CN1919354A - 人造血管丝素、胶原蛋白共混预凝涂层 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种人造血管胶原、丝素蛋白分层预凝涂层方法，通过机织或编织成具弹性多孔隙管型结构的合成血管假体，和使用三层涂层技术将丝素蛋白和增塑剂，胶原蛋白和增塑剂混合液相继涂覆血管假体内壁而成。丝素蛋白液和胶原蛋白液涂层血管假体前需混合增塑剂通过倾注并使其均匀涂布于血管假体的基底层，干燥后暴露于甲醛蒸汽中交联固定涂层材料。

Description

人造血管丝素、胶原蛋白共混预凝涂层

所属技术领域

本发明涉及一种可用来置换、旁路移植或分流人体血管系统任一部分的人造血管假体预凝涂层方法，尤其是使用混有增塑剂的丝素蛋白和胶原蛋白液分层涂层人造血管假体，使其不漏血从而免除手术过程中预凝血操作的方法。

背景技术

使用人造血管假体置换人体的病变血管是一项成熟的外科技术。人造血管有许多不同的类型，并可以由不同的材料构成。可以植入人体的人造血管假体通常是由生物相容性材料构成，同时血管假体植入后能保持开放的管形结构并允许血流通畅无阻运行其中。血管假体可以由生物相容性纤维材料构成，如涤纶或聚四氟乙烯，通过针织或机织而成，可以是单层或双层结构。

人造血管的基底层是由多孔的纤维壁构成，多孔的结构非常重要，因为这能使人造血管对血液保持足够的密封性避免在手术过程中失血过多，同时保持足够的孔隙允许成纤维细胞和平滑肌细胞侵入生长，使得受体组织包裹愈合血管假体。合成的人造血管假体在U.S.Pat.Nos.3,805,301 and No.4,047,252描述为涤纶编织的可延伸的弹性管状结构体。这些血管假体具备足够的孔隙允许受体组织侵入生长。但此类型人造血管在植入体内时需预凝血操作，即运用患者的血液浸泡血管假体足够的时间并通过一些手法技巧使人造血管壁充分预凝。预凝后的血管植入体内后便不再漏血同时也不妨碍自身组织的侵入生长。然而，外科手术尤其是急诊手术时希望能在植入人造血管时省缺预凝步骤从而节省宝贵的手术时间。

为了免除人造血管假体手术过程中预凝血操作，又保持足够的孔隙便于受体组织的侵入生长并包裹愈合人造血管。许多实验在研究提高人造血管植入时对血液的密封性，通常的办法使用可降解的生物材料(如纤维蛋白，白蛋白，明胶或胶原(R.A.Jonas，F.J.Schoen，R.J.Levy and A.R.Castaneda，“Biologicalsealants and knitted Dacron：Porosity and histological comparisons ofvascular graft materials with and without collagen and fibrin gluepretreatments，”Ann.Thorac.Surg.，41，657-663(1986)；K.Kottke-Marchant，J.M.Anderson，Y.Umemura，and R.E.Marchant，“Effectof albumin coating on the in vitro blood compatibility of Dacron arterialprostheses，”Biomaterials，10，147-155，(1989)；R.Guidoin，D.Marceau，and J.Couture，“Collagen coating as biological sealants for textilearterial prostheses，”Biomaterials，10，156-165，(1989)))涂层浸渍多孔隙人造血管假体，涂层浸渍的人造血管在植入人体时不再漏血(United StatesPatent 4,747,848，United States Patent 5108424)。按照上述方法制备的人造血管基本满足了上一世纪血管手术的要求，但随着血管手术的技术发展，原先复杂的血管疾病现多采用积极的手术干预和尽量一期手术完成，手术操作复杂，手术时间延长，对人造血管提出了更高的要求。实验证明白蛋白涂层的人造血管涂层材料在体外降解试验中7天后降解达80％，而明胶涂层的血管假体涂层材料仅剩余1％左右，胶原涂层的人造血管植入犬体内6天后近一半的涂层材料被降解吸收，而此时血管假体还未被受体组织完全包裹愈合，由此在临床全胸腹和全主动脉血管替换时可导致术后渗液增多，增加了感染机会(Guidoin R，MarceauD，Rao TJ，“In vitro and in vivo characterization of an impervious polyester arterialprosthesis：the Gelseal Triaxial graft.”，Biomaterials，8(6)：433-41.，(1987)；Yamamoto K，Noishiki Y，Mo M，“Disadvantages of″Gelseal graft″as a vascularprosthesis”，The Japanese joumal ofthoracic surgery，46(9)：762-6，(1993))。

发明内容

为克服上述困难，本发明采用可降解的生物材料丝素蛋白溶液和胶原蛋白溶液相继涂覆人造血管假体内壁，免除手术过程中预凝血操作节省手术时间和延缓植入体内后涂层材料降解速度，并达到在大范围如全胸腹和全主动脉血管替换时可以减少渗液的目的。该人造血管由具生物相容性的纤维材料构成的多孔隙管状合成血管假体与混有增塑剂的丝素蛋白和胶原蛋白液分层涂层并交联而成，使得人造血管假体不漏血从而免除手术过程中的预凝血操作。这管状血管假体的多孔隙基底层可以是由涤纶构成，可以是针织或机织而成。

从柞蚕丝提炼并通过透析的方法得到高纯度的丝素蛋白纤维分散液；从牛跟腱提炼并通过盐析的方法得到高纯度的胶原蛋白液，将高纯度的丝素蛋白溶液和胶原蛋白液相继均匀覆盖于合成血管假体基底层的内面，使人造血管结构充满弹性而具备较好的操控性和纵向伸展能力。至少分别运用丝素蛋白液和胶原蛋白液涂层2遍，干燥后将其暴露于甲醛蒸汽中交联。

为了保持人造血管假体在干燥的状态下保持足够柔软而具弹性，在使用丝素蛋白和胶原蛋白溶液涂层人造血管假体前须混合甘油、山梨醇或其它具生物相容性的增塑剂。在上述两种混合涂层材料中丝素蛋白5-50％，胶原蛋白1-5％，增塑剂浓度6-15％(重量比)。同时加入10-25％的乙醇促进水分的蒸发。

合成针织或机织型的人造血管依照本发明的方法使用胶原蛋白和增塑剂，丝素蛋白和增塑剂的混合液分层涂层后获得最重要的特征是使得原先多孔隙结构的血管基质的渗水率约降至零。为行对照实验，随机取未涂层的20根合成机织型的涤纶血管，平均渗水率为：381.6±10.6ml/min*cm²，按照本发明涂层后渗水率降至零。

由此，本发明一个目的是提供一种制备不漏血的合成人造血管假体的方法。

本发明的进一步的目的是提供一种制备丝素蛋白和胶原蛋白液分层涂层合成血管假体并使其不漏血的方法。

本发明其它的目的和益处将在以下的实例说明中得到清晰的显现。

本发明包含的特征、性质以及相关原理和操作步骤和各步骤之间的关系将在以下具体实例中的细节逐一阐述，而本发明的范围将在权利要求中说明。

附图说明

为更好的理解本发明，须参考说明书附图及说明

图1是按照本发明的方法制备的丝素蛋白和胶原蛋白分层涂层的直线型人造血管假体部分的横断面；

图2是按照本发明的方法制备的丝素蛋白和胶原蛋白分层涂层的分叉型人造血管假体的部分横断面；

图3表示人造血管假体的渗水率随着按照本发明的方法运用丝素蛋白和胶原蛋白分层涂层法涂层次数增多逐步降低。

图4表示按照本发明的方法和步骤制备的丝素蛋白和胶原蛋白涂层的人造血管假体(以Δ表示)和以单纯胶原涂层的人造血管假体(Hemashield^MeadoxMedicals，Oakland，NJ，USA)(以○表示)样本(1cm)置入Tris缓冲液中(pH＝7.6，37℃水浴)降解7天后，剩余涂层材料的百分比。

图5表示上述两种血管假体样本在含1％胰岛素的Tris缓冲液中(pH＝7.6，37℃水浴)降解7天后，剩余涂层材料的百分比。

图6表示上述两种血管假体样本在含胰蛋白酶(1g/L)的Tris缓冲液中(pH＝7.6，37℃水浴)降解7天后，剩余涂层材料的百分比。

具体实施方式

按照本发明制备的合成人造血管假体01如图1所示：包括管状结构主体02，它是由具生物相容性的纤维合成材料，尤其是聚对苯二甲酸乙酯，如涤纶针织或机织而成的基质04构成的多孔隙结构体。除涤纶外，管状结构主体02也可以由其它具生物相容性纤维材料针织或机织而成，只要使其具备多孔隙的结构允许受体的组织侵入生长同时保持开放的管腔结构允许血流顺畅通过。在基质04管腔内面覆有胶原蛋白液、丝素蛋白液和胶原蛋白液三明治复合涂层06，复合涂层06需至少运用胶原蛋白和增塑剂，丝素蛋白和增塑剂混合液体分层涂层2遍并通过暴露于甲醛蒸汽中交联而成。

图2演示一分叉形丝素蛋白和胶原蛋白液分层涂层的人造血管假体12，血管假体12包括主管状结构体14和两个分枝管状体16。主管状结构体14和分枝管状体16由涤纶机织而成的基质18构成，基质18内侧绒面覆有胶原蛋白液和丝素蛋白液分层涂层20，每涂层至少2遍。

依据本发明多孔隙结构的人造血管假体基质由涤纶通过制备该同类产品的方法一复层纤维针织或机织而成。通常通过涤纶基质编织而成的人造血管假体渗水率范围在2000到3000ml/min*cm²(清洁过滤的水，120mmHg条件下)之间，而由涤纶机织而成的血管假体渗水率在300到400ml/min*cm²(清洁过滤的水，120mmHg条件下)之间。交联丝素蛋白和胶原蛋白的方法是将胶原蛋白和增塑剂，丝素蛋白和增塑剂的混合液分层均匀涂布人造血管假体基质内，去除多余的涂层材料并放置干燥后暴露于甲醛蒸汽中交联，置入真空干燥箱中去除多余的湿气和甲醛。按照本发明制备的丝素蛋白和胶原蛋白分层涂层的人造血管的渗水率(ml/min*cm²)近于零。

以下实例将说明丝素蛋白从柞蚕丝中提取和纯化，牛胶原从牛跟腱中提取和纯化以及依据发明制备丝素蛋白和胶原蛋白分层涂层人造血管假体的过程。列举实例的目的是阐述专利而不应被理解限制它的范围。

实例1：丝素蛋白和胶原蛋白提取的方法

柞蚕蚕丝在0.5％(重量比)Na₂CO₃溶液中煮1-1.5h以脱去丝胶蛋白(蚕丝重量(g)与Na₂CO₃溶液体积(ml)比在1/80-1/67之间)，使用蒸馏水反复清洗脱去丝胶蛋白的蚕丝直至完全洁净。洁净的脱去丝胶的蚕丝置入CaCl₂/H₂O/C₂H₅OH＝1∶8∶2(摩尔比)溶剂中(脱去丝胶的蚕丝重量(g)与H₂O、C₂H₅OH体积(ml)和之比在1/10-1/15之间，然后推算出CaCl₂的质量)，于70-80℃下溶解30-45分钟后冷却装入透析袋，用蒸馏水透析3天后过滤得到高纯度丝素蛋白水溶液，然后通过磁力搅拌的办法浓缩丝素蛋白溶液达到制备涂层材料的浓度(磁力搅拌仪的温度控制在45-55℃)。

将新鲜牛跟腱去除脂肪、筋膜，在-10℃下冷冻至硬化，取出后再用手术刀剔除牛跟腱表面的残余筋膜，沿着牛跟腱纤维的方向切成1mm×1mm的薄片，运用蒸馏水反复冲洗后称重。用0.1％(质量分数)NaCO3溶液浸泡2小时，用蒸馏水漂洗5次，用不锈钢丝网滤去水溶液，晾干，放入容器中，分别加入含胃蛋白酶(与牛跟腱质量配比为1∶10)的0.3％(质量分数)乙酸溶液(pH＝2-3)适量。0-4℃之间控温缓慢搅拌3-5d，然后用高速冷冻离心机以200r/min离心，取上清液加入1％(质量分数)H2O2溶液，混匀后静置4h。用7％柠檬酸三钠溶液调节pH值到5，滤掉沉淀，在剩余的溶液中加入氯化钠，缓慢搅拌，进行盐析。4℃静置过夜，次日取出沉淀，用Tris(pH＝7)缓冲液在4℃下浸泡24h，再将沉淀装入透析袋内，用质量分数分别为1％、0.5％、0.2％的乙酸溶液各透析1d，再用蒸馏水透析3d，每天换透析液3次，最后得到白色光滑均质浆糊状的高纯度胶原蛋白液，4℃保存。

实例2：涂层人造血管假体

第一步将含有胶原蛋白(按照实例1从牛跟腱中提取)浓度为1.5％的胶原蛋白混合液注满50ml的注射器内，该胶原蛋白混合液同时含有12％的甘油，20％的乙醇和蒸馏水，粘度约30,000厘泊。注射器与合成的机织的人造血管一端相连，胶原蛋白混合液被推注入人造血管管腔，同时运用按摩的手法技巧使涂层液均匀涂布于管腔内壁，多余的胶原蛋白混合液从人造血管另一端去除。第二步将含有丝素蛋白(按照实例1从柞蚕丝提纯)浓度为5％的丝素蛋白混合液注满50ml的注射器内，该丝素蛋白混合液同时含有15％的甘油，18％的乙醇和蒸馏水，粘度约28,000厘泊。注射器与合成的编织或针织的人造血管一端相连，丝素蛋白混合液被推注入人造血管管腔，同时运用按摩的手法技巧使涂层液均匀涂布于管腔内壁，多余的丝素蛋白混合液从人造血管另一端去除。第三步重复第一步操作。每步涂层后的人造血管室温下干燥1/2小时，以上分层涂层，每层至少两次涂层。(即胶原蛋白混合液涂层干燥两次，丝素蛋白混合液涂层干燥两次，然后胶原蛋白混合液再次涂层干燥两次。)

分层涂层，每层2次涂层后，使人造血管暴露于甲醛蒸汽中交联，交联后置于室温下干燥15分钟后置入真空箱中干燥24小时去除血管假体湿气和多余的甲醛。

实例3：涂层前后人造血管血液渗透率比较

按照实例2的方法制备不漏血的胶原蛋白和丝素蛋白分层涂层的人造血管检测如下，随机抽取5根直径为8mm长度为12cm涂层后的合成机织人造血管并与储血器相连，在120mmHg的压力下，使肝素化的血液在血管内通过，收集渗漏的血液并计量(单位：ml/min*cm²)。检测结果5根人造血管的血液渗透率分别是：0.03，0.0，0.03，0.0和0.0，平均血液渗透率为0.012ml/min*cm²，接近于零。

为与未涂层的机织人造血管比较，选取未涂层的人造血管重复上述实验，测得平均血液渗透率为28.4ml/min*cm²。

实例4：涂层前后人造血管渗水率比较

人造血管经胶原蛋白和丝素蛋白液分层涂层2次后渗水率降至1％以下。标准的渗水率实验(R.Guidoin，M.King，D.Marceau，and A.Cardou，“Textile arterialprostheses：Is water permeability equivalent to porosity？”J.Biomed.Mater.Res.，21，65-87(1987))测定如下。相当于120mmHg的水柱压力通过2.44cm2面积的圆孔，将人造血管假体的样品固定于圆孔上1min，收集并测定渗漏水量。每个样品分别测定数次，测定结果如下表示：

                        渗水率(porosity)＝ml/min*cm²

合成的机织人造血管的渗水率是400ml/min*cm²经过不同次数涂层后的渗水率变化如下：

涂层次数	渗水率
		01234	400281.20.40

在上述实验的每一次涂层使用的丝素蛋白均从柞蚕丝按照实例1描述提纯，胶原蛋白从牛跟腱中按实例1描述提炼，涂层方法均按照实例2描述操作。结果如附图3所示。基于此，制备一丝素蛋白和胶原蛋白分层涂层人造血管至少需分层涂层，每层2次涂层丝素蛋白液和胶原蛋白液，并且在每次涂层之间需待其干燥，最后交联固定丝素蛋白和胶原蛋白于人造血管基质内。

与未涂层的人造血管相比，丝素蛋白和胶原蛋白分层涂层的人造血管不仅降低了渗水率，而且减少了血栓生成。以下的实例证明与对照组相比丝素蛋白和胶原蛋白分层涂层的人造血管假体显著的减少了血栓的生成。实例5：涂层前后人造血管血栓生成比较实验(体外)

采用体外实验(Imai Y，Nose Y.“A new method for evaluation ofantithrombogenicity of materials.”J Biomed Mater Res 6(3)：165-72，(1972))来评价涂层前后人造血管假体的抗血栓生成能力。将0.25ml的枸橼酸血混合0.1mmol/L的CaCl₂25μl注入按照实例2制备的丝素蛋白和胶原蛋白分层涂层的的人造血管假体管腔内壁，同样体积的上述血液注入未涂层的人造血管假体管腔内壁作为对照。分别在5，10和15分钟时点将5ml蒸馏水倾倒在实验样本上终止凝固反应，并各血管假体标本观测血栓的形成的情况。结果显示两组样本血栓形成有显著的差异。以下表格中数据是实验得到的半定量参数结果。

	丝素、胶原蛋白分层涂层组	空白组
			血液浸泡血管假体基质的速率各时点血栓形成    5min10min15min	快0+++	慢+++++++++

如表格所示，丝素、胶原蛋白分层涂层组在5min时点无纤维蛋白凝块形成，在15min时点丝素、胶原蛋白分层涂层组纤维蛋白凝块形成同样显著少于对照组。在与血液接触时未涂层的人造血管假体几乎是疏水的，需10到15秒血液才浸湿机织的人造血管的纤维，而血液浸湿丝素、胶原蛋白分层涂层组的人造血管基质平衡而迅速。

基于上述实验结果，在体外无血流的情况下，丝素、胶原蛋白分层涂层组的涤纶血管假体血液浸湿迅速，在5分钟内无血栓形成。在同一时点对照组血管假体显示血栓形成。在10和15分钟时点丝素、胶原蛋白分层涂层组血管假体形成的血栓数量明显少于空白对照组。

实例6：涂层材料体外降解实验

采用体外降解实验(BenSlimane，S.，Guidoin，R.，Roy，P.E.，“Degradability ofcross-linked albumin as an arterial polyester prostheses coating in vitro and vivo ratstudies”，Biomaterials，7，268-272，(1986))来评价单纯运用胶原蛋白涂层(Hemashield^Meadox Medicals，Oakland，NJ，USA)和使用丝素蛋白和胶原蛋白分层涂层的血管假体(按照本发明操作步骤制备)体外降解的速度。取血管假体样本(1cm长)，反复以蒸馏水冲洗，冷冻干燥后称重(W₁)。将样本置入含有蛋白水解酶或胰岛素的Tris缓冲液(pH＝7.6)中(37℃水浴)，分别降解4-144小时，取出样品再次使用蒸馏水反复冲洗，冷冻干燥后再次称重(W₂)，即计算出剩余涂层材料的百分比：

              W_剩余(％)＝(W₂-W₁)/W₁*100％

实验结果见说明书附图4，5，6。不管缓冲液中蛋白水解酶的溶度，丝素蛋白和胶原蛋白分层涂层的血管假体的涂层材料较单纯使用胶原蛋白涂层的Hemashield^血管假体更难被降解和侵蚀。Hemashield^血管假体涂层材料在胰蛋白酶中不到24小时已接近完全降解，在含胰岛素的缓冲液中仍剩余20％，但按照本发明的操作步骤制备的丝素蛋白和胶原蛋白分层涂层的血管假体涂层材料在体外降解(无论是含胰蛋白酶或胰岛素的缓冲液中)7天后还剩余80％以上。

实例7：涂层前后人造血管血栓生成比较实验(体内)

丝素、胶原蛋白分层涂层组人造血管假体体内(杂种犬)实验如下。全麻下在犬股动静脉之间植入分流管(使用5cm长两短为圆锥形的穿刺管，便于插入连接人造血管假体)。血管假体连接完成后，先缓慢松开静脉端的血管阻断钳，然后再缓慢松开动脉端的阻断钳。使血流在血管假体中运行10分钟和30分钟后阻断分流管两端，取下血管假体。将血管假体腔内多余的血液流出后称重，肉眼观测管腔内壁形成的血栓，然后使用足够的蒸馏水冲洗血管假体(3次)并再次称重。

对照组使用的标准的8mm直径的涤纶血管，在与股动静脉分流管连接前行预凝血操作。如此可提供血管假体体内实验血栓形成的视觉和客观的重量数据证据。实验过程中从血管假体壁泄漏的血液同样被收集并称重进行比较。

丝素、胶原蛋白分层涂层组的人造血管无血液渗漏。而预凝组血管与股动静脉分流管连接后，第一个5分钟内，每5cm血管假体平均渗漏31ml血液。第二个5分钟约4-7ml。在对照组一例预凝血管连续测试30分钟，平均每5cm人造血管每分钟渗漏约1.8ml血液。

丝素、胶原蛋白分层涂层组人造血管假体植入分流管10和30分钟肉眼观测均无血栓形成。在实验组血管假体涂层材料表面覆盖一光滑白色有光泽薄纤维蛋白层，经蒸馏水反复冲洗和后在多数血管假体内壁能观察到一连续的纤维蛋白薄膜，无典型的血凝块发现。

在预凝血操作组5例血管假体内壁中，有3例观测到明显的典型血凝块形成，血凝块多位于血流方向的横断面，约占血管假体管周的1/3到1/2。另1例假体内壁形成类似纤维蛋白膜结构。可能由于血管壁持续的血液渗漏，在对照组每例血管假体外壁均有较大的血凝块形成。

基于上述实验结果，丝素、胶原蛋白分层涂层组的涤纶人造血管血栓生成显著少于预凝组，这可能与丝素蛋白抗凝减少血栓生成有关，同时是预凝血操作的目的即是需要血凝来防止血管壁漏血的缘故。但是血凝块参与细胞过度反应增生并将被纤维细胞替代，所以减少涤纶人造血管基质血凝块形成对降低血管血栓和栓塞的发生是有益的。

对于植入人体替代病变血管的人造血管假体，按照本发明的方法运用胶原蛋白和增塑剂，丝素蛋白和增塑剂的混合液分层涂层合成机织具多孔隙结构的人造血管假体，每层至少2次，可使血管假体特征获得明显的改善。预期的益处不仅是免除了手术过程中的预凝血操作。尽管许多实验证实多孔隙结构对保持人造血管植入人体后长期通畅是必要的，但同时在手术过程中必须使用患者的血液行预凝血操作来防止术中和术后大量的血液渗漏丢失。事实上，预凝血操作比较耗时并需要一定的技巧和实践经验。另外如患者需急诊手术或有凝血疾患则使得预凝血变得困难或无法操作。

综上所述，胶原蛋白和增塑剂，丝素蛋白和增塑剂的混合液分层涂层合成机织具多孔隙结构的人造血管假体免除了手术过程中的预凝血操作同时提供了理想的基质便于受体组织的侵入和包裹生长，另外，丝素溶液、胶原蛋白溶液分层涂层后的血管假体血栓生成明显减少从而降低了人造血管植入后栓塞发生的危险。合成的机织涤纶人造血管按照本发明使用丝素溶液、胶原蛋白溶液分层涂层后使其柔软有弹性具备较好的操控性。

由此通过以上描述，本发明目的能客观有效实现，但在不背离本发明精神和范围情况下，上述的操作具体步骤和某些条款可以有一定改变，因此上述实例描述和附图描绘所涉及的方法和使用的某些物质材料是用来演示阐述发明，而不应就此限制发明所涵盖的范围。

Claims (6)

1.一种制备具有预凝涂层的人造血管假体的方法，所述具有涂层的人造血管假体包括人造血管假体和涂在人造血管假体上的涂层，其特征在于所述涂层相继涂覆胶原蛋白涂层和丝素蛋白涂层，所述胶原蛋白涂层含有胶原蛋白，增塑剂和促蒸发剂，丝素蛋白涂层含有丝素蛋白，增塑剂和促蒸发剂。

2.根据权利要求1所述的制备人造血管假体的方法，特征在于将含有胶原蛋白、增塑剂和促蒸发剂的涂层溶液和含有丝素蛋白、增塑剂和促蒸发剂的涂层溶液相继均与涂覆于人造血管假体内壁，干燥，然后暴露于甲醛蒸汽中进行交联，获得所述人造血管假体。

3.根据权利要求1或2所述的制备人造血管假体的方法，其特征在于增塑剂选自甘油和山梨醇，促蒸发剂选自乙醇。

4.根据权利要求1或2所述的制备人造血管假体的方法，其特征在于人造血管假体由生物相容性材料制成，其为具由弹性多孔隙管型结构的合成织物，可以是针织型或机织型。

5.根据权利要求1或2所述的制备人造血管假体的方法，其特征在于丝素蛋白的浓度为5-50％，胶原蛋白浓度为1-5％，增塑剂浓度为6-15％，促蒸发剂为10-25％，以上浓度均为重量百分比。

6.根据权利要求1或2所述的制备人造血管假体的方法，其中所述涂层为三层，内层为胶原蛋白涂层，中层为丝素蛋白层，外层为胶原蛋白层，每层涂覆至少两次。

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