CN1883471A - 一种纳米斑蝥素钠注射制剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种纳米斑蝥素钠注射制剂及其制备方法，其特征在于将斑蝥素钠与药用载体组合，制备成纳米水针剂、输液剂、粉针剂；其特征还在于本发明注射制剂中斑蝥素钠8－12重量份、药用载体26－60重量份，其中纳米粒径为5－100纳米；药理实验结果表明，本发明纳米注射制剂应用安全，与市售斑蝥素钠注射液比较具有更好的药理作用。
Description
所属技术领域
本发明属于医药制药领域，具体涉及一种纳米斑蝥素钠注射制剂及其制备方法。
技术背景
纳米中药主要是指运用纳米技术制造的，径粒小于100纳米的中药有效成分、有效部位、原药及复方制剂。生物机体对药物的吸收、代谢是一个复杂的过程，中药制剂产生的药理效应不能仅仅归之于药物特有的化学组成还与该制剂的物理状态密切相关。因此，改变药物制剂的物理状态是新药研制的一种有效方法。在改变物理状态方面，改变药物的单元尺寸是十分有效的。当颗粒尺寸进入纳米量级时由于量子尺寸效应和表面效应，纳米粒子呈现出新奇的物理化学和生物学特性。这就是应用纳米技术于中药研究可能使药物活性和生物利用度提高乃至产生新的特性依据所在。
纳米中药的制备是研究纳米中药最基础的，也是最重要的问题。将纳米技术引入中药的研究时，必须考虑中药组方的多样性、中药成分的复杂性，例如：中药单昧药可分为矿物药、植物药、动物药和菌物药等，中药的有效部位和有效成分又包括无机化合物和有机化合物、水溶性成分和脂溶性成分等。因此，针对不同的药物，在进行纳米化时必须采用不同的技术路线。纳米中药与中药新制剂关系十分密切，如何在中药理论的指导下进行纳米中药新制剂的研究，将中药制成高效、速效、长效、计量小、低毒、服用方便的现代制剂，也是进行中药纳米化时必须考虑的问题。
目前，纳米技术在中药研究中存在的问题也不能忽视的。一.纳米中药的制备困难：我国虽已制备一些纳米级的中药，可是由于中药品种繁多，成分复杂，不同的成分由于其作用部位、作用机制及作用缓急的不同而要求其粒径大小、载体成分及给药剂量均有可能不同。同时纳米中药应该有它自己的一套质量标准，使其生产规范化；二.纳米中药的毒副作用：药物制成纳米微粒，其物理性质和化学性质均发生了显著的变化，这些变化对人体是否有毒副反应均未有有关的研究报道。但由于纳米材料的特殊性，除了可穿透皮肤，还会进入细胞器内，是否会直接参与或作为催化剂扰乱机体正常的化学反应，均未见有关报道。此外，纳米中药还可以通过机体的屏障系统，那它是否会影响中枢神经系统，精子的生成及其活力、胎儿的发育等，这些问题均无法回避；三.中药在纳米级粉碎后，纳米微粒表面积变大，由于纳米微粒表面的活性使他们很容易团聚在一起，这给纳米微粒的收集及其药效的稳定性带来很大的困难。
现代中药的研究就是要在继承中药传统的基础上，充分利用现代科技手段，使中药具有先进的生产工艺和现代剂型，做到“有效、安全、可控”，将纳米技术应用于中药领域是现代中药发展的重要方向之一。纳米中药一般不是简单地将中药材进行粉碎至纳米量级，而是针对组成中药方剂的某味药的有效部位甚至是有效成分进行纳米技术加工处理，赋予传统中药以新的功能，如：提高生物利用度，增强靶向性；降低毒副作用；呈现新的药效，拓宽原药的适应证；丰富中药的剂型选择；减少用药量，节省中药资源等。
同传统中药相比，纳米中药具有以下特点：①提高了药物的利用度，减少用药量。②增强药物的靶向性。③具有缓释功能，将中药纳米粒进行一定的表面修饰后，可能使中药具有缓释作用。④呈现新的药效，拓宽原药适应症，中药加工至纳米尺寸时，由于其量子尺寸等效应导致其物理、化学特性的改变，从而可使中药呈现出新功能。⑤丰富中药的剂型选择，提升传统给药途径。
徐辉碧等检索了1998年～2000年美国专利中涉及纳米科技的专利，发现该类专利与生物医学相关的专利占总数的80％以上，杨孟君在2001年一年内申请了940多件纳米中药的专利，但其申请的大部分都是中药原料药进行纳米粉碎，其专利实用性不强。
目前纳米中药的研究主要集中于利用纳米技术对少数成分比较明确的单体有效成分进行纳米处理制成纳米制剂，或将原料药直接粉碎成纳米级，对大部分中药的纳米制剂研究还很少，主要是因为中药有效成分和有效部位特别是中药复方中有效部位本身就是一个“黑匣子”，中药中真正起药理作用的有效成分或有效部位研究本身就是一个难题，而且由于中药成分比较复杂，所以将其制备成纳米制剂需要克服的困难较多，因此，中药纳米制剂及技术是医药科研工作者的重要研究课题。
斑蝥素钠注射液由斑蝥素钠制备而成，斑蝥素溶解性差，体内吸收较难达到有效的血药浓度，且有较大的副作用，可引起刺激性炎症、血栓性静脉炎、局部组织坏死、泌尿道和消化道刺激症状，因此将斑蝥素进行合成反应，成为斑蝥素钠，以降低其不良反应，虽然其溶解性增加，但斑蝥素钠不能在癌细胞聚集，不能达到很好的治疗作用，因此斑蝥素钠注射液需要进一步进行改进以增强其治疗作用。
查阅文献和专利，未检索到纳米斑蝥素钠注射制剂的资料。
发明内容
基于上述原因，为了提高斑蝥素钠在癌细胞中的浓度，增强其临床作用，我们经过长期的实验研究，将斑蝥素钠与药用载体组合，制备成纳米斑蝥素钠注射制剂，使斑蝥素钠经包封成纳米物质后，增加了对癌细胞的通进性，提高它在生物膜上的主动转运，并以胞饮作用的方式为细胞所吞噬。由于癌细胞较正常细胞更旺盛活跃，斑蝥素钠纳米药物极易融合进癌细胞内，且因癌细胞中含有较正常细胞更多的磷脂酶与酞胺酶，通过酶解作用又能把大量药物释放出来，并在癌组织中滞留，增强杀伤肿瘤细胞的作用，所以纳米斑蝥素钠注射制剂不但有效地提高抗癌活性，而且能有效的减轻其毒性，应用十分安全，是一种抗癌新制剂，有很高的研究和推广价值，与现有技术比较，本专利将斑蝥素钠进行纳米制备后，具有更好的肿瘤细胞的靶向性。
本发明在于提供一种安全、靶向作用的纳米斑蝥素钠的注射制剂；
本发明还在于提供一种纳米斑蝥素钠注射制剂的制备方法；
本发明还在于提供纳米斑蝥素钠注射制剂的应用；
本发明通过以下技术方案实现的。
一.工艺制法
斑蝥素钠注射制剂纳米技术：
处方：斑蝥素钠8-12重量份，药用载体26-60重量份
方法一：取斑蝥素钠、乳化剂和脂质，在通氮气条件下加热至80±5℃，在搅拌条件下加入相同温度甘油和poloxamer188的水溶液，制成粗乳，在80±5℃通氮气条件下用高压乳匀机载41.4MPa压力下乳匀5次，充氮气分装后，迅速冷却形成主药混悬液。
方法二：取斑蝥素钠、卵磷脂、泊络沙姆F-68、土温80，在高速搅拌条件加入70±5℃的蒸馏水中，待完全熔融作为水相，再称取单硬脂酸甘油酯加热熔融作为油相，将油相缓慢加入水相中，持续搅拌1h后超声分散：室温，频率45-50Hz，超声时间5-8分钟，即得澄明的混悬液。
方法三：取斑蝥素钠，脂质和丙酮加入容器中，超声使充分溶解，加入乳化剂，微热使溶成有机相，另取助乳化剂泊络沙姆F-68溶于水中，构成水相，将有机相在(1000r/min)搅拌下注入75±2℃水相中，继续加热搅拌4h，使有机融媒完全蒸发并使体系浓缩，将所得的半透明体系搅拌下(1000r/min)快速溶解于0-2℃的水相，继续搅拌2h，即得混悬液。
方法四：取斑蝥素钠，溶于30％-70％乙醇中；将脂质中一种或多种溶于烷烃，混合搅拌均匀；将乙醇溶解物和烷烃溶解物混合，放入旋转刮膜蒸发仪，控制压力0.1-0.2个大气压，去除有机溶剂至尽，将蒸馏物放入密闭容器中进行超声处理，得到混悬液。
本发明所用的脂质：如脂肪酸甘油酯类(包括三硬脂酸甘油酯、三棕榈酸甘油酯、三肉豆蔻酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、三窬酸甘油酯、Witepsol W35、WitepsolH35、Witepsol H42、单硬脂酸甘油酯)及脂肪酸类(如硬脂酸、棕榈酸)等；
本发明所用的乳化剂：如磷脂(包括大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂及磷脂酰胆碱等)、泊洛沙姆、聚山梨醇、胆酸盐、四丁酚醛等；
方法五：油相：将斑蝥素钠油溶液(聚氰基丙烯酸烷酯、聚乳酸、聚丙交酯-乙交酯、壳聚糖、明胶中的一种或几种)，同无水乙醇混合，摇匀，得透明溶液；水相：为0.5％非离子型表面活性剂Pluronic F68的水溶液(pH值约6)，两相均为20℃，将油相通过硅胶管或细针头射入电磁搅拌的水相中，立即形成纳米囊，将溶液真空蒸发至原体积的1/5左右，用玻砂漏斗(9-15μm)过滤，即得混悬液。
制剂制备：
水针剂制备：取上述混悬液，加注射用水溶解完全，加入稳定剂PVP，调节PH值，过滤，灭菌，灌装，得到水针剂；
输液剂制备：取上述混悬液加入药用辅料，加注射用水溶解完全，加入稳定剂PVP，调节PH值，过滤，灭菌，灌装，得到输液剂；
粉针剂制备：取上述混悬液加入药用辅料，加注射用水溶解完全，调节PH值，过滤，灭菌，冷冻干燥，得到粉针剂；
本发明输液剂所用的药用辅料为氯化钠或葡萄糖；本发明粉针剂所用的辅料为蔗糖、乳糖或甘露醇：
本发明纳米水针剂、纳米输液剂加入少量PVP(聚乙烯吡咯烷酮)，可以提高制剂的稳定性。
本发明所用的以上载体制备工艺是我们经大量实验研究和优选的结果，在研究过程中我们采用了很多纳米技术工艺并进行了比较，有的工艺难以制备成纳米药物，而有的工艺即便制备成纳米药物，也达不到本发明制剂的靶向效果。
本发明纳米斑蝥素钠注射制剂在制备治疗原发性肝癌、白细胞低下、肝炎、肝硬化、乙型肝炎病症的应用。
二.质量标准
检测依据：根据《中华人民共和国药典》(2005年版，二部附录XIX E微囊、微球与脂质体制剂指导原则)进行的纳米质量检测。
实验仪器：H-7000型透射电镜仪(日本Hitachi公司)；Zetamaster光子相关光谱仪(英国Malvern公司)；LC-10A高效液相色谱仪(日本岛津)；TGL-18G型台式高速离心机。
1.形态观察及粒径
将本专利斑蝥素钠纳米药物在透射电镜下进行形态观察，可见呈圆球体，大小较均匀，表面光滑，无粘连。根据纳米药物的光学显微照片测定了1000个，平均粒径为40±5nm，最大粒径为60nm，最小粒径为10nm，且粒径分布符合正态分布规律。
2.包封率和载药量测定
以斑蝥素钠进行含量测定，并用下述公式计算包封率和载药量：
包封率(％)＝(投药量-游离药物量)/投药量×100％；
载药量(％)＝(投药量－游离药物量)/纳米药物的重量×100％。结果：包封率为90.3％，载药量为20％-30％。
3.稳定性考察
将纳米药物分别置于小瓶内，密封。于冰箱(3-5℃)、室温(20-25℃)和37℃(RH75％)的环境中放置，于0、1、2和3月观测纳米药物的外观、大小、再分散性等。结果均未见明显变化，3种条件下的纳米药物再分散性保持良好，无聚合现象的发生。结果见表1。
表1稳定性实验结果
| 放置条件 | 观测指标 | 时间(月) | |||
| 0 | 1 | 2 | 3 | ||
| 3-5℃ | 平均粒径(nm) | 52.3 | 52.3 | 52.8 | 52.9 |
| 颜色 | 白色 | 白色 | 白色 | 白色 | |
| 20-25℃ | 平均粒径(nm) | 52.1 | 52.3 | 52.6 | 53.1 |
| 颜色 | 白色 | 白色 | 白色 | 白色 | |
| 37℃(RH75％) | 平均粒径(nm) | 52.1 | 52.4 | 52.8 | 53.2 |
| 颜色 | 白色 | 白色 | 白色 | 白色 | |
结论：通过上述实验表明，本专利纳米药物具有很好的稳定性，充分说明本发明工艺具有实际意义。
三.检测分析实验
斑蝥素钠注射制剂有效成分的检测分析
根据WS-10001-(HD-0044)-2002标准中斑蝥素钠注射液的【含量测定】的方法测定纳米斑蝥素钠注射制剂和市售斑蝥素钠注射液中人参皂苷和斑蝥素的含量，实验结果见表2：
表2斑蝥素钠注射制剂含量比较
| 组别 | 班蝥素钠含量mg/瓶 |
| 市售斑蝥素钠注射液纳米斑蝥素钠水针剂 | 9.810.2 |
| 纳米斑蝥素钠输液剂纳米斑蝥素钠粉针剂 | 10.210.3 |
结论：通过上述实验表明，本专利工艺具有实际意义。
四.安全性实验
实验1
刺激性实验
实验药物：本发明各组纳米斑蝥素钠制剂(广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)
实验动物：健康大耳家兔，雌雄兼用。
实验方法：取健康大耳家兔3只，将动物固定于兔箱内，用酒精将皮肤消毒后，于右侧耳缘静脉处注射本专利纳米斑蝥素钠注射制剂，于另一侧对应部位注射同一体积的等渗葡萄糖水作为对照。每日注射1次，连续3次，观察兔耳缘静脉反应。于末次给药24h后将兔放血处死，取下两耳，用10％甲醛溶液浸泡，距注射部位1-4cm处，解剖取出静脉，做组织切片检查，观察注射部位的反应。
实验结果：试验过程中，肉眼观察两耳静脉注射部位处，未见红肿、热等刺激表现。表明：给药组切片部位组织形态无明显差异，未见本品毒性所致的病理形态学改变(血管结构正常，无内皮细胞损伤，无血栓形成及其他病理性变化)。
实验2
溶血毒性考察
实验药物：本发明各组纳米斑蝥素钠注射制剂(广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)
实验方法：
2％红细胞混悬液的制备：取兔耳缘静脉取血10-20ml，放入盛有玻璃珠的锥形瓶中，振摇10分钟，除去纤维蛋白原，使成脱纤血。加10倍量的生理盐水溶液，摇匀，离心，除去上清液，沉淀的红细胞再用生理盐水溶液洗涤2-3次，至上清液不呈红色时为止。将所得的红细胞用用生理盐水配成浓度为2％的混悬液，即得。
试验方法：取试管6支，按表3中的配比量依次加入2％红细胞混悬液和生理盐水溶液，混匀，于37℃恒温箱中放置30分钟，分别加入不同量的本发明纳米斑蝥素钠注射制剂(以第6管为空白对照)，摇匀后，置37℃恒温箱中，开始每隔15分钟观察1次，1小时后，每隔1小时观察1次，共观察2小时。
表3各组别配比量
| 试管编号 | 2％红细胞混悬液(ml) | 生理盐水溶液(ml) | 药液(ml) |
| 12345 | 4.04.04.04.04.0 | 3.03.13.23.33.4 | 2.01.51.00.50.1 |
| 6 | 4.0 | 3.5 | 0 |
实验结果：以第3试管为准，各管均未染有红色，显微镜下观察未见有红细胞破裂，说明本专利纳米斑蝥素钠注射制剂不溶血，安全性好。
实验3
急性毒性实验
实验药物：本发明各组纳米斑蝥素钠注射制剂(广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)；斑蝥素钠注射液(贵州益佰制药股份有限公司)
实验动物：健康小鼠18-22g，，雌雄各半。
实验方法：取小鼠，分为市售斑蝥素钠注射液组、本专利纳米斑蝥素钠水针剂组、输液剂组、粉针剂组，腹腔给药，按照体表面积换算成小鼠给药剂量，每天给药3次，连续7天，观察小鼠死亡情况，记录数据，按改良寇氏法计算斑蝥素钠注射制剂的LD50值实验结果见表4：
表4小鼠用药LD50值比较
| 组别 | 动物数只 | LD50mg/kg |
| 市售斑蝥素钠注射液组本专利纳米斑蝥素钠水针剂本专利纳米斑蝥素钠输液组本专利纳米斑蝥素钠粉针剂组 | 20202020 | 3.413.343.323.37 |
结论：通过上述实验表明，本专利纳米斑蝥素钠注射制剂与市售斑蝥素钠注射液具有相同的安全性
六.药理实验
实验1
靶向组织中药物含量的测定
实验药物：本发明各组纳米斑蝥素钠注射制剂(广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)；斑蝥素钠注射液(贵州神奇制药有限公司)
实验动物：大鼠，体重约180-220g，雌雄不限。
实验方法：取大鼠，分为市售斑蝥素钠注射液组、本专利纳米斑蝥素钠水针剂组、输液剂组、粉针剂组，大鼠腹腔给药，给药量为1ml/kg(输液制剂与粉针剂处理成与水针剂相同密度的溶液)，30min后立即断头处死，取血浆和肝、肺、淋巴组织，取血浆离心10min(2000rpm)，取血清分析测定含量。取出的大鼠组织用生理盐水轻轻冲洗，用滤纸吸干，组织膜血管剥离干净后取组织，称重。然后按组织∶生理盐水＝1∶1.5(W/V)的比例匀浆，离心10min(2000rpm)，取上清液分析测定含量(测定斑蝥素钠含量)，见表5
表5同组织药物浓度含量测定
| 组别 | 血清中斑蝥素钠含量 | 肝脏中斑蝥素钠含量 | 肺脏中斑蝥素钠含量 | 淋巴组织中斑蝥素钠含量 |
| ug/ml | ug/ml | ug/ml | ug/ml | |
| 市售斑蝥素钠注射液本专利纳米斑蝥素钠水针剂本专利纳米斑蝥素钠输液剂本专利纳米斑蝥素钠粉针剂 | 9.820.650.720.71 | 0.712.872.872.76 | 0.833.413.403.47 | 1.364.524.574.62 |
结论：通过上述实验表明，本发明纳米斑蝥素钠注射制剂具有很好的组织器官靶向性。
实验2
对大鼠肝肿瘤抑制的比较
实验动物：大鼠，150g-180g，雌雄不分。
实验药物：生理盐水；本发明各组纳米斑蝥素钠注射制剂(广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)；斑蝥素钠注射液(贵州神奇制药有限公司)
实验方法：取大鼠分为生理盐水组、市售斑蝥素钠注射液组、本专利纳米斑蝥素钠水针剂组、输液剂组、粉针剂组，作W256的肝内接种，接种7天后，用戊巴比妥钠按35mg/kg的剂量腹腔注射麻醉，固定，剖腹暴露肝，测量肝上肿瘤表面最大径(a)和最小径(b)，按(a*b2)/2＝V(肿瘤体积)。分离胃、十二指肠动脉、肝总动脉和肝固有动脉，结扎胃、十二指肠动脉远端，以银夹阻断肝总动脉，于手术放大镜下在胃十二指肠动脉上切口并插入外径0.3mm导管后再送入肝固有动脉，然后按实验分组分别注入受试药物，术后拔管结扎胃十二指肠动脉，放开肝总动脉银夹，再缝合切口，将大鼠置于动物室待苏醒，继续饲养观察，手术后8天，按上法检测肿瘤体积，实验结果见表6：
表6各组制剂对肿瘤的抑制比较
| 组别 | 给药前肿瘤体积mm3 | 给药后肿瘤体积mm3 | 体积变化百分数％ |
| 生理盐水组市售斑蝥素钠注射液本专利纳米斑蝥素钠水针剂本专利纳米斑蝥素钠输液剂本专利纳米斑蝥素钠粉针剂 | 4.284.224.314.384.32 | 6.192.471.892.021.94 | +44.6-41.5**-56.1**【*】-53.9**【*】-55.1**【*】 |
注：与生理盐水组比较**P＜0.01；与阳性对照组比较【*】P＜0.05
实验3
对CCl4急性肝损伤的保护作用
实验药物：生理盐水；本发明各组纳米斑蝥素钠注射制剂(广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)；斑蝥素钠注射液(贵州神奇制药有限公司)
实验仪器：日立7170型自动生化分析仪(试剂由日立公司提供)
实验动物：Balb/C小鼠，体重20-22g，雌雄兼用。
统计方法：数据处理采用两样本均数比较的t检验，并在Pems统计学软件包下进行计算。
实验方法：将小鼠分为生理盐水组、CCl4组、斑蝥素钠注射液组、本发明纳米斑蝥素钠水针剂组、粉针剂组、输液组，小鼠每天腹腔给药1次，生理盐水组、CCl4组给予生理盐水，给药组给药量为：1.5mg/kg，，连续给药3天，于第三天除生理盐水组外，每组均腹腔注射CCl4(20ul/kg)，16小时后血测定血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)，并肝组织作常规组织病理学检查，结果见表7：
表7不同制剂对CCl4肝损伤ALT和AST的影响
| 组别 | 动物数(只) | ALT | AST |
| 生理盐水组CCl4组斑蝥素钠注射液组本发明纳米斑蝥素钠水针剂组本发明纳米斑蝥素钠输液组 | 1010101010 | 85.1±31.9**1711.1±979.8947.8±325.9**736.1±128.3**#721.9±117.8**# | 108.1±67.7**623.5±247.3302.7±114.3**167.3±44.3**#158.9±48.7**# |
| 本发明纳米斑蝥素钠粉针剂组 | 10 | 728.5±126.5**# | 154.6±51.3**# |
注：与CCl4组比较，**p＜0.01：与斑蝥素钠注射液组比较#P＜0.05
小结：注射CCl416小时后，肝组织和肝功能明显受损，血清ALT和AST显著提高，数据显示，本发明各组纳米制剂均能较好的降低血清中的ALT和AST水平，减轻肝组织的变化和坏死。
实施例4
对CCl4导致的肝纤维化的保护作用
实验药物：生理盐水；本发明各组纳米斑蝥素钠注射制剂(广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)；斑蝥素钠注射液(贵州神奇制药有限公司)
实验仪器：日立7170型自动生化分析仪(试剂由日立公司提供)
实验动物：Wistar大鼠，体重200-240g，雌雄兼用。
实验方法：取大鼠，分为生理盐水组、CCl4组、斑蝥素钠注射液组、本发明纳米斑蝥素钠水针剂组、粉针剂组、输液组，大鼠每天腹腔给药1次，生理盐水组、CCl4组给予生理盐水，给药组给药量为：1.1mg/kg，给药第一天起皮下注射CCl4，每周两次，每次300ul/kg，生理盐水组给予等容量的生理盐水，连续给药和CCl48周，末次注射CCl424小时后，取血测定ALT、AST、血清总蛋白、白蛋白、球蛋白含量，同时取肝组织作病理组织学检查，实验结果见表8、表9：
表8不同制剂对大鼠肝纤维化ALT和AST的影响
| 组别 | 动物数(只) | ALT | AST |
| 生理盐水组CCl4组斑蝥素钠注射液组本发明纳米斑蝥素钠水针剂组本发明纳米斑蝥素钠输液组本发明纳米斑蝥素钠粉针剂组 | 101010101010 | 51.0±8.3**509.1±253.1267.2±241.4**189.8±96.3**#184.8±95.6**#185.7±98.3**# | 89.9±14.2**239.8±109.7121.6±65.2**95.2±21.3**#96.1±22.8**#193.9±21.1**# |
注：与CCl4组比较，**P＜0.01；与斑蝥素钠注射液组比较#P＜0.05
表9不同制剂对大鼠肝纤维化血浆蛋白的影响
| 组别 | 动物数(只) | 总蛋白 | 白蛋白 | 球蛋白 |
| 生理盐水组CCl4组斑蝥素钠注射液组本发明纳米斑蝥素钠水针剂组本发明纳米斑蝥素钠输液组本发明纳米斑蝥素钠粉针剂组 | 101010101010 | 80.24±9.33**61.05±5.9769.21±6.16**75.38±5.42**#75.63±5.66**#76.42±5.71**# | 41.64±9.1425.84±4.1633.54±5.8338.12±7.2338.49±7.0537.89±6.98 | 40.08±8.2535.21±5.5836.67±4.8537.26±6.8137.14±6.5538.53±5.46 |
注：与CCl4组比较，**P＜0.01：与斑蝥素钠注射液组比较#P＜0.05
小结：病理学检查，发现实验大鼠有比较典型的肝纤维化，实验数据表明，本发明纳米注射制剂可以明显提高肝纤维化大鼠血浆总蛋白和白蛋白含量，降低球蛋白含量，减轻了肝纤维化程度和肝纤维化发生率。
结论：通过以上药理实验表明，本发明的纳米斑蝥素钠注射制剂比市售斑蝥素钠注射液的药理作用更好。
七.制备实施例
斑蝥素钠纳米技术：
处方：斑蝥素钠8克，药用载体26克，脂质10克，乳化剂16克；
方法一：取斑蝥素钠8克、乳化剂大豆卵磷脂16克和脂质三硬脂酸甘油酯10克，在通氮气条件下加热至80±5℃，在搅拌条件下加入相同温度甘油和poloxamer188的水溶液，制成粗乳，在80±5℃通氮气条件下用高压乳匀机载41.4MPa压力下乳匀5次，充氮气分装后，迅速冷却形成主药混悬液。
方法二：取斑蝥素钠8克、卵磷脂、泊络沙姆F-68、土温80共16克，在高速搅拌条件加入70±5℃的蒸馏水中，待完全熔融作为水相，再称取单硬脂酸甘油酯10克加热熔融作为油相，将油相缓慢加入水相中，持续搅拌1h后超声分散：室温，频率45-50Hz，超声时间5-8分钟，即得澄明的混悬液。
方法三：取斑蝥素钠8克，脂质三棕榈酸甘油酯352克和丙酮10ml加入容器中，超声使充分溶解，加入乳化剂蛋黄卵磷脂528克，微热使溶成有机相，另取助乳化剂泊络沙姆F-68溶于10ml水中，构成水相，将有机相在(1000r/min)搅拌下注入75±2℃水相中，继续加热搅拌4h，使有机融媒完全蒸发并使体系浓缩，将所得的半透明体系搅拌下(1000r/min)快速溶解于0-2℃的水相，继续搅拌2h，即得混悬液。
方法四：取斑蝥素钠8克，溶于30％乙醇中；将脂质中三月桂酸甘油酯10克溶于正己烷中，混合搅拌均匀；将乙醇溶解物和烷烃溶解物混合，放入旋转刮膜蒸发仪，控制压力0.1个大气压，去除有机溶剂至尽，将蒸馏物放入密闭容器中进行超声处理，得到混悬液。
方法五：油相：将斑蝥素钠8克与聚氰基丙烯酸烷酯26克混合成油溶液，同无水乙醇混合，摇匀，得透明溶液；水相：为0.5％非离子型表面活性剂Pluronie F68的水溶液(pH值约6)，两相均为20℃，将油相通过硅胶管或细针头射入电磁搅拌的水相中，立即形成纳米囊，将溶液真空蒸发至原体积的1/5左右，用玻砂漏斗(9-15μm)过滤，即得混悬液。
制剂制备：
水针剂制备：取上述混悬液，加注射用水溶解完全，加入稳定剂PVP，调节PH值，过滤，灭菌，灌装，得到水针剂1000瓶；
输液剂制备：取上述混悬液加入药用辅料氯化钠，加注射用水溶解完全，加入稳定剂PVP，调节PH值，过滤，灭菌，灌装，得到输液剂1000瓶；
粉针剂制备：取上述混悬液加入药用辅料蔗糖，加注射用水溶解完全，调节PH值，过滤，灭菌，冷冻干燥，得到粉针剂1000瓶；
【将上述纳米制剂进行检测，其纳米粒径为5-100纳米】
实施例2
斑蝥素钠纳米技术：
处方为：斑蝥素钠12克，药用载体60克，其中脂质体制备中乳化剂为32克、脂质28克，
方法一：取斑蝥素钠12克、乳化剂蛋黄卵磷脂32克和脂质三肉豆蔻酸甘油酯28克，在通氮气条件下加热至80±5℃，在搅拌条件下加入相同温度甘油和poloxamer188的水溶液，制成粗乳，在80±5℃通氮气条件下用高压乳匀机载41.4MPa压力下乳匀5次，充氮气分装后，迅速冷却形成主药混悬液。
方法二：取斑蝥素钠12克、卵磷脂、泊络沙姆F-68、土温80共32克，在高速搅拌条件加入70±5℃的蒸馏水中，待完全熔融作为水相，再称取单硬脂酸甘油酯28克加热熔融作为油相，将油相缓慢加入水相中，持续搅拌1h后超声分散：室温，频率45-50Hz，超声时间5-8分钟，即得澄明的混悬液。
方法三：取斑蝥素钠12克，脂质三月桂酸甘油酯28克和丙酮加入容器中，超声使充分溶解，加入乳化剂磷脂酰胆碱32克，微热使溶成有机相，另取助乳化剂泊络沙姆F-68溶于水中，构成水相，将有机相在(1000r/min)搅拌下注入75±2℃水相中，继续加热搅拌4h，使有机融媒完全蒸发并使体系浓缩，将所得的半透明体系搅拌下(1000r/min)快速溶解于0-2℃的水相，继续搅拌2h，即得混悬液。
方法四：取斑蝥素钠12克，溶于70％乙醇中；将脂质Witepsol W3528克溶于丙烷中，混合搅拌均匀；将乙醇溶解物和烷烃溶解物混合，放入旋转刮膜蒸发仪，控制压力0.2个大气压，去除有机溶剂至尽，将蒸馏物放入密闭容器中进行超声处理，得到混悬液。
方法五：油相：将斑蝥素钠12克和聚乳酸60克形成油溶液，同无水乙醇混合，摇匀，得透明溶液；水相：为0.5％非离子型表面活性剂Pluronic F68的水溶液(pH值约6)，两相均为20℃，将油相通过硅胶管或细针头射入电磁搅拌的水相中，立即形成纳米囊，将溶液真空蒸发至原体积的1/5左右，用玻砂漏斗(9-15μm)过滤，即得混悬液。
制剂制备：
水针剂制备：取上述混悬液，加注射用水溶解完全，加入稳定剂PVP，调节PH值，过滤，灭菌，灌装，得到水针剂1000瓶；
输液剂制备：取上述混悬液加入药用辅料葡萄糖，加注射用水溶解完全，加入稳定剂PVP，调节PH值，过滤，灭菌，灌装，得到输液剂1000瓶：
粉针剂制备：取上述混悬液加入药用辅料乳糖，加注射用水溶解完全，调节PH值，过滤，灭菌，冷冻干燥，得到粉针剂1000瓶；
【将上述纳米制剂进行检测，其纳米粒径为5-100纳米】
实施例3
斑蝥素钠纳米技术：
处方为：斑蝥素钠9克，药用载体36克，其中脂质体制备中乳化剂为25克、脂质11克，
方法一：取斑蝥素钠9克、乳化剂泊洛沙姆25克和脂质单硬脂酸甘油酯11克，在通氮气条件下加热至80±5℃，在搅拌条件下加入相同温度甘油和poloxamer188的水溶液，制成粗乳，在80±5℃通氮气条件下用高压乳匀机载41.4MPa压力下乳匀5次，充氮气分装后，迅速冷却形成主药混悬液。
方法二：取斑蝥素钠9克、卵磷脂、泊络沙姆F-68、土温80共25克，在高速搅拌条件加入70±5℃的蒸馏水中，待完全熔融作为水相，再称取单硬脂酸甘油酯11克加热熔融作为油相，将油相缓慢加入水相中，持续搅拌1h后超声分散：室温，频率45-50Hz，超声时间5-8分钟，即得澄明的混悬液。
方法三：取斑蝥素钠9克，脂质硬脂酸、棕榈酸11克和丙酮加入容器中，超声使充分溶解，加入乳化剂聚山梨醇25克，微热使溶成有机相，另取助乳化剂泊络沙姆F-68溶于水中，构成水相，将有机相在(1000r/min)搅拌下注入75±2℃水相中，继续加热搅拌4h，使有机融媒完全蒸发并使体系浓缩，将所得的半透明体系搅拌下(1000r/min)快速溶解于0-2℃的水相，继续搅拌2h，即得混悬液。
方法四：取斑蝥素钠9克，溶于35％乙醇中；将脂质三硬脂酸甘油酯、三棕榈酸甘油酯11克溶于正己烷中，混合搅拌均匀；将乙醇溶解物和烷烃溶解物混合，放入旋转刮膜蒸发仪，控制压力0.12个大气压，去除有机溶剂至尽，将蒸馏物放入密闭容器中进行超声处理，得到混悬液。
方法五：油相：将斑蝥素钠9克和聚丙交酯-乙交酯、壳聚糖共36克形成油溶液，同无水乙醇混合，摇匀，得透明溶液；水相：为0.5％非离子型表面活性剂Pluronic F68的水溶液(pH值约6)，两相均为20℃，将油相通过硅胶管或细针头射入电磁搅拌的水相中，立即形成纳米囊，将溶液真空蒸发至原体积的1/5左右，用玻砂漏斗(9-15μm)过滤，即得混悬液。
制剂制备：
水针剂制备：取上述混悬液，加注射用水溶解完全，加入稳定剂PVP，调节PH值，过滤，灭菌，灌装，得到水针剂1000瓶；
输液剂制备：取上述混悬液加入药用辅料葡萄糖，加注射用水溶解完全，加入稳定剂PVP，调节PH值，过滤，灭菌，灌装，得到输液剂1000瓶；
粉针剂制备：取上述混悬液加入药用辅料蔗糖，加注射用水溶解完全，调节PH值，过滤，灭菌，冷冻干燥，得到粉针剂；
【将上述纳米制剂进行检测，其纳米粒径为40-120纳米】
实施例4
斑蝥素钠纳米技术：
处方为：斑蝥素钠10克，药用载体41克，其中脂质体制备中乳化剂为29克、脂质12克，
方法一：取斑蝥素钠10克、乳化剂胆酸盐、四丁酚醛29克和脂质WitepsolH35、Witepsol H42、单硬脂酸甘油酯12克，在通氮气条件下加热至80±5℃，在搅拌条件下加入相同温度甘油和poloxamer188的水溶液，制成粗乳，在80±5℃通氮气条件下用高压乳匀机载41.4MPa压力下乳匀5次，充氮气分装后，迅速冷却形成主药混悬液。
方法二：取斑蝥素钠10克、卵磷脂、泊络沙姆F-68、土温80共29克，在高速搅拌条件加入70±5℃的蒸馏水中，待完全熔融作为水相，再称取单硬脂酸甘油酯12克加热熔融作为油相，将油相缓慢加入水相中，持续搅拌1h后超声分散：室温，频率45-50Hz，超声时间5-8分钟，即得澄明的混悬液。
方法三：取斑蝥素钠10克，脂质单硬脂酸甘油酯、棕榈酸12克和丙酮加入容器中，超声使充分溶解，加入乳化剂胆酸盐29克，微热使溶成有机相，另取助乳化剂泊络沙姆F-68溶于水中，构成水相，将有机相在(1000r/min)搅拌下注入75±2℃水相中，继续加热搅拌4h，使有机融媒完全蒸发并使体系浓缩，将所得的半透明体系搅拌下(1000r/min)快速溶解于0-2℃的水相，继续搅拌2h，即得混悬液。
方法四：取斑蝥素钠10克，溶于50％乙醇中；将脂质三月桂酸甘油酯、三窬酸甘油酯、Witepsol W35共12克液体烷烃中，混合搅拌均匀；将乙醇溶解物和烷烃溶解物混合，放入旋转刮膜蒸发仪，控制压力0.16个大气压，去除有机溶剂至尽，将蒸馏物放入密闭容器中进行超声处理，得到混悬液。
方法五：油相：将斑蝥素钠10克和聚丙交酯-乙交酯、壳聚糖、明胶油41克形成溶液，同无水乙醇混合，摇匀，得透明溶液；水相：为0.5％非离子型表面活性剂Pluronic F68的水溶液(pH值约6)，两相均为20℃，将油相通过硅胶管或细针头射入电磁搅拌的水相中，立即形成纳米囊，将溶液真空蒸发至原体积的1/5左右，用玻砂漏斗(9-15μm)过滤，即得混悬液。
制剂制备：
水针剂制备：取上述混悬液，加注射用水溶解完全，加入稳定剂PVP，调节PH值，过滤，灭菌，灌装，得到水针剂1000瓶；
输液剂制备：取上述混悬液加入药用辅料葡萄糖，加注射用水溶解完全，加入稳定剂PVP，调节PH值，过滤，灭菌，灌装，得到输液剂1000瓶；
粉针剂制备：取上述混悬液加入药用辅料蔗糖，加注射用水溶解完全，调节PH值，过滤，灭菌，冷冻干燥，得到粉针剂1000瓶；
【将上述纳米制剂进行检测，其纳米粒径为5-10纳米】
实施例5
斑蝥素钠纳米技术：
处方为：斑蝥素钠11克，药用载体50克，其中脂质体制备中乳化剂为34克、脂质16克。
方法一：取斑蝥素钠11克、乳化剂山梨醇34克和脂质硬脂酸、棕榈酸16克，在通氮气条件下加热至80±5℃，在搅拌条件下加入相同温度甘油和poloxamer188的水溶液，制成粗乳，在80±5℃通氮气条件下用高压乳匀机载41.4MPa压力下乳匀5次，充氮气分装后，迅速冷却形成主药混悬液。
方法二：取斑蝥素钠11克、卵磷脂、泊络沙姆F-68、土温80共34克，在高速搅拌条件加入70±5℃的蒸馏水中，待完全熔融作为水相，再称取单硬脂酸甘油酯16克加热熔融作为油相，将油相缓慢加入水相中，持续搅拌1h后超声分散：室温，频率45-50Hz，超声时间5-8分钟，即得澄明的混悬液。
方法三：取斑蝥素钠11克，脂质Witepsol W35、Witepsol H35、三硬脂酸甘油酯共16克和丙酮加入容器中，超声使充分溶解，加入乳化剂大豆卵磷脂34克，微热使溶成有机相，另取助乳化剂泊络沙姆F-68溶于水中，构成水相，将有机相在(1000r/min)搅拌下注入75±2℃水相中，继续加热搅拌4h，使有机融媒完全蒸发并使体系浓缩，将所得的半透明体系搅拌下(1000r/min)快速溶解于0-2℃的水相，继续搅拌2h，即得混悬液。
方法四：取斑蝥素钠11克，溶于65％乙醇中；将脂质三月桂酸甘油酯、三窬酸甘油酯、Witepsol W35共16克溶于正丁烷，混合搅拌均匀；将乙醇溶解物和烷烃溶解物混合，放入旋转刮膜蒸发仪，控制压力0.18个大气压，去除有机溶剂至尽，将蒸馏物放入密闭容器中进行超声处理，得到混悬液。
方法五：油相：将斑蝥素钠11克和聚丙交酯-乙交酯50克形成油溶液，同无水乙醇混合，摇匀，得透明溶液；水相：为0.5％非离子型表面活性剂Pluronic F68的水溶液(pH值约6)，两相均为20℃，将油相通过硅胶管或细针头射入电磁搅拌的水相中，立即形成纳米囊，将溶液真空蒸发至原体积的1/5左右，用玻砂漏斗(9-15μm)过滤，即得混悬液。
制剂制备：
水针剂制备：取上述混悬液，加注射用水溶解完全，加入稳定剂PVP，调节PH值，过滤，灭菌，灌装，得到水针剂1000瓶；
输液剂制备：取上述混悬液加入药用辅料氯化钠，加注射用水溶解完全，加入稳定剂PVP，调节PH值，过滤，灭菌，灌装，得到输液剂1000瓶；
粉针剂制备：取上述混悬液加入药用辅料甘露醇，加注射用水溶解完全，调节PH值，过滤，灭菌，冷冻干燥，得到粉针剂1000瓶。
【将上述纳米制剂进行检测，其纳米粒径为5-100纳米】
Claims (4)
1.一种纳米斑蝥素钠注射制剂，其特征在于其组成包括斑蝥素钠8-12重量份，药用载体26-60重量份；其特征还在于纳米斑蝥素钠注射制剂中纳米粒径为5-100纳米。
2.根据权利要求1所述的一种纳米斑蝥素钠注射制剂的制备方法，其特征包括以下步骤：
斑蝥素钠注射制剂纳米技术：
方法一：取斑蝥素钠、乳化剂和脂质，在通氮气条件下加热至80±5℃，在搅拌条件下加入相同温度甘油和poloxamer188的水溶液，制成粗乳，在80±5℃通氮气条件下用高压乳匀机载41.4MPa压力下乳匀5次，充氮气分装后，迅速冷却形成主药混悬液。
方法二：取斑蝥素钠、卵磷脂、泊络沙姆F-68、土温80，在高速搅拌条件加入70±5℃的蒸馏水中，待完全熔融作为水相，再称取单硬脂酸甘油酯加热熔融作为油相，将油相缓慢加入水相中，持续搅拌1h后超声分散：室温，频率45-50Hz，超声时间5-8分钟，即得澄明的混悬液。
方法三：取斑蝥素钠，脂质和丙酮加入容器中，超声使充分溶解，加入乳化剂，微热使溶成有机相，另取助乳化剂泊络沙姆F-68溶于水中，构成水相，将有机相在1000r/min搅拌下注入75±2℃水相中，继续加热搅拌4h，使有机融媒完全蒸发并使体系浓缩，将所得的半透明体系1000r/min搅拌下快速溶解于0-2℃的水相，继续搅拌2h，即得混悬液。
方法四：取斑蝥素钠，溶于30％-70％乙醇中；将脂质中一种或多种溶于烷烃，混合搅拌均匀；将乙醇溶解物和烷烃溶解物混合，放入旋转刮膜蒸发仪，控制压力0.1-0.2个大气压，去除有机溶剂至尽，将蒸馏物放入密闭容器中进行超声处理，得到混悬液。
方法五：油相：将斑蝥素钠油溶液，同无水乙醇混合，摇匀，得透明溶液；水相：为0.5％非离子型表面活性剂Pluronic F68的pH值约为6水溶液，两相均为20℃，将油相通过硅胶管或细针头射入电磁搅拌的水相中，立即形成纳米囊，将溶液真空蒸发至原体积的1/5左右，用9-15μm玻砂漏斗过滤，即得混悬液。
制剂制备：
水针剂制备：取上述混悬液，加注射用水溶解完全，加入稳定剂PVP，调节PH值，过滤，灭菌，灌装，得到水针剂；
输液剂制备：取上述混悬液加入药用辅料，加注射用水溶解完全，加入稳定剂PVP，调节PH值，过滤，灭菌，灌装，得到输液剂；
粉针剂制备：取上述混悬液加入药用辅料，加注射用水溶解完全，调节PH值，过滤，灭菌，冷冻干燥，得到粉针剂。
3.根据权利要求1和2所述的纳米斑蝥素钠注射制剂在制备治疗原发性肝癌、白细胞低下、肝炎、肝硬化、乙型肝炎病症药物中的应用。
4.根据权利要求1和2所述的纳米斑蝥素钠注射制剂在制备治疗癌症药物中靶向作用。
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| CN110354299A (zh) * | 2019-07-11 | 2019-10-22 | 西安医学院 | 用于中晚期肝癌介入治疗的中药栓塞微球及其制备方法 |
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