CN1853731A - 葡萄球菌肠毒素a基因及其编码蛋白的新用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了葡萄球菌肠毒素A基因及其编码蛋白的新用途。本发明发明人的实验证实，葡萄球菌肠毒素A基因能够显著改善动物对DNA疫苗的反应性，可以用作DNA或重组亚单位疫苗免疫原性增强佐剂。葡萄球菌肠毒素A基因可以使乙肝病毒表面抗原DNA疫苗、疟疾多表位抗原DNA疫苗等各种DNA疫苗免疫原性均得到增强，具有广谱性，是一种不可多得的DNA疫苗免疫原性增强佐剂，葡萄球菌肠毒素A可以使各种重组亚单位疫苗的免疫原性得到增强，是一种不可多得的重组亚单位疫苗免疫原性增强佐剂，葡萄球菌肠毒素A基因及其编码蛋白在DNA疫苗及重组亚单位疫苗的生产和应用中意义重大。

Description

葡萄球菌肠毒素A基因及其编码蛋白的新用途

技术领域

本发明涉及葡萄球菌肠毒素A基因及其编码蛋白的新用途，特别是涉及葡萄球菌肠毒素A基因在作为DNA疫苗免疫原性增强佐剂和该基因的编码蛋白作为重组亚单位免疫原性增强佐剂中的应用。

背景技术

葡萄球菌肠毒素A(staphylococcal enterotoxin A，SEA)是金黄色葡萄球菌产生的葡萄球菌肠毒素家族中的一员，是最有效的T细胞活化因子之一。SEA是含233个氨基酸残基的蛋白质分子，富含丝氨酸(S)、苏氨酸(T)和天门冬氨酸(D)残基。分子量较小，约27.8kD，等电点PI＝7.3，对酸和热稳定。SEA分子中心有一个由二硫键形成的环，该环的完整性是SEA活化T淋巴细胞所必需的。SEA具有超抗原所具有的两个特点，一是SEA不需经过抗原加工或蛋白酶解过程，可被直接呈递给T淋巴细胞，而产生相应的免疫效应。该过程需要表达MHC II分子的辅佐细胞参与；二是SEA的呈递不受MHC限制，人类细胞可将SEA有效呈递给鼠T淋巴细胞，反之亦然。微量(10^-9～10^-12g)SEA能有效激活免疫细胞，产生一系列淋巴因子，主要有IL-1，IL-1，IL-2，IL-6，TNF-α，TNF-β和INF-γ，这些淋巴因子可直接产生抗肿瘤作用，也可继发激活NK细胞而产生LAK活性。更重要的是，SEA能高效激活某些含有特定TCR V的T细胞，主要是CTLs细胞，对MHC II⁺细胞产生SDCC(staphylococcal-enterotoxin-dependent cell-mediated cytotoxicity)作用。

DNA疫苗是指携带有抗原蛋白基因及表达必需的调控元件的质粒DNA的表达载体。将其导入到宿主的有机体中，从而诱导机体产生免疫应答，可达到免疫的目的。优点是易于构建；成本低廉；制剂稳定；可组建多价复合疫苗联合免疫。但是，有些抗原基因的免疫原性比较弱，单独注射这些疫苗不能诱发足够的保护性免疫。因此，寻找合适的DNA疫苗佐剂，有助于提高其免疫性及免疫效果。

重组亚单位疫苗是指重组抗原表达载体在原核或真核细胞表达的多肽抗原，经纯化后制成的蛋白疫苗，与死菌苗和减毒活疫苗相比，副作用减少的同时，其免疫原性较低，因此，需添加适当的免疫佐剂。

发明内容

本发明的目的是提供葡萄球菌肠毒素A基因在作为DNA疫苗免疫原性增强佐剂和该基因的编码蛋白(rSEA)作为重组亚单位免疫原性增强佐剂中的应用。

本发明发明人的实验证实，葡萄球菌肠毒素A基因能够显著改善动物对DNA疫苗的反应性，可以用作DNA疫苗免疫原性增强佐剂或重组亚单位；葡萄球菌肠毒素A基因的编码蛋白能够显著改善动物对重组亚单位疫苗的反应性，可以用作重组亚单位疫苗免疫原性增强佐剂。

在实际应用中，葡萄球菌肠毒素A基因与DNA疫苗的基因可以存在于不同的重组质粒中，使用时联合注射，也可以使葡萄球菌肠毒素A基因与DNA疫苗的基因融合，形成一个重组质粒，使用起来会更方便。rSEA与重组亚单位疫苗的蛋白可独立存在，在使用时联合注射，也可以使rSEA与重组亚单位疫苗的蛋白融合，形成融合蛋白。当然，在制备上述佐剂时，也不排除添加其它药学上可接受的辅料及载体。

葡萄球菌肠毒素A基因可以使乙肝病毒表面抗原DNA疫苗、疟疾多表位抗原DNA疫苗等各种DNA疫苗免疫原性均得到增强，具有广谱性，是一种不可多得的DNA疫苗免疫原性增强佐剂，葡萄球菌肠毒素A可以使各种重组亚单位疫苗的免疫原性得到增强，是一种不可多得的重组亚单位疫苗免疫原性增强佐剂，葡萄球菌肠毒素A基因及其编码蛋白在DNA疫苗及重组亚单位疫苗的生产和应用中意义重大。

附图说明

图1为质粒pmSEA的酶切鉴定图谱

图2为质粒pS2S的酶切鉴定图谱

具体实施方式

下述实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法。

实施例1、质粒的制备

1、含有葡萄球菌肠毒素A基因的重组质粒pmSEA的构建

使用上游引物P1：5’-cgc ggatccagcgagaaaagcgaagaaa-3’(带下划线碱基为限制性内切酶BamH I识别位点)和下游引物P2：5’-atgaattca gaattcacttgtatataatatAGCaata tgcat-3’(带下划线碱基为限制性内切酶EcoR I识别位点)，以金黄色葡萄球菌标准株ATCC 13565的基因组DNA为模板，PCR扩增SEA基因，反应条件为：(1)96℃ 10分钟；(2)94℃ 60秒，50℃ 90秒，72℃ 90秒，共30个循环；(3)72℃ 10分钟。反应结束后，将PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后回收702bp的目的片段，再用限制性内切酶BamHI和EcoRI对回收的基因片段酶切，将酶切产物克隆入经同样酶酶切的质粒载体pcDNA3(Invitrogen，USA)上，得到重组质粒，命名为pmSEA。转化大肠杆菌DH5α，经蓝白斑筛选后挑选阳性克隆，对其进行DNA序列分析，分析结果表明所克隆的葡萄球菌肠毒素A基因序列正确(序列1)，其编码的氨基酸残基序列为序列表中的序列2。对该重组质粒用限制性内切酶BamHI和EcoRI作进一步酶切鉴定，酶切鉴定结果如图1所示(泳道1为Marker DL-2000；泳道2为pmSEA的BamHI和EcoRI酶切产物，小片段约700bp；泳道3为未酶切的pmSEA)，表明获得了含有葡萄球菌肠毒素A基因的重组质粒。

2、含有乙肝表面抗原基因的重组质粒pS2S的构建

使用上游引物B2：5’-GGA AGATCTCAGGCCATG CAGTGGAATT-3’(带下划线碱基为限制性内切酶Bgl II识别位点)和下游引物S3：

5’-AGG GGGCCCAGCCCATGAAGTTTAGGGAA-3’(带下划线碱基为限制性内切酶Apa I识别位点)，以质粒HBV2(张彤等；中华微生物和免疫学杂志。1997，16(6)：421-424)为模板，PCR扩增乙肝表面抗原中蛋白preS2-S的基因片段，反应条件为：(1)95℃5分钟；(2)95℃ 30秒，58℃ 30秒，72℃ 50秒，共25个循环；(3)72℃ 5分钟。反应结束后，将PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后回收回收843bp的目的片段，再用限制性内切酶BamH I和Apa I对回收的基因片段酶切，将酶切产物克隆入质粒载体pcDNA3(Invitrogen，USA)的多克隆位点BamHI和Apa I之间，得到重组质粒，命名为pS2S。转化大肠杆菌DH5α，经蓝白斑筛选后挑选阳性克隆，对其进行DNA序列分析，分析结果表明所克隆的乙肝表面抗原preS2-S基因序列正确(序列3)，其编码的氨基酸残基序列为序列表中的序列4。对该重组质粒用限制性内切酶BamHI和Apa I作进一步酶切鉴定，酶切鉴定结果如图2所示(泳道1为pS2S的BamHI和ApaI酶切产物，约843bp；泳道2为Marker DL-2000)，表明获得了含有乙肝表面抗原基因的重组质粒。

3、含有疟疾多表位抗原基因的重组质粒AWTE的构建

使用上游引物：5’-cgc ggatccatgaacgctaaccctgg tgat-3’(带下划线碱基为限制性内切酶BamH I识别位点)，下游引物5’agg gggcccttacgatggtaccacaacgtt-3’(带下划线碱基为限制性内切酶Apa I识别位点)。以重组质粒CTB-AWTE(钟辉等。科学通报.43(13)：1417-1422.)为模板，PCR扩增疟疾多表位抗原AWTE基因片段，反应条件为：(1)95℃ 5分钟；(2)45℃ 20秒，72℃ 30秒，共5个循环；(3)95℃ 30秒，55℃ 20秒，72℃ 30秒，共25个循环；(4)72℃ 5分钟。反应结束后，将PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后回收366bp的目的片段，再用限制性内切酶BamHI和Apa I对回收的基因片段酶切，将酶切产物克隆入质粒载体pcDNA3的多克隆位点BamH I和Apa I之间，得到重组质粒，命名为AWTE。转化大肠杆菌DH5α，经蓝白斑筛选后挑选阳性克隆，对其进行DNA序列分析，分析结果表明所克隆的疟疾多表位抗原AWTE基因序列正确(序列5)。

4、含有葡萄球菌肠毒素A和人表皮生长因子融合基因EGF-SEA的重组质粒pEGF-SEA的构建

利用引物1：5’-AA CATATGAATTCCGACTCTGAATGCCC-3’和引物2：

5’-AA GGATCCGGCCAGGAGGTCCGCATGCTCGCAGCGTGCACCAACGTAGCCAGAATGG-3’(带下划线碱基为限制性内切酶Nde I和BamH I识别位点)，以重组质粒pET22b(+)-Ang-EGF(许伟立，陈东立，马清钧。中国专利“抗肿瘤作用的融合蛋白及该蛋白的应用”，申请号：01120099.5；授权号：CN 1161467C)为模板，PCR扩增人表皮生长因子(Epidermal Growth Factor，EGF)多肽编码基因，反应条件为：(1)95℃ 5分钟；(2)94℃ 60秒，64℃ 30秒，72℃ 30秒，72℃ 10分钟，共30个循环。反应结束后，将PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后回收147bp的目的片段，克隆至原核表达载体pmTSA上(胥全彬，博士论文，军事医学科学院，2003)，得到重组质粒，命名为pEGF-SEA。转化大肠杆菌DH5α，经蓝白斑筛选后挑选阳性克隆，对其进行DNA序列分析，分析结果表明所克隆的EGF基因序列(序列6)正确，其编码的氨基酸残基序列为序列表中的序列7。

实施例2、pmSEA对乙肝病毒表面抗原DNA疫苗免疫原性的增强作用

小鼠：Balb/c，雌性，4-6周龄。

分组：(1)空载体组(pcDNA3)，10只；(2)乙肝蛋白疫苗组(rHBsAg)，10只；(3)pS2S组，10只；(4)pS2S+pmSEA佐剂组，10只。

免疫方案：(1)空载体组(pcDNA3)：200ug/只/次；(2)乙肝蛋白疫苗组(rHBsAg)：

400ng/只/次；(3)pS2S组：100ug pS2S+100ug pcDNA3/只/次；(4)pS2S+pmSEA佐剂组：100ug pS2S+100ug pmSEA/只/次。

在小鼠麻醉状态下(75mg/kg sodium pentobarbital IP)，在小鼠的两后肢的股四头肌肉各注射50uL样品，然后用活体基因导入仪(浙江新芝公司)，在注射部位进行电击，电压为120V/cm，时长2ms，2次。

免疫次数：共两次，初次免疫后，在第14天加强免疫一次。初次免疫后，每隔2周，取血检测抗HBsAg抗体产生的滴度。用ELISPOT法检测IFN-γ产生情况。

结果表明，含有pmSEA质粒佐剂的第4组初次免疫后2周的HBsAb阳性率为37.5％，加强免疫后2周，HBsAb阳性率为75％；而未加佐剂的第3组初次免疫后2周的HBsAb阳性率为10％，加强免疫后2周，HBsAb阳性率为27％。14周后，第4组的HBsAb阳性率均为100％，而未加佐剂的第3组的HBsAb阳性率仅为50％。ELISPOT检测结果：第4组产生的IFN-γ是第3组的2-3倍，表明pmSEA可显著增强乙肝表面抗原质粒在小鼠体内激发的体液免疫和细胞免疫反应。

实施例3、pmSEA对疟疾多表位抗原DNA疫苗免疫原性的增强作用

小鼠：Balb/c，雌性，4-6周龄。

分组：(1)空载体组(pcDNA3)，6只；(2)AWTE质粒组，6只；(3)AWTE质粒+pmSEA质粒佐剂组，6只。

免疫方案：(1)空载体组(pcDNA3)：200ug/只/次；(2)AWTE质粒组：100ugAWTE+100ug pcDNA3/只/次；(3)AWTE质粒+pmSEA质粒佐剂组：100ug AWTE+100ugpmSEA/只/次。

在小鼠麻醉状态下(75mg/kg sodium pentobarbital IP)，在小鼠的两后肢的股四头肌肉各注射50ul样品，然后用活体基因导入仪(浙江新芝公司)，在注射部位进行电击，电压为120V/cm，时长2ms，2次。

免疫次数：共两次，初次免疫后，在第14天加强免疫一次。初次免疫后，每隔2周，取血检测抗AWTE抗体产生的滴度。末次免疫3周后，取脾淋巴细胞进行CTL细胞活性检测。

结果表明，含有pmSEA质粒佐剂的第3组初次免疫后2周的AWTE滴度为1∶400，加强免疫后2周，AWTE阳性率为1∶5000；第2组初次免疫后2周的AWTE滴度检测不到，加强免疫后2周，AWTE阳性率为1∶100。CTL活性检测：在效应细胞/靶细胞为100∶1时，第3组为67％，第2组为20％，表明pmSEA可显著增强疟疾多表位抗原免疫原性，诱导体液免疫和细胞免疫反应。

实施例4、rSEA对重组亚单位疫苗EGF的佐剂作用

小鼠：C57BL/6，雌性，5周龄。

分组：(1)EGF-SEA融合蛋白组，10只；(2)EGF多肽阳性对照组，10只；(3)生理盐水阴性对照组，10只。

免疫方案：(1)EGF-SEA融合蛋白组：10ug/只/次；(2)EGF多肽阳性对照组：10ug/只/次；(3)生理盐水阴性对照组：200uL/只/次。

免疫次数：共四次，初次免疫前采血，然后连续免疫4次，每次间隔10天；免疫前均采小鼠尾血，ELISA检测血清效价。

结果表明在EGF-SEA融合蛋白组检测到高滴度的抗EGF的抗体(1∶32,000)，而单独用EGF多肽免疫小鼠的血清，未检测到抗EGF的抗体，表明EGF与SEA融合后，可显著提高抗EGF的抗体滴度，证明SEA具有较强的免疫佐剂效应。

                               序列表

<160>7

<210>1

<211>702

<212>DNA

<213>金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureaus)

<400>1

agcgagaaaa gcgaagaaat aaatgaaaaa gatttgcgaa aaaagtctga attgcaggga     60

acagctttag gcaatcttaa acaaatctat tattacaatg aaaaagctaa aactgaaaat    120

aaagagagtc acgatcaatt tttacagcat actatattgt ttaaaggctt ttttacagat    180

cattcgtggt ataacgattt attagtagat tttgattcaa aggatattgt tgataaatat    240

aaagggaaaa aagtagactt gtatggtgct tattatggtt atcaatgtgc gggtggtaca    300

ccaaacaaaa cagcttgtat gtatggtggt gtaacgttac atgataataa tcgattgacc    360

gaagagaaaa aagtgccgat caatttatgg ctagacggta aacaaaatac agtacctttg    420

gaaacggtta aaacgaataa gaaaaatgta actgttcagg agttggatct tcaagcaaga    480

cgttatttac aggaaaaata taatttatat aactctgatg tttttgatgg gaaggttcag    540

aggggattaa tcgtgtttca tacttctaca gaaccttcgg ttaattacga tttatttggt    600

gctcaaggac agtattcaaa tacactatta agaatatata gagataataa aacgattaac    660

tctgaaaaca tgcatattgc tatatattta tatacaagtt aa                       702

<210>2

<211>243

<212>PRT

<213>金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureaus)

<400>2

Thr Leu Thr Thr Ser Pro Leu Val Asn Gly Ser Glu Lys Ser Glu Glu

1               5                   10                  15

Ile Asn Glu Lys Asp Leu Arg Lys Lys Ser Glu Leu Gln Gly Thr Ala

            20                  25                  30

Leu Gly Asn Leu Lys Gln Ile Tyr Tyr Tyr Asn Glu Lys Ala Lys Thr

        35                  40                  45

Glu Asn Lys Glu Ser His Asp Gln Phe Leu Gln His Thr Ile Leu Phe

    50                  55                  60

Lys Gly Phe Phe Thr Asp His Ser Trp Tyr Asn Asp Leu Leu Val Asp

65                  70                  75                  80

Phe Asp Ser Lys Asp Ile Val Asp Lys Tyr Lys Gly Lys Lys Val Asp

                85                  90                  95

Leu Tyr Gly Ala Tyr Tyr Gly Tyr Gln Cys Ala Gly Gly Thr Pro Asn

            100                 105                 110

Lys Thr Ala Cys Met Tyr Gly Gly Val Thr Leu His Asp Asn Asn Arg

        115                 120                 125

Leu Thr Glu Glu Lys Lys Val Pro Ile Asn Leu Trp Leu Asp Gly Lys

    130                 135                 140

Gln Asn Thr Val Pro Leu Glu Thr Val Lys Thr Asn Lys Lys Asn Val

145                 150                 155                 160

Thr Val Gln Glu Leu Asp Leu Gln Ala Arg Arg Tyr Leu Gln Glu Lys

                165                 170                 175

Tyr Asn Leu Tyr Asn Ser Asp Val Phe Asp Gly Lys Val Gln Arg Gly

            180                 185                 190

Leu Ile Val Phe His Thr Ser Thr Glu Pro Ser Val Asn Tyr Asp Leu

        195         200                         205

Phe Gly Ala Gln Gly Gln Tyr Ser Asn Thr Leu Leu Arg Ile Tyr Arg

    210                 215             220

Asp Asn Lys Thr Ile Asn Ser Glu Asn Met His Ile Ala Ile Tyr Leu

225                 230                 235                 240

Tyr Thr Ser

<210>3

<211>843

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>

<400>3

atgcagtgga actccacgac attccaccaa gctctgctag atcccagagt gaggggccta     60

tattttcctg ctggtggctc cagttccgga acagtaaacc ctgttccgac tactgcctca    120

cccatatcgt caatcttctc gaggactggg gaccctgcac cgaacatgga gagcacaaca    180

tcaggattcc taggacccct gctcgtgtta caggcggggt ttttcttgtt gacaagaatc    240

ctcacaatac cacagagtct agactcgtgg tggacttctc tcaattttct agggggagca    300

cccacgtgtc ctggccaaaa ttcgcagtcc ccaacctcca atcactcacc aacctcttgt    360

cctccaactt gtcctggcta tcgctggatg tgtctgcggc gttttatcat attcctcttc    420

atcctgctgc tatgcctcat cttcttgttg gttcttctgg actaccaagg tatgttgccc    480

gtttgtcctc tacttccagg aacatcaact accagcacgg gaccatgcaa gacctgcacg    540

attcctgctc aaggaacctc tatgtttccc tcttgttgct gtacaaaacc ttcggacgga    600

aactgcactt gtattcccat cccatcatcc tgggctttcg caagattcct atgggagtgg    660

gcctcagtcc gtttctcctg gctcagttta ctagtgccat ttgttcagtg gttcgtaggg    720

ctttccccca ctgtttggct ttcagttata tggatgatgt ggcattgggg gccaagtctg    780

tacaacatct tgagtccctt tttacctcta ttaccaattt tcttttgtct ctgggtatac    840

att                                                                  843

<210>4

<211>281

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>

<400>4

Met Gln Trp Asn Ser Thr Thr Phe His Gln Ala Leu Leu Asp Pro Arg

l               5                   10                  15

Val Arg Gly Leu Tyr Phe Pro Ala Gly Gly Ser Ser Ser Gly Thr Val

            20                  25                  30

Asn Pro Val Pro Thr Thr Ala Ser Pro Ile Ser Ser Ile Phe Ser Arg

        35                  40                  45

Thr Gly Asp Pro Ala Pro Asn Met Glu Ser Thr Thr Ser Gly Phe Leu

    50                  55                  60

Gly Pro Leu Leu Val Leu Gln Ala Gly Phe Phe Leu Leu Thr Arg Ile

65                  70                  75                  80

Leu Thr Ile Pro Gln Ser Leu Asp Ser Trp Trp Thr Ser Leu Asn Phe

                85                  90                  95

Leu Gly Gly Ala Pro Thr Cys Pro Gly Gln Asn Ser Gln Ser Pro Thr

            100                 105                 110

Ser Asn His Ser Pro Thr Ser Cys Pro Pro Thr Cys Pro Gly Tyr Arg

        115                 120                 125

Trp Met Cys Leu Arg Arg Phe Ile Ile Phe Leu Phe Ile Leu Leu Leu

    130                 135                 140

Cys Leu Ile Phe Leu Leu Val Leu Leu Asp Tyr Gln Gly Met Leu Pro

145                 150                 155                 160

Val Cys Pro Leu Leu Pro Gly Thr Ser Thr Thr Ser Thr Gly Pro Cys

                165         170                         175

Lys Thr Cys Thr Ile Pro Ala Gln Gly Thr Ser Met Phe Pro Ser Cys

            180                 185                 190

Cys Cys Thr Lys Pro Ser Asp Gly Asn Cys Thr Cys Ile Pro Ile Pro

        195                 200                 205

Ser Ser Trp Ala Phe Ala Arg Phe Leu Trp Glu Trp Ala Ser Val Arg

    210                 215                 220

Phe Ser Trp Leu Ser Leu Leu Val Pro Phe Val Gln Trp Phe Val Gly

225                 230                 235                 240

Leu Ser Pro Thr Val Trp Leu Ser Val Ile Trp Met Met Trp His Trp

                245                 250                 255

Gly Pro Ser Leu Tyr Asn Ile Leu Ser Pro Phe Leu Pro Leu Leu Pro

            260                 265                 270

Ile Phe Phe Cys Leu Trp Val Tyr Ile

        275                 280

<210>5

<211>366

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>

<400>5

atgaacgcta accctggtga tgaactggaa acccagaacg tgtacgcagc cccgaatgcg     60

aatccgtaca gcctgttgca gaaagagaaa atggtgctgc cgaacgccaa cccgccggcg    120

aacaagaaga acgcgggtcc caacaagaac gatgataaca agaacgatga taacaagaac    180

gatgataaca agaacgatga taacaagaac gatgataaca agaacgatga taacaagaac    240

gatgataaca agaacgatga taacaagggg aaacctaaag acgaattaga ttatgaagat    300

attgaaaaga agatcgctaa gatggaaaag gctagcagtg ttttcaacgt tgtggtacca    360

tcgtaa                                                               366

<210>6

<211>843

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>

<400>6

aattccgact ctgaatgccc gctgtctcac gacggttact gcctacacga tggtgtttgc     60

atgtatatcg aagctctgga caaatacgcg tgcgtgtgcc attctggcta cgttggtgca    120

cgctgcgagc atgcggacct cctggcc                                        147

<210>7

<211>49

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>

<400>7

Asn Ser Asp Ser Glu Cys Pro Leu Ser His Asp Gly Tyr Cys Leu His

1               5                   10                  15

Asp Gly Val Cys Met Tyr Ile Glu Ala Leu Asp Lys Tyr Ala Cys Val

            20                  25                  30

Cys His Ser Gly Tyr Val Gly Ala Arg Cys Glu His Ala Asp Leu Leu

        35                  40                  45

Ala

Claims (10)

1、葡萄球菌肠毒素A基因作为DNA疫苗免疫原性增强佐剂的应用。

2、根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述葡萄球菌肠毒素A基因与DNA疫苗的基因存在于不同的重组质粒中。

3、根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述DNA疫苗为乙肝病毒表面抗原DNA疫苗或疟疾多表位抗原DNA疫苗。

4、根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述葡萄球菌肠毒素A基因与DNA疫苗的基因是融合基因，存在于同一重组质粒中。

5、根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述DNA疫苗为乙肝病毒表面抗原DNA疫苗或疟疾多表位抗原DNA疫苗。

6、葡萄球菌肠毒素A基因在制备DNA疫苗免疫原性增强佐剂中的应用。

7、葡萄球菌肠毒素A作为重组亚单位疫苗免疫原性增强佐剂的应用。

8、根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述葡萄球菌肠毒素A与重组亚单位疫苗的蛋白独立存在。

9、根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述葡萄球菌肠毒素A与重组亚单位疫苗的蛋白融合成为融合蛋白。

10、葡萄球菌肠毒素A在制备重组亚单位疫苗免疫原性增强佐剂中的应用。