CN1876671A

CN1876671A - 大豆异黄酮提取物、其制备方法和包含它的药物组合物

Info

Publication number: CN1876671A
Application number: CN 200610099352
Authority: CN
Inventors: 廖幼鸣; 王海燕; 刘林; 刘晔; 赵颖涛; 王红; 杨福艳
Original assignee: BAOTAININGTANG BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd BEIJING
Current assignee: Beijing Botanitown Biological Technology Co ltd
Priority date: 2006-07-17
Filing date: 2006-07-17
Publication date: 2006-12-13
Anticipated expiration: 2026-07-17
Also published as: CN100410267C

Abstract

本发明涉及一种大豆异黄酮提取物，其含有三种异黄酮苷化合物：染料木苷、大豆苷、大豆黄苷，三种异黄酮苷化合物总量占提取物总重量的30～89重量％，其中染料木苷占提取物总重量的25～74重量％，大豆苷占提取物总重量的4～15重量％，大豆黄苷占提取物总重量的2.5重量％以下。此外，本发明还涉及包含该大豆异黄酮提取物的药物组合物，以及该大豆异黄酮提取物的制备方法。

Description

大豆异黄酮提取物、其制备方法和包含它的药物组合物

技术领域

本发明涉及一和大豆异黄酮提取物、其制备方法以及包含所述大豆异黄酮提取物的药物组合物。

背景技术

异黄酮类化合物存在于多种植物体内，是植物提取物领域中公认的一类重要物质。大豆尤其是异黄酮的重要资源。大豆为豆科植物大豆Glycine max(L.)merr.的成熟种子，其药用价值始载于“神农本草经”。大豆异黄酮是大豆生长中形成的一类次生代谢产物，主要为3种甙元和由它们形成的9种糖苷。大豆中，异黄酮只有少量以游离形式存在，大部分以β-葡萄糖苷的形式存在。在异黄酮葡萄糖苷中，有一部分是葡萄糖上的C-6羟基被丙二酰基取代，还有一部分是葡萄糖上的C-6羟基被乙酰基取代。12种成份见下表1和化学式1。

表1大豆异黄酮化合物的结构式

化合物	R₁	R₂	R₃
化合物	R₁	R₂	R₃	大豆苷染料木苷大豆黄苷6”-O-乙酰大豆苷6”-O-乙酰染料木苷6”-O-乙酰大豆黄苷6”-O-丙二酰大豆苷6”-O-丙二酰染料木苷6”-O-丙二酰大豆黄苷大豆苷元染料木素大豆黄素	HHHCOCH₃COCH₃COCH₃COCH₂COOHCOCH₂COOHCOCH₂COOH---------	HHOCH₃HHOCH₃HHOCH₃HHOCH₃	HOHHHOHHHOHHHOHH

化学式I

目前大豆异黄酮通常使用乙醇水溶液提取，通过常规的分离方法如过滤、离心等进行分离，通过溶剂萃取法、吸附法、超滤法、柱层析法、沉淀法、重结晶法、逆流色谱法和高压液相色谱法等多种方法进行纯化。

CN1422855A和CN1422856A中公开了对大豆豆粕进行乙醇提取并通过大孔吸附树脂进行吸附来纯化大豆异黄酮的方法，这些方法的缺点是：(1)树脂残留；(2)解吸带来有机溶剂残留；(3)树脂需要反复处理和再生。

CN1448394A中公开了一种纯化大豆异黄酮的方法，包括将过80～100目筛的粉状豆粕用具酸性的萃取剂食用酒精提取，减压蒸馏法进行浓缩，并将浓缩液用柱层析法。本发明工艺简单，效率高，时间效率尤为明显，单产效率大为提高，能耗大幅降低，有着显著的经济与社会效益。但缺点是：(1)硅胶柱层析不易工业化；(2)大量使用硅胶存在环保问题；(3)产品成本高。

CN1449763A中公开了一种提取大豆异黄酮苷组合物的方法，包括将大豆用乙醇提取，经浓缩，再用石油醚萃取，经真空干燥得到干粉，再将干粉溶解后通过大孔吸附树脂柱，得到洗脱液，经真空干燥得干粉，再将干粉经硅胶拌样，硅胶柱层析，洗脱液浓缩，真空干燥得组合物。该法的缺点是：(1)树脂残留；(2)有机溶剂残留；(3)树脂需要反复处理和再生；(4)硅胶柱层析不易工业化；(5)大量使用硅胶存在环保问题；(6)生产周期长，操作烦琐；(7)产品成本高。

发明内容

本发明涉及一种大豆异黄酮提取物、其制备方法以及包含所述大豆异黄酮提取物的药物组合物。

在本发明的第一个方面中，提供了一种大豆异黄酮提取物，其含有三种异黄酮苷化合物：染料木苷、大豆苷、大豆黄苷，三种异黄酮苷化合物总量占提取物总重量的30～89重量％，其中染料木苷占提取物总重量的25～74重量％，大豆苷占提取物总重量的4～15重量％，大豆黄苷占提取物总重量的2.5重量％以下。

在该方面的一个实施方案中，其中染料木苷、大豆苷和大豆黄苷的总量占提取物总重量的50～89重量％，其中染料木苷优选占提取物总重量的42～74重量％，大豆苷优选占提取物总重量的8～15重量％，大豆黄苷优选占提取物总重量的1.5重量％以下。

在本发明的第二个方面中，本发明提供了包含前述大豆异黄酮提取物的药物组合物。在该药物组合物中，所述大豆异黄酮提取物可以单独使用，或者和本领域技术人员公知的有类似活性的成分联合使用。另外，本发明的药物组合物也可以包含药学上可接受的载体。这些载体是本领域技术人员公知的。

在该方面的一个实施方案中，所述药物组合物配制成口服给药、腔肠给药、喷雾给药、注射制剂、输液制剂和透皮吸收的药物制剂。在一个优选实施方案中，所述口服给药的药物制剂选自片剂、胶囊、粉末、颗粒、晶体、溶液、悬液、汤、糖浆、酏剂、茶和咀嚼剂。这些药物制剂均可以利用本领域技术人员公知的技术来制备。

在本发明的第三个方面中，提供了一种制备前述的大豆异黄酮提取物的方法，包括下列步骤：

(a)将豆粕用乙醇提取，以得到乙醇提取液；

(b)将乙醇提取液浓缩至比重为1.10～1.30，以得到流浸膏；

(c)用水将流浸膏稀释至含固形物浓度为20～40％(w/v)；

(d)加入葡萄糖-δ-内酯至浓度为0.05～0.3％(w/v)，并加热至75～95℃持续30～90min以得到大豆异黄酮提取物。

在本发明方法的一个优选实施方案中，其中所用葡萄糖-δ-内酯浓度为0.15％(w/v)。在本发明方法的另一个优选实施方案中，步骤(d)中的加热是90℃持续60min。

在本发明方法的另一个优选实施方案中，还包括在步骤(d)后将沉淀用水洗涤的步骤。在一个更优选的实施方案中，将沉淀用水洗涤1～4次。

根据本发明的上述方面，本发明的一个有利之处是有效成分含量高。大豆中的异黄酮主要有游离型的苷元和结合型的糖苷两类，而苷元在大豆中含量很少，主要是以苷的形式存在，有丙二酰染料木苷、丙二酰大豆苷、丙二酰大豆黄苷、乙酰染料木苷、乙酰大豆苷、乙酰大豆黄苷、染料木苷、大豆苷和大豆黄苷等。国内外研究报道显示染料木苷、大豆苷和大豆黄苷为主要有效成份，而丙二酰和乙酰苷的研究报道很少。本发明在絮凝的同时进行加热，并控制加热条件使丙二酰基和乙酰基的苷全部转化为各自相应的苷。因此，在本发明的大豆异黄酮提取物中，染料木苷、大豆苷和大豆黄苷的总量占提取物总重量的最高为89重量％，其中染料木苷占提取物总重量的最高为74重量％，大豆苷占提取物总重量的最高为15重量％，大豆黄苷占提取物总重量的2.5重量％以下。

本发明的另一个有利之处是使用葡萄糖-δ-内酯作为絮凝剂，一次絮凝就使大豆异黄酮的含量提高到30重量％以上。

本发明的又一有利之处是通过水洗可以使葡萄糖-δ-内酯几乎不残留在大豆异黄酮中，并且更重要的是可以逐步提高沉淀物中大豆异黄酮苷的含量，水洗次数越多大豆异黄酮苷的纯度越高。

具体实施方式

以下通过优选实施例具体说明本发明的各个方面和特征。本领域的技术人员应该理解，这些实施例只是用于说明目的，而不限制本发明的范围。本发明的保护范围只受权利要求书的限制。在不背离权利要求书范围的条件下。本领域的技术人员可以对本发明的各个方面进行各种修改和改进，这些修改和改进也属于本发明的保护范围。

另外，需要注意的是，除非特别指明，下面实施例中所用的各种材料和试剂都是本领域中常用的材料和试剂，可以通过常规的商业途径获得；所用方法均为本领域技术人员公知的常规方法。另外，除非特别指明，物质的百分含量均为重量/重量百分比，即％(w/w)。

实施例1.转化对三种异黄酮总含量的影响

大豆中的异黄酮主要有游离型的苷元和结合型的糖苷两类，而苷元在大豆中含量很少，主要是以苷的形式存在，有丙二酰染料木苷、丙二酰大豆苷、丙二酰大豆黄苷、乙酰染料木苷、乙酰大豆苷、乙酰大豆黄苷、染料木苷、大豆苷和大豆黄苷等。国内外研究报道显示染料木苷、大豆苷和大豆黄苷为主要有效成份，而丙二酰和乙酰苷的研究报道很少。我们在工艺研究中发现加热可使丙二酰和乙酰苷分别转化成各自的苷，因此我们采取在絮凝加热过程中，控制加热条件使丙二酰基和乙酰基的苷全部转化为各自相应的苷，从而提高有效成分的含量。

取大豆异黄酮浸膏200g(含固形物72％)，加水280g使含固形物为30％。另称取葡萄糖-δ-内酯0.75g，加10ml水，加热使溶解，在不断搅拌下缓缓加入浸膏液中，放置30分钟，离心(3500rpm/min)，弃去上清液，得沉淀(湿)8.64g。在60℃下减压干燥后得干浸膏2.16g。测定大豆异黄酮含量为染料木苷18.5％，大豆苷5.6％，大豆黄苷1.5％，三种异黄酮苷总含量为25.6％。

取大豆异黄酮浸膏200g(含固形物72％)，加水280g使含固形物为30％。另称取葡萄糖-δ-内酯(食品添加剂GB7657-87，购于浙江仙居东兴化工厂)0.75g，加10ml水，加热使溶解，在不断搅拌下缓缓加入浸膏中，在90℃下保温60分钟后，放置到室温，离心(3500rpm/min)，弃去上清液，得沉淀(湿)9.02g。在60℃下减压干燥后得干浸膏2.35g。测定大豆异黄酮含量为染料木苷24.5％，大豆苷7.5％，大豆黄苷1.8％，三种异黄酮苷总含量为33.8％。

从上面可以看出不进行转化时，絮凝后沉淀中三种异黄酮苷总含量为25.6％；在絮凝的同时进行了转化，絮凝后沉淀中三种异黄酮苷总含量为33.8％。可以看出经过转化后三种异黄酮总含量提高了约32％。

实施例2：水洗次数对纯度的影响

絮凝后得到的大豆总异黄酮沉淀含量在30％左右，经过深入研究发现通过水洗可以逐步提高沉淀物中大豆异黄酮苷的含量。水洗次数越多大豆异黄酮苷的纯度越高。

称取按前述条件进行絮凝后得到大豆异黄酮粗提物，每次加10倍量的水洗涤，离心(3500r/min)，沉淀60℃减压干燥，测定大豆异黄酮含量，结果如下(表2)：

表2水洗实验结果

水洗次数	0			1			2
水洗次数	0			1			2			实验次数	1	2	3	1	2	3	1	2	3
沉淀干膏量(mg)染料木苷(％)大豆苷(％)大豆黄苷(％)总大豆异黄酮含量(％)	388.126.084.951.2032.23	404.124.895.161.2531.30	393.825.624.861.2231.70	206.535.365.721.3542.43	172.641.756.641.4549.84	190.240.556.511.5248.58	107.154.428.511.5664.49	103.855.418.721.6065.73	105.154.938.641.5565.12	实验次数	1	2	3	1	2	3	1	2	3

表2(续)水洗实验结果

水洗次数	3			4			5
水洗次数	3			4			5			实验次数	1	2	3	1	2	3	1	2	3
沉淀干膏量(mg)染料木苷(％)大豆苷(％)大豆黄苷(％)总大豆异黄酮含量(％)	69.859.0210.901.5271.44	68.759.4811.461.4972.43	70.460.8811.781.4174.07	41.668.0514.241.4083.69	39.569.2014.831.4185.44	40.368.7614.681.3784.81	26.270.8314.881.3887.09	24.771.0315.021.3687.41	24.969.5814.981.4085.96	实验次数	1	2	3	1	2	3	1	2	3

从以上实验结果可以看出，三次平行试验表明，絮凝后沉淀大豆异黄酮总含量约30％左右，水洗一次大豆异黄酮总含量约45％左右，水洗二次后大豆异黄酮总含量约65％左右，水洗三次大豆异黄酮总含量约72％左右，水洗四次大豆异黄酮总含量约84％左右，水洗五次大豆异黄酮总含量约86％左右。第五次水洗纯度基本不再上升多少，但样品损失却较多，所以本发明制备工艺以水洗四次以内为宜，可以根据需求大豆异黄酮纯度为多少，确定水洗几次来获得不同级别的大豆异黄酮产品，比如，需要30％纯度的大豆异黄酮产品，可以直接絮凝后干燥即可；需要40％纯度的大豆异黄酮产品，可以水洗一次后干燥即可；需要50％纯度的大豆异黄酮产品，可以用水洗二次的产品和水洗一次的产品勾兑；需要60％纯度的大豆异黄酮产品，可以水洗二次后干燥即可；需要70％纯度的大豆异黄酮产品，可以水洗三次后干燥即可；需要80％纯度的大豆异黄酮产品，可以水洗四次后干燥即可。

实施例3：制备方案1

取东北大豆30.4吨，提取大豆油后，得大豆粕约24吨。连续进样，每小时1吨，用80％食用酒精36吨，酒精加入量为每小时1.5吨，使用环型浸出器，65℃连续提取。提取液过滤后，连续通过两级60m²/L的膜式蒸发器后进入10m³的釜式减压浓缩罐，进一步浓缩至比重约1.20。

取絮凝剂约9kg溶于15L去离子水中，加入釜式浓缩罐中，进行搅拌混匀，然后加入去离子水调固形物含量为30％，进一步搅拌混匀后加热至90℃，保温30分钟后放置降温。

降温至15℃以下，使用SS-800型离心机进行分离，转速1600rpm，离心20分钟，得沉淀A，放置冷藏。上清液作为进一步提取大豆皂甙和大豆低聚糖的原料，具体操作和方法略。

取沉淀A五份(湿重1200kg)，加入10倍体积的去离子水，搅匀10分钟，使用SS-800型离心机进行离心分离，转速为1600rpm，离心20分钟，沉淀再用10倍体积的去离子水洗涤一次，得沉淀B(湿重360kg)。

取沉淀B，加入5倍量去离子水，搅拌混匀，过150目筛，滤液放入1.5m³的罐中进行灭菌(90℃，30分钟)，灭菌后进行喷雾干燥，得粉末过100目筛。最后装入药品包装用聚乙烯膜的袋中，称重为84kg，提取率为0.055％。含量测定三种异黄酮苷化合物约占提取物的65％，其中染料木苷约占提取物的54％，大豆苷约占提取物的10％，大豆黄苷约占提取物的1％。

实施例4：制备方案2

取东北大豆30.4吨，提取大豆油后，得大豆粕约24吨。连续进样，每小时1吨，用60％食用酒精36吨，酒精加入量为每小时1.5吨，使用环型浸出器，45℃连续提取。提取液过滤后，连续通过两级60m²/L的膜式蒸发器后进入10m³的釜式减压浓缩罐，进一步浓缩至比重约1.10。

取絮凝剂约4kg溶于7L去离子水中，加入釜式浓缩罐中，进行搅拌混匀，然后加入去离子水调固形物含量为40％，进一步搅拌混匀后加热至75℃，保温60分钟后放置降温。

降温至15℃以下，使用SS-800型离心机进行分离，转速1600rpm，离心20分钟，得沉淀A(湿重200kg)，

取沉淀A，加入5倍量去离子水，搅拌混匀，过150目筛，滤液放入1.5m³的罐中进行灭菌(90℃，30分钟)，灭菌后进行喷雾干燥，得粉末过100目筛。最后装入药品包装用聚乙烯膜的袋中，称重为50kg，提取率为0.164％。含量测定三种异黄酮苷化合物约占提取物的30％，其中染料木苷约占提取物的25％，大豆苷约占提取物的4％，大豆黄苷约占提取物的2％。

实施例5：制备方案3

取东北大豆30.4吨，提取大豆油后，得大豆粕约24吨。连续进样，每小时1吨，用80％食用酒精36吨，酒精加入量为每小时1.5吨，使用环型浸出器，室温连续提取。提取液过滤后，连续通过两级60m²/L的膜式蒸发器后进入10m³的釜式减压浓缩罐，进一步浓缩至比重约1.30。

取絮凝剂约18kg溶于30L去离子水中，加入釜式浓缩罐中，进行搅拌混匀，然后加入去离子水调固形物含量为20％，进一步搅拌混匀后加热至95℃，保温90分钟后放置降温。

取沉淀A三份(湿重750kg)，加入10倍体积的去离子水，搅匀10分钟，使用SS-800型离心机进行离心分离，转速为1600rpm，离心20分钟，沉淀再用5倍体积的去离子水洗涤一次，得沉淀B(湿重280kg)。

取沉淀B，加入5倍量去离子水，搅拌混匀，过150目筛，滤液放入1.5m³的罐中进行灭菌(90℃，30分钟)，灭菌后进行喷雾干燥，得粉末过100目筛。最后装入药品包装用聚乙烯膜的袋中，称重为68kg，提取率为0.075％。含量测定三种异黄酮苷化合物约占提取物的50％，其中染料木苷约占提取物的42％，大豆苷约占提取物的8％，大豆黄苷约占提取物的1％。

实施例6：制备方案4

取东北大豆30.4吨，提取大豆油后，得大豆粕约24吨。连续进样，每小时1吨，用90％食用酒精36吨，酒精加入量为每小时1.5吨，使用环型浸出器，室温连续提取。提取液过滤后，连续通过两级60m²/L的膜式蒸发器后进入10m³的釜式减压浓缩罐，进一步浓缩至比重约1.20。

取絮凝剂约9kg溶于15L去离子水中，加入釜式浓缩罐中，进行搅拌混匀，然后加入去离子水调固形物含量为30％，进一步搅拌混匀后加热至95℃，保温30分钟后放置降温。

取沉淀A五份(湿重1300kg)，加入10倍体积的去离子水，搅匀10分钟，使用SS-800型离心机进行离心分离，转速为1600rpm，离心20分钟，沉淀再用10倍体积的去离子水洗涤二次，得沉淀B(湿重220kg)。

取沉淀B，加入5倍量去离子水，搅拌混匀，过150目筛，滤液放入1.5m³的罐中进行灭菌(90℃，30分钟)，灭菌后进行喷雾干燥，得粉末过100目筛。最后装入药品包装用聚乙烯膜的袋中，称重为55kg，提取率为0.036％。含量测定三种异黄酮苷化合物约占提取物的72％，其中染料木苷约占提取物的60％，大豆苷约占提取物的11％，大豆黄苷约占提取物的1％。

实施例7：制备方案5

取东北大豆30.4吨，提取大豆油后，得大豆粕约24吨。连续进样，每小时1吨，用80％食用酒精36吨，酒精加入量为每小时1.5吨，使用环型浸出器，室温连续提取。提取液过滤后，连续通过两级60m²/L的膜式蒸发器后进入10m³的釜式减压浓缩罐，进一步浓缩至比重约1.20。

取沉淀A五份(湿重1100kg)，加入10倍体积的去离子水，搅匀10分钟，使用SS-800型离心机进行离心分离，转速为1600rpm，离心20分钟，沉淀再用10倍体积的去离子水洗涤三次，得沉淀B(湿重130kg)。

取沉淀B，加入5倍量去离子水，搅拌混匀，过150目筛，滤液放入1.5m³的罐中进行灭菌(90℃，30分钟)，灭菌后进行喷雾干燥，得粉末过100目筛。最后装入药品包装用聚乙烯膜的袋中，称重为33kg，提取率为0.022％。含量测定三种异黄酮苷化合物约占提取物的85％，其中染料木苷约占提取物的70％，大豆苷约占提取物的14％，大豆黄苷约占提取物的1％。

实施例8：制备方案6

取沉淀A五份(湿重1260kg)，加入10倍体积的去离子水，搅匀10分钟，使用SS-800型离心机进行离心分离，转速为1600rpm，离心20分钟，沉淀再用10倍体积的去离子水洗涤四次，得沉淀B(湿重90kg)。

取沉淀B，加入5倍量去离子水，搅拌混匀，过150目筛，滤液放入1.5m³的罐中进行灭菌(90℃，30分钟)，灭菌后进行喷雾干燥，得粉末过100目筛。最后装入药品包装用聚乙烯膜的袋中，称重为22kg，提取率为0.014％。含量测定三种异黄酮苷化合物约占提取物的87％，其中染料木苷约占提取物的71％，大豆苷约占提取物的15％，大豆黄苷约占提取物的1％。

实施例9：含大豆异黄酮的片剂的制备

配方：每1000片配方组成如下：

大豆异黄酮提取物 140.0g

预胶化淀粉 155.0g

交联聚维酮 80.0g

羧甲基淀粉钠 20.0g

5％PVP(w/v) 适量

微粉硅胶 3.0g

硬脂酸镁 5.0g

欧巴代适量

按选定配方、工艺进行中试，取大豆异黄酮原料1400g；预胶化淀粉1550g；交联聚维酮800g；羧甲基淀粉钠200g，分别过100目筛，准确称量后过80目筛混合三遍，用5％PVP(w/v，50％乙醇配制)制软材，16目筛制粒，在55℃烘箱内干燥，整粒(控制颗粒水分含量在3％左右)，将硬脂酸镁50g与微粉硅胶30g过80目筛，与颗粒混匀后，压片，理论投药量为10000片，成品为9600片，包水溶性白色薄膜衣。包衣材料欧巴代购于上海卡乐康包衣技术有限公司(产品代号为85G68918)。

实施例10：大豆异黄酮提取物预防给药对去卵巢大鼠骨质疏松模型的影响

采用去卵巢大鼠作为绝经后骨质疏松动物模型，60只10月龄雌性Wistar大鼠，随机取出10只为假手术对照组(SH)，其余大鼠摘除双侧卵巢并随机分为5组，每组10只：切除卵巢组(OVX)、切除卵巢加大豆异黄酮提取物低剂量组(L，20mg·kg^-1·d^-1)、切除卵巢加大豆异黄酮提取物中剂量组(M，40mg·kg^-1·d^-1)、切除卵巢加大豆异黄酮提取物高剂量组(H，80mg·kg^-1·d^-1)和切除卵巢加尼尔雌醇组(NE，30μg·kg^-1·d^-1)。灌胃给药12周后处死并检测指标。

结果表明，与SH组相比，OVX第4腰椎骨、股骨骨密度及骨小梁面积和数目明显下降(P＜0.05)，而骨小梁分隔距离、血清骨钙素(BGP)含量及碱性磷酸酶(AKP)活性明显升高(P＜0.05)，与OVX组相比，大豆异黄酮各剂量组及NE组以上各指标均无显著差异，但有明显改善，与SH组相比无显著差异(P＜0.05)；与SH组比较，OVX组大鼠24h空腹尿钙、尿磷值均明显升高(P＜0.05)，大豆异黄酮中、高剂量及NE给药可显著降低OVX大鼠尿钙值(P＜0.05)；去卵巢后大鼠体重明显增加，其中OVX组显著高于SH组(P＜0.05)；与OVX组相比，大豆异黄酮各剂量组子宫湿重无明显升高(P＞0.05)，而NE组明显增加(P＜0.05)；与OVX组相比，大豆异黄酮L组及NE组腹部脂肪湿重无明显变化，但M、H组显著低于NE组(P＜0.05)

因此，本发明的大豆异黄酮提取物可有效抑制去卵巢引起的骨量丢失和骨小梁面积减少；有效抑制去卵巢引起的骨转换，且不表现出明显的子宫效应。本发明的大豆异黄酮提取物拮抗去卵巢大鼠骨丢失的有效剂量为40mg·kg^-1·d^-1，依据大鼠与人体表面积折算系数，推荐临床有效剂量为6.4mg·kg^-1·d^-1。

实施例11：大豆异黄酮提取物治疗给药对去卵巢大鼠骨质疏松的影响。

为了观察本发明的大豆异黄酮提取物(SI)治疗给药对去卵巢大鼠骨质疏松模型的作用，为其用于绝经后骨质疏松症的临床研究提供科学、合理的依据，通过摘除6月龄成年大鼠双侧卵巢建立骨质疏松动物模型，通过骨密度(BMD)、骨生物力学、骨组织形态学等骨治疗指标、血清及尿的骨代谢指标以及体重及子宫系数指标，分别以仙灵骨葆胶囊(GB)和尼尔雌醇片(NE)作为中、西药对照，对大豆异黄酮提取物20、40、80mg·kg^-1·d^-1三个剂量组的治疗作用进行研究。

结果发现，OVX组大鼠腰椎、股骨GMD、股骨W_ash及Ca、Pi含量与SH组相比明显降低(P＜0.05)，SI中、高剂量可显著提高此5项指标(P＜0.05或P＜0.01)。生物力学三点弯曲实验结果表明，OVX组大鼠股骨最大载荷比SH组有显著降低(P＜0.05)，与OVX组相比，SI中、高剂量显著升高(P＜0.05)。故形态计量学指标中，OVX大鼠股骨骨小梁面积百分比(Tb.Tr(％))(P＜0.05)、骨小梁数目(Tb.N)比SH组显著降低(P＜0.01)，而骨小梁间距(Tb.Sp)明显升高(P＜0.01)，SI高、中剂量可显著改善上述3指标(P＜0.05)。血清骨代谢指标显示，OVX组血清BGP含量与SH组相比未有显著性变化(P＞0.05)，而血清1，25-(OH)₂D₃、Ca和Pi含量明显降低(P＜0.05或P＜0.01)，与OVX相比，SI高、中剂量可显著提高血清BGP、Ca和1，25-(OH)₂D₃含量(P＜0.05或P＜0.01)，高剂量组升高1，25-(OH)₂D₃含量的作用强于GB组和NE组(P＜0.05)。与SH组相比，OVX组尿DPD/Cr有显著性升高(P＜0.01)，SI中、高剂量、GB组和NE组可使该比值显著降低(P＜0.05或P＜0.01)，SI高剂量组尿DPD/Cr显著低于GB组(P＜0.05)。体重与子宫系数结果分析表明，相比于SH组，OVX组大鼠的体重显著增加(P＜0.05)，而子宫系数显著下降(P＜0.01)，与OVX组相比，SI高、中剂量可使大鼠体重明显降低，而不显著升高子宫系数(P＞0.05)，SI三个剂量组的子宫系数显著低于NE组(P＜0.05)。

因此，本发明的大豆异黄酮提取物可拮抗大鼠去卵巢引起的骨丢失，显著升高去卵巢大鼠的股骨最大载荷，改善去卵巢大鼠骨组织形态结构，促进肠钙吸收，并有效抑制骨吸收，同时无明显子宫效应。本发明的大豆异黄酮提取物拮抗去卵巢大鼠骨丢失的有效剂量为40mg·kg^-1·d^-1，依据大鼠与人体表面积折算系数，推荐临床有效剂量为6.4mg·kg^-1·d^-1。

实施例12：大豆异黄酮提取物治疗给药对维甲酸致大鼠骨质疏松模型的影响

为了观察本发明的大豆异黄酮提取物(SI)对维甲酸致大鼠实验性骨质疏松症的治疗效果，为其用于绝经后骨质疏松症的临床研究提供科学、合理的依据，用70mg/kg维甲酸诱导大鼠骨质疏松症，通过骨密度(BMD)、骨生物力学、骨组织形态学等骨治疗指标、血清及尿的骨代谢指标以及体重及子宫系数指标，分别以仙灵骨葆胶囊(GB)和尼尔雌醇片(NE)作为中、西药对照，对大豆异黄酮提取物20、40、80mg·kg^-1·d^-1三个剂量组的治疗作用进行研究。

模型组(RA)大鼠腰椎BMD明显低于正常对照组(CON)，SI高、中剂量可显著提高该指标(P＜0.05)。生物力学三点弯曲实验结果表明，RA组大鼠股骨最大载荷与其他各组比较，虽无统计学差异，但均小于其他各组。骨形态计量学指标中，大鼠股骨骨小梁面积百分比(Tb.Tr(％))(P＜0.05)、骨小梁数目(Tb.N)比SH组显著降低(P＜0.01)，而骨小梁间距(Tb.Sp)明显升高(P＜0.01)，SI高、中剂量可显著改善上述3指标(P＜0.05)。血清骨代谢指标中，RA组血清BGP含量及AKP活性均比CON组显著升高(P＜0.01)，而血清1，25-(OH)₂D₃、Ca和Pi含量明显降低(P＜0.05或P＜0.01)，SI高、中剂量可使BGP含量及AKP活性显著回降，同时显著提高血清1，25-(OH)₂D₃含量(P＜0.01)，作用强于GB和NE组(P＜0.05)。与CON组相比，RA组尿DPD/Cr有显著性升高(P＜0.01)，SI中、高剂量可使该比值显著降低(P＜0.05)，高剂量作用效果优于GB和NE组(P＜0.05)。

因此，本发明的大豆异黄酮提取物可拮抗维甲酸所致的骨丢失，改善实验大鼠骨组织形态结构，促进实验大鼠肠钙吸收，并有效抑制维甲酸诱导的骨钙高转化态。本发明的大豆异黄酮提取物拮抗去卵巢大鼠骨丢失的有效剂量为40mg·kg^-1·d^-1，依据大鼠与人体表面积折算系数，推荐临床有效剂量为6.4mg·kg^-1·d^-1。

实施例13：毒性研究

犬及大鼠长期毒性试验、急性毒性试验及一般药理学研究结果均提示本发明的大豆异黄酮提取物安全范围较宽，犬长期毒性试验的安全剂量为100mg·kg^-1·d^-1，依据犬与人体表面积折算系数，推算临床安全剂量最大为30mg·kg^-1·d^-1。

Claims

1.一种大豆异黄酮提取物，其含有染料木苷、大豆苷和大豆黄苷，三者总量占提取物总重量的30～89重量％，其中染料木苷占提取物总重量的25～74重量％，大豆苷占提取物总重量的4～15重量％，大豆黄苷占提取物总重量的2.5重量％以下。

2.权利要求1的大豆异黄酮提取物，其中染料木苷、大豆苷和大豆黄苷总量占提取物总重量的50～89重量％。

3.权利要求1或2的大豆异黄酮提取物，其中染料木苷占提取物总重量的42～74重量％。

4.权利要求1或2的大豆异黄酮提取物，其中大豆苷占提取物总重量的8～15重量％。

5.权利要求1或2的大豆异黄酮提取物，其中大豆黄苷占提取物总重量的1.5重量％以下。

6.包含前述权利要求中任意一项所述的大豆异黄酮提取物的药物组合物。

7.权利要求6所述的药物组合物，其配制成口服给药、腔肠给药、喷雾给药、注射制剂、输液制剂和透皮吸收的药物制剂。

8.权利要求7所述的药物组合物，其中口服给药的药物制剂选自片剂、胶囊、粉末、颗粒、晶体、溶液、悬液、汤、糖浆、酏剂、茶和咀嚼剂。

9.一种制备权利要求1所述的大豆异黄酮提取物的方法，包括下列步骤：

(a)将豆粕用乙醇提取，以得到乙醇提取液；

(b)将乙醇提取液浓缩至比重为1.10～1.30，以得到流浸膏；

(c)用水将流浸膏稀释至含固形物浓度为20～40％(w/w)；

10.权利要求9所述的方法，其中所用葡萄糖-δ-内酯浓度为0.15％(w/v)。

11.权利要求10所述的方法，其中步骤(d)中的加热是90℃持续60min。

12.权利要求9-11中任意一项的方法，还包括在步骤(d)后将沉淀用水洗涤的步骤。

13.权利要求12所述的方法，其中将沉淀用水洗涤1～4次。