CN1948502A - Trpc在抗肿瘤药物筛选中的应用及其抑制剂的药物用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种筛选通过TRPC离子通道抑制肿瘤细胞增殖的化合物的方法。本发明还公开了TRPC抑制剂用于制备治疗肿瘤的药物的用途。本发明首次证实了细胞上TRPC离子通道与肿瘤增殖的相关性，从而提供了通过抑制TRPC离子通道抑制肿瘤增殖的新途径。

Description

TRPC在抗肿瘤药物筛选中的应用及其抑制剂的药物用途
技术领域
本发明属于细胞生物学领域，涉及一种细胞离子通道，更具体的，本发明涉及TRPC离子通道对于抗肿瘤药物筛选方面的应用以及TRPC拮抗剂在制备治疗肿瘤药物方面的用途。
背景技术
细胞内钙稳态对于细胞正常生理活动至关重要，胞外钙离子进入胞内，以及胞内钙离子浓度上升会促进细胞的增殖和影响细胞周期[Kahl CR，Means AR.Endocr Rev.2003 Dec；24(6)：719-36.]。
TRP(transient receptor potential，瞬时受体电位通道)离子通道是最近发现的一大类离子通道家族。Montell等根据TRP离子通道家族中各个成员的序列同源性将这一家族分成了三类：TRPC、TRPM以及TRPV[Montell，C等，(2002b).Mol.Cell.9，229-231.]。有研究报道TRPM8和TRPV6在前列腺癌中高表达[Fixemer T等，Oncogene.2003 Oct 30；22(49)：7858-61；Tsavaler L等，Cancer Res.2001 May 1；61(9)：3760-9.]。TRPC根据序列的同源性以及功能的相似性分成TRPC1、TRPC4、TRPC5、TRPC3、TRPC6、TRPC7以及TRPC2。
最新报道证实，TRPC可以被生长因子，如表皮细胞因子(EGF)，脑源神经营养因子(BDNF)所激活[Li，H.S.等，(1999).Neuron 24，261-273；Bezzerides VJ等，Nat Cell Biol.2004 Aug；6(8)：709-20；Hisatsune C等，J Biol Chem.2004 Apr30；279(18)：18887-94.]，而此两种生长因子均与肿瘤细胞的增殖和肿瘤形成有关[Yarden Y等，Annual Reviews in Biochemistry 57 443-478.1988；Ullrich A等，Nature 309 418-425.1984]。
此外，有报导证实，TRPC1与bFGF介导的神经干细胞胞内钙升高和的增殖有关，同时TRPC6在原发性肺动脉高血压病人(idiopathic pulmonary arterialhypertension)的肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cell)高表达，并与此类细胞的增殖相关[Antoniotti S等，FEBS Lett.2002 Jan16；510(3)：189-95；Yu Y等，Proc Natl Acad Sci U S A.2004 Sep 21；101(38)：13861-6]。
目前，肿瘤的生长和增殖仍然是一个复杂而没有完整答案的问题，因此本领域迫切需要研究与肿瘤的生长和增殖有关的离子通道和相关途径，并开发针对相关途径或靶点从而抑制肿瘤细胞增殖的化合物。
发明内容
本发明的目的就是提供一种与肿瘤的生长和增殖有关的TRPC通道，并提供了通过该相关途径筛选抑制肿瘤细胞增殖的化合物等用途。
在本发明的第一方面，提供了一种筛选通过TRPC离子通道抑制肿瘤细胞增殖的化合物的方法，包括以下步骤：
(a)在测试组中，向表达TRPC离子通道的肿瘤细胞培养物中添加待筛选的候选物，并检测肿瘤细胞的增殖情况；
(b)将步骤(a)测试组中肿瘤细胞的增殖情况与对照组中肿瘤细胞的增殖情况进行比较，其中所述的对照组包括：未添加候选物且表达TRPC离子通道的肿瘤细胞培养物和添加候选物且不表达TRPC离子通道的肿瘤细胞培养物；
如果测试组中的肿瘤细胞的增殖在统计学上低于(优选显著低于)对照组，就表明该候选物是抑制肿瘤细胞增殖的化合物。
在本发明的一个优选例中，所述的TRPC离子通道为TRPC1、TRPC3或TRPC6。在本发明的更进一步的优选例中，所述的TRPC离子通道为TRPC3或TRPC6。
在本发明的一个优选例中，所述的肿瘤细胞选自：乳腺癌、子宫内膜癌、胶质瘤、卵巢透明细胞瘤、卵巢浆叶性腺癌、胶质母细胞瘤或卵巢内膜癌的细胞。
在本发明的第二方面，提供了一种TRPC抑制剂的用途，用于制备治疗肿瘤的药物。
在本发明的一个优选例中，所述的肿瘤可以是乳腺癌、子宫内膜癌、胶质瘤、卵巢透明细胞瘤、卵巢浆叶性腺癌、胶质母细胞瘤或卵巢内膜癌。
在本发明的一个优选例中，所述的TRPC抑制剂为TRPC1、TRPC3或TRPC6的抑制剂。在本发明的更进一步的优选例中，所述的TRPC离子通道为TRPC3或TRPC6。
在本发明的一个优选例中，所述的TRPC抑制剂是1-[β-[3-(4-甲氧基苯基)丙氧基]-4-对甲氧酚]-1-氢-咪唑盐酸盐(SK&F96365)。
在本发明的第三方面，提供了一种用所述的筛选通过TRPC离子通道抑制肿瘤细胞增殖的化合物的方法获得的可抑制肿瘤细胞增殖的化合物。
附图说明
图1显示了Western blot检测各TRPC通道亚型在肿瘤细胞株和肿瘤临床样本的表达情况。图1A，图1B
图2显示了各TRPC通道亚型相对于GAPDH的表达水平。
图3显示了TRPC通道在肿瘤临床样本中表达情况的免疫组化图。
图4显示了各种组织样品的DAB显色强弱。
图5显示了BDNF和EGF在肿瘤细胞SKOV3中可以诱发TRPC特性的内向电流。
图6显示了TRPC特性的内向电流的IV曲线分析。
图7显示了TRPC通道阻断剂抑制胶质瘤细胞U251和C6增殖，**p＜0.01。
表8显示了SK&F 96365可以将肿瘤细胞阻断在G2/M期。
图9显示了SK&F 96365对肿瘤细胞的G2/M期阻滞是时间依赖的。
图10显示了过表达野生型TRPC3、TRPC6，过表达突变型的TRPC3、TRPC6对肿瘤细胞增殖的阴性。
图11显示了TRPC3、TRPC6突变型抑制肿瘤细胞增殖。
具体实施方式
本发明人通过广泛而深入的研究，首次发现了：
1.胞外Ca2+离子是通过TRPC离子通道，具体是通过TRPC3以及TRPC6进入肿瘤细胞从而促进其生长和增殖的，证明肿瘤细胞的增殖与TRPC离子通道相关；
2.一些抑制TRPC通道或阻断从磷脂酶C(PLC)及三磷酸肌醇(InsP3)通路激活的TRPC通道的化合物能够抑制肿瘤细胞的增殖。
在此基础上完成了本发明。
在众多通道中，本发明人通过研究发现，TRPC通道家族(尤其是TRPC1、TRPC3以及TRPC6)在肿瘤细胞中是主要表达的(TRPC1、TRPC3和TRPC6的基因序列分别参见GeneBank中LOCUS NM_003304；LOCUS NM_003305和LOCUS NM_004621)，并且通过实验证明，TRPC3和TRPC6在乳腺癌、子宫内膜癌、胶质母细胞瘤、卵巢透明细胞瘤、卵巢浆叶性腺癌病人组织高表达，并在细胞水平证实，阻断TRPC通道，阻断了生长因子在肿瘤细胞上激活的TRPC类似的内向电流，并阻断肿瘤细胞的增殖。
基于本发明的新发现，TRPC离子通道有多方面的新用途。这些用途包括(但不限于)：筛选通过抑制TRPC离子通道进而抑制肿瘤生长的物质(如抑制剂或拮抗剂)。
这些初步筛选出的物质可构成一个筛选库，以便于人们最终可以从中筛选出能够有效抑制TRPC离子通道从而抑制肿瘤生长的相关药物。
TRPC离子通道的拮抗剂或抑制剂，可以施用于哺乳动物(包括人和非人哺乳动物)的个体，以抑制肿瘤细胞的增殖。通常，可将这些物质配制于无毒的、惰性的和药学上可接受的水性载体介质中，其中pH通常约为5-8，较佳地pH约为6-8，尽管pH值可随被配制物质的性质以及待治疗的病症而有所变化。配制好的药物组合物可以通过常规途径进行给药，其中包括(但并不限于)：肌内、静脉内、或皮下给药。
本发明还提供了一种组合物(如药物组合物)，它含有安全有效量的(a)TRPC离子通道的拮抗剂或抑制剂，以及(b)药学上可接受的载体或赋形剂。这些组合物可以抑制肿瘤细胞的生长和增殖。
通常，这类载体包括(但并不限于)：盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其组合。药物制剂应与给药方式相匹配。本发明的药物组合物可以被制成针剂形式，例如用生理盐水或含有葡萄糖和其他辅剂的水溶液通过常规方法进行制备。诸如片剂和胶囊之类的药物组合物，可通过常规方法进行制备。活性成分的给药量是治疗有效量，例如每天约0.1微克/千克体重-约10毫克/千克体重。
在本发明中，所述的“不表达TRPC离子通道”的细胞包括完全不表达TRPC离子通道的细胞以及包括低表达TRPC离子通道(低于正常表达量的20％，优选的为低于正常表达量的10％，更优选为低于正常表达量的5％)的细胞。所述不表达或低表达TRPC离子通道的细胞可以通过对正常表达TRPC离子通道的细胞的相应基因进行knockout处理来获得，或可以通过细胞筛选来获得。
本发明的主要优点在于：
首次证实了细胞上TRPC离子通道与肿瘤增殖的相关性，从而提供了通过抑制TRPC离子通道抑制肿瘤增殖的新途径。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York：Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1TRPC3及TRPC6在几种肿瘤样本中的高表达
采用常规的RT-PCR的方法，检测TRPC通道各亚型在一些肿瘤中的表达水平。使用的肿瘤细胞株为：胶质母细胞瘤(GBM，glioblastoma)、乳腺癌、子宫内膜癌、卵巢癌细胞株。
检测结果结果见图1，人胶质母细胞瘤U251(购于中国科学院细胞库)，A172(ATTC No.：CRL-1620)细胞株和大鼠胶质瘤细胞株C6(ATTC No.：CCL-107)，主要表达TRPC1、TRPC3和TRPC6通道(图1A)。乳腺癌细胞株MCF-7(ATTC No.：HTB-22)、卵巢癌细胞株SKOV3(ATTC No.：HTB-77)，和肝癌细胞株7721(购于中国科学院细胞库)与胶质母细胞瘤细胞株相似主要表达TRPC1、TRPC3和TRPC6通道，子宫内膜癌细胞株HEC-1A(ATTCNo.：HTB-112)主要表达TRPC1和TRPC6通道(图1B)。
同时，采用Alomone公司的TRPC3和TRPC6的抗体，Western blot结果显示，在5例乳腺癌病人中，与癌旁组织相比，TRPC3和TRPC6均高表达，特别是TRPC6(图1C)，相对于上样对照看家基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH，购于Sigma)，在有的样品中高出正常约30-200倍(图2)。
在3例胶质母细胞瘤(GBM)临床样本中，与癌旁组织相比，其中2例的TRPC6高表达，1例的TRPC3高表达(图1D)。同时本发明人也发现，与5例正常卵巢组织相比，8例卵巢透明细胞瘤(SAC，serous adenocarcinoma)病人组织中有6例高表达TRPC3和TRPC6(图1E)，并且，相对于上样对照看家基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)，在有的样品中高出正常约5-10倍(图2)。
在8例卵巢浆叶性腺癌(CCC，clear cell carcinoma)病人组织中有7例高表达TRPC3，6例高表达TRPC6(图1F)，并且，相对于上样对照看家基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)，在有的样品中TRPC3高出正常约10-20倍(图2)。
与5例正常子宫内膜组织相比，在9例子宫内膜瘤(EC，endometrialadenocarcinoma)病人组织中有6例高表达TRPC6，但这9例子宫内膜瘤病人TRPC3并未出现高表达(图1J)，相对于上样对照看家基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)，在有的样品中TRPC6高出正常约10-60倍(图2)。
为进一步证实TRPC通道高表达在肿瘤组织中，本发明人用TRPC6的抗体，采用免疫组织化学方法，观察乳腺癌和胶质母细胞瘤病人中TRPC6表达。如图3A所示，TRPC6在侵润性乳腺癌(IDC，invasive ductal carcinoma)和原位乳腺癌(DCIS，in ductal carcinoma in situ)中均有高表达，而在正常的乳腺小叶中表达很弱。如图3B所示，在GBM的样品中，TRPC6高表达于血管周边。根据DAB显色强弱，本发明人把样品分为强，中，阴性DAB显色，如图4所示，4例正常乳腺组织均为阴性，9例乳腺癌病人中有5例强阳性，2例中度呈色；3例正常脑组织中TRPC6着色均为阴性，9例GBM病人中有6例强阳性，1例中度呈色。
综上所述，在TRPC通道中，肿瘤细胞主要表达TRPC1、TRPC3和TRPC6。在胶质母细胞瘤、乳腺癌、子宫内膜癌、卵巢癌病人组织中TRPC3和TRPC6有高表达。
实施例2生长因子BDNF和EGF在肿瘤细胞SKOV3中可以诱发TRPC特性的内向电流
生长因子作为一种胞外的刺激，对于肿瘤细胞的增殖至关重要。生长因子是否通过TRPC通道引起胞外钙进入胞内，升高胞内钙浓度，以达到促进其增殖的目的目前尚不清楚。本发明人在卵巢癌细胞株培液中施加BDNF(购于Sigma)和EGF(购于Sigma)，如图5所示，BDNF和EGF均可在SKOV3上诱发一个缓慢内向电流。通过对其电流的IV曲线分析，此内向电流类似于TRPC的双向整流特性(图6A，6B)。并且发现，这种电流可以被TRPC通道阻断剂SK&F96365(1-[β-[3-(4-甲氧基苯基)丙氧基]-4-对甲氧酚]-1-氢-咪唑盐酸盐，C22H26N2O3·HCl，购于Calbiochem)所阻断。
本实施例的实验结果首次证实，生长因子在肿瘤细胞上能够诱发一个TRPC类似的内向电流。
实施例3TRPC通道阻断剂抑制胶质瘤细胞U251和C6增殖
实施例2证明了TRPC通道阻断剂SK&F96365阻断了生长因子在肿瘤细胞上诱发的TRPC类似的内向电流。本实施例进一步证实SK&F96365通过阻断TRPC通道来抑制肿瘤细胞的增殖。
具体的试验方法如下：在培养的胶质母细胞瘤C6细胞和U251细胞中分别加入10μM SK&F96365，与溶剂对照相比，SK&F96365可明显抑制两种肿瘤细胞的增殖。磷脂酶C(PLC)的激活和三磷酸肌醇(InsP3)作用于其内质网上的受体(IP3R)，可以激活TRPC通道[Montell，C.等，Mol.Cell.9，229-231.]。本发明人采用9μM PLC的抑制剂U73122(1-[6-[((17β)-3-甲氧雌-1，3，5[10]-三亚乙基四胺-17-基)氨基]己基]-1H-吡咯-2，5-二酮，C29H40N2O3，购于Calbiochem)，明显抑制了胶质母细胞瘤C6细胞和U251细胞的增殖，同时IP3R的抑制剂100μM 2APB(二苯基硼酸2-氨基乙酯(2-Aminoethyl diphenylborate，(C6H5)2BOCH2CH2NH2)，购于Calbiochem)也可明显抑制肿瘤细胞的增殖(图7)。
与之相反，本发明人用MK801(NMDA受体的阻断剂(5-甲基二氢二苯并环庚烯亚氨马来酸或其盐，C16H15N·C4H4O4，购于Sigma)、CNQX(AMPA受体的阻断剂，6-氰基-7-硝基喹喔啉-2，3-二酮，C9H4N4O4，购于Sigma)以及硝苯地平(Nifedipine，L-型钙通道的阻断剂，1，4-二氢-2，6-二甲基-4-(2-硝基苯)-3，5-吡啶羟酸二甲基酯，C17H18N2O6，购于Sigma)的混合物对胶质母细胞瘤C6细胞和U251细胞的增殖没有任何影响(图7)。图中，SKF＝SK&F96365；MCN＝MK801+CNQX+硝苯地平。
结果提示，阻断TRPC通道可抑制胶质母细胞瘤细胞增殖。
实施例4SK&F 96365可以将肿瘤细胞阻断在G2/M期
通过以上的实施例，本发明人证明了SK&F 96365可以抑制肿瘤细胞的增殖，为分析此药物对于细胞周期的影响，本发明人用SK&F 96365处理肿瘤细胞C6，24小时后测细胞周期。测试结果见图8，停留在S期和G0/G1期的细胞百分比降低，大部分细胞被阻断在了G2/M期。并且这种G2/M期阻滞是时间依赖性的，最早发生于SK&F 96365处理C6细胞9小时后(图9)。同样的实验也在卵巢内膜癌细胞系SKOV3，乳腺癌细胞系MCF-7，子宫内膜癌细胞系ISKWA(购于中国科学院细胞库)，肝癌细胞株HCGLM3(中国科学院细胞库)，以及胶质瘤细胞系U251和U87(ATTC No.：HTB-14)中进行，得到同样的结论，见表1。
                                    表1
  细胞系                                   细胞周期
        GC/G1期           S期          G2/M期
  对照   10μmSK&F96365   对照   10μmSK&F96365   对照   10μmSK&F96365
  SKOV3   47.99％   23.54％   36.63％   33.53％   15.38％   42.93％
  U87   64.19％   48.02％   21.99％   19.79％   13.81％   32.19％
  U251   47.4％   47.81％   41.52％   34.14％   11.05％   18.06％
  ISKWA   48.07％   18.87％   37.02％   33.95％   14.91％   47.18％
  MCF-7   39.86％   50.35％   34.44％   12.19％   25.69％   37.46％
  HCGLM3   57.39％   15.66％   30.44％   31.24％   12.17％   53.10％
这表明，通过阻断TRPC通道，可阻止细胞的Ca2+离子进入，从而将肿瘤细胞阻滞在G2/M期，进而抑制肿瘤细胞增殖。
实施例5过表达野生型TRPC3、TRPC6促进肿瘤细胞增殖，过表达突变型的TRPC3、TRPC6抑制肿瘤细胞克隆的形成
为进一步证实TRPC通道参与肿瘤细胞的增殖，本发明人首先胶质瘤细胞系C6上过表达野生型TRPC3(方法参见Vazquez G，Putney JW Jr.等，J BiolChem.2003；278(24)：21649-54.)，和野生型TRPC6(方法参见Hofmann，T.，，Gudermann，T.等，(2002).Proc.Natl.Acad.Sci.USA.99，7461-7466.)，转染后48小时后，采用3H-胸腺嘧啶核苷掺入法检测肿瘤细胞增殖情况。如图10所示，与对照组相比，过表达野生型TRPC3和TRPC6促进3H-胸腺嘧啶核苷掺入。图10中，WTC3＝野生型TRPC3，WTC6＝野生型TRPC6。
以野生型TRPC3序列为模板，通过PCR获得N端1-302氨基酸的野生型人TRPC3的PCR产物。将PCR产物插入pEGFP-N1质粒(购自Clontech)的多克隆位点，得到突变型人TRPC3(DNC3)。根据Hofmann，T.，Gudermann，T.等，(2002).Proc.Natl.Acad.Sci.USA.99，7461-7466中所述，可得到突变型TRPC6(DNC6)。与野生型相反，转染突变型的TRPC6抑制了3H-胸腺嘧啶核苷掺入，如图10所示。
随后，在将带有绿色荧光蛋(GFP)的两个突变型TRPC3和TRPC6(DNC3，DNC6)分别转入U251细胞系中，用G418药物筛选2周后，得到的稳定表达带有绿色荧光的DNC3和DNC6细胞株，用细胞计数的方法在35mm碟中种1000个细胞，2周后DNC3和DNC6绿色荧光的克隆的大小以及克隆的数目明显低于GFP对照(图11)。采用相似的方法，用DNC6在SKOV3上得到相似结果(图12)。
综上，在细胞水平采用基因操作结果进一步证实，TRPC3和TRPC6对于肿瘤细胞的增殖是必需的，因此可知，抑制TRPC3和TRPC6通道的药物能够抑制肿瘤细胞的增殖。
实施例6筛选通过TRPC离子通道抑制肿瘤细胞增殖的化合物
本实例中，候选物为：MK801，SK&F96365，U73122，CNQX，硝苯地平。
测试组：添加候选物且表达TRPC离子通道的肿瘤细胞(人胶质母细胞瘤U251)。
对照组：未添加候选物且表达TRPC离子通道的肿瘤细胞(人胶质母细胞瘤U251)。
包括以下步骤：
在测试组中，向表达TRPC离子通道的肿瘤细胞培养物中添加待筛选的候选物：MK801，SK&F96365，U73122，CNQX，硝苯地平，并检测肿瘤细胞的增殖情况。
将前述测试组中肿瘤细胞的增殖情况与对照组中肿瘤细胞的增殖情况进行比较，如果测试组中的肿瘤细胞的增殖在统计学上显著低于对照组(＜70％)，就表明该候选物是抑制肿瘤细胞增殖的化合物。
各组的肿瘤细胞抑制情况见表2。
表2
  MK801   CNQX   硝苯地平  SK&F96365   U73122
  测试组   -   -   -  +   +
  对照组   -   -   -  -   -
*“+”表示肿瘤细胞的增殖显著受到抑制；“-”表示肿瘤细胞的增殖没有受到抑制。
结果表明，MK801，CNQX，DNQX，硝苯地平不能抑制肿瘤细胞的增殖，而SK&F96365，U73122能够抑制肿瘤细胞的增殖。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (10)

1.一种筛选通过TRPC离子通道抑制肿瘤细胞增殖的化合物的方法，其特征在于，包括步骤：
(a)在测试组中，向表达TRPC离子通道的肿瘤细胞培养物中添加待筛选的候选物，并检测肿瘤细胞的增殖情况；
(b)将步骤(a)测试组中肿瘤细胞的增殖情况与对照组中肿瘤细胞的增殖情况进行比较，其中所述的对照组包括：未添加候选物且表达TRPC离子通道的肿瘤细胞培养物和添加候选物且不表达TRPC离子通道的肿瘤细胞培养物；
如果测试组中的肿瘤细胞的增殖在统计学上低于对照组，就表明该候选物是抑制肿瘤细胞增殖的化合物。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的TRPC离子通道为TRPC1、TRPC3或TRPC6。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的TRPC离子通道为TRPC3或TRPC6。
4.如权利要求1所述的的方法，其特征在于，所述的肿瘤细胞选自：乳腺癌、子宫内膜癌、胶质瘤、卵巢透明细胞瘤、卵巢浆叶性腺癌、胶质母细胞瘤或卵巢内膜癌的细胞。
5.一种TRPC抑制剂的用途，其特征在于，用于制备治疗肿瘤的药物。
6.如权利要求5所述的TRPC抑制剂的用途，其特征在于，所述的肿瘤为乳腺癌、子宫内膜癌、胶质瘤、卵巢透明细胞瘤、卵巢浆叶性腺癌、胶质母细胞瘤或卵巢内膜癌。
7.如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述的TRPC抑制剂为TRPC1、TRPC3或TRPC6的抑制剂。
8.如权利要求7所述的用途，其特征在于，所述的TRPC抑制剂为TRPC3或TRPC6的抑制剂。
9.如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述的TRPC抑制剂是1-[β-[3-(4-甲氧基苯基)丙氧基]-4-对甲氧酚]-1-氢-咪唑盐酸盐。
10.一种用权利要求1所述的方法获得的通过TRPC离子通道抑制肿瘤细胞增殖的化合物。
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