碱基对,作用于启动子以增强基因的转录。可举的例子包括在复制起始点晚期一侧的100到270个碱基对的SV40增强子、在复制起始点晚期一侧的多瘤增强子以及腺病毒增强子等。
本领域一般技术人员都清楚如何选择适当的载体、启动子、增强子和宿主细胞。
用重组DNA转化宿主细胞可用本领域技术人员熟知的常规技术进行。当宿主为原核生物如大肠杆菌时,能吸收DNA的感受态细胞可在指数生长期后收获,用CaCl2法处理,所用的步骤在本领域众所周知。可供选择的是用MgCl2。如果需要,转化也可用电穿孔的方法进行。当宿主是真核生物,可选用如下的DNA转染方法:磷酸钙共沉淀法,常规机械方法如显微注射、电穿孔、脂质体包装等。
获得的转化子可以用常规方法培养,表达本发明的基因所编码的多肽。根据所用的宿主细胞,培养中所用的培养基可选自各种常规培养基。在适于宿主细胞生长的条件下进行培养。当宿主细胞生长到适当的细胞密度后,用合适的方法(如温度转换或化学诱导)诱导选择的启动子,将细胞再培养一段时间。
在上面的方法中的重组多肽可包被于细胞内、细胞外或在细胞膜上表达或分泌到细胞外。如果需要,可利用其物理的、化学的和其它特性通过各种分离方法分离和纯化重组的蛋白。这些方法是本领域技术人员所熟知的。这些方法的例子包括但并不限于:常规的复性处理、用蛋白沉淀剂处理(盐析方法)、离心、渗透破菌、超处理、超离心、分子筛层析(凝胶过滤)、吸附层析、离子交换层析、高效液相层析(HPLC)和其它各种液相层析技术及这些方法的结合。
重组的具有抑癌功能的人蛋白或多肽有多方面的用途。这些用途包括(但不限于):直接做为药物治疗具有抑癌功能的蛋白功能低下或丧失所致的疾病,和用于筛选促进或对抗具有抑癌功能的蛋白功能的抗体、多肽或其它配体。例如,抗体可用于激活或抑制具有抑癌功能的人蛋白的功能。用表达的重组具有抑癌功能的人蛋白筛选多肽库可用于寻找有治疗价值的能抑制或刺激具有抑癌功能的人蛋白功能的多肽分子。
本发明也提供了筛选药物以鉴定提高(激动剂)或阻遏(拮抗剂)具有抑癌功能的人蛋白的药剂的方法。激动剂提高具有抑癌功能的人蛋白刺激细胞增殖等生物功能,而拮抗剂阻止和治疗与细胞过度增殖有关的紊乱如各种癌症。例如,能在药物的存在下,将哺乳动物细胞或表达具有抑癌功能的人蛋白的膜制剂与标记的具有抑癌功能的人蛋白一起培养。然后测定药物提高或阻遏此相互作用的能力。
具有抑癌功能的人蛋白的拮抗剂包括筛选出的抗体、化合物、受体缺失物和类似物等。具有抑癌功能的人蛋白的拮抗剂可以与具有抑癌功能的人蛋白结合并消除其功能,或是抑制具有抑癌功能的人蛋白的产生,或是与多肽的活性位点结合使多肽不能发挥生物学功能。具有抑癌功能的人蛋白的拮抗剂可用于治疗用途。
在筛选作为拮抗剂的化合物时,可以将本发明蛋白加入生物分析测定中,通过测定化合物影响具有抑癌功能的蛋白和其受体之间的相互作用来确定化合物是否是拮抗剂。用上述筛选化合物的同样方法,可以筛选出起拮抗剂作用的受体缺失物和类似物。
本发明的多肽可直接用于疾病治疗,例如,各种恶性肿瘤、和细胞异常增殖等。
本发明的多肽,及其片段、衍生物、类似物或它们的细胞可以用来作为抗原以生产抗体。这些抗体可以是多克隆或单克隆抗体。多克隆抗体可以通过将此多肽直接注射动物的方法得到。制备单克隆抗体的技术包括杂交瘤技术,三瘤技术,人B-细胞杂交瘤技术,EBV-杂交瘤技术等。
可以将本发明的多肽和拮抗剂与合适的药物载体组合后使用。这些载体可以是水、葡萄糖、乙醇、盐类、缓冲液、甘油以及它们的组合。组合物包含安全有效量的多肽或拮抗剂以及不影响药物效果的载体和赋形剂。这些组合物可以作为药物用于疾病治疗。
本发明还提供含有一种或多种容器的药盒或试剂盒,容器中装有一种或多种本发明的药用组合物成分。与这些容器一起,可以有由制造、使用或销售药品或生物制品的政府管理机构所给出的指示性提示,该提示反映出生产、使用或销售的政府管理机构许可其在人体上施用。此外,本发明的多肽可以与其它的治疗化合物结合使用。
药物组合物可以以方便的方式给药,如通过局部、静脉内、腹膜内、肌内、皮下、鼻内或皮内的给药途径。具有抑癌功能的蛋白以有效地治疗和/或预防具体的适应症的量来给药。施用于患者的具有抑癌功能的蛋白的量和剂量范围将取决于许多因素,如给药方式、待治疗者的健康条件和诊断医生的判断。
具有抑癌功能的人蛋白的多聚核苷酸也可用于多种治疗目的。基因治疗技术可用于治疗由于具有抑癌功能的蛋白的无表达或异常/无活性的具有抑癌功能的蛋白的表达所致的细胞增殖、发育或代谢异常。重组的基因治疗载体可用于治疗具有抑癌功能的蛋白表达或活性异常所致的疾病。来源于病毒的表达载体如逆转录病毒、腺病毒、腺病毒相关病毒、单纯疱疹病毒、细小病毒等可用于将具有抑癌功能的蛋白基因转移至细胞内。构建携带具有抑癌功能的蛋白基因的重组病毒载体的方法可见于已有文献(Sambrook,etal.)。另外重组具有抑癌功能的人蛋白基因可包装到脂质体中转移至细胞内。
抑制具有抑癌功能的人蛋白mRNA的寡聚核苷酸(包括反义RNA和DNA)以及核酶也在本发明的范围之内。核酶是一种能特异性分解特定RNA的酶样RNA分子,其作用机制是核酶分子与互补的靶RNA特异性杂交后进行核酸内切作用。反义的RNA和DNA及核酶可用已有的任何RNA或DNA合成技术获得,如固相磷酸酰胺化学合成法合成寡核苷酸的技术已广泛应用。反义RNA分子可通过编码该RNA的DNA序列在体外或体内转录获得。这种DNA序列已整合到载体的RNA聚合酶启动子的下游。为了增加核酸分子的稳定性,可用多种方法对其进行修饰,如增加两侧的序列长度,核糖核苷之间的连接应用磷酸硫酯键或肽键而非磷酸二酯键。
多聚核苷酸导入组织或细胞内的方法包括:将多聚核苷酸直接注入到体内组织中;或在体外通过载体(如病毒、噬菌体或质粒等)先将多聚核苷酸导入细胞中,再将细胞移植到体内等。
本发明的多肽还可用作肽谱分析,例如,多肽可用物理的、化学或酶进行特异性切割,并进行一维或二维或三维的凝胶电泳分析。
本发明还提供了针对具有抑癌功能的人蛋白抗原决定簇的抗体。这些抗体包括(但不限于):多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、单链抗体、Fab片段和Fab表达文库产生的片段。这些抗体可用常规方法制备。抗具有抑癌功能的人蛋白的抗体可用于免疫组织化学技术中,检测活检标本中的具有抑癌功能的人蛋白。
与具有抑癌功能的人蛋白结合的单克隆抗体也可用放射性同位素标记,注入体内可跟踪其位置和分布。本发明中的抗体可用于治疗或预防与具有抑癌功能的人蛋白相关的疾病。给予适当剂量的抗体可以刺激或阻断具有抑癌功能的人蛋白的产生或活性。
抗体也可用于设计针对体内某一特殊部位的免疫毒素。如具有抑癌功能的人蛋白高亲和性的单克隆抗体可与细菌或植物毒素(如白喉毒素,蓖麻蛋白,红豆碱等)共价结合。
多克隆抗体的生产可用具有抑癌功能的人蛋白或多肽免疫动物,如家兔,小鼠,大鼠等。多种佐剂可用于增强免疫反应,包括但不限于弗氏佐剂等。
具有抑癌功能的人蛋白单克隆抗体可用杂交瘤技术生产(Kohler and Milstein.Nature,1975,256:495-497)。将人恒定区和非人源的可变区结合的嵌合抗体可用已有的技术生产(Morrison et al,PNAS,1985,81:6851)。而已有的生产单链抗体的技术(U.S.PatNo.4946778)也可用于生产抗具有抑癌功能的人蛋白的单链抗体。
能与本发明蛋白结合的多肽分子可通过筛选由各种可能组合的氨基酸结合于固相物组成的随机多肽库而获得。筛选时,必须对具有抑癌功能的人蛋白分子进行标记。
本发明还涉及定量和定位检测具有抑癌功能的人蛋白水平的诊断试验方法。这些试验是本领域所熟知的,且包括FISH测定和放射免疫测定。试验中所检测的具有抑癌功能的人蛋白水平,可以用作解释具有抑癌功能的人蛋白在各种疾病中的重要性和用于诊断具有抑癌功能的蛋白起作用的疾病。
具有抑癌功能的蛋白的多聚核苷酸可用于具有抑癌功能的蛋白相关疾病的诊断和治疗。在诊断方面,具有抑癌功能的蛋白的多聚核苷酸可用于检测具有抑癌功能的蛋白的表达与否或在疾病状态下具有抑癌功能的蛋白的异常表达。如具有抑癌功能的蛋白DNA序列可用于对活检标本的杂交以判断具有抑癌功能的蛋白的表达异常。杂交技术包括Southern印迹法,Northern印迹法、原位杂交等。这些技术方法都是公开的成熟技术,相关的试剂盒都可从商业途径得到。本发明的多核苷酸的一部分或全部可作为探针固定在微阵列(Microarray)或DNA芯片(又称为“基因芯片”)上,用于分析组织中基因的差异表达分析和基因诊断。用具有抑癌功能的蛋白特异的引物进行RNA-聚合酶链反应(RT-PCR)体外扩增也可检测具有抑癌功能的蛋白的转录产物。
检测具有抑癌功能的蛋白基因的突变也可用于诊断具有抑癌功能的蛋白相关的疾病。具有抑癌功能的蛋白突变的形式包括与正常野生型具有抑癌功能的蛋白DNA序列相比的点突变、易位、缺失、重组和其它任何异常等。可用已有的技术如Southern印迹法、DNA序列分析、PCR和原位杂交检测突变。另外,突变有可能影响蛋白的表达,因此用Northern印迹法、Western印迹法可间接判断基因有无突变。
本发明的序列对染色体鉴定也是有价值的。这些序列会特异性地针对某条人染色体具体位置且并可以与其杂交。目前,需要鉴定染色体上的各基因的具体位点。然而现在只有很少的基于实际序列数据(重复多态性)的染色体标记物可用于标记染色体位置。为了将这些序列与疾病相关基因相关联。第一步就是将本发明DNA序列定位于染色体上。
简而言之,根据cDNA制备PCR引物(优选15-35bp),可以将序列定位于染色体上。然后,将这些引物用于PCR筛选含各条人染色体的体细胞杂合细胞。只有那些含有相应于引物的人基因的杂合细胞会产生扩增的片段。
体细胞杂合细胞的PCR定位法,是将DNA定位到具体染色体的快捷方法。使用本发明的的寡核苷酸引物,通过类似方法,可利用一组来自特定染色体的片段或大量基因组克隆而实现亚定位。可用于染色体定位的其它类似策略包括原位杂交、用标记的流式分选的染色体预筛选和杂交预选,从而构建染色体特异的cDNA库。
将cDNA克隆与中期染色体进行荧光原位杂交(FISH),可以在一个步骤中精确地进行染色体定位。此技术的综述,参见Verma等,Human Chromosomes:a Manual of BasicTechniques,Pergamon Press,New York(1988)。
一旦序列被定位到准确的染色体位置,此序列在染色体上的物理位置就可以与基因图数据相关联。这些数据可见于例如,V.Mckusick,Mendelian Inheritance in Man(可通过与Johns Hopkins University Welch Medical Library联机获得)。然后可通过连锁分析,确定基因与业已定位到染色体区域上的疾病之间的关系。
接着,需要测定患病和未患病个体间的cDNA或基因组序列差异。如果在一些或所有的患病个体中观察到某突变,而该突变在任何正常个体中未观察到,则该突变可能是疾病的病因。比较患病和未患病个体,通常涉及首先寻找染色体中结构的变化,如从染色体水平可见的或用基于cDNA序列的PCR可检测的缺失或易位。
本发明的具有抑癌功能的蛋白核苷酸全长序列或其片段通常可以用PCR扩增法、重组法或人工合成的方法获得。对于PCR扩增法,可根据本发明所公开的有关核苷酸序列,尤其是开放阅读框序列来设计引物,并用市售的cDNA库或按本领域技术人员已知的常规方法所制备的cDNA库作为模板,扩增而得有关序列。当序列较长时,常常需要进行两次或多次PCR扩增,然后再将各次扩增出的片段按正确次序拼接在一起。
一旦获得了有关的序列,就可以用重组法来大批量地获得有关序列。这通常是将其克隆入载体,再转入细胞,然后通过常规方法从增殖后的宿主细胞中分离得到有关序列。
此外,还可用人工合成的方法来合成有关序列,尤其是片段长度较短时。通常,通过先合成多个小片段,然后再进行连接可获得序列很长的片段。
目前,已经可以完全通过化学合成来编码本发明蛋白(或其片段,或其衍生物)的DNA序列。然后可将该DNA序列引入本领域中的各种DNA分子(如载体)和细胞中。此外,还可通过化学合成将突变引入本发明蛋白序列中。
此外,由于本发明的具有抑癌功能的蛋白具有源自人的天然氨基酸序列,因此,与来源于其他物种的同族蛋白相比,预计在施用于人时将具有更高的活性和/或更低的副作用(例如在人体内的免疫原性更低或没有)。
下面结合具体实施例,进一步阐述本发明。应理解,这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件如Sambrook等人,分子克隆:实验室手册(New York:Cold Spring Harbor LaboratoryPress,1989)中所述的条件,或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1:cDNA基因的获得及对3T3细胞克隆形成的抑制作用
PP9457、PP9943、PP9974、PP10443、PP10472、PP11662、PP11741、PP12301、PP12616、PP12723、PP14356和PP14737是通过用常规方法构建人胎盘cDNA文库获得的。取3、6、10月龄的胎盘组织,用Trizol试剂(GIBCO BRL公司)按厂方说明书提取总RNA,用mRNA提纯试剂盒(Pharmacia公司)提取mRNA。用pCMV-script TMXR cDNA文库构建试剂盒(Stratagene公司)构建上述mRNA的cDNA文库。其中反转录酶改用MMLV-RT-Superscript II(GIBCO BRL),反转录反应在42℃进行。转化XL 10-Gold感受细胞,获得了1×106cfu/μg滴度的cDNA文库。第一轮随机挑取cDNA克隆,其后以高丰度cDNA克隆和已证明有抑癌细胞生长功能的cDNA克隆为探针,杂交筛选cDNA文库,挑取弱阳性及阴性克隆。用Qiagen 96孔板质粒抽提试剂盒,按厂家说明书进行质粒DNA的提取。质粒DNA和空载体同时转染3T3细胞系。100ngDNA酒精沉淀干燥后,加6μl H2O溶解,待转染。每份DNA样品中加0.74μl脂质体及9.3μl无血清培液,混匀后,室温放置10分钟。每管中加150μl无血清培液,均分加入3孔生长于96孔板的7721细胞中,37℃放置2小时,每孔再加50μl无血清培液,37℃24小时。每孔换100μl全培液,37℃24小时,换含G418的全培液100μl,37℃24-48小时,边观察,边换G418浓度不等的培液。约2-3次后,直到镜检细胞有克隆形成,计数。发现以上12个克隆有抑制3T3细胞克隆形成作用,结果如下表所示。cDNA克隆转染细胞(3T3)后的克隆形成情况
cDNA克隆名称 cDNA克隆数(三个重复) 空载体克隆数(三个重复)
    PP9457PP9943PP9974PP10443PP10472PP11662PP11741PP12301PP12616PP12723PP14356PP14737     2     5     114    15    1410    9     710    13    1512    13    1515    18    1314    19    157     5     814    17    114     8     716    19    1516    18    19     27    29    3027    29    3027    29    3027    29    3027    29    3027    29    3027    29    3027    29    3027    29    3027    29    3027    29    3027    29    30
对cDNA克隆采用双脱氧终止法,在ABI377 DNA自动测序仪上测定其一端近500bp的核苷酸序列。分析后,确定为新基因克隆,进行另一端测序,仍未获得全长cDNA序列,设计引物,再次进行测序,直到获得全长序列(SEQ ID NO:1、4、7、10、13、16、19、22、25、28、31、34)。
实施例2:从胎盘cDNA中PCR获得全长基因:
取3、6、10月龄的胎盘组织,用Trizol试剂(GIBCO BRL公司)按厂方说明书提取总RNA,用mRNA提纯试剂盒(Pharmacia公司)提取mRNA。用MMLV-RT-SuperscriptII(GIBCO BRL),反转录酶在42℃进行反转录反应,获得胎盘cDNA。利用各个基因的转异引物(如下表所示),按97℃3′1个循环;94℃30″→60℃30″→72℃1′,共35个循环;72℃10′,1个循环进行PCR扩增,获得含有完整开放阅读框序列的各蛋白基因的扩增产物。扩增产物经测序验证,与实施例1测得的序列相符,随后用常规技术将扩增产物转入宿主细胞,获得重组蛋白(SEQ ID NO:2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35)。
                             基因特异引物
克隆名称     特异引物1(5′→3′)     特异引物2(5′→3′)
    PP9457PP9943PP9974PP10443PP10472PP11662PP11741PP12301PP12616PP12723PP14356PP14737   CCCCACGTTCTCTCTCAGATGGTCGAGGCTTCAGTGAGTCGCAGCCCGACTAGCAGTCTAAGAGAGAGGACACCGAAGCCCTAGCTCCGCTTGGTGACAGGAGGTGTGGATCGAGGAGGCTAACCCAGCCCTCCGTGTTAAAAACAATGAGCTGGGCCCAAAGCACCCTCGAATTATGTGAAGCTACTGCCTTTGCCGAAGTTGCAGGGTACAAGGCGGTGGATGCAGAAACACAAG   GCTCAGGGAGGTGAAGTGACAAATTCCCAAATTCCCAAGGACAAGATGGAGAGCCACGACTTGGTGGAAAAACAAGAGGCTTCGATGCTTICTCAAGGCTGCCTGTTTTGACAGGTCGTTGCAGTCGTGCTTGTTGTCAATTTTATTTAGGCCGGGCACGAGGCGGATGGATTACTTGATTGTACATCTGGCCCACTGAGGCCCTCTATTTTATTCCACTGAGATCTGCCTCCAAAGCTGA
实施例3:cDNA克隆序列分析
1.PP9457
A:核苷酸序列(SEQ ID N0:1)长度:25541  GCTCTGACAG ATGGCCTATT GAGGTCAACT TGAATGTGAG GGCTACGGTG TGGTTTCAAA61  CATTCATGAT GGATGTATTT TCCTACCCCT AACTTAAGGA GAAAAAAAAA AAGACTTCCT121  TTTTTTTGCC AAAGTCCAGA AAGGGGCCTT TAGCCTTTAG TAGGAGCTCA AATTGTTGGG181  GCCCCTCTAC CTCTCTCAGG GCTAGAACTG CCTGACTCTT GGTGGACGAG CCCTTCAGGG241  TTCTGCTTTC AGCCCCACCT GGACAGAGGC TTACAAGACT AGGGTCTGGA CCAGAATCTG301  TGTATTTCTG TCTGGGACCA GGAAGCCGCA GCTGTCCCAT CATCCCCAGC AAATCCTAGA361  AGTGGAGTCT GGATACTTCA AGGATAGAAG TGTTGGCACG CACAGCCATG GACCCAGCTG421  AGCAGAGCAG ACGCTTTGCA GGCTGCCCCT GGCTTCTTCC TCCCTTTCCC GCTTCTGCTC481  TCTTTATGGA CTGGTCAGAG GGTAGGTGGG AAAGAACAGA CAAGCCATGG GAAGTTGGCA541  GTGGGGAGAT TTCCACTGTG GAAACCGCCT GGGAATTCCG GCCAGCAGCT TCCTCCTTCA601  GCCACCTGGC CATACCCCTT AAATAAGCCC CTCACCTTGC TGCCTCAGGA CCTTCAAGAT661  TCCATCTGTG GGCTGGCCGG CAAGATGGCA CCAGTGGGGA CCCACACCCT GGCTGGGCAG721  AGGTGCTGCT AGCAACCTCT CTTCCTCTAT AAGAGGAAAT GGAAAATGCA GGGTGTGGAA781  TTGCCCTTTG GGGTCCTTCC TTAATTGAAG GCCACCTTCT CACAGGTTTC ATTCTGCAGG841  GATTTACTGG AATCTATTGG TGCTGCTGCA TGAGTCTGCT GACAACCTGA CTGCACAAGG901  ACTGGGTAGC AGACTCCTCA GAGTCCTCTT GACACAAATG TCAGATTTGT GTCACTCTTC961  TGCCTTCGTG AAAAGCCAAT AGCACTCTCA GATATCAGGG GATTTTAGTT CCAAGCAGGG1021  ACCCTGGTTT CCATACTGCC CTCAGCTGGA GTTTGGATCC AAAGGCTCTG GCTAAGTCAT1081  TATGTCACTT TTTCACAGGA ATGTAAATTT GACTGTCACC TCTGAATTTG TTCAGTGTCC1141  CACCATGGTC TATGAGAAGT ACACTGGAAG CGTGGGGGGA ACACATGACA TGATTTGTGA1201  ATATCATCAT CTTTGCCAGA CAAGTCTCCA GGGGATCCCT GTTTCCCAAC TGAAAGGTGT1261  GAACGGACAC ACACACAGCC TGGATGACGC CTTGGCTGTT CTAAGGGGCT GTAAGGTGGG1321  CTCTGGGCCT TCCAGCTAGG CTCTCAAGCA CAGCAGAAGC CTCACTGGGC TGCTATGTCT1381  CTGTATTTGT GGCTTGTGTG GTAGCCTCAG AAGCAGAGCT GTTTGGCAGA CTGGCTGGAG1441  AAATTCCCTC TAGGAGACTT GCCTGTGCTG TGCTTCCAGG TCACAGAGCC CCCCGGAAAC1501  TCACAGGGGC CCTCTTCCCA GAAAAGAATC TATTCTATCA CTTCAGAATC AGGACACTCA1561  AGCTCTGGCA GAGGAAGGCC AAGTTACTTT CATGGTCTTA CCCTCTGCTT TTCCCCTTTT1621  TGCAAAAAAC CACTGGCCAA ATCCGAACCA TTGCCCTTGT TTCCCCCACG TTCTCTCTCA1681  GATCTTTGTC TCGAAGGGAA AACATAGTGG ATGAAAAGGT GTGGCAGGCT TTGGCACCTT1741  GTTAAAATTT CTAGTCATCT GTGGATGTTA CCTTGCTTGT CCACAGCAGC CAGTCACCCT1801  GGCCAGTCCC ACTTCCTGGA TAATTCTCTA CCCTCACCCC ACAGAGCCAT CTCTCTCCAG1861  ACCAAAAGCT GGAAGGAGAG TTGCTTTGAG AGCTTGTTTT TACAACTGCA TGTTTATTAT1921  GATACTTTCT CTCCAAAGGA AACTTTTAAA TCAATGGGAA CAATTAGCAA CAGAAAGAGC1981  ACAGTCCCTG CTTTTGACTG GGTTCCTATT TTAAGCACAA ATGAGAGCTC TGGAGCCAGA2041  ATGCCAGGGT TCTAACTTCA GCATTCACTT ACTAGCTGTA TGATCTTGGC CAAGTCACTT2101  CACCTCCCTG AGCCCCAATT CCCAAGTTTG TGAAATGGCA ACAATACCTA TGTGTCACTG2161  GATTATTGGT TAAAACAGAA TGAGATTCCT TGTGTGAAAA TAGCTATTAT ACCTGACACA2221  CTCATCGTAT GGGCTCTGCA AAGGGATATT CCCCAACCTG TCCTTCCTGA CAGGAAGCAT2281  AGGGCACTGC AGATGGGGAA GCATGTCACC TTGGCAGTGA CTCGGTGGCT TCCCAAGCAG2341  GAGTGTCAGG GGAACCATGA GAGAGAGTCT AGGAGCAAAC ACATCACCAC CCTGAGCAGA2401  TACAGGAGTG GGGAGGGGGC TGTAACTCAG TGAGTGGCTT CCAGGGGCCC CAGGCCCTGC2461  TGGATGTGGG CCAAGCCCTA CAGCTTCCCT AGGCAGTAAG TAAAAACATT CTCCTAGCAT2521  TAAAATGGTT TCCATAAAAA AAAAAAAAAA AAAAB:核苷酸序列(SEQ ID NO:2)长度:1141  MKRCGRLWHL VKISSHLWML PCLSTAASHP GQSHFLDNSL PSPHRAISLQ TKSWKESCFE61  SLFLQLHVYY DTFSPKETFK SMGTISNRKS TVPAFDWVPI LSTNESSGAR MPGFC.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO:3)     克隆号:PP9457起始编码子:1711 ATG  终止编码子:2053 TAA  蛋白质分子量:12942.19(注:(1)给出的是起始和终止编码子第一个核苷酸的位置,(2)分子量单位是道尔顿)1  GCT CTG ACA GAT GGC CTA TTG AGG TCA ACT TGA ATG TGA GGG CTA CGG      4849  TGT GGT TTC AAA CAT TCA TGA TGG ATG TAT TTT CCT ACC CCT AAC TTA      9697  AGG AGA AAA AAA AAA AGA CTT CCT TTT TTT TGC CAA AGT CCA GAA AGG      144 145  GGC CTT TAG CCT TTA GTA GGA GCT CAA ATT GTT GGG GCC CCT CTA CCT     192193  CTC TCA GGG CTA GAA CTG CCT GAC TCT TGG TGG ACG AGC CCT TCA GGG     240241  TTC TGC TTT CAG CCC CAC CTG GAC AGA GGC TTA CAA GAC TAG GGT CTG     288289  GAC CAG AAT CTG TGT ATT TCT GTC TGG GAC CAG GAA GCC GCA GCT GTC     336337  CCA TCA TCC CCA GCA AAT CCT AGA AGT GGA GTC TGG ATA CTT CAA GGA     384385  TAG AAG TGT TGG CAC GCA CAG CCA TGG ACC CAG CTG AGC AGA GCA GAC     432433  GCT TTG CAG GCT GCC CCT GGC TTC TTC CTC CCT TTC CCG CTT CTG CTC     480481  TCT TTA TGG ACT GGT CAG AGG GTA GGT GGG AAA GAA CAG ACA AGC CAT     528529  GGG AAG TTG GCA GTG GGG AGA TTT CCA CTG TGG AAA CCG CCT GGG AAT     576577  TCC GGC CAG CAG CTT CCT CCT TCA GCC ACC TGG CCA TAC CCC TTA AAT     624625  AAG CCC CTC ACC TTG CTG CCT CAG GAC CTT CAA GAT TCC ATC TGT GGG     672673  CTG GCC GGC AAG ATG GCA CCA GTG GGG ACC CAC ACC CTG GCT GGG CAG     720721  AGG TGC TGC TAG CAA CCT CTC TTC CTC TAT AAG AGG AAA TGG AAA ATG     768769  CAG GGT GTG GAA TTG CCC TTT GGG GTC CTT CCT TAA TTG AAG GCC ACC     816817  TTC TCA CAG GTT TCA TTC TGC AGG GAT TTA CTG GAA TCT ATT GGT GCT     864865  GCT GCA TGA GTC TGC TGA CAA CCT GAC TGC ACA AGG ACT GGG TAG CAG     912913  ACT CCT CAG AGT CCT CTT GAC ACA AAT GTC AGA TTT GTG TCA CTC TTC     960961  TGC CTT CGT GAA AAG CCA ATA GCA CTC TCA GAT ATC AGG GGA TTT TAG    10081009  TTC CAA GCA GGG ACC CTG GTT TCC ATA CTG CCC TCA GCT GGA GTT TGG    10561057  ATC CAA AGG CTC TGG CTA AGT CAT TAT GTC ACT TTT TCA CAG GAA TGT    11041105  AAA TTT GAC TGT CAC CTC TGA ATT TGT TCA GTG TCC CAC CAT GGT CTA    11521153  TGA GAA GTA CAC TGG AAG CGT GGG CGG AAC ACA TGA CAT GAT TTG TGA    12001201  ATA TCA TCA TCT TTG CCA GAC AAG TCT CCA GGG GAT CCC TGT TTC CCA    12481249  ACT GAA AGG TGT GAA CGG ACA CAC ACA CAG CCT GGA TGA CGC CTT GGC    12961297  TGT TCT AAG GGG CTG TAA GGT GGG CTC TGG GCC TTC CAG CTA GGC TCT    13441345  CAA GCA CAG CAG AAG CCT CAC TGG GCT GCT ATG TCT CTG TAT TTG TGG    13921393  CTT GTG TGG TAG CCT CAG AAG CAG AGC TGT TTG GCA GAC TGG CTG GAG    14401441  AAA TTC CCT CTA GGA GAC TTG CCT GTG CTG TGC TTC CAG GTC ACA GAG    14881489  CCC CCC GGA AAC TCA CAG GGG CCC TCT TCC CAG AAA AGA ATC TAT TCT    15361537  ATC ACT TCA GAA TCA GGA CAC TCA AGC TCT GGC AGA GGA AGG CCA AGT    15841585  TAC TTT CAT GGT CTT ACC CTC TGC TTT TCC CCT TTT TGC AAA AAA CCA    16321633  CTG GCC AAA TCC GAA CCA TTG CCC TTG TTT CCC CCA CGT TCT CTC TCA    16801681  GAT CTT TGT CTC GAA GGG AAA ACA TAG TGG ATG AAA AGG TGT GGC AGG    17281                                          Met Lys Arg Cys Gly Arg       61729  CTT TGG CAC CTT GTT AAA ATT TCT AGT CAT CTG TGG ATG TTA CCT TGC    17767  Leu Trp His Leu Val Lys Ile Ser Ser His Leu Trp Met Leu Pro Cys      221777  TTG TCC ACA GCA GCC AGT CAC CCT GGC CAG TCC CAC TTC CTG GAT AAT    182423  Leu Ser Thr Ala Ala Ser His Pro Gly Gln Ser His Phe Leu Asp Asn      381825  TCT CTA CCC TCA CCC CAC AGA GCC ATC TCT CTC CAG ACC AAA AGC TGG    187239  Ser Leu Pro Ser Pro His Arg Ala Ile Ser Leu Gln Thr Lys Ser Trp      541873  AAG GAG AGT TGC TTT GAG AGC TTG TTT TTA CAA CTG CAT GTT TAT TAT    192055  Lys Glu Ser Cys Phe Glu Ser Leu Phe Leu Gln Leu His Val Tyr Tyr      701921  GAT ACT TTC TCT CCA AAG GAA ACT TTT AAA TCA ATG GGA ACA ATT AGC    196871  Asp Thr Phe Ser Pro Lys Glu Thr Phe Lys Ser Met Gly Thr Ile Ser      861969  AAC AGA AAG AGC ACA GTC CCT GCT TTT GAC TGG GTT CCT ATT TTA AGC    201687  Asn Arg Lys Ser Thr Val Pro Ala Phe Asp Trp Val Pro Ile Leu Ser     1022017  ACA AAT GAG AGC TCT GGA GCC AGA ATG CCA GGG TTC TAA CTT CAG CAT    2064103  Thr Asn Glu Ser Ser Gly Ala Arg Met Pro Gly Phe ***                 1152065  TCA CTT ACT AGC TGT ATG ATC TTG GCC AAG TCA CTT CAC CTC CCT GAG    21122113  CCC CAA TTC CCA AGT TTG TGA AAT GGC AAC AAT ACC TAT GTG TCA CTG    21602161  GAT TAT TGG TTA AAA CAG AAT GAG ATT CCT TGT GTG AAA ATA GCT ATT    22082209  ATA CCT GAC ACA CTC ATC GTA TGG GCT CTG CAA AGG GAT ATT CCC CAA    22562257  CCT GTC CTT CCT GAC AGG AAG CAT AGG GCA CTG CAG ATG GGG AAG CAT    23042305  GTC ACC TTG GCA GTG ACT CGG TGG CTT CCC AAG CAG GAG TGT CAG GGG    23522353  AAC CAT GAG AGA GAG TCT AGG AGC AAA CAC ATC ACC ACC CTG AGC AGA    24002401  TAC AGG AGT GGG GAG GGG GCT GTA ACT CAG TGA GTG GCT TCC AGG GGC    24482449  CCC AGG CCC TGC TGG ATG TGG GCC AAG CCC TAC AGC TTC CCT AGG CAG    24962497  TAA GTA AAA ACA TTC TCC TAG CAT TAA AAT GGT TTC CAT AAA AAA AAA    25442545  AAA AAA AAA A                                                      25542.PP9943A:核苷酸序列(SEQ ID NO:4)长度:20391  GCTGAAAATA AAATCAGGCC TGTGTGCTGG GCCTGGCCTG TAGTAAGTAC TTCCCAACCC61  CTTCTCTTGA CCCACAAATG TTGATGGAGC CCTTCTGTGC CAGGCCCTGA GCTGGGCTGA121  GGAGGCAGTG AGAGGCAGCT GACATTGTCC TTTCGTGGGA GAAGAGTTCA CTCAGGCTTC181  TTTCCACTGC GTTAACCCAG CCCGAGGGAG CCAAACCCCT GGAATCTATT CCCCTTGGCA241  AGAACTCCCA GGGTTCCAGG CAGGACTGAC CCCGCACTCC GAGGCATCAG GCCCAGAGCA301  CTTGGCTGAT CCAGGTGCCA TCCTTCCCGA AACACCACCC ACAGGCAGAA AAGAGCCAAA361  CAGGCCAGGA AACCTGTCCC AGATTCTGGC TTCCAGCTGT GGAGGGAATA GCCAGGGCTG421  GTGCAGATGA GTCGGGAAAC CCAGCAGAGA TGGAGGGGGG AGTCTTCGTC ATAACACGTG481  GCACTGGCAC ATTCAAGGTC GGTTAGCATG GATCAGACAG GATCGTAGCA TGATGAGGGG541  TTAGCACAAG GACTAGAGTG GTTCTCAGCC CTGGCTGTAC ATGAGATTTG CCTGGGCAAC601  TCGAAAACTC CGGTGGCTGG GCCATAGACT CCTGAAGTCA GGCTCTCAGG AGCAGAAGGG661  CCATCAGTCA TCGTTTAAGC TCCTCGGGTG CTCCCAATGC ATAGTCAAGG TTGAGAGCTA721  CTGGCCTGGA GCCGTGCCTG GTAACAGTAG GTGCCACCTG CGTGTTAGAT GTGGTTTATA781  ATGGAGACAC GGTGCACAGC TGCTCCAGAG AGACACATCT GGGCAGTTAC AGTCCAGCAC841  AGCAGTGGAG GCTTCCCGCG GCAGCAGGAG AGCCCACAGG AAGCTTTCAG CTCAGTGAAG901  GGAGTCAAGG TCAGGCTTCT TGGAAGGAGG TTGGACAGGG CAGCTTTGGC CTCTGAGTCT961  TGGGGGCCTC CCCATGTGGA ACTGTGCTCT TAAACCAGGG CATCACCACC TCAACAGATG1021  CCAGGGTTTC CTGGTAAATG TAAAATACAC AAGTCAGGCA GGGCACAGGG GCCCACCCCT1081  GTAATTTCAG CACTTTGGGA GGACAAGGCA GGAGGATTGT TAGAGGTCAG GAGTTTGAGA1141  CCAACCTGGG CAATATAATG ATACCCCCCA TCTCTACAAA AAATAAAAAA ATTAGCCAGG1201  CATGGTGATG TGGGAGGATT GTTTGAGCTC AAGTGGTCGA GGCTTCAGTG AGTCATGGTT1261  GCGCCACTGC AGTCCAGCCT GGGCAACAGA GCGAGACCCC GTCTCTATAA AATAAAACAT1321  GCAAATCACT GTCCAGCCAA CACCCCAGTC CAGATCCCTG CATTCGATCC AAGGGAGGCA1381  GACTGCTGGG GGAAATTGAG AGTCCTCGAG GTGCCCCTGG CAGTGAGCGG CCAGAAAGAG1441  AAGCAGGAAG GCGCCAGCAT CACGAGGAAC TGCTTCCCTC AAAGTGCTGG GATTACAGGT1501  GTGAGCCACC GCGCCAGGCC TCAGCCCACT TCTTTTGGGT GGCAATGGTT TGGATATCGT1561  TTGTCCTCAC TAAAATTCAT GTTGAGATTC GAGCCCCAGT GTGGCAGGTG TTGGGATGTG1621  GGGCCTCATA GGAGCTGTGT GGTCTTGGAG GTGGAGTCCT CATGGATAGA TTAATGCCTG1681  CCTTAAGGGG TGAGTGAGTG CTCACCCTTG GGAATTTGGG AATTTGGTTT TCTCTCCCTT1741  GCTTCCTTCA GCACCATGTG ATCTCTGTGC ACACAGCTGC ATCCTTCTGC CCTCCCCCAG1801  AAGCAGCAGC AGCCTCAGGG ATGAGGGAGG TCCTCAGTGA GTGCACCTGC CCAGTCTTGA1861  ACCTTCCAGC CATCAGAATC TGAGCCAAAT CAACCTCTTC CTTTTATAAA GACCCAGCCT1921  CAGGTCTTCT GTCAGAGCAA CACAAAATGG ACTCAGCACG GATCAAATTG TGTCTCCCCC1981  ACCCCCACAA AAAACTTTAT ATTAAAATCC TAACCCCCAG CAAAAAAAAA AAAAAAAAAB:核苷酸序列(SEQ ID NO:5)长度:1391   MVAPLQSSLG NRARPRLYKI KHANHCPANT PVQIPAFDPR EADCWGKLRV LEVPLAVSGQ61  KEKQEGASIT RNCFPQSAGI TGVSHRARPQ PTSFGWQWFG YRLSSLKFML RFEPQCGRCW121  DVGPHRSCVV LEVESSWIDC.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO:6)    克隆号:PP9943起始编码子:1255 ATG  终止编码子:1672 TAA  蛋白质分子量:15661.181  GCT GAA AAT AAA ATC AGG CCT GTG TGC TGG GCC TGG CCT GTA GTA AGT      4849  ACT TCC CAA CCC CTT CTC TTG ACC CAC AAA TGT TGA TGG AGC CCT TCT      9697  GTG CCA GGC CCT GAG CTG GGC TGA GGA GGC AGT GAG AGG CAG CTG ACA     144145  TTG TCC TTT CGT GGG AGA AGA GTT CAC TCA GGC TTC TTT CCA CTG CGT     192193  TAA CCC AGC CCG AGG GAG CCA AAC CCC TGG AAT CTA TTC CCC TTG GCA     240241  AGA ACT CCC AGG GTT CCA GGC AGG ACT GAC CCC GCA CTC CGA GGC ATC     288289  AGG CCC AGA GCA CTT GGC TGA TCC AGG TGC CAT CCT TCC CGA AAC ACC     336337  ACC CAC AGG CAG AAA AGA GCC AAA CAG GCC AGG AAA CCT GTC CCA GAT     384385  TCT GGC TTC CAG CTG TGG AGG GAA TAG CCA GGG CTG GTG CAG ATG AGT     432 433  CGG GAA ACC CAG CAG AGA TGG AGG GGG GAG TCT TCG TCA TAA CAC GTG     480481  GCA CTG GCA CAT TCA AGG TCG GTT AGC ATG GAT CAG ACA GGA TCG TAG     528529  CAT GAT GAG GGG TTA GCA CAA GGA CTA GAG TGG TTC TCA GCC CTG GCT     576577  GTA CAT GAG ATT TGC CTG GGC AAC TCG AAA ACT CCG GTG GCT GGG CCA     624625  TAG ACT CCT GAA GTC AGG CTC TCA GGA GCA GAA GGG CCA TCA GTC ATC     672673  GTT TAA GCT CCT CGG GTG CTC CCA ATG CAT AGT CAA GGT TGA GAG CTA     720721  CTG GCC TGG AGC CGT GCC TGG TAA CAG TAG GTG CCA CCT GCG TGT TAG     768769  ATG TGG TTT ATA ATG GAG ACA CGG TGC ACA GCT GCT CCA GAG AGA CAC     816817  ATC TGG GCA GTT ACA GTC CAG CAC AGC AGT GGA GGC TTC CCG CGG CAG     864865  CAG GAG AGC CCA CAG GAA GCT TTC AGC TCA GTG AAG GGA GTC AAG GTC     912913  AGG CTT CTT GGA AGG AGG TTG GAC AGG GCA GCT TTG GCC TCT GAG TCT     960961  TGG GGG CCT CCC CAT GTG GAA CTG TGC TCT TAA ACC AGG GCA TCA CCA    10081009  CCT CAA CAG ATG CCA GGG TTT CCT GGT AAA TGT AAA ATA CAC AAG TCA    10561057  GGC AGG GCA CAG GGG CCC ACC CCT GTA ATT TCA GCA CTT TGG GAG GAC    11041105  AAG GCA GGA GGA TTG TTA GAG GTC AGG AGT TTG AGA CCA ACC TGG GCA    11521153  ATA TAA TGA TAC CCC CCA TCT CTA CAA AAA ATA AAA AAA TTA GCC AGG    12001201  CAT GGT GAT GTG GGA GGA TTG TTT GAG CTC AAG TGG TCG AGG CTT CAG    12481249  TGA GTC ATG GTT GCG CCA CTG CAG TCC AGC CTG GGC AAC AGA GCG AGA    12961          Met Val Ala Pro Leu Gln Ser Ser Leu Gly Asn Arg Ala Arg      141297  CCC CGT CTC TAT AAA ATA AAA CAT GCA AAT CAC TGT CCA GCC AAC ACC    134415  Pro Arg Leu Tyr Lys Ile Lys His Ala Asn His Cys Pro Ala Asn Thr      301345  CCA GTC CAG ATC CCT GCA TTC GAT CCA AGG GAG GCA GAC TGC TGG GGG    139231  Pro Val Gln Ile Pro Ala Phe Asp Pro Arg Glu Ala Asp Cys Trp Gly      461393  AAA TTG AGA GTC CTC GAG GTG CCC CTG GCA GTG AGC GGC CAG AAA GAG    144047  Lys Leu Arg Val Leu Glu Val Pro Leu Ala Val Ser Gly Gln Lys Glu      621441  AAG CAG GAA GGC GCC AGC ATC ACG AGG AAC TGC TTC CCT CAA AGT GCT    148863  Lys Gln Glu Gly Ala Ser Ile Thr Arg Asn Cys Phe Pro Gln Ser Ala      781489  GGG ATT ACA GGT GTG AGC CAC CGC GCC AGG CCT CAG CCC ACT TCT TTT    153679  Gly Ile Thr Gly Val Ser His Arg Ala Arg Pro Gln Pro Thr Ser Phe      941537  GGG TGG CAA TGG TTT GGA TAT CGT TTG TCC TCA CTA AAA TTC ATG TTG    158495  Gly Trp Gln Trp Phe Gly Tyr Arg Leu Ser Ser Leu Lys Phe Met Leu     1101585  AGA TTC GAG CCC CAG TGT GGC AGG TGT TGG GAT GTG GGG CCT CAT AGG    1632111  Arg Phe Glu Pro Gln Cys Gly Arg Cys Trp Asp Val Gly Pro His Arg     1261633  AGC TGT GTG GTC TTG GAG GTG GAG TCC TCA TGG ATA GAT TAA TGC CTG    1680127  Ser Cys Val Val Leu Glu Val Glu Ser Ser Trp Ile Asp ***             1401681  CCT TAA GGG GTG AGT GAG TGC TCA CCC TTG GGA ATT TGG GAA TTT GGT    17281729  TTT CTC TCC CTT GCT TCC TTC AGC ACC ATG TGA TCT CTG TGC ACA CAG    17761777  CTG CAT CCT TCT GCC CTC CCC CAG AAG CAG CAG CAG CCT CAG GGA TGA    18241825  GGG AGG TCC TCA GTG AGT GCA CCT GCC CAG TCT TGA ACC TTC CAG CCA    18721873  TCA GAA TCT GAG CCA AAT CAA CCT CTT CCT TTT ATA AAG ACC CAG CCT    19201921  CAG GTC TTC TGT CAG AGC AAC ACA AAA TGG ACT CAG CAC GGA TCA AAT    19681969  TGT GTC TCC CCC ACC CCC ACA AAA AAC TTT ATA TTA AAA TCC TAA CCC    20162017  CCA GCA AAA AAA AAA AAA AAA AA                                     20393.PP9974A:核苷酸序列(SEQ ID NO:7)长度:26301  GGCGAACACA GCACACACGA ACACAGCACA CACAGCACAC ACACAAACAC AGCACACACA61  TGCACACAGC ACATGCACAC ACAGCACACA CATGAACACA GCACACAGCA CACACATGCA121  CACAGCACAC ACGCATGCAC AGCACACATG AACACAGCAC ACACAAACAC ACAGCACACA181  CATGCACACA CAGCACACAC ACTCATGCGC A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 CCA GAG AGG ACC CTG GGC TGC      4849  CTG GAC AGT CAG GAC CTG GCT GTG GCC GAT GGC CAC CAA CAC TCA GAT      9697  CCG GCC GGA GGG ACA CAA AGG GAG ATG GGA GCG AGG TCA AGG GGC TCA     144145  CAG GGG AGG AAC GTG AGA TGC GGG AGG AAT CAC GCA CAC CAG CAG GTG     192193  CCG GCA TTT CTA AAG GCG CCT GGG CAG CCT GGC TCA TCC ACC CTC AGG     240241  AGC GAG CAT CGC CTG ACA CAG GGC ACT TAG TGT CCA CCA CCA AGT ACC     288289  CTG TTG TCC CCA CCA ACC CCA AGA CAC AAG AAG TCA CCC CAG AGC CAG     336337  CCC CAG AGC GCT GGG AGG GGG GCA CTC ACC CGT GTG TGA GGT AGG GGT     384385  GAG GGG TGT GGG GGG AGC CAC TTC CTG CGT CCC CCG CAG GCG GCC GGA     432433  GGC TGT GGA AGG GAG GCC GCG GGT AGC CGG GTT CCG CGA GTG TCT CAG     480481  CCG CTC CTC TCG GTC CCT GCG CTC CCG CTC GGC GTC ATC GGC GGC CCG     528529  GCT GGC ACC CTG AGG AGG CAG GAG GTG AGG CCG GAA TGG AAC CAG CTT     576577  TGG CAG AAA GCA ACC CTA GGT CCT AGG CTG CCC CGG CCA CGT GAG AAA     624625  ATA CCT ACC AAA GGG CAC TGG GAC GAG ACT TTT GCC TGC AAA GCC CCC     672673  CAC AGG CTG CAC GTT TCT CCT CAT GGG ATG ACA GCA TCA TCC CCA CAA     720721  GGG GTC AGA GCC AGG CCT CTC AGC TCC CCC AAC AAT CGA AAA AAC CCC     768769  ACT CGC CAT GGC ATC TCC CTG TGG GCT CAG AAC TTC CTT AAA CTT CCA     816817  AAT GGG CAG CAG CTA CCC CCT GCT GCT CTG TGA ACA TGC TCA CTA ACA     864865  CGT GCA GAA AGA GGA GAG GGA CAG GAA CCA TCG GAG GCC AAA GAC AGG     912913  CCC CAA ATG GTG ACA GCT GGG GAG GAA AGC GGG GTG GGG ATG AGA GCG     960961  TTT GGT CGG ACG AGG AGT ACA CTC AGG GTC CGG ACC CTG CAG CCT CCA    10081009  ACA GCC TGT GCA GGT GTG GTG GCG TGG CCA GCA GCC GGC AGC CGG ATC    10561057  TGT GCT GCA CTA TCC AGA TGC ACG GGG GTG GGG AGG TCA GAT TTT AAG    11041105  CCG AGA CAG CAA CCT ATG AAA AAG CAG ATT CTA ACT GCC AAT GCT GTG    11521153  CGG CAG GGG CCT GCA AAC TAC AGC CCC GGG GCC AAA CCC AGG TGC CAC    12001201  TTC TTC CTG CAA GTA CAG CTC ATT GGA CAC AGC CAC GTT CAC CAG GCA    12481249  ACA CAC AGA CCG ACA CAC CTG CGG CTG CAG CAC CGT GCG GCC AGC ACC    12961297  GCC CAG ACT CCT CAT GCT GCC ATT TAC GGA AAA CGC TGG CCT AGC CTG    13441345  CTC TGA GGG CCG GGT GAC TCT AAT GCC GCA GGA GGG TCG CTC TGA TTC    13921393  CTC CCG AGG CAG CAC AGC CCC GGC AGA GGG ACT GAT CTG CCC TGC CGA    14401441  GTG CAC CCC TCC CGG CAC CTG GGC CCC GAG GCT CGG GCC TGC CTC GCC    14881489  TGC CAT CTC TCC GGT GCC TCC AAG TAC TCC CCA CGC TGA TGG GCA CTT    15361537  GGC AAG TAA GTC AAG ATG AAC AGA GTG CAC CCC TCC CAG CAT CTG GAG    15841585  ACC CCG CCC CTC CCT GGC CCC TGC ACG ACT ACT GGA CAA GGC TGC CGT    16321633  TTT TGT ACC CTC CCA AGA GGC AGT TCT GCT CCT CCA TCA GAC TGC TGC    16801681  CTG GAA AAG CTC CAA ATT CTA TTT AAA ACT GAC AAC AAA ACA GTA AGT    17281729  TTT TAA TGA AGG AAC ACA ACA GTT CCA CAG GAG CTT CAT TTC TGA CAG    17761777  CGG TGT CTG AAA AGT AAT TCA GCT CAG ACA TGG ACC CAG GGC TGG GCT    18241825  GCC TGT TTT TAG AGG CTC CAC TGC ATA CTT CAC ACC GCA TCA AGA AAG    18721873  CCA CAG GGA AAA TCA GCT CAT GAC AGG GTC AGT CAG GCT AGA CGG GTA    19201921  GCA CCT CAC CAG GCC CCA ACC CCA CTC ATC TCG TGG GCA CCA CGA CCA    19681969  TGT GGC ACA GCG AAT GGG AAT GCG CAC CCC CAG CCC CCA CCC TCT GCC    20162017  CCC AGG GCA TGC TCT GGG CCC TAG CTC CGC TTG GTG ACA GGG AGG GAA    20642065  GGG GCC TCC TGC TGT CCA CAC CCA GGA ATT CCA TGG ACC CCT CTG CGT    21122113  TCC CTA ATG GCG TCT TAC TTC TTG GCA CCC CTT TCT GGC AGG CAG ACA    21601          Met Ala Ser Tyr Phe Leu Ala Pro Leu Ser Gly Arg Gln Thr      142161  CCC ACT CAG TCC AGG TCC TTG CCC ACT ACA CAC TTG CCC TTC ACA ACC    220815  Pro Thr Gln Ser Arg Ser Leu Pro Thr Thr His Leu Pro Phe Thr Thr      302209  AGA GAC ACT CCC TAT ATG GTA CAG CCC CTC AAC AAG ACG GCC GCC GGC    225631  Arg Asp Thr Pro Tyr Met Val Gln Pro Leu Asn Lys Thr Ala Ala Gly      462257  CTC TCA CTG ACA AGC CAT CCC CCG CAC ACC ACA CTC AGC GAA CGT GCT    230447  Leu Ser Leu Thr Ser His Pro Pro His Thr Thr Leu Ser Glu Arg Ala      622305  GGC AGT GCG ACT TAC AAA TTT GAG CAT GTT CCA GTC GAA CAC GTA GTC    2352  63  Gly Ser Ala Thr Tyr Lys Phe Glu His Val Pro Val Glu His Val Val      782353  ATA GGA GAA GCC CTG GCG ATG GAA CAG ATT CCG GAA AAG CTG CCG CAG    240079  Ile Gly Glu Ala Leu Ala Met Glu Gln Ile Pro Glu Lys Leu Pro Gln      942401  GTA CGA GTA GTC AGG CTT GTC GTC AAA ACG CAA GGA ACG GCA GAA ATT    244895  Val Arg Val Val Arg Leu Val Val Lys Thr Gln Gly Thr Ala Glu Ile     1102449  CAG GTA TGT GGC AAA TTC GGC TAC AAA ACA AGA AAC TCA AAG CTA ACT    2496111  Gln Val Cys Gly Lys Phe Gly Tyr Lys Thr Arg Asn Ser Lys Leu Thr     1262497  CAT GAA ACC CAA CTG CGA CTC AAG GTG TCT CTG CCA ACG TCG CTG TCT    2544127  His Glu Thr Gln Leu Arg Leu Lys Val Ser Leu Pro Thr Ser Leu Ser     1422545  ACC TCC TGC TGC TGC ACA CTC AAG GGG AGA AGG ACA GAT GCA AAA CAC    2592143  Thr Ser Cys Cys Cys Thr Leu Lys Gly Arg Arg Thr Asp Ala Lys His     1582593  CTG TCA GAT TTC TAA GAC CTG AAG CCT TGA GAA AGC ATC GAA AAG TAT    2640159  Leu Ser Asp Phe ***                                                 1632641  TCA AGT CAC GGC CGG GTG CGG CGG CTC ACG CCT GTC ACC CCA GCA CTC    26882689  TAG GAG GCT GAG GAG GGC GGA TCA CGA GGT CAG GAG ATC AAG ACC ATC    27362737  CTG GCT AAC ACA GTG AAA CCC CAT CTC TAC TGA AAA AAA AAA AAA AAA    27842785  AAA                                                                27876. PP11662A:核苷酸序列(SEQ ID NO:16)长度:2067
1  GTGGAAAATG GGCATCTCTC CCTCCCATGT TAAGCTTTAA CCTCTGTAAT CTGCCTGTAT61  CTATAGGTGG GCATCTCACT CCATCAAAGG AGCCCAGCCT CTCTTTGTCC CTCTATCCAT121  GCAACAGTCT TCTCTGTGCA TTTCCCCAAG CTGGGCCCTC TTCTACTCTC CATTTAGGCC181  TGTTGATAAC TCCATTACCC ACCCATCACT GCTGTTCCTC CAGGGCCAGC ACTCGGGCGA241   GGCAGGGGAG CTGCCTTCGG TACATAATTT GAAGGGGCAC TCCCTCTTGG GCACATGCCG301   GCCCTGAGTG CCTCCCTTGC CTCACTCTGA TCCCAGCCCC ATAATGTCCT CAGTGGAAGG361   TGACTGGGGG CCGGTGCTGT GGGGAGAGTA GAAAGAGGGG TTGGCATGAC TAAAAATACC421   AGTATGTGTA TTAAGTATTT TGAGAATGAA ATGCCAAGGA GTGCCTACTG TATGCCAGCT481   CTGCTCTAGG AATGGAGTAG ACAGTGGACA CAAGAAGGAC TTACGCCCTG AGCACAGGTG541   CCAACAGTGA CAAGACTGGC AAGACGTGAG GGCATGAATG GTTCATTCAG GCAGCTGCTG601   CAGGTGTGGT CACCTGGTGC CATCTGCTGC TCCCTTTTCC ACTTTTCTAT GTCCTCCTTC661   CACCCCAAGT CCCGGATCAC TCGCTGTTTT CTGGCTAGCT CTTGGCATCT CCATCTGAGC721   CTAAAGTTGC CCACTGGCAC CAATAGATTC TGTTTGACCT GCTGTGCCCA TGCTCATCTT781   TGTCGGGGCT TGGCTTGGCA GCGAGTGAGG CTGGCATGGG GTGCTGAAGT GGGGTCTCAG841   TGAGGGGTGA CAGCGTGCTG GCAGTCCTCA CAGCCCTCGC TCGCTCTCGG CGCCTCCTCT901   GCCTGGGCTC CCACTTTGGC GGCACTTGAG GAGCCCTTCA GCCCACCGCT GCACTGTGGG961   GAGCCCCTTT CTGGGCTGGC CAAGGCCAGA GCAGGCTCCC TCAGCTTGCA GGGAGGTGTG1021   GATCGAGGAG GCGCGAAGCG GGAACCGGGG CTGCGTGCAG CGCTTGCGGG CCAGCTGGAG1081   TTCCGGGTGG GCATGGGGCT TGGCGGGCCT GCACTCGGAG CAGCCGGCCG GCCCTTCCGG1141   CCCCGGGCAG TGAGGGACTT GGCACCCGGG CCAGCGGGCT GCAGAGGGTG TACTGGGTCC1201   CCCAGCAGTG CCGGCCCACC TGCGCTGTGC TTGATTTCTC GCTGGGCCTT AGCTGCCTTC1261   CCGCGGGGCA GGGCTCGGGA CCTGCAGCCC GCCGTGCCTG AGCCTCCCAC CCGCTCCATG1321   GGCTCCTGTG GGGCCCGAGC CTCCCCGACG AGTACCACCC CCTGCTCCAG GGCGCCCAGT1381   CCCATCGACC ACCCAAGGGC TGAGGAGTGC GAGCGCACGG CGCGGGACTG GCAGGCAGCT1441   CCACCTGCAG CCCCGGTGCG GGATCCACTA GGTGAAGCCA GCTGGGCTCC TGAGTCTGAT1501   GGGGACGTGG AGAGTCCTTA TGTCCTGCTC AGGGATTGTA AACACACCAA TCAGCACCCT1561   GTGTTTAGCT CAAGGTTTGT GAGTGCACCA GTCGACACTC TGTATCTAGC TGCTCTGGTG1621   GGGCCTCGGA GAACCTTTAT ATCTAGCTCA GGGATTGTAA ATACACCCAT CGGCACTGTG1681   TATCTAGCTC AAGGTTTATA AACACACCAA TCAACACCCT GTGTCTAGCT CAGGGTTTGT1741   GAGTGCACCA ATCAACACTC TGTATCTAGC TGCTCTGGTG GGGCCTTGGA GAACCTGTGT1801   GTCGAAACTC TGTATCTAAC TAATCTGATG GGGACGTGGA GAACCTTTGT ATCTAGCTCA1861   GGGATTGTAA ACGCACCAAT CAACGACCTG TCAAAACAGG CCACTCGGCT CTACCAATCA1921   GCAGGATGTG GGTGGGGCCA GATAAGAGAA TAAAAGCAGG CTGCCCGAGC CAGCATTGGC1981   AACTCGCTCG GGTCCCCTTC CACGCTGTGG GAGCTTTGTT CTTTGCAATA AATCTTGCTA2041   CTGCTCAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAB:核苷酸序列(SEQ ID NO:17)长度:2021 MGLGGPALGA AGRPFRPRAV RDLAPGPAGC RGCTGSPSSA GPPALCLISR WALAAFPRGR61 ARDLQPAVPE PPTRSMGSCG ARASPTSTTP CSRAPSPIDH PRAEECERTA RDWQAAPPAA121 PVRDPLGEAS WAPESDGDVE SPYVLLRDCK HTNQHPVFSS RFVSAPVDTL YLAALVGPRR181 TFISSSGIVN TPIGTVYLAQ GLC.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO:18)  克隆号:PP11662起始编码子:1093 ATG  终止编码子:1699 TAA 蛋白质分子量:21042.591  GTG GAA AAT GGG CAT CTC TCC CTC CCA TGT TAA GCT TTA ACC TCT GTA      4849  ATC TGC CTG TAT CTA TAG GTG GGC ATC TCA CTC CAT CAA AGG AGC CCA      9697  GCC TCT CTT TGT CCC TCT ATC CAT GCA ACA GTC TTC TCT GTG CAT TTC     144145  CCC AAG CTG GGC CCT CTT CTA CTC TCC ATT TAG GCC TGT TGA TAA CTC     192193  CAT TAC CCA CCC ATC ACT GCT GTT CCT CCA GGG CCA GCA CTC GGG CGA     240241  GGC AGG GGA GCT GCC TTC GGT ACA TAA TTT GAA GGG GCA CTC CCT CTT     288289  GGG CAC ATG CCG GCC CTG AGT GCC TCC CTT GCC TCA CTC TGA TCC CAG     336337  CCC CAT AAT GTC CTC AGT GGA AGG TGA CTG GGG GCC GGT GCT GTG GGG     384385  AGA GTA GAA AGA GGG GTT GGC ATG ACT AAA AAT ACC AGT ATG TGT ATT     432433  AAG TAT TTT GAG AAT GAA ATG CCA AGG AGT GCC TAC TGT ATG CCA GCT     480481  CTG CTC TAG GAA TGG AGT AGA CAG TGG ACA CAA GAA GGA CTT ACG CCC     528529  TGA GCA CAG GTG CCA ACA GTG ACA AGA CTG GCA AGA CGT GAG GGC ATG     576577  AAT GGT TCA TTC AGG CAG CTG CTG CAG GTG TGG TCA CCT GGT GCC ATC     624625  TGC TGC TCC CTT TTC CAC TTT TCT ATG TCC TCC TTC CAC CCC AAG TCC     672673  CGG ATC ACT CGC TGT TTT CTG GCT AGC TCT TGG CAT CTC CAT CTG AGC     720721  CTA AAG TTG CCC ACT GGC ACC AAT AGA TTC TGT TTG ACC TGC TGT GCC     768769  CAT GCT CAT CTT TGT CGG GGC TTG GCT TGG CAG CGA GTG AGG CTG GCA     816817  TGG GGT GCT GAA GTG GGG TCT CAG TGA GGG GTG ACA GCG TGC TGG CAG     854865  TCC TCA CAG CCC TCG CTC GCT CTC GGC GCC TCC TCT GCC TGG GCT CCC     912913  ACT TTG GCG GCA CTT GAG GAG CCC TTC AGC CCA CCG CTG CAC TGT GGG     960961  GAG CCC CTT TCT GGG CTG GCC AAG GCC AGA GCA GGC TCC CTC AGC TTG    10081009  CAG GGA GGT GTG GAT CGA GGA GGC GCG AAG CGG GAA CCG GGG CTG CGT    10561057  GCA GCG CTT GCG GGC CAG CTG GAG TTC CGG GTG GGC ATG GGG CTT GGC    11041                                                  Met Gly Leu Gly       41105  GGG CCT GCA CTC GGA GCA GCC GGC CGG CCC TTC CGG CCC CGG GCA GTG    11525  Gly Pro Ala Leu Gly Ala Ala Gly Arg Pro Phe Arg Pro Arg Ala Val      201153  AGG GAC TTG GCA CCC GGG CCA GCG GGC TGC AGA GGG TGT ACT GGG TCC    120021  Arg Asp Leu Ala Pro Gly Pro Ala Gly Cys Arg Gly Cys Thr Gly Ser      361201  CCC AGC AGT GCC GGC CCA CCT GCG CTG TGC TTG ATT TCT CGC TGG GCC    124837  Pro Ser Ser Ala Gly Pro Pro Ala Leu Cys Leu Ile Ser Arg Trp Ala      521249  TTA GCT GCC TTC CCG CGG GGC AGG GCT CGG GAC CTG CAG CCC GCC GTG    129653  Leu Ala Ala Phe Pro Arg Gly Arg Ala Arg Asp Leu Gln Pro Ala Val      681297  CCT GAG CCT CCC ACC CGC TCC ATG GGC TCC TGT GGG GCC CGA GCC TCC    134469  Pro Glu Pro Pro Thr Arg Ser Met Gly Ser Cys Gly Ala Arg Ala Ser      841345  CCG ACG AGT ACC ACC CCC TGC TCC AGG GCG CCC AGT CCC ATC GAC CAC    139285  Pro Thr Ser Thr Thr Pro Cys Ser Arg Ala Pro Ser Pro Ile Asp His     1001393  CCA AGG GCT GAG GAG TGC GAG CGC ACG GCG CGG GAC TGG CAG GCA GCT    1440101  Pro Arg Ala Glu Glu Cys Glu Arg Thr Ala Arg Asp Trp Gln Ala Ala     1161441  CCA CCT GCA GCC CCG GTG CGG GAT CCA CTA GGT GAA GCC AGC TGG GCT    1488117  Pro Pro Ala Ala Pro Val Arg Asp Pro Leu Gly Glu Ala Ser Trp Ala     1321489  CCT GAG TCT GAT GGG GAC GTG GAG AGT CCT TAT GTC CTG CTC AGG GAT    1536133  Pro Glu Ser Asp Gly Asp Val Glu Ser Pro Tyr Val Leu Leu Arg Asp     1481537  TGT AAA CAC ACC AAT CAG CAC CCT GTG TTT AGC TCA AGG TTT GTG AGT    1584149  Cys Lys His Thr Asn Gln His Pro Val Phe Ser Ser Arg Phe Val Ser     1641585  GCA CCA GTC GAC ACT CTG TAT CTA GCT GCT CTG GTG GGG CCT CGG AGA    1632165  Ala Pro Val Asp Thr Leu Tyr Leu Ala Ala Leu Val Gly Pro Arg Arg     1801633  ACC TTT ATA TCT AGC TCA GGG ATT GTA AAT ACA CCC ATC GGC ACT GTG    1680181  Thr Phe Ile Ser Ser Ser Gly Ile Val Asn Thr Pro Ile Gly Thr Val     1961681  TAT CTA GCT CAA GGT TTA TAA ACA CAC CAA TCA ACA CCC TGT GTC TAG    1728197  Tyr Leu Ala Gln Gly Leu ***                                         2031729  CTC AGG GTT TGT GAG TGC ACC AAT CAA CAC TCT GTA TCT AGC TGC TCT    17761777  GGT GGG GCC TTG GAG AAC CTG TGT GTC GAA ACT CTG TAT CTA ACT AAT    18241825  CTG ATG GGG ACG TGG AGA ACC TTT GTA TCT AGC TCA GGG ATT GTA AAC    18721873  GCA CCA ATC AAC GAC CTG TCA AAA CAG GCC ACT CGG CTC TAC CAA TCA    19201921  GCA GGA TGT GGG TGG GGC CAG ATA AGA GAA TAA AAG CAG GCT GCC CGA    19681969  GCC AGC ATT GGC AAC TCG CTC GGG TCC CCT TCC ACG CTG TGG GAG CTT    20162017  TGT TCT TTG CAA TAA ATC TTG CTA CTG CTC AAA AAA AAA AAA AAA AAA    20642065  AAA                                                                20677.PP11741A:核苷酸序列(SEQ ID NO:19)长度:32221  GTTGGGAAGG ACTTGGGGAC TCCACCTCTT GGCCTGGTTC CCATGGCCCC TAGGGGTCTA61  ACCTACCTGA TCCTGGGTTG GAGAAGCAGG ACCTTCTGGA AGCCCATGTT CCAGCGCTTG121  GGCCCCAGTC CTGATGGGGA TCAGGAATAG GCCCCCTTGC ACAGACCCCC ACCTGGCCAG181  CTCAGTGCCA GCAGACATCT TTCTACCTCA TGGTTCATCT ATGGAATTCT GGGGGTCCAC241  TGGATCCCTC ATCTTCCCTG GCTATGCCTG CTTCTATGCC AGGCACACCA TCCTCCAAGT301  GACCACAGAC AGACCTGAGT GTATGTGGCT GCGGCACACA CACCCCTGTG ACCAAGTGCA361  CTTCTGTGCA TTGGGGCACA GATTGTGTGT TCATCGTGTG AGTGCATGTG TGGGTCTGTG421  ACACGTGGCC GTTGCTCCTC TGTGAGCCAT CTGCTGATGA GCTACATCTC TGCCTTTACG481  CGTGACTTTG TATCCATGTC CAGGTGTCCA TGCGCCTGTG TGTGCAGATG TGTCCTGTCC541  CTGGGTGTGT CTGTGCCTGT GTGTGCGTTG ATATCTGTGC CTGCCTCTTC ACACATAGGT601  GGGAATGCAG AGTGTGTATT CTTTGTATGC ACCTGTACAC AGGCTGGGCG GGCAAGTGAG661  GATGCGTATG TGGGTGGCTG TGTCTGTATC TGCATTTGCA TGGTGTATTG GAGATTGGAG721  CTGTGTGTCT GTGCGTGTGT GGGTAGTGTG TACCGTGTGC ACATGTATGT GTGTGCCTGT781  GGACCAGCAC CTGTGTTGCC ACATTTGGGT GACGGTACAT CCATGCACTG GGTCTGCAGG841  TGTATTTGCG AGTGCGTGTG TCTGTCTAAC ACACTCTGTA GATGTCGCCG CCTGAATGAG901  AGCCAGAGCA GAGCTCTCCC CAGCCCTTCC CAAGTACTGT TCCCCTCTAC CGACGACTCC961  CCAGTTCTCT CCTTCCCTGA TGCAATGCAC GCCTAGTGGG CTACGTGTGC CAACCCTCCA1021  GGCCTTCTCC TGCCACAGGC TCTGTCTCTG TCCCGTCGCT GTGCCTCCTG CCCCTGCTAA1081  CCCAGCCCTC CGTGCCCTGG ATGCGCCCGG ACATGGCCAC CCTGCATGTG TGTCCGCCTG1141  CCCTCCCGCC CCACCCTGCC CCTCAGATCC ACCTCAGAGG CCCTGGGTCT GGTTTTCACT1201  GCTGTCCCTC CCTGGTCCCT GCCCTCCACT CCCACCCCTT GGTCCCTTTT CTCCTTCTCT1261  CTCTCGTTTC AGAAAAGAGG CCAGCTCTGC AGCCCCCTCG GGACGCCCCC ACCAGCTCAA1321  ATTCCGAGTG CAGAAAAGAA ACCGGACCCC CCAGTGAGGC CTGCCAGGCC TCCCGGACCC1381  CTTGTTACTC AGGAACCTCA CCTTGGACGG AATGGGATGG GGGCTTCGGT GCCCACCAAC1441  CCCCCACCTC CACTCTGCCA TTCCGGCCCA CCTCCCTCTG GCCGGACAGA ACTGGTGCTC1501  TCTTCTCCCC ACTGTGCCCG TCCGCGGACC GGGGACCCTT CCCCGTGCCC TACCCCCTCC1561  CATTTTGATG GTGTCTGTGA CATTTCCTGT TGCGAAGTAA AAGAGGGACC CCTGCGTCCT1621  GCTCCTTTCT CTTGCAGTCT GCTTGTCCAT GTGTCTATTT TTCCACTTGT CCATCTGTCC1681  AGTAAGGAGG TAATGGTGAC CCATGCTGGT CCGCTCGGAC CCCCATCCTC CTCTCCCCAC1741  AGCTGGGCCC TGCTCAGCTG GTCCTGCTGG ATGCAGTGCC CCTTTGGACC CCCTTGTCGC1801  CTGGCCTCCC ACTCCCGGCC ACCTGGCCTG GCAGCTCTGC AGCTGTTGCT CTGTCCCGGT1861  GGGAGAAAGT CCAGCCAGGC CTCCACTTCC CCTGGGGCAT CCCAACCTCA GCCCTGCACA1921  GACCCAGCGT CTGCCCTTAT TTGCTCCCCT GCAGACAAGG ACGAGTGCTC CAAGGATAAC1981  GGCGGCTGCC AGCAGGACTG CGTCAACACG TTCGGCAGTT ATGAGTGCCA ATGCCGCAGT2041  GGCTTCTGTC CTCCATGACA ACAAGCACGA CTGCAAAGAG GTACGGGCTG CATGCCAGGG2101  GCATCTGGGC TTGAAGGACC TGCTGCTGGG AGTGGAAGCC CAGAGGATCA TCTCCATCAG2161  CCTCCGTTTA GATTCTGGGG CCTGTATGAT CTCTAAGGCC CCCTCATTCC CCCACCCACC2221  TGGTACATAG ATCCTCCTCC CGCAGTGTCG GAGCCACACG CTCACTTCTG TTGCCCACAT2281  TAGGAGAGGA GGAGCTCACG GCTGCTCTGA GGCTTCATTT TCAGACTTTT CTAGTTTGTG2341  CTTCTTAAAA CCATGTCCAA GTCTCTTTGT GACTTCCTAC CGGCACAGAG GCGAGAAAGG2401  ATAGTGGGTA AGAGCACAGC CTCCAGAGCC AGGTGGCCTG GCCCAGCCCT GCCGCTTCAC2461  TAGCTGTGTG CCTTTGAGTG ACTCCTTGAC CCTCTCTGTG CCTTGGTTTG CTCCTGGGTA2521  AAATGTAGAT AATAATAATA GTACCCACCT CAGAGAGCAT TGGGAGCTTG AAGGGCCCCA2581  AGCAGGGCCT GGCTCACCGC AAGCACAATG GCATCTGTTA CCACTATCAG TCACACTTAT2641  AACCCCTGGG GATGGTCAGA ACAGGGCCAC TTGCTTCCTG GCAGTGAAGC CCTGCACACA2701  TTTAAAAATA GCTCTAGGCC GGGCACGATG GCTCATGCCT GTAATCCCAG CACTTTGGGA2761  GGCCGAGGCA AGGAGGATCG CTTGAGCTCA GGCATTCAAG ACCAGCCTGA GCAACATAGT2821  GAGACTCTGT CTCTATTTTA CTTTTAAACA GGTTTTTAAA CTAGAAATAA AGTAAAATAG2881  GCCAGTGCGG TGGTTCACAC CTGTAATCCC AGCACTTTGG GAGGCTGAGG TGGGCATGAT2941  TGCGTCAGCC CAGGAGTTTA AGACCAACCT GGGCAACATG GCGAAACCCC ATCTCTACAA3001  TAAATACAAA AAATTAGCTG GATGTGGTGG TGCATGCCTA TAGTCCCAGC TACCCTGGAG3061  GCTGAGGTGG GAGAATCACC TGAGTCTGGG GAGGCTGAGG CTGCATGAGC CGAGATCACA3121  CCACTGTACT CCAGCCTGGG TGACAGAGTG GGAAAAAACA AATAAAAATA TAAATAAATA3181  AATAAAGCAA AATAAAACCA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAB:核苷酸序列(SEQ ID NO:20)长度:3101  MCVRLPSRPT LPLRSTSEAL GLVFTAVPPW SLPSTPTPWS LFSFSLSFQK RGQLCSPLGT61  PPPAQIPSAE KKPDPPVRPA RPPGPLVTQE PHLGRNGMGA SVPTNPPPPL CHSGPPPSGR121  TELVLSSPHC ARPRTGDPSP CPTPSHFDGV CDISCCEVKE GPLRPAPFSC SLLVHVSIFP181  LVHLSSKEVM VTHAGPLGPP SSSPHSWALL SWSCWMQCPF GPPCRLASHS RPPGLAALQL241  LLCPGGRKSS QASTSPGASQ PQPCTDPASA LICSPADKDE CSKDNGGCQQ DCVNTFGSYE301  CQCRSGFCPPC.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO:21)  克隆号:DP11741起始编码子:1126 ATG  终止编码子:2056 TGA  蛋白质分子量:32605.641  GTT GGG AAG GAC TTG GGG ACT CCA CCT CTT GGC CTG GTT CCC ATG GCC      4849  CCT AGG GGT CTA ACC TAC CTG ATC CTG GGT TGG AGA AGC AGG ACC TTC      9697  TGG AAG CCC ATG TTC CAG CGC TTG GGC CCC AGT CCT GAT GGG GAT CAG     144145  GAA TAG GCC CCC TTG CAC AGA CCC CCA CCT GGC CAG CTC AGT GCC AGC     192193  AGA CAT CTT TCT ACC TCA TGG TTC ATC TAT GGA ATT CTG GGG GTC CAC     240241  TGG ATC CCT CAT CTT CCC TGG CTA TGC CTG CTT CTA TGC CAG GCA CAC     288289  CAT CCT CCA AGT GAC CAC AGA CAG ACC TGA GTG TAT GTG GCT GCG GCA     336337  CAC ACA CCC CTG TGA CCA AGT GCA CTT CTG TGC ATT GGG GCA CAG ATT     384385  GTG TGT TCA TCG TGT GAG TGC ATG TGT GGG TCT GTG ACA CGT GGC CGT     432433  TGC TCC TCT GTG AGC CAT CTG CTG ATG AGC TAC ATC TCT GCC TTT ACG     480481  CGT GAC TTT GTA TCC ATG TCC AGG TGT CCA TGC GCC TGT GTG TGC AGA     528529  TGT GTC CTG TCC CTG GGT GTG TCT GTG CCT GTG TGT GCG TTG ATA TCT     576577  GTG CCT GCC TCT TCA CAC ATA GGT GGG AAT GCA GAG TGT GTA TTC TTT     624625  GTA TGC ACC TGT ACA CAG GCT GGG CGG GCA AGT GAG GAT GCG TAT GTG     672673  GGT GGC TGT GTC TGT ATC TGC ATT TGC ATG GTG TAT TGG AGA TTG GAG     720721  CTG TGT GTC TGT GCG TGT GTG GGT AGT GTG TAC CGT GTG CAC ATG TAT     768769  GTG TGT GCC TGT GGA CCA GCA CCT GTG TTG CCA CAT TTG GGT GAC GGT     816817  ACA TCC ATG CAC TGG GTC TGC AGG TGT ATT TGC GAG TGC GTG TGT CTG     864865  TCT AAC ACA CTC TGT AGA TGT CGC CGC CTG AAT GAG AGC CAG AGC AGA     912913  GCT CTC CCC AGC CCT TCC CAA GTA CTG TTC CCC TCT ACC GAC GAC TCC     960961  CCA GTT CTC TCC TTC CCT GAT GCA ATG CAC GCC TAG TGG GCT ACG TGT    10081009  GCC AAC CCT CCA GGC CTT CTC CTG CCA CAG GCT CTG TCT CTG TCC CGT    10561057  CGC TGT GCC TCC TGC CCC TGC TAA CCC AGC CCT CCG TGC CCT GGA TGC    11041105  GCC CGG ACA TGG CCA CCC TGC ATG TGT GTC CGC CTG CCC TCC CGC CCC    11521                              Met Cys Val Arg Leu Pro Ser Arg Pro       91153  ACC CTG CCC CTC AGA TCC ACC TCA GAG GCC CTG GGT CTG GTT TTC ACT    120010  Thr Leu Pro Leu Arg Ser Thr Ser Glu Ala Leu Gly Leu Val Phe Thr      251201  GCT GTC CCT CCC TGG TCC CTG CCC TCC ACT CCC ACC CCT TGG TCC CTT    124826  Ala Val Pro Pro Trp Ser Leu Pro Ser Thr Pro Thr Pro Trp Ser Leu      411249  TTC TCC TTC TCT CTC TCG TTT CAG AAA AGA GGC CAG CTC TGC AGC CCC    129642  Phe Ser Phe Ser Leu Ser Phe Gln Lys Arg Gly Gln Leu Cys Ser Pro      571297  CTC GGG ACG CCC CCA CCA GCT CAA ATT CCG AGT GCA GAA AAG AAA CCG    134458  Leu Gly Thr Pro Pro Pro Ala Gln Ile Pro Ser Ala Glu Lys Lys Pro      731345  GAC CCC CCA GTG AGG CCT GCC AGG CCT CCC GGA CCC CTT GTT ACT CAG    139274  Asp Pro Pro Val Arg Pro Ala Arg Pro Pro Gly Pro Leu Val Thr Gln      891393  GAA CCT CAC CTT GGA CGG AAT GGG ATG GGG GCT TCG GTG CCC ACC AAC    144090  Glu Pro His Leu Gly Arg Asn Gly Met Gly Ala Ser Val Pro Thr Asn     1051441  CCC CCA CCT CCA CTC TGC CAT TCC GGC CCA CCT CCC TCT GGC CGG ACA    1488106  Pro Pro Pro Pro Leu Cys His Ser Gly Pro Pro Pro Ser Gly Arg Thr     1211489  GAA CTG GTG CTC TCT TCT CCC CAC TGT GCC CGT CCG CGG ACC GGG GAC    1536122  Glu Leu Val Leu Ser Ser Pro His Cys Ala Arg Pro Arg Thr Gly Asp     1371537  CCT TCC CCG TGC CCT ACC CCC TCC CAT TTT GAT GGT GTC TGT GAC ATT    1584138  Pro Ser Pro Cys Pro Thr Pro Ser His Phe Asp Gly Val Cys Asp Ile     1531585  TCC TGT TGC GAA GTA AAA GAG GGA CCC CTG CGT CCT GCT CCT TTC TCT    1632154  Ser Cys Cys Glu Val Lys Glu Gly Pro Leu Arg Pro Ala Pro Phe Ser     1691633  TGC AGT CTG CTT GTC CAT GTG TCT ATT TTT CCA CTT GTC CAT CTG TCC    1680170  Cys Ser Leu Leu Val His Val Ser Ile Phe Pro Leu Val His Leu Ser     1851681  AGT AAG GAG GTA ATG GTG ACC CAT GCT GGT CCG CTC GGA CCC CCA TCC    1728186  Ser Lys Glu Val Met Val Thr His Ala Gly Pro Leu Gly Pro Pro Ser     2011729  TCC TCT CCC CAC AGC TGG GCC CTG CTC AGC TGG TCC TGC TGG ATG CAG    1776202  Ser Ser Pro His Ser Trp Ala Leu Leu Ser Trp Ser Cys Trp Met Gln     2171777  TGC CCC TTT GGA CCC CCT TGT CGC CTG GCC TCC CAC TCC CGG CCA CCT    1824218  Cys Pro Phe Gly Pro Pro Cys Arg Leu Ala Ser His Ser Arg Pro Pro     2331825  GGC CTG GCA GCT CTG CAG CTG TTG CTC TGT CCC GGT GGG AGA AAG TCC    1872234  Gly Leu Ala Ala Leu Gln Leu Leu Leu Cys Pro Gly Gly Arg Lys Ser     2491873  AGC CAG GCC TCC ACT TCC CCT GGG GCA TCC CAA CCT CAG CCC TGC ACA    1920250  Ser Gln Ala Ser Thr Ser Pro Gly Ala Ser Gln Pro Gln Pro Cys Thr     2651921  GAC CCA GCG TCT GCC CTT ATT TGC TCC CCT GCA GAC AAG GAC GAG TGC    1968266  Asp Pro Ala Ser Ala Leu Ile Cys Ser Pro Ala Asp Lys Asp Glu Cys     2811969  TCC AAG GAT AAC GGC GGC TGC CAG CAG GAC TGC GTC AAC ACG TTC GGC    2016282  Ser Lys Asp Asn Gly Gly Cys Gln Gln Asp Cys Val Asn Thr Phe Gly     2972017  AGT TAT GAG TGC CAA TGC CGC AGT GGC TTC TGT CCT CCA TGA CAA CAA    2064298  Ser Tyr Glu Cys Gln Cys Arg Ser Gly Phe Cys Pro Pro ***             3112065  GCA CGA CTG CAA AGA GGT ACG GGC TGC ATG CCA GGG GCA TCT GGG CTT    21122113  GAA GGA CCT GCT GCT GGG AGT GGA AGC CCA GAG GAT CAT CTC CAT CAG    21602161  CCT CCG TTT AGA TTC TGG GGC CTG TAT GAT CTC TAA GGC CCC CTC ATT    22082209  CCC CCA CCC ACC TGG TAC ATA GAT CCT CCT CCC GCA GTG TCG GAG CCA    22562257  CAC GCT CAC TTC TGT TGC CCA CAT TAG GAG AGG AGG AGC TCA CGG CTG    23042305  CTC TGA GGC TTC ATT TTC AGA CTT TTC TAG TTT GTG CTT CTT AAA ACC    23522353  ATG TCC AAG TCT CTT TGT GAC TTC CTA CCG GCA CAG AGG CGA GAA AGG    24002401  ATA GTG GGT AAG AGC ACA GCC TCC AGA GCC AGG TGG CCT GGC CCA GCC    24482449  CTG CCG CTT CAC TAG CTG TGT GCC TTT GAG TGA CTC CTT GAC CCT CTC    24962497  TGT GCC TTG GTT TGC TCC TGG GTA AAA TGT AGA TAA TAA TAA TAG TAC    25442545  CCA CCT CAG AGA GCA TTG GGA GCT TGA AGG GCC CCA AGC AGG GCC TGG    25922593  CTC ACC GCA AGC ACA ATG GCA TCT GTT ACC ACT ATC AGT CAC ACT TAT    26402641  AAC CCC TGG GGA TGG TCA GAA CAG GGC CAC TTG CTT CCT GGC AGT GAA    26882689  GCC CTG CAC ACA TTT AAA AAT AGC TCT AGG CCG GGC ACG ATG GCT CAT    27362737  GCC TGT AAT CCC AGC ACT TTG GGA GGC CGA GGC AAG GAG GAT CGC TTG    27842785  AGC TCA GGC ATT CAA GAC CAG CCT GAG CAA CAT AGT GAG ACT CTG TCT    28322833  CTA TTT TAC TTT TAA ACA GGT TTT TAA ACT AGA AAT AAA GTA AAA TAG    28802881  GCC AGT GCG GTG GTT CAC ACC TGT AAT CCC AGC ACT TTG GGA GGC TGA    29282929  GGT GGG CAT GAT TGC GTC AGC CCA GGA GTT TAA GAC CAA CCT GGG CAA    29762977  CAT GGC GAA ACC CCA TCT CTA CAA TAA ATA CAA AAA ATT AGC TGG ATG3025  TGG TGG TGC ATG CCT ATA GTC CCA GCT ACC CTG GAG GCT GAG GTG GGA3073  GAA TCA CCT GAG TCT GGG GAG GCT GAG GCT GCA TGA GCC GAG ATC ACA3121  CCA CTG TAC TCC AGC CTG GGT GAC AGA GTG GGA AAA AAC AAA TAA AAA3169  TAT AAA TAA ATA AAT AAA GCA AAA TAA AAC CAA AAA AAA AAA AAA AAA3217  AAA AAA8.PP12301A:核苷酸序列(SEQ ID NO:22)长度:14041  GCCGGATTGC AGCACCTGGG ATTGGAGTTT GGAATCCTGC CTTCGATGTC ACCCCCCACG61  ACCTCATCAC TGGTGGCATC ATCACAGAAC TGGGGGTCTT TGCCCCTGAG GAGCTCCGGA121  CAGCCCTAAC CACCACCATC TCTTCCAGGG ATGGAACCCT AGATGGACCC CAGATGTAAC181  CAACTCAGCT CTCCCTAGCC TGCCTCTCTA GGTTTTTCAA TACATTTCTT GAATGGCTAC241  CCAAAAGCTG ACCGTCCAGC CCCTGACCAC ACTTGTTCCT AGTGCAGGGA GCTCAGACAG301  GGCCTTCCAT CTAGAGCCCA GCACCTAGAG CCAGGCTGCC CAGATTCAAA TCCTGACTCC361  GCCACTTTTC CCAAAGTGCT GGGACTACAG GCATGAGCCA CTGTGCCTGA CCTTACAGCA421  GTATTTTTTA AAAATCAAAA TTAATGCAAA AATCCATGAT GAGGCCAGGC TTGGTGGCTC481  ATGCCTGTGA TTCCAGCACT TTGGGAGGAT CCCTTGAGCC CAGGTGTTTG AGACCAGTTT541  GGGTAACATA GGAAGAGCTT GTCTCTACAA ACAAAAATTT AAAAACAATG AGCTGGGCAT601  GGAACTCACA CCTCTAGCCC CAGCTACTCG GGCTGAGGTG GGAGGATGGC TTGAGCCCAG661  GAGTTCAAGG ATGCAGTGTG CTTTGATTGC ACTACTGCGC TTCACCCTGG GCAACAGAGT721  GAGACCCCAT CTCTTTAAAA AAAAAAAAAA ATCCATGATG AACAAAACAA GTATTTGTTT781  GAGACGGGGT CTCGCTCTGT CGCCCAGGCT GGAGTGCAGT GGTGCCATCT CAGCTCACTG841  CAACCTCCGC CTTCTGGGTT CAAGCGACTC TCCTGCCTCA GCCTCCCGAG TAGCTGGGAT901  TGCAGGAGCC TGGCACTATG CCTGGCTAAT TTTTGTATTT TTATTGGAGA CACCATGTTG961  GTCGTGGCTG GTCTCCAACT CCTGACCTCG GGTGATCCGC GCCCCGCGGC CTCCGAAAGT1021  GCTGGGATTA CAGGCGTGAG CCACCGTGCC CGGCCTAAAT AAAATTTTGA AGAGGCTAGA1081  ACCCCGCACT TGTGCCTTGA GCTTACTGAC CTCAACACCC TGGTTCCACT AAAACTTTAT1141  TTACAAAATT ATGCTGCCGG TCTGCAGGAT GTAGTTTAAC AATTTGATTA TTTTGGATAT1201  TAAAATATTT TTTAAGTCTT GAAAATATTG TTTACTATTA CCAAAGTTTT TGAACCTTCT1261  TAAATTCTGT ACCAGAGGTG AGTGCCACAC CCTAACCTAG TCTGAGTTTT TATGTGTAAA1321  GATCATAAAA CGTTGTAAGT TTTCTAAAAC ACATAAGCTC TCAATAAACG TTAGCTTATC1381  ATTGAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAB:核苷酸序列(SEQ ID NO:23)长度:1281    MELTPLAPAT  RAEVGGWLEP  RSSRMQCALI  ALLRFTLGNR  VRPHLFKKKK  KSMMNKTSIC6     LRRGLALSPR  LECSGAISAH  CNLRLLGSSD  SPASASRVAG  IAGAWHYAWL  IFVFLLETPC121    WSWLVSNSC.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO:24)   克隆号:PP12301起始编码子:599 ATG  终止编码子:983 TGA  蛋白质分子量:14138.861    G CCG GAT TGC AGC ACC TGG GAT TGG AGT TTG GAA TCC TGC CTT CGA      4647  TGT CAC CCC CCA CGA CCT CAT CAC TGG TGG CAT CAT CAC AGA ACT GGG      9495  GGT CTT TGC CCC TGA GGA GCT CCG GAC AGC CCT AAC CAC CAC CAT CTC     142143  TTC CAG GGA TGG AAC CCT AGA TGG ACC CCA GAT GTA ACC AAC TCA GCT     190191  CTC CCT AGC CTG CCT CTC TAG GTT TTT CAA TAC ATT TCT TGA ATG GCT     238239  ACC CAA AAG CTG ACC GTC CAG CCC CTG ACC ACA CTT GTT CCT AGT GCA     286287  GGG AGC TCA GAC AGG GCC TTC CAT CTA GAG CCC AGC ACC TAG AGC CAG     334335  GCT GCC CAG ATT CAA ATC CTG ACT CCG CCA CTT TTC CCA AAG TGC TGG     382383  GAC TAC AGG CAT GAG CCA CTG TGC CTG ACC TTA CAG CAG TAT TTT TTA     430431  AAA ATC AAA ATT AAT GCA AAA ATC CAT GAT GAG GCC AGG CTT GGT GGC     478479  TCA TGC CTG TGA TTC CAG CAC TTT GGG AGG ATC CCT TGA GCC CAG GTG     526527  TTT GAG ACC AGT TTG GGT AAC ATA GGA AGA GCT TGT CTC TAC AAA CAA     574575  AAA TTT AAA AAC AAT GAG CTG GGC ATG GAA CTC ACA CCT CTA GCC CCA     6221                                  Met Glu Leu Thr Pro Leu Ala Pro       8623  GCT ACT CGG GCT GAG GTG GGA GGA TGG CTT GAG CCC AGG AGT TCA AGG     6709  Ala Thr Arg Ala Glu Val Gly Gly Trp Leu Glu Pro Arg Ser Ser Arg      24 671  ATG CAG TGT GCT TTG ATT GCA CTA CTG CGC TTC ACC CTG GGC AAC AGA     71825  Met Gln Cys Ala Leu Ile Ala Leu Leu Arg Phe Thr Leu Gly Asn Arg      40719  GTG AGA CCC CAT CTC TTT AAA AAA AAA AAA AAA TCC ATG ATG AAC AAA     76641  Val Arg Pro His Leu Phe Lys Lys Lys Lys Lys Ser Met Met Asn Lys      56767  ACA AGT ATT TGT TTG AGA CGG GGT CTC GCT CTG TCG CCC AGG CTG GAG     81457  Thr Ser Ile Cys Leu Arg Arg Gly Leu Ala Leu Ser Pro Arg Leu Glu      72815  TGC AGT GGT GCC ATC TCA GCT CAC TGC AAC CTC CGC CTT CTG GGT TCA     86273  Cys Ser Gly Ala Ile Ser Ala His Cys Asn Leu Arg Leu Leu Gly Ser      88863  AGC GAC TCT CCT GCC TCA GCC TCC CGA GTA GCT GGG ATT GCA GGA GCC     91089  Ser Asp Ser Pro Ala Ser Ala Ser Arg Val Ala Gly Ile Ala Gly Ala     104911  TGG CAC TAT GCC TGG CTA ATT TTT GTA TTT TTA TTG GAG ACA CCA TGT     958105  Trp His Tyr Ala Trp Leu Ile Phe Val Phe Leu Leu Glu Thr Pro Cys     120959  TGG TCG TGG CTG GTC TCC AAC TCC TGA CCT CGG GTG ATC CGC GCC CCG    1006121  Trp Ser Trp Leu Val Ser Asn Ser ***                                 1291007  CGG CCT CCG AAA GTG CTG GGA TTA CAG GCG TGA GCC ACC GTG CCC GGC    10541055  CTA AAT AAA ATT TTG AAG AGG CTA GAA CCC CGC ACT TGT GCC TTG AGC    11021103  TTA CTG ACC TCA ACA CCC TGG TTC CAC TAA AAC TTT ATT TAC AAA ATT    11501151  ATG CTG CCG GTC TGC AGG ATG TAG TTT AAC AAT TTG ATT ATT TTG GAT    11981199  ATT AAA ATA TTT TTT AAG TCT TGA AAA TAT TGT TTA CTA TTA CCA AAG    12461247  TTT TTG AAC CTT CTT AAA TTC TGT ACC AGA GGT GAG TGC CAC ACC CTA    12941295  ACC TAG TCT GAG TTT TTA TGT GTA AAG ATC ATA AAA CGT TGT AAG TTT    13421343  TCT AAA ACA CAT AAG CTC TCA ATA AAC GTT AGC TTA TCA TTG AAA AAA    13901391  AAA AAA AAA AAA AA                                                 14049.PP12616A:核苷酸序列(SEQ ID NO:25)长度:9931  GCCGCAGTCC CATCATTCAG TTCCGTAGGG TCACCGGCGC GGCAGTGGCC TCGCAGGGCG61  CTGGGTCCCT CTCCCCAGCT CTCCTCCCCC TGGCCCCGTC GCCCCGCCCT CGCCGGGCTG121  GGCTGCGGGG TCAGGGGCCG AGCGGAGAGG GGTGAGTATT CCCCACAGCC CTTGCCGGTT181  GCCTCCTCCC GGCTCTGCTT CCCACACGGT CCTTGCCCCA CTCCTAGGAC AGGGAGGAAG241  GGCACGCGCG GGTAGGCGGG AAACAGCCCA GTCCTGAACA AAAGGCCGGG GAAGCGGGTC301  CCCGCCGGTA ACTGCAGGCC TGTGCTGGCC GCCGCGAGCG GGAAGGGCGA GGACACTCCC361  TCCTCGGGGA CCCGGTCCCC GTCGCGCACA CGGTGTCACC AGCACACCTG GCCCAGTACC421  CAAAGCACCC TCGAATTATC ATTTAACATG GAAGAAGATG AGTTCATTGG AGAAAAAACA481  TTCCAACGTT ATTGTGCAGA ATTCATTAAA CATTCACAAC AGATAGGTGA TAGTTGGGAA541  TGGAGACCAT CAAAGGACTG TTCTGATGGC TACATGTGCA AAATACACTT TCAAATTAAG601  AATGGGTCTG TGATGTCACA TCTAGGAGCA TCTACCCATG GACAGACATG TCTTCCCATG661  GAGGTGAAGT CTTGCTCTGT CACCCAGGCT GGAGTGCAGT TGCGTGATCT CAGCTCACTG721  CAACCTCCGC CTTCTGGGTT CAAGCAGTTC TCCTGCCTCA GCCTTCCGAG TAACTGGGAC781  TACAGGGGTT CACCACTACA CCTGGCTAAT TTTTTGTATT TTTAGTAGAG ATAAGGTTTC841  ACCATGTTGG TCAGGCTGGT CTTGAACTCC TGACATCAAG TAATCCATCC GCCTCAGCCT901  CCCAAAGTGC TGAGATTACA GGCATGAGCC ACTGTGCCTG GCCCTGAGCT TAAAATAAAA961  GTTAAATTAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAB:核苷酸序列(SEQ ID NO:26)长度:1251   MEEDEFIGEK  TFQRYCAEFI  KHSQQIGDSW  EWRPSKDCSD  GYMCKIHFQI  KNGSVMSHLG61   ASTHGQTCLP  MEVKSCSVTQ  AGVQLRDLSS  LQPPPSGFKQ  FSCLSLPSNW  DYRGSPLHLA121   NFLYFC.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO:27)  克隆号:PP12616起始编码子:448 ATG  终止编码子:823 TAG  蛋白质分子量:14216.381  GCC GCA GTC CCA TCA TTC AGT TCC GTA GGG TCA CCG GCG CGG CAG TGG      4849  CCT CGC AGG GCG CTG GGT CCC TCT CCC CAG CTC TCC TCC CCC TGG CCC      9697  CGT CGC CCC GCC CTC GCC GGG CTG GGC TGC GGG GTC AGG GGC CGA GCG     144 145  GAG AGG GGT GAG TAT TCC CCA CAG CCC TTG CCG GTT GCC TCC TCC CGG     192193  CTC TGC TTC CCA CAC GGT CCT TGC CCC ACT CCT AGG ACA GGG AGG AAG     240241  GGC ACG CGC GGG TAG GCG GGA AAC AGC CCA GTC CTG AAC AAA AGG CCG     288289  GGG AAG CGG GTC CCC GCC GGT AAC TGC AGG CCT GTG CTG GCC GCC GCG     336337  AGC GGG AAG GGC GAG GAC ACT CCC TCC TCG GGG ACC CGG TCC CCG TCG     384385  CGC ACA CGG TGT CAC CAG CAC ACC TGG CCC AGT ACC CAA AGC ACC CTC     432433  GAA TTA TCA TTT AAC ATG GAA GAA GAT GAG TTC ATT GGA GAA AAA ACA     4801                      Met Glu Glu Asp Glu Phe Ile Gly Glu Lys Thr      11481  TTC CAA CGT TAT TGT GCA GAA TTC ATT AAA CAT TCA CAA CAG ATA GGT     52812  Phe Gln Arg Tyr Cys Ala Glu Phe Ile Lys His Ser Gln Gln Ile Gly      27529  GAT AGT TGG GAA TGG AGA CCA TCA AAG GAC TGT TCT GAT GGC TAC ATG     57628  Asp Ser Trp Glu Trp Arg Pro Ser Lys Asp Cys Ser Asp Gly Tyr Met      43577  TGC AAA ATA CAC TTT CAA ATT AAG AAT GGG TCT GTG ATG TCA CAT CTA     62444  Cys Lys Ile His Phe Gln Ile Lys Asn Gly Ser Val Met Ser His Leu      59625  GGA GCA TCT ACC CAT GGA CAG ACA TGT CTT CCC ATG GAG GTG AAG TCT     67260  Gly Ala Ser Thr His Gly Gln Thr Cys Leu Pro Met Glu Val Lys Ser      75673  TGC TCT GTC ACC CAG GCT GGA GTG CAG TTG CGT GAT CTC AGC TCA CTG     72076  Cys Ser Val Thr Gln Ala Gly Val Gln Leu Arg Asp Leu Ser Ser Leu      91721  CAA CCT CCG CCT TCT GGG TTC AAG CAG TTC TCC TGC CTC AGC CTT CCG     76892  Gln Pro Pro Pro Ser Gly Phe Lys Gln Phe Ser Cys Leu Ser Leu Pro     107769  AGT AAC TGG GAC TAC AGG GGT TCA CCA CTA CAC CTG GCT AAT TTT TTG     816108  Ser Asn Trp Asp Tyr Arg Gly Ser Pro Leu His Leu Ala Asn Phe Leu     123817  TAT TTT TAG TAG AGA TAA GGT TTC ACC ATG TTG GTC AGG CTG GTC TTG     864124  Tyr Phe ***                                                         126865  AAC TCC TGA CAT CAA GTA ATC CAT CCG CCT CAG CCT CCC AAA GTG CTG     912913  AGA TTA CAG GCA TGA GCC ACT GTG CCT GGC CCT GAG CTT AAA ATA AAA     960961  GTT AAA TTA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA                         99310. PP12723A:核苷酸序列(SEQ ID NO:28)长度:15481  GCAGAGTTTG GGGGTTGTTT GGGATTAGTG AAGCTACTGC CTTTGCCGCC AGCGCAGCCT61  CAGAGTTTGA TTATTTGCAA TGTCAGGCTT TGAAAACTTA AACACGGATT TCTACCAGAC121  AAGTTACAGC ATCGATGATC AGTCACAGCA GTCCTATGAT TATGGAGGAA GTGGAGGACC181  CTATAGCAAA CAGTATGCTG GCTATGACTA TTCGCAGCAA GGCAGATTTG TCCCTCCAGA241  CATGATGCAG CCACAACAGC CATACACCGG GCAGATTTAC CAGCCAACTC AGGCATATAC301  TCCAGCTTCA CCTCAGCCTT TCTATGGAAA CAACTTTGAG GATGAGCCAC CTTTATTAGA361  AGAGTTAGGT ATCAATTTTG ACCACATCTG GCAAAAAACA CTAACAGTAT TACATCCGTT421  AAAAGTAGCA GATGGCAGCA TCATGAATGA AACTGATTTG GCAGGTCCAA TGGTTTTTTG481  CCTTGCTTTT GGAGCCACAT TGCTACTGGC TGGCAAAATC CAGTTTGGCT ATGTATACGG541  GATCAGTGCA ATTGGATGTC TAGGAATGTT TTGTTTATTA AACTTAATGA GTATGACAGG601  TGTTTCATTT GGTTGTGTGG CAAGTGTCCT TGGATATTGT CTTCTGCCCA TGATCCTACT661  TTCCAGCTTT GCAGTGATAT TTTCTTTGCA AGGAATGGTA GGAATCATTC TCACTGCTGG721  GATTATTGGA TGGTGTAGTT TTTCTGCTTC CAAAATATTT ATTTCTGCAT TAGCCATGGA781  AGGACAGCAA CTTTTAGTAG CATATCCTTG CGCTTTGTTA TATGGAGTCT TTGCCCTGAT841  TTCCGTCTTT TGAAAATTTA TCTGGGATGT GGACATCAGT GGGCCAGATG TACAAAAAGG901  ACCTTGAACT CTTACATTGG ACCAGCAAAC TGCTGCAGCG CAACTCTCAT GCAGATTTTA961  CATTTGACTG TTGGAGCAAT GAAAGTAAAC GTGTATCTCT TGTTCATTTT TATAGAACTT1021  TTGCATACTA TATTGGATTT ACCTGCGGTG TGACTAGCTT TAAATGTTTG TGTTTATACA1081  GATAAGAAAT GCTATTTCTT TCTGGTTCCT GCAGCCATTG AAAAACCTTT TTCCTTGCAA1141  ATTATAATGT TTTTGATAGA TTTTTATCAA CTGTGGGAAA CCAAACACAA AGCTGATAAC1201  CTTTCTTAAA AACGACCCAG TCACAGTAAA GAAGACACAA GACGGCCGGG CGTGGTAGCT1261  CACGCCTGTA ATCCCAGCAC TTTGGGAGGC CGAGGCGGGC GGATCACAAG GGCAGGAGAT1321  CGAGACCATC CTGGTTAACA CGGTGAAACC CCGACTCTAC TAAAACTACA AAAAAATTAG1381  CTGGGCGTGG TGGCGGGCGC CTGTAGTCCC AGCTACTCAG GAGGCTGAGG CAGGAGAAAA1441  GTGTGAACCC AGGAGGCGGA GCTTGCAGTG AGCCGAGATC ACACCACTGC ACTCCATACC1501  AGCCTGGGTG ACAGGGTGAG ACTCTGTTTC AAAAAAAAAA AAAAAAAAB:核苷酸序列  (SEQ ID NO:29)  长度:2571  MSGFENLNTD FYQTSYSIDD QSQQSYDYGG SGGPYSKQYA GYDYSQQGRF VPPDMMQPQQ61  PYTGQIYQPT QAYTPASPQP FYGNNFEDEP PLLEELGINF DHIWQKTLTV LHPLKVADGS121  IMNETDLAGP MVFCLAFGAT LLLAGKIQFG YVYGISAIGC LGMFCLLNLM SMTGVSFGCV181  ASVLGYCLLP MILLSSFAVI FSLQGMVGII LTAGIIGWCS FSASKIFISA LAMEGQQLLV241  AYPCALLYGV FALISVFC.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO:30)  克隆号:PP12723起始编码子:80 ATG  终止编码子:851 TGA  蛋白质分子量:27987.811    G CAG AGT TTG GGG GTT GTT TGG GAT TAG TGA AGC TAC TGC CTT TGC      4647  CGC CAG CGC AGC CTC AGA GTT TGA TTA TTT GCA ATG TCA GGC TTT GAA      941                                              Met Ser Gly Phe Glu       595  AAC TTA AAC ACG GAT TTC TAC CAG ACA AGT TAC AGC ATC GAT GAT CAG     1426  Asn Leu Asn Thr Asp Phe Tyr Gln Thr Ser Tyr Ser Ile Asp Asp Gln      21143  TCA CAG CAG TCC TAT GAT TAT GGA GGA AGT GGA GGA CCC TAT AGC AAA     19022  Ser Gln Gln Ser Tyr Asp Tyr Gly Gly Ser Gly Gly Pro Tyr Ser Lys      37191  CAG TAT GCT GGC TAT GAC TAT TCG CAG CAA GGC AGA TTT GTC CCT CCA     23838  Gln Tyr Ala Gly Tyr Asp Tyr Ser Gln Gln Gly Arg Phe Val Pro Pro      53239  GAC ATG ATG CAG CCA CAA CAG CCA TAC ACC GGG CAG ATT TAC CAG CCA     28654  Asp Met Met Gln Pro Gln Gln Pro Tyr Thr Gly Gln Ile Tyr Gln Pro      69287  ACT CAG GCA TAT ACT CCA GCT TCA CCT CAG CCT TTC TAT GGA AAC AAC     33470  Thr Gln Ala Tyr Thr Pro Ala Ser Pro Gln Pro Phe Tyr Gly Asn Asn      85335  TTT GAG GAT GAG CCA CCT TTA TTA GAA GAG TTA GGT ATC AAT TTT GAC     38286  Phe Glu Asp Glu Pro Pro Leu Leu Glu Glu Leu Gly Ile Asn Phe Asp     101383  CAC ATC TGG CAA AAA ACA CTA ACA GTA TTA CAT CCG TTA AAA GTA GCA     430102  His Ile Trp Gln Lys Thr Leu Thr Val Leu His Pro Leu Lys Val Ala     117431  GAT GGC AGC ATC ATG AAT GAA ACT GAT TTG GCA GGT CCA ATG GTT TTT     478118  Asp Gly Ser Ile Met Asn Glu Thr Asp Leu Ala Gly Pro Met Val Phe     133479  TGC CTT GCT TTT GGA GCC ACA TTG CTA CTG GCT GGC AAA ATC CAG TTT     526134  Cys Leu Ala Phe Gly Ala Thr Leu Leu Leu Ala Gly Lys Ile Gln Phe     149527  GGC TAT GTA TAC GGG ATC AGT GCA ATT GGA TGT CTA GGA ATG TTT TGT     574150  Gly Tyr Val Tyr Gly Ile Ser Ala Ile Gly Cys Leu Gly Met Phe Cys     165575  TTA TTA AAC TTA ATG AGT ATG ACA GGT GTT TCA TTT GGT TGT GTG GCA     622166  Leu Leu Asn Leu Met Ser Met Thr Gly Val Ser Phe Gly Cys Val Ala     181623  AGT GTC CTT GGA TAT TGT CTT CTG CCC ATG ATC CTA CTT TCC AGC TTT     670182  Ser Val Leu Gly Tyr Cys Leu Leu Pro Met Ile Leu Leu Ser Ser Phe     197671  GCA GTG ATA TTT TCT TTG CAA GGA ATG GTA GGA ATC ATT CTC ACT GCT     718198  Ala Val Ile Phe Ser Leu Gln Gly Met Val Gly Ile Ile Leu Thr Ala     213719  GGG ATT ATT GGA TGG TGT AGT TTT TCT GCT TCC AAA ATA TTT ATT TCT     766214  Gly Ile Ile Gly Trp Cys Ser Phe Ser Ala Ser Lys Ile Phe Ile Ser     229767  GCA TTA GCC ATG GAA GGA CAG CAA CTT TTA GTA GCA TAT CCT TGC GCT     814230  Ala Leu Ala Met Glu Gly Gln Gln Leu Leu Val Ala Tyr Pro Cys Ala     245815  TTG TTA TAT GGA GTC TTT GCC CTG ATT TCC GTC TTT TGA AAA TTT ATC     862246  Leu Leu Tyr Gly Val Phe Ala Leu Ile Ser Val Phe ***                 258863  TGG GAT GTG GAC ATC AGT GGG CCA GAT GTA CAA AAA GGA CCT TGA ACT     910911  CTT ACA TTG GAC CAG CAA ACT GCT GCA GCG CAA CTC TCA TGC AGA TTT     958959  TAC ATT TGA CTG TTG GAG CAA TGA AAG TAA ACG TGT ATC TCT TGT TCA    10061007  TTT TTA TAG AAC TTT TGC ATA CTA TAT TGG ATT TAC CTG CGG TGT GAC         10541055  TAG CTT TAA ATG TTT GTG TTT ATA CAG ATA AGA AAT GCT ATT TCT TTC         11021103  TGG TTC CTG CAG CCA TTG AAA AAC CTT TTT CCT TGC AAA TTA TAA TGT         11501151  TTT TGA TAG ATT TTT ATC AAC TGT GGG AAA CCA AAC ACA AAG CTG ATA         11981199  ACC TTT CTT AAA AAC GAC CCA GTC ACA GTA AAG AAG ACA CAA GAC GGC         12461247  CGG GCG TGG TAG CTC ACG CCT GTA ATC CCA GCA CTT TGG GAG GCC GAG         12941295  GCG GGC GGA TCA CAA GGG CAG GAG ATC GAG ACC ATC CTG GTT AAC ACG         13421343  GTG AAA CCC CGA CTC TAC TAA AAC TAC AAA AAA ATT AGC TGG GCG TGG         13901391  TGG CGG GCG CCT GTA GTC CCA GCT ACT CAG GAG GCT GAG GCA GGA GAA         14381439  AAG TGT GAA CCC AGG AGG CGG AGC TTG CAG TGA GCC GAG ATC ACA CCA         14861487  CTG CAC TCC ATA CCA GCC TGG GTG ACA GGG TGA GAC TCT GTT TCA AAA         15341535  AAA AAA AAA AAA AA                                                      154811.PP14356A:核苷酸序列(SEQ ID NO:31)长度:12501  GAAAATCCTC AACAAAAATT TGCAAGTAGA ATCCAATAGT GTATAAAAAA AATTATACAC61  CACAACCAAA TACTGTAGCA TACCAAGTGT GTAGTATCCC AAGTATGTAA AACTGGTTCA121  GCATTCTAAA GTCAATTAAT GTCATCCATC ACATCGACAA ACTAAGGAAG AAAAAATGAC181  ATGATCATAT CAATAGATAC AGACAAAGTA TTTGTCAAAA TCCAACATCT ATATATGACA241  AAAGCTCTCA GTAAACTAGA AATATAGGGG AACTTCCTCA ACTTGATAAG GAATGTCTAT301  TAAAAAAACT ACAGTTAACA TCATACTTAA TGACGATAAA CTGTACAGAA GCTTTCTCAC361  TAAGATCAGA AACAAGCCAA ATATGTCATC TCTAATAAAC TTCTTTTCAA TGCCATGCTA421  GAAGCCCTCG CTAATACAAT AAATAAGACA AGTAAAGAAA ATAACAGGTA TACTGATTGG481  AAAGGAAGAA ATAAAAACTG TCTTTGTTCA CAGATGTCAT GATTGTCTAT GTAGAAAATC541  AAAAGAATTA ACAACAACAA CAACCAAAAA AAAAACTCCT GAAACTAATA AGTGAGTATA601  GTGAAGTTGC AGGGTACAAG GCTAATACAC AAAAGTCAAG TGCTTTCCTA TGTACCAACA661  ATGAACAAGT AGGATTTGAA TTTAAACACA TAATGCCATT TACATTAGCA CCACAAGAAT721  ACACAACACT TAGATATAAA AATCTAACAA CATATGTACA AGATTTATGT GAGGAAAAGT781  GCAAAACTCT AATGAAAGAA ATTAGAGATG ATCTAAATAA ATGGAGAGAT ATTCAACATT841  CATGGATAGG AAGACTCAAT ATTGTCAAGA TGTCAGTTCT TCCCAACTTG ATGTATATAT901  TCAATACAAT ACTAATCAAA ATCCTACAGA GTTATTTTGT GGATATTGAC AAACTAGTTC961  TAAAGTTTAT ATGTAGAGAC AAAAGACCCA GAATAGCCAA CGCAGTACTG AAGGAGAAGA1021  ACAAAGCCAG AGGACTGGCA CTACTTAACG TCAAGACTTA CCGTAAAGCG ACAGTAATCA1081  CGACAGTGTG GTATTTGTGA AAGAATAGAC CTCTACCAAT AGTTCAGTGG AATAAAATAG1141  AGGGCCTAGA AATAGACCCA CATAAATATA GTCAACTGAC CTTTGACAAA GCAGAAAACA1201  AAAGGTACTG GAACAACTGG ACAACCACAT GCAAAAAAAA AAAAAAAAAAB:核苷酸序列(SEQ ID NO:32)长度:1351     MPFTLAPQEY  TTLRYKNLTT  YVQDLCEEKC  KTLMKEIRDD  LNKWRDIQHS  WIGRLNIVKM61     SVLPNLMYIF  NTILIKILQS  YFVDIDKLVL  KFICRDKRPR  IANAVLKEKN  KARGLALLNV121     KTYRKATVIT TVWYLC.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO:33)  克隆号:PP14356起始编码子:693 ATG  终止编码子:1098 TGA  蛋白质分子量:16072.351   GA AAA TCC TCA ACA AAA ATT TGC AAG TAG AAT CCA ATA GTG TAT AAA      4748  AAA AAT TAT ACA CCA CAA CCA AAT ACT GTA GCA TAC CAA GTG TGT AGT      9596  ATC CCA AGT ATG TAA AAC TGG TTC AGC ATT CTA AAG TCA ATT AAT GTC     143144  ATC CAT CAC ATC GAC AAA CTA AGG AAG AAA AAA TGA CAT GAT CAT ATC     191192  AAT AGA TAC AGA CAA AGT ATT TGT CAA AAT CCA ACA TCT ATA TAT GAC     239240  AAA AGC TCT CAG TAA ACT AGA AAT ATA GGG GAA CTT CCT CAA CTT GAT     287288  AAG GAA TGT CTA TTA AAA AAA CTA CAG TTA ACA TCA TAC TTA ATG ACG     335336  ATA AAC TGT ACA GAA GCT TTC TCA CTA AGA TCA GAA ACA AGC CAA ATA     383384  TGT CAT CTC TAA TAA ACT TCT TTT CAA TGC CAT GCT AGA AGC CCT CGC     431432  TAA TAC AAT AAA TAA GAC AAG TAA AGA AAA TAA CAG GTA TAC TGA TTG     479480  GAA AGG AAG AAA TAA AAA CTG TCT TTG TTC ACA GAT GTC ATG ATT GTC     527528  TAT GTA GAA AAT CAA AAG AAT TAA CAA CAA CAA CAA CCA AAA AAA AAA     575576  CTC CTG AAA CTA ATA AGT GAG TAT AGT GAA GTT GCA GGG TAC AAG GCT     623624  AAT ACA CAA AAG TCA AGT GCT TTC CTA TGT ACC AAC AAT GAA CAA GTA     671 672  GGA TTT GAA TTT AAA CAC ATA ATG CCA TTT ACA TTA GCA CCA CAA GAA     7191                              Mer Pro Phe Thr Leu Ala Pro Gln Glu       9720  TAC ACA ACA CTT AGA TAT AAA AAT CTA ACA ACA TAT GTA CAA GAT TTA     76710  Tyr Thr Thr Leu Arg Tyr Lys Asn Leu Thr Thr Tyr Val Gln Asp Leu      25768  TGT GAG GAA AAG TGC AAA ACT CTA ATG AAA GAA ATT AGA GAT GAT CTA     81526  Cys Glu Glu Lys Cys Lys Thr Leu Met Lys Glu Ile Arg Asp Asp Leu      41816  AAT AAA TGG AGA GAT ATT CAA CAT TCA TGG ATA GGA AGA CTC AAT ATT     86342  Asn Lys Trp Arg Asp Ile Gln His Ser Trp Ile Gly Arg Leu Asn Ile      57864  GTC AAG ATG TCA GTT CTT CCC AAC TTG ATG TAT ATA TTC AAT ACA ATA     91158  Val Lys Met Ser Val Leu Pro Asn Leu Met Tyr Ile Phe Asn Thr Ile      73912  CTA ATC AAA ATC CTA CAG AGT TAT TTT GTG GAT ATT GAC AAA CTA GTT     95974  Leu Ile Lys Ile Leu Gln Ser Tyr Phe Val Asp Ile Asp Lys Leu Val      89960  CTA AAG TTT ATA TGT AGA GAC AAA AGA CCC AGA ATA GCC AAC GCA GTA    100790  Leu Lys Phe Ile Cys Arg Asp Lys Arg Pro Arg Ile Ala Asn Ala Val     1051008  CTG AAG GAG AAG AAC AAA GCC AGA GGA CTG GCA CTA CTT AAC GTC AAG    1055106  Leu Lys Glu Lys Asn Lys Ala Arg Gly Leu Ala Leu Leu Asn Val Lys     1211056  ACT TAC CGT AAA GCG ACA GTA ATC ACG ACA GTG TGG TAT TTG TGA AAG    1103122  Thr Tyr Arg Lys Ala Thr Val Ile Thr Thr Val Trp Tyr Leu ***         1361104  AAT AGA CCT CTA CCA ATA GTT CAG TGG AAT AAA ATA GAG GGC CTA GAA    11511152  ATA GAC CCA CAT AAA TAT AGT CAA CTG ACC TTT GAC AAA GCA GAA AAC    11991200  AAA AGG TAC TGG AAC AAC TGG ACA ACC ACA TGC AAA AAA AAA AAA AAA    12471248  AAA                                                                125012.PP14737A:核苷酸序列(SEQ ID NO:34)长度:10371  GGGCGGCCCC AACGGCCGTC CAGGACGTGG AGCGAAATGA GCTCGGGCGC TGACGGCGGC61  GGTGGCGCTG CGGTGGCGGC GCGGTCGGAC AAGGGCAGTC CCGGGGAGGA CGGTTTCGTC121  CCGTCGGCGC TGGGGACCCG CGAGCATTGG GATGCTGTCT ATGAGAGAGA ACTGCAAACT181  TTCCGAGAAT ATGGAGATAC AGGTGAAATC TGGTTTGGAG AAGAGAGTAT GAATCGACTA241  ATAAGGTGGA TGCAGAAACA CAAGATTCCA CTGGATGCTT CAGTGCTTGA TATTGGAACT301  GGAAATGGTG TTTTCCTGGT TGAACTTGTT GGCAAAATTT GGTTTCTCTA ATATTACTGG361  AATTGATTAC TCTCCTTCTG CAATTCAGCT TTCTGGAAGT ATTATAGAAA AAGAAGGTTT421  ATCTAACATT AAGTTAAAGG TAGAAGACTT TTTGAATCTC TCCACACAGC TGTCTGGATT481  TCATATTTGT ATTGACAAAG GGACTTTTGA TGCCATAAGC CTTAATCCTG ACAATGCAAT541  TGAGAAGAGG AAGCAATATG TGAAATCTCT CTCCAGGGTG TTGAAAGTAA AAGGCTTTTT601  TTCTAATAAC GTCATGTAAT TGGACCCAAG GAAGAGTTGC TAAATGAATT CAGTGAAGGA661  TTTGAACTTC TCGAAGAGCT ACCAACACCC AAGTTCAGCT TTGGAGGCAG ATCTGGAAAC721  AGTGTAGCAG CATTGGTTTT CCAAAAAATG TGAGACTTTT TCTTGGACGA ATTCAGGTAG781  CTACACAGAA TCTACACAGC AAAGTTAACC TGACACAGAA AATCCTTGTG CAAATAAATG841  CTTAGTAAGT ACACAGGATG CACATGTTGA ATAGAGTATA CTGGATTGGT GAAAGAAAAT901  AATAATAATG AGCATCTAAG TGGTTGGGTT TTAGAGATCA ATCAAGAATA ATTTTAATTT961  TCTTTTGTAT TTGAAATGTA AATAGTTTTC TTTTCGATTA AAAAAATTTC CTATAAAAAA1021  AAAAAAAAAA AAAAAAAB:核苷酸序列  (SEQ ID NO:35)  长度:1141     MLQCLILELE  MVFSWLNLLA  KFGFSNITGI  DYSPSAIQLS  GSIIEKEGLS  NIKLKVEDFL61     NLSTQLSGFH  ICIDKGTFDA  ISLNPDNAIE  KRKQYVKSLS  RVLKVKGFFS  NNVMC.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO:36)  克隆号:PP14737起始编码子:275ATG  终止编码子:617 TAA  蛋白质分子量:12777.241    G GGC GGC CCC AAC GGC CGT CCA GGA CGT GGA GCG AAA TGA GCT CGG      4647  GCG CTG ACG GCG GCG GTG GCG CTG CGG TGG CGG CGC GGT CGG ACA AGG      9495  GCA GTC CCG GGG AGG ACG GTT TCG TCC CGT CGG CGC TGG GGA CCC GCG     142 143  AGC ATT GGG ATG CTG TCT ATG AGA GAG AAC TGC AAA CTT TCC GAG AAT     190191  ATG GAG ATA CAG GTG AAA TCT GGT TTG GAG AAG AGA GTA TGA ATC GAC     238239  TAA TAA GGT GGA TGC AGA AAC ACA AGA TTC CAC TGG ATG CTT CAG TGC     2861                                                  Met Leu Gln Cys       4287  TTG ATA TTG GAA CTG GAA ATG GTG TTT TCC TGG TTG AAC TTG TTG GCA     3345  Leu Ile Leu Glu Leu Glu Met Val Phe Ser Trp Leu Asn Leu Leu Ala      20335  AAA TTT GGT TTC TCT AAT ATT ACT GGA ATT GAT TAC TCT CCT TCT GCA     38221  Lys Phe Gly Phe Ser Asn Ile Thr Gly Ile Asp Tyr Ser Pro Ser Ala      36383  ATT CAG CTT TCT GGA AGT ATT ATA GAA AAA GAA GGT TTA TCT AAC ATT     43037  Ile Gln Leu Ser Gly Ser Ile Ile Glu Lys Glu Gly Leu Ser Asn Ile      52431  AAG TTA AAG GTA GAA GAC TTT TTG AAT CTC TCC ACA CAG CTG TCT GGA     47853  Lys Leu Lys Val Glu Asp Phe Leu Asn Leu Ser Thr Gln Leu Ser Gly      68479  TTT CAT ATT TGT ATT GAC AAA GGG ACT TTT GAT GCC ATA AGC CTT AAT     52669  Phe His Ile Cys Ile Asp Lys Gly Thr Phe Asp Ala Ile Ser Leu Asn      84527  CCT GAC AAT GCA ATT GAG AAG AGG AAG CAA TAT GTG AAA TCT CTC TCC     57485  Pro Asp Asn Ala Ile Glu Lys Arg Lys Gln Tyr Val Lys Ser Leu Ser     100575  AGG GTG TTG AAA GTA AAA GGC TTT TTT TCT AAT AAC GTC ATG TAA TTG     622101  Arg Val Leu Lys Val Lys Gly Phe Phe Ser Asn Asn Val Met ***         115623  GAC CCA AGG AAG AGT TGC TAA ATG AAT TCA GTG AAG GAT TTG AAC TTC     670671  TCG AAG AGC TAC CAA CAC CCA AGT TCA GCT TTG GAG GCA GAT CTG GAA     718719  ACA GTG TAG CAG CAT TGG TTT TCC AAA AAA TGT GAG ACT TTT TCT TGG     766767  ACG AAT TCA GGT AGC TAC ACA GAA TCT ACA CAG CAA AGT TAA CCT GAC     814815  ACA GAA AAT CCT TGT GCA AAT AAA TGC TTA GTA AGT ACA CAG GAT GCA     862863  CAT GTT GAA TAG AGT ATA CTG GAT TGG TGA AAG AAA ATA ATA ATA ATG     910911  AGC ATC TAA GTG GTT GGG TTT TAG AGA TCA ATC AAG AAT AAT TTT AAT     958959  TTT CTT TTG TAT TTG AAA TGT AAA TAG TTT TCT TTT CGA TTA AAA AAA    10061007  TTT CCT ATA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA A                          1037

Claims (10)

1.一种分离的具有抑癌功能的人蛋白,其特征在于,它包含具有选自下组的氨基酸序列的多肽:SEQ ID NO:2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35;或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。
2.如权利要求1所述的多肽,其特征在于,该多肽是具有选自下组的氨基酸序列的多肽:SEQ ID NO:2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35。
3.一种分离的多核苷酸,其特征在于,它包含一核苷酸序列,该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少85%相同性:
(a)编码如权利要求1和2所述多肽的多核苷酸;
(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。
4.如权利要求3所述的多核苷酸,其特征在于,该多核苷酸编码的多肽具有选自下组的氨基酸序列:SEQ ID NO:2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35。
5.如权利要求3所述的多核苷酸,其特征在于,该多核苷酸的序列选自下组:
SEQ ID NO:3、6、9、12、15、18、21、24、27、30、33、36的编码区序列或全长序列。
6.一种载体,其特征在于,它含有权利要求3所述的多核苷酸。
7.一种遗传工程化的宿主细胞,其特征在于,它是选自下组的一种宿主细胞:
(a)用权利要求6所述的载体转化或转导的宿主细胞;
(b)用权利要求3所述的多核苷酸转化或转导的宿主细胞。
8.一种具有抑癌功能的人蛋白活性的多肽的制备方法,其特征在于,该方法包含:
(a)在适合表达具有抑癌功能的人蛋白的条件下,培养权利要求7所述的宿主细胞;
(b)从培养物中分离出具有抑癌功能的人蛋白活性的多肽。
9.一种能与权利要求1所述的具有抑癌功能的人蛋白特异性结合的抗体。
10.一种药物组合物,其特征在于,它含有安全有效量的权利要求1所述的多肽以及药学上可接受的载体。
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