CN1861193A - 肾靶向前体药物、制剂及其制备方法与应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及低分子量蛋白质－雷公藤提取物或其衍生物，或低分子量蛋白质－糖皮质激素结合物的肾靶向载体的前体药物(I)，其中LMWP为低分子量蛋白质，选自溶菌酶、胰岛素、细胞色素C、抑肽酶及其多肽片断所组成的组；D为雷公藤提取物或其衍生物，或糖皮质激素；L为连接基团，选自酯基、碳酸酯基、酰胺基、酰胺酯基、醚基、胺基、氨基酸酯基、氨基酸酰胺组成的组。药物分子与载体蛋白质通过化学键相连，并涉及其制备方法和应用。体外和体内实验研究表明前体药物能够在体内到达肾脏并释放出活性药物。本发明制法简单，工艺成熟，性能稳定，适于大规模连续生产。其应用包括作为治疗肾脏疾病的免疫抑制剂，肾抑制的抗排斥反应药物，肾炎并发肾脏感染的药物及其制剂。

Description

肾靶向前体药物、制剂及其制备方法与应用

                             技术领域

本发明涉及药剂学领域，更具体地，本发明涉及具有较高肾靶向效率的肾靶向前体药物，其制备方法和这些药物在肾脏疾病局部免疫抑制有关的疾病中的应用。

                             背景技术

免疫抑制剂广泛地应用于治疗自身免疫疾病和预防抑制排斥。普通的免疫抑制剂包括硫唑嘌啉，皮质类固醇，环磷酰胺及环胞菌素A等。这些药物并不是完全有效，其临床应用常常受到其毒副作用的限制。例如，由于对机体整个免疫系统不加选择的抑制作用，采用有效的剂量会使患者对机会性入侵物的感染的敏感性增加。因此，采用靶向给药，对病灶器官的局部免疫抑制可以降低免疫抑制剂的毒副作用。

雷公藤内酯醇作为一种从中药雷公藤中提取的有效成分，1977年黎磊石在国际上首创应用中药雷公藤治疗慢性肾炎获得成功。经动物实验及临床验证，明确其治疗范围与皮质激素相似，但没有激素的副作用，现已被列入治疗肾炎的重点药物。1985年以后发现雷公藤能抑制狼疮性肾炎，效果良好，重型(IV型)狼疮性肾炎5年存活率达到90％以上，居国际先进水平。雷公藤作为一种新的免疫抑制剂应用于临床是近20余年来肾脏病药物治疗中的重要进展之一，特别是以雷公藤多甙片为代表的免疫抑制剂已在全国广泛应用于各种原发性和继发性肾炎的治疗，仅仅在南京军区南京总医院解放军肾脏病研究所一个单位应用的病例数就以10万计。但是雷公藤内酯醇的严重毒副作用，限制了其在临床上的应用。虽然，近几年来雷公藤的应用引起国内医药界的广泛重视，但它毕竟属于毒性很强的药物，临床不良反应的发生频率远高于其它药物。其不良反应主要发生在消化系统、泌尿系统、生殖系统、心血管系统、骨髓及血液系统，此外不良反应还可引起水肿、血糖升高，复视等。因此，降低其不良反应具有很重要的意义。目前，对雷公藤内酯醇的研究主要集中在对其化学结构进行修饰以及制剂研究上，以希望降低其毒副作用，增加水溶性。其主要领域涉及以下方面：

1.对雷公藤内酯醇进行化学结构修饰。围绕这方面的专利和文章较多，如：美国专利(US Patent)；6,150,539，6,004,999，5,972,998，5,962,516，566,335；中国专利CN 1483731A，CN 1511838A，CN1316997；

2.亲水性载体结合物或纳米制剂，如：中国专利CN 1676525A，CN 1465340A。

虽然制得的雷公藤衍生物或制剂水溶性和免疫活性较高，毒性降低，但我们所见到已发表的资料中迄今未见关于雷公藤提取物靶向制剂的报道；亦未见结合雷公藤的临床用药实际进行研究。虽然雷公藤的提取物免疫抑制活性较高，其临床应用的制剂-雷公藤多甙片主要用于肾脏疾病的治疗，而且由于成分复杂，质量难以控制，各厂家之间，不同批次药物之间的治疗效果差异大，使其临床应用受到限制。我们所见到已发表的资料中迄今未见关于雷公藤提取物肾靶向制剂的报道。

糖皮质激素具有抗炎、抗毒素、抗休克、影响代谢和免疫抑制等作用，常用的有泼尼松、泼尼松龙、地塞米松、倍他米松；，临床对肾脏疾病应用比较广泛。但是，其临床应用常常伴随出现许多问题：第一，代谢紊乱，可以引起糖、脂、蛋白质、水和电解质代谢紊乱；第二，对消化系统损伤较大，可以引起激素性溃疡、小肠出血穿孔和激素性胰腺炎；第三，糖类皮质激素不仅对病原茵无抑制和杀灭作用，而且由于其抗炎症反应，反而可减少炎性细胞和防碍纤维母细胞形成纤维组织，使病原茵不易局限和吞噬。同时，糖皮质激素可抑制网状内皮系统的吞噬功能，使淋巴组织萎缩和淋巴细胞减少(T淋巴细胞和B淋巴细胞)，从而可降低细胞免疫和体液免疫功能。此外，出于抗体抗原结合受抑制，可使激素释放减低，激素释放受抑又可使致敏白细胞的浸入受抑制，吞噬细胞的产生和成熟减少。因此，对糖皮质激素采用肾靶向给药，可以产生局部免疫抑制作用，有利于降低毒副作用，增强疗效。

                                发明内容

本发明的目的在于制备具有局部免疫抑制功能和较高肾靶向效率的前体药物及其制剂。通过采用内源性、能被肾小管上皮细胞特异摄取的LMWP为载体，采用能在水解释放原药的间隔基团通过共价键连接药物，使药物能够被靶向到肾，降低药物在全身其它部位的浓度和副作用，减低药物剂量增加疗效和产生局部免疫抑制效果。

分子量低于30,000道尔顿的低分子量蛋白质(Low-molecular-weight proteins，以下简称LMWP)可被肾小球自由滤过并通过近端小管迅速吸收。LMWP被近端小管细胞内吞后，经内吞体迁移到有蛋白水解活性的溶酶体。在溶酶体内，LMWP被分解成小肽和单个氨基酸。体外放射活计数试验表明：有多达80％注射剂量的LMWP(如溶菌酶、细胞色素C、抑肽酶等)最终被肾摄取。除肾外，LMWP在机体的其它部位几乎无蓄积。

LMWP是一种适宜的肾靶向载体：①载体有可供药物连接的功能基团；②LMWP在肾脏中特异性蓄积，通过重吸收机制尤其在肾近端小管中蓄积；③LMWP的理化性质决定被连接药物的理化性质；④药物-LMWP结合物在循环中稳定，但当到达肾脏后在近曲小管细胞的代谢性溶酶体内，活性药物被释放出来。LMWP是肾靶向药物载体之一。

LMWP可通过多种方式与药物连接。药物可通过蛋白质的赖氨酸基以酯键与LMWP直接相连。通过酶水解和化学水解，母体药物从药物-间隔基衍生物和药物-LMWP结合物中释放。

本发明的技术方案为：

按照本发明的一个方面，提供了通式(I)的低分子量蛋白质-雷公藤提取物或及其衍生物前体药物，低分子量蛋白质-糖皮质激素及其衍生物前体药物：

LMWPL-D)_n    (I)

其中：

LMWP为低分子量蛋白质，选自天然或其它来源的溶菌酶，胰岛素、细胞色素C、抑肽酶及其多肽片断所组成的组，分子量在150-40,000之间；

n是一整数，最大不超过LMWP上的端基活性官能团数；

L为连接基团，选自由酰胺酯基、醚基、胺基、碳酸酯基、酯基、酰胺基、氨基酸酯基、氨基酸酰胺组成的组；

D为雷公藤提取物或其衍生物，或糖皮质激素。

其特征在于药物或其衍生物通过化学键与低分子量蛋白质赖氨酸残基的氨基侧链共价连接。

在本发明的优选实施方案中，所述雷公藤提取物包含但是不限于：雷公藤内酯醇、雷公藤甲素丁二酸单酯、雷公藤乙素、雷公藤酮内酯、雷公藤氯内酯、雷公藤内酯三醇、雷公藤素、雷公藤多甙，以及它们衍生物；糖皮质激素包含但是不限于：氢化可的松、可的松、地塞米松、泼尼松、泼尼松龙、地塞米松、倍他米松，以及它们衍生物。低分子量蛋白质包含但是不限于：溶菌酶，胰岛素、细胞色素C、抑肽酶。连接基团包含但是不限于：酯基、碳酸酯基、酰胺基、酰胺酯基、醚基、胺基、氨基酸酯基、氨基酸酰胺。特别的，酯基在体内可以通过生物降解的方式释放出活性原药。

本发明的优选实施方案中，低分子量蛋白质为溶菌酶，连接基团为丁二酸，药物为雷公藤内酯醇或泼尼松龙，即雷公藤内酯醇丁二酸单酯-溶菌酶(II)或泼尼松龙丁二酸单酯-溶菌酶(III)，或叫做：雷公藤内酯醇-14-琥珀酸单酯-溶菌酶或泼尼松龙琥珀酸酯-溶菌酶。其结构通式如下：

其中：

L代表丁二酸

LMWP代表天然或其它来源的溶菌酶或其多肽片断，分子量150-40,000之间

n是一整数，最大不超过溶菌酶或其多肽片断上的端基活性官能团数

采用丁二酸为连接基将药物分子与低分子量蛋白质载体连接。对于有丁二酸单酯衍生物的药物，直接采用其丁二酸单酯衍生物。将雷公藤内酯醇或糖皮质激素药物衍生化生成具有羧基的衍生物，对于已有丁二酸单酯衍生物的药物，直接采用其丁二酸单酯衍生物。前体药物制备方法简述如下：

1.将药物通过选自酯键、碳酸酯键、酰胺键、酰胺酯键、醚键、胺键、氨基酸酯键、氨基酸酰胺键中的一种与连接基团连接；优选药物和丁二酸酐按1∶1-1∶100的比例溶于有机溶剂二氯甲烷、三氯甲烷或吡啶中，加入催化剂二甲氨基吡啶和三乙胺，室温反应完全，硅胶柱层析纯化。

2.在无水条件下，将制得的药物丁二酸单酯衍生物与氮羟基琥珀酰亚胺在二氯甲烷中，在催化剂二环己基亚胺作用下反应完全，过滤除去生成副产物，滤液到入冷己烷中结晶析出，干燥得药物丁二酸单酯衍生物活性酯。

3.将载体蛋白质用pH 7-12，浓度为0.01-1.0的缓冲液配成溶液，将药物丁二酸单酯衍生物活性酯溶于二氧六环中，搅拌下缓慢滴加入将载体蛋白质溶液。透析出去未反应小分子和反应生成的小分子化合物制备前体药物粗品。4℃反应过夜，离心除去交联不溶产物，上清液经PEG 20000浓缩，所得的粗品在经过葡聚糖凝胶柱G-25纯化，收集260nm处有紫外吸收的洗脱液，测定含量，加入1-10％的蔗糖、葡萄糖、甘露醇等组成的支架剂，常规冻干保存。

按照本发明的一个方面，提供了上述前体药物的药学上可以接受的制剂。包括片剂、栓剂、软或硬明胶胶囊剂、溶液剂、混悬剂或气雾剂、冻干粉针，优选冻干粉针剂。其中，所述的前体药物制剂可以通过口、鼻内、直肠、透皮或注射方式进行给药，优选注射方式进行给药的制剂。其制备方法为本领域人员所共知。

本发明的另一个目的是提供前体药物能够被特异输送到肾脏。并能在肾脏特异释放出原药的药学证据。采用雷公藤内酯醇-溶菌酶前体药物进行了体外和体内试验，以期实现如下目的：1、确保前体药物在到达肾脏之前不会在体内降解；2、前体药物到达肾脏之后能够被水解释放出药物，3、释放的药物有活性，而且不会被血液携带重新进入循环，分布到其他器官或组织：

1、体外稳定性试验证实，结合物与大鼠血浆37℃混合，振荡，高效液相色谱法(HPLC)定时测定血浆中游离药物的量。结果证实：前体药物相对稳定，2小时释放出游离药物的量不及结合药物的10％，考虑到前体药物在血液中能够迅速被肾脏摄取(＜30分钟)，避免前体药物在到达肾脏之前释放出药物。而前体药物在大鼠肾细胞溶酶体匀浆中能迅速释放药物，结果见附图2。图中曲线(●)代表前体药物在大鼠血浆中的累积释药量；曲线(■)代表前体药物在大鼠肾脏溶酶体匀浆中的累积释药量；曲线(▲)代表前体药物在大鼠空白对照溶液中的累积释药量。

2、体外培养肾近端小管细胞，通过向培养基中加入细菌内毒素模拟环境对肾脏的损伤，扫描电镜发现前体药物能够保护对肾脏重吸收起重要作用的近端小管上皮细胞微绒毛，结果见附图3中C图所示；此外，与原药雷公藤内酯醇比较，毒性明显降低，MTT法测得其对肾近端小管细胞IC₅₀为900μg/ml，见附图4(图中曲线(▲)代表雷公藤内酯醇；曲线(■)代表雷公藤内酯醇-溶菌酶)；相差显微镜结果见附图5，A为空白对照；B为加入雷公藤内酯醇，C为加入前体药物。都证实前体药物毒性降低。通过测定培养基中亚硝酸根的浓度发现结合物能明显抑制LPS致肾近端小管细胞产生一氧化氮的量，结果见附图6(图中曲线(▲)代表细菌内毒素；曲线(◆)代表雷公藤内酯醇；曲线(■)代表雷公藤内酯醇-溶菌酶)。

3、评价一种药物或制剂靶向性的常用办法是测定在某一时间点各个器官中药物的相对浓度，即靶向效率。通过小鼠尾静脉注射结合物，定时处死，HPLC法测定主要脏器的药物浓度，发现注射肾中药物得浓度远远较其它器官高，结果见图7。

4、前体药物经荧光标记，昆明种小鼠尾静脉注射，经荧光成像系统观察标记前体药物在体内的分布，在肾脏发现明显的荧光，而其它组织基本上没有荧光，说明前体药物具有较强的肾靶向性，结果见图8。图9为小鼠注射标记前体药物后，定时处死，观察其肾脏荧光强度变化过程。

综上，通过采用前体药物的方法，能够将药物特异地送达肾脏，活化并释放出原药，产生局部的免疫抑制作用，有效降低其毒副作用，增强其疗效。

附图说明：

图1.前体药物的质谱图

图2.前体药物在血浆，大鼠肾细胞溶酶体和空白对照溶液中的释药曲线

图3.前体药物对细菌脂多糖(LPS)致大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)的细胞形态损伤的保护作用影响扫描电镜图

图4.原药和前体药物对正常大鼠肾小管上皮细胞的毒性实验结果

图5.原药与前体药物对大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)的细胞毒性作用相差显微镜图

图6.原药和前体药物对LPS刺激正常大鼠肾小管上皮细胞产生NO的影响

图7.小鼠注射前体药物15分钟后组织分布图

图8小鼠注射荧光标记前体药物15分钟后腹面解剖图

图9小鼠注射荧光标记前体药物后肾脏荧光经时变化对照

                             具体实施例

下面再结合实施进一步描述本发明的前体药物及其制备方法，它不限制本发明，本发明的范围要求由权利要求限定。

实施例1：

精确称取雷公藤内酯醇100mg，丁二酸酐200mg，二甲氨基吡啶10mg，加入无水吡啶2ml，三乙胺1ml，室温反应过夜，硅胶板监测反应。待反应完成后，加入纯水50ml，盐酸调节pH至酸性。20ml氯仿萃取3次，合并萃取液，室温真空浓缩萃取液，硅胶柱层析纯化2次，收集产物，真空浓缩干燥，得类白色固体雷公藤内酯醇琥珀酸酯117.6mg，产率91.5％。产物结构经UV，MS，FTIR，¹H-NMR确证。mp 109~111℃；IR(KBr)3463(-COOH)cm^-1；MS m/z 459(M-H)⁺；¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：5.06(1H，s，-14CH)，4.67(2H，s，19-CH₂)，3.82(1H，d，11-CH)，3.50(1H，d，12-CH)，3.43(1H，d，7-CH)，2.75(5H，m，CH₂CH₂，5-CH)，2.30(1H，d-m，15-CH)，2.15(2H，m，6-CH_a，2-CH_a)，1.88(2H，m，2-CH_b，6-CH_b)，1.55(1H，m，1-CH_b)，1.20(1H，m，1-CH_a)，1.05(3H，s，20-CH₃)，0.95(3H，d，16-CH₃)，0.83(3H，d，17-CH₃)；UV：λnm：217.5nm.

实施例2：

精确称取溶菌酶100mg，溶于5mL 0.1mol/l的硼酸盐缓冲液中，EDC 100mg，HOBT 50mg和雷公藤内酯醇琥珀酸酯100mg溶于0.5ml的乙腈中。缓慢将乙腈溶液滴加入溶菌酶的硼酸盐缓冲液中，适速搅拌，0℃条件下反应24小时。反应溶液经离心10分钟(2,000转/分，0℃)出去不溶物，未反应的雷公藤内酯醇琥珀酸酯和生成的小分子杂质经葡聚糖凝胶G-25除去。收集含蛋白质流出液，冷冻干燥，得白色疏松粉末，密封-20℃低温保存。MS和HPLC法测定溶菌酶对雷公藤内酯醇琥珀酸酯的结合率及前药浓度，质谱图见附图1，发现结合比例为1∶1至1∶7，HPLC水解测定结果得结合比例为1∶2.3，这与质谱结果一致。

实施例3：

精确称取胰岛素100mg，溶于5mL 0.1mol/L的硼酸盐缓冲液中，EDC 100mg，HOBT 50mg和雷公藤内酯醇琥珀酸酯100mg溶于0.5ml的乙腈中。缓慢将乙腈溶液滴加入胰岛素的硼酸盐缓冲液中，适速搅拌，0℃条件下反应24小时。反应溶液经离心10分钟(2,000转/分，0℃)出去不溶物，未反应的雷公藤内酯醇琥珀酸酯和生成的小分子杂质经葡聚糖凝胶G-25除去。收集含蛋白质流出液，测定胰岛素对雷公藤内酯醇琥珀酸酯的结合率及前药浓度，冷冻干燥，得白色疏松粉末，密封-20℃低温保存。

实施例4：

精确称取细胞色素C100mg，溶于5ml 0.1mol/l的硼酸盐缓冲液中，EDC100mg，HOBT 50mg和雷公藤内酯醇琥珀酸酯100mg溶于0.5ml的乙腈中。缓慢将乙腈溶液滴加入细胞色素C的硼酸盐缓冲液中，适速搅拌，0℃条件下反应24小时。反应溶液经离心10分钟(2,000转/分，0℃)出去不溶物，未反应的雷公藤内酯醇琥珀酸酯和生成的小分子杂质经葡聚糖凝胶G-25除去。收集含蛋白质流出液，透析袋(截留分子量3,000)进一步除去小分子杂质，测定细胞色素C对雷公藤内酯醇琥珀酸酯的结合率及前药浓度，冷冻干燥，得白色疏松粉末，密封-20℃低温保存。

实施例5：

精确称取上述的前体药物经葡聚糖凝胶纯化溶液或冻干粉末适量，调节浓度为1％，加入3％的甘露糖作为支架剂，常规冻干保存。

实施例6：

精确雷公藤内酯醇琥珀酸酯100mg溶于0.5ml的二氯甲烷中，加入100mg二环己基亚胺(DCC)和100mg N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，室温条件下搅拌反应24小时，过滤除去反应生成的沉淀，减压除去溶剂，的到无色的雷公藤内酯醇琥珀酸活性酯粗品，用2ml无水二氧六环溶解，的溶液A。精确称取溶菌酶100mg，溶于5mL 0.1mol/l的硼酸盐缓冲液中，得溶液B。将A在适速搅拌条件下缓慢滴加到B中，0℃条件下反应24小时。反应溶液经离心10分钟(2,000转/分，0℃)出去不溶物，未反应的雷公藤内酯醇琥珀酸酯和生成的小分子杂质经葡聚糖凝胶G-25除去。收集含蛋白质流出液，透析袋(截留分子量3,000)进一步除去小分子杂质，测定细胞色素C对雷公藤内酯醇琥珀酸酯的结合率及前药浓度，冷冻干燥，得白色疏松粉末，密封-20℃低温保存。

实施例7：

理想的靶向前体药物应能在到达肾脏之前保持稳定，在到达靶器官或靶细胞之后又能释放出活性母药而发生作用。本发明详细研究了前体药物在大鼠血浆、大鼠肾细胞溶酶体和对照溶液中的释药行为。研究表明，前体药物在大鼠血浆中相对稳定，在15分钟内释放的药物不及总药的5％，而在大鼠肾细胞溶酶体中的释药速度则相对快许多。这保证前体药物能够到达肾又能释放出母药。

取经肝素抗凝的SD大鼠新鲜血浆5ml，37℃预热，加入前体药物成浓度为20μg/mL，37℃水浴振摇，定时取样0.2ml，加入甲醇沉淀蛋白质，旋涡振摇5分钟，超声1分钟，离心(10000转/分，5分钟)，高效液相色谱测定上清液游离药物浓度。

取刚处死的SD大鼠肾匀浆制备大鼠肾细胞溶酶体，测定酸性磷酸酶活性，-40℃保存备用。大鼠肾细胞溶酶体溶液5ml，37℃预热，加入前体药物成浓度为20μg/mL，37℃水浴振摇，定时取样0.2ml，加入甲醇沉淀蛋白质，旋涡振摇5分钟，超声1分钟，离心(10000转/分，5分钟)，高效液相色谱测定上清液游离药物浓度。发现前体药物在大鼠血浆中相对稳定，而在溶酶体匀浆中能够迅速释放出母药，结果见附图2。

实施例8：

取对数生长期的正常大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)，胰酶消化后，按每孔1×10⁴浓度接种于96孔板，常规培养48小时。用细菌内毒素多糖(LPS)刺激对数生长期的NRK52E细胞，观察细胞形态，比色法测定培养基中亚硝酸盐和NO浓度，观察前药在模拟炎症条件下对NRK52E细胞的保护作用。在培养基中加入10μg/mL的LPS和各种浓度的前体药物，扫描电镜观察结合物在模拟细胞损伤条件下对肾小管上皮细胞形态的保护作用。结果如图3。可知前体药物对对肾小管上皮细胞形态有明显保护作用，能维持对肾脏重吸收功能有重要作用的对肾小管上皮细胞绒毛的形态。

取对数生长期的正常大鼠肾小管上皮细胞，胰酶消化后，按每孔1×10⁴浓度接种于96孔板，常规培养48小时。在培养基中分别加入各种浓度的原药和前体药物培养12小时，每孔加入MTT溶液(5μg/mL)20mL，继续培养4小时后，终止培养，小心吸弃培养上清液，每孔加入150mL DMSO，振荡10分钟，选择490nm波长，在酶联免疫检测仪上测定各孔光吸收度值，测定IC50。与原药相比，雷公藤内酯醇前体药物毒性明显降低，IC50为850μg/ml，而雷公藤内酯醇IC50为140μg/ml(图4)。这与相差显微镜结果(图5)一致。

实施例9：

昆明种小鼠100只，雌雄兼用，体重18-20克，随机分成10组，尾静脉注射给药，分别在给药后的5，10，15，30，60，90，120，150，180，210分钟摘眼球取血，处死老鼠，取心、肝、脾、肺、肾匀浆，HPLC法测定各器官和血液中游离药物浓度。肾中药物得浓度较其它器官高，结果见图7。

实施例10：

将前体药物经荧光标记，昆明种小鼠尾静脉注射0.2ml(20mg/kg)的标记前体药物，定时处死，立即解剖，经荧光成像系统观察标记前体药物在体内的分布，在肾脏发现明显的荧光，而其它组织基本上没有荧光，说明前体药物具有较强的肾靶向性，结果见图8、9。

本发明采用前体药物的方法，能够将药物特异地输送到肾脏，活化并释放出原药，产生局部免疫抑制作用，能有效地降低毒副作用，增强疗效。

Claims (9)

1、通式(I)的低分子量蛋白质-雷公藤提取物或其衍生物前体药物，或低分子量蛋白质-糖皮质激素前体药物：

其中：

LMWP为低分子量蛋白质，选自溶菌酶、胰岛素、细胞色素C、抑肽酶及其多肽片断所组成的组；

n是一整数，最大不超过LMWP上的端基活性官能团数；

L为连接基团，选自酯基、碳酸酯基、酰胺基、酰胺酯基、醚基、胺基、氨基酸酯基、氨基酸酰胺组成的组；

D为雷公藤提取物或其衍生物，或糖皮质激素；

其特征在于药物或其衍生物通过化学键与低分子量蛋白质分子上的赖氨酸残基的氨基侧链共价连接。

2、根据权利1所述的前体药物，其中，所述的低分子量蛋白质为溶菌酶，所述的溶菌酶为天然来源或其它来源所的溶菌酶及其多肽片断。

3、根据权利1、2所述的前体药物，其中所述的低分子量蛋白质的分子量在150-40,000之间。

4、根据权利要求1至3所述的前体药物，所述雷公藤提取物或其衍生物选雷公藤内酯醇、雷公藤甲素丁二酸单酯、雷公藤乙素、雷公藤酮内酯、雷公藤氯内酯、雷公藤内酯三醇、雷公藤素、雷公藤多甙，以及它们衍生物组成的组；

所述糖皮质激素选自氢化可的松、可的松、地塞米松、泼尼松、泼尼松龙、地塞米松、倍他米松，以及它们衍生物所组成的组。

5、根据权利要求4所述的前体药物，其中，所述的药物为雷公藤内酯醇或泼尼松龙。

6、根据权利要求1-5所述的前体药物，其中的前体药物为：公藤内酯醇丁二酸单酯-溶菌酶(II)或泼尼松龙丁二酸单酯-溶菌酶(III)

其中：

L代表丁二酸

LMWP代表天然或其它来源的溶菌酶或其多肽片断，分子量150-40,000之间

n是一整数，最大不超过溶菌酶或其多肽片断上的端基活性官能团数。

7、根据权利要求1-6中的前体药物以及药物学可接受的制剂：包括片剂、栓剂、软或硬明胶胶囊剂、溶液剂、混悬剂或气雾剂、冻干粉针，优选冻干粉针剂；其中，所述的前体药物制剂可以通过口、鼻内、直肠、透皮或注射方式进行给药，优选注射方式进行给药的制剂。

8、制备前体药物的方法，其特征在于：

(1)将药物通过选自酯键、碳酸酯键、酰胺键、酰胺酯键、醚键、胺键、氨基酸酯键、氨基酸酰胺键中的一种与连接基团连接；优选药物和丁二酸酐按1∶1-1∶100的比例溶于有机溶剂二氯甲烷、三氯甲烷或吡啶中，加入催化剂二甲氨基吡啶和三乙胺，室温反应完全，硅胶柱层析纯化；

(2)在无水条件下，将制得的药物衍生物与氮羟基琥珀酰亚胺在二氯甲烷中反应完全(催化剂为二环己基亚胺)，过滤除去生成副产物，滤液到入冷己烷中结晶析出，干燥得药物丁二酸单酯衍生物活性酯；

(3)将载体蛋白质用pH7-12，浓度为0.01-1.0的缓冲液配成溶液，将药物衍生物活性酯溶于二氧六环中，搅拌下缓慢滴加入将低分子量蛋白质溶液。透析出去未反应小分子和反应生成的小分子化合物制备前体药物粗品。4℃反应过夜，离心除去交联不溶产物，上清液经PEG 20000浓缩，所得的粗品在经过葡聚糖凝胶柱G-25纯化，收集260nm处有紫外吸收的洗脱液，加入支架剂，冻干即得。

9、根据权利要求1-7中的任一种前体药物及其临床可用的制剂形式在预防和控制肾脏疾病的急慢性肾炎，肾肿瘤，肾抑制后的抗排斥反应及其他肾脏疾病中的应用。

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