CN1844362A - 一种泡菜用乳酸菌的高密度培养方法 - Google Patents
一种泡菜用乳酸菌的高密度培养方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1844362A CN1844362A CN 200610039750 CN200610039750A CN1844362A CN 1844362 A CN1844362 A CN 1844362A CN 200610039750 CN200610039750 CN 200610039750 CN 200610039750 A CN200610039750 A CN 200610039750A CN 1844362 A CN1844362 A CN 1844362A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- acid bacteria
- lactic acid
- culture
- cultivation
- kraut
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及一种泡菜用乳酸菌的高密度培养方法，具体是指主要是采用常规植物乳酸菌为菌种，经常规方法活化、扩大培养，接种于按常规配方配置的发酵培养基，其特征在于将发酵培养基用含0.2％～0.3％柠檬酸钠、0.2％～0.3％磷酸氢二钠、0.1％～0.2％磷酸二氢钠的缓冲盐溶液调pH值为6.3～6.6；在整个培养过程中，流加氨水以保持pH值稳定在5.8～6.2；菌液培养20h后，补加500ml～700ml新鲜培养基；菌液培养结束后离心，加入由10％～15％脱脂乳、5％～7％谷氨酸钠、2％～3％甘油和7％～8％麦芽糖组成的复合保护剂，真空冷冻干燥。其培养方法高效可靠，培养液乳酸菌活菌体含量高。且克服了真空冷冻干燥过程中造成部分微生物细胞的损伤、死亡等问题。
Description
技术领域
本发明涉及一种泡菜用乳酸菌的高密度培养方法，具体是指采用含有缓冲盐的发酵培养基，培养过程中流加氨水保持培养液pH值稳定，培养后期补加新鲜培养基的方法，促进细胞持续生长以实现泡菜用乳酸菌的高密度培养；该方法得到的发酵液经过离心，加入复合保护剂真空冷冻干燥得到乳酸菌冻干粉。
背景技术
高密度培养技术一般指在液体培养中的细胞密度超过常规培养10倍以上的培养技术，达到提高菌体富集培养的目的。不仅可减少培养体积，还可以缩短生产周期、减少设备投资，从而降低生产成本，提高产品市场竞争力。
由于乳酸菌在生长过程中不断地产生代谢产物—乳酸，导致培养液的pH值不断下降，从而抑制乳酸菌的生长和繁殖。熊晓辉等在《中国调味品》2004年第5期发表的“乳酸菌发酵剂高密度培养的研究”论文中采用缓冲盐法，即在发酵培养基中添加缓冲盐，一定程度上阻止了培养液的pH值的变化，但培养后期，由于产生乳酸过多，仍无法维持乳酸菌正常生长所需的pH值。李斌等在《食品科技》2005年第1期发表的“泡菜用乳酸菌富集培养的研究”论文中采用化学中和法，即在乳酸菌培养过程中自动向培养液中流加氨水，不断中和乳酸菌产生的乳酸，促进乳酸菌的大量繁殖。但由于培养过程中乳酸盐不断积累，达到一定浓度时，仍会抑制乳酸菌的生长繁殖。因而，现有技术限制了泡菜用乳酸菌的大规模生产和应用。
真空冷冻干燥技术是保存生物材料最有效的方法之一。但真空冷冻干燥过程中，冷冻和干燥两个步骤都可能会造成部分微生物细胞的损伤、死亡及某些酶蛋白分子的钝化。如果冻干工艺中保护剂选择不当，微生物的存活率和发酵活力将严重下降。贺稚非等在《四川食品与发酵》2005年第1期发表的“橄榄菜直投式乳酸菌发酵剂的研究”论文中选用甘油作保护剂，冻干后活菌存活率为50％。单一的保护剂并不能满足冷冻干燥的要求。
发明内容
本发明的目的在于提供一种泡菜用乳酸菌的培养方法。该高密度培养新方法，既能保证乳酸菌的活性，又能大量富集该乳酸菌。同时，还可以通过添加独特的复合保护剂，利用冷冻干燥技术制备高活性乳酸菌冻干粉。
为了达到以上发明目的，本发明的技术方案是：主要是采用常规植物乳酸菌为菌种，经常规方法活化、扩大培养，接种于按常规配方配置的发酵培养基，其特征在于将发酵培养基用含0.2％～0.3％柠檬酸钠、0.2％～0.3％磷酸氢二钠、0.1％～0.2％磷酸二氢钠的缓冲盐溶液调pH值为6.3～6.6；在整个培养过程中，流加氨水以保持pH值稳定在5.8～6.2；菌液培养20h后，补加500ml～700ml新鲜培养基；菌液培养结束后离心，加入由10％～15％脱脂乳、5％～7％谷氨酸钠、2％～3％甘油和7％～8％麦芽糖组成的复合保护剂，真空冷冻干燥。
本发明的培养方法高效可靠，培养液乳酸菌活菌体含量高。由于在乳酸菌生长代谢过程中，乳酸菌会不断产生代谢产物一乳酸，乳酸的积累对细胞的生长产生抑制作用；同时，培养液中营养物的减少也延缓了乳酸菌细胞的增殖。因此，本发明在乳酸菌培养过程中，通过添加缓冲盐、调节pH值、追加营养物等措施，延长乳酸菌的对数生长期，获得了高密度的细胞培养物。
本发明通过添加复合保护剂克服了真空冷冻干燥过程中造成部分微生物细胞的损伤、死亡及某些酶蛋白分子钝化等问题。
具体实施方式：
实例1：
(1)种子培养
挑取菌苔接入50ml MRS液体培养基(蛋白胨10g，肉膏10g，酵母提取物5g，K2HPO4 2g，柠檬酸二铵2g，乙酸钠5g，葡萄糖20g，吐温801mL，MgSO4·7H2O0.58g，MnSO4·4H2O 0.25g，pH6.2～6.4，下同)中，37℃恒温培养18h，然后以5％的接种量转入210ml含2％植物蛋白粉的番茄汁培养基(番茄汁浓度以100ml番茄汁含2g还原糖为标准，下同)，在37℃下静置培养18h，即得种子液。
(2)接种前准备及接种过程
将植物蛋白粉溶于3升番茄汁，采用0.2％柠檬酸钠、0.2％磷酸氢二钠、0.2％磷酸二氢钠的缓冲盐溶液调pH值为6.3左右，倒入5L发酵罐中；发酵罐罐体放入高压灭菌锅中灭菌；发酵罐冷却至室温，在酒精火焰圈上方，将种子液以7％的接种量接种到发酵罐中，以普通氮气保持罐压为0.05MPa，搅拌常温发酵。
(3)流加碱
当发酵罐中培养液低于6.0时，流加氨水以保持pH值稳定在6.0±0.1。
(4)补料
菌液培养20h后，补加500ml新鲜培养基继续培养6h。
(5)冻干粉的制备
培养液在10℃下，以4000r/min离心25min；弃上清液，沉淀部分加入无菌生理盐水振荡洗涤，按上述条件再次离心。弃上清液，沉淀部分加入复合保护剂(脱脂乳10％、谷氨酸钠5％、甘油3％和麦芽糖7％)振荡均匀，置于-70℃预冻2h后，再置入真空冷冻干燥机。冻干条件为真空度5Pa，隔板加热温度20℃，冷阱温度-55℃，冻干28h～30h，即得泡菜用乳酸菌冻干粉。
实例2：
(1)种子培养
挑取菌苔接入50ml MRS液体培养基中，37℃恒温培养18h，然后以5％的接种量转入210ml含2％植物蛋白粉的番茄汁培养基，在37℃下静置培养18h，即得种子液。
(2)接种前准备及接种过程
将植物蛋白粉溶于3升番茄汁，0.3％柠檬酸钠、0.3％磷酸氢二钠、0.2％磷酸二氢钠的缓冲盐溶液调pH值为6.5左右，倒入5L发酵罐中；发酵罐罐体放入高压灭菌锅中灭菌；发酵罐冷却至室温，在酒精火焰圈上方，将种子液以7％的接种量接种到发酵罐中，以普通氮气保持罐压为0.05MPa，搅拌常温发酵。
(3)流加碱
当发酵罐中培养液低于5.9时，流加氨水以保持pH值稳定在5.9±0.1。
(4)补料
菌液培养20h后，补加600ml新鲜培养基继续培养7h。
(5)冻干粉的制备
培养液在8℃下，以4500r/min离心20min；弃上清液，沉淀部分加入无菌生理盐水振荡洗涤，按上述条件再次离心。弃上清液，沉淀部分加入复合保护剂(脱脂乳15％、谷氨酸钠6％、甘油2％和麦芽糖8％)振荡均匀，置于-70℃预冻2h后，再置入真空冷冻干燥机。冻干条件为真空度5Pa，隔板加热温度20℃，冷阱温度-55℃，冻干28h～30h，即得泡菜用乳酸菌冻干粉。
实例3：
(1)种子培养
挑取菌苔接入50ml MRS液体培养基中，37℃恒温培养18h，然后以5％的接种量转入210ml含2％植物蛋白粉的番茄汁培养基，在37℃下静置培养18h，即得种子液。
(2)种前准备及接种过程
将植物蛋白粉溶于3升番茄汁，0.3％柠檬酸钠、0.3％磷酸氢二钠、0.1％磷酸二氢钠的缓冲盐溶液调pH值为6.6左右，倒入5L发酵罐中；发酵罐罐体放入高压灭菌锅中灭菌；发酵罐冷却至室温，在酒精火焰圈上方，将种子液以7％的接种量接种到发酵罐中，以普通氮气保持罐压为0.05MPa，搅拌常温发酵。
(3)流加碱
当发酵罐中培养液低于6.1时，流加氨水以保持pH值稳定在6.1±0.1。
(4)补料
菌液培养20h后，补加700ml新鲜培养基继续培养8h。
(5)冻干粉的制备
培养液在6℃下，以5000r/min离心15min；弃上清液，沉淀部分加入无菌生理盐水振荡洗涤，按上述条件再次离心。弃上清液，沉淀部分加入复合保护剂(脱脂乳12％、谷氨酸钠7％、甘油2％和麦芽糖7％)振荡均匀，置于-70℃预冻2h后，再置入真空冷冻干燥机。冻干条件为真空度5Pa，隔板加热温度20℃，冷阱温度-55℃，冻干28h～30h，即得泡菜用乳酸菌冻干粉。
Claims (1)
1.一种泡菜用乳酸菌的高密度培养方法，采用常规植物乳酸菌为菌种，经常规方法活化、扩大培养，接种于按常规配方配置的发酵培养基，其特征在于将发酵培养基用含0.2％～0.3％柠檬酸钠、0.2％～0.3％磷酸氢二钠、0.1％～0.2％磷酸二氢钠的缓冲盐溶液调pH值为6.3～6.6；在整个培养过程中，流加氨水以保持pH值稳定在5.8～6.2；菌液培养20h后，补加500ml～700ml新鲜培养基；菌液培养结束后离心，加入由10％～15％脱脂乳、5％～7％谷氨酸钠、2％～3％甘油和7％～8％麦芽糖组成的复合保护剂，真空冷冻干燥。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200610039750 CN1844362A (zh) | 2006-04-21 | 2006-04-21 | 一种泡菜用乳酸菌的高密度培养方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200610039750 CN1844362A (zh) | 2006-04-21 | 2006-04-21 | 一种泡菜用乳酸菌的高密度培养方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1844362A true CN1844362A (zh) | 2006-10-11 |
Family
ID=37063332
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 200610039750 Pending CN1844362A (zh) | 2006-04-21 | 2006-04-21 | 一种泡菜用乳酸菌的高密度培养方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1844362A (zh) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101748083B (zh) * | 2008-12-11 | 2012-01-04 | 吉林省农业科学院 | 植物乳杆菌发酵剂及其制备方法与专用菌株 |
| CN102599451A (zh) * | 2011-01-25 | 2012-07-25 | 天津科技大学 | 一种新型酸菜复合发酵剂的制备 |
| CN103284028A (zh) * | 2013-05-13 | 2013-09-11 | 陈正军 | 一种泡菜发酵剂及其制备方法和在蔬菜泡制中的应用方法 |
| CN103725633A (zh) * | 2013-12-25 | 2014-04-16 | 四川理工学院 | 一种泡菜发酵菌菌剂及制备方法及应用 |
| CN105936885A (zh) * | 2016-07-08 | 2016-09-14 | 广州市微生物研究所 | 一种基于在线监控碱液消耗率的乳酸菌高细胞密度培养方法 |
| CN108504602A (zh) * | 2018-04-13 | 2018-09-07 | 陕西科技大学 | 一种富硒乳酸菌的制备方法 |
-
2006
- 2006-04-21 CN CN 200610039750 patent/CN1844362A/zh active Pending
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101748083B (zh) * | 2008-12-11 | 2012-01-04 | 吉林省农业科学院 | 植物乳杆菌发酵剂及其制备方法与专用菌株 |
| CN102599451A (zh) * | 2011-01-25 | 2012-07-25 | 天津科技大学 | 一种新型酸菜复合发酵剂的制备 |
| CN103284028A (zh) * | 2013-05-13 | 2013-09-11 | 陈正军 | 一种泡菜发酵剂及其制备方法和在蔬菜泡制中的应用方法 |
| CN103284028B (zh) * | 2013-05-13 | 2014-12-17 | 陈正军 | 一种泡菜发酵剂及其制备方法和在蔬菜泡制中的应用方法 |
| CN103725633A (zh) * | 2013-12-25 | 2014-04-16 | 四川理工学院 | 一种泡菜发酵菌菌剂及制备方法及应用 |
| CN103725633B (zh) * | 2013-12-25 | 2016-04-20 | 四川理工学院 | 一种泡菜发酵菌菌剂及制备方法及应用 |
| CN105936885A (zh) * | 2016-07-08 | 2016-09-14 | 广州市微生物研究所 | 一种基于在线监控碱液消耗率的乳酸菌高细胞密度培养方法 |
| CN108504602A (zh) * | 2018-04-13 | 2018-09-07 | 陕西科技大学 | 一种富硒乳酸菌的制备方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101580809B (zh) | 直投式干酪乳杆菌鼠李糖亚种冻干粉的制备方法 | |
| CN102220260B (zh) | 一种植物乳杆菌的冻干工艺 | |
| CN102453681B (zh) | 用于约氏乳杆菌真空冷冻干燥的保护剂及其应用 | |
| CN1844362A (zh) | 一种泡菜用乳酸菌的高密度培养方法 | |
| CN107034149A (zh) | 一种马克斯克鲁维酵母菌冻干菌剂的制备方法及其用途 | |
| CN102559523A (zh) | 一种富硒酵母、富硒酵母酶解物及其制备方法 | |
| KR20210062608A (ko) | 구연산염을 포함하는 유산균 동결 보호용 조성물 | |
| CN112695061A (zh) | 一种l-谷氨酸全营养流加高密度发酵的方法 | |
| CN112694976A (zh) | 一种高活菌数嗜酸乳杆菌菌粉的制备方法 | |
| CN115505534A (zh) | 冻干保护剂、其制备方法及应用、菌体的冻干方法 | |
| JP2023073258A (ja) | 乳酸菌の凍結保護のためのシステインまたはその塩の用途（ｕｓｅ ｏｆ ｃｙｓｔｅｉｎｅ ｏｒ ｓａｌｔ ｔｈｅｒｅｏｆ ｆｏｒ ｃｒｙｏｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｂａｃｔｅｒｉａ） | |
| CN108018211B (zh) | 一种提高保加利亚乳杆菌耐冻性的培养基及其应用方法 | |
| CN100352914C (zh) | 酵母拮抗菌罗伦隐球酵母的真空冷冻干燥制品及其制备方法 | |
| CN103602609A (zh) | 一种发酵生产l-丙氨酸的高产菌株及其制备方法 | |
| CN113321580A (zh) | 一种生产苹果酸的方法 | |
| CN108315277A (zh) | 一株植物乳杆菌及一种冷冻干燥乳酸菌的方法 | |
| CN113046253A (zh) | 一种提高马克斯克鲁维酵母耐热性的培养方法 | |
| CN110004068B (zh) | 一种香菇菌种保藏培养基及保藏方法 | |
| CN109266553A (zh) | 一种冻干保护剂、用其制备普洱茶用直投式冻干菌剂的方法与应用 | |
| CN113293101B (zh) | 一种乳酸菌的灭活方法及应用 | |
| CN113201459B (zh) | 一种微生物快速冻干保存的方法 | |
| CN114107104B (zh) | 一种保加利亚乳杆菌冻干粉及其制备方法 | |
| CN104911232A (zh) | 免疫抑制剂雷帕霉素在提高出芽短梗霉普鲁兰多糖产量中的应用及方法 | |
| CN1507879A (zh) | 乳酸球菌干粉制品的制作方法 | |
| CN100344750C (zh) | 酵母拮抗菌的真空冷冻干燥制品及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C12 | Rejection of a patent application after its publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |