CN113046253A - 一种提高马克斯克鲁维酵母耐热性的培养方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于生物工程技术领域，具体提供了一种提高马克斯克鲁维酵母耐热性的培养方法，该方法利用发酵培养基和流加培养基配合培养马克斯克鲁维酵母，所述流加培养基以无水葡萄糖、生物素、泛酸钙作为原料，提供了马克斯克鲁维酵母持续快速发酵和繁殖所需的营养物质，保证了马克斯克鲁维酵母菌的高效繁殖和菌活性，显著提高了马克斯克鲁维酵母高密度发酵后的活菌数；此外，在发酵罐流加补料过程中通过调节补料速度以及向发酵罐内添加NaCl并进行升温发酵，在渗透压和温度胁迫下，使马克斯克鲁维酵母的耐热性得到显著地提高。解决了因为马克斯克鲁维酵母耐热性低，导致后处理干燥过程中产品活菌收率低的问题，实现了高质量的工业化生产转化。

Description

一种提高马克斯克鲁维酵母耐热性的培养方法
技术领域
本发明属于生物工程，具体涉及一种提高马克斯克鲁维酵母耐热性的培养方法。
背景技术
马克斯克鲁维酵母是一种广泛存在于酸马奶、牛奶、水果等自然环境中的酵母，同时也是传统食品藏灵菇中的重要菌相；且近年来其在食品及医疗行业中的安全性已得到了中国卫生部、欧盟食品安全监督局、及美国食品药品管理局的确证，即可以被人类食用。作为一种新型酵母，马克斯克鲁维酵母在饲料中也有其应用潜力。在欧洲，食品安全局已将马克斯克鲁维酵母列入食品和饲料添加的安全生物制剂范围，表明了马克斯克鲁维酵母的安全性和重要价值。在国内，研究者已经认识到马克斯克鲁维酵母的商业化价值
作为一种活菌制剂产品，马克斯克鲁维酵母前期高密度发酵时耐热性偏低，造成干燥产品收率偏低，产品储存稳定性下降，对发酵液的后处理及干燥以及干燥制剂产品的存储稳定性带来很大的影响。中国发明专利(申请号：CN201910827684.5，专利名称：一种马克斯克鲁维酵母菌的增殖培养基及其制备方法)提供了一种马克斯克鲁维酵母快速增值的发酵培养基，能使马克斯克鲁维酵母放罐菌体浓度达到6.8×108cfu/mL左右。但是采用该方法进行高密度发酵，发酵液耐热性很低，导致发酵液后处理沸腾干燥过程中活菌损失大，产品收率低，同时干燥产品存储稳定性不佳。
因此提高马克斯克鲁维酵母高密度发酵的耐热性，能够提高干燥样品的收率和存储稳定性，提高产品的市场竞争力。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术中马克斯克鲁维酵母高密度发酵时耐热性低，干燥产品收率低，储存稳定性下降问题。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种提高马克斯克鲁维酵母耐热性的培养方法，包括以下步骤：
(1)菌种活化：将马克斯克鲁维酵母种子涂布于YPD培养基中进行活化，获得纯化的菌株，然后将菌株接种到YPD培养基中恒温培养；
(2)种子液制备：选取所述步骤(1)中活化后的马克斯克鲁维酵母菌株，接种到试管种子液培养基中，得到试管种子液；将试管种子液接种到摇瓶种子液培养基中，得到摇瓶种子液；
(3)种子罐接种及发酵培养：将所述步骤(2)中的摇瓶种子液接种到种子发酵罐中进行发酵培养，制得种子发酵液；
(4)发酵罐接种及发酵培养：将所述步骤(3)中的种子发酵液接种到发酵罐中进行发酵培养，发酵温度为28-32℃，并控制溶氧在40％以上；
(5)流加培养：在所述步骤(4)中发酵罐发酵培养6-10h后，向发酵罐中加入流加培养基进行流加补料，补料5-10h后，通过调节补料速度，控制溶氧为0％-25％；发酵至18-25h后，向发酵罐中添加NaCl并升温发酵，发酵至28-36h后结束。
具体的，上述步骤(1)中活化培养温度为28-32℃，活化时间为70-80h，恒温培养温度为30℃，培养时间为48h。
具体的，上述步骤(2)中试管种子液培养温度为28-32℃，摇床转速为150-300rpm/min，培养时间为18-25h；摇瓶种子液培养接种量为2-15％，培养温度为28-32℃，摇床转速为150-300rpm/min，培养时间为18-25h。
具体的，上述步骤(2)中试管种子液和摇瓶种子液培养基配比均为：2-4％无水葡萄糖、0.3-0.7％(NH4)2SO4、0.03-0.07％MgSO4·7H2O、0.1-0.5％KH2PO4、0.1-0.5％500x微量元素储液、0.08-0.12％1000x维生素储液，pH值为5.0-5.5；其中所述500x微量元素储液组分为：5-10g/L EDTA、1.5-5g/L ZnSO4·7H2O、0.2-0.7g/L MnCl2·7H2O、0.1-0.3g/LCoC12·6H2O、0.1-0.3g/L CuSO4·5H2O、0.1-0.5g/L Na2MoO4·2H2O、0.1-0.5g/LCaC12·2H2O、1-3g/L FeSO4·7H2O、1-3g/L H3BO3、0.01-0.05g/L KI；所述1000x维生素储液组分为：0.05-0.2g/L生物素、0.5-3g/L泛酸钙、0.5-3g/L烟酸。
具体的，上述步骤(3)中种子罐培养基和所述步骤(4)中发酵罐培养基配比均为：0.5-2％无水葡萄糖、0.5-2％(NH4)2SO4、0.2-1％MgSO4·7H2O、0.5-2％KH2PO4、0.2-1％500x微量元素储液、0.1-0.5％1000x维生素储液、0.01-0.1％泡敌，pH值为5.0-5.5；其中所述500x微量元素储液组分为：5-10g/L EDTA、1.5-5g/L ZnSO4·7H2O、0.2-0.7g/L MnCl2·7H2O、0.1-0.3g/L CoC12·6H2O、0.1-0.3g/L CuSO4·5H2O、0.1-0.5g/L Na2MoO4·2H2O、0.1-0.5g/L CaC12·2H2O、1-3g/L FeSO4·7H2O、1-3g/L H3BO3、0.01-0.05g/L KI；所述1000x维生素储液组分为：0.05-0.2g/L生物素、0.5-3g/L泛酸钙、0.5-3g/L烟酸。
具体的，上述步骤(3)中摇瓶种子液接种量为2-15％，发酵温度为28-32℃，转速为200-500rpm/min，罐压为0.02-0.05Mpa，初始pH值为5.0-5.5，培养时间为18-25h，发酵全程使用氨水控制pH值保持不变。
具体的，上述步骤(4)中种子发酵液接种量为2-15％，转速为200-650rpm/min，罐压为0.02-0.05Mpa，初始pH值为5.0-5.5，发酵全程使用氨水控制pH值保持不变。
具体的，上述步骤(5)中流加培养基配比为：500-800g/L无水葡萄糖、2-10mg/L生物素、50-200mg/L泛酸钙。
具体的，上述步骤(5)中NaCl添加量为4-5g/L。
具体的，上述步骤(5)中升温发酵的温度为38-42℃。
与现有技术相比，本发明具有以下优点和有益效果：
1、本发明提供的这种提高马克斯克鲁维酵母耐热性的培养方法，得到最适合发酵条件，使得马克斯克鲁维酵母发酵后得到最优的生物量；以无水葡萄糖、5mg/L生物素、100mg/L泛酸钙作为流加培养基进行补料，提供了马克斯克鲁维酵母持续快速发酵和繁殖所需的营养物质，保证了马克斯克鲁维酵母菌的高效繁殖和菌活性，显著提高了马克斯克鲁维酵母高密度发酵后的活菌数。
2、本发明提供的这种提高马克斯克鲁维酵母耐热性的培养方法，在发酵罐发酵过程中调节补料的速度以及添加氯化钠后升温发酵，显著提高了马克斯克鲁维酵母的耐热性。
3、本发明提供的这种提高马克斯克鲁维酵母耐热性的培养方法，解决了因为马克斯克鲁维酵母耐热性低，导致后处理干燥过程中产品活菌收率低的问题，实现了高质量的工业化生产转化。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。尽管已经详细描述了本发明的代表性实施例，但是本发明所属技术领域的普通技术人员将理解，在不脱离本发明范围的情况下可以对本发明进行各种修改和改变。因此，本发明的范围不应局限于实施方案，而应由所附权利要求及其等同物来限定。
本发明提供了一种提高马克斯克鲁维酵母耐热性的培养方法，包括以下步骤：
(1)菌种活化
将马克斯克鲁维酵母种子涂布于YPD培养基中进行活化，活化温度为28-32℃，活化时间为70-80h，获得纯化的菌株，然后将菌株接种到YPD培养基中，在30℃的恒温培养箱中培养48h；
(2)种子液制备
选取活化后的马克斯克鲁维酵母菌株，接种在试管种子液培养基中，培养温度为28-32℃，摇床转速为150-300rpm/min，优选180-200rpm/min，培养18-25h，得试管种子液；将获得的试管种子液以2-15％，优选8-10％的接种量接种到摇瓶种子液培养基里，培养温度为28-32℃，摇床转速为150-300rpm/min，优选为180-200rpm/min，培养18-25h，得摇瓶种子液；
其中，试管种子液培养基和摇瓶种子液培养基配比均为：2-4％无水葡萄糖、0.3-0.7％(NH4)2SO4、0.03-0.07％MgSO4·7H2O、0.1-0.5％KH2PO4、0.1-0.5％500x微量元素储液、0.08-0.12％1000x维生素储液，pH值为5.0-5.5；其中所述500x微量元素储液组分为：5-10g/L EDTA、1.5-5g/L ZnSO4·7H2O、0.2-0.7g/L MnCl2·7H2O、0.1-0.3g/L CoC12·6H2O、0.1-0.3g/L CuSO4·5H2O、0.1-0.5g/L Na2MoO4·2H2O、0.1-0.5g/L CaC12·2H2O、1-3g/L FeSO4·7H2O、1-3g/L H3BO3、0.01-0.05g/L KI；所述1000x维生素储液组分为：0.05-0.2g/L生物素、0.5-3g/L泛酸钙、0.5-3g/L烟酸；分装后110℃灭菌20min；
(3)种子罐接种及发酵培养
将制备得到的摇瓶种子液以2-15％的接种量接种到种子发酵罐中，发酵温度为28-32℃，转速为200-500rpm/min，罐压为0.02-0.05Mpa，发酵全程用氨水调节pH值为5.0-5.5，培养18-25h，得种子发酵液；
(4)发酵罐接种及发酵培养
将发酵后的种子发酵液以2-15％，优选8-10％的接种量接种到普通发酵罐中，发酵温度为28-32℃，转速为200-650rpm/min，罐压为0.02-0.05Mpa，发酵全程用氨水调节pH值为5.0-5.5，发酵初期通过调节转速和控制通气量，控制溶氧在40％以上。
其中，种子罐和发酵罐培养基配比均为：0.5-2％无水葡萄糖、0.5-2％(NH4)2SO4、0.2-1％MgSO4·7H2O、0.5-2％KH2PO4、0.2-1％500x微量元素储液、0.1-0.5％1000x维生素储液、0.01-0.1％泡敌，pH值为5.0-5.5；其中所述500x微量元素储液组分为：5-10g/LEDTA、1.5-5g/L ZnSO4·7H2O、0.2-0.7g/L MnCl2·7H2O、0.1-0.3g/L CoC12·6H2O、0.1-0.3g/L CuSO4·5H2O、0.1-0.5g/L Na2MoO4·2H2O、0.1-0.5g/L CaC12·2H2O、1-3g/LFeSO4·7H2O、1-3g/L H3BO3、0.01-0.05g/L KI；所述1000x维生素储液组分为：0.05-0.2g/L生物素、0.5-3g/L泛酸钙、0.5-3g/L烟酸；分装后110℃灭菌20min；
(5)流加培养
发酵罐发酵6-10h后，根据溶氧反弹不下降，向发酵罐中加入流加培养基进行流加补料，补料速度根据发酵时间和溶氧控制，补料5-10h，优选7-8h后，控制溶氧为0％-25％，优选0-15％。发酵18-25h后，以最终放罐体积进行估算，向培养基中添加4-5g/L NaCl，并升温至38-42℃，优选为40℃，发酵至28-36h后结束。
其中，流加培养基配比为：500-800g/L无水葡萄糖、2-10mg/L生物素、50-200mg/L泛酸钙，115℃灭菌20min。
下面通过具体实施例对本发明的提高马克斯克鲁维酵母耐热性的培养方法的效果进行研究。
本发明实施例均使用购自中国普通微生物菌种保藏管理中心的CGMCC编号为10621的马克斯克鲁维酵母进行高密度发酵。
实施例1：一种提高马克斯克鲁维酵母耐热性的培养方法
(1)菌种活化
将马克斯克鲁维酵母种子涂布于YPD培养基中进行活化，活化温度为30℃，活化时间为72h，获得纯化的菌株，然后将菌株接种到YPD培养基中，在30℃的恒温培养箱中培养48h；
(2)种子液制备
选取活化后的马克斯克鲁维酵母菌株，接种在试管种子液培养基中，培养温度为30℃，摇床转速为180rpm/min，培养20h，得试管种子液；将获得的试管种子液以10％的接种量接种到摇瓶种子液培养基里，培养温度为30℃，摇床转速为180rpm/min，培养20h，得摇瓶种子液；
其中，试管种子液培养基和摇瓶种子液培养基配比均为：2％无水葡萄糖、0.5％(NH4)2SO4、0.05％MgSO4·7H2O、0.3％KH2PO4、0.2％500x微量元素储液、0.1％1000x维生素储液，pH值为5.0；所述500x微量元素储液组分为：7.5g/L EDTA、2.25g/L ZnSO4·7H2O、0.5g/L MnCl2·7H2O、0.15g/L CoC12·6H2O、0.15g/L CuSO4·5H2O、0.2g/L Na2MoO4·2H2O、2.25g/L CaC12·2H2O、1.5g/L FeSO4·7H2O、0.5g/L H3BO3、0.05g/L KI；所述1000x维生素储液组分为：0.1g/L生物素、1g/L泛酸钙、1g/L烟酸；分装后110℃灭菌20min；
(3)种子罐接种及发酵培养
将制备得到的摇瓶种子液以10％的接种量接种到种子发酵罐中，发酵温度为30℃，转速为300rpm/min，罐压为0.03Mpa，初始pH值为5.0，发酵全程用氨水调节pH值为5.0，培养20h，得种子发酵液；
(4)发酵罐接种及发酵培养
将发酵后的种子发酵液以2％的接种量接种到普通发酵罐中，发酵温度为30℃，转速为200rpm/min，罐压为0.03Mpa，初始pH值为5.0，发酵全程用氨水调节pH值为5.0，发酵初期通过调节转速和控制通气量，控制溶氧在40％以上。
其中，种子罐和发酵罐培养基配比均为：1％无水葡萄糖、1％(NH4)2SO4、0.5％MgSO4·7H2O、1％KH2PO4、0.7％500x微量元素储液、0.2％1000x维生素储液、0.05％泡敌，pH值为5.0；所述500x微量元素储液组分为：7.5g/L EDTA、2.25g/L ZnSO4·7H2O、0.5g/LMnCl2·7H2O、0.15g/L CoC12·6H2O、0.15g/L CuSO4·5H2O、0.2g/L Na2MoO4·2H2O、2.25g/LCaC12·2H2O、1.5g/L FeSO4·7H2O、0.5g/L H3BO3、0.05g/L KI；所述1000x维生素储液组分为：0.1g/L生物素、1g/L泛酸钙、1g/L烟酸；分装后110℃灭菌20min；
(5)流加培养
发酵罐发酵7h后，根据溶氧反弹不下降，向发酵罐中加入流加培养基进行流加补料，补料速度根据发酵时间和溶氧控制，补料7h后，控制溶氧为0％-15％。发酵至22h后，以最终放罐体积进行估算，向培养基中添加5g/L NaCl，并升温至40℃，发酵至30h结束。
其中，流加培养基配比为：650g/L无水葡萄糖、5mg/L生物素、100mg/L泛酸钙，115℃灭菌20min。
发酵结束后，检测发酵液中马克斯克鲁维酵母菌的放罐活菌数；将发酵液加热到55℃，保温10min钟后检测发酵液的放罐活菌数，以剩余的活菌数与初始活菌数的百分比衡量耐热性，结果如表1所示。
实施例2：
采用与本发明实施例1相同的发酵工艺进行发酵培养，唯一不同的是，发酵罐发酵过程中NaCl添加量为4g/L。
发酵结束后，检测发酵液中马克斯克鲁维酵母菌的放罐活菌数；将发酵液加热到55℃，保温10min钟后检测发酵液的放罐活菌数，以剩余的活菌数与初始活菌数的百分比衡量耐热性，结果如表1所示。
实施例3
采用与本发明实施例1相同的发酵工艺进行发酵培养，唯一不同的是，发酵罐发酵过程中添加NaCl后升温发酵温度为38℃。
发酵结束后，检测发酵液中马克斯克鲁维酵母菌的放罐活菌数；将发酵液加热到55℃，保温10min钟后检测发酵液的放罐活菌数，以剩余的活菌数与初始活菌数的百分比衡量耐热性，结果如表1所示。
实施例4
采用与本发明实施例1相同的发酵工艺进行发酵培养，唯一不同的是，发酵罐发酵过程中添加NaCl后升温发酵温度为42℃。
发酵结束后，检测发酵液中马克斯克鲁维酵母菌的放罐活菌数；将发酵液加热到55℃，保温10min钟后检测发酵液的放罐活菌数，以剩余的活菌数与初始活菌数的百分比衡量耐热性，结果如表1所示。
实施例5
采用与本发明实施例1相同的发酵工艺进行发酵培养，唯一不同的是，流加培养阶段补料7h后，控制溶氧为15％-25％。
发酵结束后，检测发酵液中马克斯克鲁维酵母菌的放罐活菌数；将发酵液加热到55℃，保温10min钟后检测发酵液的放罐活菌数，以剩余的活菌数与初始活菌数的百分比衡量耐热性，结果如表1所示。
比较例1：
采用与本发明实施例1相同的发酵工艺进行发酵培养，唯一不同的是，发酵罐发酵过程中不添加NaCl。
发酵结束后，检测发酵液中马克斯克鲁维酵母菌的放罐活菌数；将发酵液加热到55℃，保温10min钟后检测发酵液的放罐活菌数，以剩余的活菌数与初始活菌数的百分比衡量耐热性，结果如表1所示。
比较例2：
采用与本发明实施例1相同的发酵工艺进行发酵培养，唯一不同的是，发酵罐发酵过程中添加NaCl后不进行升温发酵，发酵温度保持在30℃。
发酵结束后，检测发酵液中马克斯克鲁维酵母菌的放罐活菌数；将发酵液加热到55℃，保温10min钟后检测发酵液的放罐活菌数，以剩余的活菌数与初始活菌数的百分比衡量耐热性，结果如表1所示。
比较例3
采用与本发明实施例1相同的发酵工艺进行发酵培养，唯一不同的是，流加培养阶段补料7h后，控制溶氧在25％以上。
发酵结束后，检测发酵液中马克斯克鲁维酵母菌的放罐活菌数；将发酵液加热到55℃，保温10min钟后检测发酵液的放罐活菌数，以剩余的活菌数与初始活菌数的百分比衡量耐热性，结果如表1所示。
比较例4：
采用CN201910827684.5提供的马克斯克鲁维酵母菌的增值培养基进行发酵培养。
发酵结束后，检测发酵液中马克斯克鲁维酵母菌的放罐活菌数；将发酵液加热到55℃，保温10min钟后检测发酵液的放罐活菌数，以剩余的活菌数与初始活菌数的百分比衡量耐热性，结果如表1所示。
表1：本发明制备的马克斯克鲁维酵母的活菌数与耐热性。
Figure BDA0003019336160000101
Figure BDA0003019336160000111
由表1数据可以看出，流加培养阶段补料一段时间后，通过调节补料速度，控制溶氧在0-25％范围内，向发酵罐内添加4-5g/L NaCl并升温至38-42℃，优选为40℃进行发酵，在渗透压和温度胁迫下，马克斯克鲁维酵母的耐热性得到了显著提高。
综上所述，本发明提供的这种提高马克斯克鲁维酵母耐热性的培养方法，利用发酵培养基和流加培养基配合培养马克斯克鲁维酵母，在发酵罐流加补料过程中通过调节补料速度以及添加NaCl并进行升温发酵，使马克斯克鲁维酵母的放罐活菌数和耐热性能够得到显著提高。解决了因为马克斯克鲁维酵母耐热性低，导致后处理干燥过程中产品活菌收率低的问题，实现了高质量的工业化生产转化。
以上例举仅仅是对本发明的举例说明，并不构成对本发明的保护范围的限制，凡是与本发明相同或相似的设计均属于本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种提高马克斯克鲁维酵母耐热性的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)菌种活化：将马克斯克鲁维酵母种子涂布于YPD培养基中进行活化，获得纯化的菌株，然后将菌株接种到YPD培养基中恒温培养；
(2)种子液制备：选取所述步骤(1)中活化后的马克斯克鲁维酵母菌株，接种到试管种子液培养基中，得到试管种子液；将试管种子液接种到摇瓶种子液培养基中，得到摇瓶种子液；
(3)种子罐接种及发酵培养：将所述步骤(2)中的摇瓶种子液接种到种子发酵罐中进行发酵培养，制得种子发酵液；
(4)发酵罐接种及发酵培养：将所述步骤(3)中的种子发酵液接种到发酵罐中进行发酵培养，发酵温度为28-32℃，并控制溶氧在40％以上；
(5)流加培养：在所述步骤(4)中发酵罐发酵培养6-10h后，向发酵罐中加入流加培养基进行流加补料，补料5-10h后，通过调节补料速度，控制溶氧为0％-25％；发酵至18-25h后，向发酵罐中添加NaCl并升温发酵，发酵至28-36h后结束。
2.如权利要求1所述的提高马克斯克鲁维酵母耐热性的培养方法，其特征在于：所述步骤(1)中活化培养温度为28-32℃，活化时间为70-80h，恒温培养温度为30℃，培养时间为48h。
3.如权利要求1所述的提高马克斯克鲁维酵母耐热性的培养方法，其特征在于：所述步骤(2)中试管种子液培养温度为28-32℃，摇床转速为150-300rpm/min，培养时间为18-25h；摇瓶种子液培养接种量为2-15％，培养温度为28-32℃，摇床转速为150-300rpm/min，培养时间为18-25h。
4.如权利要求1所述的提高马克斯克鲁维酵母耐热性的培养方法，其特征在于：所述步骤(2)中试管种子液和摇瓶种子液培养基配比均为：2-4％无水葡萄糖、0.3-0.7％(NH4)2SO4、0.03-0.07％MgSO4·7H2O、0.1-0.5％KH2PO4、0.1-0.5％500x微量元素储液、0.08-0.12％1000x维生素储液，pH值为5.0-5.5；其中所述500x微量元素储液组分为：5-10g/LEDTA、1.5-5g/LZnSO4·7H2O、0.2-0.7g/L MnCl2·7H2O、0.1-0.3g/L CoC12·6H2O、0.1-0.3g/LCuSO4·5H2O、0.1-0.5g/L Na2MoO4·2H2O、0.1-0.5g/L CaC12·2H2O、1-3g/LFeSO4·7H2O、1-3g/L H3BO3、0.01-0.05g/L KI；所述1000x维生素储液组分为：0.05-0.2g/L生物素、0.5-3g/L泛酸钙、0.5-3g/L烟酸。
5.如权利要求1所述的提高马克斯克鲁维酵母耐热性的培养方法，其特征在于：所述步骤(3)中种子罐培养基和所述步骤(4)中发酵罐培养基配比均为：0.5-2％无水葡萄糖、0.5-2％(NH4)2SO4、0.2-1％MgSO4·7H2O、0.5-2％KH2PO4、0.2-1％500x微量元素储液、0.1-0.5％1000x维生素储液、0.01-0.1％泡敌，pH值为5.0-5.5；其中所述500x微量元素储液组分为：5-10g/L EDTA、1.5-5g/L ZnSO4·7H2O、0.2-0.7g/L MnCl2·7H2O、0.1-0.3g/LCoC12·6H2O、0.1-0.3g/L CuSO4·5H2O、0.1-0.5g/L Na2MoO4·2H2O、0.1-0.5g/LCaC12·2H2O、1-3g/LFeSO4·7H2O、1-3g/L H3BO3、0.01-0.05g/L KI；所述1000x维生素储液组分为：0.05-0.2g/L生物素、0.5-3g/L泛酸钙、0.5-3g/L烟酸。
6.如权利要求1所述的提高马克斯克鲁维酵母耐热性的培养方法，其特征在于：所述步骤(3)中摇瓶种子液接种量为2-15％，发酵温度为28-32℃，转速为200-500rpm/min，罐压为0.02-0.05Mpa，初始pH值为5.0-5.5，培养时间为18-25h，发酵全程使用氨水控制pH值保持不变。
7.如权利要求1所述的提高马克斯克鲁维酵母耐热性的培养方法，其特征在于：所述步骤(4)中种子发酵液接种量为2-15％，转速为200-650rpm/min，罐压为0.02-0.05Mpa，初始pH值为5.0-5.5，发酵全程使用氨水控制pH值保持不变。
8.如权利要求1所述的提高马克斯克鲁维酵母耐热性的培养方法，其特征在于：所述步骤(5)中流加培养基配比为：500-800g/L无水葡萄糖、2-10mg/L生物素、50-200mg/L泛酸钙。
9.如权利要求1所述的提高马克斯克鲁维酵母耐热性的培养方法，其特征在于：所述步骤(5)中NaCl添加量为4-5g/L。
10.如权利要求1所述的提高马克斯克鲁维酵母耐热性的培养方法，其特征在于：所述步骤(5)中升温发酵的温度为38-42℃。
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