CN1842515A - 组织蛋白酶抑制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一类右式(I)所表示的新化合物，其中R1、R2、R2和R4的含义如本文中所述，这些化合物是半胱氨酸蛋白酶的抑制剂，包括但不限于组织蛋白酶K、L、S和B抑制剂。这些化合物可以用于治疗其中需要抑制骨吸收的疾病，例如骨质疏松症、骨关节炎和风湿性关节类。

Description

组织蛋白酶抑制剂
技术领域
本发明一般而言涉及蛋白质活性的抑制剂，并特别涉及组织蛋白酶的抑制剂。
背景技术
许多组织蛋白酶属于半胱氨酸蛋白酶的木瓜蛋白酶超家族。这些蛋白酶在结缔组织的正常生理学降解以及病理降解中发挥作用。组织蛋白酶在细胞内蛋白质降解和更新以及再造中起着举足轻重的作用。这些组织蛋白酶天然地存在于多种组织中。迄今为止，许多组织蛋白酶已经从许多来源中得到鉴定和测序，例如，组织蛋白酶B、F、H、L、K、S、W和Z已经得到克隆。此外，在1996年5月9日出版的KhepriPharmaceuticals公司的PCT申请WO 96/13523中公开了组织蛋白酶K的序列，该申请的全文在此引为参考。组织蛋白酶L与正常的溶菌酶蛋白质水解以及若干病态(包括但不限于黑素瘤转移)存在复杂的关系。组织蛋白酶S与阿尔茨海默氏病和某些自体免疫紊乱(包括但不限于青少年发作糖尿病、多发性硬化、慢性天疱疮、甲状腺机能亢进、重症肌无力、全身性红斑狼疮、类风湿性关节炎和桥本氏甲状腺炎)、变应性紊乱(包括但不限于哮喘)、以及外源性免疫反应(包括但不限于器官移植排斥或者组织移植排斥)存在复杂的关系。在肿瘤中发现升高的组织蛋白酶B水平和酶的重新分布，表明该酶在肿瘤发病和转移中起一定作用。此外，异常的组织蛋白酶B活性与某类疾病状态(如类风湿性关节炎、骨关节炎、卡氏肺囊虫、急性胰炎、炎性气道疾病和骨与关节病症)存在复杂的关系。
已知半胱氨酸蛋白酶抑制剂如E-64(反-环氧琥珀酰-L-亮氨酰胺-(4-胍基)丁烷)可有效抑制骨吸收。参阅Delaisse，J.M.等人，1987，Bone，8：305-313，其全文在此引为参考。最近，对组织蛋白酶K进行了克隆并发现其特异性地表达于破骨细胞中。参阅Tezuka，K.等人，1994，J Biol Chem，269：1106-1109；Shi G.P.等人，1995，FEBS Lett，357：129-134；Bromme，D.和Okamoto，K.，1995，BiolChem Hoppe Seyler，376：379-384；Bromme D.等人，1996，J BiolChem，271：2126-2132；Drake，F.H.等人，1996，J Biol Chem，271：12511-12516，其全文在此引为参考。与该克隆同时存在的是，描绘了常染色体隐性病症和致密性成骨不全症(其特征在于骨吸收缩小的骨硬化表型)与存在于该组织蛋白酶K基因中的突变相关。迄今为止，已知在组织蛋白酶K基因中鉴定的所有突变都可以导致失活的蛋白质。参阅Gelb，B.D.等人，1996，Science，273：1236-1238；Johnson，M.R.等人，1996，Genome Res，6：105O-1055，其全文在此引为参考。因此，组织蛋白酶K似乎与破骨细胞介导的骨吸收相关。
将组织蛋白酶K合成为37kDa前酶原，该前酶原被局限于溶菌酶层，并且通常认为它在低pH值下会被自动活化成成熟的27kDa酶。参阅McQueney，M.S.等人，1997，J Biol Chem，272：13955-13960；Littlewood-Evans，A.等人，1997，Bone，20：81-86，其全文在此引为参考。组织蛋白酶K与在氨基酸水平上有56％的序列同一性的组织蛋白酶S最紧密相关。组织蛋白酶K的S2P2底物专一性与组织蛋白酶S相似，对于带正电荷的残基(例如精氨酸)和疏水性残基(例如苯丙氨酸或者亮氨酸)而言分别在P1和P2位上优先。参阅Bromme，D.等人，1996，J Biol Chem，271：2126-2132；Bossard，M.J.等人，1996，J Biol Chem，271：12517-12524，其全文在此引为参考。组织蛋白酶K在广泛的pH范围内有活性，在pH值4～8下具有显著的活性，由此使它在pH值为约4～5的破骨细胞的吸收腔中具有优良的催化活性。
人类I型胶原，骨中的主要胶原，是组织蛋白酶K的优良底物。参阅Kafienah，W.等人，1988，Biochem J，331：727-732，其全文在此引为参考。对组织蛋白酶K使用反义寡核苷酸的体外试验已经显示了减少了的体外骨吸收，这可能是由于组织蛋白酶K mRNA翻译的减少所导致的。参阅Inui，T.等人，1997，J Biol Chem，272：8109-8112，其全文在此引为参考。已经对组织蛋白酶K的晶体结构进行了解析。参阅McGrath，M.E.等人，1997，Nat Struct Biol，4：105-109；Zhao，B.等人，1997，Nat Struct Biol，4：109-11，其全文在此引为参考。同样，已经开发了基于肽的选择性的组织蛋白酶K的抑制剂。参阅Bromme，D.等人，1996，Biochem J，315：85-89；Thompson，S.K.等人，1997，Proc Natl Acad Sci USA，94：14249-14254，其全文在此引为参考。因此，组织蛋白酶K抑制剂能够降低骨吸收。这些抑制剂可用于治疗涉及骨吸收的病症，例如骨质疏松症。
发明概述
本发明提供在需要治疗和/或预防的哺乳动物中能够治疗和/或预防组织蛋白酶依赖状态或者疾病态的化合物。本发明提供下面的通式化合物：
Figure A20048002452000071
其中R4是具有吸电子性质的非氢取代基，其与R1、R2和R2一起足以将水介质中氮的pKa降至小于6，
其中R1是结合于组织蛋白酶活性部位的S1亚位点的取代基，和
其中R2是结合于组织蛋白酶活性部位的S2亚位点的取代基，和
其中R3是结合于组织蛋白酶活性部位的S3亚位点的取代基。
更具体而言，本发明提供下面的通式化合物：
Figure A20048002452000072
其中R1是结合于组织蛋白酶活性部位的S1亚位点的取代基，和其中R2是结合于组织蛋白酶活性部位的S2亚位点的取代基，和其中R3是结合于组织蛋白酶活性部位的S3亚位点的取代基。
为了描述蛋白酶抑制剂的活性部位，已经提出了专门的命名法。参阅美国专利号6,333,402，在此引入作为参考。从底物的易断开的键的氨基侧链上的残基处开始，并从该键处离开，残基被命名为P1、P2和P3等。将跟在易裂开的键之后的残基称为P1’、P2’和P3’等。已经发现，具有非常不同整体结构的蛋白质抑制剂的主链在P3和P3’之间的区域非常类似，同时对于P2、P1和P1’而言是尤其高度类似的。人们通常认为各蛋白酶活性部位具有亚位点S1和S2等以及亚位点S1’和S2’等，S1和S2容纳底物或者抑制剂的残基P1和P2等的侧链基团，S1’和S2’容纳底物或者抑制剂的P1和P2等的侧链基团。S亚位点和P侧链基团之间的相互作用产生蛋白酶对于底物的特异性和抑制剂对于蛋白酶的特异性。这种命名法通常涉及蛋白酶的非肽抑制剂，其中与蛋白酶亚位点S1和S2等相互作用的非肽区域将分别被称为P1和P2等。
二肽组织蛋白酶抑制剂中的P2-P3酰胺键可以被取代的乙胺残基所替换。R1、R2、R2和R4的吸电子性能集合起来使得P4胺在生理pH值下变成非碱性的。由此，该片段能够与组织蛋白酶整个木瓜蛋白酶族中保守的组织蛋白酶甘氨酸形成重要的中性氢键。
酰胺和苯胺都能够与羰基形成氢键，但是具有新陈代谢的倾向。乙胺本身是碱性的并且在生物系统中被质子化，产生一个能够降低与目标酶结合的电荷。具有充分吸电子的R4(或者更具体而言为三氟乙胺)时，胺不被质子化并且胺与组织蛋白酶活性部位中的受体氧形成更强的氢键。在组织蛋白酶中，重要的受体氧位于活性部位的S2和S3亚位点之间；在组织蛋白酶K中受体氧是Gly66。该残基是在蛋白质的这个整个木瓜蛋白酶族之中的保守残基，并包括组织蛋白酶B、F、H、K、L、L2、O、S、W和Z、falcipain、falcipain-1和falcipain-2。因此，使用非碱性乙胺连接子连接与组织蛋白酶S2和S3亚位点结合的抑制剂片段，能够产生比使用相应酰胺更为有效的抑制作用。
发明详述
本发明涉及具有下面化学式的物质的组合物：
Figure A20048002452000081
和具有不超过70个各自独立地选自C、O、N、S、P、F、Cl、Br或者I的非氢原子；
其中R4是非氢的吸电子取代基，从而使得其与R1、R2和R2一起使氮的碱性降低至pKa小于6；
其中组合物分子与组织蛋白酶相互作用，使得化学式中的CH-NH区域与组织蛋白酶在S2和S3之间有利地进行相互作用，R1与组织蛋白酶活性部位的S1而非S3有利地进行相互作用，R2与组织蛋白酶活性部位的S2而非S3有利地进行相互作用，以及R2与组织蛋白酶活性部位的S3而非S2或者S1有利地进行相互作用。
在本发明的一组技术方案中，组织蛋白酶选自组织蛋白酶B、F、H、K、L、L2、O、S、W和Z。在本发明的一个亚组中，组织蛋白酶选自组织蛋白酶K、L、S和B。在本发明的另一个亚组中，组织蛋白酶是组织蛋白酶L。在本发明的另一个亚组中，组织蛋白酶是组织蛋白酶S。在本发明的另一个亚组中，组织蛋白酶是组织蛋白酶B。在本发明另一个亚组中，组织蛋白酶是组织蛋白酶F。
在本发明的一组技术方案中，R4并不分别与组织蛋白酶活性部位的亚位点S2、S3和S1有利地进行相互作用。在本发明的另一类中，R4选自-CF3、-CH2F、-CF2R5和-CHFR5，其中R5是任选地被1～4个取代基取代的C1-6烷基、芳基或者杂芳基，这些取代基选自卤素、C1-3烷基、C1-3烷氧基、羟基、羟基烷基、酮、氰基、杂环基、C3-8环烷基、SOmC1-3烷基、NH2、NO2或者O(C＝O)C1-3烷基，其中m是0～2的整数。
在本发明的一组技术方案中，R2具有至少一个同时满足以下三个距离标准的碳原子或者硫原子，该距离标准为：它在组织蛋白酶Cα26的7范围内、在组织蛋白酶Cα68的8.5范围内和在组织蛋白酶Cα134的7范围内。在本发明的另一类中，R2包括非极性区域。在本发明的另一类中，R2包括亲油的区域。
在本发明的一组技术方案中，R1包括稳定地与组织蛋白酶活性部位的亚位点S1配合的区域，具有至少一个在组织蛋白酶Cα25的5范围内的碳原子。在本发明的另一类中，R1是非免疫原性的。
在本发明的一组技术方案中，R2具有至少一个同时满足以下两个距离标准的碳原子或者硫原子，该距离标准为：它在组织蛋白酶Cα66的7范围内和在组织蛋白酶Cα60的7范围内。在本发明的另一类中，R2包括非极性区域。在本发明的另一类中，R2包括亲油的区域。
在本发明的一组技术方案中，氮的pKa小于6并且与组织蛋白酶甘氨酸66的组织蛋白酶酰胺羰基形成一个氢键。
在本发明的一组技术方案中，化合物具有小于1000道尔顿的分子量。在本发明的一组技术方案中，化合物与组织蛋白酶的半胱氨酸25形成共价键。在本发明的一组技术方案中，化合物与组织蛋白酶的活性部位结合，在纯化的酶活性测定中IC50小于10微摩尔。
在本发明的一组技术方案中，在权利要求1中所示的仲胺氮在水介质中的pKa小于5。
在本文中使用的术语“亲油的”，是指一种作为单独实体的化合物，与溶解于水相比更易溶于非极性溶剂(例如环己烷)。术语“亲油基”，在上下文中它连接在分子上，是指具有高烃含量的分子的一个区域，从而使得基团对非极性溶剂或者脂质产生高亲合力。亲油基可以是，例如少于30个碳原子的烷基链或者环烷基链(优选为正烷基)。更进一步来说，亲油基包括连接于天然形成的和合成的芳香和非芳香部分的烷基链，例如脂肪酸、酯和醇以及其它脂类分子。亲油分子的其它实例是笼形结构(例如金刚烷和巴克敏斯特富勒烯)和芳香烃(例如苯、苝、菲、蒽、萘、芘、 和四并苯)。在此使用的术语“亲油基”特别包括烷基链、环烷基链、芳环或者杂芳环的碳原子和连接的氢原子。在此使用的术语“亲油基”还包括二价硫原子。
术语“基本上同源的”，当连同氨基酸序列一起使用时，是指在序列上基本相同或者类似的序列，这引起构象同源性并且由此引起类似的生物活性。该术语并不打算隐含共同的序列起源。一般“基本上同源的”序列是在次序上，至少在任何已知涉及期望活性的区域上，至少有50％的序列相同，更优选至少80％相同。最优选除了末端基团之外，至多有五个残基不同。优选在序列上的异差至少在上述区域内为“保守的变形”形式。
“保守的变形”被定义为(a)如下文定义的氨基酸的保守置换；和(b)在末端、在中间区域边界、在环内或者其它相对高活动性的部分(例如通过X射线衍射分析或者NMR无法清楚解析的所示部分)，氨基酸的单个或多重插入或者消去。优选除了在末端之外，至多约五个氨基酸在特定位点被插入或者消去，以及已知变形是在含有对活性而言重要的结合部位的外部区域。
保守置换在此定义为在以下五组中的一组内进行交换，五组为：(1)小的脂肪族非极性或者轻微极性的残基：丙氨酸(Ala)、丝氨酸(Ser)和苏氨酸(Thr)(脯氨酸(Pro)、甘氨酸(Gly))；(2)极性带负电荷的残基和它们的酰胺：天冬氨酸(Asp)、天冬酰胺(Asn)、谷氨酸(Glu)和谷氨酰胺(Gln)；(3)极性的带正电荷的残基：组氨酸(His)、精氨酸(Arg)和赖氨酸(Lys)；(4)大的脂肪族非极性残基：蛋氨酸(Met)、亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)和缬氨酸(Val)(半胱氨酸(Cys))；和(5)大的芳香残基：苯丙氨酸(Phe)、酪氨酸(Tyr)和色氨酸(Trp)。残基Pro、Gly和Cys用圆括号括起是因为它们具有特别的构象作用。Cys参与二硫键的形成。甘氨酸赋予链以挠性。脯氨酸赋予链以刚性和破坏α-螺旋。这些残基在多肽某些区域可能是基本的残基，但是在其它地方是可替换的。半保守置换被定义为在上述(1)～(5)组的两组间的交换，上述五组可以限定为超群(a)，包括上述的组(1)、(2)和(3)，或者限定为超群(b)，包括上述的组(4)和(5)。
在此使用的术语“组织蛋白酶”是指属于木瓜蛋白酶族的酶，即其中酶的活性形式以类似于木瓜蛋白酶的方式进行折叠(在NCBIConserved Domain数据库中为Conserved Domain smart00645.7，http：// www.ncbi.nlm.nih.gov/Structure/cdd/cddsrv.cgi？uid＝15045)。在此仅仅涉及人类、鼠、兔、灵长类动物、大鼠和小镰疟原虫中的组织蛋白酶。人类组织蛋白酶特别包括组织蛋白酶B、F、H、K、L、L2、O、S、W和Z；还特别包括鼠、兔、灵长类动物和大鼠中的酶，这些酶与最相似的在先所述人类组织蛋白酶相比显示出超过80％序列同一性(比较酶的活性形式)。还特别包括小镰疟原虫中的falcipain、falcipain-1和falcipain-2，和与这些酶最相似的，显示出超过80％序列同一性的任何其它小镰疟原虫酶，同样比较酶的活性形式。
组织蛋白酶中的特定的氨基酸残基(例如甘氨酸66)或者Cα(例如Cα66)是指通过用于组织蛋白酶K活性形式和图1给出的基本序列比对的残基编号的组合。此序列比对用于如图中标记的人类组织蛋白酶和falcipains的蛋白质活性形式的相关部分。在附图中，给出了本文中涉及的一些关键残基编号，编排成为垂直于上述比对的序列的形式。涉及的其它残基编号可以通过沿最接近的编号残基计算或者通过直接参考组织蛋白酶K序列得到。编号以人类组织蛋白酶的KSWISSPROT主索引登记#P43235为基准而获得，其中链中的第一残基，蛋白质的活性形式(在#P43235中残基编号为115)在此重置为残基号码1。在此序列比对被用来统一组织蛋白酶K残基对于另一个人类组织蛋白酶和falcipains的参考。对小鼠、兔、灵长类动物和大鼠组织蛋白酶中的残基的参考被使用缺省参数的标准的基本序列比对所隐含，达到最高度同源的以下具体限定的序列中：
                22
                56
                **
Figure A20048002452000121
                6  667
                0  680
                *  ***
组织蛋白酶K：YPYVG---------QEESCMYNPT-------------------GKAAKCR
组织蛋白酶B：YESHVGCRPYSIPPCEHHVNGSRPPCTGEGDTPKCSKICEPGYSPTYKQD
组织蛋白酶F：YSYQG---------HMQSCNFSAE-------------------KAKVYlN
组织蛋白酶H：YPYQG---------KDGYCKFQPG-------------------KAIGFVK
组织蛋白酶L：YPYEA---------TEESCKYNPK-------------------YSVANDT
组织蛋白酶O：YPFKA---------QNGLCHYFSG-------------------SHSGFSI
组织蛋白酶S：YPYKA---------MDQKCQYDSK-------------------YRAATCS
组织蛋白酶W：YPFQGK--------VRAHRCHPKKY------------------QKVAWIQ
组织蛋白酶Z：NNYQAKDQECDKFNQCGTCNEFKE-------------------CHAIRNY
组织蛋白酶L2：YPYVA--------VDEICKYRPE-------------------NSVANDT
Falcipain：YKYKAK--------DDMFCLNYRC-------------------KRKVSLS
Falcipain2：YPYVSN--------LPETCNLKRC-------------------NERYTIK
Falcipain3：YPYVSD--------APNLCNIDRC-------------------TEKYGIK
                1
                3
                4
                *
组织蛋白酶K：CNS-----DNLNHAVLAVGYGIQKG-------------------------
组织蛋白酶B：GEMMG------GHAIRILGWGVENG-------------------------
组织蛋白酶F：CSP-----WLIDHAVLLVGYGNRSD-------------------------
组织蛋白酶H：CHKTP---DKVNHAVLAVGYGEKNG-------------------------
组织蛋白酶L：CSS-----EDMDHGVLVVGYGFESTE---------------------SDN
组织蛋白酶Q：GE--------ANHAVLITGFDKTGS-------------------------
组织蛋白酶S：CT------QNVNHGVLVVGYGDLNG-------------------------
组织蛋白酶W：CDP-----QLVDHSVLLVGFGSVKSEEGIWAETVSS-----QSQPQPPHP
组织蛋白酶Z：DTT------YINHVVSVAGWGISDG-------------------------
组织蛋白酶L2：CSS-----KNLDHGVLVVGYGFEGAN--------------------SNN
Falcipain：SEE-------LNHSVLLVGYGQVEKTKLNYNNKIQTYNTKENSNQPDDNI
Falcipain2：GA------A-PNHAVILVGYGMKDIYNEDTG---------------RMEK
Falcipain3：GD------E-LNHAVMLVGFGMKEIVNPLTK---------------KGEK
                        2
                        0
                        9
                        *
组织蛋白酶K：NKHWIIKNSWGENWGNKGYILMARNKN-------NACGIANLASFPKM--
组织蛋白酶B：TPYWLVANSWNTDWGDNGFFKILRGQD--------HCGIESEVVAGIPRT
组织蛋白酶F：VPFWAIKNSWGTDWGEKGYYYLHRGSG--------ACGVNTMASSAVVD-
组织蛋白酶H：IPYWIVKNSWGPQWGMNGYFLIERGK--------NMCGLAACASYPIPLV
组织蛋白酶L：NKYWLVKNSWGEEWGMGGYVKMAKDRR-------NHCGIASAASYPTV--
组织蛋白酶O：TPYWIVRNSWGSSWGVDGYAHVKMGSN--------VCGIADSVSSIFV--
组织蛋白酶S：KEYWLVKNSWGHNFGEEGYIRMARNKG-------NHCGLASFPSYPEI--
组织蛋白酶W：TPYWILKNSWGAQWGEKGYFRLHRGSN--------TCGiTKFPLTARVQK
组织蛋白酶Z：TEYWIVRNSWGEPWGERGWLRIVTSTYKDGKGARYNLAIEEHCTFGDPIV
组织蛋白酶L2：SKYWLVKNSWGPEWGSNGYVKIAKDKN-------NHCGIATAASYPNV--
Falcipain：IYYWIIKNSWSKKWGENGFMRLSRNKNGD----NVFCGIGEEVFYPIL--
Falcipain2：FYYYIIKNSWGSDWGEGGYINLETDENGY----KKTCSIGTEAYVPLLE-
Falcipain3：HYYYIIKNSWGQQWGERGFINIETDESGL----MRKCGLGTDAFIPLIE-
组织蛋白酶K：------------(SEQ ID NO：1)
组织蛋白酶B：D-----------(SEQ ID NO：2)
组织蛋白酶F：------------(SEQ ID NO：3)
组织蛋白酶H：------------(SEQ ID NO：4)
组织蛋白酶L：------------(SEQ ID NO：5)
组织蛋白酶O：------------(SEQ ID NO：6)
组织蛋白酶S：------------(SEQ ID NO：7)
组织蛋白酶W：PDMKPRVSCPP-(SEQ ID NO：8)
组织蛋白酶Z：------------(SEQ ID NO：9)
组织蛋白酶L2：------------(SEQ ID NO：10)
Falcipain：------------(SEQ ID NO：11)
Falcipain2：------------(SEQ ID NO：12)
Falcipain3：------------(SEQ ID NO：13)
                                            图1
定义：术语“有利地”，如在本文中用于术语“有利地相互作用”，是指制作分子模型计算的有利结果，其中将配体分子的计算机模型置入组织蛋白酶计算机模型的活性部位，产生配体：组织蛋白酶配合物，并且使用标准分子力学力场，例如MMFF94s配体：组织蛋白酶配合物的能量最小化(T.A.Halgren，Journal of Computational Chemistry(1999)，20，720-729页)。配体进入活性部位之内的初始布局，也称为“对接”这样进行，以便最适宜地使配体：酶在配体取代基和本文所述酶的亚位点之间发生相互作用。对于所研究的组织蛋白酶(除去非蛋白质原子)，如果其X射线晶体结构是可获得的，那么活性部位的计算机模型基于X射线晶体结构(例如，对于组织蛋白酶K，Protein Databank入口为1MEM)；或者如果X射线晶体结构是不可获得的，就可以使用以最相似的组织蛋白酶为基准的同源性构造结构，对于该最相似的组织蛋白酶，其X射线晶体结构是可获得的；或者仅仅直接使用其X射线结构是可获得的最相似的组织蛋白酶。在能量最小化开始时，还没有调节蛋白质原子以适应于配体，但是在能量最小化期间，允许具有至少一个原子在配体6之内的整个蛋白质侧链随着能量最小化的进行而移动。在能量最小化期间，不允许酶的主链原子产生移动。可以使用水的连续电介质溶剂，但是可以另外使用标准的分子力学能量最小化的缺省参数和运转状态，它与SchrodingerInc的软件程序宏观模型中采用的缺省参数和运转状态相似。“模型制作计算的有利结果”是指在能量最小化完成后，在配体和活性部位之间没有不良的空间相互作用，以及在配体和活性部位之间存在稳定能量的氢键和亲油相互作用。如果相信配体与半胱氨酸-25的活性部位硫形成共价键，那么能量最小化可以包括提交计算的在模拟配体：组织蛋白酶配合物中的共价键。如本文中要求的配体和组织蛋白酶之间的相互作用基于配体：组织蛋白酶配合物的几何结构，该几何结构由上述能量最小化产生。
在本发明的一个实施方案中，配体取代基和S2之间有利的相互作用需要取代基的至少一个碳原子或者二价硫原子同时满足以下三个距离条件：它在组织蛋白酶Cα26的7范围内，在组织蛋白酶Cα68的8.5范围内和在组织蛋白酶Cα134的7范围内。在本发明的另一实施方案中，配体取代基和S2之间有利的相互作用需要取代基亲油基的至少一个原子在残基67、68和134中两个残基的原子的5.5范围内。在本发明更进一步的实施方案中仅仅涉及组织蛋白酶B，配体取代基和S2之间有利的相互作用需要在取代基和组织蛋白酶B的谷氨酸209之间具有氢键。
在本发明的一个实施方案中，配体取代基和S3之间有利的相互作用需要取代基的至少一个碳原子或者二价硫原子同时满足以下两个距离：它在组织蛋白酶Cα66的5.5范围之内，并且它在组织蛋白酶笼的7范围之内。在本发明的另一实施方案中，配体取代基和S3之间有利的相互作用需要取代基亲油基的至少一个原子在Cα66和残基60或者61原子的5.5范围内。在本发明的另一实施方案中，配体取代基和S3之间有利的相互作用需要取代基亲油基的至少一个原子在残基60或者61的5.5范围内。
在本发明的一个实施方案中，配体取代基和S1之间有利的相互作用需要取代基的至少一个碳原子在Cα25的5范围内。在本发明的另一实施方案中，配体取代基和S1之间有利的相互作用，需要在残基25的活性部位半胱氨酸硫和配体亲电子碳之间有一个共价键，优选为羰基碳或者腈碳。
在本发明的一个实施方案中，配体的化学式中CH-NH区域和S2与S3间的组织蛋白酶之间有利的相互作用，需要该化学式的N在Gly66的肽氧的4范围内，以及该化学式的C(仅仅涉及直接与R4相连的C)在Cα66的5.5范围内。在本发明的另一实施方案中，配体化学式中CH-NH区域和S2与S3间的组织蛋白酶之间有利的相互作用，需要让该化学式的NH氢键连结到残基66的酰胺0上。
除非另作说明，本文中使用的“烷基”指的是包括具有1～10个碳原子的支链和直链的饱和脂族烃基团。例如，C1～C10，如在“C1～C10烷基”中，定义为包括在直链、支链或者环状排列中具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或者10个碳原子的基团。例如，“C1～C10烷基”特别包括甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基和癸基等。
除非另作说明，“烷氧基”表示如上述定义的烷基，其中所述烷基通过氧桥连接。
除非另作说明，术语“环烷基”或者“碳环”是指碳原子总数为3～8个或者此范围内任何数目的环状烷烃环(即环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基或者环辛基)。
本文中使用的“芳基”是指在各环中有最高达12个原子的任何稳定的单环或者二环碳环，其中至少一个环是芳香环。上述芳基单元的实例包括苯基、萘基、四氢萘基、2，3-二氢化茚基、联苯基、菲基、蒽基或者苊基。可以理解，在芳基取代基是二环的取代基并且一个环是非芳环的情况中，连接是通过芳环进行的。
本文中使用的术语“杂芳基”表示各环中具有最高达10个原子的稳定的单环、二环或者三环，其中至少一个环是芳香环并且含有1～4个选自O、N和S的杂原子。在此定义范围内的杂芳基基团包括但不限于：苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并呋咱基、苯并吡唑基、苯并三唑基、苯并噻吩基、苯并唑基、咔唑基、咔啉基、噌啉基、呋喃基、二氢吲哚基、吲哚基、中氮茚基(indolazinyl)、吲唑基、异苯并呋喃基、异氮杂茚基、异喹啉基、异噻唑基、异唑基、萘并吡啶基、二唑基、唑基、唑啉、异唑啉、吡喃基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并吡啶基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、喹喔啉基、四唑基、四唑并吡啶基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、三唑基、二氢苯并咪唑基、二氢苯并呋喃基、二氢苯并噻吩基、二氢苯并唑基、二氢吲哚基、二氢喹啉基、亚甲基二氧基苯、苯并噻唑基、苯并噻吩基、喹啉基、异喹啉基、唑基和四氢喹啉基。在其中杂芳基取代基是二环取代基并且一个环是非芳香环或者不包含杂原子的情况下，应当理解，分别通过芳环或者通过包含环的杂原子进行连接。如果杂芳基含有氮原子，应当理解该定义中也包含其相应的N-氧化物。
如熟练的技术人员所理解，本文中使用的“卤代”或者“卤素”意指包括氯、氟、溴和碘。术语“酮”是指羰基(C＝O)。本文中使用的术语“烷氧基”指的是通过氧原子连接到分子的剩余部分上的烷基部分，其中烷基如上所定义。烷氧基的实例包括甲氧基和乙氧基等。
术语“羟基基烷基”是指被一个或两个羟基取代的1～6个碳原子的直链单价烃基或者3～6个碳原子的支链单价烃基，条件是如果存在两个羟基，它们不在同一碳原子上。代表性的实例包括但不限于羟甲基、2-羟乙基、2-羟丙基和3-羟丙基等。
除非另作说明，本文中使用的术语“杂环”或者“杂环基”表示含有1～4个选自O、N、S、SO或者SO2的杂原子的5～10元非芳族环，并包括二环基团。因此，“杂环基”包括但不限于以下基团：哌嗪基、哌啶基、吡咯烷基、吗啉基、硫代吗啉基、四氢吡喃基、二氢哌啶基和四氢噻吩基等。如果杂环含有氮，可以理解此定义中也包含其相应的N-氧化物。
本发明还包括式I化合物的N-氧化物衍生物和受保护的衍生物。
例如，当式I化合物含有可氧化的氮原子时，可以通过本领域熟知的方法将氮原子转化成N-氧化物。还有当式I化合物含有例如羟基、羧基、巯基或者任何含有氮原子的基团时，这些基团可以用适当的保护基进行保护。适当保护基的综合列表可以在T.W.Greene，Protective Groups in Organic Synthesis，John Wiley & Sons，Inc.，1981中得到，其公开的全部内容在此引入作为参考。式I化合物受保护的衍生物可以通过本领域熟知的方法制备。
在本发明范围内还包括药物组合物，药物组合物包括如上所述的化合物和药学上可接受的载体。本发明还预期包含一种药物组合物，它包括药学上可接受的载体和任何在本申请中明确公开的化合物。根据包含在此的教导，本发明的这些和其它方面将会是显而易见的。
本发明化合物药学上可接受的盐包括无机或者有机酸形式的本发明化合物的常规无毒盐。例如，常规的无毒盐包括由无机酸得到的盐，例如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸和硝酸等的盐，以及由有机酸制备的盐，例如醋酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、扑酸(pamoic)、马来酸、羟基马来酸、苯基乙酸、谷氨酸、安息香酸、水杨酸、磺胺酸、2-乙酰氧基-安息香酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙基二磺酸、草酸、羟乙磺酸和三氟乙酸等的盐。Berg等人，＂Pharmaceutical Salts＂，J.Pharm.Sci.，1977，66：1-19对上述药学上可接受的盐以及其它一般药学上可接受的盐的制备进行了更为全面地描述，在此引入作为参考。本发明化合物的药学上可接受的盐，可以利用常规化学方法由含有碱性或者酸性部分的本发明化合物进行合成。通常，碱性化合物的盐或者通过离子交换色谱法，或者通过在适当溶剂或者多种溶剂组合中，使游离碱与化学计算量或者与过量的形成期望盐的无机酸或有机酸反应制备得到。类似地，酸性化合物的盐通过酸性化合物与适宜的无机或者有机碱反应形成。
本发明化合物为组织蛋白酶抑制剂，并且因此具有治疗或者预防哺乳动物组织蛋白酶依赖性疾病或者状态的用途，哺乳动物优选是人类。
特别地，本发明化合物为组织蛋白酶K抑制剂，并且因此具有治疗或者预防哺乳动物的组织蛋白酶K依赖性疾病或者状态的用途，哺乳动物优选是人类。
“组织蛋白酶依赖性疾病或者状态”是指依赖一种或多种组织蛋白酶活性的病理学状态。“组织蛋白酶K依赖性疾病或者状态”是指依赖一种或多种组织蛋白酶K活性的病理学状态。与组织蛋白酶K活性相关的疾病包括骨质疏松症、肾上腺糖皮质激素诱发的骨质疏松症、佩吉特氏病、骨代谢异常升高、牙周病、牙齿损失、骨折、类风湿性关节炎、骨关节炎、假体周围骨自溶症、不完全的成骨作用、肥胖症、动脉粥样硬化症、慢性阻塞性肺病、青少年发作糖尿病、多发性脑脊髓硬化症、慢性天疱疮、甲状腺机能亢进、重症肌无力、全身性红斑狼疮、类风湿性关节炎和桥本氏甲状腺炎、哮喘、外源性免疫反应、寄生虫感染、癌症、转移性骨疾病、恶性高钙血症或者多发性骨髓瘤。在用本发明要求的化合物治疗这些状态中，需要的治疗剂量将根据具体疾病而不同，并且熟练的技术人员可以很容易地对其进行确定。虽然治疗和预防都可以在本发明范围得到预期，但是这些状态的治疗是优选的用途。
本发明的一个实施方案是一种在需要抑制组织蛋白酶活性的哺乳动物中抑制组织蛋白酶活性的方法，包括向哺乳动物给药治疗有效量的如上所述任何化合物或者任何药物组合物。
实施方案的一类是方法，其中组织蛋白酶活性是组织蛋白酶K活性。
本发明的另一个实施方案是一种在需要治疗或预防组织蛋白酶依赖状态的哺乳动物中治疗或者预防组织蛋白酶依赖状态的方法，包括向哺乳动物给药治疗有效量的如上所述任何化合物或者任何药物组合物。
实施方案的一类是方法，其中组织蛋白酶活性是组织蛋白酶K活性。
本发明的另一实施方案是一种在需要抑制骨损失的哺乳动物中抑制骨损失的方法，包括向哺乳动物给药治疗有效量的如上所述任何化合物或者任何药物组合物。本发明的另一实施方案是一种在需要降低骨损失的哺乳动物中降低骨损失的方法，包括向哺乳动物给药治疗有效量的如上所述任何化合物或者任何药物组合物。组织蛋白酶K抑制剂在骨吸收抑制中的应用在文献中是已知的。参阅Stroup G.B.等人，“Potent and selective inhibition of human cathepsin Kleadsto inhibition of bone resorption in vivo in a nonhumanprimate”，J.Bone Miner.Res.，16：1739-1746，2001；和Votta，B.J.等人，“Peptide aldehyde inhibitors of cathepsin Kinhibit boneresorption bone resorption both in vivo and in vitro”，J.BoneMiner.Res.，12：1396-1406，1997。
本发明的另一个实施方案是一种在需要治疗或预防骨质疏松症的哺乳动物中治疗或者预防骨质疏松症的方法，包括向哺乳动物给药治疗有效量的任何如上所述化合物或者任何上述药物组合物。组织蛋白酶K抑制剂在骨质疏松症治疗或者预防中的应用在文献中是已知的。参阅Saftig P.等人，“Impaired osteoclast bone resorption leadsto osteoporosis in cathepsin K-deficient mice”，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA，95：13453-13458，1998。
本发明的另一个实施方案是一种在需要治疗或预防风湿性关节炎状态的哺乳动物中治疗或者预防风湿性关节炎状态的方法，包括向哺乳动物给药治疗有效量的如上所述任何化合物或者任何药物组合物。在文献中，已知关节周围骨的渐进破坏是风湿性关节炎(RA)病人中关节机能障碍和关节无力的主要原因。参阅Goldring SR，“Pathogenesis of bone erosions in rheumatoid arthritis”，Curr.Opin.Rheumatol.，14：406-10，2002。对来自具有RA病人的关节组织进行分析，已经证明组织蛋白酶K阳性破骨细胞是介导与风湿性滑液损害有关的病灶骨吸收的细胞类型。参阅Hou，W-S等人，“Comparision of Cathepsin K and S expression within theRheumatoid and Osteoarthritic Synovium”，ArthritisRheumatism，46：663-74，2002。此外，全身性骨损失是导致与严重RA有关的病状的主要原因。在具有慢性RA的病人中，殿部和脊柱骨折频率基本上得到增加。参阅Gould等人，“Osteoclastic activationis the principal mechanism leading to secondary osteoporosisin rheumatoid arthritis”，J.Rheumatol.，25：1282-9，1998。组织蛋白酶K抑制剂在关节下骨吸收和全身性骨损失的治疗或者预防中的应用，表示一种在风湿性关节炎加重中药理学介入的合理方法。
本发明的另一个实施方案是一种在需要治疗或预防骨关节炎的哺乳动物中治疗或者预防骨关节炎进行的方法，包括向哺乳动物给药治疗有效量的如上所述任何化合物或者任何药物组合物。在文献中，已知骨关节炎(OA)在关节中带有明确的变化，包括关节软骨表面侵蚀、关节周围软骨内骨化/骨赘增生和软骨下骨硬化和孢囊形成，参阅Oettmeier，R & Abendroth，K，“Osteoarthritis and bone:osteologictypes of osteoarthritis of the hip”，Skeletal Radiol.，18：165-74，1989。最近，已经提出了软骨下骨硬化可能促使OA开始和进行。当关节响应重复的脉冲式负载时，变硬的软骨下骨只能较小地减弱和散布通过关节的压力，使得该压力在关节软骨表面的机械应力更大。这反过来也促进了软骨磨损和纤化。参阅Radin EL和RoseRM，“Role of subchondral bone in the initiation and progressionof cartilage damage”，Clin.Orthop.，213：34-40，1986。通过用抗吸收试剂(例如组织蛋白酶K抑制剂)抑制过多的关节下骨吸收，将导致软骨下骨代谢受到抑制，由此可能会对进行性OA产生有利的影响。除上述假设之外，最近，在采自OA病人滑膜和关节软骨样品的滑液成纤维细胞、巨噬细胞相似细胞和软骨细胞中确定了组织蛋白酶K的蛋白质表达。参阅Hou，W-S等人，“Comparison of Cathepsin Kand S expression within the Rheumatoid and OsteoarthriticSynovium”，Arthritis Rheumatism，46：663-74，2002；和Dodd RA等人，“Expression of Cathepsin K messenger RNA in giant cellsand their precursors in human osteoarthritic synovialtissues”，Arthritis Rheumatism，42：1588-93，1999；和Konttinen等人，“Acidic cysteine endoproteinase cathepsin K in thedegeneration of the superficial articular hyaline cartilagein osteoarthritis”，Arthritis Rheumatism，46：953-60，2002。由此，这些新近的研究涉及组织蛋白酶K在伴有骨关节炎进行的关节软骨II型胶原破坏中的作用。由此，如本发明所述的组织蛋白酶K抑制剂在骨关节炎治疗或者预防中的应用包括两种不同的机制，一种机制是抑制破骨细胞驱动的软骨下骨代谢，和第二种机制是直接抑制具有OA的病人的滑膜和软骨中的II型胶原变性。
本发明的另一实施方案是一种在需要治疗癌症的哺乳动物中治疗癌症的方法，包括向哺乳动物给药治疗有效量的如上所述任何化合物或者任何药物组合物。在文献中已知组织蛋白酶K在人类乳癌中进行表达。参阅Littlewood-Evans AJ等人，“The osteoclast-associatedprotease cathepsin K is expressed in human breast carcinoma”，Cancer Res，57(23)：5386-90，1997年12月1日。
本发明的一个具体实例是任何如上所述化合物在制备药物中的用途，药物用于在需要其的哺乳动物中治疗和/或预防骨质疏松症。本发明的另一个具体实例是任何如上所述化合物在制备药物中的用途，药物用于治疗和/或预防骨损失、骨吸收、骨折、转移性骨疾病和/或与组织蛋白酶功能相关的病症。
本发明化合物可以向哺乳动物，优选人类给药，单独给药或者优选与药学上可接受的载体或者稀释剂联合给药，在药物组合物中，根据标准药物实践，任选与已知的辅剂联合给药，辅剂例如是明矾。化合物可以口服给药或者胃肠外给药，包括静脉内的、肌内的、腹膜内的、皮下的、直肠的和局部的给药途径。
在用于口服使用的片剂情况下，通常使用的载体包括乳糖和玉米淀粉，并且通常加入润滑剂，例如硬脂酸镁。对于胶囊形式的口服给药，有益的稀释剂包括乳糖和干玉米淀粉。为了口服使用根据本发明的治疗化合物，选择的化合物可以通过以下方式给药，例如以片剂或者胶囊形式，或者形成水溶液或者悬浮液。对于以片剂或者胶囊形式口服给药，药物活性成分可以与口服的、无毒的、药学上可接受的惰性载体联合使用，惰性载体例如是乳糖、淀粉、蔗糖、葡萄糖、甲基纤维素、硬脂酸镁、磷酸氢钙、硫酸钙、甘露醇和山梨糖醇等；对于以液态形式口服给药，口服的药物组分可以与任何口服的、无毒的、药学上可接受的惰性载体联合使用，惰性载体例如乙醇、甘油和水等。此外，当期望或者需要时，混合物中也可以加入合适的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂。适当的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖类(例如葡萄糖或者β-乳糖)、玉米甜味剂、天然树胶和合成树胶(例如阿拉伯胶、西黄蓍胶或者海藻酸钠)、羧甲基纤维素、聚乙二醇和石蜡等。用于这些剂型的润滑剂包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠和氯化钠等。崩解剂包括但不限于淀粉、甲基纤维素、琼脂、皂土和黄原胶等。当要求水悬浮液口服使用时，将活性成分与乳化剂和悬浮剂组合使用。如果需要，可以加入某些甜味剂和/或增香剂。对于肌内、腹膜内、皮下和静脉内使用，通常制备活性成分的无菌液，以及应当对溶液的pH值进行适当的调节和缓冲。对于静脉内使用，应该对溶质的总浓度进行控制，以便使得制剂等渗。
本发明化合物还可以以脂质体输送系统的形式进行给药，脂质体输送系统例如是小单层囊、大单层囊和多层囊。脂质体可以由多种磷脂，例如胆固醇、十八胺或者卵磷脂形成。
本发明化合物也可以通过利用单克隆抗体作为个体载体而得到递送，其中化合物分子被偶联到单克隆抗体上。本发明化合物也可以与作为目标药物载体的可溶性聚合物偶联。上述聚合物可以包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、多羟基丙基甲基丙烯酰胺-苯酚、多羟基-乙基天冬酰胺-苯酚或者棕榈酰基取代的聚氧化乙烯-聚赖氨酸。此外，本发明化合物可以被偶联到一类在达到药物的控释中有用的可生物降解的聚合物上，可生物降解的聚合物例如是聚丙醇酸、聚乙醇酸、聚丙醇酸和聚乙醇酸的共聚物、聚ε-己内酯、多羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯和交联的或者两亲性的水凝胶嵌段共聚物。
本发明化合物也可用于与已知的用于治疗或者预防以下疾病的试剂联用，所述疾病包括：骨质疏松症、肾上腺糖皮质激素诱发的骨质疏松症、佩吉特氏病、骨代谢异常升高、牙周病、牙齿损害、骨折、风湿性关节炎、骨关节炎、假体周围骨自溶症、骨脆症病、肥胖症、动脉粥样硬化症、慢性阻塞性肺病、青少年发作糖尿病、多发性脑脊髓硬化症、慢性天疱疮、甲状腺机能亢进、重症肌无力、全身性红斑狼疮、类风湿性关节炎和桥本氏甲状腺炎、哮喘、外源性免疫反应、寄生虫感染、癌症、转移性骨疾病、恶性高钙血症或者多发性骨髓瘤。本发明公开的化合物与其它对治疗或者预防骨质疏松症或者其它骨病症有用的试剂的组合，同样包括在本发明范围内。本领域普通技术人员能够辨别哪些试剂组合将会有用，这基于药物的特性以及所涉及的疾病。上述试剂包括以下试剂：有机双膦酸酯、雌激素受体调节剂、雄激素受体调节剂、破骨细胞质子三磷酸腺苷酶抑制剂、HMG-CoA还原酶抑制剂、整联蛋白受体拮抗剂、成骨细胞合成代谢剂(例如PTH)和药学上可接受的盐及其混合物。优选的组合为本发明化合物和有机双膦酸酯。另一优选的组合为本发明化合物和雌激素受体调节剂。另一优选的组合为本发明化合物和雄激素受体调节剂。另一优选的组合为本发明化合物和成骨细胞合成代谢剂。
“有机双膦酸酯”包括但不限于下面化学式的化合物：
Figure A20048002452000241
其中n是0～7的整数，并且其中A和X独立地选自：H、OH、卤素、NH2、SH、苯基、C1-C30烷基、C3-C30支链烷基或者环烷基、含有两个或三个N的双环结构、C1-C30取代烷基、C1-C10烷基取代的NH2、C3-C10支链烷基或者环烷基取代的NH2、C1-C10二烷基取代的NH2、C1-C10烷氧基、C1-C10烷基取代的硫基、噻吩基、卤代苯硫基、C1-C10烷基取代的苯基、吡啶基、呋喃基、吡咯烷基、咪唑基、咪唑并吡啶基和苄基，使得当n是0时，A和X都不选自H或者OH；或者A和X与碳原子或者跟它们相连的原子合起来形成C3-C10环。
在上述化学式中，烷基可以是直链、支链或者环状的烷基，以选择充足的原子用于化学式为条件。C1-C30取代烷基可以包含多种取代基，取代基的非限制性实例包含以下取代基，选自：苯基、吡啶基、呋喃基、吡咯烷基、咪唑酮基、NH2、C1-C10烷基取代的或者二烷基取代的NH2、OH、SH和C1-C10烷氧基。
对于A和/或X取代基，上述化学式也包含复杂的碳环结构、芳香结构和杂原子结构，这些结构的非限制性实例包括萘基、喹啉基、异喹啉基、金刚烷基和氯代苯硫基。
双膦酸酯的药学上可接受的盐和双膦酸酯衍生物在此也是有效的。这些盐的非限制性实例包含以下盐，选自：碱金属盐、碱土金属盐(alkaline metal)、铵盐和单-、二-、三-或者四-C1-C30烷基取代的铵盐。优选的盐选自钠盐、钾盐、钙盐、镁盐和铵盐。更优选钠盐。衍生物的非限制性实例包含选自：酯类、水合物和酰胺的衍生物。
应当注意，在此涉及本发明治疗剂中使用的术语“双膦酸酯”和“双膦酸酯类”的含义还包括双膦酸酯、双膦酸和二膦酸，以及这些物质的盐和衍生物。除非明确说明，在涉及双膦酸酯中的具体命名法的使用并不意味着对本发明范围的限制。因为熟练的普通技术人员当前应用混合命名法，所以除非在本文其它处另有说明，否则涉及本发明双膦酸酯化合物的特定重量或百分比是以酸的活性重量为基础计算的。例如，短语“对于以阿仑膦酸活性重量为基础的约5mg骨吸收抑制双膦酸酯，选自阿仑膦酸酯、其药学上可接受的盐及其混合物”是指选择的双膦酸酯化合物的量以5mg阿仑膦酸为基准进行计算的。
在此有效的双膦酸酯的非限制性实例包括以下：Alendronate(又名阿仑膦酸)、阿仑膦酸钠、阿仑膦酸钠三水合物或者4-氨基-1-羟基亚丁基-1，1-二膦酸单钠三水合物。
Alendronate描述于美国专利4,922,007中，Kieczykowski等人，公开于1999年5月1日；美国专利5,019,651，Kieczykowski等人，公开于1991年5月28日；美国专利5,510,517，Dauer等人，公开于1996年4月23日；美国专利5,648,491，Dauer等人，公开于1997年7月15日，它们的全文在此引入作为参考。
环庚基氨基亚甲基-1，1-二膦酸，YM 175，Yamanouchi(伊卡膦酸，以前称为cimadronate)，如Isomura等人的公开于1990年11月13日的美国专利4,970,335所述，其全文在此引入作为参考。
1，1-二氯亚甲基-1，1-二磷酸(氯膦酸)和二钠盐(氯膦酸盐，Procter和Gamble)，描述于比利时专利672,205(1966)和J.Org.Chem，32，4111(1967)中，在此它们两个的全文都引入作为参考。
1-羟基-3-(1-吡咯烷基)-亚丙基-1，1-二膦酸(EB-1053)。
1-羟基乙烷-1，1-二磷酸(依替膦酸)。
1-羟基-3-(N-甲基-N-戊基氨基)亚丙基-1，1-二膦酸，又名BM-210955，Boehringer-Mannheim(伊班膦酸)，描述于1990年5月22日公开的美国专利编号4,927,814中，其全文在此引入作为参考。
1-羟基-2-咪唑并(1，2-a)吡啶-3-基乙叉(米诺膦酸)。
6-氨基-1-羟基亚己基-1，1-二膦酸(奈立膦酸)。
3-(二甲基氨基)-1-羟基亚丙基-1，1-二膦酸(奥帕膦酸)。
3-氨基-1-羟基亚丙基-1，1-二膦酸(帕米膦酸)。
[[2-(2-吡啶基)亚乙基]-1，1-二膦酸(吡膦酸)，描述于美国专利编号4,761,406中，其全文在此引入作为参考。
1-羟基-2-(3-吡啶基)-亚乙基-1，1-二膦酸(利塞膦酸)。
(4-氯苯基)硫甲烷-1，1-二膦酸(替鲁膦酸)，如美国专利4,876,248中所述，其全文在此引入作为参考。
1-羟基-2-(1H-咪唑-1-基)-亚乙基-1，1-二膦酸(唑来膦酸)。
双膦酸盐的非限制性实例包含阿仑膦酸、cimadronate、氯膦酸、依替膦酸、伊班膦酸、伊卡膦酸、米诺膦酸、奈立膦酸、奥帕膦酸、帕米膦酸、吡膦酸、利塞膦酸、替鲁膦酸和唑来膦酸，及其药学上可接受的盐或酯类。尤其优选的双膦酸盐是阿仑膦酸盐，特别是阿仑膦酸的钠、钾、钙、镁或者铵盐。优选的双膦酸酯的具体示例是阿仑膦酸钠盐，特别是水合阿仑膦酸钠盐。盐可以与整摩尔数的水或者非整摩尔数的水进行水合。优选双膦酸酯的另一个具体示例是水合阿仑膦酸钠盐，特别是当水合盐是阿仑膦酸单钠三水合物时。
应当认可，可以使用两种或更多双膦酸酯活性物质的混合物。
有机双膦酸酯的精确剂量将随以下条件而变化，包括剂量给药方案、选择的具体双膦酸酯、哺乳动物或者人类的年龄、性别和状态、要进行治疗的病症的性质和严重程度以及其它相关的医疗和物理因素。因此，精确的药学有效量不能预先规定，以及可以由护理者或者临床医生即时确定。适宜的量可以根据动物模型和人类临床研究，通过常规试验得到确定。通常，对双膦酸酯的适宜量进行选择以取得骨吸收抑制作用，即给药骨吸收抑制量的双膦酸酯。对于人类，双膦酸酯的有效口服剂量一般为约1.5～约6000μg/kg体重，和优选约10～约2000μg/kg体重。对于阿仑膦酸单钠三水合物，一般人类给药剂量通常为约2毫克/天～约40毫克/天，优选为约5毫克/天～约40毫克/天。对于阿仑膦酸单钠三水合物，美国目前批准的用于预防骨质疏松症的剂量是5毫克/天，用于治疗骨质疏松症的剂量是10毫克/天，用于治疗阴囊炎性癌的剂量是40毫克/天。
在另一种给药方案中，双膦酸酯可以每隔一段时间给药而不是按天给药，例如每周一次给药、每周两次给药、每两周给药和每月两次给药。在每周一次的给药方案中，阿仑膦酸单钠三水合物将按35毫克/周或者70毫克/周的剂量给药。
“选择性雌激素受体调节剂”是指不考虑机制，可以干扰或者抑制雌激素结合至受体的化合物。雌激素受体调节剂的实例包含但不限于雌激素、孕激素、雌二醇、
Figure A20048002452000271
洛昔芬、雷洛昔芬、拉索昔芬、TSE-424、他莫昔芬、艾多昔芬、LY353381、LY117081、托瑞米芬、氟维司群、4-[7-(2，2-二甲基-1-氧代丙氧基-4-甲基-2-[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]-2H-1-苯并吡喃-3-基]-苯基-2，2-二甲基丙酸酯、4，4’-二羟基二苯甲酮-2，4-二硝基苯基-腙和SH646。
“雌激素受体β调节剂”是一种选择性地激动或者反激动雌激素受体β的化合物(ER□激动 ER□经 ER□介导作用促进色氨酸羟化酶基因的转录(TPH，血清素合成中的关键酶))。雌激素受体β激动剂的实例在以下PCT国际公开中可以得到，公开于2001年11月8日的WO01/82923，和公开于2002年5月20日的WO 02/41835，它们的全文都在此引入作为参考。
“雄激素受体调节剂”是指不考虑机制，干扰或者抑制雄激素结合至受体的化合物。雄激素受体调节剂的实例包含非那雄胺和其它5α-还原酶抑制剂、尼鲁米特、氟他米特、比卡鲁胺、利阿唑和乙酸阿比特龙。
“破骨细胞质子三磷酸腺苷酶抑制剂”是指质子三磷酸腺苷酶的抑制剂，发现于破骨细胞的顶膜上，并且据报道，其在骨吸收过程中起着显著的作用。此质子泵表示骨吸收抑制剂设计的诱人目标，这些抑制剂可能对骨质疏松症和相关代谢疾病的治疗和预防有效。参阅C.Farina等人，“Selective inhibitors of the osteoclast vacuolarproton ATPase as novel bone antiresorptive agents”，DDT，4：163-172(1999)，其全文在此引入作为参考。
“HMG-CoA还原酶抑制剂”是指3-羟基-3-甲基戊二酰-CoA还原酶。对HMG-CoA还原酶具有抑制活性的化合物可以通过使用现有技术中众所周知的验定法容易地得到鉴定。例如，参阅美国专利4,231,938第6栏和WO 84/02131第30～33页中描述或者列举的验定法。当在此使用时，术语“HMG-CoA还原酶抑制剂”和“HMG-CoA还原酶的抑制剂”具有相同的含义。
可以应用的HMG-CoA还原酶抑制剂的实例包括但不限于洛伐他汀(MEVACOR，参阅美国专利号4,231,938、4,294,926和4,319,039)、辛伐他汀(ZOCOR，参阅美国专利号4,444,784、4820,850和4,916,239)、普伐他汀(PRAVACHOL，参阅美国专利号4,346,227、4,537,859、4,410,629、5,030,447和5,180,589)、氟伐他汀(LESCOL，参阅美国专利号5,354,772、4,911,165、4,929,437、5,189,164、5,118,853、5,290,946和5,356,896)、阿托伐他汀(LIP1TOR，参阅美国专利号5,273,995、4,681,893、5,489,691和5,342,952)和西立伐他汀(亦称rivastatin和BAYCHOL，参阅美国专利号5,177,080)。这些化合物的结构式和另外可以用于本发明方法中的HMG-CoA还原酶抑制剂如下所述，M.Yalpani，“Cholesterol Lowering Drugs”，85～89页的第87页，1996年2月5日，和美国专利号4,782,084以及4,885,314。在此使用的术语HMG-CoA还原酶抑制剂包含所有药学上可接受的内酯和开放酸形式(即其中内酯环开放形成游离酸)，以及具有HMG-CoA还原酶抑制活性的化合物的盐和酯形式，和因此上述盐、酯、开放酸和内酯形式的用途都包括在本发明范围内。内酯部分及其相应的开放酸形式的实例如下结构I和II所示。
Figure A20048002452000281
     内酯                      开环酸
       I                         II
在可以存在开环酸形式的HMG-CoA还原酶抑制剂中，盐形式和酯形式可以优选由开环酸形成，并且所有这些形式都包含在在此使用的术语“HMG-CoA还原酶抑制剂”的含义内。优选HMG-CoA还原酶抑制剂选自洛伐他汀和辛伐他汀，和最优选辛伐他汀。在此，关于HMG-CoA还原酶抑制剂的术语“药学上可接受的盐”将意指用于本发明化合物的无毒盐，它们通常通过游离酸与适当的有机或者无机碱进行反应制备，尤其是由阳离子形成的那些盐，阳离子例如钠、钾、铝、钙、锂、镁、锌和四甲铵，以及由胺形成的盐，胺例如氨、乙二胺、N-甲基葡萄糖胺、赖氨酸、精氨酸、鸟氨酸、胆碱、N，N’-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、二乙醇胺、普鲁卡因、N-苄基苯乙胺、1-对氯苄基-2-四氢吡咯-1’-基-甲基苯并咪唑、二乙胺、哌嗪和三羟甲基氨基甲烷。HMG-CoA还原酶抑制剂的盐形式的更进一步实例可以包含但不限于，醋酸盐、苯磺酸盐苯甲酸盐、碳酸氢盐、硫酸氢盐、洒石酸氢盐、硼酸盐、溴化物、乙二胺四乙酸钙盐、右旋樟脑磺酸、碳酸盐、氯化物、棒酸盐(clavulanate)、柠檬酸盐、二盐酸化物、乙二胺四乙酸盐、乙二磺酸盐、依托酸盐、乙磺酸盐、延胡索酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、谷氨酸盐、乙醇酰基阿散酸盐、己基间苯二酸盐(hexylresorcinate)、哈胺(hydrabamine)、氢溴酸盐、盐酸盐、羟基萘甲酸盐、碘化物、异硫代硫酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐(lactobionate)、月桂酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、硫酸二甲酯、粘酸盐(mucate)、萘磺酸盐、硝酸盐、油酸盐、乙二酸盐、扑酸盐(pamaote)、棕榈酸盐、泛酸盐(panthothenate)、磷酸盐/磷酸氢盐、多聚半乳糖醛酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、碱式醋酸盐、琥珀酸盐、丹宁酸盐、酒石酸盐、8-氯茶碱盐、甲苯磺酸盐、三乙基碘化物和戊酸盐。
所述HMG-CoA还原酶抑制剂化合物的酯类衍生物可以作为前药，当将其吸收到恒温动物血液中去时，可以以一定方式裂开以释放药物形式和使药物提供改善的治疗效能。
如上所使用，“整联蛋白受体拮抗剂”是指选择性拮抗、抑制或者抵消生理配体结合至αvβ3整联蛋白的化合物，是指选择性拮抗、抑制或者抵消生理配体结合至αvβ5整联蛋白的化合物，是指选择性拮抗、抑制或者抵消生理配体结合至αvβ3整联蛋白和αvβ5整联蛋白的化合物，和是指拮抗、抑制或者抵消在毛细血管内皮细胞上表达的特定整联蛋白的化合物。该术语也涉及αvβ6、αvβ8、α1β1、α2β1、α5β1、α6β1和α6β1整联蛋白拮抗剂。术语还涉及αvβ3、αvβ5、αvβ6、αvβ8、α1β1、α2β1α5β1、α6β1和α6β4整联蛋白的任意组合的拮抗剂。H.N.Lode等人，PNAS USA，96：1591-1596，1999年，在自发肿瘤转移的根除中，已经观察到血管原性αv整联蛋白拮抗剂和肿瘤特异性抗体细胞因子(白细胞介素-2)融合蛋白之间的协同效应。他们的结果表明这种联用对于癌症和转移性肿瘤生长的治疗有效。αvβ3整联蛋白受体拮抗剂通过与所有现有药物不同的新机理抑制骨吸收。整联蛋白是介导细胞-细胞和细胞-底物相互作用的异源二聚的横跨膜粘着受体。α和β整联蛋白亚单位非共价相互作用，和以二价阳离子依赖性方式结合细胞外底物配体。破骨细胞上最大量的整联蛋白是αvβ3(＞107/破骨细胞)，它们看来似乎在细胞骨架组织中起着限速的作用，细胞骨架组织对细胞迁移和极化是重要的。αvβ3拮抗作用选自骨吸收抑制作用、再狭窄抑制作用、黄斑变性抑制作用、关节炎抑制作用和癌症以及转移性肿瘤抑制作用。
“成骨细胞合成代谢剂”是指构造骨的制剂，例如甲状旁腺激素(PTH)。已经表明在动物和人类中间歇给药甲状旁腺激素(PTH)或者它的氨基末端片段及其类似物，可以预防、阻止、部分逆转骨损失和刺激骨生成。详述涉及D.W.Dempster等人，“Anabolicactionsof parathyroid hormone on bone”，Endocr Rev，14：690-709，1993。研究已经表明甲状旁腺激素在刺激骨生成并且从而提高骨质量和强度中的临床益处。结果由RM Neer等人报道，New Eng J Med，344：1434-1441，2001。
此外，甲状旁腺激素相关蛋白质片段或者其类似物，例如PTHrP-(1-36)已经表明具有有效的抗钙尿作用[参阅M.A.Syed等人，“Parathyroid hormone-related protein-(1-36)stimulatesrenal tubular calcium reabsorption in normal human volunteers：implications for the pathogenesis of humoral hypercalcemia ofmalignancy”，JCEM，86：1525-1531(2001)]，并且也可以作为治疗骨质疏松症的合成代谢剂。
如果配制成固定剂量，这种组合产品使用如下所述剂量范围内的本发明化合物和其它在其批准剂量范围内的药学活性剂。当组合制剂不适宜时，本发明化合物可以另外与已知的药学上可接受的试剂顺序使用。
与本发明化合物有关的术语“给药”及其变形(例如，“用药”化合物)，是指将化合物或者化合物的前体药物引入到需要治疗的动物体系中。当本发明化合物或者其前体药物与于一种或多种其它活性剂(例如细胞毒素剂等)组合提供时，“给药”及其变形都理解为包含化合物或者其前体药物和其它试剂的并流引入和顺序引入。在本发明范围内包括本发明化合物的前体药物。通常，前体药物是本发明化合物的功能性衍生物，在体内易于转换成需要的化合物。因此，在本发明治疗方法中，术语“给药”应该包含多种所述状态的治疗，使用明确公开的化合物或者使用可以不必明确公开的化合物，但是在给药患者后，该化合物在体内转化成指定的化合物。适当前体药物衍生物的选择和制备的常规步骤描述于，例如，“Design of Prodrugs”，主编H.Bundgaard，Elsevier，1985，其全文在此引入作为参考。这些化合物的代谢产物包含当将本发明化合物引入生物环境时所产生的活性中心。
在本文中使用的术语“组合物”包含包括规定量的指定成分的产品，以及任何直接或者间接地由规定量的指定成分组合得到的产品。
本文中使用的术语“治疗有效量”是指活性物质或者药物制剂的量，该量能够在组织、系统、动物或者人类中引起生物反应或者药物反应，该反应是研究人员、兽医、医疗医生或者其它临床医生所寻求的反应。
本文中使用的术语疾病的“治疗”包括：预防疾病，即造成疾病的临床症状不在哺乳动物中发展，哺乳动物可能暴露于疾病或者易感染疾病，但是又没有经历或者显示疾病症状；抑制疾病，即阻止或者降低疾病或者其临床症状的发展；或者减轻疾病，即导致疾病或者其临床症状消退。
在本文中使用的术语“骨吸收”是指一个过程，经该过程破骨细胞降解骨。
本发明还包含对骨质疏松症或者其它骨骼病症的治疗有用的药物组合物，包括给药治疗有效量的本发明化合物，含有或者不含有药学上可接受的载体或者稀释剂。本发明适宜的组合物包含包括本发明化合物和药理学上可接受的载体的水溶液，例如盐水，其pH值水平例如为7.4。溶液可以通过局部弹丸注射引入到患者血液中。
当将根据本发明的化合物给药进入受试验的人时，每日剂量通常由开药医师确定，同时剂量通常依据个体患者的年龄、体重和反应以及患者症状的严重程度而不同。
在一个示范性应用中，将适宜量的化合物给药到对依赖于组织蛋白酶的病症进行治疗的哺乳动物。本发明的口服剂量，当用来产生所需要的效果时，为约0.01毫克/千克体重/天(mg/kg/天)～约100mg/kg/day，优选0.01～10mg/kg/day，和最优选0.1～5.0mg/kg/day。对于口服给药，组合物优选以片剂形式提供，其中含有0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0、15.0、25.0、50.0、100和500毫克活性成分，以根据症状调整给药至进行治疗的患者的剂量。药剂一般含有约0.01mg～约500mg活性成分，优选约1mg～约100mg活性成分。对于静脉内给药，在恒速输液期间，最优选的剂量为约0.1～约10mg/kg/min。有利地，本发明化合物可以以单一日剂量给药，或者每日总剂量可以分为每日两次、三次或者四次剂量给药。此外，对于本发明化合物，优选可以以鼻内形式给药，经局部使用合适的鼻内载体，或者经透过皮肤路线，利用那些本领域普通技术人员熟知的皮肤表层贴片形式。以透过皮肤输送系统形式给药，剂量给药当然将持续整个给药方案，而不是间歇剂量给药。
本发明化合物可以与其它用于治疗组织蛋白酶介导的状态的试剂组合使用。上述组合的单个组分可以在治疗期间分成不同次数给药，或者以分开或者单一组合的形式并行给药。因此本发明应理解为包含所有上述联合治疗或者轮流治疗的方案，并且术语“给药”应当相应地进行理解。应当理解，本发明化合物与其它可用于治疗组织蛋白酶介导的病症的试剂的组合的范围，原则上包含任何与可用于治疗与雌激素功能相关病症的药物组合物的组合。
因此，本发明范围包含本发明要求的化合物与第二试剂组合的用途，第二试剂选自：有机双膦酸酯、雌激素受体调节剂、雄激素受体调节剂、破骨细胞质子三磷酸腺苷酶抑制剂、HMG-CoA还原酶抑制剂、整联蛋白受体拮抗剂、成骨细胞合成代谢剂(例如PTH)和药学上可接受的盐及其混合物。
根据包含在本文中的教导，本发明的这些和其它方面将是显而易见的。
补充以上所述，对本发明一个或多个实施方案的详细说明进行阐述。虽然任何与本文中所述相似或者等效的方法和材料可以用于本发明实践或者试验中，但是优选现在所述的方法和材料。根据说明书和根据权利要求书，本发明的其它特征、目的和优点将是显而易见的。在说明书和附属的权利要求中，除非上下文清楚地指明，否则单数形式包含多个对象。除非另外定义，所有在本文中使用的技术术语和科学术语，具有与本发明所属技术领域普通技术人员通常理解相同的含义。所有在本说明书中引用的专利和出版物都引入作为参考。
上述说明书仅仅是为了说明的目的存在，并不打算将本发明限定为明确公开的形式，而是通过附加于此的权利要求进行限定。
方案
本发明化合物可以根据方案1得到制备，如下所示。由此可以将α-氨基酯加入到卤代烷酮中形成缩醛胺，缩醛胺在脱水剂存在下可以脱水形成亚胺，脱水剂例如是TiCl4、MgSO4或者异丙基三氟醋酸盐。用还原剂(例如氰基硼氢化钠或者硼氢化钠)还原亚胺形成胺。酯水解和与适当取代的氨基乙腈形成酰胺，提供本发明化合物。如果D系统上的取代基是卤素，就与适宜的硼酸发生钯催化的Suzuki偶合而提供本发明另外的化合物。另外，与适宜的胺进行铜催化或者钯催化的Buchwald偶合而提供本发明另外的化合物。另外，与适宜的胺形成酰胺，继之以钯催化羧基化作用提供本发明另外的化合物。
                        方案1
本发明化合物也可以根据方案2得到制备，如下所示。酮或者醛可以与氨基醇进行缩合产生环状的缩醛胺。用三当量的格氏试剂或者有机锂试剂进行处理将提供适当烷基化的氨基醇。用铬系统(例如琼斯氧化或者H5IO6/CrO3)氧化醇，或者通过二步氧化作用(例如NaClO后，继之以草酰氯/DMSO/Et3N)氧化醇将提供相应的羧酸。进行缩氨酸偶合和如方案1所述的Suzuki反应将提供本发明化合物。
                        方案2
Figure A20048002452000351
本发明化合物也可以根据方案3得到制备，如下所示。酮或者醛可以与氨基醇进行缩合产生无环的缩醛胺。用多倍当量的格氏试剂或者有机锂试剂进行处理将提供适当烷基化的氨基醇。此醇可以通过方案2中描述的方法转化成本发明化合物。
                    方案3
Figure A20048002452000361
本发明化合物也可以根据方案4得到制备。适当取代的醋酸盐可以用适宜的碱(包括但不限于LDA、KHMDS、NaH或者nBuLi)进行烯醇化，和用多聚甲醛处理以产生二醇。使用氟化试剂(例如DAST)可将此二醇转化为二氟化物。Curtius重排后对该酯进行水解，于是将形成胺。此胺可以取代适当取代的α-溴酯以形成α-氨基酯。α-氨基酯可以通过方案1中描述的方法转化成本发明化合物。
                    方案4
Figure A20048002452000371
本发明化合物也可以根据方案5得到制备，如下所示。醛或者半缩醛可以与氨基醇进行缩合同时恒沸除去水，将氨基醇中醇部分用适宜的保护基进行保护。用格氏试剂或者有机锂试剂处理产生的亚胺将提供适当烷基化的氨基醇。醇保护基能因此得到除去，而醇可以转化成本发明化合物，或者通过方案2中所述的方法，或者首先进行Suzuki反应，继之以用H5IO6/CrO3氧化醇和然后进行缩氨酸偶合。
                        方案5
Figure A20048002452000381
本发明化合物也可以根据方案6得到制备，如下所示。α-氨基酸的缩氨酸偶合描述于方案1、2或者5中，与α-氨基酰胺进行偶合，然后对产生的伯酰胺进行脱水(Voegel，J.J.；Benner，S.A.，Helv.Chez.Aacta，1996，79，1863)将形成本发明化合物。
                    方案6
在起初方案2、3和5中使用的一些氨基醇的合成描述于方案7～11中。例如，(2S)-2-氨基-4-氟-4-甲基戊-1-醇的合成在以下方案7中得到描述，其中R＝Me。从适宜的双保护天冬氨酸开始，使用标准的文献步骤可以将羧基还原成醇(即，酸酐形成后继之以用NaBH4还原)。2-氨基-4-甲基戌烷-1，4-二醇(R＝Me)的保护形式然后可以通过适当的Grignard反应或者有机锂化反应得到生成。最后，使用氟化剂(例如DAST)可以将羟基部分转化成期望的氟。此醇的保护或者无保护形式然后可以根据方案1、2、3和5转化成本发明化合物。
                    方案7
4-氟代亮氨酸也可以根据方案8得到合成。将4，5-脱氢亮氨酸转化成(4S)-4-(2-甲基丙-2-烯基)-1，3-唑烷-2-酮，如下方案所述。然后用氢氟化试剂(例如HF-吡啶)对此中间体进行处理，产生(4S)-4-(2-氟-2-甲基丙基)-1，3-唑烷-2-酮。然后进行碱性水解(即Ba(OH)2或者NaOH)产生(2S)-2-氨基-4-氟-4-甲基戊烷-1-醇。
                    方案8
4，4-二氟-L-正缬氨酸的合成描述于以下方案9中，其中R＝Me。从适宜的双保护丝氨酸开始，可以使用试剂(例如(PhO)3P+MeI-)进行碘化。
合成碘化物的锌化可以使用Zn-Cu对和TMSCl进行。然后合成的锌酸盐可以与烷酰氯发生钯催化偶联反应，生成酮。
最后，使用氟化剂(例如DAST)可以将酮部分转化成期望的二氟衍生物。然后，此氨基酸或者氨基醇的保护或者无保护形式可以根据方案1、2、3和5转化成本发明化合物。
                    方案9
Figure A20048002452000421
用于本发明的氨基醇还可以根据方案10得到合成。将带保护基的氨基酸用还原剂(例如NaBH4)还原，有或者没有助剂(例如LiCl)，在一种溶剂(例如EtOH)或者混合溶剂系统(例如EtOH和THF)中进行。然后根据保护基的性质，将氨基保护基用适当的方法除去。
                    方案10
Figure A20048002452000431
用于本发明的(2S，4S)-2-氨基-5，5，5-三氟-4-甲基戊-1-醇的合成描述于方案11中。N-苯甲酰基-5，5，5-三氟亮氨酸(Ojiima等人，J.Org.Chem.，1989，54，4511-4522)可以与酸的水溶液(例如6MHCl)在回流条件下进行水解。然后将氨基酸盐酸盐转化成N-乙酰基-5，5，5-三氟亮氨酸，并且氨基手性中心通过酶催化法得到拆分(Synthetic Communications，1996，26，1109-1115)。然后对分离的5，5，5-三氟-L-亮氨酸用保护基(例如氨基甲酸苄酯)进行保护，和对羧基进行酯化。然后在4-位的两个非对应异构体通过闪式柱色谱得到分离。然后将其中一种对映异构体，(2S，4S)保护的氨基酸转化成氨基醇，如方案10所示。
                        方案11
Figure A20048002452000441
其中R5是氢并且R6是芳基或者杂芳基的本发明化合物也可以根据方案12得到制备，如下所示。芳基或者杂芳基醛与用适宜保护基对其中醇部分进行了保护的氨基醇进行缩合，然后用Grignard试剂或者有机锂试剂对产生的亚胺进行处理，Grignard或者有机锂试剂为化学式卤代-(D)n-Li或者卤代-(D)n-MgX(其中D如发明概述中定义)，继之以除去氧保护基形成烷基化的氨基醇。然后将烷基化的氨基醇转化成本发明化合物，或者通过方案2中所述的方法，或者通过首先与式R7-B(OH)2的硼酸酯进行Suzuki反应，然后用适宜的氧化剂(例如H5IO6/CrO3)氧化醇而产生酸，和最后在如先前所述的缩氨酸偶合条件下，用氨基乙腈对酸进行处理。
                    方案12
本发明化合物也可以根据方案13得到制备，如下所示。在碘化钠存在下，在适宜的有机溶剂(例如二甲基甲酰胺)中，适当N-保护的氨基酸衍生物与氧杂环丁烷甲苯磺酸盐发生反应，形成相应的氧杂环丁烷酯，将氧杂环丁烷酯用乙硼烷处理形成原酸酯。除去氨基保护基而产生胺，胺与式R6CHO(其中R6是芳基或者杂芳基)的醛或者与式R6C(OH)(OR)(其中R是烷基)的半缩醛在如上所述反应条件下发生缩合，形成亚胺。用格氏试剂或者有机锂试剂在如上所述反应条件下处理亚胺而形成N-烷基化衍生物。除去原酸酯形成相应的羧酸，然后该羧酸通过与氨基乙腈在缩氨酸偶合条件下发生缩合，继之以进行如上所述Suzuki反应，转化成本发明化合物。
                    方案13
Figure A20048002452000461
本发明化合物也可以如方案14中所示的方法得到制备。含有合适R1、R2、R2、R4和R6基团的芳基卤可以与双(四甲基乙二醇化)二硼偶合产生芳基四甲基乙二醇化物。后者可以与R7-溴化物在Suzuki条件下偶合形成本发明化合物。
                    方案14
Figure A20048002452000471
本发明化合物也可以根据方案15得到制备，如下所示。在方案1、2或者5中描述的适当取代的氨基酸与α-氨基酯、醇或者酮发生缩氨酸偶合，将形成本发明化合物。在α-氨基醇的情况下，氧化产品醇将形成作为本发明化合物的酮。在α-氨基酯的情况下，水解产品酯，继之以与适宜的胺形成酰胺，将形成作为本发明化合物的酰胺。
                    方案15
Figure A20048002452000481
方案1、2、6和15中所示的酸也可以如方案16所示得到制备。适当取代的苄基溴、苄基碘或者苄基三氟甲磺酸化物(可以是手性或者外消旋的)可以与α-氨基酯在碱性条件下进行偶合。然后用碱的水溶液对其进行水解，形成酸，后者可以转化为本发明的实施例。
                    方案16
Figure A20048002452000482
以下实施例描述了所选择的本发明化合物的合成。这些实施例是本文中要求专利保护的发明的具体示例，并且不能解释为对本发明范围的限制。表1描述了实施例，当与对于实施方案为活性的组织蛋白酶的活性部位结合时，是怎样满足如本文中所述的距离标准的。
                    实施例1
N1-(氰甲基)-N2-(2，2，2-三氟-1-苯基乙基)-L-亮氨酸酰胺的合成
Figure A20048002452000491
向L-亮氨酸甲酯盐酸盐(975mg，5.37mmol)的二氯甲烷(30mL)溶液中，加入2，2，2-三氟苯乙酮(0.75mL，5.34mmol)和二异丙基乙胺(3.5mL，20mmol)。滴加加入溶于0.45mL二氯甲烷溶液的TiCl4(0.55mL，5.0mmol)，和搅拌混合物过夜。然后另外加入TiCl4(O.4mL，3.6mmol)，并且搅拌混合物3h。加入NaCNBH3(1050mg，16.7mmol)的甲醇(20mL)溶液，并且搅拌混合物2h。倒入1N NaOH中以及用乙酸乙酯(2×)萃取。有机相用1N NaOH和盐水洗涤，然后用MgSO4干燥并进行蒸发。经ISCO柱色谱(30％～90％的乙酸乙酯/己烷梯度)纯化，形成甲基N-(2，2，2-三氟-1-苯乙基)-L-白酸酯。
向室温下的甲基N-(2，2，2-三氟-1-苯乙基)-L-白酸酯(150mg，0.50mmol)的2∶1THF/MeOH溶液中加入1M LiOH。搅拌混合物整夜并进行浓缩。将残余物在乙酸乙酯和pH值3.5的磷酸盐缓冲液之间进行分配。用盐水洗涤有机相，用MgSO4干燥和进行浓缩，产生N-(2，2，2-三氟-1-苯基乙基)-L-亮氨酸。
把N-(2，2，2-三氟-1-苯基乙基)-L-亮氨酸(149mg，0.50mmol)、氨基乙腈盐酸盐(102mg，1.1mmol)和PyBOP(260mg，0.50mmol)混合物溶于DMF(5mL)中。加入三乙胺(0.3mL，2.1mmol)并且搅拌混合物过夜，然后倒入pH值为3的磷酸盐缓冲液中，并用3∶1乙醚/乙酸乙酯进行萃取。将有机相用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，用MgSO4干燥并进行蒸发。经ISCO柱色谱(乙酸乙酯/己烷梯度为20％～50％)纯化，形成N1-(氰甲基)-N2-(2，2，2-三氟-1-苯基乙基)-L-亮氨酸酰胺，为1∶1的非对应异构体混合物。
MS(+APCI)：313.9[M+1]。
                        实施例2
N2-[1-(-4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]-N1-(氰甲基)-L-亮氨酸酰胺的合成
Figure A20048002452000501
使用实施例1的方法，制备得到N2～[1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]-N1-(氰甲基)-L-亮氨酸酰胺。
MS(-ESI)：403.9，405.9[M-1]-
                        实施例3
N1-(氰甲基)-N2-{[4’-((甲磺酰基))-1，1’-联苯基-4-基][4-((甲磺酰基))苯基]甲基}-L-亮氨酸酰胺的合成
Figure A20048002452000502
步骤1：N-{(4-溴苯基)[4-((甲磺酰基))苯基]亚甲基}-L-亮氨酸甲酯
将(4-溴苯基)[4-((甲磺酰基))苯基]甲酮(202mg，0.59mmol)、L-亮氨酸甲酯盐酸盐(328mg，2.0mmol)和樟脑磺酸(52mg，0.22mmol的甲苯溶液使用Dean-Stark阱回流18小时。在真空下除去溶剂，和使用EtOAc和己烷作为洗脱液，用色谱法对所得残余物进行纯化，得到标题化合物与开始物质(4-溴苯基)[4-((甲磺酰基基))苯基]甲酮比例为1∶1的混合物。
步骤2：N-{(4-溴苯基)[4-((甲磺酰基基))苯基]甲基}-L-亮氨酸甲酯
向得自步骤1的比例为1∶1的N-{(4-溴苯基)[4-((甲磺酰基))苯基]亚甲基}亮氨酸甲酯和(4-溴苯基)[4-((甲磺酰基))苯基]甲酮(185mg，～0.2mmol)混合物的乙酸/甲醇(1∶3，4mL)溶液中，使用固体加料漏斗分批加入硼氢化钠(～400mg)，在两天内(夜间停止加入)每30分钟加入一次。反应混合物在EtOAc和水之间得到分配，用Na2SO4对有机层进行干燥并进行浓缩。所得混合物通过色谱法得到纯化，使用EtOAc和己烷作为洗脱液。得到N-{(4-溴苯基)[4-((甲磺酰基))苯基]甲基}-L-亮氨酸甲酯，为无色胶，和(4-溴苯基)[4-((甲磺酰基))苯基]甲醇，为白色固体。
步骤3：N-{(4-溴苯基)[4-((甲磺酰基))苯基]甲基}-L-亮氨酸
向得自步骤2的N-{(4-溴苯基)[4-((甲磺酰基))苯基]甲基}-L-亮氨酸甲酯(81mg，0.17mmol)的THF(1mL)和MeOH(0.5mL)溶液中，加入1NLiOH(0.3mL，0.3mmol)。在室温下搅拌所得混合物18小时，然后在EtOAc和水之间进行分配，加入1N HCl(0.5mL)。将有机层用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，产生无色胶状的标题化合物。
步骤4：N2-{(4-溴苯基)[4-((甲磺酰基))苯基]甲基}-N1-(氰甲基)-L-亮氨酸酰胺
向冷却至-10℃的N-{(4-溴苯基)[4-((甲磺酰基))苯基]甲基}-L-亮氨酸(76mg，0.17mmol)(得自步骤3)、HATU(146mg，0.38mmol)和氨基乙腈盐酸盐(52mg，0.56mmol)的DMF(1.1mL)溶液中，加入N，N-二异丙基乙胺(0.13mL，0.75mmol)。使反应在室温下进行18h并且将它在EtOAc和水之间进行分配。有机层用Na2SO4干燥、过滤和在真空下进行浓缩。粗制品经色谱法使用EtOAc和己烷作为洗脱液进行纯化，产生无色胶状的标题化合物。
步骤5：N1-(氰甲基)-N2-{[4-((甲磺酰基))苯基][4’-(甲硫基)-1，1’-联苯基-4-基]甲基}-L-亮氨酸酰胺
将来自步骤4的N2-{(4-溴苯基)[4-((甲磺酰基))苯基]甲基}-N’-(氰甲基)-L-亮氨酸酰胺(72mg，0.15mmol)和4-(甲硫基)苯基硼酸(37mg，0.22mmol)的乙二醇二甲醚(1mL)和2M碳酸钠水溶液的多相混合物在真空下脱气，和用氮气冲洗。
向此混合物中加入[1，1’-双(二苯膦基)二茂铁]二氯化钯(II)的二氯甲烷配合物(19mg，0.023mmol)，继之以进行脱气和用氮气排空。将反应混合物在有效搅拌下在85℃加热16小时。将反应混合物在EtOAc和25％w/v的NH4OAc水溶液之间进行分配。有机层用Na2SO4干燥、过滤和在真空下进行浓缩。粗制品经色谱法使用EtOAc和己烷作为洗脱液进行纯化，产生无色胶状的标题化合物。
步骤6：N1-(氰甲基)-N2-{[4’-(甲硫基)-1，1’-联苯基-4-基][4-((甲磺酰基))苯基]甲基}-L-亮氨酸酰胺
向N1-(氰甲基)-N2-{[4-((甲磺酰基))苯基][4’-(甲硫基)-1，1’-联苯基-4-基]甲基}-L-亮氨酸酰胺(63mg，0.12mmol)、钨酸钠二水合物(2mg，0.006mmol)和四丁基硫酸氢铵(4mg，0.01mmol)溶液中，加入30％w/v过氧化氢水溶液(100μL，0.9mmol)，在室温下搅拌所得的混合物10分钟。反应混合物在EtOAc和水之间进行分配，加入1MNaHSO3(～3∶1)。用Na2SO4干燥有机层、过滤和在真空下进行浓缩。粗制品经色谱法使用EtOAc和己烷作为洗脱液进行纯化，产生无色胶状的标题化合物。
MS(+ESI)：568.2[M+1]+。
                        实施例4
N1-(氰甲基)-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))-1，1’-联苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺的合成
Figure A20048002452000531
步骤1：(2S)-1-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-4-甲基戊烷-2-胺
向室温下的L-亮氨醇(6.0g)二氯甲烷(100mL)溶液中加入三乙胺(11mL)、DMAP(0.1g)和叔丁基二甲基甲硅烷基氯化物(8.5g)。在室温下搅拌混合物2小时，然后加入水。将有机层进行分离，以及更进一步用二氯甲烷萃取水溶液。将合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥和在真空下除去溶剂，得到标题化合物，该残余物原样用于下一反应。1H NMR(CD3COCD3)δ3.48(m，2H)，3.32(m，1H)，2.76(m，1H)，1.78(m，1H)，1.22-1.02(m，2H)，0.88(m，15H)，0.06(s，6H)。
步骤2：(2S)-1-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-4-甲基-N-[(1E)-2，2，2三氟亚乙基]戊烷-2-胺
将来自步骤1的(2S)-1-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-4-甲基戊-2-胺(50g)和三氟乙醛甲基半缩醛(35mL)的甲苯(300mL)溶液加热回流16小时，在此期间在Dean-Stark阱中收集水。在真空下蒸发溶剂，和将残余物在SiO2上进行纯化，使用己烷和乙酸乙酯(9∶1)作为洗脱液，得到标题化合物。
1H NMR(CD3COCD3)δ7.88(m，1H)，3.76-3.45(m，3H)，1.60-1.25(m，3H)，0.88(m，15H)，0.06(s，3H)，0.04(s，3H).
步骤3：(2S)-2-{(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]氨基}-4-甲基戊烷-1-醇
将n-BuLi(2.5M己烷溶液，42mL)加入到-70℃的1，4-二溴苯(25.8g)的THF溶液中，并且搅拌混合物25分钟。然后加入(2S)-1-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-4-甲基-N-[(1E)-2，2，2-三氟亚乙基]戊烷-2-胺(31g)的THF(30mL)溶液，并且搅拌混合物1.5小时。然后在强烈搅拌下，将其缓缓倒入乙酸乙酯(500mL)、水(2L)、冰(300g)和氯化铵(100g)的混合物中。将有机层进行分离，以及更进一步用乙酸乙酯(2×500mL)对水溶液进行萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥和在真空下除去溶剂得到残余物，该残余物照此使用。将由上所得残余物溶于THF(250mL)中，并且将溶液冷却至0℃。将叔丁基氟化铵(110mL)的1MTHF溶液滴加加入，并且使混合物反应4小时。在强烈搅拌下，将其倒入乙酸乙酯(300mL)、水(2L)和氯化铵(100g)中。将有机层进行分离，以及更进一步用乙酸乙酯(2×100mL)萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥和在真空下蒸发溶剂得到残余物，将该残余物在SiO2上进行纯化，使用梯度乙酸乙酯和己烷(1∶5～1∶4)洗脱液，得到标题化合物。
1H NMR(CD3COCD3)δ7.6(2H，d)，7.45(2H，d)，4.55(1H，m)，3.65-3.7(1H，m)，3.5-3.55(1H，m)，3.25-3.35(1H，m)，2.6-2.7(1H，m)，2.25-2.35(1H，m)，1.65-1.75(1H，m)，1.3-1.4(1H，m)，1.2-1.3(1H，m)，0.75-0.9(6H，dd).
步骤4：(2S)-4-甲基-2-({(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-(甲硫基)-1，1’-联苯基-4-基]乙基}氨基)戊烷-1-醇
将氮气流通过悬浮液15分钟，该悬浮液由来自步骤3的溴化物(27.7g)、4-(甲硫基)苯基硼酸(15.7g)、2M Na2CO3(100mL)和正丙醇(500mL)组成。然后加入Pd(OAc)2和PPh3比例为1∶3的混合物(3.5g)，和将反应升温至70℃并且在氮气下搅拌8小时。将混合物冷却至室温，用乙酸乙酯稀释并倒入水(2L)和冰(500g)中。将乙酸乙酯层分离，以及更进一步用乙酸乙酯(200mL)萃取水层。将合并的乙酸乙酯萃取物用0.5N NaOH(2×200mL)、NH4Cl水溶液和盐水洗涤，并用硫酸镁干燥。除去溶剂留下残余物，在SiO2通过色谱法纯化该残余物，使用梯度乙酸乙酯和己烷(1∶4～1∶3)和再一次用梯度丙酮和甲苯(1∶10)洗脱。将残余物溶于热己烷(200mL)中，并且在搅拌下使溶液冷却至0℃。对获得的固体进行过滤和干燥，得到标题化合物。
1H NMR(CD3COCD3)δ7.7(2H，d)，7.65(2H，d)，7.6(2H，d)，7.35(2H，d)，4.5-4.6(1H，m)，3.7(1H(OH)，m)，3.5-3.6(1H，m)，3.3-3.4(1H，m)，2.7(1H，m)，2.5(3H，s)，2.3-2.4(1H(NH)，m)，1.65-1.75(1H，m)，1.2-1.4(3H，m)，0.8-0.9(6H，dd).
步骤5：(2S)-4-甲基-2-({(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))-1，1’-联苯基-4-基]乙基}氨基)戊烷-1-醇
向0℃的来自步骤4的硫化物(19g)的甲苯(400mL)溶液中加入Na2WO4·2H2O(0.16g)和Bu4NHSO4(0.81g)。然后缓缓加入30％过氧化氢(12.2mL)，在室温下搅拌混合物4.5小时。然后把化合物倾倒在冰、稀释的硫代硫酸钠水溶液和乙酸乙酯的混合物上。将有机层进行分离，以及更进一步用乙酸乙酯(2×100mL)萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥和在真空下蒸发溶剂得到残余物，将该残余物在SiO2上进行纯化，使用乙酸乙酯和己烷(1∶5～1∶4)作为洗脱液，得到产物。
1H NMR(CD3COCD3)δ8.05(2H，d)，8.0(2H，d)，7.85(2H，d)，7.7(2H，d)，4.6-4.7(1H，m)，3.75(1H，m)，3.6(1H，m)，3.35-3.45(1H，m)，3.2(3H，s)，2.7-2.8(1H，m)，2.35-2.45(1H，m)，1.7-1.8(1H，m)，1.2-1.5(2H，m)，0.8-0.95(6H，dd).
步骤6：N-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))-1，1’-联苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸的制备
将H5IO6/CrO3悬浮液(529mL 0.44M CH3CN溶液；参阅下面的注释)冷却至0℃，滴加将来自步骤3的醇(20g)的CH3CN(230mL)溶液。在0～5℃下搅拌混合物3.5小时。在剧烈搅拌下将其倒入pH值为4的Na2HPO4中，和用乙醚(3×250mL)对混合物进行萃取。将合并的乙醚萃取物用水与盐水(1∶1)洗涤、用NaHSO3稀溶液和盐水洗涤。用硫酸钠干燥有机萃取物、进行过滤和将溶剂蒸干得到残余物，将残余物分成两组以进行下面的纯化。
将由上所得的粗产物酸(10g)溶于醋酸异丙酯(250mL)中，将其萃取入冷0.1N NaOH(3×250mL)中。将合并的萃取物用乙醚(250mL)洗涤，然后用6N HCl将其缓缓酸化至pH值为4。用醋酸异丙酯(2×250mL)对羧酸进行萃取，对醋酸异丙酯层进行干燥和浓缩，得到基本上纯的产物，将此用于下一步中。
注释：氧化剂(H5IO6/CrO3)如Tetrahedron Letters 39(1998)5323-5326所述进行制备，但是使用HPLC级的CH3CN(含有0.5％水)；不加入水。
1H NMR(CD3COCD3)δ8.05(2H，d)，7.95(2H，d)，7.8(2H，d)，7.65(2H，d)，4.45-4.55(1H，m)，3.55-3.6(1H，m)，3.2(3H，s)，2.8-3.0(broad m，NH/OH)1.95-2.05(1H，m)，1.55-1.6(2H，m)，0.9-1.0(6H，m).
步骤7：N1-(氰甲基)-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))-1，1’-联苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺的制备
向来自步骤7的酸(9g)的DMF(200mL)溶液中，加入苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷六氟磷酸盐(11.6g)、氨基乙腈盐酸盐(3.94g)，和将混合物冷却至0℃。滴加加入三乙胺(9.9mL)，将混合物升温至室温并且搅拌16小时。将其倒入冰和饱和的碳酸氢钠水溶液中，用乙醚(3×100mL)萃取。用盐水洗涤合并的萃取物，用硫酸镁干燥和在真空下除去溶剂。通过色谱法在SiO2上使用乙酸乙酯和己烷(1∶1)对残余物进行纯化。然后将标题化合物在乙醚中搅拌16小时、过滤和干燥(熔点140.5℃)。
1H NMR(CD3COCD3)δ8.0(2H，d)，7.95(2H，d)，7.8(2H，d)，7.65(2H，d)，4.35-4.45(1H，m)，4.1-4.2(2H，m)，3.45-3.55(1H，m)，3.15(3H，s)，2.65-2.7(1H，m)，1.85-1.95(1H，m)，1.4-1.6(2H，m)，0.85-0.95(6H，m).
                        实施例5
N1-(1-氰基环丙基)-4-氟-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))-1，1’-联苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺的制备
Figure A20048002452000561
步骤1：(3S)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-4-羟基丁酸苄基酯
将N-(叔丁氧羰基)-L-天冬氨酸4-苄基酯(30g)溶于乙二醇二甲醚(90mL)中，将溶液冷却至-5℃。然后加入N-甲基吗啉(10.32mL)，继之以加入氯甲酸异丁酯(12.7mL)，如此使得温度保持低于-10℃。将混合物老化0.5小时。将固体迅速过滤和用乙二醇二甲醚(90mL)进行洗涤。向冷却至-50℃的滤液中小心地加入硼氢化钠(4.4g)水溶液(45mL)，按如此方式加入，以保持温度在-30℃和-15℃之间。加入氢化物后，将水(500mL)按一定方式加入，使得温度保持低于-15℃。将悬浮液过滤，用水(400mL)对固体进行洗涤和干燥，得到(3S)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-4-羟基丁酸苄基酯。
1H NMR(CD3COCD3)δ7.3-7.45(5H，m)，5.85-5.95(1H，NH)，5.15(2H，s)，3.95-4.1(2H，m)，3.5-3.7(2H，m)，2.55-2.75(2H，m)，1.4(9H，s).
步骤2：[(4S)-2-氧代-1，3-唑烷-4-基]乙酸苄基酯
向步骤1的溶于二氯乙烷(925mL)的醇(95.7g)中加入吡啶(625mL)，和将混合物冷却至0-5℃。将无水对甲苯磺酸酐(105.7g)加入，将混合物升温至室温并且搅拌1小时。然后将其加热到90℃保持2小时。将混合物冷却，用二氯甲烷(1000mL)稀释和用1N HCl(3×600mL)洗涤。用盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥和在真空下除去溶剂。通过色谱法在SiO2对残余物进行纯化，使用比例为1∶1的乙酸乙酯和己烷，然后使用乙酸乙酯，得到[(4S)-2-氧代-1，3-唑烷-4-基]乙酸苄基酯。
1H NMR(CD3SOCD3)δ7.8(1H，NH)，7.3-7.45(5H，m)，5.05-5.15(2H，m)，4.4-4.5(1H，m)，4.1-4.2(1H，m)，4.0-4.05(1H，m)，3.6-3.8(2H，m).
步骤3：(4S)-4-(2-羟基-2-甲基丙基)-1，3-唑烷-2-酮
在-20℃下，将甲基溴化镁(227mL的3M乙醚溶液)加入到甲苯(340mL)和THF(340mL)的混合物中。然后将步骤2的酯(40g)的热THF溶液(170mL)滴加加入，保持温度低于-10℃，放置混合物2小时。然后将混合物缓缓加入到水(1000mL)和乙酸(200mL)的混合物中，并且在室温下搅拌混合物2小时。将水层进行分离，和将有机层更进一步用水(2×200mL)进行萃取。使用二氯甲烷和连续提取器将产物从合并的水层中提取出来。借助于庚烷将二氯甲烷萃取液蒸干。通过色谱法在SiO2上使用乙醇和二氯甲烷(1∶30)对残余物进行纯化，得到(4S)-4-(2-羟基-2-甲基丙基)-1，3-唑烷-2-酮。
1H NMR(CD3COCD3)δ6.1-6.4(1H，NH)，4.45-4.55(1H，m)，4.1-4.2(1H，m)，3.95-4.05(1H，m)，3.7(1H，s)，1.65-1.85(2H，m)，1.25(6H，m).
步骤4：(4S)-4-(2-氟-2-甲基丙基)-1，3-唑烷-2-酮
将得自步骤3的醇(47.8g)的二氯甲烷(100mL)溶液加入到(二乙基氨基)三氟化硫(48.5g)的二氯甲烷(500mL)溶液中。将混合物升温至室温和搅拌1小时。然后小心地将其加入到0℃的饱和NaHCO3水溶液(800mL)的混合物中。将有机层分离，用饱和NaHCO3水溶液洗涤。更进一步用二氯甲烷(100mL)萃取水层，将合并的二氯甲烷层进行干燥和浓缩。使用乙酸乙酯和己烷(1∶5)，然后使用乙酸乙酯，通过色谱法在SiO2对残余物进行纯化，得到(4S)-4-(2-氟-2-甲基丙基)-1，3-唑烷-2-酮。
1H NMR(CD3SOCD3)δ7.6(1H，NH)，4.4-4.5(1H，m)，3.95-4.05(1H，m)，3.9-3.95(1H，m)，1.8-1.95(2H，m)，1.25-1.4(6H，2s).
步骤5：(2S)-2-氨基-4-氟-4-甲基戊烷-1-醇。
向溶于90％乙醇水溶液(216mL)中的步骤4的氟代衍生物(21.0g)中加入氢氧化钾(21.9g)。将混合物在回流下加热4小时，冷却至室温。然后将混合物浓缩和用甲苯(3×300mL)进行共蒸发。将残余物溶于二氯甲烷(500mL)中并搅拌0.5小时。将悬浮液滤过硅藻土和用二氯甲烷(3×100mL)洗涤硅藻土。将滤液浓缩至干燥，得到(2S)-2-氨基-4-氟-4-甲基戊-1-醇。
1H NMR(CD3OD)δ3.4-3.5(1H，m)，3.2-3.3(1H，m)，3.0-3.1(1H，m)，1.5-1.7(2H，m)，1.35(3H，s)，1.3(3H，s).
步骤6：(2S)-1-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-4-氟-4-甲基戊烷-2-胺
将得自步骤5的氨基醇(21.0g)溶于二氯甲烷(300mL)中，将溶液冷却至0℃。将4-(二甲基氨基)吡啶(0.051g)和叔丁基二甲基甲硅烷基氯化物(21g)加入，然后加入三乙胺(25mL)。在室温下搅拌混合物过夜。将反应混合物缓缓倒入0℃的饱和氯化铵水溶液中，并用二氯甲烷(3×300mL)进行萃取。用盐水洗涤有机层、用硫酸钠干燥和在真空下除去溶剂，得到(2S)-1-{[叔丁基(二甲基甲硅烷基]氧基}-4-氟-4-甲基戊烷-2-胺。
1H NMR(CD3OD)δ3.6-3.65(1H，m)，3.4-3.5(1H，m)，3.1-3.2(1H，m)，1.6-1.8(2H，m)，1.35-1.45(6H，m)，0.93(9H，s)，0.1(6H，s).
步骤7：(2S)-1-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-4-氟-4-甲基-N-[(1E)-2，2，2-三氟亚乙基]戊烷-2-胺。
向溶于苯(126mL)的得自步骤6的胺(31.5g)中加入三氟乙醛甲基半缩醛(21.6mL)。在回流下加热溶液过夜，使用Dean-Stark阱收集水。将反应混合物冷却至室温并浓缩至干燥。在SiO2上使用4％的乙酸乙酯己烷溶液对残余物进行纯化，得到(2S)-1-([叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-4-氟-4-甲基戊烷-2-胺。
1H NMR(CD3COCD3)δ7.9-7.95(1H，m)，3.75-3.85(1H，m)，3.7-3.75(1H，m)，3.53-3.6(1H，m)，1.9-2.0(2H，m)，1.3-1.4(6H，m)，0.9(9H，s)，0.1(3H，s)，0.05(3H，s).
步骤8：(2S)-2-{[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]氨基}-4-氟-4-甲基戊烷-1-醇
向-75℃的1，4-二溴苯(0.26g)的THF(4mL)溶液中，加入n-BuLi(0.42mL的2.5M己烷溶液)和将混合物放置20分钟。加入步骤7的亚胺(0.329g)的THF(2mL)溶液，和将混合物放置2小时。然后将混合物加入到水(5OmL)、NH4Cl(1g)和碎冰的混合物中。用乙酸乙酯(2×25mL)对其进行萃取，和将合并的乙酸乙酯层干燥和蒸干。
重复相同的步骤，但是使用二溴苯(1.2g)、n-BuLi(1.84mL)和亚胺(1.38g.)，和对反应混合物的处理如上。将合并的根据两种制备方法得到的残余物溶于THF(10mL)中，并且冷却至0℃。加入正丁基氟化铵(6mL的1M THF溶液)和在+5℃下搅拌混合物16小时。然后将其倒入水(50mL)、氯化铵(1g)和碎冰的混合物中，并将有机层分离。更进一步用乙酸乙酯(2×15mL)萃取水层，和对合并的有机层进行干燥和浓缩。在SiO2上使用乙酸乙酯和己烷(1∶5)对残余物进行纯化，得到(2S)-2-{[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]氨基}-4-氟-4-甲基戊-1-醇。
1H(CD3COCD3)δ7.65(2H，m)，7.5(2H，m)，4.5-4.6(1H，m)，3.8(1H，m)，3.6(1H，m)，3.3-3.4(1H，m)，2.85-2.0(1H，m)，2.55(1H，m)，1.7-1.9(2H，s)，1.3-1.4(6H，m).
步骤9：N-[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]-4-氟-L-亮氨酸。
将H5IO6/CrO3悬浮液(529mL的0.44M CH3CN溶液；注释)冷却至0℃，和将得自步骤8的醇(1.55g)的CH3CN(5mL)溶液滴加加入。在0～5℃下搅拌混合物3.5小时。在剧烈搅拌下将其倒入pH值为4的Na2HPO4(200mL)中，和用乙醚(3×50mL)萃取混合物。将合并的乙醚萃取液用水与盐水(1∶1)洗涤，然后用NaHSO3稀溶液和盐水洗涤。用硫酸钠干燥和在真空下将溶剂蒸干，得到N-[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]-4-氟-L-亮氨酸，在下一步中照此使用。
注释：氧化剂(H5IO6/CrO3)如Tetrahedron Letters 39(1998)5323-5326所述进行制备，但是使用HPLC级的CH3CN(含有0.5％水)；不加入水。
步骤10：N2-[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]-N1-(1-氰基环丙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺。
将二异丙基乙胺(4.2mL)加入到0℃的得自步骤9的酸(1.5g)、1-氨基-1-环丙烷腈盐酸盐(1.18g)、0-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐(1.94g)和二甲基甲酰胺(5mL)悬浮液中，混合物在室温下反应48小时。然后将其倾倒在冰和稀氯化铵水溶液中。用乙酸乙酯和乙醚(1∶1)萃取混合物，和将合并的有机层用pH值为3的稀Na2HPO4溶液和盐水洗涤。将溶剂蒸干，和使用乙酸乙酯和己烷(1∶2)通过色谱法在SiO2上对残余物进行纯化，得到N2-[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]-N’-(1-氰基环丙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺，具有用于下一步反应的充分纯度。
1H NMR(CD3COCD3)δ8.15(1H，NH)，7.6(2H，m)，7.45(2H，m)，4.35-4.45(1H，m)，3.45-3.55(1H，m)，1.9-2.1(2H，m)，1.75-1.85(1H，NH)，1.35-1.55(8H，m)，1.1-1.15(1H，m)，0.95-1.05(1H，m).
步骤11：N1-(1-氰基环丙基)-4-氟-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-(甲硫基)-1，1’-联苯基]乙基}-L-亮氨酸酰胺。
让氮气流通过悬浮液15分钟，悬浮液由得自步骤10的溴化物(0.338g.)、4-(甲硫基)苯基硼酸(0.252g)、2M Na2CO3(0.8mol)和DMF(4mL)构成。然后加入PdCl2·dppf(0.1g)，和将反应升温至85℃，并在氮气下搅拌5小时。将混合物冷却至室温，用乙酸乙酯稀释和将其倒入水(50mL)和冰中。将乙酸乙酯层分离，以及更进一步用乙酸乙酯对水层进行萃取。干燥合并的乙酸乙酯萃取液和在真空下除去溶剂。使用乙酸乙酯和己烷(1∶2)通过色谱法在SiO2上对残余物进行纯化，得到N1-(1-氰基环丙基)-4-氟-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-(甲硫基)-1，1’-联苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺。
1H NMR(CD3COCD3)δ8.15(1H，NH)，7.1-7.2(4H，m)，7.5-7.55(2H，m)，7.35-7.4(2H，m)，4.3-4.4(1H，m)，3.45-3.55(1H，m)，2.75-2.8(1H，NH)，2.5(3H，s)，1.9-2.05(2H，m)，1.3-1.5(8H，m)，1.0-1.1(1H，m)，0.85-0.95(1H，m).
步骤12：N1-(1-氰基环丙基)-4-氟-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))-1，1’-联苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺的制备
向0℃的得自步骤11的硫化物(0.265g)的甲苯(5mL)和二氯甲烷(5mL)溶液中加入Na2WO4·2H2O(0.002g)和n-Bu4NHSO4(0.01g)。然后缓缓加入30％过氧化氢(0.137mL)，和在室温下搅拌混合物3小时。然后把化合物倾倒在冰、稀的硫代硫酸钠水溶液和乙酸乙酯的混合物上。将有机层进行分离，以及更进一步用乙酸乙酯对水层进行萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，和在真空下除去溶剂得到残余物，在SiO2上纯化该残余物，使用乙酸乙酯、己烷和二氯甲烷(1∶1∶0.1)作为洗脱液。将残余物在乙醚中进行研磨，得到N1-(1-氰基环丙基)-4-氟-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))-1，1’-联苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺。
1H NMR(CD3COCD3)δ8.2(1H，NH)，8.05-8.1(2H，m)，7.95-8.0(2H，m)，7.8(2H，m)，7.65(2H，m)，4.35-4.45(1H，m)，3.5-3.6(1H，m)，3.2(3H，s)，2.8-2.9(1H，NH)，1.9-2.1(2H，m)，1.3-1.5(8H，m)，1.05-1.15(1H，m)，0.9-1.0(1H，m).
实施例6
N2-[1-(3-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]-N1-(氰甲基)-L-亮氨酸酰胺的合成
使用实施例1所述步骤，将其中2，2，2-三氟苯乙酮替代为1-(3-溴苯基)-2，2，2-三氟乙酮，制备得到标题化合物。
MS(+ESI)：406.0，408.1[M+1]+.
                    实施例7
N1-(氰甲基)-N2-[2，2，2-三氟-1-(4-哌嗪-1-苯基)乙基]-L-亮氨酸酰胺
Figure A20048002452000622
步骤1：N2-(1-{4-[4-(叔丁基羧基)哌嗪-1-基]苯基}-2，2，2-三氟乙基)-N1-(氰甲基)-L-亮氨酸酰胺
将N2-[1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]- N 1-(氰甲基)-L-亮氨酸酰胺(实施例2)(100mg，0.25mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(2.3mg，0.0025mmol)、联苯基-2-基(二叔丁基)膦(3mg，0.01mmol)、磷酸钾(74mg，0.35mmol)和叔丁基哌嗪-1-羧酸酯(56mg，0.3mmol)的乙二醇二甲醚(0.5mL)溶液冷却至-78℃，在高真空下抽气3分钟，然后将氮气导入烧瓶中。然后将混合物在80℃下加热1小时。冷却到室温后，直接将混合物应用到硅胶吸附柱上和用乙酸乙酯/己烷洗脱，得到标题化合物。
步骤2：N1-(氰甲基)-N2-[2，2，2-三氟-1-(4-哌嗪-1-基苯基)乙基]-L-亮氨酸酰胺
向得自步骤1的化合物(139mg，0.27mmol)的1，4-二氧六环(0.5mL)溶液中加入甲磺酸(53μL，0.82mmol)，搅拌混合物过夜。加入乙酸乙酯，然后将混合物用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤、用硫酸镁干燥、过滤和在真空下蒸发溶剂。用93％二氯甲烷、0.6％氨水和6.4％甲醇洗脱，通过硅胶色谱法纯化得到标题化合物。
MS(+ESI)：412.2[M+1]+.
                        实施例8
N2-((1S)-1-{4’-[1-(氨基羰基)环丙基]联苯基-4-基}-2，2，2-三氟乙基)-N1-(1-氰基环丙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺的合成
步骤1：1-(4-溴苯基)环丙烷腈的制备
向室温下的4-溴苯基乙腈(18.0g)的22mL氢氧化钠(水中50％W/W)溶液中，加入1-溴-2-氯乙烷(12.0mL)和苄基三甲基氯化铵(627mg)。混合物在60℃加热过夜。将反应混合物冷却至室温，加入乙醚(300mL)。用水(100mL)、氯化氢(100mL，水中含10％HCl)和盐水洗涤乙醚层。有机层用硫酸镁干燥和在真空下除去溶剂。通过使用乙醚和己烷研磨来纯化残余物，得到标题化合物。
1H NMR(CD3COCD3)δ7.60(2H，d)，7.35(2H，d)，1.74-1.80(2H，m)，1.52-1.57(2H，m).
步骤2：1-(4-溴苯基)环丙烷羧酸的制备
向室温下的得自步骤1的1-(4-溴苯基)环丙烷腈(13g)的乙醇(110mL)溶液中加入56mL氢氧化钠溶液(NaOH在水中W/W为25％)。将混合物在100℃加热过夜。将其冷却至室温，倒入冰和氯化氢(1N)中，以及用二氯甲烷(2×100mL)进行萃取。用盐水洗涤合并的萃取物，用硫酸镁干燥和在真空下除去溶剂，得到标题化合物。
1H NMR(CD3COCD3)δ7.50(2H，d)，7.35(2H，d)，1.53-1.60(2H，m)，1.18-1.22(2H，m).
步骤3：1-(4-溴苯基)环丙烷甲酰胺的制备
向-15℃的得自步骤2的1-(4-溴苯基)环丙烷羧酸(1.5g)的氯仿(60mL)溶液中缓缓加入氯甲酸异丁酯(900μL)和三乙胺(1.1mL)。将反应混合物在-15℃下搅拌2小时。然后用氨气使其饱和和在-15℃下搅拌10分钟。容许反应混合物在室温下放置1小时，然后将其倒入水(60mL)中和进行分层。用二氯甲烷(2×60mL)萃取水层。将合并的萃取物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥和在真空下除去溶剂。通过使用乙醚和己烷挥发对残余物进行纯化，得到标题化合物。
1H NMR(CD3COCD3)δ7.54(2H，d)，7.40(2H，d)，6.45(1H，bs)，5.96(1H，bs)，1.42-1.48(2H，m)，0.98-1.02(2H，m).
步骤4：N1-(1-氰基环丙基)-4-氟-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺的制备
让氮气流通过得自实施例5步骤9的N2-[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]-N1-(1-氰基环丙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺、双(四甲基乙二醇化)二硼(1.24g)和乙酸钾(1.53g)的DMF(40mL)悬浮液15分钟。然后加入催化剂[1，1’-双(二苯膦基)-二茂铁]二氯化钯(II)与二氯甲烷(181mg)的配合物(1∶1)，将混合物升温至65℃，在氮气下过夜。将混合物冷却至室温，用乙酸乙酯和己烷(1∶1，100mL)稀释并倒在水(50mL)和冰(50g)上。将有机层进行分离，以及更进一步用乙酸乙酯和己烷(1∶1，3×50mL)进行萃取水层。用盐水洗涤合并的萃取液和用硫酸镁干燥。除去溶剂得到残余物，使用乙酸乙酯和己烷(1∶3～1∶2)，将该残余物通过SiO2色谱进行纯化，得到标题化合物。
1H NMR(CD3COCD3)δ8.15(1H，bs)，7.78(2H，d)，7.50(2H，d)，4.31-4.40(1H，m)，3.47-3.54(1H，m)，2.72-2.80(2H，m)，1.32-1.48(9H，m)，1.05-1.11(1H，m)，0.87-0.95(1H，m).
步骤5：N2-((1S)-1-{4’-[1-(氨基羰基)环丙基]联苯基-4-基}-2，2，2-三氟乙基)-N1-(1-氰基环丙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺的制备
将氮气流通过得自步骤4的硼酸盐(150mg)、得自步骤3的1-(4-溴苯基)环丙烷甲酰胺(110mg)和2M Na2CO3(400μL)的DMF(4ml)溶液15分钟。然后加入催化剂[1，1’-双(二苯膦基)-二茂铁]二氯化钯(I)与二氯甲烷(12mg)的配合物(1∶1)，和将混合物升温至80℃，在氮气下保持3小时。将混合物冷却至室温，倒入冰(10g)和饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)中，并用50％乙酸乙酯(3×30mL)萃取。用盐水洗涤合并的萃取液和用硫酸镁干燥。除去溶剂得到残余物，使用乙酸乙酯和己烷(50～70％)作为洗脱液，将该残余物通过色谱法在SiO2上进行纯化，然后通过使用乙醚挥发进行纯化，得到标题化合物。
1H NMR(CD3COCD3)δ8.20(1H，bs)，7.75(2H，d)，7.70(2H，d)，7.60(2H，d)，7.55(2H，d)，6.37(1H，bs)，5.87(1H，bs)，4.35-4.43(1H，m)，3.52-3.58(1H，m)，1.92-2.05(2H，m)，1.42-1.50(6H，m)，1.35-1.42(4H，m)，1.03-1.12(3H，m)，0.92-0.98(1H，m).
                    实施例9
N2-[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]-N1-(1-氰基环丙基)-4，4-二氟-L-正缬氨酸酰胺
Figure A20048002452000651
步骤1：N-((苄氧基)羰基)-3-碘-L-丙氨酸甲酯的制备
向苄氧羰基-L-丝氨酸(25g，104mmol)的乙酸乙酯(200mL)溶液中，加入重氮甲烷的乙醚溶液，直至呈现持续的轻微的黄色。将溶剂在真空下蒸发。向残余物中加入N，N-二甲基甲酰胺(400mL)和甲基三苯氧基膦碘化物(50g，110mmol)。搅拌混合物15分钟，然后加入甲醇(15mL)，然后在混合物中倒入20％硫代硫酸钠，用乙酸乙酯∶己烷为1∶1的混合物(2L)进行萃取。用水和盐水(3×)洗涤有机层，用硫酸镁干燥，过滤和在真空下将溶剂蒸发。使用乙酸乙酯和己烷，通过硅胶色谱法纯化残余物。将得到的化合物在乙醚/己烷中研磨、过滤和风干，得到N-((苄氧基)羰基)-3-碘-L-丙氨酸甲酯。
步骤2：N-((苄氧基)羰基)-氧代-L-正缬氨酸甲酯的制备
将得自步骤1的N-((苄氧基)羰基)-3-碘-L-丙氨酸甲酯(10g，27.5mmol)、苯(110mL)中的锌-铜偶(3.3g)和N，N-二甲基乙酰胺(7.4mL)在超声浴中超声处理2小时。经过此期间后，加入3批1，2-二溴乙烷(0.24mL)和三甲基氯硅烷(0.17mL)。然后向该混合物中加入双(三苯基膦)氯化钯(0.958g，1.4mmol)和乙酰氯(2.5mL，35.2mmol)，将混合物在70℃加热2小时。冷却至室温后，使用乙酸乙酯在硅藻土上过滤混合物，然后用饱和氯化铵溶液和盐水(2×)洗涤有机层、用硫酸镁干燥、过滤和在真空下蒸发溶剂。通过硅胶色谱法使用乙酸乙酯和己烷对残余物进行纯化，得到N-((苄氧基)羰基)-4-氧-L-正缬氨酸甲酯。
步骤3：N-((苄氧基)羰基)-4，4-二氟-L-正缬氨酸甲酯的制备
向0℃下的N-((苄氧基)羰基)-4-氧-L-正缬氨酸甲酯(1.3g，4.65mmol)的二氯甲烷(20mL)和甲醇(0.019mL)溶液中缓缓加入DAST(2.46mL)。除去冰浴并用热水浴(57℃)替换。替换热水浴3次，然后将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物缓缓倾倒在冷的饱和NaHCO3上，用乙酸乙酯萃取，用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤和在真空下将溶剂蒸发。通过硅胶色谱法，使用乙酸乙酯和己烷纯化残余物，得到N-((苄二氟基)羰基)-4，4-二氟-L-正缬氨酸甲酯。
步骤4：(1S)-3，3-二氟-1-(羟甲基)丁基氨基甲酸苄基酯的制备
向N-((苄氧基)羰基)-4，4-二氟-L-正缬氨酸甲酯(1.59g，5.29mmol)的乙醇(50mL)溶液中加入氯化锂(919mg)，搅拌混合物10分钟。缓缓加入硼氢化钠(820mg)，搅拌混合物2小时。然后，加入另一份硼氢化钠(100mg)，继续搅拌30分钟。用水(20mL)稀释混合物和用1N HCl慢慢地中和，继之以加入另一等量水。用乙酸乙酯(2×)萃取混合物、用盐水洗涤、用硫酸镁干燥、过滤和在真空下将溶剂蒸发，得到(1S)-3，3-二氟-1-(羟甲基)丁基氨基甲酸苄基酯。
步骤5：(2S)-1-((叔丁基(二甲基)甲硅烷基)氧基)-4，4-二氟戊-2-胺的制备
向(1S)-3，3-二氟-1-(羟甲基)丁基氨基甲酸苄基酯(得自步骤4)的乙醇(25mL)溶液中，加入在活性炭上的钯(10％，150mg)，在H2气氛下(H2气泡)搅拌混合物2h。加入二氯甲烷，在硅藻土上过滤混合物。在真空下蒸发溶剂。将残余物溶于二氯甲烷(15mL)中，将三乙胺(1mL)、N，N-二甲基氨基吡啶(10mg)和叔丁基二甲基氯代甲硅烷(844mg)加入。搅拌混合物过夜，然后加入水和盐水。用乙酸乙酯(2×)萃取混合物、用盐水洗涤、用硫酸镁干燥、过滤和在真空下将溶剂蒸发，得到(2S)-1-((叔丁基(二甲基)甲硅烷基)氧基)-4，4-二氟戊烷-2-胺。
步骤6：(2S)-1-((叔丁基(二甲基)甲硅烷基)氧基)-4，4-二氟-N-((1E)-2，2，2-三氟亚乙基)戊烷-2-胺的制备
将得自步骤5的(2S)-1-((叔丁基(二甲基)甲硅烷基)氧基)-4，4-二氟戊烷-2-胺和三氟乙醛甲基半缩醛(80％，0.9mL)的苯(20mL)溶液用Dean-Stark仪器回流过夜。将溶剂在真空下蒸发，使用乙酸乙酯和己烷通过硅胶色谱法进行纯化残余物，得到(2S)-1-((叔丁基(二甲基)甲硅烷基)氧基)-4，4-二氟-N-(1E)-2，2，2-三氟亚乙基)戊烷-2-胺。
步骤7：(2S)-2-((1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基)氨基)-4，4-二氟戊烷-2-胺的制备
向-78℃的1，4-二溴苯(330毫克)的THF(5.2mL)溶液中，加入2.5M的n-BuLi的己烷溶液(0.52mL)，将溶液老化30分钟。然后，加入(2S)-1-((叔丁基(二甲基)甲硅烷基)氧基)-4，4-二氟-N-((1E)-2，2，2-三氟亚乙基)戊烷-2-胺(333mg)的THF(5.2mL)溶液。将混合物在-78℃下搅拌45分钟，然后倾倒在冷的饱和氯化铵中，用乙酸乙酯(2×)萃取、用盐水洗涤、用硫酸镁干燥、过滤和在真空下将溶剂蒸发。将残余物溶于冰水浴冷却的THF(10mL)中，并且加入四正丁基氟化铵(在THF中1M，1.5mL)。在0℃下搅拌混合物1h，倾倒入冷水中，用乙酸乙酯(2×)萃取，用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤和在真空下将溶剂蒸发，得到(2S)-2-(((1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基)氨基)-4，4-二氟戊-1-醇。
步骤8：N2-[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]-N1-(1-氰基环丙基)-4，4-二氟-L-正缬氨酸酰胺的制备
将H5IO6/CrO3悬浮液(27mL的0.44M CH3CN溶液；注释)冷却至0℃，滴加加入得自步骤7的醇(740mg)的CH3CN(10mL)溶液。将混合物在0℃下搅拌4小时，另外再加入H5IO6/CrO3(2×10mL的0.44MCH3CN溶液)。然后在剧烈搅拌下将混合物倒入pH值为4的Na2HPO4缓冲溶液中，用乙酸乙酯萃取混合物，用盐水(2×)洗涤，然后用稀NaHSO3水溶液和盐水洗涤。用硫酸镁干燥混合物，过滤和将溶剂蒸干，得到680mg N-[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]-4，4-二氟-L-正缬氨酸，将其照此样用于下一步骤。
注释：氧化剂(H5IO6/CrO3)如Tetrahedron Letters 39(1998)5323-5326所述进行制备，但是使用HPLC级的CH3CN(含有0.5％水)；不加入水。
将三乙胺(0.42mL)加入到得自以上的酸(340mg)、1-氨基-1-环丙烷腈盐酸盐(227mg)、苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷六氟磷酸盐(498mg)和二甲基甲酰胺(4.5mL)的混合物中，让混合物在室温下反应48小时。然后将其倾倒入稀碳酸氢钠中。用乙醚(3×)萃取混合物，将合并的有机层用盐水(3×)洗涤，以及用硫酸镁干燥并过滤。将溶剂蒸干，使用40％乙酸乙酯和己烷通过色谱法在硅胶上纯化残余物，得到N2-[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]- N 1-(1-氰基环丙基)-4，4-二氟-L-正缬氨酸酰胺。
MS(+ESI)：454.1，456.2[M+1]+.
                        实施例10
N2-[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]-N1-(氰甲基)-4，4-二氟-L-正缬氨酸酰胺
使用实施例9所述的步骤，将步骤8中的1-氨基-1-环丙烷腈盐酸盐替换为氨基乙腈盐酸盐，得到标题化合物。
MS(+ESI)：428，430.1[M+1]+.
实施例11
4-氟-N1-[(2R，3S)-2-甲基-4-氧基四氢呋喃-3-基]-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))-1，1’-联苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺
步骤1：N2-[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]-4-氟-N1-[(2R，3S)-2-甲基-4-氧基四氢呋喃-3-基]-L-亮氨酸酰胺
将三乙胺(0.63mL)加入到得自实施例5步骤9的酸(500mg)、(4S，5R)-4-氨基-5-甲基二氢呋喃-3(2H)-酮盐酸盐(227mg)(WO00/69855)、苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷六氟磷酸盐(744mg)和二甲基甲酰胺(7mL)的混合物中，让混合物在室温下反应3小时。然后将其倾倒入稀碳酸氢钠中。用乙醚(3×)萃取混合物，用盐水(3×)洗涤合并的有机层，以及用硫酸镁干燥并过滤。将溶剂蒸干，通过色谱法在SiO2上使用30％乙酸乙酯和己烷进行纯化残余物，得到标题化合物。
步骤2：4-氟-N1-[(2R，3S)-2-甲基-4-氧基四氢呋喃-3-基]-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-(甲硫基)联苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺
将得自步骤1的溴化物(200mg)、4-(甲硫基)苯基硼酸(104mg)、2M Na2CO3水溶液(0.51mL)和DMF(3mL)的混合物搅拌15分钟。将PdCl2dppf2(17mg)冷却至-78℃，在高真空下抽气5分钟，然后将氮气通入烧瓶，在氮气下，在80℃下加热并搅拌混合物3小时。将混合物冷却至室温，用乙酸乙酯稀释，用饱和氯化铵和盐水(3×)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤和在真空下将溶剂蒸发。使用35％乙酸乙酯/己烷作为洗脱液，通过硅胶色谱法进行纯化，得到标题化合物。
步骤3：4-氟-N1-[(2R，3S)-2-甲基-4-氧基四氢呋喃-3-基]-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))联苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺
向得自步骤2的硫化物(120mg)的乙酸乙酯(2mL)溶液中加入Na2WO4·2H2O(1mg)和n-Bu4NHSO4(4mg)。然后缓缓加入30％过氧化氢(0.06mL)，在室温下搅拌混合物2小时。然后进一步加入过氧化氢(0.06mL)。然后将乙酸乙酯加入到混合物中，用浓Na2S2O3(2×)和盐水洗涤该混合物，用硫酸镁干燥，过滤和在真空下将溶剂蒸发。使用55％乙酸乙酯/己烷作为洗脱液，通过硅胶色谱法进行纯化，得到标题化合物。
MS(+ESI)：559.1[M+1]+.
                    实施例12
N1-(1-氰基-1-甲基乙基)-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))联苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺的合成
Figure A20048002452000711
步骤1：2-氨基-2-甲基丙烷腈盐酸盐的制备
向0℃的氯化铵(15.5g)水(50mL)溶液中加入丙酮(17mL)的乙醚(50mL)溶液。然后以某一速率缓缓加入氰化钠(11.9g)的水(35mL)溶液，使得温度绝不超过10℃。加入氰化物溶液后，将反应混合物搅拌1小时，然后将其放置过夜。将乙醚层分离，用乙醚(2×30mL)萃取水层。用盐水洗涤合并的有机层，用硫酸镁干燥和在真空下除去溶剂得到残余物，将该残余物用甲醇(80mL)进行稀释。在-78℃下冷却该溶液和用氮气饱和(使用带有塞阀和温度计套管的Ace压力管)。容许反应混合物在室温下放置两天。通过气流逐出将过量氨，通过蒸发除去甲醇。将残余物溶于乙醚(50mL)并冷却至0℃，然后加入40mL氯化氢(在乙醚中为1.0M)溶液。搅拌混合物30分钟并且过滤，得到标题化合物。
1H NMR(CD3SOCD3)δ9.45(1H，s)，1.70(6H，s).
步骤2：N1-(1-氰基-1-甲基乙基)-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))联苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺的制备
向得自实施例4步骤6的酸(1.2g)的DMF(30mL)溶液中，加入苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷六氟磷酸盐(1.55g)、得自步骤1的2-氨基-2-甲基丙烷腈盐酸盐(720mg)，将混合物冷却至0℃。将三乙胺(1.3mL)滴加加入并将混合物升温至室温并搅拌72小时。将其倒入冰和饱和碳酸氢钠水溶液中，用乙醚(3×50mL)萃取。用盐水洗涤合并的萃取物，用硫酸镁干燥和在真空下除去溶剂。通过色谱法在SiO2上进行纯化残余物，使用梯度乙酸乙酯和己烷(1∶2～1∶1)作为洗脱液，然后使用乙醚和己烷研磨，得到标题化合物。
1H NMR(CD3COCD3)δ8.08(2H，d)，7.95(2H，d)，7.80(2H，d)，7.68(1H，bs)，7.65(2H，d)，4.32-4.42(1H，m)，3.43-3.52(1H，m)，3.20(3H，s)，2.65-2.75(1H，m)，1.90-2.00(1H，m)，1.57(3H，s)，1.52(3H，s)，1.52-1.57(1H，m)，1.40-1.50(1H，m)，0.90-0.98(6H，m).
                    实施例13
N1-(氰甲基)-3-(1-甲基环丙基)-N2-{2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))-1，1’-联苯基-4-基]乙基}-丙氨酸酰胺
Figure A20048002452000721
步骤1：N-(二苯亚甲基)-4-亚甲基正缬氨酸甲酯
在0℃下，向N-(二苯亚甲基)氨基乙酸甲酯(12.0g，47.4mmol)的THF(118mL)溶液中加入1M叔丁醇钾THF(49mL，49mmol)溶液。混合物变为嫩黄色，将混合物更进一步搅拌～15min。加入3-溴-2-甲基丙烯(5.2mL，51.3mmol)，在室温下搅拌混合物2天。用水猝灭后，用EtOAc萃取混合物。在硅胶上进行色谱法并用己烷：EtOAc(6∶1)进行洗脱，形成2.2g作为较低极性组分的二烷基化产物。更进一步洗脱产生为较高极性组分的标题化合物。
1H NMR(丙酮-d6)δ7.62-7.18(m，10H)，4.72(s，1H)，4.64(s，1H)，4.20(dd，1H)，3.64(s，3H)，2.62(dd，1H)，2.50(dd，1H)，1.48(s，3H).
步骤2：N-[(苄氧基)羰基]-4-亚甲基正缬氨酸甲酯
将得自步骤1的N-(二苯亚甲基)-4-亚甲基正缬氨酸甲酯(6.2g，20.2mmol)和0.5M HCl水溶液(60mL)的混合物在室温下搅拌过夜。将所有的混合物用Et2O(2×)进行洗涤。冷却至0℃后，将1M NaOH水溶液(40mL，40mmol)加入，然后将EtOAc(50mL)和氯甲酸苄基酯(4mL，28mmol)加入。将混合物在0℃下搅拌2h。然后将EtOAc层分离，用水(2×)洗涤，干燥(MgSO4)和浓缩。在硅胶上进行色谱和用己烷：EtOAc(6∶1)，然后(3∶1)进行洗脱，产生作为无色油的标题化合物。
1H NMR(丙酮-d6)δ7.40-7.25(m，5H)，6.54(d，1H)，5.06(s，2H)，4.82(s，1H)，4.78(s，1H)，4.40(m，1H)，3.68(s，3H)，2.52(dd，1H)，2.40(dd，1H)，1.74(s，3H).
步骤3：N-[(苄氧基)羰基]-3-(1-甲基环丙基)-L-丙氨酸甲酯
向0℃的CH2CL2(40mL)中加入二乙基锌(2mL，19.5mmol)，然后滴加加入三氟乙酸(1.5mL，19.5mmol)的CH2CL2(8mL)溶液。搅拌15分钟后，将二碘甲烷(1.6mL，20.0mmol)的CH2CL2(8mL)溶液加入。搅拌混合物15分钟，产生透明溶液。将得自步骤2的N-[(苄氧基)羰基]-4-亚甲基正缬氨酸甲酯(2.75g，9.9mmol)加入，将混合物在室温下搅拌过夜。用0.1M HCl水溶液(50mL)猝灭后，将CH2Cl2层分离，用稀盐水洗涤，干燥(MgSO4)和浓缩，产生标题化合物粗产物。
1H NMR(丙酮-d6)δ7.35(m，5H)，6.58(d，1H)，5.08(m，2H)，4.40(m，1H)，3.68(s，3H)，1.75(dd，1H)，1.62(dd，1H)，1.08(s，3H)，0.45(m，1H)，0.22(m，3H).
步骤4：2-羟基-1-[(1-甲基环丙基)甲基]乙基氨基甲酸苄基酯
向在0℃下冷却的得自步骤3的粗酯的EtOH(40mL)和THF(40mL)溶液中加入LiCl(1.7g)，然后加入NaBH4(1.6g)。在室温下搅拌混合物过夜，用0.5M HCl水溶液猝灭和用EtOAc萃取。将EtOAc萃取液用稀盐水(2×)洗涤，干燥(MgSO4)和浓缩。色谱提纯产生2g无色油的标题化合物。
1H NMR(丙酮-d6)δ7.35(m，5H)，5.98(d，1H)，5.06(m，2H)，3.85(m，1H)，3.72(t，1H)，3.50(m，2H)，1.60(dd，1H)，1.34(dd，1H)，1.05(s，3H)，0.40-0.15(m，4H).
步骤5：2-氨基-3-(1-甲基环丙基)丙-1-醇
将2-羟基-1-[(1-甲基环丙基)甲基]-乙基氨基甲酸苄基酯(2.0g，7.6mmol)和10％Pd/C(200mg)在EtOH(80mL)中的混合物与2mL 1M HCl溶液在H2气氛下(鼓泡)搅拌过夜。将催化剂滤出和将滤液浓缩，产生标题化合物。
1H NMR(甲醇-d4)83.72(dd，1H)，3.40(dd，1H)，3.22(m，1H)，1.50-1.30(m，2H)，1.06(s，3H)，0.45-0.25(m，4H).
步骤6：N1-(氰甲基)-3-(1-甲基环丙基)-N2-{2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))-1，1’-联苯基-4-基]乙基}-丙氨酸酰胺
标题化合物由得自步骤5的氨基醇进行制备，使用与实施例5步骤6～12中所述相同的方法。
1H NMR(丙酮-d6)δ8.06(br s，1H)，8.00(d，2H)，7.94(d，2H)，7.78(d，2H)，7.62(d，2H)，4.48(m，1H)，4.12(m，2H)，3.55(m，1H)，3.16(s，3H)，1.64(m，2H)，1.10(s，3H)，0.48-0.20(m，4H).
MS(+ESI)：494(MH+).
                    实施例14
N1-(氰甲基)-N2-(2，2，2-三氟-1-{4-[(4-甲基哌嗪-1-基)羰基]苯基}乙基)-L-亮氨酸酰胺的合成
Figure A20048002452000741
步骤1：N2-{1-[4-(羟基羰基)苯基]-2，2，2-三氟乙基}-N1-(氰甲基)-L-亮氨酸酰胺
将在三丁基胺(2.5mL)和水(0.6mL)中的二氯双(三苯基膦)钯(II)(58mg，0.08mmol)、三苯基膦(155mg，0.59mmol)和N2-[1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]-N1-(氰甲基)-L-亮氨酸酰胺(实施例2，1.2g，3.0mmol)的混合物置于带有聚四氟乙烯涂层磁棒的钢制反应釜中。将系统用一氧化碳(每次100psi)冲洗三次，最后充满300psi压力的此种气体。在持续搅拌下，将反应混合物在160℃加热20小时。然后使系统冷却至室温，将压力解除，将产生的残余物在EtOAc和水之间进行分配，加入盐酸水溶液以调节pH值为2.5～3.0。用Na2SO4干燥有机层、过滤和浓缩。将粗制品经色谱法进行纯化，使用EtOAc、己烷和乙酸作为洗脱液，产生黄橙色海棉状的标题化合物。
步骤2：N1-(氰甲基)-N2-(2，2，2-三氟-1-{4-[(4-甲基哌嗪-1-基)羰基]苯基}乙基)-L-亮氨酸酰胺
向DMF(8mL)中的得自步骤1的N2-{1-[4-(羟基羰基)苯基]-2，2，2-三氟乙基}-N1-(氰甲基)-L-亮氨酸酰胺(480mg，1.3mmol)和苯并三唑-1-基氧基三吡咯烷基磷六氟膦酸盐(1.35g，2.6mmol)溶液中，缓缓加入N-甲基哌嗪(0.29mL，2.6mmol)，然后加入三乙胺(0.54mL，3.9mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3小时。将产生的混合物在EtOAc和水之间进行分配，加入盐酸水溶液以调节pH值为2.5～3.0。将有机层用Na2SO4干燥、过滤和浓缩。粗制品经色谱法纯化，使用MeOH、EtOAc和浓NH4OH作为洗脱液，产生白色海棉状的标题化合物。
MS(+ESI)：454.3[M+1]+.
                    实施例15
N1-{(1S)-1-[2-(甲硫基)乙基]-2-氧代丙基}-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))联苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺的合成
步骤1：N2-(叔丁氧羰基)-N1-甲氧基-N1-甲基-L-甲硫氨酸酰胺
向DMF(15mL)中的N-叔丁氧羰基-L-甲硫氨酸(1.0g，4.0mmol)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐(3.3g，8.7mmol)和N，O-二甲基羟胺盐酸盐(1.0g，10.2mmol)的冰冷溶液中，滴加加入三乙胺(2.2mL，15.8mmol)。将产生的混合物在室温下搅拌18小时，然后在EtOAc和半饱和NaHCO3水溶液之间进行分配。将有机层用Na2SO4干燥、过滤和浓缩。粗制品经色谱法进行纯化，使用EtOAc和己烷作为洗脱液，产生无色浆状的标题化合物，。
步骤2：{(1S)-1-[2-(甲硫基)乙基]-2-氧代丙基}氨基甲酸叔丁基酯
向冷却至-78℃的得自步骤1的N2-(叔丁氧羰基)-N1-甲氧基-N1-甲基-L-蛋氨酸(200mg，0.68mmol)的THF溶液中加入1.4M甲基锂的己烷溶液(1.1mL，1.5mmol)。在此温度下搅拌反应2小时，然后用25％W/v乙酸铵水溶液将其冷猝灭。用EtOAc萃取混合物，用Na2SO4干燥有机层、过滤和浓缩。粗制品经色谱法进行纯化，使用EtOAc和己烷作为洗脱液，产生无色胶状的标题化合物。
步骤3：(3S)-3-氨基-5-(甲硫基)戊-2-酮盐酸盐
向得自步骤2的{(1S)-1-[2-(甲硫基)乙基]-2-氧代丙基}氨基甲酸叔丁基酯(140mg，0.57mmol)中加入4.0M的在1，4-二氧六环中的氯化氢溶液(3mL，12mmol)。将所得混合物在室温下搅拌1小时。在真空中除去溶剂并所得残余物与甲苯(2×10mL)共沸蒸馏，产生白色固体的标题化合物。
步骤4：N1-{(1S)-1-[2-(甲硫基)乙基]-2-氧代丙基}-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))联苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺
将得自步骤3的(3S)-3-氨基-5-(甲硫基)戊-2-酮盐酸盐(104mg，0.57mmol)、N-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))-1，1’-联苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸(实施例4步骤6，127mg，0.2mmol)和0-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐(187mg，0.49mmol)的DMF(1mL)悬浮液冷却至10℃，然后将三乙胺(115μL，0.83mmol)缓缓加入。将反应混合物在室温下搅拌3小时。将产生的混合物在EtOAc和半饱和NaHCO3水溶液之间进行分配。用Na2SO4干燥有机层、过滤和浓缩。粗制品经色谱法进行纯化，使用EtOAc和己烷作为洗脱液，产生白色海棉状的标题化合物。
MS(+ESI)：573.5[M+1]+.
                    实施例16
N1-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))联苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酰-L-蛋氨酸酰胺的合成
使用实施例15步骤4所述的方法，将其中(3S)-3-氨基-5-(甲硫基)戊-2-酮盐酸盐替换为L-蛋氨酸酰胺盐酸盐，制备得到标题化合物，以及从EtOAc和己烷(1∶2)中进行结晶，得到白色固体的标题产物。
MS(+ESI)：574.3[M+1]+.
                    实施例17
N-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))联苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酰-L-蛋氨酸的合成
Figure A20048002452000772
步骤1：N-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))联苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酰-L-蛋氨酸甲酯的合成
使用实施例15步骤4所述的方法，其中将(3S)-3-氨基-5-(甲硫基)戊-2-酮盐酸盐替换为甲基L-甲二磺酸盐盐酸盐，制备得到标题化合物，以及从EtOAc和己烷(1∶2)中进行结晶，得到白色固体的标题化合物。
MS(+ESI)：589.3[M+1]+.
步骤2：N-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))联苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酰-L-蛋氨酸
向得自步骤1的N-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))联苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酰-L-蛋氨酸甲酯(100mg，0.17mmol)的THF(2mL)和甲醇(0.5mL)冰冷溶液中，滴加加入1.0N LiOH(0.25mL，0.25mmol)，在室温下搅拌所得的溶液18小时。溶液在EtOAc和水之间进行分配，加入1N HCl(1mL)。用Na2SO4干燥有机层、过滤和浓缩。粗制品经色谱法纯化，使用EtOH、EtOAc和AcOH作为洗脱液，产生白色海棉状的标题化合物，将该化合物从EtOAc和己烷(6mL，1∶2)中进行结晶，得到白色固体。
MS(+ESI)：575.0[M+1]+.
                    实施例18
N1-[(1S)-1-氰基-3-(甲硫基)丙基]-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))联苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺的合成
将得自实施例16的N1-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))联苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酰-L-蛋氨酸(350mg，0.6mmol)和吡啶(85μL，1.05mmol)的1，4-二氧六环溶液冷却至10℃。然后，将三氟醋酐滴加加入(65μL，0.46mmol)和将反应混合物在室温下搅拌1小时。反应混合物在EtOAc和水之间得到分配。用Na2SO4干燥有机层、过滤和浓缩。粗制品经色谱法进行纯化，使用EtOAc和己烷作为洗脱液，产生无色胶状的标题化合物。
MS(+ESI)：556.3[M+1]+.
                    实施例19
N-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))联苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酰-N1-甲基-L-蛋氨酸的合成
Figure A20048002452000791
将DMF中的得自实施例17的N-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))联苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酰-L-蛋氨酸(100mg，0.17mmol)、盐酸甲胺(35mg，0.52mmol)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐(150mg，0.39mmol)悬浮液冷却至10℃，并且然后将三乙胺(110μL，0.79mmol)缓缓加入。在室温下搅拌反应混合物18小时。将产生的混合物在EtOAc和半饱和NaHCO3水溶液之间进行分配。用Na2SO4干燥有机层、过滤和浓缩。粗制品经色谱法进行纯化，使用EtOAc和己烷作为洗脱液，产生白色海棉状的标题化合物，将该化合物从EtOAc和己烷中结晶而产生白色固体。
MS(+ESI)：588.1[M+1]+.
                    实施例20
(2S)-2-{[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]氨基}-4，4-二氯-N-(1-氰基环丙基)丁酰胺的合成
Figure A20048002452000801
步骤1：(2S)-2-氨基-4，4-二氯丁酸乙酯
向25mL冰冷乙醇中，滴加加入乙酰氯(2.0mL，28mmol)。然后将(S)-2-氨基-4，4-二氯丁酸(1.0g，5.8mmol)[根据Chem.-Ztg，114，249-251(1990)和Synthesis，1996，1419制备得到]一次性加入。将混合物回流18h，浓缩和将残余物在饱和NaHCO3溶液和二氯甲烷之间进行分配。将有机物分离干燥(Na2SO4)、过滤和浓缩，产生油状残余物，将该残余物通过硅胶柱进行纯化，用30％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，产生纯的标题化合物。
步骤2：(2S)-2-{(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]氨基}-4，4-二氯丁酸乙酯
将(2S)-2-氨基-4，4-二氯丁酸乙酯(298mg，1.49mmol)、三氟醋酸(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基酯(862mg，2.2mmol)[根据J.Am.Chem.Soc.，1983，105，2343-2350制备得到]和二异丙基乙胺(284mg，2.2mmol)在60℃和N2气氛下均匀加热6小时。将混合物在NaHCO3溶液和乙酸乙酯之间进行分配。将有机层分离、干燥(Na2SO4)、过滤和浓缩。通过ISCO柱色谱(乙酸乙酯/己烷梯度为2％～15％)进行纯化而提供标题化合物，为87∶13的非对应异构体混合物。
MS(+APCI)：438.8[M+1]和440.8[M+3].
步骤3：(2S)-2-{(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]氨基}-4，4-二氯丁酸
向(2S)-2-{[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]氨基}-4，4-二氯丁酸乙酯(325mg，0.74mmol)的THF(5mL)溶液中加入三甲基硅醇钾(178mg，1.39mmol)。将混合物在室温下搅拌1.5小时，然后进行浓缩。将残余物在乙酸乙酯和1N HCl之间进行分配。将有机层分离、干燥(Na2SO4)、过滤和浓缩，得到油状的标题化合物，将该化合物照此样用于下一步中。
MS(-APCI)：407.9[M-1].
步骤4：(2S)-2-{[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]氨基}-4，4-二氯-N-(1-氰基环丙基)丁酰胺
将(2S)-2-{[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]氨基}-4，4-二氯丁酸(275mg，0.67mmol)、1-氨基-1环丙烷腈盐酸盐(159mg，1.34mmol)和HATU偶合剂(305mg，0.8mmol)的混合物溶于DMF(4mL)中。将三乙胺(0.3mL，2.1mmol)加入，搅拌混合物过夜，然后将其倒入NaHCO3溶液和乙酸乙酯中。将有机层分离，用盐水、1N HCl和盐水洗涤。将有机层分离、干燥(Na2SO4)、过滤和浓缩，产生393mg油，该油经柱色谱纯化，用6∶3∶1的甲苯∶乙酸乙酯∶二氯甲烷洗脱。用乙醚挥发纯产物得到白色固体的作为85∶15非对映异构体混合物的标题化合物。
MS(-APCI)：471.9[M-1].
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)“主要异构体”，δ8.95(s，1H)，7.61(d，2H，7.38(d，2H)，6.19(dd，1H)，4.38-4.25(m，1H)，3.45-3.38(bs，2H)，2.5-2.3(m，2H)，1.43-1.32(m，2H)，1.02-0.95(m，1H)，0.75-0.68(m，1H).
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)“次要异构体”，δ8.89(s，1H)，7.65-7.61(m，1H)，7.43(d，1H)，6.23-6.19(m，1H)，4.38-4.25(m，1H)，3.45-3.38(bs，2H)，2.5-2.3(m，2H)，1.43-1.32(m，2H)，1.02-0.95(m，1H)，0.75-0.68(m，1H).
                    实施例21
N1-(1-氰基环丙基)-N2-{(1S)-2，2-二氟-1-[4-(3-甲基-2-噻吩基)苯基]乙基}-L-亮氨酸酰胺。
Figure A20048002452000821
步骤1：(2S)-1-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-N-[(1Z)-2，2-二氟亚乙基]-4-戊烷-2-胺的制备
将在苯中的(2S)-1-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-4-甲基戊烷-2-胺(实施例4步骤1，8.5g，36.8mmol)和二氟乙醛乙基半缩醛(5.0g，39.7mmol)混合物用Dean-stark阱回流过夜。将溶剂在真空下除去。将残余物通过短二氧化硅柱和用己烷：EtOAc(10∶1)进行洗脱，产生浅黄色油状的标题化合物。
1H NMR(CD3COCD3)δ7.72(m，1H)，6.12(dt，1H)，3.70(dd，1H)，3.54(dd，1H)，3.36(m，1H)，1.48(m，2H)，1.32(m，1H)，0.95-0.78(m，15H)，0.06(s，3H)，0.02(s，3H).
步骤2：(2S)-1-{[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2-二氟乙基]氨基}-4-甲基戊烷-1-醇的制备
将n-BuLi(2.5M己烷溶液，1.43mL)加入到-70℃的1，4-二溴苯(884毫克)的THF溶液中，并且将混合物搅拌15分钟。然后将(2S)-1-([叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-4-甲基-N-[(1E)-2，2-二氟亚乙基]戊-2-胺(1.0g)的THF(8.5mL)溶液，并且将混合物搅拌1.5小时。然后在剧烈搅拌下将其缓缓倒入冰冷的饱和氯化铵溶液中。将其用3份乙酸乙酯进行萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥和在真空下蒸发溶剂得到残余物，将该残余物在SiO2上进行纯化，使用己烷和乙酸乙酯梯度(90∶10～75∶25)洗脱液，得到标题化合物。将由上所得的化合物(200毫克)溶于CH3CN(4mL)中，将溶液冷却至0℃。将HF-吡啶(40□M)滴加加入和使混合物反应16小时。将其倒入饱和碳酸氢钠溶液中，将乙酸乙酯加入和将其剧烈摇动。将有机层进行分离，以及更进一步用乙酸乙酯(2×50mL)萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥和在真空下将溶剂除去得到残余物，将该残余物在SiO2上进行纯化，使用己烷和乙酸乙酯梯度(80∶20～60∶40)洗脱液，得到标题化合物。
1H NMR(CD3COCD3)δ7.6(2H，d)，7.45(2H，d)，6.0(1H，dt)，4.25(1H，m)，3.65(1H，t)，3.5-3.55(1H，m)，3.3-3.35(1H，m)，2.55-2.65(1H，m)，2.15-2.25(1H，m)，1.6-1.7(1H，m)，1.3-1.4(1H，m)，1.2-1.3(1H，m)，0.9(3H，d)，0.8(3H，d).
步骤3：N-[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2-二氟乙基]-L-亮氨酸的制备
将H5IO6/CrO3悬浮液(5.5mL的0.40M CH3CN溶液；参阅下面的注释)冷却至0℃，和将得自步骤2的醇(250mg)的CH3CN(3.7mL)溶液滴加加入。将混合物在0～5℃下搅拌3.5小时。经过此阶段后，将2.0mL氧化剂加入。1.5小时后，在剧烈搅拌下将其倒入Na2HPO4缓冲溶液(10mL中含0.4g)中，将混合物用乙醚(3×20mL)进行萃取。将合并的乙醚萃取物用水与盐水(1∶1)洗涤、用稀NaHSO3溶液和盐水洗涤。将有机萃取液用硫酸镁干燥、过滤和将溶剂蒸干得到残余物，不经更进一步纯化该残余物即可使用。
注释：氧化剂(H5IO6/CrO3)如Tetrahedron Letters 39(1998)5323-5326所述进行制备，但是使用HPLC级的CH3CN(含有0.5％水)；没有加入水。
1H NMR(CD3COCD3)δ7.55(2H，d)，7.4(2H，d)，6.05(1H，dt)，3.95-4.05(1H，m)，3.45(1H，t)，2.7-3.0(宽m，NH/OH)，1.85-1.95(1H，m)，1.5(2H，t)，0.95(3H，d)，0.9(3H，d).
步骤4：N2-[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2-二氟乙基]-N1-(1-氰基环丙基)-L-亮氨酸酰胺的制备
向得自步骤3的酸(258mg)的DMF(2mL)溶液中，加入O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐(337mg)和1-氨基环丙烷腈盐酸盐(175mg)。搅拌1分钟以后，将二异丙基乙胺(0.45mL)滴加加入和将混合物搅拌16小时。将其倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，和用乙酸乙酯(3×15mL)进行萃取。将合并的萃取物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥和在真空下将溶剂除去。通过色谱法在SiO2上使用己烷和乙酸乙酯(80∶20～50∶50)对残余物进行纯化。
1H NMR(CD3COCD3)δ8.05(1H，m)，7.55(2H，d)，7.4(2H，d)，6.05(1H，dt)，3.95-4.05(1H，m)，3.25-3.3(1H，m)，2.4-2.45(1H，m)，1.8-1.9(1H，m)，1.4-1.55(2H，m)，0.95-1.1(2H，m)，0.95(6H，t).
步骤5：N1-(1-氰基环丙基)-N2-{(1S)-2，2-二氟-1-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基]苯基]乙基}-L-亮氨酸酰胺的制备
向得自步骤4的芳基溴化物(5.23g)和双(四甲基乙二醇化)二硼(3.8g)的DMF(60mL)溶液中加入乙酸钾(3.7g)和PdCl2dppf(309mg)。使氮气流通过悬浮液1分钟。将反应混合物在80℃下加热16h。使其冷却至室温并转入分液漏斗中。将饱和NaHCO3(～120mL)溶液和EtOAc(100mL)加入。将有机层进行分离，以及更进一步用2份EtOAc(2×50mL)对水层进行萃取。将合并的有机层用盐水洗涤、用Na2SO4干燥并浓缩。将粗物质在硅胶上进行纯化(己烷/EtOAc为80∶20～50∶50)，得到期望的硼酸盐。
1H NMR(CD3COCD3)δ8.15(bs，NH)，7.72(2H，d)，7.40(2H，d)，6.02(1H，dt)，3.95(1H，m)，3.25(1H，q)，2.38(1H，m)，1.72(1H，m)，1.27-1.50(16H，m)，0.85-1.05(8H，m).
步骤6：N1-(1-氰基环丙基)-N2-{(1S)-2，2-二氟-1-[4-(3-甲基-2-噻吩基)苯基]乙基}-L-亮氨酸酰胺的制备。
在可密封的微波管中，使氮气流通过悬浮液1分钟，该悬浮液由得自步骤5的芳基硼酸盐(200mg)、2-溴-3-甲基噻吩(115mg)、2MNa2CO3(0.65mL)、DMF(4.3mL)和PdCl2dppf(11mg)构成。然后将混合物在微波(SmithCreator)中加热500秒(固定维持时间：关闭)，加热至120℃(吸收水平：高)。将其冷却至室温，用乙酸乙酯稀释和将其倒入饱和碳酸氢钠溶液中。将乙酸乙酯层进行分离，以及更进一步用乙酸乙酯(2×15mL)萃取水层。将合并的乙酸乙酯萃取液用盐水洗涤和用硫酸镁干燥。除去溶剂得到残余物，将该残余物通过色谱法在SiO2上进行纯化，使用己烷和乙酸乙酯梯度(己烷/EtOAc为80∶20～50∶50)。
1H NMR(CD3COCD3)δ8.13(bs，NH)，7.50(4H，s)，7.37(1H，d)，6.97(1H，d)，6.05(1H，t)，4.00(1H，m)，3.30(1H，m)，2.42(1H，m)，2.32(3H，s)，1.85(1H，m)，1.40-1.53(2H，m)，1.30-1.40(2H，m)，0.85-1.03(8H，m).
                    实施例22
N1-(1-氰基甲苯基)-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))-1，1’-联苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺的合成
Figure A20048002452000851
向N-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))-1，1’-联苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸(实施例4步骤6，21mg，0.046mmol)的DMF混合物中加入2-苯基氨基乙腈盐酸盐(8.6mg，0.051mmol)。将N-甲基吗啉(41μL，0.368mmol)和环化的三聚体点50％的N-丙基膦酸酐(55μL，0.092mmol)顺序加入，将混合物搅拌过夜。挥发物在GenevacHT-4中得到蒸发。将残余物溶于CH2Cl2(5mL)中，用BTMA碳酸盐硅胶处理30分钟和将其通过SiOH SPE筒(500mg)过滤。用大孔树脂A-21处理溶液，并且再过滤一次。将溶液浓缩，得到1∶1的差向异构体混合物。
MS(-ESI)：556.0[M-1]-
                    实施例23
N1-(氰基环丙基)-N2-{(1S)-2，2-二氟-1-[2’，4’-二氟-1，1’-联苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺的合成
Figure A20048002452000861
使用实施例21所述的步骤，将其中步骤6中的2-溴-3-甲基噻吩替换为1-溴-2，4-二氟代苯，得到白色固体的标题化合物。
MS(+API)：448.1[M+1]+.
                    实施例24
步骤4：3-氧代-4-[(N-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))联苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酰)氨基]氮杂环庚不庚烷-1-羧酸苄基酯的合成
Figure A20048002452000862
步骤1：3-羟基-4-[(N-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))联苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酰)氨基]氮杂环庚烷-1-羧酸苄基酯
向N-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))-1，1’-联苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸(实施例4步骤6，605mg，1.37mmol)、4-氨基-3-羟基氮杂环庚烷-1-羧酸苄基酯(WO 0134565，J.Med.Chem.，44，1380，2001，326mg，1.23mmol)和PyBOP(724mg，1.39mmol)的10mL DMF溶液中加入三乙胺(0.45mL，3.2mmol)，将混合物搅拌1h，升温至室温1h，然后在NaHCO3和乙醚之间进行分配。将有机相用pH值为3.5的磷酸盐缓冲液洗涤，然后用盐水洗涤，用MgSO4干燥。通过硅胶色谱法(梯度为65％乙酸乙酯：己烷～100％乙酸乙酯)进行纯化，提供了作为同分异构体混合物的标题化合物。
步骤2：3-氧代-4-[(N-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))联苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酰)氨基]氮杂环庚烷-1-羧酸苄基酯
向0℃的3-羟基-4-[(N-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))联苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酰)氨基]氮杂环庚烷-1-羧酸苄基酯(98mg，0.14mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液中加入Dess-Martin过碘烷(periodinane)。将混合物升温至室温，搅拌15h，然后在乙酸乙酯和1M NaOH之间进行分配。将有机相用盐水洗涤和用MgSO4干燥。通过硅胶色谱法(梯度为40％～70％乙酸乙酯：己烷)进行纯化，提供了作为非对应异构体混合物的标题化合物。
MS(+ESI)：688.4[M+1]+
                    实施例25
N1-[3-氧代-1-(吡啶-2-基磺酰基)氮杂环庚烷-4-基]-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))联苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺的合成
Figure A20048002452000871
步骤1：N1-[3-羟基氮杂环庚烷-4-基]-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))联苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺
使苄基3-羟基-4-[(N-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))联苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酰)氨基]氮杂环庚烷-1-羧酸酯(实施例24步骤1，710mg，1.03mmol)和10％ Pd/C(490mg)的2∶1 EtOH∶EtOAc(80mL)溶液充满氢气，和在氢气鼓泡下搅拌2h。将反应混合物滤过硅藻土和进行浓缩，产生标题化合物。
步骤2：N1-[3-羟基-1-(吡啶-2-基磺酰基)氮杂环庚烷-4-基]-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))联苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺
向0℃的 N 1-(3-羟基氮杂环庚烷-4-基)-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))联苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺(567mg，1.02mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中加入三乙胺(0.25mL，1.8mmol)和2-吡啶磺酰氯(204mg，1.15mmol)。将混合物升温至室温保持1h，然后将其在二氯甲烷和NaHCO3之间进行分配。将有机相用盐水洗涤，滤过棉纱并进行浓缩。通过硅胶色谱法(梯度为70％乙酸乙酯：己烷～100％乙酸乙酯)进行纯化，得到作为同分异构体混合物的标题化合物。
步骤3：N1-[3-氧代-1-(吡啶-2-基磺酰基)氮杂环庚烷-4-基]-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))联苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺
向室温的 N 1-[3-羟基-1-(吡啶-2-基磺酰基)氮杂环庚烷-4-基]-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4’-((甲磺酰基))联苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺(460mg，0.73mmol)的二氯甲烷(15mL)溶液中加入Dess-Martin过碘烷。将混合物搅拌1h，然后用二氯甲烷稀释，用1MNaOH洗涤，然后用盐水洗涤。将有机相滤过棉纱和进行浓缩。通过硅胶色谱法(梯度为60％乙酸乙酯：己烷～100％乙酸乙酯)进行纯化，得到作为非对应异构体混合物的标题化合物。
MS(+ESI)：695.3[M+1]+
                    实施例26
N2-{(4-溴苯基)(4-甲氧基苯基)甲基}-N1-(氰甲基)-L-亮氨酸酰胺的合成
步骤1：(4-溴苯基)(4-甲氧苯基)甲醇
将1，4-二溴苯(9.1g，38mmol)的THF(80mL)溶液冷却至-78℃，将正丁基锂(16mL，2.5M己烷溶液)滴加加入。15分钟后，将对甲氧基苯甲醛(5g，37mmol，在4.5mL THF中)滴加加入。再经过20分钟后，将反应混合物用甲醇(5mL)和饱和氯化铵水溶液(100mL)猝灭。将反应混合物用三份100mL乙酸乙酯进行萃取，以及将合并的有机层用盐水洗涤(50mL)。用硫酸镁干燥有机层和在减压下浓缩，产生标题化合物，可以直接用于下一步中。
步骤2：N-[(4-溴苯基)(4-甲氧苯基)甲基]-L-亮氨酸甲酯
将(4-溴苯基)(4-甲氧苯基)甲醇(1.15g，3.9mmol)与四丁溴化铵(130mg，0.4mmol)一起溶于二氯甲烷(4mL)中，。然后将48％氢溴酸水溶液(3.3mL)加入，将反应混合物剧烈搅拌40小时。将产物在水(20mL)和二氯甲烷(30mL)之间进行分配和用硫酸镁进行干燥。将有机层浓缩至大约10mL，和将L-亮氨酸甲酯(游离碱)以二氯甲烷(20mL)溶液的形式加入，继之以将三乙胺(3mL)加入。将反应混合物在35℃下搅拌20分钟(出现白色沉淀)。在乙醚(50mL)和水(30mL)中对反应进行调整。将两相分离，用饱和氯化铵水溶液(30mL)和盐水(30mL)洗涤有机层。用硫酸镁干燥和在减压下浓缩后，制备得到N-(4-溴苯基)(4-甲氧苯基)甲基]-L-亮氨酸甲酯，并在硅胶上使用10％乙酸乙酯、90％己烷进行纯化。
步骤3：N-[(4-溴苯基)(4-甲氧苯基)甲基]-L-亮氨酸
向室温下的60mL的在大约2∶1∶1 THF/MeOH/水中的N-[(4-溴苯基)(4-甲氧苯基)甲基]-L-亮氨酸甲酯(1.25g，3mmol)溶液中，加入氢氧化锂一水合物(250mg，6mmol)。搅拌整夜混合物并进行浓缩。将残余物在二氯甲烷(50mL)和pH值为3.5的磷酸盐缓冲液(50mL)之间进行分配。将水相分离和用两份50mL二氯甲烷洗涤。将有机相用硫酸钠干燥和在减压下浓缩，得到一种固体，该固体在极少量冷的二氯甲烷中研磨得到N-[(4-溴苯基)(4-甲氧苯基)甲基]-L-亮氨酸。
步骤4：N2-[(4-溴苯基)(4-甲氧苯基)甲基]-N1-(氰甲基)-L-亮氨酸酰胺
将N-[(4-溴苯基)(4-甲氧苯基)甲基]-L-亮氨酸(149mg，0.37mmol)和氨基乙腈盐酸盐(87mg，0.73mmol)的混合物溶于5mL二甲基甲酰胺中。将HATU(153mg，0.403mmol)一次性加入，然后加入三乙胺(0.18mL，1.31mmol)。将混合物搅拌过夜，然后将其倒入pH值为4的磷酸盐缓冲液(40mL)中和用乙酸乙酯(50mL)进行萃取。用三份50mL水洗涤有机相，用硫酸钠干燥和在减压下浓缩。在硅胶上纯化(30％乙酸乙酯/己烷)提供了N2-[(4-溴苯基)(4-甲氧苯基)甲基]- N 1-(氰甲基)-L-亮氨酸酰胺。
MS(+ESI)：443.9[M+1].
组织蛋白酶结合
实施例1～26中每个实施例都服从以下过程：在电脑生成的模型中，化合物在组织蛋白酶K活性部位被能量最小化。组织蛋白酶K电脑生成的模型基于蛋白质数据库入口1MEM的晶体结构，已经将氢加入到该晶体结构上，但是在能量最小化开始时没有进行非氢的能量最小化(因此蛋白质侧链保持X射线晶体结构的几何构型)。化合物的结合方向根据以下设想进行确定：1)共价键在S1和化合物中被标记为“1”的亲电碳原子之间得以形成。结合用于本发明的化学式，这确定了对应于R1和R2的分子片段；2)对于对应于本发明化学式的化合物片断，胺上的氢原子与Gly66上的氧原子形成氢键，因此在这两个原子之间的距离小于4A；3)对应于R2和R2的化合物片段，根据化合物化学结构上的标记碳原子，分别处于组织蛋白酶亚位点S2和S3中。例如，化学结构中被标记为“2”的碳原子位于S2中，而标记为“3”的碳原子位于S3中，这样使得距离表1中组织蛋白酶Cα的距离在表1给出距离的一埃范围内。虽然这些放置是人工和近似操作，但是对它们进行有意地放置以产生有利的相互作用。对于作为外消旋混合物的合成化合物，对应于本发明化学式的对映异构体被用于计算。使用软件MacroModel与MMFFs力场，能量最小化得以进行。化合物的所有原子都被允许移动，但是对于组织蛋白酶K，仅仅具有在化合物6范围内的原子的蛋白质侧链允许移动；在这种情况下，整个侧链都可以移动。对用于能量最小化的缺省参数进行选择，同时连续溶剂对应于水。能量最小化的结果对于化合物是有利的：在配体和组织蛋白酶K活性部位之间不存在不良的空间相互作用，并且活性部位和配体之间的有利相互作用(亲油相互作用和氢键结合)由表1中给出的距离得到证实。表1给出的距离取自如上所述由化合物和组织蛋白酶K形成的能量最小化的配体-酶配合物。标记为“Gly66氢键”的栏给出了形成于化合物胺上的氢与Gly 66上的氧之间的氢键的距离。表1中R2下的三个栏都以对应于组织蛋白酶中的一个Cα的Cα标记为标题；这些栏给出了在组织蛋白酶中标明的Cα和化合物结构中标记为“2”的碳原子之间的距离。类似地，表1中“R2”下的两个栏给出了在组织蛋白酶中标明的Cα和化合物结构中标记为“3”的碳原子之间的距离。形成于组织蛋白酶中残基25的半胱氨酸的硫和该化合物结构中标记为“1”的亲电碳原子之间的共价键，确保了与该化合物结构中标记为“1”的碳原子的距离＜5。由此，实施例1～26满足在本文中所述的距离标准。
表1.从组织蛋白酶K中的原子至实施例1～26中的原子的距离(以表示)。参阅正文。
  实施例                   R2           R3
  Gly66氢键   Cα26   Cα68   Cα134   Cα66   Cα60
  1   2.4   6.4   7.7   5.5   4.5   6.1
  2   2.5   6.4   7.7   5.5   4.4   5.9
  3   2.5   6.5   7.7   5.5   4.8   6.3
  4   2.6   6.4   7.7   5.6   4.8   6.3
  5   2.6   6.4   7.7   5.4   4.8   6.3
  6   2.5   6.4   7.7   5.5   4.7   6.3
  7   2.5   6.4   7.7   5.5   4.6   6.1
  8   2.5   6.5   7.6   5.4   4.7   6.3
  9   2.4   6.5   7.8   5.3   4.6   6.2
  10   2.5   6.8   8.0   5.4   4.6   6.1
  11   2.6   6.6   7.7   5.4   4.8   6.3
  12   2.6   6.2   7.7   5.6   4.8   6.5
  13   2.7   6.7   7.9   5.6   5.0   6.5
  14   2.5   6.5   7.7   5.5   4.5   6.0
  15   2.5   6.5   7.7   5.4   4.7   6.3
  16   2.4   6.5   7.5   5.4   4.7   6.2
  17   2.4   6.6   7.5   5.4   4.7   6.2
  18   2.4   6.4   7.5   5.4   4.7   6.2
  19   2.5   6.7   7.5   5.4   4.8   6.2
  20   2.3   6.4   7.5   5.5   4.5   6.1
  21   2.4   6.4   7.6   5.4   4.6   6.2
  22   2.5   6.5   7.6   5.5   4.7   6.2
  23   2.4   6.4   7.6   5.4   4.7   6.3
  24   2.0   6.7   7.3   5.4   4.6   6.0
  25   2.4   6.5   7.6   5.4   4.6   6.2
  26   2.4   6.4   7.7   5.5   4.8   6.4
纯化的酶试验
公开于本申请中的化合物在下面试验中显示出活性。此外，公开于本申请的化合物相对于先前公开的化合物具有增强的药理学分布。
组织蛋白酶K试验
制备得到试验化合物在二甲基亚砜(DMSO)中的从500μM直到0.0085μM的系列稀释物。然后将2μL取自各稀释物的DMSO加入到50μL试验缓冲液(MES，50mM(pH值5.5)；EDTA，2.5mM；DTT，2.5mM和10％DMSO))和25μL在试验缓冲溶液中的人类组织蛋白酶K(0.4nM)中。将试验溶液在摇动板上混合5～10秒钟并且在室温下培养15分钟。将在25μL评测缓冲液中的Z-Leu-Arg-AMC(8μM)加入到评测溶液中。通过分光荧光测定法(Exλ＝355nm；Emλ＝460nm)，对香豆素离去基团(AMC)的水解跟踪10分钟。通过将实验值拟合至关于剂量反应曲线的标准数学模型，计算得到抑制作用百分比。
组织蛋白酶L试验
制备得到试验化合物在二甲基亚砜(DMSO)中的从500μM直至0.0085μM的系列稀释物(1/3)。然后将2μL取自各稀释物的DMSO加入到50μL试验缓冲液(MES，50mM(pH值5.5)；EDTA，2.5mM；DTT，2.5mM和10％DMSO)和25μL在试验缓冲液溶液中的人类组织蛋白酶L(0.5nM)中。将试验溶液在摇动板上混合5～10秒钟并在室温下培养15分钟。将在25μL评测缓冲液中的Z-Leu-Arg-AMC(8μM)加入到评测溶液中。通过分光荧光测定法(Exλ＝355nm；Emλ＝460nm)，对香豆素离去基团(AMC)的水解跟踪10分钟。通过将实验值拟合至关于剂量反应曲线的标准数学模型，计算得到抑制作用百分比。
组织蛋白酶B试验
制备得到试验化合物在二甲基亚砜(DMSO)中中从500μM至0.0085μM的系列稀释物(1/3)。然后将2μL取自各稀释物的DMSO加入到50μL试验缓冲液(MES，50mM(pH值5.5)；EDTA，2.5mM；DTT，2.5mM和10％DMSO)和25μL在试验缓冲液溶液中的人类组织蛋白酶B(4.0nM)中。将试验溶液在摇动板上混合5～10秒钟并在室温下培养15分钟。将在25μL评测缓冲液中的Z-Leu-Arg-AMC(8μM)加入到评测溶液中。通过分光荧光测定法(Exλ＝355nm；Emλ＝460nm)，对香豆素离去基团(AMC)的水解跟踪10分钟。通过将实验值拟合至关于剂量反应曲线的标准数学模型，计算得到抑制作用百分比。
组织蛋白酶S试验
制备得到试验化合物在二甲基亚砜(DMSO)中从500μM至0.0085μM的系列稀释物(1/3)。然后将2μL取自各稀释物的DMSO加入到50μL试验缓冲液(MES，50mM(pH值5.5)；EDTA，2.5mM；DTT，2.5mM和10％DMSO)和25μL在试验缓冲液溶液中的人类组织蛋白酶S(20nM)中。将试验溶液在摇动板上混合5～10秒钟和在室温下培养15分钟。将在25μL评测缓冲液中的Z-Leu-Arg-AMC(8μM)加入到评测溶液中。通过分光荧光测定法(Exλ＝355nm；Emλ＝460nm)，对香豆素离去基团(AMC)的水解跟踪10分钟。通过将实验值拟合至关于剂量反应曲线的标准数学模型，计算得到抑制作用百分比。
                                序列表
<110>Merck Frosst.
     Bayly，Christopher
     Black.Cameron
     McKay，Daniel
<120>组织蛋白酶抑制剂
<130>MCO78Y
<150>60/498,017
<151>2003-08-27
<160>13
<170>FastSEQ for Windows Version 4.0
<210>1
<211>215
<212>PRT
<213>人
<400>1
Ala Pro Asp Ser Val Asp Tyr Arg Lys Lys Gly Tyr Val Thr Pro Val
 1               5                  10                  15
Lys Asn Gln Gly Gln Cys Gly Ser Cys Trp Ala Phe Ser Ser Val Gly
            20                  25                  30
Ala Leu Glu Gly Gln Leu Lys Lys Lys Thr Gly Lys Leu Leu Asn Leu
        35                  40                  45
Ser Pro Gln Asn Leu Val Asp Cys Val Ser Glu Asn Asp Gly Cys Gly
    50                  55                  60
Gly Gly Tyr Met Thr Asn Ala Phe Gln Tyr Val Gln Lys Asn Arg Gly
65                  70                  75                  80
Ile Asp Ser Glu Asp Ala Tyr Pro Tyr Val Gly Gln Glu Glu Ser Cys
                85                  90                  95
Met Tyr Asn Pro Thr Gly Lys Ala Ala Lys Cys Arg Gly Tyr Arg Glu
            100                 105                 110
Ile Pro Glu Gly Asn Glu Lys Ala Leu Lys Arg Ala Val Ala Arg Val
        115                 120                 125
Gly Pro Val Ser Val Ala Ile Asp Ala Ser Leu Thr Ser Phe Gln Phe
    130                 135                 140
Tyr Ser Lys Gly Val Tyr Tyr Asp Glu Ser Cys Asn Ser Asp Asn Leu
145                 150                 155                 160
Asn His Ala Val Leu Ala Val Gly Tyr Gly Ile Gln Lys Gly Asn Lys
                165                 170                 175
His Trp Ile Ile Lys Asn Ser Trp Gly Glu Asn Trp Gly Asn Lys Gly
            180                 185                 190
Tyr Ile Leu Met Ala Arg Asn Lys Asn Asn Ala Cys Gly Ile Ala Asn
        195                 200                 205
Leu Ala Ser Phe Pro Lys Met
    210                 215
<210>2
<211>254
<212>PRT
<213>人
<400>2
Leu Pro Ala Ser Phe Asp Ala Arg Glu Gln Trp Pro Gln Cys Pro Thr
 1               5                  10                  15
Ile Lys Glu Ile Arg Asp Gln Gly Ser Cys Gly Ser Cys Met Ala Phe
            20                  25                  30
Gly Ala Val Glu Ala Ile Ser Asp Arg Ile Cys Ile His Thr Asn Ala
        35                  40                  45
His Val Ser Val Glu Val Ser Ala Glu Asp Leu Leu Thr Cys Cys Gly
    50                  55                  60
Ser Met Cys Gly Asp Gly Cys Asn Gly Gly Tyr Pro Ala Glu Ala Trp
65                  70                  75                  80
Asn Phe Trp Thr Arg Lys Gly Leu Val Ser Gly Gly Leu Tyr Glu Ser
                85                  90                  95
His Val Gly Cys Arg Pro Tyr Ser Ile Pro Pro Cys Glu His His Val
            100                 105                 110
Asn Gly Ser Arg Pro Pro Cys Thr Gly Glu Gly Asp Thr Pro Lys Cys
        115                 120                 125
Ser Lys Ile Cys Glu Pro Gly Tyr Ser Pro Thr Tyr Lys Gln Asp Lys
    130                 135                 140
His Tyr Gly Tyr Asn Ser Tyr Ser Val Ser Asn Ser Glu Lys Asp Ile
145                 150                 155                 160
Met Ala Glu Ile Tyr Lys Asn Gly Pro Val Glu Gly Ala Phe Ser Val
                165                 170                 175
Tyr Ser Asp Phe Leu Leu Tyr Lys Ser Gly Val Tyr Gln His Val Thr
            180                 185                 190
Gly Glu Met Met Gly Gly His Ala Ile Arg Ile Leu Gly Trp Gly Val
        195                 200                 205
Glu Asn Gly Thr Pro Tyr Trp Leu Val Ala Asn Ser Trp Asn Thr Asp
    210                 215                 220
Trp Gly Asp Asn Gly Phe Phe Lys Ile Leu Arg Gly Gln Asp His Cys
225                 230                 235                 240
GlyIle Glu Ser Glu Val Val Ala Gly Ile Pro Arg Thr Asp
               245                 250
<210>3
<211>214
<212>PRT
<213>人
<400>3
Ala Pro Pro Glu Trp Asp Trp Arg Ser Lys Gly Ala Val Thr Lys Val
 1               5                  10                  15
Lys Asp Gln Gly Met Cys Gly Ser Cys Trp Ala Phe Ser Val Thr Gly
            20                  25                  30
Asn Val Glu Gly Gln Trp Phe Leu Asn Gln Gly Thr Leu Leu Ser Leu
        35                  40                  45
Ser Glu Gln Glu Leu Leu Asp Cys Asp Lys Met Asp Lys Ala Cys Met
    50                  55                  60
Gly Gly Leu Pro Ser Asn Ala Tyr Ser Ala Ile Lys Asn Leu Gly Gly
65                  70                  75                  80
Leu Glu Thr Glu Asp Asp Tyr Ser Tyr Gln Gly His Met Gln Ser Cys
                85                  90                  95
Asn Phe Ser Ala Glu Lys Ala Lys Val Tyr Ile Asn Asp Ser Val Glu
            100                 105                 110
Leu Ser Gln Asn Glu Gln Lys Leu Ala Ala Trp Leu Ala Lys Arg Gly
        115                 120                 125
Pro Ile Ser Val Ala Ile Asn Ala Phe Gly Met Gln Phe Tyr Arg His
    130                 135                 140
Gly Ile Ser Arg Pro Leu Arg Pro Leu Cys Ser Pro Trp Leu Ile Asp
145                 150                 155                 160
His Ala Val Leu Leu Val Gly Tyr Gly Asn Arg Ser Asp Val Pro Phe
                165                 170                 175
Trp Ala Ile Lys Asn Ser Trp Gly Thr Asp Trp Gly Glu Lys Gly Tyr
            180                 185                 190
Tyr Tyr Leu His Arg Gly Ser Gly Ala Cys Gly Val Asn Thr Met Ala
        195                 200                 205
Ser Ser Ala Val Val Asp
    210
<210>4
<211>220
<212>PRT
<213>人
<400>4
Tyr Pro Pro Ser Val Asp Trp Arg Lys Lys Gly Asn Phe Val Ser Pro
 1               5                  10                  15
Val Lys Asn Gln Gly Ala Cys Gly Ser Cys Trp Thr Phe Ser Thr Thr
            20                  25                  30
Gly Ala Leu Glu Ser Ala Ile Ala Ile Ala Thr Gly Lys Met Leu Ser
        35                  40                  45
Leu Ala Glu Gln Gln Leu Val Asp Cys Ala Gln Asp Phe Asn Asn His
    50                  55                  60
Gly Cys Gln Gly Gly Leu Pro Ser Gln Ala Phe Glu Tyr Ile Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Asn Lys Gly Ile Met Gly Glu Asp Thr Tyr Pro Tyr Gln Gly Lys Asp
                85                  90                  95
Gly Tyr Cys Lys Phe Gln Pro Gly Lys Ala Ile Gly Phe Val Lys Asp
            100                 105                 110
Val Ala Asn Ile Thr lle Tyr Asp Glu Glu Ala Met Val Glu Ala Val
        115                 120                 125
Ala Leu Tyr Asn Pro Val Ser Phe Ala Phe Glu Val Thr Gln Asp Phe
    130                 135                 140
Met Met Tyr Arg Thr Gly Ile Tyr Ser Ser Thr Ser Cys His Lys Thr
145                 150                 155                 160
Pro Asp Lys Val Asn His Ala Val Leu Ala Val Gly Tyr Gly Glu Lys
                165                 170                 175
Asn Gly Ile Pro Tyr Trp Ile Val Lys Asn Ser Trp Gly Pro Gln Trp
            180                 185                 190
Gly Met Asn Gly Tyr Phe Leu Ile Glu Arg Gly Lys Asn Met Cys Gly
        195                 200                 205
Leu Ala Ala Cys Ala Ser Tyr Pro Ile Pro Leu Val
    210                 215                 220
<210>5
<211>220
<212>PRT
<213>人
<400>5
Ala Pro Arg Ser Val Asp Trp Arg Glu Lys Gly Tyr Val Thr Pro Val
 1               5                  10                  15
Lys Asn Gln Gly Gln Cys Gly Ser Cys Trp Ala Phe Ser Ala Thr Gly
            20                  25                  30
Ala Leu Glu Gly Gln Met Phe Arg Lys Thr Gly Arg Leu Ile Ser Leu
        35                  40                  45
Ser Glu Gln Asn Leu Val Asp Cys Ser Gly Pro Gln Gly Asn Glu Gly
    50                  55                  60
Cys Asn Gly Gly Leu Met Asp Tyr Ala Phe Gln Tyr Val Gln Asp Asn
65                  70                  75                  80
Gly Gly Leu Asp Ser Glu Glu Ser Tyr Pro Tyr Glu Ala Thr Glu Glu
                85                  90                  95
Ser Cys Lys Tyr Asn Pro Lys Tyr Ser Val Ala Asn Asp Thr Gly Phe
            100                 105                 110
Val Asp Ile Pro Lys Gln Glu Lys Ala Leu Met Lys Ala Val Ala Thr
        115                 120                 125
Val Gly Pro Ile Ser Val Ala Ile Asp Ala Gly His Glu Ser Phe Leu
    130                 135                 140
Phe Tyr Lys Glu Gly Ile Tyr Phe Glu Pro Asp Cys Ser Ser Glu Asp
145                 150                 155                 160
Met Asp His Gly Val Leu Val Val Gly Tyr Gly Phe Glu Ser Thr Glu
                165                 170                 175
Ser Asp Asn Asn Lys Tyr Trp Leu Val Lys Asn Ser Trp Gly Glu Glu
            180                 185                 190
Trp Gly Met Gly Gly Tyr Val Lys Met Ala Lys Asp Arg Arg Asn His
        195                 200                 205
Cys Gly Ile Ala Ser Ala Ala Ser Tyr Pro Thr Val
    210                 215                 220
<210>6
<211>214
<212>PRT
<213>人
<400>6
Leu Pro Leu Arg Phe Asp Trp Arg Asp Lys Gln Val Val Thr Gln Val
 1               5                  10                  15
Arg Asn Gln Gln Met Cys Gly Gly Cys Trp Ala Phe Ser Val Val Gly
            20                  25                  30
Ala Val Glu Ser Ala Tyr Ala Ile Lys Gly Lys Pro Leu Glu Asp Leu
        35                  40                  45
Ser Val Gln Gln Val Ile Asp Cys Ser Tyr Asn Asn Tyr Gly Cys Asn
    50                  55                  60
Gly Gly Ser Thr Leu Asn Ala Leu Asn Trp Leu Asn Lys Met Gln Val
65                  70                  75                  80
Lys Leu Val Lys Asp Ser Glu Tyr Pro Phe Lys Ala Gln Asn Gly Leu
                85                  90                  95
Cys His Tyr Phe Ser Gly Ser His Ser Gly Phe Ser Ile Lys Gly Tyr
            100                 105                 110
Ser Ala Tyr Asp Phe Ser Asp Gln Glu Asp Glu Met Ala Lys Ala Leu
        115                 120                 125
Leu Thr Phe Gly Pro Leu Val Val Ile Val Asp Ala Val Ser Trp Gln
    130                 135                 140
Asp Tyr Leu Gly Gly Ile Ile Gln His His Cys Ser Ser Gly Glu Ala
145                 150                 155                 160
Asn His Ala Val Leu Ile Thr Gly Phe Asp Lys Thr Gly Ser Thr Pro
                165                 170                 175
Tyr Trp Ile Val Arg ASn Ser Trp Gly Ser SeT Trp Gly Val Asp Gly
            180                 185                 190
Tyr Ala His Val Lys Met Gly Ser Asn Val Cys Gly Ile Ala Asp Ser
        195                 200                 205
Val Ser Ser Ile Phe Val
    210
<210>7
<211>217
<212>PRT
<213>人
<400>7
Leu Pro Asp Ser Val Asp Trp Arg Glu Lys Gly Cys Val Thr Glu Val
 1               5                  10                  15
Lys Tyr Gln Gly Ser Cys Gly Ala Cys Trp Ala Phe Ser Ala Val Gly
            20                  25                  30
Ala Leu Glu Ala Gln Leu Lys Leu Lys Thr Gly Lys Leu Val Thr Leu
        35                  40                  45
Ser Ala Gln Asn Leu Val Asp Cys Ser Thr Glu Lys Tyr Gly ASn Lys
    50                  55                  60
Gly Cys Asn Gly Gly Phe Met Thr Thr Ala Phe Gln Tyr Ile Ile Asp
65                  70                  75                  80
Asn Lys Gly Ile Asp Ser Asp Ala Ser Tyr Pro Tyr Lys Ala Met Asp
                85                  90                  95
Gln Lys Cys Gln Tyr Asp Ser Lys Tyr Arg Ala Ala Thr Cys Ser Lys
            100                 105                 110
Tyr Thr Glu Leu Pro Tyr Gly Arg Glu Asp Val Leu Lys Glu Ala Val
        115                 120                 125
Ala ASn Lys Gly Pro Val Ser Val Gly Val Asp Ala Arg His Pro Ser
    130                 135                 140
Phe Phe Leu Tyr Arg Ser Gly Val Tyr Tyr Glu Pro Ser Cys Thr Gln
145                 150                 155                 160
Asn Val Asn His Gly Val Leu Val Val Gly Tyr Gly Asp Leu Asn Gly
                165                 170                 175
Lys Glu Tyr Trp Leu Val Lys Asn Ser Trp Gly His Asn Phe Gly Glu
            180                 185                 190
Glu Gly Tyr Ile Arg Met Ala Arg Asn Lys Gly Asn His Cys Gly Ile
        195                 200                 205
Ala Ser Phe Pro Ser Tyr Pro Glu Ile
    210                 215
<210>8
<211>249
<212>PRT
<213>人
<400>8
Val Pro Phe Ser Cys Asp Trp Arg Lys Val Ala Gly Ala Ile Ser Pro
 1               5                  10                  15
Ile Lys Asp Gln Lys Asn Cys Asn Cys Cys Trp Ala Met Ala Ala Ala
            20                  25                  30
Gly Asn Ile Glu Thr Leu Trp Arg Ile Ser Phe Trp Asp Phe Val Asp
        35                  40                  45
Val Ser Val His Glu Leu Leu Asp Cys Gly Arg Cys Gly Asp Gly Cys
    50                  55                  60
His Gly Gly Phe Val Trp Asp Ala Phe Ile Thr Val Leu Asn Asn Ser
65                  70                  75                  80
Gly Leu Ala Ser Glu Lys Asp Tyr Pro Phe Gln Gly Lys Val Arg Ala
                85                  90                  95
His Arg Cys His Pro Lys Lys Tyr Gln Lys Val Ala Trp Ile Gln Asp
            100                 105                 110
Phe Ile Met Leu Gln Asn Asn Glu His Arg Ile Ala Gln Tyr Leu Ala
        115                 120                 125
Thr Tyr Gly Pro Ile Thr Val Thr Ile Asn Met Lys Pro Leu Gln Leu
    130                 135                 140
Tyr Arg Lys Gly Val Ile Lys Ala Thr Pro Thr Thr Cys Asp Pro Gln
145                 150                 155                 160
Leu Val Asp His Ser Val Leu Leu Val Gly Phe Gly Ser Val Lys Ser
                165                 170                 175
Glu Glu Gly Ile Trp Ala Glu Thr Val Ser Ser Gln Ser Gln Pro Gln
            180                 185                 190
Pro Pro His Pro Thr Pro Tyr Trp Ile Leu Lys Asn Ser Trp Gly Ala
        195                 200                 205
Gln Trp Gly Glu Lys Gly Tyr Phe Arg Leu His Arg Gly Ser Asn Thr
    210                 215                 220
Cys Gly Ile Thr Lys Phe Pro Leu Thr Ala Arg Val Gln Lys Pro Asp
225                 230                 235                 240
Met Lys Pro Arg Val Ser Cys Pro Pro
                245
<210>9
<211>242
<212>PRT
<213>人
<400>9
Leu Pro Lys Ser Trp Asp Trp Arg Asn Val Asp Gly Val Asn Tyr Ala
 1               5                  10                  15
Ser Ile Thr Arg Asn Gln His Ile Pro Gln Tyr Cys Gly Ser Cys Trp
            20                  25                  30
Ala His Ala Ser Thr Ser Ala Met Ala Asp Arg Ile Asn Ile Lys Arg
        35                  40                  45
Lys Gly Ala Trp Pro Ser Thr Leu Leu Ser Val Gln Asn Val Ile Asp
    50                  55                  60
Cys Gly Asn Ala Gly Ser Cys Glu Gly Gly Asn Asp Leu Ser Val Trp
65                  70                  75                  80
Asp Tyr Ala His Gln His Gly Ile Pro Asp Glu Thr Cys Asn Asn Tyr
                85                  90                  95
Gln Ala Lys Asp Gln Glu Cys Asp Lys Phe Asn Gln Cys Gly Thr Cys
            100                 105                 110
Asn Glu Phe Lys Glu Cys His Ala Ile Arg Asn Tyr Thr Leu Trp Arg
        115                 120                 125
Val Gly Asp Tyr Gly Ser Leu Ser Gly Arg Glu Lys Met Met Ala Glu
    130                 135                 140
Ile Tyr Ala Asn Gly Pro Ile Ser Cys Gly Ile Met Ala Thr Glu Arg
145                 150                 155                 160
Leu Ala Asn Tyr Thr Gly Gly Ile Tyr Ala Glu Tyr Gln Asp Thr Thr
                165                 170                 175
Tyr Ile Asn His Val Val Ser Val Ala Gly Trp Gly Ile Ser Asp Gly
            180                 185                 190
Thr Glu Tyr Trp Ile Val Arg Asn Ser Trp Gly Glu Pro Trp Gly Glu
        195                 200                 205
Arg Gly Trp Leu Arg Ile Val Thr Ser Thr Tyr Lys Asp Gly Lys Gly
    210                 215                 220
Ala Arg Tyr Asn Leu Ala Ile Glu Glu His Cys Thr Phe Gly Asp Pro
225                 230                 235                 240
Ile Val
<210>10
<211>221
<212>PRT
<213>人
<400>10
Leu Pro Lys Ser Val Asp Trp Arg Lys Lys Gly Tyr Val Thr Pro Val
 1               5                  10                  15
Lys Asn Gln Lys Gln Cys Gly Ser Cys Trp Ala Phe Ser Ala Thr Gly
            20                  25                  30
Ala Leu Glu Gly Gln Met Phe Arg Lys Thr Gly Lys Leu Val Ser Leu
        35                  40                  45
Ser Glu Gln Asn Leu Val Asp Cys Ser Arg Pro Gln Gly Asn Gln Gly
    50                  55                  60
Cys Asn Gly Gly Phe Met Ala Arg Ala Phe Gln Tyr Val Lys Glu Asn
65                  70                  75                  80
Gly Gly Leu Asp Ser Glu Glu Ser Tyr Pro Tyr Val Ala Val Asp Glu
                85                  90                  95
Ile Cys Lys Tyr Arg Pro Glu Asn Ser Val Ala Asn Asp Thr Gly Phe
            100                 105                 110
Thr Val Val Ala Pro Gly Lys Glu Lys Ala Leu Met Lys Ala Val Ala
        115                 120                 125
Thr Val Gly Pro Ile Ser Val Ala Met Asp Ala Gly His Ser Ser Phe
    130                 135                 140
Gln Phe Tyr Lys Ser Gly Ile Tyr Phe Glu Pro Asp Cys Ser Ser Lys
145                 150                 155                 160
Asn Leu Asp His Gly Val Leu Val Val Gly Tyr Gly Phe Glu Gly Ala
                165                 170                 175
Asn Ser Asn Asn Ser Lys Tyr Trp Leu Val Lys ASh Ser Trp Gly Pro
            180                 185                 190
Glu Trp Gly Ser Asn Gly Tyr Val Lys Ile Ala Lys Asp Lys Asn Asn
        195                 200                 205
His Cys Gly Ile Ala Thr Ala Ala Ser Tyr Pro Asn Val
    210                 215                 220
<210>11
<211>237
<212>PRT
<213>小镰疟原虫
<400>11
Val Pro Glu Ile Leu Asp Tyr Arg Glu Lys Gly Ile Val His Glu Pro
 1               5                  10                  15
Lys Asp Gln Gly Leu Cys Gly Ser Cys Trp Ala Phe Ala Ser Val Gly
            20                  25                  30
Asn Ile Glu Ser Val Phe Ala Lys Lys Asn Lys Asn Ile Leu Ser Phe
        35                  40                  45
Ser Glu Gln Glu Val Val Asp Cys Ser Lys Asp Asn Phe Gly Cys Asp
    50                  55                  60
Gly Gly His Pro Phe Tyr Ser Phe Leu Tyr Val Leu Gln Asn Glu Leu
65                  70                  75                  80
Cys Leu Gly Asp Glu Tyr Lys Tyr Lys Ala Lys Asp Asp Met Phe Cys
                85                  90                  95
Leu Asn Tyr Arg Cys Lys Arg Lys Val Ser Leu Ser Ser Ile Gly Ala
            100                 105                 110
Val Lys Glu Asn Gln Leu Ile Leu Ala Leu Asn Glu Val Gly Pro Leu
        115                 120                 125
Ser Val Asn Val Gly Val Ash Asn Asp Phe Val Ala Tyr Ser Glu Gly
    130                 135                 140
Val Tyr Asn Gly Thr Cys Ser Glu Glu Leu Asn His Ser Val Leu Leu
145                 150                 155                 160
Val Gly Tyr Gly Gln Val Glu Lys Thr Lys Leu Asn Tyr Asn Asn Lys
                165                 170                 175
Ile Gln Thr Tyr Asn Thr Lys Glu Asn Ser Asn Gln Pro Asp Asp Asn
            180                 185                 190
Ile Ile Tyr Tyr Trp Ile Ile Lys Asn Ser Trp Ser Lys Lys Trp Gly
        195                 200                 205
Glu Asn Gly Phe Met Arg Leu Ser Arg Asn Lys Asn Gly Asp Asn Val
    210                 215                 220
Phe Cys Gly Ile Gly Glu Glu Val Phe Tyr Pro Ile Leu
225                 230                 235
<210>12
<211>222
<212>PRT
<213>小镰疟原虫
<400>12
Asp Arg Ile Ala Tyr Asp Trp Arg Leu His Gly Gly Val Thr Pro Val
 1               5                  10                  15
Lys Asp Gln Ala Leu Cys Gly Ser Cys Trp Ala Phe Ser Ser Val Gly
            20                  25                  30
Ser Val Glu Ser Gln Tyr Ala Ile Arg Lys Leu Phe Leu Phe Ser Glu
        35                  40                  45
Gln Glu Leu Val Asp Cys Ser Val Lys Asn Ash Gly Cys Tyr Gly Gly
    50                  55                  60
Tyr Ile Thr Asn Ala Phe Asp Asp Met Ile Asp Leu Gly Gly Leu Cys
65                  70                  75                  80
Ser Gln Asp Asp Tyr Pro Tyr Val Ser Asn Leu Pro Glu Thr Cys Asn
                85                  90                  95
Leu Lys Arg Cys Asn Glu Arg Tyr Thr Ile Lys Ser Tyr Val Ser Ile
            100                 105                 110
Pro Asp Asp Lys Phe Lys Glu Ala Leu Arg Tyr Leu Gly Pro Ile Ser
        115                 120                 125
Ile Ser Ile Ala Ala Ser Asp Asp Phe Ala Phe Tyr Arg Gly Gly Phe
    130                 135                 140
Tyr Asp Gly Glu Cys Gly Ala Ala Pro Asn His Ala Val Ile Leu Val
145                 150                 155                 160
Gly Tyr Gly Met Lys Asp Ile Tyr Asn Glu Asp Thr Gly Arg Met Glu
                165                 170                 175
Lys Phe Tyr Tyr Tyr Ile Ile Lys Asn Ser Trp Gly Ser Asp Trp Gly
            180                 185                 190
Glu Gly Gly Tyr Ile Ash Leu Glu Thr Asp Glu Asn Gly Tyr Lys Lys
        195                 200                 205
Thr Cys Ser Ile Gly Thr Glu Ala Tyr Val Pro Leu Leu Glu
    210                 215                 220
<210>13
<211>224
<212>PRT
<213>小镰疟原虫
<400>13
Asp His Ala Ala Tyr Asp Trp Arg Leu His Ser Gly Val Thr Pro Val
 1               5                  10                  15
Lys Asp Gln Lys Asn Cys Gly Ser Cys Trp Ala Phe Ser Ser Ile Gly
            20                  25                  30
Ser Val Glu Ser Gln Tyr Ala Ile Arg Lys Asn Lys Leu Ile Thr Leu
        35                  40                  45
Ser Glu Gln Glu Leu Val Asp Cys Ser Phe Lys Asn Tyr Gly Cys Asn
    50                  55                  60
Gly Gly Leu Ile Asn Ash Ala Phe Glu Asp Met Ile Glu Leu Gly Gly
65                  70                  75                  80
Ile Cys Pro Asp Gly Asp Tyr Pro Tyr Val Ser Asp Ala Pro Asn Leu
                85                  90                  95
Cys Asn Ile Asp Arg Cys Thr Glu Lys Tyr Gly Ile Lys Asn Tyr Leu
            100                 105                 110
Ser Val Pro Asp Ash Lys Leu Lys Glu Ala Leu Arg Phe Leu Gly Pro
        115                 120                 125
Ile Ser Ile Ser Val Ala Val Ser Asp Asp Phe Ala Phe Tyr Lys Glu
    130                 135                 140
Gly Ile Phe Asp Gly Glu Cys Gly Asp Glu Leu Ash His Ala Val Met
145                 150                 155                 160
Leu Val Gly Phe Gly Met Lys Glu Ile Val Ash Pro Leu Thr Lys Lys
                165                 170                 175
Gly Glu Lys His Tyr Tyr Tyr Ile Ile Lys Asn Ser Trp Gly Gln Gln
            180                 185                 190
Trp Gly Glu Arg Gly Phe Ile Asn Ile Glu Thr Asp Glu Ser Gly Leu
        195                 200                 205
Met Arg Lys Cys Gly Leu Gly Thr Asp Ala Phe Ile Pro Leu Ile Glu
    210                 215                 220

Claims (24)

1、一种化合物，其具有如下化学式：
Figure A2004800245200002C1
并且具有不超过70个各自独立地选自C、O、N、S、P、F、Cl、Br或者I的非氢原子；
其中R4是非氢的吸电子取代基，这样以致其与R1、R2和R2一起使氮的碱性降低至pKa小于6；
其中化合物的分子与组织蛋白酶相互作用，从而使得化学式中的CH-NH区域有利地与S2和S3之间的组织蛋白酶进行相互作用，R1有利地与组织蛋白酶活性部位的活性部位S1而非活性部位S3进行相互作用，R2有利地与组织蛋白酶的S2而非S3进行相互作用，以及R2有利地与组织蛋白酶活性部位的S3而非S2或者S1进行相互作用。
2、权利要求1的化合物，其中组织蛋白酶选自组织蛋白酶B、F、H、K、L、L2、O、S、W或者Z。
3、权利要求2的化合物，其中组织蛋白酶选自组织蛋白酶K、L、S或者B。
4、权利要求1的化合物，其中R4有利地不分别与组织蛋白酶活性部位的亚位点S2、S3和S1相互作用。
5、权利要求1的化合物，其中R2具有至少一个同时满足以下三个距离标准的碳原子或者硫原子，其中所述的距离标准为：它在组织蛋白酶的Cα26的7范围内、在组织蛋白酶的Cα68的8.5范围内以及在组织蛋白酶的Cα134的7范围内。
6、权利要求1的化合物，其中R3具有至少一个同时满足以下两个距离标准的碳原子或者硫原子，其中所述的距离标准为：它在组织蛋白酶Cα66的5.5范围内以及在组织蛋白酶Cα60的7范围内。
7、权利要求1的化合物，其中所述的氮具有小于6的pKa值并且所述的氮与组织蛋白酶的甘氨酸66的组织蛋白酶酰胺羰基形成一个氢键。
8、权利要求1的化合物，其中R2包括非极性区域。
9、权利要求1的化合物，其中R2包括亲油的区域。
10、权利要求1的化合物，其中R3包括非极性区域。
11、权利要求1的化合物，其中R3包括亲油的区域。
12、权利要求1的化合物，其中权利要求1中所示的仲胺的氮在水介质中的pKa小于5。
13、权利要求1的化合物，其中R4是选自-CF3、-CH2F、-CF2R5和-CHFR5的基团，其中R5是任选地被1～4个取代基取代的C1-6烷基、芳基或者杂芳基，所述取代基选自卤素、C1-3烷基、C1-3烷氧基、羟基、羟基烷基、酮、氰基、杂环基、C3-8环烷基、SOmC1-3烷基、NH2、NO2或者O(C＝O)C1-3烷基；和m是0～2的整数。
14、权利要求1的化合物，其中R1包括稳定地与组织蛋白酶活性部位的亚位点S1配合的区域，并且在组织蛋白酶Cα25的5范围内具有至少1个碳原子。
15、权利要求14的化合物，其中组织蛋白酶选自组织蛋白酶B、F、H、K、L、L2、O、S、W或者Z。
16、权利要求14的化合物，其中化合物与组织蛋白酶的半胱氨酸25的硫形成共价键。
17、权利要求14的化合物，其中R1是非免疫原性的。
18、权利要求14的化合物，其中化合物与组织蛋白酶的活性部位结合，在纯化的酶测定中具有小于10微摩尔的IC50。
19、权利要求14的化合物，其中与化合物的亲电羰基碳形成一个共价键。
20、权利要求1的化合物，其中在化合物和组织蛋白酶之间没有形成共价键。
21、药物组合物，包括与药学上可接受的载体组合的如权利要求1至20中任一项所定义的化合物或者其药学上可接受的盐。
22、如权利要求1至20任一项所定义的化合物或者其药学上可接受的盐在制造药物中的用途，其中所述的药物用于抑制组织蛋白酶活性、或者治疗或预防哺乳动物中的组织蛋白酶依赖性的状态、或者抑制或减少哺乳动物中的骨损失、或者治疗或者预防哺乳动物中的骨质疏松症、或者治疗或者预防哺乳动物中的风湿性关节炎状态、或者治疗或者预防哺乳动物中骨关节炎的进行、或者治疗哺乳动物中的癌症。
23、用于药物治疗中的如权利要求1至20中任一项所定义的化合物或其药学上可接受的盐。
24、一种用于治疗或者预防哺乳动物中的组织蛋白酶依赖状态、或者抑制或减少哺乳动物中的骨损失、或者治疗或者预防哺乳动物中的骨质疏松症、或者治疗或者预防哺乳动物中的风湿性关节炎状态、或者治疗或者预防哺乳动物中骨关节炎的进行，或者治疗哺乳动物中的癌症的方法，其包括向哺乳动物给药治疗有效量的如权利要求1至20中任一项所定义的化合物或其药学上可接受的盐。
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