CN1918143B - 连接子化合物、配体络合物和它们的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种新的连接子化合物，其能极力抑制非特殊的疏水性相互作用，且可以容易调整提供金属键的二硫基的长度，从而有效率地形成金属一硫键，以及新的配体络合物、配体载体和它们的制备方法。连接子化合物具有下述通式(1)

Description

连接子化合物、配体络合物和它们的制备方法

技术领域

本发明涉及一种可以在表面等离子体共振的感应芯片等蛋白质分析用载体上固定寡糖等糖链的连接子化合物和通过在该连接子化合物中导入糖链制得的配体络合物、配体载体以及它们的制备方法。 

背景技术

存在于生物体内的各种糖链对于维持生物的活动和生命起着重要的作用。为了精密地分析这类糖链的功能，必须基于糖链复杂的结构来分析它们的功能。糖链功能的分析正在使用的方法是使用结构清楚的寡糖，使糖链结构一部分一部分地再现，由此可以搞清楚糖链全部结构和功能的关系。 

作为上述糖链的功能分析方法，公知的有例如表面等离子体共振(下面记为SPR)法。即，在感应芯片表面上固定包含模拟了一部分糖链的寡糖的配体络合物，使用这样固定了寡糖的感应芯片，使与寡糖起特殊相互作用的蛋白质等物质特定化。由此，可以基于寡糖的结构来进行生物活性的正确评价。 

但是，因为仅一分子的寡糖其活性并不那么高，评价寡糖生物活性时必须将寡糖链集聚在感应芯片上。换句话说，使用集聚化的寡糖链，通过分析和蛋白质的相互作用，可以进行寡糖链的生物活性的评价。 

因此，迄今为止，本发明人得到了在分子内具有可以固定在感应芯片表面上的部位和可以导入寡糖链的部位的连接子化合物，得到了在该连接子化合物上导入1单位或2单位寡糖链而制得的配体络合物。从而，通过使用该配体络合物，发现可以集聚化地将寡糖链导入到感应芯片上(例如参见专利文献1、非专利文献1等)。 

[专利文献1]特开2003-836969号公报(2003年3月19日公开) 

[非专利文献1]“日本化学会第79次春季年会演讲预稿集II”，社团法人日本化学会，2001年3月15日，p.1042 

但是，虽然上述专利文献1和非专利文献1中记载的配体络合物可以在感应芯片表面上以二维序列寡糖糖链，但仍然存在难以再现性好地获得该序列的技术问题。 

即，如上所述，在感应芯片表面上集聚多分子的寡糖链，分析寡糖链的生物活性的情况要求寡糖的糖链集聚化状态相同，才能再现性好地观测寡糖链和蛋白质之间的相互作用。特别重要的是为了观测寡糖链的生物活性，通过在感应芯片表面上集聚3单位以上的寡糖链，在该感应芯片上再现性好地以二维序列，才能再现性好地评价寡糖链的生物活性。 

但是，上述非专利文献1中记载的配体络合物中，1个配体络合物所具有的寡糖链是1单位或2单位的。换句话说，上述配体络合物是相对于1个连接子化合物结合1个或2个寡糖链制得的产品。因此，为了观测寡糖链的生物活性，在感应芯片表面上排列上述配体络合物时，必须通过提高配体络合物浓度，将配体即糖链相互集聚，才能在感应芯片表面上集聚3单位以上的寡糖链。 

通过这样的方法来集聚寡糖链时，控制寡糖链的糖链间在一定间隔并再现性好地获得寡糖的排列变得困难。因而，上述现有的配体络合物不能再现性好地观测寡糖的生物活性，进行糖结构的分析和寡糖生物活性的评价时会有困难。 

本发明是为了解决上述课题而提出的，其目的在于提供一种新的连接子化合物，其能控制感应芯片表面上的糖链间距离，再现性好地以二维序列寡糖，以及在该连接子化合物上导入糖分子的新的配体络合物、配体载体及它们的制备方法。 

发明内容

本发明人为了解决上述课题进行了刻苦钻研，结果发现通过使用具有可以导 入3单位以上的糖分子的部位，并且具有可以结合到表面等离子体共振(SPR)的感应芯片和亲和色谱法的载体等蛋白质分析用载体上的部位的新连接子化合物，可以再现性好地在上述载体上以二维序列3单位以上的糖分子。 

另外，在本发明人的在先申请(申请号：特愿2003-190568，公开号：特开2004-157108(公开日：2004年6月3日)，本申请优先权日(2004年2月5日)时未公开)中公开了目的在于解决上述问题的其他连接子化合物。但是该其他连接子化合物在分析疏水性非常强的蛋白质等时，存在所谓的和连接部分的烷基有非特殊的结合相互作用的问题。并且，该其他连接子化合物形成连接部分的烷基长度不够长，在固定的寡糖链大的情况下，会有因为寡糖链类的立体阻碍而不能有效率地形成金属—硫键的问题。 

因而，本发明人再在连接部分导入寡环氧乙烷，发现可以极力抑制非特殊的疏水性相互作用，且能容易调整提供金属键的二硫基的长度，能有效率地形成金属—硫键，从而完成本发明。 

即，为了结合上述课题，本发明中的连接子化合物的特征在于具有通式(1) 

(式中，a、b、d、e分别独立地是0以上6以下的整数)表示的结构，上述X具有包含3个以上烃衍生链的多分枝结构部位的结构，所述烃衍生链在末端上具有芳香族氨基且在主链上可以有碳—氮键。 

并且，本发明的连接子化合物具有通式(2) 

(式中，n是1以上6以下的整数)表示的结构，上述X具有包含3个以上烃衍生链的多分枝结构部位的结构，所述烃衍生链在末端上具有芳香族氨基且在主链上可以有碳—氮键。 

这里上述烃衍生链是指由碳和氢获得的烃链，其中部分碳和氢可以被其他原子和取代基取代。即，上述烃衍生链是指在末端具有芳香族氨基，烃链的主链结构碳—碳键(C-C键)的部分可以用碳—氮键(C-N键)、碳—氧键(C-O键)、酰胺键(CO-NH键)取代的烃链。 

根据上述构成，上述连接子化合物可以简便导入糖分子的部位具有芳香族氨基。上述芳香族氨基因为包含在各烃衍生链中，在上述连接子化合物中可以导入3单位以上的糖分子。并且，作为在上述蛋白质分析用的载体上可以固定的部位有S-S键。 

因而，通过插入上述连接子化合物，可以在上述载体上导入集聚的3单位以上的糖分子。并且，因为3单位以上的糖分子导入到1个连接子化合物中，在上述载体表面上可以再现性好地排列3单位以上的糖分子。由此，在上述载体表面上可以观测糖分子和蛋白质的相互作用，同时可以再现性好地评价糖分子的生物活性。 

进而，由于上述连接子化合物因为在连接部位具有寡亚乙二氧基，和在连接部位具有烷基的情况相比，可以大幅降低与疏水性高的分析对象物引起非特殊相互作用的可能性。并且，上述连接部分通过寡亚乙二氧基构成，可以容易地调节提供金属键的二硫基到结合到氨基末端的寡糖链的长度。由此，可以使二硫基不受寡糖链的影响，可以有效率地形成金属—硫键。 

具有上述通式(1)或通式(2)表示结构的连接子化合物中，上述X优选 具有通式(3) 

(式中，m¹、m²、m³、m⁴、p¹、p²分别独立地是1以上6以下的整数)表示的结构。 

并且，具有上述通式(1)或通式(2)表示结构的连接子化合物中，上述X优选具有通式(4) 

(式中，q¹、q²、q³、r¹、r²、r³、t¹  t²、t³、u¹、u²、u³分别独立地是0以上 6以下的整数)表示的结构。 

上述连接子化合物的X因为具有3个以上的上述烃衍生链，插入该连接子化合物可以在上述载体上导入3单位以上的糖分子。因此，可以控制上述载体表面上3单位以上的糖分子间的间隔，能再现性好地得到糖分子的序列，从而可以再现性好地评价糖分子的生物活性。 

并且，为了解决上述课题，本发明的配体络合物的特征在于在上述任何一种连接子化合物的芳香族氨基上导入了糖分子。 

接着，上述配体络合物具体的优选具有通式(5) 

(式中，m¹、m²、m³、m⁴、n、p¹、p²分别独立地是1以上6以下的整数。R’是氢或R。)表示的结构，上述R是选自(6-1)～(6-6)的源自寡糖化合物。 

并且，上述配体络合物具体的优选具有通式(7) 

(式中，a、b、d、e、q¹、q²、q³、r¹、r²、r³、t¹、t²、t³、u¹、u²、u³分别独立地是0以上6以下的整数。b是0时t¹、t²和t³不是0，t¹、t²和t³是0时，b不是0。并且R’是氢或R。)表示的结构，上述R是选自上述式(6-1)～(6-6)的寡糖。 

通过使用上述配体络合物，可以在上述蛋白质分析用的载体表面上集聚3单位以上或4单位以上(使用具有通式(5)或通式(7)所示结构的配体络合物时)的糖分子并使其固定。像这样，因为一个配体络合物具有3单位以上的糖分子，上述配体络合物相互之间没有在上述载体表面集聚，使用一个配体络合物的话，可以集聚3单位以上的糖分子。因此，可以再现性好地测定糖分子的生物活性。并且，可以在上述载体表面上再现性好地以二维序列多个糖分子。因此，通过使用固定了本发明配体络合物的蛋白质分析用载体，可以再现性好地评价糖分子的生物活性。 

并且，为了解决上述课题，本发明的连接子化合物的制备方法的特征在于包括进行硫辛酸和胺化合物的缩合反应的步骤，该胺化合物具有3个以上用保护基团保护芳香族氨基末端的分枝链，以及对上述芳香族氨基末端的保护基团脱保护的步骤。 

根据上述方法，作为在上述蛋白质分析用的载体上可以固定的部位具有S-S键，作为可以简便地导入糖分子的部位具有芳香族氨基，可以获得本发明的连接子化合物。 

并且，为了解决上述课题，本发明的配体络合物的制备方法其特征在于使用上述连接子化合物和糖分子，进行还原胺化反应。 

根据上述方法，通过还原胺化反应，能简便地将糖分子导入连接子化合物中，从而获得本发明的配体络合物。 

另外，作为上述糖分子，可以使用一切种类的具有还原末端的糖分子。 

作为上述糖分子具体的优选使用具有通式(8) 

表示的肝素部分二糖结构的硫酸化寡糖。 

并且作为上述糖分子，具体的优选使用选自组(9) 

的寡糖的至少一种。 

并且，为了解决上述课题，本发明糖分子的导入方法其特征在于使含有上述配体络合物的溶液和载体表面的金属相接触。 

根据上述方法，可以将上述配体络合物中包含的连接子化合物的S-S键转换为和上述载体表面的金属之间的键，从而在载体表面上固定配体即糖链。因而，采用使含有配体络合物的溶液和载体接触的简便方法，可以在载体表面上排列结合到连接子化合物上的糖分子。 

并且，为了解决上述课题，本发明的配体载体的特征在于在表面具有金属的载体上固定上述配体络合物而制得。 

根据上述结构，通过插入金属—硫键可以在载体表面上牢固地固定配体络合物，因而能提供在载体表面再现性好地排列多个糖分子而制得的配体载体。从而，使用上述配体载体的话，可以再现性好地观测在配体络合物中包含的糖分 子和与该糖分子相互作用的蛋白质等物质间的相互作用，因而可以定量地评价糖分子的生物活性。 

本发明的其他目的、特征和优点根据下面的记载可以充分地明白。并且，本发明的利益参照添加的附图并根据下面的说明来明白。 

附图说明

[图1]表示本发明中该连接子化合物(化合物15)的合成路线的一个例子的示意图。 

[图2]表示本发明中该配体络合物(化合物17)的合成路线的一个例子的示意图。 

[图3]表示在肝素共存下，bFGF结合到固定了单—GlcNS6S-IdoA2S-Glc的芯片上的行为的图表。 

[图4]表示肝素对bFGF与分别固定了单—GlcNS6S-IdoA2S-Glc、三—GlcNS6S-IdoA2S-Glc、四—GlcNS6S-IdoA2S-Glc的芯片的相互结合作用产生的阻碍率的图表。 

[图5(a)]表示改变溶液中的混合比后三—GlcNS6S-IdoA2S-Glc的全反射红外吸收谱的图表。 

[图5(b)]表示改变溶液中的混合比后四—GlcNS6S-IdoA2S-Glc的全反射红外吸收谱的图表。 

[图6(a)]表示芯片上的硫酸基团对于溶液中的三—GlcNS6S-IdoA2S-Glc的混合比的相对强度的图表。 

[图6(b)]表示芯片上的硫酸基团对于溶液中的四—GlcNS6S-IdoA2S-Glc的混合比的相对强度的图表。 

[图7(a)]表示通过SPR法观察单—GlcNS6S-IdoA2S-Glc和单—Glc的混合比为100/0时的h-vWF相互结合作用的结果的图表。 

[图7(b)]表示通过SPR法观察三—GlcNS6S-IdoA2S-GlC和单—GlC的 混合比为100/0时的h-vWF相互结合作用的结果的图表。 

[图7(c)]表示通过SPR法观察四—GlcNS6S-IdoA2S-Glc和单—Glc的混合比为100/0时的h-vWF相互结合作用的结果的图表。 

[图8(a)]表示通过SPR法观察单—GlCNS6S-IdoA2S-Glc和单—Glc的混合比为20/80时的h-vWF相互结合作用的结果的图表。 

[图8(b)]表示通过SPR法观察三—GlCNS6S-IdoA2S-Glc和单—Glc的混合比为20/80时的h-vWF相互结合作用的结果的图表。 

[图8(c)]表示通过SPR法观察四—GlcNS6S-IdoA2S-Glc和单—Glc的混合比为20/80时的h-vWF相互结合作用的结果的图表。 

[图9(a)]表示每单位n-vWF的浓度对由图7(a)和图8(a)所示结果获得的结合量作图获得的图表。 

[图9(b)]表示每单位n-vWF的浓度对由图7(b)和图8(b)所示结果获得的结合量作图获得的图表。 

[图9(c)]表示每单位n-vWF的浓度对由图7(c)和图8(c)所示结果获得的结合量作图获得的图表。 

[图10(a)]表示在单—GlcNS6S-IdoA2S-Glc和单—Glc＝100/0时，固定了单—GlcNS6S-IdoA2S-Glc的芯片和rhvWF-A1相互作用的测定结果的图表。 

[图10(b)]表示在单—GlCNS6S-IdoA2S-Glc和单—Glc＝50/50时，固定了单—GlcNS6S-IdoA2S-Glc的芯片和rhvWF-A1相互作用的测定结果的图表。 

[图11(a)]表示在三—GlcNS6S-IdoA2S-Glc和单—Glc＝100/0时，固定了三—GlcNS6S-IdoA2S-Glc的芯片和rhvWF-A1相互作用的测定结果的图表。 

[图11(b)]表示在三—GlCNS6S-IdoA2S-Glc和单—GlC＝50/50时，固定了三—GlcNS6S-IdoA2S-Glc的芯片和rhvWF-A1相互作用的测定结果的图 表。 

[图12(a)]表示在四—GlcNS6S-IdoA2S-Glc和单—Glc＝100/0时，固定了四—GlcNS6S-IdoA2S-Glc的芯片和rhvWF-A1相互作用的测定结果的图表。 

[图12(b)]表示在四—GlcNS6S-IdoA2S-Glc和单—Glc＝50/50时，固定了四—GlcNS6S-IdoA2S-Glc的芯片和rhvWF-A1相互作用的测定结果的图表。 

[图13]表示本发明的连接子化合物(化合物26)的合成路线的一个例子的示意图。 

[图14]表示本发明的配体络合物(化合物27)的合成路线的一个例子的示意图。 

[图15]表示本发明的连接子化合物(化合物32)的合成路线的一个例子的示意图。 

[图16]表示H₂N-TEG-NHBoc(化合物30)的合成路线的一个例子的示意图。 

[图17]表示本发明的配体络合物(化合物34)的合成路线的一个例子的示意图。 

实施方式 

下面详细说明本发明。 

本发明的连接子化合物是用于插入到表面等离子体共振(SPR)的感应芯片和亲和色谱法的载体等蛋白质分子用的载体和寡糖等糖(下面记为糖分子)之间，在上述载体上固定糖分子的。因此，上述连接子化合物必须在分子内具有可以固定在上述载体上的部位和可以方便导入糖分子的部位。 

并且，上述SPR和亲和色谱法的目的在于特定化并分离和糖分子有特殊相互作用的蛋白质等物质。因此，上述连接子化合物必须是和蛋白质等物质没有 非特殊相互作用的物质。 

因此，如上述通式(1)或通式(2)所示，本发明的连接子化合物具有二硫键(S-S键)作为可以固定在上述载体上的部位。该二硫键的硫(S)例如可以和涂覆在蛋白质分析用的载体表面上的金(Au)等金属形成金属—硫键，从而牢固地结合到上述载体上。 

并且，上述连接子化合物为了在蛋白质分析用载体表面上以二维序列多个糖分子，同时控制各糖分子间的距离，作为可以简便地导入糖分子的部位，具有含多个氨基的多分枝部位。即，本发明的连接子化合物的多分枝部位是具有如上述通式(1)或通式(2)中的X表示的结构的部位，该X如上所述具有包含3个以上的、在末端具有芳香族氨基且在主链上可以具有碳—氮键和酰胺键的烃衍生链。 

上述芳香族氨基的氨基(-NH₂基)是用于通过和寡糖等糖分子的还原胺化反应在上述连接子化合物中导入糖分子的反应基团。换句话说，由糖分子中的平衡产生的醛基(-CHO基)或酮基(-CRO基，R是烃基)和上述连接子化合物具有的氨基反应。接着，通过接下来的还原由该反应形成的席夫碱，可以容易地在芳香族氨基上导入糖分子。 

因而，上述通式(1)或通式(2)的X通过包含3个以上的上述烃衍生链，具备同时具有多个多个可导入糖分子的芳香族氨基的多分枝部位。因为在该多分枝型部位含有的各芳香族氨基上导入寡糖等糖分子，可以插入具有上述通式(1)或通式(2)表示结构的连接子化合物，在蛋白质分析用的载体表面上再现性好地以二维序列多个糖分子。 

进而，本发明的连接子化合物如上述通式(1)或通式(2)所示，在二硫基团和芳香族氨基之间具有寡环氧乙烷。由此可以极力抑制非特殊的疏水性相互作用，且能容易地调整提供到金属键上的二硫基团的长度，有效率地形成金属-硫键。另外，在上述通式(1)中，a、b、d、e可以分别独立地是0以上6以下的整数。在b为0时，X内部必须具有寡聚环氧乙烷。上述通式(2)中，n 只要是1以上6以下的整数，可以没有限制。 

具体来说，上述X如上述通式(3)所示，是2链的烃衍生链，芳香族氨基在反侧的末端，可以是具有2个结合到1个氮原子(N)上的二分枝结构的结构。此时，2个二分枝结构的上述氮可以通过例如插入-CO-CH₂-而结合到1个氮原子(N)上形成分枝结构。由此，上述X是具有带4个烃衍生链的多分枝型部位的结构。另外，上述通式(3)中，m¹、m²、m³、m⁴只要是1以上6以下的整数，可以没有限制，可以是彼此不同的整数，也可以是部分或全部相同的整数。这其中，从能简便制备具有上述多分枝部位的化合物考虑，优选上述m¹～m⁴是彼此相同的整数，特别优选是2。并且，p¹、p²只要是1以上6以下的整数，可以没有特别限制，可以是彼此不同的整数，也可以是彼此相同的整数。这其中，从制备的简易性考虑，p¹、p²优选彼此相同的整数，特别优选是1。 

另外，具有上述通式(3)表示的4个烃衍生链的X可以在各烃衍生链中具有寡环氧乙烷的结构。例如如上述通式(4)所示，可以在各烃衍生链的CH₂和NH之间具有寡环氧乙烷的结构。 

并且，上述X如上述通式(4)所示是3个烃衍生链，芳香族氨基在反侧的末端，可以具有结合到1个碳原子(C)上的三分枝结构的结构。此时，三分枝结构的上述碳例如可以通过插入-C-N-，结合到1个氮原子(N)上来形成分枝结构。由此，上述X具有带三个烃衍生链的多分枝型部位的结构。 

另外，上述通式(4)中，q¹、q²、q³只要是0以上6以下的整数，可以没有限制，可以是彼此不同的整数，也可以是部分或全部相同的整数。这其中，从能简便制备具有上述多分枝部位的化合物考虑，上述q¹～q³优选是彼此相同的整数，特别优选是2。并且，r¹、r²、r³只要是0以上6以下的整数，可以没有限制，可以是彼此不同的整数，也可以是部分或全部相同的整数。这其中，从制备的简易性考虑，上述r¹～r³优选彼此相同的整数，特别优选是1。并且，u¹、u²、u³只要是0以上6以下的整数，可以没有限制，可以是彼此不同的整数，也可以是部分或全部相同的整数。这其中，从制备的简易性考虑，上述u¹～u³优 选彼此相同的整数，特别优选是1。进而，t¹、t²、t³只要是0以上6以下的整数，可以没有限制，可以是彼此不同的整数，也可以是部分或全部相同的整数。上述通式(1)中X是通式(4)表示的情况下，上述通式(1)的b是0时，，t¹、t²、t³优选是1以上6以下的整数。从制备的简易性考虑，上述t¹～t³优选彼此相同的整数，特别优选是4。 

如上所述，上述X具有在碳和氮等原子上结合多个上述烃衍生链形成分枝结构的多分枝型部位的结构。另外，在上述X中含有的多个烃衍生链优选都相同，但是如果在末端具有芳香族氨基的话，彼此也可以有不同的结构。 

如上所述，具有通式(1)或通式(2)表示的结构的连接子化合物具有可以结合到蛋白质分子用载体上的S-S键和可以结合到寡糖等糖分子上的氨基。因而，例如通过Au-S键等金属—硫键上述连接子化合物能固定在蛋白质分析用载体上，从而通过插入上述连接子化合物，能将糖分子牢固且简单地结合到上述载体上。 

并且，上述连接子化合物具有多分枝型部位，在该多分枝型部位的各末端上具有芳香族氨基。因此，通过使用在上述连接子化合物上导入糖分子而制得的配体络合物(后述)，可以有效率地在上述连接子化合物上集聚糖分子。并且，因为具有多分枝型部位，在载体表面上结合含有连接子化合物的配体络合物时，可以再现性好地以二维序列多个糖分子。 

进而，上述连接子化合物可以几乎无视和蛋白质非特异性的相互作用的影响。从而，通过使用本发明的连接子化合物，可以再现性好地评价糖分子的生物活性。 

并且，上述连接子化合物如上述通式(1)或通式(2)所示，在二硫基和芳香族氨基之间具有寡环氧乙烷。由此，可以极力抑制非特殊疏水性相互作用，且能容易地调整提供到金属键上的二硫基团的长度，有效率地形成金属一硫键。 

上述连接子化合物可以通过下面所示的制备方法来制备。即，上述连接子化合物是通过将硫辛酸和胺化合物进行缩合反应，该胺化合物包含多分枝结构， 其具有3个以上的芳香族氨基末端用保护基团保护的分枝链，再对上述芳香族氨基末端的保护基团脱保护来制备的。 

上述硫辛酸具有下述通式(10) 

表示的结构。 

并且上述胺化合物只要包含具有用保护基团保护的芳香族氨基末端的分枝链，没有特别限制，上述连接子化合物的多分枝部位保护相应的结构也是可以的。 

因而，上述分枝链是除了具有用保护基团保护的芳香族氨基末端代替上述烃衍生链中所包含的芳香族氨基之外，也具有包含于上述烃衍生链中的结构。换句话说，上述分枝链是在由碳和氢获得的烃链中，可以将部分碳和氢用其他原子和取代基替代的链。更具体的，上述分枝链可以是具有用保护基团保护的芳香族氨基末端，同时烃链的主链结构即碳—碳键(C-C键)的部分可以被碳—氮键(C-N)键)或碳—氧键(C-O键)取代。 

并且，上述保护基团是指通过上述缩合反应不发生反应而导入芳香族氨基的氨基的取代基。这样的保护基团只要是在对仲氨基的保护基团脱保护时不受影响的基团，没有特别限制。作为上述保护基团可以列举出例如叔丁氧基羰基(-COOC(CH₃)₃基；记为Boc基)、苄基、烯丙基氨基甲酸酯基(-COOCH₂CH＝CH₂，Alloc基)等。 

作为上述胺化合物，可以列举出例如具有下述通式(11) 

表示的结构的化合物。另外，上述通式(11)中的n、m¹～m⁴、p¹、p²分别独立地是1以上6以下的整数。这些胺化合物的合成方法用后面的实施例来详细描述。 

通过上述硫辛酸和胺化合物的缩合反应，硫辛酸的羧基(-COOH基)和胺化合物的氨基(-NH₂基)缩合，形成酰胺键。然后，芳香族氨基末端的保护基团脱保护，除去保护基团，获得芳香族氨基，可以得到上述连接子化合物。 

另外，上述连接子化合物因为要获得在上述连接部分上具有寡环氧乙烷的结构，在其制备方法中，优选使用含有寡环氧乙烷结构的物质作为原料。作为该原料可以列举出例如双[2-(2—羟基乙氧基)乙基]醚(实施例的化合物1)、分子量不同的市售聚乙二醇(Mw：200、300、400、600、1000)(Sigma公司制造)等，这其中，出于能完全控制聚合度，即获得可控制长度的结构的理由考虑，优选使用双[2-(2-羟基乙氧基)乙基]醚(实施例的化合物1)。 

接着，说明本发明的配体络合物。这里，“配体络合物”是指在上述连接子化合物的芳香族氨基上导入糖分子制得的产品。本发明的配体络合物可以通过将连接子化合物的氨基和由糖分子中的平衡产生的醛基或酮基反应，接着还原由 该反应形成的席夫碱，在芳香族氨基上导入糖分子。即，通过该还原胺化反应，将上述连接子化合物和糖分子结合。 

作为本发明的配体络合物中含有的糖分子只要是具有还原末端的还原糖，就可以没有特别限制使用一切这样种类的产品。作为上述糖分子具体可以列举出例如葡萄糖、半乳糖、甘露糖等单糖类、结合糖数为2糖～10糖的麦芽糖、乳糖、后述的硫酸化寡糖等寡糖类、单糖类和寡糖类组合的糖数在11以上的肝素、硫酸软骨素、类肝素磺酸酯等多糖类。 

并且，作为上述寡糖类，可以列举出具有抗凝血活性的公知的硫酸化多糖肝素中的具有用下述通式(8) 

表示的特定部分二糖结构(称为“GlcNS6S-IdoA2S”)的硫酸化寡糖、在该硫酸化寡糖的还原末端的羟基上导入葡萄糖而制得的具有下述通式(12) 

表示的结构的寡糖。 

另外，上述寡糖类和多糖类可以是由同一单糖分子制得的单寡糖和单多糖，也可以是由各种单糖分子及其衍生物制得的糖复合剂和包含各种单糖分子及其衍生物、寡糖类的复合多糖类。并且，上述糖分子任何一种都可以是由自然界分离、精制获得的各种天然糖，也可以是人工合成的糖。 

具体来说，本发明的配体络合物是具有上述通式(5)表示的结构的制品。 

具有该通式(5)表示结构的配体络合物是在具有上述通式(2)表示的、X是用上述通式(3)表示的结构的连接子化合物上导入糖分子的制品。糖分子只要是具有还原末端的还原糖，没有特别限制，优选选自通式组(9)和通式(12)的产品。因为用通式(3)表示的X具有带4个烃衍生链的结构，具有通式(5)表示结构的配体络合物是在上述连接子化合物上结合4单位以上的糖分子的制品。另外，上述通式(5)中，m¹～m⁴和通式(3)中的m¹～m⁴一样，只要是1以上6以下的整数就没有限制，可以是彼此不同的整数，也可以是部分或全部相同的整数。并且，n只要是1以上6以下的整数就没有特别限制。并且，R’可以是氢或寡糖衍生化合物。 

并且，本发明的配体络合物是具有上述通式(7)表示结构的制品。具有该通式(7)表示的结构的配体络合物是在具有上述通式(1)表示的、X是上述通式(4)表示结构的连接子化合物上导入糖分子的制品。糖分子只要是具有还原末端的还原糖，没有限制，优选选自通式组(9)和通式(12)的产品。因为用通式(7)表示的X具有带3个烃衍生链的结构，具有通式(7)表示结构的配体络合物是在上述连接子化合物上结合3单位以上的糖分子的制品。 

因为上述配体络合物含有任何一种连接子化合物和糖分子，在连接子化合物内的S-S键可以和蛋白质分析用的载体表面的金属结合形成金属—硫(S)键，例如金—硫(Au-S)键。由此，通过插入该Au-S键，可以提供在上述载体表面集聚了3单位以上糖分子的固定化的配体载体。因而，通过使用上述配体络合物，例如获得在蛋白质分析用的载体表面上再现性好地以二维序列多个糖分子而获得的配体载体，通过使用该配体载体，可以再现性好地评价糖分子的生物活性。另外，作为上述载体表面的金属除了能使用上述的Au以外，还可以使用Cu、Ag、Pt等金属，特别优选使用Au。 

进而，上述配体络合物在连接部位具有寡环氧乙烷。由此，可以极大抑制非特殊疏水性的相互作用，且可以容易地调整提供金属键的二硫基的长度，有效率地形成金属—硫键。 

如上所述，本发明中还可以包含在插入金属—硫键的载体表面上固定本发明大配体络合物而制得的配体载体。该配体载体不限于蛋白质分析用，也可以用于检测和糖分子的相互作用，作为蛋白质以外的物质的分析来使用。 

上述配体载体是通过将含有该配体络合物的溶液和表面上具有金属膜的载体接触，使配体络合物的S-S键的各S原子和载体表面的金属通过金属—硫键结合，在载体表面上导入上述配体络合物。具体来说，通过在上述配体络合物溶液中浸渍蛋白质分析用载体一定时间，或者在上述载体上浸渍配体络合物溶液(在载体表面流过配体络合物溶液)，将在上述配体络合物中含有的连接子化合物的S-S键置换成与上述载体表面的金等形成的Au-S键，可以在载体表面上固定上述配体络合物。 

作为在配体络合物溶液中使用的溶剂没有特别限制，例如可以列举出甲醇、水、二甲基乙酰胺(DMAc)和它们的混合溶剂等。并且，浸渍时间可以是0.5小时～12小时左右，浸渍浓度可以是1μM～1mM左右。 

如上所述，本发明的配体络合物因为具有S-S键，可以简单地固定在蛋白质分析用载体表面上，可以在上述载体上简单地导入糖分子。 

另外，如上在载体上导入糖分子的方法也包含在本发明中。 

本发明的配体载体可以用于分析糖分子和例如蛋白质等其他物质的相互作用。具体来说，上述配体载体可以适用于SPR测定、亲和色谱法等中。 

例如，作为蛋白质分析，进行SPR测定可以按照下面的方式来进行。即，使用在气体电镀金薄膜等金属薄膜的载体上固定本发明的配体络合物制得的配体载体，  将该配体载体和蛋白质接触，根据常规方法，使用表面等离子体共振装置测定共振角度，就可以观测该配体载体和蛋白质的结合行为。另外，作为在SPR测定中使用的上述载体(感应芯片)，可以使用例如玻璃、塑料等，特别适合使用玻璃。而且，配体载体和蛋白质的接触可以通过例如在该配体载体表面流过将蛋白质溶解于流动缓冲液获得的溶液来进行。作为这样的流动缓冲液可以列举出例如磷酸缓冲液等。 

本发明的配体载体因为具有上述配体络合物，可以在载体表面上再现性好地以二维序列多个糖分子。因而，可以再现性好地观测糖分子的生物活性，可以进行糖分子结构的查明和糖分子的生物活性的定量评价。 

而且，作为本发明的配体载体，固定了糖链的感应芯片例如可以在下述SPR测定中使用。即，使用在载体表面上固定第1糖分子而制得的第1感应芯片和在载体表面上固定和上述第1糖分子末端结构不同的第2糖分子而制得的第2感应芯片，检测出使用第1感应芯片得到的SPR测定的检测结果和使用第2感应芯片得到的SPR测定的检测结果之差，就可以观测糖分子的相互作用。这些感应芯片可以使用固定不同糖分子的配体络合物。用于比较的糖分子可以列举出例如乳糖和葡萄糖、麦芽糖和葡萄糖、曲二糖和葡萄糖等。这里，使用2个感应芯片，但是可以使用在其以上数量的、导入不同糖分子的感应芯片。另外，糖分子末端是指不固定在感应芯片上的一侧。 

上述SPR测定是使用在第1糖分子中起特殊作用的蛋白质等，测定条件一定，上述2个感应芯片发生作用，观测两者的共振角度。检测该两者的共振角度之差，可以测定糖分子和蛋白质等的特殊相互作用。 

并且，观测和糖分子的相互作用的物质不限于蛋白质。 

上面叙述中同时测定2个种类的感应芯片，但是并不限于此，可以测定2种以上的感应芯片，也可以同时测定。而且，也可以使用在至少1个感应芯片中不导入糖分子的制品。例如可以使用只固定连接子化合物的制品。 

进行上述这样的SPR测定的话，糖分子以外的相互作用因为可以使用至少2个固定了相同结构的配体络合物的感应芯片进行测定，用至少2个感应芯片测定的相互作用的大小之差可以用来作为观测糖分子引起的相互作用。因而，使用上述测定方法，能降低糖分子以外的部分与其他物质的非特殊相互作用，可以观测糖分子和其他物质的特殊相互作用。 

实施例 

下面更详细地说明本发明的连接子化合物和配体络合物的合成。并且，本实施例还进行使用合成的该配体络合物和其他配体络合物其特性的比较研究。在其中结合说明。 

[实施例1：连接子化合物(化合物15)的合成] 

本发明的连接子化合物之一，即具有上述通式(2)中n为4，X为上述通式(3)表示的、p¹、p²是1、m¹、m²、m³、m⁴是2的结构的连接子化合物(化合物15)是根据下面顺序来合成的。图1中示出了合成该连接子化合物(化合物15)的过程。即，在本实施例1的说明中，各化合物中附带的编号和图1中记载的编号相对应。 

如图1所示，首先，使用双[2-(2-羟基乙氧基乙基]醚(化合物1)作为原料，在二氯甲烷中BF₃·Et₂O存在下与重氮基醋酸乙酯(化合物2)反应，合成产率为40％的酯化合物(化合物3)。接着，在二氯甲烷中DMAP和吡啶存在下将化合物3和对甲苯磺酰氯反应，得到产率为78％的对甲苯磺酰化合物(化合物4)。化合物4与N，N-二甲基甲酰胺中的叠氮钠作用，得到产率为90％的叠氮化合物(化合物5)。 

将其在甲醇中用1N的NaOH水解，得到产率为98％的羧酸衍生物(化合物6)。在二氯甲烷中将上述化合物6和化合物7用HOBt、EDC·HCl缩合，得到产率为80％的二酯衍生物(化合物8)。将该化合物8在甲醇中用0.6N的NaOH水解，得到产率为93％的二羧酸衍生物(化合物9)。将上述化合物9和二胺衍生物(化合物10)使用FDPP、DIPEA缩合，得到产率为40％的化合物11。将该化合物11的叠氮基与氢接触而还原，得到产率为80％的胺化合物(化合物12)。 

然后，和硫辛酸(化合物13)进行缩合，得到产率为59％的化合物14。最后，通过该化合物14中的TFA作用，对Boc基团脱保护，得到产率为91％的具有4单位目标芳香族氨基的连接子化合物(化合物15)。 

下面更具体地示出由上述合成过程获得的各化合物的合成方法，同时示出合 成的各化合物中¹H-NMR谱的测定和重量分析的测定结果。而且，配体即糖链在芯片上的相对浓度要求通过全反射FT-IR(ATR-FT-IR)来测定。其分别通过下面的顺序来进行。 

[¹H-NMR谱、重量分析、ATR-FT-IR的测定和试剂等] 

¹H-NMR谱的测定是使用JEOL-JNM-Lambda-500 NMR分光光度计和JEOL JNM-GSX400 NMR分光光度计、JEOL EX-270 NMR分光光度计。化学位移对于CDCl₃是用四甲基硅烷作为基准物质的δ值来表示。CD₃OD和DMSO-d₆是用残存溶剂的质子的化学位移为基准的δ值来表示。重量分析是使用Applied Biosystems，Mariner^TM来测定的。ATR-FT-IR测定使用在Shimadzu，IRPrestige-21上搭载1次反射的ATR附带装置(MIRacle Ge棱镜)的装置。用于ATR-FT-IR测定的感应芯片使用和SPR测定时相同的产品。中压柱硅胶色谱法使用硅胶No.9385(Merck)，薄层硅胶色谱法使用硅胶60 F254(Merck)。无水二氯甲烷使用氢化钙作干燥剂、在氮气流下蒸馏的制品。其他脱水溶剂使用从关东化学有限公司购买的产品。此外的试剂和溶剂基本上使用特级的产品。 

(1)化合物3的合成 

在50ml的无水二氯甲烷中溶解双[2-(2-羟基乙氧基)乙基]醚(化合物1)(14.57ml，80mmol)和BF₃·Et₂O(252ml，2mmol)，滴加0℃下的重氮基醋酸乙酯(化合物2)(1.8ml，17.35mmol)后，在室温下搅拌70分钟。在反应溶液中加入20ml饱和氯化铵水溶液，用二氯甲烷萃取，用无水硫酸镁干燥。滤去干燥剂，减压浓缩，用中压分离色谱法(600g，己烷：醋酸乙酯＝1∶3)精制浓缩残渣，得到无色液体化合物3(2.26g，产率：47％)。 

对该化合物3进行¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)的测定 

δ4.22(2H，q，J＝7.0，14.2Hz，CO₂CH ₂)，4.14(2H，s，OCH₂CO)，3.75-3.62(14H，m， CH ₂CH ₂O×3，HOCH₂CH ₂)，3.61(2H，t，J＝4.4 Hz，HOCH ₂)，1.84(1H，bs，OH )，1.28(3H，t，J＝7.3Hz，CH₂CH ₂)。 

并且，上述化合物3进行ESI-MS(正)的测定，结果是m/z 303.27[(M+Na)⁺]。由此可以确认化合物3的结构。另外，该化合物3的分子量是C₁₂H₂₄O₇：280.15。 

(2)化合物4的合成 

在8ml无水吡啶中溶解上述乙基体化合物3(2.15g，7.66mmol)和DMAP(41.7mg，337mmol)。在0℃下向该溶液中滴加溶解于8ml无水二氯甲烷中的对甲苯磺酸氯化物(1.75g，9.19mmol)的溶液，在室温下搅拌3小时。在反应溶液中加入二氯甲烷和冰水，在二氯甲烷中萃取。用饱和碳酸氢钠水溶液、水饱和食盐水平均清洗有机层一次，用无水硫酸镁干燥。滤去干燥剂，减压浓缩，用中压分离色谱法(100g，氯仿：丙酮＝4∶1)精制浓缩残渣，得到黄色液体化合物4(2.59g，产率：78％)。 

对该化合物4进行¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)的测定，结果为 

δ7.80(2H，d，J＝8.4Hz，aromatic)，7.35(2H，d，J＝8.4Hz，aromatic)，4.21(2H，q， CO₂ CH ₂)，4.16(2H，t，J＝4.8Hz，TsOCH ₂)，4.14(2H，s，OCH ₂CO)，3.76-3.59(14H， m，CH ₂CH ₂O×3，TsOCH ₂CH ₂)，2.45(3H，s，CH ₃Ar)，1.28(3H，t，J＝7.0Hz，CH₂ CH ₃)。 

并且，进行上述化合物4的ESI-MS(正)测定，结果为m/z 457.16[(M+Na)⁺]。由此可以确认化合物4的结构。另外，该化合物4的分子量为C₁₉H₃₀O₉S：434.16。 

(3)化合物5的合成 

在50ml无水二甲基甲酰胺中溶解上述对甲苯磺酰基化合物4(1.01g，2.31mmol)和叠氮化钠(1.53g，2.31mmol)，遮光，在120℃下氮气氛围气中搅拌10小时。用氯仿萃取反应溶液，用水、饱和食盐水平均清洗一次有机层，用无水硫酸镁干燥。滤去干燥剂，减压浓缩，用中压分离色谱法(10g，氯仿：丙酮＝2∶1)精制浓缩残渣，得到黄色液体化合物5(638mg，产率：90％)。 

对该化合物5进行¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)的测定，结果为 δ4.22(2H，q，J＝7.3Hz，CO₂CH ₂)，4.15(2H，s, OCH ₂ CO₂Et)，3.75-3.63(12H，m，OCH ₂ CH ₂O)，3.69(2H，m，N₃CH₂CH ₂)，3.39(2H，t，J＝5.1Hz，N₃CH₂)，1.29(3H，t，J＝7.3Hz，CO₂CH₂CH₂)。 

并且，进行上述化合物5的ESI-MS(正)测定，结果为m/z 328.14[(M+Na)⁺]。由此可以确认化合物5的结构。另外，该化合物5的分子量为C₁₂H₂₃N₃0₆：305.16。 

(4)化合物6的合成 

在24ml甲醇中溶解上述叠氮化合物5(614mg，2.0lmmol)，遮光下在0℃下添加1N NaOH4.3ml后，在室温下搅拌21小时。减压浓缩反应溶液，在浓缩残渣中加入氯仿后，加入1N HCl直到pH＝2，用氯仿萃取。用饱和食盐水清洗一次有机层，用无水硫酸镁干燥。滤去干燥剂，减压浓缩，得到无色液体化合物6(549mg，产率：90％)。 

对该化合物6进行¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)的测定，结果为δ6.19(1H,bs，CO₂ H),4.16(2H，s，OCH ₂CO₂H), 3.75-3.64(12H，m，OCH ₂CH ₂O)，3.68(2H，m,N₃CH₂CH ₂),3.41(2H，t,J＝5.1Hz，N₃CH ₂)。 

并且，进行上述化合物6的ESI-MS(负)测定，结果为m/z 328.14[(M+Na)⁺]。由此可以确认化合物6的结构。另外，该化合物6的分子量为C₁₀H₁₉N₃O₆：277.13。 

(5)化合物7的合成 

在50ml无水甲醇中溶解二甘氨酸(10.0g，75.1mmol)和BF₃·OEt₂(22ml，173mmol)，在氩气氛围气中回流5小时后，加入饱和碳酸氢钠水溶液中和，用氯仿萃取。pH达到9时在水层中加入三乙胺，再用氯仿萃取，使用无水硫酸镁作为干燥剂干燥后，滤去干燥剂，减压浓缩，得到黄色油状物化合物7(9.61g，产率：79％)。 

对该化合物7进行¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)的测定，结果为 

3.48(4H，s，CH₂N)，2.00(1H，s，NH)。并且，进行上述化合物7的ESI- MS(正)测定，结果为m/z162.1[(M+H)⁺]。由此可以确认化合物7的结构。另外，该化合物7的分子量为C₆H₁₁NO₂：161.07。 

(6)化合物8的合成 

在2ml无水二氯甲烷中溶解上述化合物6(0.35g，1.26mmol)和EDC·HCl(0.27g，1.39mmol)、HOBt(0.19g，1.39mmol)，在氩气氛围气中、0℃下遮光搅拌80分钟后，加入在1ml无水二氯甲烷中溶解上述化合物7(1.42g，6.83mmol)的溶液，在室温下搅拌17小时。反应溶液用氯仿萃取，有机层用10％柠檬酸和饱和碳酸氢钠水溶液平均清洗一次。使用无水硫酸钠作为干燥剂干燥后，滤去干燥剂，进行减压浓缩。用分离硅胶色谱法(50g，氯仿∶丙酮＝10∶1)精制浓缩残渣，得到白色固体化合物8(0.42g，产率：80％)。 

对该化合物8进行¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)的测定，结果为 δ4.23，4.11(4H，s，s，CONCH ₂)，4.18(2H，s，OCH ₂CON)，3.69，3.66(4H，s，s，CO₂CH ₃)， 3.69-3.56(12H，m，OCH ₃CH ₂O)，3.61(2H，t，J＝5.1Hz，N₃CH₂CH ₂)，3.32(3H， t，J＝5.0Hz，N₃CH ₂)。 

并且，进行上述化合物8的ESI-MS(正)测定，结果为m/z443.17[(M+Na)⁺]。由此可以确认化合物8的结构。另外，该化合物8的分子量为C₁₆H₂₈N₄O₉：420.19。 

(7)化合物9的合成 

在5ml甲醇中溶解上述化合物8(398mg，947μmol)，加入2N的NaOH(2.1ml)，在0℃下搅拌2.5小时后，加入Dowex 50WX-8(H⁺形式)直到pH＝2，中和，过滤Dowex 50WX-8，进行减压浓缩。在减压浓缩得到的浓缩残渣中加入水，滤去不溶物后，进行减压浓缩和冷冻干燥，得到白色固体化合物9(346mg，产率：93％)。 

对该化合物9进行¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)的测定，结果为 δ5.66(2H，bs，CO₂ H×2)，4.26(2H，s，OCH ₂CON)，4.24，4.18(4H，s，s，CONCH ₂), 3.71-3.63(12H，m，OCH ₂CH ₂O)，3.67(2H，m，J＝5.1Hz，N₃CH₂CH ₂)，3.40(3H，t， J＝4.9Hz，N₂CH ₂)。 

并且，进行上述化合物9的ESI-MS(负)测定，结果为m/z 391.15[(M-H)^-]。由此可以确认化合物9的结构。另外，该化合物9的分子量为C₁₄H₂₄N4O₉：392.15。 

(8)化合物10的合成 

在60ml无水二氯甲烷中悬浮N-Boc氨基安息香酸衍生物(3.33g，14.0mmol)和HOBt(1.93g，14.3mmol)，在氩气氛围气中、0℃下搅拌15分钟，加入在30ml无水二氯甲烷中溶解EDC·HCl(2.87g，15.0mmol)的溶液，搅拌50分钟。在该溶液中加入二亚乙基三胺(0.79ml，7.00mmol)，遮光下在室温下搅拌整夜，得到白色结晶。滤去该白色结晶后，用甲醇再结晶，得到白色结晶化合物10(3.53g，产率：92.9％)。 

对该化合物10进行¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)的测定，结果为 δ7.77-7.74(4H，d，J＝8.67Hz，aromatic)，7.50-7.48(4H，d，J＝8.57Hz，aromatic)， 3.70-3.66(4H，m，J＝5.19Hz CONHCH ₂)，3.34-3.28(4H，m，J＝5.61Hz CH ₂CH₂ ONH)，1.53(18H，s，CH ₃)。 

并且，进行上述化合物10的ESI-MS(正)测定，结果为m/z542.4[(M+H)⁺]。由此可以确认化合物10的结构。另外，该化合物10的分子量为C₂₈H₃₉N₅O₆：541.29。 

(9)化合物11的合成 

在5ml无水二甲基甲酰胺中溶解上述化合物9(333mg，847μmol)和二异丙基乙基胺(435ml，2.54mmol)、FDPP(1.00g，2.60mmol)，遮光下在氩气氛围气中、0℃下搅拌30分钟后，加入在11ml无水二甲基甲酰胺中溶解上述化合物10(1.15g，2.11mmol)的溶液，在室温下搅拌20小时。减压浓缩该反应溶液，得到的浓缩残渣用氯仿萃取，用10％的柠檬酸、饱和碳酸氢钠水溶液平 均清洗1次水、有机层，使用无水硫酸镁作为干燥剂进行干燥后，滤去干燥剂，进行减压浓缩。用分离硅胶色谱法(80g，氯仿∶甲醇＝10∶1)精制减压浓缩得到的浓缩残渣，得到白色固体化合物11(125mg，产率：59％)。 

对该化合物11进行¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)的测定，结果为 δ8.18(1H，bs，NHCOPh)，7.86(2H，d，J＝8.4Hz，aromatic)，7.80(1H，bs，PhNH CO)，7.75-7.68(8H，m，NHCOPh，aromatic，PhNHCO)，7.54(1H，bs，PhNHCO)， 7.48(2H，d，J＝8.4Hz，NHCOPh，aromatic)，7.42(5H，m，aromatic，NHCOPh)， 7.34(2H，d，J＝8.8Hz，aromatic)，7.28(1H，bs，PhNHCO)，3.84(4H，bs，CONCH ₂ )，3.62-3.48(20H，m，OCH ₂CH ₂O，NCH₂CH ₂NH)，3.56(2H，t，J＝5.1Hz，N₃CH₂C H ₂)，3.43(2H，bs，OCH ₂CON)，3.35-3.30(4H，m，NCH ₂CH₂NH)，3.26(2H，t，J＝ 5.1Hz，N₃CH ₂)，3.13，2.98(4H，bs，bs，NCH ₂CH₂NH)，1.52，1.50，1.49(36H，s，s， s，t-butyl)。 

并且，进行上述化合物11的ESI-MS(正)测定，结果为m/z1461.72[(M+Na)⁺]。由此可以确认化合物11的结构。另外，该化合物11的分子量为C₇₀H₉₈N₁₄O₁₉：1438.71。 

(10)化合物12的合成 

在12ml甲醇中溶解上述化合物11(165mg，114μmol)，加入5％的Pd/C(55mg)，在氢气氛围气中、室温下搅拌5小时后，滤去上述Pd/C，减压浓缩，用分离硅胶色谱法(10g，氯仿：甲醇＝7∶1)精制得到的浓缩残渣，得到白色固体化合物12(128mg，产率：79％)。 

对该化合物12进行¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)的测定，结果为 δ7.78-7.68(8H，m，aromatic)，7.48(8H，m，aromatic)，4.21，4.10(4H，bs，bs，CONC H ₂)，3.85(2H，bs，OCH ₂CON)，3.62-3.44(26H，m，OCH CH ₂O，NCH₂CH ₂NH，NC H ₂CH₂NH)，3.50(2H.t，J＝5.1Hz，H₂NCH₂CH ₂)，2.76(2H，t，J＝5.1 Hz，H₂NCH ₂ CH₂)，1.50(36H，s，t-butyl)。 

并且，进行上述化合物12的ESI-MS(正)测定，结果为m/z1413.74[(M+H)⁺]。另外，该化合物12的分子量为C₇₀H₁₀₀N₁₂O₁₉：1412.72。 

该化合物12是具有上述通式(11)中n为4，p¹、p²是1，m¹、m²、m³、m⁴为2的结构的胺化合物。 

(11)化合物14的合成 

在2ml无水二甲基甲酰胺中溶解上述化合物13(硫辛酸)(3.4mg，16.6imol)和HOBt(1.6mg，16.6μmol)、EDC·HCl(3.2mg，1.66μmol)，在氩气氛围气中、0℃下遮光搅拌。接着，加入在2ml无水二甲基甲酰胺中溶解上述化合物12(23.5mg，16.6μmol)的溶液，在室温下搅拌22小时。减压浓缩该反应溶液，将得到的浓缩残渣用二氯甲烷萃取，有机层用10％柠檬酸、饱和碳酸氢钠水溶液平均清洗1次。使用无水硫酸钠作为干燥剂进行干燥后，滤去干燥剂，进行减压浓缩。用分离硅胶色谱法(7g，氯仿：甲醇＝10∶1)精制浓缩残渣，得到白色固体化合物14(15.7mg，产率：59％)。 

对该化合物14进行¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)的测定，结果为 δ8.20，8.00(4H，bs，bs，NHCOPh)，7.86(2H，d，J＝8.8Hz，aromatic)，7.77-7.72 (7H，m，COPhNH，aromatic)，7.53(1H，bs，NHCOPh)，7.50-7.36(10H，m， aromatic，J＝8.8Hz，COPhNH)，7.27(2H，bs，COPhNH，CONHCH ₂)，3.89(4H， bs，CONCH ₂CO)，3.64-3.37(26H，m，NCH₂CH₂NH，NCH₂CH ₂NH，OCH ₂CH ₂O， CONHCH ₂，CONHCH₂CH ₂)，3.53(1H，m，SSCH)，3.48(2H，m，NCH ₂CH₂NH)， 3.32(4H，m，OCH ₂CON，NCH ₂CH₂NH)，3.18，2.85(4H，bs，bs，NCH ₂CH₂NH)， 3.17-3.04(2H，m，CH ₂SSCH)，2.44-2.36(1H，m，CH ₂CH₂SS)，2.16(2H，m，CH₂CH₂ CH ₂CONH)，1.89-1.81(1H，m，CH ₂CH₂SS)，1.69-1.56(4H，m，CH₂CH ₂CH₂ CONH，CH ₂CH₂CH₂CH₂CONH)，1.51，1.50(36H，s，s，t-butyl)，1.42-1.34(2H，m， CH ₂CH₂CH₂CONH)。 

并且，进行上述化合物14的ESI-MS(正)测定，结果为m/z1601.81[(M+H)⁺]。由此可以确认该化合物14的结构。另外，该化合物14的分子量为C₇₈H₁₁₂N₁₂O₂₀S₂：1600.76。 

(12)连接子化合物(化合物15)的合成 

在1ml二氯甲烷中溶解上述化合物14(60.3mg，31.2μmol)，加入TFA(3ml)， 0℃下遮光搅拌1小时后，进行减压浓缩，将得到的残渣溶解在甲醇中，注入填充了Dowex Marathon A(OH^-形式)的柱(1.0cmФ×3.0cm)，进行离子交换。减压浓缩排出液，得到白色固体化合物15(41.2mg，产率：91％)。 

对该化合物15进行¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₃)的测定，结果为 

δ8.19，8.05(4H，m，m，NHCOPh)，7.82(1H，bt，CONHCH₂)，7.53(8H，m， aromatic)，6.51(8H，dd，J＝8.4，1.5Hz，aromatic)，5.61-5.55(8H，m，NH ₂)，4.24， 4.11(4H，s，s，CONCH ₂CO)，3.93(2H，bs，OCH ₂CON)，3.60-3.37(31H，m，NCH₂ CH ₂NH，NCH ₂CH NH，OCH ₂CH ₂O，CONHCH ₂，CONHCH₂CH ₂，SSCH)，3.19-3.06 (4H，m，CONHCH ₂CH₂，CH ₂SSCH)，2.42-2.32(1H，m，CH ₂CH₂SS)，2.04(2H，m， CH₂CH₂CH ₂CONH)，1.87-1.78(1H，m，CH ₂CH₂SS)，1.64-1.45(4H，m，CH₂CH ₂CH₂ CONH，CH ₂CH₂CH₂CH₂CONH)，1.34-1.28(2H，m，CH ₂CH₂CH₂CONH)。 

并且，进行上述化合物15的ESI-MS(正)测定，结果为m/z623.27[(M+2Na)²⁺]。另外，该化合物15的分子量为C₅₈H₈₀N₁₂O₁₂S₂：1200.55。 

该化合物15是具有上述通式(2)中n为4，X用上述通式(3)表示，p¹、p²是1，m¹、m²、m³、m⁴为2的结构的连接子化合物。 

[实施例2：配体络合物(化合物17)的合成] 

使用实施例1中得到的连接子化合物15，根据下面的顺序合成具有用在上述通式(5)中n为4，p¹、p²是1，m¹、m²、m³、m⁴为2，R’为氢，R是用上述通式(12)表示的寡糖衍生的结构的配体络合物。图2中示出了该合成的化学反应式。 

如图2所示，使用实施例1中得到的连接子化合物15和用上述通式(12)表示的糖分子的化合物16(7当量)，进行还原胺化反应。据此，得到产率为22％的本发明配体络合物的一个例子化合物17。 

具体的，在100ml水、400ml二甲基甲酰胺和10ml醋酸的混合溶剂中溶解上述连接子化合物15(2.0mg，1.67μmol)化合物16(10mg，11.7mmol)，遮光下，在封闭管中37℃加热25小时。加入在15ml醋酸中溶解NaBH₃CN(3.51mg， 50.2mmol)的反应溶液，在37℃下加热6天后，减压浓缩，使用SephadexG-50(1.6cmФ×80cm，在PBS中加入0.3M的NaCl溶液)精制。减压浓缩由精制得到的目标馏分，使用Sephadex G-25(1.6cmФ×40cm，水)对浓缩残渣脱盐。减压浓缩脱盐得到的目标馏分，溶解于水中，进行冷冻干燥，得到白色粉末化合物17(1.7mg，产率22％)。 

对该化合物17用实施例1记载的方法进行¹H-NMR(400MHz，D₂O)的测定，结果为 

δ7.65-7.58(8H，m，aromatic)，6.78-6.67(8H，m，aromatic)，5.37(4H，bs，H-1”)，5.13(4H，bs，J＝2.5Hz)，4.52(4H，bs，H-5’)，4.29 (10H，m，H-6a”，H-3’，CONCH ₂CO)，4.19(10H，m，H-6b”，H-2’，CONCH ₂CO)，4.05(3H，m，H-4’)，3.99-3.92(14H，m，H-2，H-6a，H-5”，OCH ₂CON)，3.87(8H，m，H-5，NCH₂CH ₂NH)，3.83(8H，m，H-3，NCH₂CH ₂NH)，3.77-3.70(8H，m，H-4，NCH₂CH ₂ NH)，3.71(4H，L，J＝9.9Hz，H-3”)，3.64-3.50(25H，m，H-6b，NCH ₂CH₂NH，OC H ₂CH ₂O，CONHCH ₂，CONHCH₂CH ₂，SSCH)，3.54(3H，s，OCH ₃)，3.45-3.19(14H，m，H-1a，H-1b，NCH ₂CH₂NH，CH ₂SS)，3.34(4H，t，J＝9.6Hz，H-4”)，3.24(4H，dd，J＝3.4，10.5Hz，H-2”)，2.35-2.28(1H，m，CH ₂CH₂SS)，2.27(2H，bt，CH CH ₂ CONHCH₂)，1.891.84(1Hm，CH ₂CH₂SS)，1.56 1.46(2H，m，CH ₂CH₂CONH )，1.35-1.14(2H，m，CH ₂CH₂(CH₂)₂CONH)。 

并且，进行上述化合物17的ESI-MS(负)测定，结果为m/z1449.93[(M-10Na+7H)³]。由此可以确认化合物17的结构。另外，该化合物17的分子量为C₁₃₄H₁₉₆N₁₆Na₁₆O₁₀₈S₁₄：4572.48。 

该化合物17是具有上述通式(5)中n为4，p¹、p²是1，m¹、m²、m³、m⁴为2，R’为氢，R用通式(6-3)表示的寡糖衍生的化合物结构的配体络合物。 

[实施例3：配体糖链和蛋白质的相互作用的验证] 

本实施例中，使用实施例2中得到的，具有在上述通式(5)中n为4，p¹、p²是1，m¹、m²、m³、m⁴为2，R’为氢，R用通式(6-3)表示的寡糖衍生的 化合物的结构的配体络合物(下面对于该配体络合物记为“四—GlcNS6S-IdoA2S-Glc”)，检验和蛋白质的分子间相互作用。 

本实施例中，为了比较，本发明人对于以前发现的其他两种配体络合物也进行同样的实验，比较研究其相互作用。上述其他两种配体络合物具体是指上述专利文献1中记载的配体络合物，是下面通式(13)表示的配体络合物。下面将该配体络合物记为“单—GlcNS6S-IdoA2S-Glc”。 

并且，其他配体络合物的另一种是特开2004-157108中记载的配体络合物，是下面通式(14)表示的配体络合物。下面对于该配体络合物记为“三-GlcNS6S-IdoA2S-Glc”。另外，上述特开2004-157108在本申请的优先权日没有公开。 

[实施例3-1：特异性的相互作用的确认] 

首先，作为实施例3-1，为了确认固定了上述通式(8)表示的二糖结构(GlcNS6S-IdoA2S)的芯片和肝素结合性的蛋白质的特异性的相互作用，进行阻碍实验。即，在用于阻碍肝素结合性蛋白质和GlcNS6S-IdoA2S结构的结合的抑制剂共存下，研究肝素结合性蛋白质是否会结合到芯片上。 

本实验使用肝素(来自猪小肠，Mw＝17600)作为抑制剂，bFGF作为肝素结合性蛋白质。抑制，bFGF，也称为FGF-2，在血管内皮细胞和纤维胚细胞中工作，通过发挥血管新生作用、促进肉芽组织形成的作用来治愈创伤。在生物 体内和存在于细胞表面上的肝素类似物质类肝素磺酸酯相互作用，发现有生物活性。和bFGF结合的必要的最小结合单位据报导是下述通式(15)表示的5糖(参考文献：M.Maccarana，B.Casu&U.Lindahl，J.Biol.Chem.268卷，8857页，1993年)。 

在上述结构中，不含有葡糖胺的6位被硫酸化的结构。但是，类肝素磺酸酯中的IdoA2S-GlcNS结构和bFGF的缔合中，可以确认不特定多数的6位硫酸化不是必须的，这在活性部位的形成中是必须的。因此，为了观测与GlcNS6S-IdoA2S结构的相互作用，选择bFGF作为蛋白质。 

接着，使用分别固定上述的单-GlcNS6S-IdoA2S-Glc、三-GlcNS6S-IdoA2S-Glc、四-GlcNS6S-IdoA2S-Glc的芯片，进行肝素共存下合bFGF结合的阻碍实验。即，在200nM的bFGF溶液中改变肝素的浓度为3、10、100、300、1000nM进行混合，注入到芯片中。 

图3中表示了bFGF结合到固定了单—GlcNS6S-IdoA2S-Glc的芯片上的行为。从该图可知，确认了bFGF对固定了单—GlcNS6S-IdoA2S-Glc的芯片的结合对肝素浓度的依赖性降低。即，确认了bFGF对固定了单—GlcNS6S-IdoA2S-Glc的芯片的结合不会因为肝素造成阻碍。 

根据由上述实验得到的3种芯片各自的数据可以计算出各芯片中bFGF结合的阻碍率。其结果示于图4中。另外，上述阻碍率是用在不同浓度的肝素共存下的最大角度变化量与没有肝素共存时的最大角度变化量的比值的百分率来表示的。 

根据图4所示的曲线图，将bFGF对芯片的结合阻碍率的50％的地方定义 为IC₅₀。结果是固定了单—GlcNS6S-IdoA2S-Glc的芯片的IC₅₀＝2.5nM，固定了三—GlcNS6S-IdoA2S-Glc的芯片的IC₅₀＝94nM，固定了四—GlcNS6S-IdoA2S-Glc的芯片的IC₅₀＝71nM，固定了单—GlcNS6S-IdoA2S-Glc的芯片的IC₅₀值比其他两种芯片的值低一个数量级，确认其受到的肝素阻碍效果强。根据任何一种芯片其阻碍率都依赖于肝素的浓度而变化，可以得出结论这些芯片能对肝素结合性蛋白质即bFGF特殊辨认。 

[实施例3-2：芯片表面的糖链的相对密度的检测] 

首先，将三-GlcNS6S-IdoA2S-Glc或四-GlcNS6S-IdoA2S-Glc与结合了没有糖链的分子的连接子化合物(非糖链一连接结合化合物，下面称为单-Glc)在溶液中混合，进行向芯片的固定，对于由其混合比(试验比)而引起的芯片上的配体硫酸化二糖的密度变化，采用ATR-FT-IR法来研究。溶液中的三-GlcNS6S-IdoA2S-Glc或四-GlcNS6S-IdoA2S-Glc的比例在0、25、50、75、100％这些值内变化。其结果示于图5(a)、(b)中。图5(a)是改变溶液中的混合比的三—GlcNS6S-IdoA2S-Glc的全反射谱，图5(b)是改变溶液中的混合比的四—GlcNS6S-IdoA2S-Glc的全反射谱。 

为了观测波数(wavenumber)在1200-1303cm^-1范围内来自硫酸基团的S＝0的伸缩振动，使用该区域的吸光度曲线，通过多变量分析法进行硫酸基团的定量，以芯片上的硫酸基团的相对强度对溶液中的配体络合物的混合比作图。其结果示于图6(a)、(b)中。图6(a)是表示芯片上的硫酸基团的相对强度对溶液中的三—GlcNS6S-IdoA2S-Glc的混合比的曲线图，图6(b)是表示芯片上的硫酸基团的相对强度对溶液中的四—GlcNS6S-IdoA2S-Glc的混合比的曲线图。图6(a)、(b)所示的一次曲线的相关系数分别为0.9993、0.9610，从而表示配体硫酸化二糖在芯片上的固定率(芯片表面的糖链密度)与任何溶液中的配体络合物的存在比成比例。 

[实施例3-3：糖链的相对密度对h-vWF的相互作用的影响的研究] 

接着研究芯片表面的配体即硫酸化二糖的相对密度对蛋白质相互作用的影 响。这里，进行与来自人血浆的vWF(下面称为h-vWF)的相互作用的分析。 

将上述3种各配体络合物(单—GlcNS6S-IdoA2S-Glc、三—GlcNS6S-IdoA2S-Glc、四—GlcNS6S-IdoA2S-Glc)和单—Glc的混合比分别改变为100/0和20/80，制备六种芯片，用SPR法观察与h-vWF的相互作用。这里，说明根据SPR法测定的顺序。 

测定中，使用SPR670(日本激光电子有限公司制造)。并且，对感应芯片，在13×20×0.7mm的玻璃基盘上气体电镀作为粘合层的2nm铬，再在其上气体电镀50nm的金属膜(日本激光电子有限公司制造)，使用该制品，放入UV臭氧清洁机(日本激光电子有限公司制造的NL-UV253)中用紫外线照射30分钟，用臭氧清洁芯片表面。 

接着将感应芯片装入专用的PTFE室(日本激光电子有限公司制造)后，在甲醇/水＝1/1的混合溶液(但是在单—GlcNS6S-IdoA2S-Glc/单—Glc混合时为甲醇溶液)中溶解上述6种芯片(0.1mM)，取出50μl该溶液，加入PTFE室内，用Parafilm封口膜密封。在室温下、Bio Dancer(New Brunswick Scientific公司制造)上缓慢地整夜振荡装有该芯片的PTFE室。 

用甲醇清洗该芯片6次，用水清洗1次后，在依次用甲醇、水清洗1次。风干后，将其安装在SPR670的感应芯片弹筒里。用流动的缓冲液将芯片表面充分平衡化后，用激光照射金膜，观察此时表面等离子体共振的角度变化。流动的缓冲液使用pH为7.4的等渗性磷酸缓冲溶液(PBS)。并且，SPR测定都在25℃下进行。bFGF使用STRATHMANN BIOTEC AG公司制造的(Recombiant HumanFGF—基本型，MW；17000，Lot No.；471120)产品，h-vWF使用CALBIOCHEM公司制造的(von Willebrand Factor，Human Plasma，MW；270000(换算成单体单位)，Lot No.；B41632)。 

进行该SPR测定时，边改变h-vWF的浓度为10、20、40、80、160nM，边注入到各芯片上，观测结合的相互作用，观察h-vWF在芯片上的固定形态。此时，因为还没有发现不使配体硫酸化二糖发生改性且能从芯片上完全解离h -vWF的解离剂，解离常数(K_D)的计算要从芯片上的h-vWF的结合量来求得。h-vWF的结合量是以固定配体络合物的状态为基线，改变浓度后注入的h-vWF的感应器(gram)的曲线大致一定时与基线的差作为结合量。 

图7(a)～(c)中表示上述3种各配体络合物(单—GlcNS6S-IdoA2S-Glc、三—GlcNS6S-IdoA2S-Glc、四—GlcNS6S-IdoA2S-Glc)和单—Glc的混合比为100/0时的结合相互作用。(a)是单—GlcNS6S-IdoA2S-Glc的情况，(b)是三—GlcNS6S-IdoA2S-Glc的情况，(c)是四—GlcNS6S-IdoA2S-Glc的情况。并且，图8(a)～(c)中表示上述3种各配体络合物(单—GlcNS6S-IdoA₂S-Glc、三—GlcNS6S-IdoA2S-Glc、四—GlcNS6S-IdoA2S-Glc)和单—Glc的混合比为20/80时的结合相互作用。(a)是单—GlcNS6S-IdoA2S-Glc的情况，(b)是三—GlcNS6S-IdoA2S-Glc的情况，(c)是四—GlcNS6S-IdoA2S-Glc的情况。 

将该结果得到的结合量对h-vWF的浓度作图，示于图9(a)～(c)。(a)是单—GlcNS6S-IdoA2S-Glc的情况，(b)是三—GlcNS6S-IdoA2S-Glc的情况，(c)是四—GlcNS6S-IdoA2S-Glc的情况。图9中也示出了由各图的曲线计算出解离常数(K_D)的结果。 

如图9(a)所示，使用固定了单—GlcNS6S-IdoA2S-Glc/单—Glc＝100/0和单—GlcNS6S-IdoA2S-Glc/单—Glc＝20/80的配体硫酸化二糖的芯片时，解离常数分别变为K_D＝35nM和41nM。如图9(b)所示，使用固定了三—GlcNS6S-IdoA2S-Glc/单—Glc＝100/0和三—GlcNS6S-IdoA2S-Glc/单—Glc＝20/80的配体硫酸化二糖的芯片时，解离常数分别变为K_D＝27nM和24nM。进而，使用固定了四—GlcNS6S-IdoA2S-Glc/单—Glc＝100/0和四-GlcNS6S-IdoA2S-Glc/单—Glc＝20/80的配体硫酸化二糖的芯片时，解离常数分别变为K_D＝32nM和35nM。 

根据该结果，使用h-vWF作为分析体时，明显看出改变配体糖链在芯片上的存在比对亲合性几乎没有影响。并且，即使使用固定了糖链间距离不同的配 体络合物的芯片，和h-vWF的相互作用中糖链间距离之差对解离常数的值没有影响。这认为是因为h-vWF存在多聚体结构，存在多个肝素结合性区域，受此影响解离速度显著变慢，糖链间距离之差没有反映到解离常数上。 

[实施例3-4：糖链的相对密度对蛋白质相互作用的影响的研究] 

接着，使用源自大肠杆菌的重组人-vWF部分蛋白质(下面称为rhvWF-A1)的话(该大肠杆菌只具有带有1个肝素结合性区域的A1网络部分)，对于芯片上的群集化糖链和蛋白质之间的相互作用，认为可以研究糖链间距离之差对糖链—糖链结合性蛋白质间的相互作用的影响，从而进行如下所述的实验。rhvWF-A1根据文献(M.A.Cruz，R.I.Handin & R.J.Wise，J.Biol.Chem.268卷，21238页，1993年)来制备。 

这里，作为配体络合物使用上述的3种各配体络合物(单—GlcNS6S-IdoA2S-Glc、三—GlcNS6S-IdoA2S-Glc、四—GlcNS6S-IdoA2S-Glc)和单—Glc，改变上述3种配体络合物/单—Glc的存在比分别为100/0、50/50，制备芯片并使用。改变rhvWF-A1浓度，测定与芯片的结合相互作用的结果示于图10～图12中。另外，图10(a)是单—GlcNS6S-IdoA2S-Glc/单—Glc＝100/0下制备芯片的情况，图10(b)是单—GlcNS6S-IdoA2S-Glc/单—Glc＝50/50下制备芯片的情况。图11(a)是三—GlcNS6S-IdoA2S-Glc/单—Glc＝100/0下制备芯片的情况，图11(b)是三—GlcNS6S-IdoA2S-Glc/单—Glc＝50/50下制备芯片的情况。图12(a)是四—GlcNS6S-IdoA2S-Glc/单—Glc＝100/0下制备芯片的情况，图12(b)是四—GlcNS6S-IdoA2S-Glc/单—Glc＝50/50下制备芯片的情况。 

根据这些结果计算出的解离常数、结合常数、结合速度常数、解离速度常数汇总于表1中。另外，表1中解离常数：K_D(k_d/k_a)，结合常数：K_A(k_a/k_d)，结合速度常数：k_a，解离速度常数：k_d。 

[表1] 

如表1所示，固定单-GlcNS6S-IdoA2S-Glc的芯片和固定三-GlcNS6S-IdoA2S-Glc和四-GlcNS6S-IdoA2S-Glc的芯片相比，解离常数变大(K_D＝2.6μM)。并且，相对减小芯片上的糖链固定密度的话解离常数的值变得更大(K_D＝3.79μM)。另一方面，对固定三-GlcNS6S-IdoA2S-Glc的芯片相对减小芯片上的固定密度时，发现解离常数的值增加了若干(K_D＝1.20μM→1.50μM)。并且，固定了四-GlcNS6S-IdoA2S-Glc的芯片即使改变芯片上的固定密度，解离常数几乎不变(K_D＝0.99μM→1.00μM)。 

并且，如表1所示，固定了单-GlcNS6S-IdoA2S-Glc的芯片相比固定了其他2个配体络合物的芯片，确认具有高1个数量级的解离速度常数(k_d)。这认为是因为三-GlcNS6S-IdoA2S-Glc和四-GlcNS6S-IdoA2S-Glc具有控制分子内硫酸化寡糖链间距离的糖链群集，即使芯片上糖链的固定密度相对降低也难以受其影响。 

换句话说，对于和rhvWF-Al的相互作用，固定了单-GlcNS6S-IdoA2S-Glc的芯片如果降低芯片上糖链的相对固定密度的话，确认其结合力会降低。与此相对，固定了三-GlcNS6S-IdoA2S-Glc和四-GlcNS6S-IdoA2S-Glc的芯片即使降低芯片上糖链的相对固定密度，其结合力也没有太大的变化。 

根据以上的结果证明了对于硫酸化寡糖糖链—糖链结合蛋白质间的相互作 用，要增大结合力的话，像固定单—GlcNS6S-IdoA2S-Glc的芯片这样，仅在芯片上以二维层面聚集具有类似配体络合物结构的硫酸化寡糖链是不充分的，必须具有如三—GlcNS6S-IdoA2S-Glc和四—GlcNS6S-IdoA2S-Glc这样的在分子水平上控制糖链间距离的群集结构。 

[实施例4：连接子化合物(化合物26)和配体络合物(化合物27)的合成] 

本发明的连接子化合物之一，即具有在上述通式(1)中，a是1，b是4，d是1，e是4，X用上述通式(4)表示，q¹、q²、q³是2，r¹、r²、r³、t¹、t²、t³、u¹、u²、u³是0的结构的连接子化合物(化合物26)和具有在上述通式(7)表示的，a是1、b是4、d是1、e是4，q¹、q²、q³是2，r¹、r²、r³、t¹、t²、t³、u¹、u²、u³是0，R’是氢，R是通式(6-2)的结构的连接子化合物(化合物27)用下面顺序来合成。在图13中示出了该连接子化合物(化合物26)的合成过程。另外，图14中示出了由该连接子化合物(化合物26)合成配体络合物(化合物27)的过程。另外，在本实施例4的说明中，各化合物附带的编号和图13和图14中记载的编号相对应。 

[测定方法、试剂等] 

¹H-NMR谱的测定使用JOEL-Delta600分光光度计。化学位移在CDCl₃ 时以四甲基硅烷(0.00ppm)作为基准物质，用δ值表示。在D₂O时以DHO(4.65ppm)作基准物质，用δ值表示。重量分析使用PerSeptive BiosystemMariner^TM生物光谱测定工作站来测定。中压硅胶柱色谱法使用硅胶60(Merck，0.040-0.063mm)来进行。薄层色谱法使用预涂覆硅胶60F254(Merck，0.5mm)。全部试剂、脱水溶剂从关东化学有限公司制造的产品购入。 

(1)N₃-TEG-三价-(O^tBU)₃(化合物20)的合成(参见图13) 

在20ml甲醇中溶解O₂N—三价—(O^tBU)₃(化合物18)(757mg，1.70mmol)和氯化镍六水合物(NiCl₂·6H₂O)(80.8mg，0.340mmol)，分5次添加当量分的氢化硼钠(322mg，8.50mmol)，在室温下搅拌30分钟。浓缩除去甲醇后，加入水和氯仿。用硅藻土过滤后，用氯仿萃取3次滤液。使用无水硫酸钠干燥 有机相后，滤去干燥剂，减压浓缩。在10ml无水二甲基甲酰胺中溶解得到的浓缩残渣(化合物19)和N₃-TEG-COOH(化合物6)(441mg，1.70mmol)，在室温下、氩气氛围气中依次加入DIEA(592μl，3.40mmol)、HOAt(463mg，3.40mmol)、EDC·HCl(652mg，3.40mmol)，搅拌16小时。在反应液中加入水后，用醋酸乙酯萃取3次水相。用饱和食盐水清洗有机相，使用无水硫酸镁干燥后，滤去干燥剂，进行减压浓缩。用硅胶柱色谱法(50g，氯仿∶丙酮＝50∶1)精制得到的浓缩残渣，得到无色油状物N₃-TEG-三价-(O^tBU)₃(化合物20)。产量为839mg(73％)。 

对该化合物20进行¹H-NMR谱(600MHz，CDCl₃)的测定，结果为 

δ3.90(s，2H，-OCH ₂CONH-)，3.70-3.67(m，14H，-OCH ₂ CH ₂O-×3，N₃CH₂ CH ₂ O)，3.39(t，2H，J＝4.8 Hz，N₃ CH ₂ CH ₂O)，2.212.18(m，6H，CH₂ CH ₂CO×3)， 2.00-1.96(m，6H，-CH ₂CH₂CO-×3)，1.43(s，27H，-CH₃×9)。 

进行ESI-MS(正)测定，结果为m/z697.45[(M+Na)⁺]。由此可以确认化合物20的结构。另外，该化合物20的分子量为C₃₂H₅₈N₄O₁₁：676.41。 

(2)TEG-三价-(O^tBUu)₃(化合物22)的合成(参见图13) 

在10ml甲醇中溶解上述化合物20(N₃-TEG-三价-(OtBU)₃)(837mg，1.24mmol)，加入10％的Pd/C(200mg)，在氢气氛围气中、室温下搅拌1.5小时。滤去上述Pd/C，减压浓缩滤液。在10ml无水二甲基甲酰胺中溶解得到的浓缩残渣(化合物21)和硫辛酸(385mg，1.87mmol)，在氩气氛围气中、室温下依次加入DIEA(325μl，1.87mmol)、HOAt(254mg，1.87mmol)、EDC·HCl(358mg，1.87mmol)，搅拌13小时。在反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液后，用醋酸乙酯萃取3次水相。用饱和食盐水清洗有机相，使用无水硫酸镁干燥后，滤去干燥剂，进行减压浓缩。用硅胶柱色谱法(50g，氯仿∶甲醇＝30∶1)精制得到的浓缩残渣，得到无色油状物TEG-三价-(OtBu)₃(化合物22)。产量为1.05g(99％)。 

对该化合物22进行¹H-NMR谱(600MHz，CDCl₃)的测定，结果为 

δ3.91(s，2H，-OCH ₂CONH-)，3.70-3.54 (m，13H，-OCH ₂ CH ₂O-×3，CH₂ CH(CH₂ -)(S-))，3.55(t，2H，J＝5.5Hz，-CONHCH₂ CH ₂O-)，3.45(q，2H，J＝5.5Hz， -CONHCH ₂CH₂O-)，3.20-3.16(m，1H，-S_CH2(1H)-),3.14-3.09(m，1H，-SCH ₂ (1H)-)，2.49-2.43(m，1H，-SCH₂ CH(1H)-)，2.22-2.17(m，8H，-CH₂ CH ₂CO-×3， -NHCOCH ₂CH₂-)，2.00-1.96(m，6H，-CH ₂CH₂CO-×3)，1.94-1.88(m，1H， -SCH₂ CH ₂(1H)-)，1.74-1.62(m 4H，COCH₂ CHCH₂ CH ₂-)，1.52-1.41(m，2H， -COCH₂CH₂CH₂CH₂-)，1.44(s，27H，CH₃×9)。 

由此可以确认化合物22的结构。 

(3)TEG—三价-(NHBoc)₃(化合物25)的合成(参见图13) 

在二氯甲烷/水(2.2ml，10/1)中溶解上述化合物22(TEG-三价-(O^tBu)₃ )(500mg，0.587mmol)，在0℃下加入TFA(2ml)，在相同温度下搅拌1小时。浓缩反应溶液后，与甲苯共沸。将得到的浓缩残渣(化合物23)和N-Boc-苯二胺(化合物24)(612mg，2.94mmol)溶解在无水二甲基甲酰胺(10ml)中，在氩气氛围气中、室温下依次加入DIEA(380μl，2.94mmol)、HOAt(400mg，2.94mmol)、EDC·HCl(563mg，2.94mmol)，搅拌19小时。在反应溶液中加入饱和碳酸氢钠水溶液后，用AcOEt萃取3次水相。用饱和食盐水清洗有机相，使用无水硫酸镁干燥后，滤去干燥剂，进行减压浓缩。用硅胶柱色谱法(50g，氯仿：丙酮＝3∶1)精制得到的浓缩残渣，得到淡黄色油状物TEG-三价-(NHBoc)₃(化合物25)。产量为230mg(31％)。 

对该化合物25进行¹H-NMR谱(600MHz，CDCl₃)的测定，结果为 

δ8.72(bs，3H，-NHCO-)，7.56(bs，3H，aromatic)，7.22-7.10(m，6H，aromatic)， 6.91(bs，3H，-NHCO-)，3.85(s，2H，-OCH ₂CONH-)，3.67-3.57(m，9H，ethylene glycol chain，CH2CH(CH₂-)(S-))，3.55-3.47(m，6H，ethylene glycol chain， -CONHCH₂ CH ₂O-)，3.38(q，2H，J＝5.2Hz，-CONHCH ₂CH₂O-)，CH₂O-)，3.14(ddd，1H，J ＝5.5，6.9，12.4Hz，SCH ₂(1H))，3.08(ddd，1H,J= 6.9，12.4Hz,12.4 SCH ₂ (1H)-)，2.43-2，35(m，7H，-CH₂ CH ₂CO-×3，-SCH₂ CH ₂(1H)-)，2.08(t，2H，J＝ 6.9Hz，-NHCOCH ₂CH₂-)，2.17-2.12(m，6H，-CH ₂CH₂CO-×3)，1.88-1.83(m， 1H，-SCH₂ CH ₂(1H)-)，1.65-1.50(m 4H，-COCH₂ CH ₂ CH ₂CH-)，1.50(s，27H， -CH₃×9)，1.46-1.29(m，2H，-COCH₂CH₂ CH ₂CH₂-)。 

由此可以确认化合物25的结构。 

(4)配体络合物TEG-三价-(Mal)₃(化合物27)的合成(参见图13和图14) 

在二氯甲烷/水(4.4ml，10/1)中溶解上述化合物25(TEG—三价—(OtBu)₃ )(500mg，0.587mmol)，在0℃下加入TFA(2ml)，在相同温度下搅拌1.5小时。浓缩反应溶液后，与甲苯共沸。得到的浓缩残渣(化合物26)不精制，在接下来的还原胺化反应中使用。产量为252mg。 

下面对图14进行说明。在二甲基乙酰胺/水(1∶1，600μl)中溶解得到的残渣(化合物26)(12.1mg，8.88μmol)和麦芽糖(9.60mg，26.7μmol)，在37℃下放置7小时。在反应液中加入醋酸(30μl)和氰基氢化硼钠(5.58mg，88.8μmol)，在37℃下再放置70小时。冷冻干燥反应液后，得到的残渣用分离高速液体色谱法(ODS柱，甲醇/水＝50/50)精制。得到白色固体配体络合物TEG—三价—(Mal)₃(化合物27)。 

对该化合物27进行¹H-NMR谱(600MHz，D₂O)的测定，结果为 

δ7.02(dd，3H，J＝7.6，8.2Hz，aromatic)，6.72(s，3H，aromatic)，6.60(dd，3H，J＝ 1.4，7.6Hz，aromatic)，6.44(dd，3H，J＝1.4，8.2Hz，aromatic)，4.91(d，3H，J＝ 3.4 Hz，H-1’×3)，3.82-3.73(m，8H，H-2×3，H-5×3，-OCH ₂CONH-)，3.73- 3.67(m，9H，H-3×3，H-5’×3，H-6a’×3)，3.65(dd，3H，J＝2.1，12.4Hz，H-6b’ ×3)，3.59(dd，3H，J＝4.8，12.4Hz，H-6a×3)，3.55(dd，3H，J＝5.5，6.2Hz，H-4 ×3)3.55(dd，3H，J＝9.6，9.6Hz，H-3’×3)，3.50-3.36(m，12H，-OCH ₂ CH ₂O-× 3)，3.45-3.40(m，3H，H-6b×3)，3.42-3.38(m，1H，CH₂ CH(CH₂-)(S-))，3.38(dd， 3H，J＝3.4，10.3Hz，H-2’×3)，3.40(t，2H，J＝5.5Hz，-CONHCH₂ CH ₂O-)，3.25 (dd，3H，J＝9.6，9.6Hz，H4’×3)，3.15 3.10(m，5H ，CONHCH ₂CH₂O，H1a ×3)，3.02(dd，J＝8.2，13.7Hz，H-1b×3)，3.01-2.97(m，1H，-SCH ₂(1H)-)，2.96- 2.91(m，1H，-SCH ₂(1H)-)，2.29-2.25(m，6H，CH₂ CH ₂CO-×3)，2.26-2.19(m， 1H，-SCH₂ CH ₂(1H)-)，2.05-1.98(m，6H，-CH ₂CH₂CO-×3)，1.99(t，2H，J＝6.9 Hz，-NHCOCH ₂CH₂-)，1.74-1.69(m，1H，-SCH₂ CH ₂(1H)-)，1.50-1.30(m 4H， -COCH₂ CH ₂CH₂ CH ₂-)，1.16-1.10(m，2H，-COCH₂CH₂ CH ₂CH₂-)。 

进行ESI-MS测定，结果为m/z为981.41[(M+2Na)²⁺]。由此可以确认化合物27的结构。另外，该化合物27的分子量为C₈₂H₁₃₂N₈O₃₉S₂：1916.80。 

[实施例5：连接子化合物(化合物32)和配体络合物(化合物34)的合成] 

本发明的连接子化合物之一，即具有在上述通式(1)中，a是4，b是0，d是0，e是0，X用上述通式(4)表示，q¹、q²、q³是2，r¹、r²、r³是1，t¹、t²、t³是4，u¹、u²、u³是1的结构的连接子化合物(化合物32)和具有在上述通式(7)表示的，a是4、b是0、d是0、e是0，q¹、q²、q³是2，r¹、r²、r³是1，t¹、t²、t³是4，u¹、u²、u³是1，R’是氢，R是通式(6-2)的结构的配体络合物(化合物34)用下面顺序来合成。在图15中示出了该连接子化合物(化合物32)的合成过程。图16中示出了在合成上述连接子化合物(化合物32)过程中使用的化合物30的合成过程。并且，在图17中示出了由该连接子化合物(化合物32)合成配体络合物(化合物34)的过程。另外，在本实施例5的说明中， 各化合物附带的编号和图15、图16和图17中记载的编号相对应。 

[测定方法、试剂等] 

¹H-NMR谱的测定使用JOEL-Delta600分光光度计。化学位移在CDCl₃ 时以四甲基硅烷(0.00ppm)作为基准物质，用δ值表示。在D₂O时以DHO(4.65ppm)作基准物质，用δ值表示。重量分析使用PerSeptive BiosystemMariner^TM生物光谱测定工作站来测定。中压硅胶柱色谱法使用硅胶60(Merck，0.040-0.063mm)来进行。薄层色谱法使用预涂覆硅胶60 F254(Merck，0.5mm)。全部试剂、脱水溶剂从关东化学有限公司制造的产品购入。 

(1)三价-(O^tBu)₃(化合物28)的合成(参见图15) 

在20ml甲醇中溶解O₂N—三价—(O^tBu)₃(化合物18)(757mg，1.70mmol)和NiCl₂·6H₂O(80.8mg，0.340mmol)，在0℃下分5次添加当量分的氢化硼钠(322mg，8.50mmol)，然后在室温下搅拌反应液30分钟。浓缩除去甲醇后，在反应溶液中加入水和氯仿。用硅藻土过滤后，用氯仿萃取3次水相。使用无水硫酸钠干燥有机相后，滤去干燥剂，减压浓缩。在10ml无水二甲基甲酰胺中溶解得到的浓缩残渣(化合物19)和硫辛酸(351mg，1.70mmol)，在室温下、氩气氛围气中依次加入DIEA(592μl，3.40mmol)、HOAt(463mg，3.40mmol)、EDC·HCl(652mg，3.40mmol)，搅拌16小时。在反应溶液中加入水后，用醋酸乙酯萃取3次水相。用饱和食盐水和饱和碳酸氢钠水溶液清洗有机相，使用无水硫酸镁干燥后，滤去干燥剂，进行减压浓缩。用硅胶柱色谱法(50g，己烷∶醋酸乙酯＝3∶1)精制得到的浓缩残渣，得到淡黄色油状物三价—(O^tBu)₃(化合物28)。产量为750mg(73％)。 

对该化合物28进行¹H-NMR谱(600MHz，CDCl₃)的测定，结果为 

δ5.91(s，1H，-CONH-)，3.57(ddd，1H，J＝6.2，6.2，12.4Hz，CH₃ CH(CH₂-)(S-))， 3.18(ddd，1H，J＝5.5，5.5，12.4Hz，-SCH ₂(1H)-)，3.11(ddd，1H，J＝6.9，7.6， 12.4Hz，-SCH ₂(1H)-)，2.46(ddd，1H，J＝6.2，6.2，12.4Hz，-SCH₂ CH ₂(1H)-)，2.22 (t，8H，J＝7.6 Hz，-CH₂ CH ₂CO-×3)，2.11(dd，2H，J＝6.9，7.6Hz，-COCH ₂CH₂ CH₂CH₂-)，1.97(t，6H，J＝7.6Hz，-CH ₂CH₂CO-×3)，1.91(ddd，1H，J＝6.9，6.9， 12.4Hz-SCH₂ CH ₂(1H)-)，1.74^-1.57(m 4H，-COCH₂ CH ₂CH₂ CH ₂-)，1.51-1.38 (m，2H，-COCH₂CH₂ CH ₂CH₂-)，1.43(s，27H，  CH₃×9)。 

并且进行¹³C-NMR(150MHz，CDCl₃)的测定，结果为δ172.9、172.1、80.7、57.3、56.3、40.2、38.5、37.2、34.6、30.0、29.8、28.9、28.1、25.3。由此可以确认化合物28的结构。 

(2)N₃-TEG-NHBoc(化合物33)的合成(参见图16) 

在6ml1，4-二噁烷中溶解N₃-TEG-CO₂Et(化合物5)(500mg，1.64mmol)，在0℃下反应液中加入氢氧化钠水溶液(1ml，150mg/ml)，在相同温度下搅拌3小时。浓缩除去1，4—二噁烷后，加入5％的硫酸氢钾水溶液和氯仿。用氯仿萃取3次水相，使用无水硫酸钠干燥有机相后，滤去干燥剂，进行减压浓缩。得到的残渣(化合物6)不精制，在接下来的偶联反应中使用。产量为435mg(96％)。在无水二甲基甲酰胺中溶解得到的浓缩残渣和N-Boc-苯二胺(化合物24)(327mg，1.57mmol)，在氩气氛围气中、室温下依次加入DIEA(410μl，2.35mmol)、HOAt(320mg，2.35mmol)、EDC.HCl(451mg，2.35mmol)，搅拌14小时。在反应溶液中加入水后，用醋酸乙酯萃取3次水相。用饱和食盐水和饱和碳酸氢钠水溶液清洗有机相，使用无水硫酸镁干燥后，滤去干燥剂，进行减压浓缩。用硅胶柱色谱法(50g，甲苯：醋酸乙酯＝1∶1)精制得到的浓缩残渣，得到淡黄色油状物N₃-TEG-NHBoc(化合物33)。产量为597mg(81％)。 

对该化合物33进行¹H-NMR谱(600MHz，CDCl₃)的测定，结果为 

δ8.81(bs，1H，-NHCO-)，7.61(s，1H，aromatic)，7.35(d，1H，J＝6.9Hz， aromatic)，7.26-7.20(m，2H，aromatic)，6.71(bs，1H，-NHCO-)，4.10(s，2H，-O CH ₂CONH-)，3.78-3.70(m，8H，ethyleneglycol chain)，3.67-3.62(m，6H，ethylene glycol chain，-CONHCH₂ CH ₂O-)，3.35(t，2H，J＝5.5Hz，-CONHCH ₂CH₂O-) 

并且进行¹³C-NMR(150MHz，CDCl₃)的测定，结果为δ168.3、152.6、139.0、138.0、129.5、114.5、114.3、109.8、80.5、71.2、70.6、70.6、70.6、70.5、70.4、70.2、70.0、50.6、28.3。由此可以确认化合物33的结构。 

(3)H₂N-TEG-NHBoc(化合物30)的合成(参见图16) 

在4ml甲醇中溶解上述化合物33(N₃-TEG-NHBoc)(200mg，0.425mmol)，加入10％的Pd/C(200mg)，在氢气氛围气中、室温下搅拌1.5小时。滤去上述Pd/C后，减压浓缩。得到的残渣(化合物30)不精制，使用在接下来的反应中。产量为174mg(93％)。 

(4)三价-(TEG-NHBoc)₃(化合物31)的合成(参见图15) 

在二氯甲烷/水(2.2ml，10/1)中溶解上述化合物28(三价-(O^tBu)₃)(64.2mg，0.106mmol)，在0℃下加入TFA(2ml)，在相同温度下搅拌1小时。浓缩反应液后，与甲苯共沸。在3ml无水二甲基甲酰胺中溶解得到的浓缩残渣(化合物29)和H₂N-TEG-NHBoc(化合物30)(174mg，0.425mmol)，在氩气氛围气中、室温下依次加入DIEA(92.6μl，0.532mmol)、HOAt(72.3mg，0.532mmol)、EDC·HCl(102mg，0.532mmol)，搅拌14小时。在反应溶液中加入水后，用醋酸乙酯萃取3次水相。用饱和食盐水清洗有机相，使用无水硫酸镁干燥后，滤去干燥剂，进行减压浓缩。用硅胶柱色谱法(50g，氯仿：甲醇＝30∶1)精制得到的浓缩残渣，得到淡黄色油状物三价—(TEG-NHBoc)₃ (化合物31)。产量为64.7mg(36％)。 

对该化合物31进行¹H-NMR谱(600MHz，CDCl₃)的测定，结果为 

δ8.88(bs，3H，-NHCO-×3)，7.67(bs，3H，aromatic)，7.42(bs，3H，-NHCO-×3)， 7.31(d，3H，J＝7.7Hz，aromatic)，7.27(d，3H，J＝8.2Hz，aromatic)，7.22(dd， 3H，J＝7.7，8.2Hz，aromatic)，6.63(bt，3H，J＝4.8Hz，-NHCO-×3)，4.11(s，6H， -OCH ₂CONH-×3)，3.78-3.58(m，36H，ethylene glycol chain)，3.57-3.49(m，1H， CH₂ CH(CH₂-)(S-))，3.50(t，6H，J＝5.5Hz，-CONHCH₂ CH ₂O-×3)，3.36(q，6H， J＝5.2Hz，-CONHCH ₂CH₂O-×3)，3.15(ddd，1H，J＝5.5，6.9，11.0Hz，-SCH ₂ (1H)-)，3.09(ddd，1H，J＝6.9，6.9，11.0Hz，-SCH ₂(1H)-)，2.42(ddd，1H，J＝6.9， 6.9，12.4Hz，-SCH₂ CH(1H)-)，2.12-2.06(m，8H，-CH₂ CH ₂CO-×3，-NHCOCH ₂ CH₂CH₂-)，1.95-1.88(m，6H，-CH ₂CH₂CO-×3)，1.87(ddd，1H，J＝6.9，6.9，12.4 Hz，-SCH₂ CH ₂(1H)-)，1.70-1.50(m 4H，COCH₂ CH ₂CH₂ CH ₂-)，1.50(s，27H， -CH₃×9)，1.48-1.33(m，2H，COCH CH₂ CH ₂CH₂-)。 

并且进行¹³C-NMR(150MHz，CDCl₃)的测定，结果为δ173.3、172.8、168.4、152.8、139.3、137.8、129.3、114.5、114.4、110.1、80.2、71.1、70.5、70.4、70.4、70.3、70.1、70.1、69.7、57.3、56.4、40.1、39.2、38.3、37.0、34.5、31.1、30.5、28.8、28.3、25.4。并且进行ESI-MS测定，结果为m/z为875.41[(M+2Na)²⁺]。由此可以确认化合物31的结构。另外，该化合物31的分子量为C₈₁H₁₂₈N₁₀O₂₅S₂：1704.85。 

(5)配体络合物三价-(TEG-Mal)₃(化合物34)的合成(参见图16和图17) 

在二氯甲烷/水(2.2ml，10/1)中溶解上述化合物31(三价-(TEG-NHBoc)₃ )(64.7mg，37.9μmol)，在0℃下加入TFA(2ml)，在相同温度下搅拌2.5小时。浓缩反应液后，与甲苯共沸。得到的残渣(化合物32)不精制，用在接下来的还原胺化反应中。产量为70mg。 

下面对图17进行说明。在二甲基乙酰胺/水(1∶1，400μl)中溶解得到的残渣(化合物32)(含有6.95mg，3.77μmol)和麦芽糖(4.07mg，11.3μmol)，在37℃下放置13小时。然后在反应液中加入醋酸(20μl)和氰基氢化硼钠(2.24mg，35.6μmol)，在37℃下放置59小时。冷冻干燥反应液后，得到的残 渣用分离高速液体色谱法(ODS柱，甲醇/水＝50/50)精制，得到白色固体三价-(TEG-Mal)₃(化合物34)。产量为4.46mg(50％)。 

对该化合物34进行¹H-NMR谱(600MHz，D₂O)的测定，结果为 

δ7.05(dd，3H，J＝7.6，8.2Hz，aromatic)，6.77(s，3H，aromatic)，6.63(dd，3H，J＝ 1.4，7.6Hz，aromatic)，6.47(dd，3H，J＝1.4，8.2Hz，aromatic)，4.92(d，3H，J＝ 3.4 Hz，H-1’×3)，4.01(s，6H，-OCH ₂CONH-×3)，3.81(ddd，3H，J＝2.1，4.8， 7.6Hz，H-2×3)，3.71(ddd，3H，J＝4.1，7.6Hz，H-5×3)，3.74-3.68(m，9H，H-3 ×3，H-5’×3，H-6a’×3)，3.65(dd，3H，J＝2.1，12.4 Hz，H-6b’×3)，3.64-3.60 (m，3H，H-6a× 3)，3.64-3.42(m，36H，-OCH ₂ CH ₂O-×9)，3.56-3.52(m，6H，H-4 ×3，H-3’×3)，3.47-3.43(m，3H，H-6b×3)，3.42-3.39(m，1H，CH₂ CH(CH₂ -)(S-))，3.38(dd，3H，J＝3.4，9.6Hz，H-2’×3)，3.37(t，6H，J＝4.8 Hz， -CONHCH₂ CH ₂O-×3)，3.26(dd，3H，J＝9.6，9.6Hz，H-4’× 3)，3.15(dd，3H，J＝ 4.8，13.7Hz，H1a×3)，3.14(t，6H，CONHCH ₂CH₂O×3)，3.06(dd，J＝7.6， 13.7Hz，H-1b×3)，3.01(ddd，1H，J＝6.2，6.2，11.0Hz，-SCH ₂(1H)-)，2.95(ddd， 1H，J＝6.9，6.9，11.0Hz，-SCH ₂(1H)-)，2.24(ddd，1H，J＝6.2，6.2，12.4Hz， -SCH₂ CH ₂(1H)-)，2.00(t，2H，J＝6.9Hz，-NHCOCH ₂CH-)，1.96-1.92(m，6H， CH₂ CH ₂CO-×3)，1.77-1.69(m，7H，-CH ₂CH₂CO-×3，-SCH₂ CH ₂(1H)-)，1.52- 1.32(m 4H，-COCH₂ CH ₂CH₂ CH ₂-)，1.20-1.14(m，2H，-COCH₂CH₂ CH ₂CH₂-)。 

还进行ESI-MS测定，结果为m/z为1214.57[(M+2Na)²⁺]。由此可以确认化合物34的结构。另外，该化合物34的分子量为C₁₀₂H₁₇₀N₁₀O₄₉S₂：2283.06。 

另外，为了实施发明的最佳形态乃至具体实施方式或实施例能使本发明的技术内容可以完全清楚明白，但是不应当仅限于这些具体例子来进行狭义的解释，在本发明精神和下面记载的权利要求范围内，可以进行各种变化来实施。 

工业实用性 

如上所述，本发明的连接子化合物具有芳香族氨基末端来作为可以导入3单位以上糖分子的位置。并且，作为在表面等离子体共振(SPR)的感应芯片和亲和色谱法的载体等蛋白质分析用载体上可以结合的部位有S-S键。进而，要 极力抑制非特殊疏水性相互作用，且能容易地调整提供到金属键上的二硫基团的长度，要在二硫基团和芳香族基团之间具有寡环氧乙烷。 

因而，通过使用上述连接子化合物，可以起到所谓的在上述载体表面上再现性好地以二维序列3单位以上的糖分子的效果。并且，上述连接子化合物因为可以几乎无视和蛋白质的非特殊相互作用的影响，在观测糖分子和蛋白质相互作用时，可以再现性好地评价糖分子的生物活性。进而，可以有效率地形成金属—硫键。 

并且，本发明的配体络合物是在上述连接子化合物中导入糖分子的制品。 

因而，通过在蛋白质分析用的载体表面上导入上述配体络合物，可以再现性好地二维序列多个糖分子，因而能起到所谓的再现性好地评价糖分子的生物活性的效果。进而，可以起到有效率地形成金属—硫键的效果。 

根据本发明，可以能控制感应芯片表面上的糖链间距离，并且再现性好地二维序列寡糖而获得连接子化合物，并且可以在该连接子化合物中导入糖分子而获得配体络合物。该连接子化合物和配体络合物对于寡糖链芯片的实用化和普及非常有用。 

固定寡糖链的芯片如果作为糖链和蛋白质的功能分析的工具来发展的话，不仅对阐明与寡糖链有关的生命现象有贡献，而且可期待能成为医药品开发中的重要技术。因而，本发明认为具有高度有用性。 

Claims (12)

1.一种用于将糖分子排列在载体表面上的连接子化合物，其特征在于具有通式(1)

表示的结构，式中，a、b、d、e分别独立地是0以上、6以下的整数，上述X具有下述通式(3)或(4)所示的结构，

其中，m¹、m²、m³、m⁴、p¹和p²分别独立地是1至6的整数，q¹、q²、q³、 r¹、r²、r³、t¹、t²、t³、u¹、u²和u³分别独立地是0至6的整数，并且，当b为0时，X内部必须具有寡聚环氧乙烷。

2.如权利要求1所述的连接子化合物，其特征在于具有通式(2)

表示的结构，式中，n是1以上、6以下的整数。

3.一种配体络合物，其特征在于是通过在权利要求1或2所述的连接子化合物的芳香族氨基上导入糖分子得到的。

4.一种用于将糖分子排列在载体的表面上的配体络合物，其特征在于具有通式(5)

表示的结构，式中，m¹、m²、m³、m⁴、n、p¹、p²分别独立地是1以上、6以下的整数，R’是氢或R；

其中，上式R是选自式(6-1)～式(6-6) 

的源于寡糖的化合物。

5.一种用于将糖分子排列在载体的表面上的配体络合物，其特征在于具有通式(7) 

表示的结构，式中，a、b、d、e、q¹、q²、q³、r¹、r²、r³、t¹、t²、t³、u¹、u²、u³分别独立地是0以上、6以下的整数；并且b是0时t¹、t²和t³不是0，t¹、t²和t³是0时b不是0；并且R’是氢或R；

其中，上式R是选自式(6-1)～式(6-6) 

的源于

寡糖的化合物。

6.如权利要求1或2所述的连接子化合物的制备方法，其特征在于包括使硫辛酸和具有用保护基团保护芳香族氨基末端的3个以上支链的胺化合物进行缩合反应的步骤，以及使上述芳香族氨基末端的保护基团脱保护的步骤。

7.一种配体络合物的制备方法，其特征在于使用权利要求1或2所述的连接子化合物和糖分子进行还原胺化反应。

8.如权利要求7所述的配体络合物的制备方法，其特征在于：作为上述糖分子，使用通式(8) 

表示的具有肝素部分二糖结构的硫酸盐化寡糖。

9.如权利要求7所述的配体络合物的制备方法，其特征在于：作为上述糖分子，使用选自组(9)中

的寡糖的至少一种。

10.一种糖分子的导入方法，其特征在于是在载体表面上排列的糖分子的导入方法，其通过将含有权利要求3～5的任何一项记载的配体络合物的溶液和表面上具有金属的载体接触。

11.一种配位基载体，其特征在于是通过将权利要求3～5的任何一项所述的配体络合物固定在表面上具有金属的载体上来制备的。

12.一种表面等离子体共振感应芯片，其特征在于是通过使权利要求3～5任一项所述的配体络合物固定在表面而制成的。 

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