CN102977175A

CN102977175A - 氨基葡萄糖衍生物作为小分子药物肾靶向修饰基团的用途

Info

Publication number: CN102977175A
Application number: CN2011102628473A
Authority: CN
Inventors: 张志荣; 林燕; 龚涛; 孙逊; 王晓虹
Original assignee: Sichuan University
Current assignee: Sichuan University
Priority date: 2011-09-07
Filing date: 2011-09-07
Publication date: 2013-03-20
Anticipated expiration: 2031-09-07
Also published as: CN102977175B

Abstract

本发明公开了氨基葡萄糖衍生物作为小分子药物肾靶向修饰基团的用途。进一步涉及一种结构如式(I)的氨基葡萄糖化合物，其中B部分为具有治疗肾病活性的药物D，A部分为氨基葡萄糖及其寡聚糖肾靶向修饰基团，以及其制备方法。含有结构通式(I)氨基葡萄糖化合物具有肾靶向的倾向性，显著提高B部分的药物在肾脏聚集浓度或延长其肾脏聚集时间或提高其肾脏作用效果。

Description

氨基葡萄糖衍生物作为小分子药物肾靶向修饰基团的用途

技术领域

[0001] 本发明涉及医药领域，更具体地是涉及氨基葡萄糖衍生物作为小分子药物肾靶向修饰基团的用途，进一步涉及具有肾靶向性的氨基葡萄糖衍生物及其制剂与制备方法。

背景技术

肾脏是泌尿系统的组成器官之一，是人体的主要排泄器官，如果肾脏生理功能发生偏差，将导致严重疾病。近年来，随着亚健康生活方式增多和生活节奏加快，肾脏疾病成为威胁人类健康的常见疾病之一。常见的肾脏疾病包括原发性和继发性肾小球、肾小管、肾介质及肾血管疾病，其中常见的有急性肾炎，慢性肾炎，原发性肾病综合症等，比起选用昂贵的血液透析或者肾移植来治疗肾脏疾病，药物治疗更具优势。

肾脏疾病需要长期服药，然而所用药物均存在不同程度的肾外效应，由此带来的毒副作用限制了肾病的治疗。所以，为了增加药物的安全性和有效性，肾脏靶向给药系统的研究很有必要。

已有研究的肾靶向载体主要包括以下几种：低分子量蛋白质（LMWP）载体、糖基复合物载体、乙烯基吡咯烷酮/二甲基马来酸共聚物（PVD）、叶酸、低分子量壳聚糖等。上述载体虽能将药物靶向到肾脏，但也存在以下问题：（1）这些肾靶向载体多数是大分子物质，由于药物—载体偶合物结构不明确，要将它们开发成新药具有未知的难度；（2）载药量低；（3）制备工艺复杂；（4）毒性大。

申请人通过偶然发现氨基葡萄糖衍生物及其寡糖能被肾脏特异性摄取，因此，获得了氨基葡萄糖衍生物作为小分子药物肾靶向修饰基团的用途的技术方案。

迄今未见关于将氨基葡萄糖衍生物作为小分子药物肾靶向载体的报道。

发明内容

本发明人通过创造性的研究发现，式(I)结构的氨基葡萄糖衍生物具有肾靶向作用。采用本发明的氨基葡萄糖衍生物的A部分的氨基葡萄糖及其寡糖作为小分子药物D的肾靶向性修饰基团，不仅极大地提高药物D在肾脏聚集浓度，还延长了其在肾脏的聚集时间或提高了其肾脏作用效果。

氨基葡萄糖是一种适宜的肾靶向修饰基团：①其有可供药物连接的功能基团；②小分子药物——氨基葡萄糖修饰物在体内可降解，释放出小分子药物以发挥药物作用；③其连接方法简单，易于大规模生产，生产成本低，具有良好的应用前景。

专利文献CN1879889A中虽然披露了利用壳聚糖作为一种新的肾靶向药物载体的用途，其使用的壳聚糖脱乙酰度在40%-60%之间，如果脱乙酰度不在这个范围中，就有可能不具有肾靶向性。现有技术已知，壳聚糖的肾靶向性与分子量密切相关，分子量为19KDa时肾靶向性最好，高于或低于这个分子量的壳聚糖，几乎不具有肾靶向性。

更为重要地，大分子物质虽然是小分子物质的重复单元的组合，但是其理化性质却截然不同，如溶解性，黏度，体内半衰期，体内分布等，并且无法推测。壳聚糖与氨基葡萄糖的关系类似于蛋白质与氨基酸，两者的生物学构效关系完全不同，蛋白质具有的功能和性质，氨基酸却不一定具有。

然而，由于大分子物质和小分子物质之间的结构差异性及各种未知原理的困扰，壳聚糖的肾靶向性虽然早已为人所知，但是在本发明的研究之前并没有氨基葡萄糖具有肾靶向性的报道及技术启示。

本发明的目的在于提供氨基葡萄糖及其寡聚糖作为小分子药物肾靶向修饰基团的用途。

本发明的另一目的在于提供一种具有较高肾靶向性能的氨基葡萄糖衍生物及其制剂。通过采用小分子氨基葡萄糖及其寡聚糖作为修饰基团，采用共价键来连接药物，从而使药物能够被靶向到肾脏，降低药物在全身其它部位的浓度和副作用，可减低给药剂量和增加疗效。

本发明的技术方案具体为：

本发明提供了一个式(I)的氨基葡萄糖的衍生物，其中A部分的氨基葡萄糖及其寡聚糖作为B部分的小分子药物D的肾靶向修饰基团：

Figure 2011102628473100002DEST_PATH_IMAGE001

式（Ⅰ）

其中：

m =0、1、2、3、4、5

n=0、1、2、3、4、5、6、7、8；

R1为氢，羟基，氨基，巯基，烷氧基，乙酸酯基，乙酰胺基；

R2为氢，羟基，氨基，巯基，烷氧基，乙酸酯基，乙酰胺基；

R3为氢，羟基，氨基，巯基，烷氧基，乙酸酯基，乙酰胺基；

R4为氢，羟基，氨基，巯基，烷氧基，乙酸酯基，乙酰胺基；

R5为氢，羟基，氨基，巯基，烷氧基，乙酸酯基，乙酰胺基；

烷氧基含碳数为1-6。

氨基可为游离氨基，也可以是其与酸形成的盐，其中包括盐酸，硫酸，硝酸，磷酸等无机酸以及醋酸，草酸，甲酸，酒石酸等有机酸。

X为酯基、碳酸酯基、酰胺基、酰胺酯基、醚基、胺基、氨基甲酸酯基、氨基酸酰胺、二硫键中的一种或多种。

Y为酯基、碳酸酯基、酰胺基、酰胺酯基、醚基、胺基、氨基甲酸酯基、氨基酸酰胺、二硫键中的一种或多种。

药物D优选是分子量小于1000道尔顿的用于治疗肾脏疾病的化学合成药物或治疗肾脏疾病的天然药物单体。

本发明中，所述治疗肾脏疾病的药物(D)包含但是不限于：抗肿瘤药物、抗微生物药物、抗病毒药物、免疫抑制剂等。

抗炎药(如(非甾体)吲哚美辛，布洛芬，(甾体)可的松，地塞米松，氢化可的松，氢化泼尼松，泼尼松，泼尼松龙，倍他米松，以及类似物和衍生物)。

抗肿瘤药物：氟尿嘧啶，苯丁酸氮芥，环磷酰胺，美法仑，异溶肉瘤素，以及类似物和衍生物。

免疫抑制剂：雷公藤内酯醇，环孢素A，他克莫司，雷帕霉素，霉酚酸以及类似物和衍生物。

抗病毒药(如齐多夫定，盐酸金刚烷胺以及类似物和衍生物)。

抗微生物药(如头孢菌素类如(头孢氨苄，头孢羟氨苄，头孢拉定类似物和衍生物)，青霉素类(如氨比西林，阿莫西林，环己西林类似物和衍生物)，四环素类(如盐酸四环素，多西环素以及类似物和衍生物)，以及类似物和衍生物)；

所述的氨基葡萄糖及其寡聚糖(A部分)包含但不限于氨基葡萄糖，氨基葡二糖，氨基葡三糖，氨基葡四糖，氨基葡五糖，氨基葡六糖以及它们的羟基被全部或者部分地被取代为氢，氨基，巯基，烷氧基，乙酸酯基，乙酰胺基的衍生物。

所述连接基团X包含但是不限于：酯基、碳酸酯基、酰胺基、酰胺酯基、醚基、胺基、二硫键、氨基甲酸酯基、氨基酸酰胺的一种或多种等。

所述连接基团Y包含但是不限于：酯基、碳酸酯基、酰胺基、酰胺酯基、醚基、胺基、氨基甲酸酯基、氨基酸酰胺、二硫键中的一种或多种

本发明的另一个目的是提供了式（I）中A部分的氨基葡萄糖及其寡聚糖作为B部分的小分子药物D的肾靶向修饰基团的用途。

本发明进一步提供了制备本发明的肾靶向氨基葡萄糖化合物的方法：

将药物分子上的活性基团，如氨基、羟基、羧基等，与氨基葡萄糖的活性基团在催化剂的作用下共价连接；

或，将药物分子的活性基团进一步衍生化为更强活性的酰卤衍生物，再与氨基葡萄糖的活性基团直接共价连接形成药物的氨基葡萄糖修饰物，然后再进行硅胶柱层析纯化。

本发明的另一个目的是提供了一种制备式（I）衍生物的方法，采用氨基甲酸酯键将A部分的氨基葡萄糖及其寡聚糖修饰基团与B部分的小分子药物D连接。

进一步优选，将小分子药物D的羟基用NPC活化后，再与氨基葡萄糖衍生物上的氨基进行连接。

进一步优选，将小分子药物D与丁二酸酐反应生成丁二酸单酯后，再与氨基葡萄糖衍生物连接。

作为本发明的具体实施方案和非限制性的说明例，下面将以上述的糖皮质激素泼尼松龙和免疫抑制剂雷公藤内酯醇为例，对本发明的实施技术路线进行说明，但是整体的实施方案不限于泼尼松龙和雷公藤内酯醇。

糖皮质激素具有抗炎、抗休克、抗毒素、免疫抑制等作用，常用的有泼尼松、泼尼松龙、倍他米松，临床上广泛用于肾脏疾病。但其毒副作用不容忽视：首先，对消化系统损伤较大，常引起激素性胰腺炎、激素性溃疡及小肠穿孔；其次，引起糖、脂、蛋白质、水和电解质代谢紊乱；第三，其免疫抑制作用降低细胞免疫和体液免疫功能，使机体更易受外来病原菌侵害。所以，为了增强其局部免疫抑制作用，减小其毒副作用，采用肾靶向氨基葡萄糖及其寡聚糖修饰的方式，促进泼尼松龙的肾脏靶向非常必要。

本技术路线中，以氨基葡萄糖单糖为肾靶向修饰基团，药物为泼尼松龙，通过丁二酸连接制得产物I，或者，通过氨基甲酸酯连接制得产物 II。以氨基葡二糖为肾靶向修饰基团，药物为泼尼松龙，通过氨基甲酸酯连接得产物III。

I

Figure 2011102628473100002DEST_PATH_IMAGE003

II

III

泼尼松龙-氨基葡萄糖偶合物制备方法简述如下：

(1)泼尼松龙与丁二酸酐在三乙胺存在下于四氢呋喃中室温反应，反应完毕，倾入盐酸冰水溶液中，过滤即得泼尼松龙丁二酸单酯。泼尼松龙丁二酸单酯与氨基葡萄糖溶于N,N-二甲基甲酰胺（DMF）中，以Ｎ,Ｎ’-二环己基碳二亚胺（DCC）和４－二甲氨基吡啶（DMAP）催化，室温反应，过柱纯化得白色固体，即泼尼松龙—氨基葡萄糖偶合物Ⅰ。

优选，泼尼松龙与丁二酸酐在三乙胺存在下于四氢呋喃中室温反应2~8h，反应完毕，倾入5%~20%盐酸冰水溶液中，过滤即得泼尼松龙丁二酸单酯。泼尼松龙丁二酸单酯与氨基葡萄糖溶于N,N-二甲基甲酰胺（DMF）中，以Ｎ,Ｎ’-二环己基碳二亚胺（DCC）和４－二甲氨基吡啶（DMAP）催化，室温反应1~5h，过柱纯化得白色固体，即泼尼松龙—氨基葡萄糖偶合物Ⅰ。

(2)泼尼松龙与对硝基苯基氯甲酸酯(NPC)在吡啶存在下于二氯甲烷中室温反应2~8h，加水淬灭，分液萃取，有机层干燥旋干得白色固体，即泼尼松龙对硝基苯酚碳酸酯。此固体与氨基葡萄糖于DMF中和适量三乙胺一起室温反应过夜，过柱纯化得白色固体，即泼尼松龙—氨基葡萄糖偶合物II。

泼尼松龙-氨基葡二糖偶合物制备方法简述如下：

泼尼松龙与对硝基苯基氯甲酸酯(NPC)在吡啶存在下于二氯甲烷中室温反应2~8h，加水淬灭，分液萃取，有机层干燥旋干得白色固体，即泼尼松龙对硝基苯酚碳酸酯。此固体与氨基葡二糖于DMF中和适量三乙胺一起室温反应过夜，过柱纯化得白色固体，即泼尼松龙—氨基葡二糖偶合物III。

雷公藤内酯醇是一种从中药雷公藤中提取的有效成分，1977年黎磊石在国际上首创应用中药雷公藤治疗慢性肾炎获得成功，现已被列入治疗肾炎的重点药物。雷公藤作为一种新的免疫抑制剂应用于临床是近20余年来肾脏病药物治疗中的重要进展之一，仅仅在南京军区总医院解放军肾脏病研究所一个单位应用的病例数就以10万计。但由于雷公藤内酯醇具有严重的毒副作用，使其临床上的应用受到限制。其不良反应主要发生在消化系统、泌尿生殖系统、心血管系统、骨髓及血液系统，此外还引起水肿、血糖升高等。因此，为了增加其安全性和有效性，采用肾靶向氨基葡萄糖及其寡糖修饰的方式，促进雷公藤内酯醇的肾脏靶向也具有重要意义。

本技术路线中以氨基葡萄糖单糖为肾靶向修饰基团，药物为雷公藤内酯醇，通过丁二酸连接制得产物Ⅳ，或，通过氨基甲酸酯连接制得产物Ⅴ，其结构式如下：

Figure 2011102628473100002DEST_PATH_IMAGE005

Ⅳ

Ⅴ

雷公藤内酯醇-氨基葡萄糖偶合物制备方法简述如下

（1）雷公藤内酯醇与丁二酸酐在三乙胺存在下于四氢呋喃中室温反应，反应完毕，倾入盐酸冰水溶液中，过滤即得雷公藤内酯醇丁二酸单酯。雷公藤内酯醇丁二酸单酯与氨基葡萄糖溶于DMF中，以DCC 和DMAP 催化，室温反应，过柱纯化得白色固体，即雷公藤内酯醇—氨基葡萄糖偶合物Ⅳ。

优选地，雷公藤内酯醇与丁二酸酐在三乙胺存在下于四氢呋喃中室温反应2~8h，反应完毕，倾入5%~20%盐酸冰水溶液中，过滤即得雷公藤内酯醇丁二酸单酯。雷公藤内酯醇丁二酸单酯与氨基葡萄糖溶于DMF中，以DCC 和DMAP 催化，室温反应1~5h，过柱纯化得白色固体，即雷公藤内酯醇—氨基葡萄糖偶合物Ⅳ。

（2）雷公藤内酯醇与NPC在吡啶存在下于二氯甲烷中室温反应2~8h，加水淬灭，分液萃取，有机层干燥旋干得白色固体，即雷公藤内酯醇对硝基苯酚碳酸酯。此固体与氨基葡萄糖于DMF中和适量三乙胺一起室温反应过夜，过柱纯化得白色固体，即雷公藤内酯醇—氨基葡萄糖偶合物Ⅴ。

采用氨基甲酸酯键将药物分子与氨基葡萄糖及其寡糖修饰基团连接。将泼尼松龙或雷公藤内酯醇的羟基用NPC活化后，再与氨基葡萄糖衍生物上的氨基进行连接。

采用丁二酸酯将药物分子与氨基葡萄糖及其寡糖修饰基团连接。将泼尼松龙或雷公藤内酯醇与丁二酸酐反应生成丁二酸单酯后，再与氨基葡萄糖衍生物连接。

本发明还提供了上述前体药物的药学上可以接受的制剂。例如，片剂、栓剂、软胶囊剂或硬胶囊剂、溶液剂、混悬剂或气雾剂、注射剂、冻干粉针，优选注射剂。

本发明的另个一目的为本发明所述的氨基葡萄糖的衍生物或包含其的制剂在制备治疗肾脏疾病的药物中的应用。

本发明的内容还包含所述的氨基葡萄糖衍生物或包含其的制剂在制备预防和控制急慢性肾炎、肾肿瘤及肾移植后的抗排斥反应及其他肾脏疾病的药物中的应用。

本发明的有益效果

本发明的目的还在于氨基葡萄糖衍生物具有显著提高了B部分的药物D中在肾脏聚集浓度或延长了其在肾脏聚集时间或提高其肾脏作用效果的用途。

为了证明本发明的氨基葡萄糖化合物的肾靶向性，故对上述化合物进行了体内药物分布试验。实验证明上述氨基葡萄糖化合物较原药在相同给药方式和给药剂量下在肾脏有较高的分布浓度。

附图说明

以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：

图1氨基葡萄糖—泼尼松龙偶合物I，II的合成路线。

图2氨基葡二糖—泼尼松龙偶合物III的合成路线。

图3氨基葡萄糖—雷公藤内酯醇偶合物Ⅳ，Ⅴ的合成路线。

图4氨基葡萄糖—泼尼松龙偶合物I及泼尼松龙原药尾静脉给药1小时，在各组织脏器浓度分布图。

图5氨基葡萄糖—泼尼松龙偶合物II及泼尼松龙原药尾静脉给药1小时，在各组织脏器浓度分布图。

图6氨基葡萄糖—泼尼松龙偶合物II及泼尼松龙原药尾静脉给药后在肾脏的经时分布图。

具体实施方式

下面再结合实施例进一步描述本发明的前体药物及其制备方法，它不限制本发明，本领域研究人员以常规知识对本发明进行的修改均属于本发明的保护范畴。本发明的范围要求由权利要求限定。

实施例1

泼尼松龙1g (2.8mmol)溶解于30ml四氢呋喃中，加入2g (7.1 eq)丁二酸酐及5ml三乙胺，室温搅拌8h，TLC监测反应完毕，将反应液倒入10%HCl冰水溶液中析出白色固体，过滤，干燥即得泼尼松龙丁二酸单酯。

将泼尼松龙丁二酸单酯1.5g (3.3mmol)溶于10ml DMF中，加入DCC 560mg (1.2eq)，DMAP 56mg，室温搅拌0.5h后，加入氨基葡萄糖700mg (2.7mmol)继续搅拌4h，TLC监测反应完毕，加水淬灭反应，正丁醇萃取，有机层用饱和食盐水洗涤，干燥，旋干，过柱纯化得白色固体，即泼尼松龙—氨基葡萄糖偶合物I。

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): d7.33 (d, 1H, J=10.4 Hz), 6.16 (d, 1H, J=10.4 Hz), 5.92 (s, 1H), 5.06 (d, 1H, J=17.2 Hz), 4.76 (d, 1H, J=17.6 Hz), 4.29 (d, 1H, J=3.2Hz), 4.07 (m, 2H), 3.48 (m, 4H), 3.15 (m, 2H), 3.04 (m, 4H), 2.60 (m, 3H), 2.42 (m, 3H), 2.31 (m, 2H), 2.02 (m, 2H), 1.64 (m, 3H), 1.38 (s, 3H), 1.25 (m, 2H), 1.02 (dd, 1H, J=13.2 and 4 Hz), 0.89 (dd, 1H, J=10.8 and 3.2 Hz), 0.77 (s, 3H); ¹³C NMR (200 MHz, DMSO-d ₆): d 16.8, 21.1, 22.8, 23.7, 28.4, 28.9, 29.9, 31.1, 31.8, 34.2, 44.1, 47.3, 51.3, 55.6, 57.2, 61.2, 66.0, 68.1, 68.3, 70.2, 76.2, 77.4, 88. 8, 103.9, 115.9, 121.8, 127.3, 157.1, 172.2, 173.4, 174.3, 185.5, 205.6; ESI-MS (m/z): 665.4 [M+H]⁺.

实施例2

泼尼松龙5g (13.9mmol)悬浮于100ml二氯甲烷，加入13g (4.6eq)NPC，冰浴下滴加吡啶，室温反应2h，加水淬灭反应，分液，二氯甲烷萃取，有机层用稀盐酸洗涤，干燥旋干得产品，为白色固体。

将氨基葡萄糖0.173g (0.66mmol)溶于干燥的4ml DMF，加入上述白色固体0.35g(0.66mmol)和三乙胺40μl，室温搅拌过夜，加水淬灭反应，正丁醇萃取，有机层用饱和食盐水洗涤，干燥，旋干，过柱纯化得白色固体，即泼尼松龙—氨基葡萄糖偶合物II。

¹H NMR (400 MHz, CD₃OD)：d7.47 (d, 1H, J=10.0 Hz), 6.26(dd, 1H, J=10.0 and 1.6 Hz), 6.23(s, 1H), 5.49(s, 1H), 4.52(d, 1H, J=8.0 Hz), 4.41(d, 1H, J=3.2 Hz),3.91(m, 2H), 3.69(m, 2H), 3.44(m, 2H), 3.38(m, 3H), 2.81(m, 1H),2.65(m, 2H), 2.38(dd, 1H, J=13.2 and 2.8 Hz), 2.16(m, 2H), 2.02(dd, 1H, J=13.6 and 3.2 Hz), 1.76(m, 3H), 1.45( m, 5H), 1.13 (m, 1H), 1.01( m, 2H), 0.9(s, 3H); ¹³C NMR (200 MHz, CD₃OD): d18.1, 19.5, 21.6, 26.0, 32.7, 33.2, 34.6, 35.6, 40.1, 41.9, 46.1, 52.8, 57.3, 57.8, 62.3, 69.5, 69.9, 70.8, 71.7, 74.7, 78.4, 90.6, 101.4, 122.5, 127.8, 158.5, 160.2, 174.8, 189.0, 208.9;ESI-MS (m/z): 609.4 [M+H]⁺.

实施例3

将氨基葡二糖0.45g (0.99mmol)溶于干燥的6ml DMF，加入上述白色固体0.52g(0.99mmol)和三乙胺60μl，室温搅拌过夜，加水淬灭反应，正丁醇萃取，有机层用饱和食盐水洗涤，干燥，旋干，过柱纯化得白色固体，即泼尼松龙—氨基葡二糖偶合物III。

实施例4

雷公藤内酯醇0.1g (0.28mmol)溶解于5ml四氢呋喃中，加入0.2g (7.1 eq)丁二酸酐及0.5ml三乙胺，室温搅拌6h，TLC监测反应完毕，将反应液倒入10%HCl冰水溶液中析出白色固体，过滤，干燥即得雷公藤内酯醇丁二酸单酯。

将雷公藤内酯醇丁二酸单酯0.15g (0.33mmol)溶于5ml DMF中，加入DCC 56mg (1.2eq)，DMAP 5.6mg，室温搅拌0.5h后，加入氨基葡萄糖70mg (0.27mmol)继续搅拌4h，TLC监测反应完毕，加水淬灭反应，正丁醇萃取，有机层用饱和食盐水洗涤，干燥，旋干，过柱纯化得白色固体，即雷公藤内酯醇—氨基葡萄糖偶合物Ⅳ。

实施例5

雷公藤内酯醇0.5g (1.4mmol)悬浮于10ml二氯甲烷，加入1.3g (4.6eq)NPC，冰浴下滴加吡啶，室温反应2h，加水淬灭反应，分液，二氯甲烷萃取，有机层用稀盐酸洗涤，干燥旋干得产品，为白色固体。

将氨基葡萄糖0.34 (1.32mmol)溶于干燥的DMF 8ml，加入上述白色固体0.70g(1.32mmol)和三乙胺80μl，室温搅拌过夜，加水淬灭反应，正丁醇萃取，有机层用饱和食盐水洗涤，干燥，旋干，过柱纯化得白色固体，即雷公藤内酯醇—氨基葡萄糖偶合物Ⅴ。

实施例6

精确称取上述前体药物适量，调节浓度为1％（1g/100ml），以少量注射用乙醇为助溶剂，制备成可供静脉给药的注射剂。

实施例7

大鼠体内分布实验

SD大鼠，体重200±20g，雄性，尾静脉注射给药，按每18mg/kg泼尼松龙给药，前药Ⅰ，Ⅱ给药剂量相当于泼尼松龙18mg/kg，实验组和对照均于给药后5分钟、15分钟、30分钟、1小时、2小时取血后处死，立即分离心、肝、脾、肺、肾、脑，加2倍量0.9%生理盐水匀浆，全血于6000r/min离心10分钟，取上层血浆置于－20℃冰箱冷冻待用.

取大鼠组织匀浆0.50ml、血浆0.50ml，置于5mlEP管中，加入100μl甲醇混匀，再加入100μl 20%三氯乙酸水溶液，漩涡萃取5分钟，离心(12000r/min, 10min)，精密吸取上清液50μl进样，记录色谱图和药物的峰面积。HPLC检测条件:色谱柱：Dikma Diamonsil column, ODS-C18,5μm,150*4.6mm，流动相：乙腈－0.05mol/L柠檬酸三钠缓冲液(磷酸调pH4.1) 25：75，检测波长：254nm，柱温：35℃，流速：1ml/min，进样量：50μl。

图4和图5的结果表明泼尼松龙—氨基葡萄糖偶合物I和II尾静脉给药后，在肾脏的药物浓度均远高于泼尼松龙原药组，1小时的药物浓度分别是其6.4倍和9.1倍。

图6的结果表明泼尼松龙-氨基葡萄糖偶合物II尾静脉给药后不同时间点（5min, 15min, 30min, 60min）, 在肾脏的药物浓度均远高于泼尼松龙原药组，分别是泼尼松龙原药的4.4，2.9，11.3，9.1倍，在给药2h后，原药在肾脏的浓度低于检测限，但泼尼松龙-氨基葡萄糖偶合物II还有较高浓度。

综上所述，通过采用氨基葡萄糖及其寡糖肾靶向基团修饰的方法，能够将药物特异地传递至肾，提高药物在肾脏的聚集浓度和作用效果，可降低给药剂量，减少毒副作用。

Claims

1.氨基葡萄糖衍生物作为小分子药物肾靶向修饰基团的用途。

2.一种具有权利要求1所述的肾靶向作用的式(I)的氨基葡萄糖衍生物，其中A部分氨基葡萄糖及其寡糖为B部分药物D的靶向修饰基团：

Figure 2011102628473100001DEST_PATH_IMAGE001

式（Ⅰ）。

3.根据权利要求2所述的氨基葡萄糖衍生物，其中：

m =0、1、2、3、4、 5；

n=0、1、2、3、4、5、6、7、8；

烷氧基含碳数为1-6；

氨基可为游离氨基，也可以是其与酸形成的盐，其中包括盐酸，硫酸，硝酸，磷酸等无机酸以及醋酸，草酸，甲酸，酒石酸等有机酸；

X为酯基、碳酸酯基、酰胺基、酰胺酯基、醚基、胺基、氨基甲酸酯基、氨基酸酰胺、二硫键中的一种或多种；

4.根据权利要求2～3任一项所述的氨基葡萄糖衍生物，其特征在于药物D是用于治疗肾脏疾病的化学合成药或天然药物单体。

5.根据权利要求2～4任一项所述的氨基葡萄糖衍生物，其特征在于B部分的药物D是选自抗肿瘤药物、抗微生物药物、抗病毒药物、抗寄生虫药物、糖皮质激素，免疫抑制剂等；包括氟尿嘧啶，苯丁酸氮芥，环磷酰胺，美法仑，异溶肉瘤素，可的松，氢化可的松，地塞米松，泼尼松，泼尼松龙，倍他米松，雷公藤内酯醇，环孢素A，他克莫司，雷帕霉素，霉酚酸以及它们的衍生物；进一步地，B部分的药物D优选泼尼松龙和雷公藤内酯醇。

6.一种由权利要求2～5任一项所述的氨基葡萄糖衍生物制得的药学上可接受的制剂，所述制剂选自片剂、栓剂、软胶囊剂或硬胶囊剂、溶液剂、混悬剂或气雾剂、注射剂、冻干粉针剂；所述前体药物制剂可以通过口，鼻内，直肠，透皮或注射方式进行给药；进一步地，所述制剂优选注射剂，通过注射方式给药。

7.根据权利要求2～5任一项所述的氨基葡萄糖衍生物和权利要求6所述的制剂在制备治疗肾脏疾病药物中的应用。

8.根据权利要求2～5任一项所述的氨基葡萄糖衍生物和权利要求6所述的制剂在制备预防和控制急慢性肾炎、肾肿瘤及肾移植后的排斥反应及其他肾脏疾病药物中的应用。

9.根据权利要求2～5任一项所述的氨基葡萄糖衍生物具有显著提高了B部分中药物D在肾脏聚集浓度或延长了其在肾脏聚集时间或提高了其肾脏作用效果的用途。

10.一种制备权利要求1所述的式（I）衍生物的方法，其特征在于采用氨基甲酸酯键将A部分的氨基葡萄糖及其寡聚糖修饰基团与B部分的小分子药物D连接；

进一步优选，将小分子药物D的羟基用NPC活化后，再与氨基葡萄糖衍生物上的氨基进行连接；

或者，进一步优选，将小分子药物D与丁二酸酐反应生成丁二酸单酯后，再与氨基葡萄糖衍生物连接。