CN1920537A - 水稻籽粒铁含量快速测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开的水稻籽粒铁含量快速测定方法,简述如下:将水稻籽粒磨粉,过60目筛;用盐酸溶液浸提米粉中的铁,获得含铁溶液,经染色后,于可见分光光度计上516nm处比色,根据铁标准溶液曲线计算水稻籽粒中铁含量。本发明方法具有快速,准确,成本低,便于操作的优点。
Description
技术领域
本专利涉及水稻籽粒中铁含量的快速测定方法。
背景技术
水稻是世界上第二大粮食作物,全球有20亿以上人口以稻米为主食。长期以来,稻米一直我国人民营养和能量的主要来源,随着稻米消费量的不断增长,其营养问题也日益暴露出来。WHO数据显示,世界上有近37亿人口缺铁,其中1.5亿人患有铁缺乏性贫血,且多缺铁性贫血多发生于婴幼儿和怀孕妇女。缺铁严重的影响到儿童智力发育,因此日粮中含有适量的铁十分重要。为此世界范围内开展了一系列的针对铁缺乏的预防工作,其中包括强化铁食物、育种高铁富集作物等。在我国水稻是主要人类口粮,因此水稻中铁是人体铁获取的主要来源。近年来我国植物育种学家努力致力于高铁富集水稻品种的研究。不同水稻品种中的铁含量变化很大,其性状主要受相关基因的控制。控制高铁含量的基因已经在第7,8,9染色体上得到证实,总表现变异的19%~30%受这些基因的控制。通过杂交育种等技术培育出高铁含量的新品种,对全面改善铁营养具有广阔的发展前景。中国具有丰富的水稻种质资源,高铁种质资源筛选涉及区域广、工作量大。因此,快速的、准确的测定作物中铁含量对育种者来说显得尤为重要。传统的化学方法存在简便特点,但由于操作过程易污染或试剂应用不当等原因,造成测定结果偏差过大,无法正确衡量水稻籽粒铁含量。较为准确的原子吸收色谱法和能够痕量测定ICP-MS法均存在处理过程复杂,耗时,成本高等缺点,并不受育种工作者欢迎。对于育种工作者来说并不需要极其精确的掌握水稻籽粒铁含量,只需要相对的准确便可达到对育种材料铁含量的了解。因此,研究该水稻籽粒铁含量快速测定方法对育种工作铁富集种质材料筛选具有重要意义。
发明内容
本发明的目的是为育种工作中快速测定水稻籽粒铁含量提供一个快速、准确的方法。
本发明提供的水稻籽粒铁含量快速测定方法,包括以下步骤:
1)将水稻籽粒用石英磨粉机制粉,过60目筛;
2)称取0.5g粉碎装入离心管,按米粉与盐酸溶液质量体积比1∶200加入摩尔浓度为2M盐酸溶液,振荡30~60min后,离心;
3)取上清液过0.45um滤膜,吸取2mL滤液置于比色管中,加入0.5mL10%的氯化羟胺和1.5mL醋酸缓冲液,静置5min,5N的NaOH溶液调pH值到4.0-4.5,静置5min后,加入0.5mL临联吡啶染色液,充分混匀后,于可见分光光度计上516nm处比色,并根据铁标准溶液曲线计算铁含量;
上述醋酸缓冲液的配制:取41.5g无水醋酸钠用去离子水完全溶解后,加入12mL醋酸,用去离子水稀释定容至500mL;
上述临联吡啶染色液的配制:取54.4g三水醋酸钠、0.1g临联吡啶,然后加入50mL去离子水,完全溶解后用去离子水定容至100mL。
本发明中的铁标准溶液曲线是用市售的铁标液按如下浓度梯度:0、0.5、1、1.5、2、3ppm配制。
本发明方法具有快速,准确,成本低,便于操作的优点。
具体实施方式
已知IR68144水稻品种,本实验室采用ICP-MS测定含铁量为18.6mg/kg。
利用本发明方法测定同样IR68144水稻籽粒铁含量,包括以下步骤:
1)将水稻籽粒经脱壳处理后,取籽粒30-40粒于石英磨粉机上震荡研磨,得到米粉,过60目筛即可。以上过程应避免接触含铁器具。
2)称取0.5g米粉,放入25mL圆底塑料具塞离心管中。用移液管吸取10mL2M的盐酸溶液,加入离心管中,塞紧管塞,用食指小心弹击离心管底部,使米粉充分混入盐酸溶液。然后将离心管置于振荡器上震荡30min后离心,离心速率为4000r/min。
3)取上清液过0.45um滤膜,用移液枪准确吸取2mL过滤液,加入干净比色管中;然后,用移液枪准确吸取0.5mL10%的氯化羟胺,用手轻轻摇动比色管使其充分混合后,静止放置5min;然后用2mL移液枪吸取1.5mL醋酸缓冲液,用手混匀;用1mL移液枪吸取0.6mL5N的氢氧化钠溶液,把pH调到4.5,以上步骤完成后,静止5min,使溶液pH稳定;然后用移液枪吸取0.5mL临联吡啶染色液加入该溶液中,用手混匀,静止30min充分染色后,于可见分光光度计上516nm比色,根据用市售的铁标准液配制的该浓度为0、0.5、1、1.5、2、3ppm的梯度曲线。并按如下公式计算的铁含量为19.8mg/kg。
籽粒中铁含量(mg/kg)=(根据标准曲线算出的测试溶液铁含量×10mL/称样重)×1000
上述醋酸缓冲液的配制:取41.5g无水醋酸钠用去离子水完全溶解后,加入12mL醋酸,用去离子水稀释定容至500mL;
上述临联吡啶染色液的配制:取54.4g三水醋酸钠、0.1g临联吡啶,然后加入50mL去离子水,完全溶解后用去离子水定容至100mL。
以上所用玻璃仪器在使用前需用盐酸溶液浸泡过夜。
试验表明,采用本发明方法与用ICP-MS测定水稻籽粒含铁量接近。
Claims (1)
1.水稻籽粒铁含量快速测定方法,其特征是包括以下步骤:
1)将水稻籽粒用石英磨粉机制粉,过60目筛;
2)称取0.5g米粉装入离心管,按米粉与盐酸溶液质量体积比1∶200加入摩尔浓度为2M盐酸溶液,振荡30~60min后,离心;
3)取上清液过0.45um滤膜,吸取2ml滤液置于比色管中,加入0.5mL10%的氯化羟胺和1.5mL醋酸缓冲液,静置5min,用5N的NaOH溶液调pH值到4.0-4.5,静置5min后,加入0.5mL临联吡啶染色液,充分混匀后,于可见分光光度计上516nm处比色,并根据铁标准溶液曲线计算铁含量;
上述醋酸缓冲液的配制:取41.5g无水醋酸钠用去离子水完全溶解后,加入12mL醋酸,用去离子水稀释定容至500mL;
上述临联吡啶染色液的配制:取54.4g三水醋酸钠、0.1g临联吡啶,然后加入50mL去离子水,完全溶解后用去离子水定容至100mL。
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