CN1939499B - 吉祥草提取物及其制备方法、药物组合物和用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种吉祥草提取物及其制备方法、药物组合物和用途。吉祥草提取物是将新鲜采集的吉祥草全草晾干粉碎，得到吉祥草粗粉，然后用有机溶剂、含水有机溶剂或水加热回流或渗滤提取2～4次，提取液浓缩干燥后得到的。本发明吉祥草提取物具有明显的抗溶血及祛痰、抗炎、止咳作用。特别是对上呼吸道、气管及支气管疾病，如急性上呼吸道感染、上气道阻塞、支气管扩张症、弥漫性泛细支气管炎、支气管哮喘有治疗作用；同时对肺炎疾病如链球菌肺炎、葡萄球菌肺炎、克雷白杆菌肺炎、常见革兰阴性杆菌肺炎具有治疗作用。

Description

吉祥草提取物及其制备方法、药物组合物和用途

技术领域：本发明涉及一种吉祥草提取物及其制备方法、药物组合物和用途，属于药物技术领域。

背景技术：吉祥草又名观音草，为百合科植物吉祥草Reineck carnea(Andr.)kunh[Sansevier Andr]的干燥全草。它是我国西南地区常用的传统草药之一，具有悠久的药用历史。根据民间用药经验，其全草可药用，具有清肺止咳，凉血止血，解毒利咽等功能。吉祥草既可单用，也可入复方。在苗族民间，吉祥草与紫菀、鱼腥草、罂粟壳、麻黄等配伍，用于急慢性支气管炎、肺气肿等，症见于咳喘、胸闷、痰多。

目前，吉祥草的提取一般采用的是常规的水提醇沉法或醇提法，但对于吉祥草提取物的药理学研究尚未见报道。申请人经过广泛深入的研究发现，通过将吉祥草用有机溶剂、含水有机溶剂或水在一定条件下提取得到的吉祥草提取物具有抗溶血及止咳、化痰、抗炎作用，并显示出良好的治疗上呼吸道、气管及支气管疾病和肺炎疾病的作用。

发明内容：

本发明的目的在于：提供一种吉祥草提取物及其制备方法、药物组合物和用途。本发明吉祥草提取物具有显著的抗溶血及止咳、化痰、抗炎作用，特别是对急性上呼吸道感染、上气道阻塞、支气管扩张症、弥漫性泛细支气管炎、支气管哮喘、链球菌肺炎、葡萄球菌肺炎、克雷白杆菌肺炎、革兰阴性杆菌肺炎具有治疗作用。

本发明是这样实现的：吉祥草提取物的制备方法为：将新鲜采集的吉祥草全草晾干粉碎，得到吉祥草粗粉，然后用有机溶剂、含水有机溶剂或水加热回流或渗滤提取2～4次，提取液浓缩干燥后得到吉祥草提取物。

所述的有机溶剂为甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、丙酮、三氯甲烷、二氯甲烷、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙醚、石油醚或汽油。

具体的说，吉祥草水提取物的制备方法为：取吉祥草适量，粉碎成粗粉，加10倍量水煎煮2次，第一次2小时，第二次1.5小时，滤过，合并滤液，浓缩至60℃测相对密度为1.30，放冷，加入乙醇使含醇量为70％，静置过夜，取上清液减压浓缩至相对密度为1.25的稠膏，75℃减压干燥，即得。

吉祥草醇提取物的制备方法为：取吉祥草适量，粉碎成粗粉，加8倍量75％的乙醇回流提取2次，每次2小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，余液浓缩至相对密度为1.25的稠膏，减压干燥，即得。

按上述吉祥草提取物制备方法提取得到的吉祥草提取物。

由上述吉祥草提取物组成的药物组合物：包括作为活性成分的吉祥草提取物和一种或多种药用载体或赋形剂。

本发明吉祥草提取物用于制备治疗上呼吸道、气管及支气管疾病的药物。

所述的上呼吸道、气管及支气管疾病为急性上呼吸道感染、上气道阻塞、支气管扩张症、弥漫性泛细支气管炎或支气管哮喘。

本发明吉祥草提取物用于制备治疗肺炎疾病的药物。

所述的肺炎疾病为链球菌肺炎、葡萄球菌肺炎、克雷白杆菌肺炎或常见的革兰阴性杆菌肺炎。

本发明吉祥草提取物可单独或以药物组合物形式使用，因此还涉及含有作为活性成份的有效剂量的吉祥草提取物以及常规药物赋形剂或辅剂的药物组合物。通常本发明药物组合物含有0.1-90％重量的吉祥草提取物。药物组合物可根据本领域已知的方法制备。如果需要，可将吉祥草提取物与一种或多种固体或液体药物赋形剂和/或辅剂结合，制成可作为人用的适当的施用形式或剂量形式。

本发明的吉祥草提取物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、腹膜或直肠等。给药剂型例如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、脂质体、透皮剂、口含片、检剂、膏剂、贴剂、注射剂、冻干粉针剂等。可以是普通制剂、缓释制剂、控释制剂及各种微粒给药系统。为了将单位给药剂型制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体：例如稀释剂与吸收剂，如淀粉、糊精、硫酸钙、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝等；湿润剂与粘合剂，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，如干燥淀粉、海藻酸盐、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等；崩解抑制剂，如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油等；吸收促进剂，如季铵盐、十二烷基硫酸钠等；润滑剂，如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片、多层片。为了将给药单元制成丸剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体：例如稀释剂与吸收剂，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氮化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、高岭土、滑石粉等；粘合剂如阿拉伯胶、黄蓍胶、明胶、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解剂，如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸盐、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。为了将给药单元制成检剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体：例如聚乙二醇、卵磷脂、可可脂、高级醇、高级醇的酯、明胶、半合成甘油酯等。为了将给药单元制成胶囊，将有效成分吉祥草提取物与上述的各种载体混合，并将由此得到的混合物置于硬的明胶囊或软胶囊中。也可将有效成分吉祥草提取物制成微囊剂，混悬于水性介质中形成混悬剂，亦可装入硬胶囊中或制成注射剂应用。为了将给药单元制成注射用制剂，如溶液剂、乳剂、冻干粉针剂和混悬剂，可以使用本领域常用的所有稀释剂，例如水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，为了制备等渗注射液，可以向注射用制剂中添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油，此外，还可以添加常规的助溶剂、缓冲剂、pH调节剂等。

此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或其它材料。

本发明吉祥草提取物的给药剂量取决于许多因素，例如所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的性别、年龄、体重及个体反应，所用的具体化合物，给药途径及给药次数等。上述剂量可以单一剂量形式或分成几个，例如二、三或四个剂量形式给药。

为了验证本发明制备方法的合理性，申请人对吉祥草的提取工艺进行了试验研究和筛选，具体如下：

一、吉祥草水提取工艺的研究

影响煎煮的主要因素有：药材粉碎粒度、煎煮次数、加水量及煎煮时间等，申请人经过研究发现：通过以下方法优选出的提取工艺可以认为是吉祥草的最佳水提取工艺，所得的提取物疗效最好。

取吉祥草药材适量，按下表1试验，以出膏率及吉祥草的药理活性评分作为评价指标进行提取工艺的优选，结果见表2、表3：

表1吉祥草提取工艺研究的因素水平表

表2吉祥草提取工艺优选结果表

表3正交试验方差分析表

方差来源	SS	自由度	变异均方	统计量F	显著性
						A	2.2022	2	1.1011	5.5000
B	13.5273	2	6.7637	33.7845	P＜0.05

方差来源	SS	自由度	变异均方	统计量F	显著性
						C	14.4273	2	7.2137	36.0322	P＜0.05
D(误差)	0.4004	2	0.2002	1
						总计	30.5572	8

注：F_0.05(2，2)＝19.00

研究结果表明：各因素对吉祥草水提取工艺影响大小的顺序为：C＞B＞A＞D，其中B、C两个因素有显著性差异，B2＞B3＞B1，C2＞C3＞C1，因此，提取次数选2次，加水量选10倍；A、D两个因素没有显著性差异，但考虑到生产实际，选择粗粉，以方便过滤提取液，煎煮时间第一次定为2小时，第二次定为1.5小时。

因此，吉祥草水提取物的最佳提取工艺为：取吉祥草适量，粉碎成粗粉，加10倍量的水煎煮2次，第一次2小时，第二次1.5小时，滤过，合并滤液。

吉祥草药材经水提浓缩后，除杂相当关键，申请人采用不同浓度的乙醇进行醇沉以除去杂质，方法如下：

取吉祥草粗粉，按优选的水提煎煮条件煎煮提取，减压浓缩(60-75℃，-0.08Mpa)至相对相密度1.30(60℃)，摇匀，量取一定量浓缩液，加乙醇，使乙醇含量为60％、70％、80％，醇沉24小时，取上清液减压回收乙醇，挥干，减压干燥(65-80℃，-0.08Mpa)，称醇提物重量；醇沉物减压干燥(65-80℃，-0.08Mpa)，称杂质重量。测定醇提物的药理活性，试验结果见表4。

表4除杂工艺研究结果表

序号	药液量(ml)	含醇量(％)	醇提物量(g)	醇沉物量(g)	药理活性评分
						1	125	60	11.4785	7.5014	89
2	125	80	10.5632	8.1212	88
						3	125	70	10.4125	8.7145	90
4	125	0	19.6205	0	86

研究结果表明：醇沉浓度为70％时，除去的杂质最多，同时药理活性最高，因此，选用70％的乙醇浓度作为去除杂质的浓度。

浓缩工艺的研究：申请人考察了减压浓缩和常压浓缩两种方法，经过优选发现，减压浓缩和常压浓缩两种方法比较，减压浓缩较常压浓缩快，节约时间，且药理活性比常压浓缩高，因此，选择减压浓缩作为本提取物制备的浓缩方法。

干燥工艺：申请人研究发现，干燥温度对提取物的药理活性有一定的影响，本提取物在75℃减压干燥的药理活性最好，因此，选择75℃减压干燥作为本提取物的干燥方法。

二、吉祥草醇提取工艺的研究

影响提取的主要因素有：提取次数、溶媒用量、溶媒浓度及提取时间等，申请人经过研究发现：通过以下方法优选出的提取工艺可以认为是吉祥草的最佳醇提取工艺，所得的提取物疗效最好。

取吉祥草药材适量，粉碎成细粉，按表5进行试验，结果见表6、表7：

表5吉祥草醇提取工艺研究的因素水平表

表6吉祥草醇提取工艺优选结果表

表7正交试验方差分析表

方差来源	SS	自由度	变异均方	统计量F	显著性
						A	2.7236	2	1.3618	4.9145
B	12.1023	2	6.0512	21.8374	P＜0.05
						C	14.3457	2	7.1729	25.8854	P＜0.05
D(误差)	0.5542	2	0.2771	1

方差来源	SS	自由度	变异均方	统计量F	显著性
						总计	29.7258	8

注：F_0.05(2，2)＝19.00

研究结果表明：各因素对吉祥草醇提取工艺影响大小顺序为：C＞B＞A＞D，通过直观分析，选择C2、B2、A2、D2作为最佳提取工艺，即：吉祥草适量，粉碎成粗粉，加8倍量75％的乙醇回流提取2次，每次2小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，余液浓缩至相对密度为1.25的稠膏，减压干燥，即得吉祥草醇提取物。

为了确保本发明的效果，申请人对所述吉祥草提取物进行了生物活性实验，具体如下：

观察指标：兔血红细胞溶血实验(抗溶血作用)；小鼠氨水引咳法及气管酚红排泌法实验(止咳及化痰作用)；小鼠耳壳二甲苯致肿法、小鼠腹腔毛细血管通透法实验(抗炎作用)。

该生物活性实验所采用的吉祥草提取物均为用乙醇作为提取溶剂得到的提取物。

1.吉祥草提取物对兔血红细胞溶血实验的影响：

方法及结果：取日本大耳兔1只，耳静脉取血20ml置于三角烧瓶中，除去纤维蛋白后转入刻度离心管中，加入生理盐水10ml，混匀后离心(2500r/min)5min，除去上清夜，再加入适量生理盐水离心。如此重复4次至上清液无色澄明。用生理盐水配成2％的红细胞混悬液。取试管9支，分别加入生理盐水(NS)、蒸馏水及生理盐水配制的吉祥草提取物不同浓度药液(0.5mg/ml、1mg/ml、2mg/ml、3mg/ml、4mg/ml、5mg/ml、10mg/ml)，置37℃水浴中保温，每30min观察1次结果，观察1h。

实验结果(表8)表明，剂量小于5mg/ml吉祥草提取物表现为不溶血，剂量大于10mg/ml开始表现出一定的溶血性。

表8吉祥草提取物对兔血红细胞溶血实验的影响

注：①第1～6管、NS管不溶血，第7管微溶血，第9管溶血；②“-”表示不溶血，“+”表示溶血。

2.吉祥草提取物对小鼠氨水引咳法的影响：

方法及结果：取小鼠40只，体重(22±2)g，雄性，随机分4组。设空白对照组(生理盐水0.4ml/只，灌胃给药)，2组药物组(吉祥草提取物100mg/kg、200mg/kg，灌胃给药)；阳性药物组(新泰络其0.2ml/10g，灌胃给药)；各组每天给药2次，连续3d，末次给药后40min，分别将小鼠置于倒置的5L密闭容器中，给予超生雾化氨水熏蒸15s后(50ml/次，一熏一换氨水，每次熏2只小鼠)，记录小鼠1min内的咳嗽次数和潜伏期。结果见表9。

结果表明：吉祥草提取物对氨水所致小白鼠咳嗽反应能延长咳嗽潜伏期，使咳嗽次数减少。

表9止咳作用对比表

注：**P＜0.01

3.吉祥草提取物对小鼠耳壳二甲苯致肿的影响：

方法及结果：昆明种小白鼠40只，随机分为4组，每组10只，即空白对照组(生理盐水0.4ml/只，灌胃)、阳性对照组(地塞米松，0.5mg/kg，皮下注射给药)、吉祥草提取物低、高剂量组，剂量分别为100mg/kg、200mg/kg(灌胃)；各组每天给药1次，连续3d，末次给药后40min，每鼠右耳均匀涂二甲苯50μl，致炎后1h脱椎处死，沿耳廓剪下二耳，用8mm打孔器分别在左、右耳同一部位打下圆耳片，称重，计算左、右耳片重量之差作为肿胀度，结果见表10。

结果表明：吉祥草提取物能明显抑制二甲苯致小鼠耳廓肿胀。

表10对小鼠耳壳二甲苯致肿的影响

组别	剂量	动物数(只)	耳廊肿胀度(mg)
				空白对照组	0.4ml/只	10	6.94±3.12
阳性对照组	0.5mg/kg	10	2.11±0.06**
				吉祥草低剂量组	100mg/kg	10	2.27±0.41**
吉祥草高剂量组	200mg/kg	10	2.21±0.15**

注：**P＜0.01

4.吉祥草提取物对小鼠毛细血管通透性的影响：

方法及结果：取小鼠70只，体重22±2g，雄性，随机分4组。设空白对照组(生理盐水灌胃给药)；2组药物组(100mg/kg，200mg/kg，灌胃给药)；地塞米松(阳性药0.5mg/kg，皮下注射给药)；各组每天给药1次，连续3d，末次给药后40min，每鼠尾静脉注射2g/dl伊文思蓝生理盐水溶液0.1ml/10g，立即腹腔注射0.6％醋酸0.2ml/只，20min后，脱椎处死小鼠，剪开腹腔，用5ml生理盐水冲洗腹腔数次，收集洗涤液，离心(1000r/min)5min，用分光光度计于波长590nm处测定吸收值。结果见表11：

表11口服吉祥草提取物对小鼠毛细血管通透性的影响

组别	剂量	动物数(只)	吸光值
				空白对照组	0.4ml/只	10	0.256±0.087
阳性对照组	0.5mg/kg	10	0.135±0.061**
				吉祥草低剂量组	100mg/kg	10	0.211±0.054*
吉祥草高剂量组	200mg/kg	10	0.202±0.074*

*p＜0.05，**p＜0.01(与空白对照组比较)

结果表明：吉祥草提取物能够使小鼠的毛细血管通透性增加。

5.吉祥草提取物对气管酚红排泌法试验的影响：

方法及结果：取小鼠40只，体重22±2g，雄性，随机分4组，设空白对照组(生理盐水0.4ml/只，灌胃给药)，2组药物组(100mg/kg，200mg/kg灌胃给药)，氯化铵(阳性药0.2g/kg，灌胃给药)，连续3d，末次给药后1h，ip5％酚红0.1ml/10g，0.5h后处死动物，剥离气管周围组织，剪下自甲状软骨下至气管分支处的一段气管，放入盛有2ml生理盐水的试管中，再加入1mol/LNaOH 0.1ml，用分光光度计于波长546nm处测吸光度(A)值，A越大，表示酚红排泌量越多，提示药物的祛痰作用越大。结果见表12：

结果表明：吉祥草提取物具有明显的祛痰作用。

表12吉祥草提取物对气管酚红排泌法试验的影响

组别	剂量	动物数(只)	吸光值
				空白对照组	0.4ml/只	10	0.234±0.077
阳性对照组	0.5mg/kg	10	0.535±0.043**
				吉祥草低剂量组	100mg/kg	10	0.411±0.074*
吉祥草高剂量组	200mg/kg	10	0.435±0.068*

注：*p＜0.05，**p＜0.01(与空白对照组比较)

结论：上述五个实验结果表明，吉祥草提取物具有明显的抗溶血及祛痰、抗炎、止咳作用。特别是对上呼吸道、气管及支气管疾病，如急性上呼吸道感染、上气道阻塞、支气管扩张症、弥漫性泛细支气管炎、支气管哮喘有治疗作用；同时对肺炎疾病如链球菌肺炎、葡萄球菌肺炎、克雷白杆菌肺炎、常见革兰阴性杆菌肺炎具有治疗作用。

具体实施方式：

本发明的实施例1：吉祥草水提取物的制备：

取吉祥草干品10kg，粉碎成粗粉，加10倍量水煎煮2次，第一次2小时，第二次1.5小时，滤过，合并滤液，浓缩至60℃测相对密度为1.30，放冷，加入乙醇使含醇量为70％，静置过夜，取上清液减压浓缩至相对密度为1.25的稠膏，75℃减压干燥，即得吉祥草水提取物490g。

本发明的实施例2：吉祥草乙醇提取物的制备：

取吉祥草干品10kg，粉碎成粗粉，加8倍量75％的乙醇回流提取2次，每次2小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，余液浓缩至相对密度为1.25的稠膏，减压干燥，即得吉祥草乙醇提取物510g。

本发明的实施例3：吉祥草石油醚提取物的制备：

将吉祥草干品10kg粉碎后，用石油醚加热回流提取，每次用石油醚40L，提取3次，合并提取液，减压蒸发至干，得到石油醚提取物390g。

本发明的实施例4：吉祥草乙酸乙酯水溶液提取物的制备：

将吉祥草干品10kg粉碎后，用乙酸乙酯水溶液加热回流提取，每次用乙酸乙酯水溶液60L，提取2次，合并提取液，减压蒸发至干，得到乙酸乙酯水溶液提取物354g。

本发明的实施例5：吉祥草三氯甲烷提取物的制备：

将吉祥草干品10kg粉碎后，用三氯甲烷渗滤提取，每次用三氯甲烷30L，提取4次，合并提取液，减压蒸发至干，得到三氯甲烷提取物330g。

本发明的实施例6：含吉祥草提取物的药物组合物1：

按下述配比称取原料：吉祥草30g、杏仁10g。按传统汤液制备方法制备汤液，每日一剂，连续7日，用于治疗上呼吸道、气管及支气管疾病如急性上呼吸道感染、上气道阻塞、支气管扩张症、弥漫性泛细支气管炎或支气管哮喘。

本发明的实施例7：含吉祥草提取物的药物组合物2：

按下述配比称取原料：吉祥草250g、黄芪150g、白术120g、茯苓120g、甘草120g、贝母120g、射干60g。以上七味，加水煎煮二次，每次2小时，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20(60℃)，加乙醇至浓度为70％，静置过夜，取上清夜，浓缩，减压干燥，加入淀粉等辅料适量，采用常规工艺压制成1000片。本制剂口服，每次2-4片，每日三次，用于治疗肺炎疾病如链球菌肺炎、葡萄球菌肺炎、克雷白杆菌肺炎或常见的革兰阴性杆菌肺炎。

本发明的实施例8：吉祥草提取物单方制剂：

称取吉祥草提取物180g、植物油141.12g、蜂蜡2.88g混匀，用胶体研磨机研磨均匀，用压制法罐装成软胶囊，制成1000粒，每粒0.36g。本制剂口服，一次2-4粒，一日3次。用于治疗咳嗽、咯血、吐血、咽喉肿痛等。

Claims (7)

1.吉祥草提取物的制备方法，其特征在于：将新鲜采集的吉祥草全草晾干，粉碎成粗粉，加10倍量水煎煮2次，第一次2小时，第二次1.5小时，滤过，合并滤液，浓缩至60℃测相对密度为1.30，放冷，加入乙醇使含醇量为70％，静置过夜，取上清液减压浓缩至相对密度为1.25的稠膏，75℃减压干燥，即得吉祥草水提取物。

2.如权利要求1所述吉祥草提取物的制备方法提取得到的吉祥草水提取物。

3.如权利要求2所述的吉祥草水提取物组成的药物组合物，其特征在于：包括作为活性成分的吉祥草水提取物和一种或多种药用载体或赋形剂。

4.如权利要求2所述的吉祥草水提取物在制备治疗上呼吸道、气管及支气管疾病的药物中的用途。

5.按照权利要求4所述吉祥草水提取物的用途，其特征在于：所述的上呼吸道、气管及支气管疾病为急性上呼吸道感染、上气道阻塞、支气管扩张症、弥漫性泛细支气管炎或支气管哮喘。

6.如权利要求2所述的吉祥草水提取物在制备治疗肺炎疾病的药物中的用途。

7.按照权利要求6所述吉祥草水提取物的用途，其特征在于：所述的肺炎疾病为链球菌肺炎、葡萄球菌肺炎、克雷白杆菌肺炎或常见的革兰阴性杆菌肺炎。