本发明的详细描述
本发明的产品及其医药用途
本发明人发现化合物I对多巴胺D1受体、多巴胺D2受体和α1肾上腺素能受体表现出高度的亲和力。而且,现已发现化合物I是多巴胺D1和D2受体以及血清素5-HT2a受体的拮抗剂。认为化合物I相对于这些受体的药理学活性与上面描述的化合物相似,结构上的区别在于化合物I在哌嗪上具有甲基而不是氢。
本发明人还发现上述提到的参考文献中描述的几种在结构上相关的化合物、两种消旋体和对映体是CYP2D6(细胞色素P450 2D6)抑制剂,而化合物I同其它例如和瑞司哌酮的抗精神病药比较起来是一种相对弱的CYP2D6抑制剂。与本发明的对映体(即化合物I)相比,本发明化合物的外消旋体对CYP2D6酶也是相当有效的。
CYP2D6酶是一种对新陈代谢重要的肝脏酶。CYP2D6是一种哺乳动物的酶,通常与药用化合物的新陈代谢有关,并且对这种代谢药物酶的抑制作用可引起临床上重要的药物-药物相互作用,即如果两种药物是联合给予的并且通过相同的酶代谢,那么对新陈代谢的竞争作用可导致增加的血浆浓度,从而可能发生副作用(参见Lin等人,Pharmacological Rev.1997,49,403-449,Bertz RJ和Granneman GR.Clin Pharmacokinet 1997,32,210-258)。
因为在临床应用中超过80种药物(并且特别是精神治疗药)是通过CYP2D6代谢的(Bertz RJ,Granneman GR.Clin Pharmacokin1997,32,210-58,Rendic S,DiCarlo FJ.Drug Metab Rev 1997,29,413-580),所以这种酶通过共同服用的药物的抑制作用可引起暴露水平戏剧性的增加并且产生公知的CYP2D6抑制剂费洛克汀或帕罗西汀与丙咪嗪、Desimipramine或去甲替林联合用药的毒性,导致这些三环化合物的心脏毒性增加(Ereshefsky L.等人,J.Clin.Psychiatry1996,57(suppl8),17-25,Shulman RW Can J Psychiatry,Vol 42,Supplement 1,4S)。
事实上化合物I与肝脏酶CYP2D6的相互作用低意味着它对于药物对药物的相互作用具有降低的可能,即当用本发明的化合物和其它主要CYP2D6酶代谢的药物一起治疗患者时,可能存在更少的药物对药物的相互作用。这是重要的优势,特别是对于常常用其它药物来治疗以控制其疾病的精神分裂症患者。
本发明人还发现化合物I对“α-氯醛糖(chloraose)麻醉的兔子”的心电图中的QT-间隔有相对低的延长作用。药物-诱导的心电图(ECG)中QT-间隔的延长和致命的心律不齐的出现、尖峰的扭曲(TdP)被认为是用包括延迟复极化的抗心律失常药[C.L.Raehl,A.K.Patel和M.LeRoy,Clin Pharm 4(1985),675-690]、各种抗组胺药[R.L.Woosley,Annu Rev Pharmacol Toxicol 36(1996),233-252;Y.G.Yap和A.J.Camm,Clin Exp Allergy 29Suppl 1(1999),15-24]、抗精神病药[A.H.Glassman和J.T.Bigger,Am J Psychiatry 158(2001),1774-1782]和抗微生物药[B.Darpo,Eur Heart J 3 Suppl K(2001),K70-K80]在内的宽范围的药物治疗期间的潜在危险。化合物I对兔子QT间隔有相对低的作用的事实意味着与一些商业性的抗精神病药相比,该化合物对于在人中引入药物-诱导的QT间隔延长和致命的心律不齐的出现、尖峰的扭曲(TdP)具有降低的可能性。
因此,一方面,本发明涉及式I化合物(化合物I)及其盐。本发明的盐,即式(I)化合物的盐,可选自例如化合物I的富马酸盐或马来酸盐。
化合物I的性质表明它将成为特别有用的药物。因此,本发明还涉及本发明的化合物I或其盐的药物组合物。本发明还涉及这种化合物、盐和组合物的医药用途,例如用于中枢神经系统疾病的治疗,包括精神病,特别是精神分裂症或其它涉及精神病症状的疾病,例如,精神分裂症、精神分裂症样的疾病、情感分裂疾病、妄想疾病、短暂的精神病疾病、共享的(Shared)精神病疾病以及其它精神病疾病或存在精神病症状的疾病,例如,双极疾病中的躁狂症。
此外,本发明化合物的5-HT2拮抗活性提示该化合物或其盐具有相对低的锥体外系副作用的危险。
本发明还涉及本发明化合物I或其盐用于治疗疾病的用途,疾病选自焦虑病症、包括抑郁症的情感障碍、睡眠障碍、偏头痛、抗精神病药-诱导的帕金森氏综合症、可卡因滥用、尼古丁滥用、酒精滥用以及其它滥用疾病。
在优选的实施方案中,本发明涉及一种治疗精神分裂症样疾病、分裂情感性疾病、妄想疾病、短暂的精神病疾病、共享的精神病疾病或双极疾病中的躁狂症的方法,该方法包括给予治疗有效量的本发明的化合物I或其盐。
本发明的另一实施方案涉及一种治疗精神分裂症的阳性症状的方法,该方法包括给予治疗有效量的化合物I或其盐。
本发明的另一实施方案涉及一种治疗精神分裂症的阴性症状的方法,该方法包括给予治疗有效量的化合物I或其盐。
本发明的另一实施方案涉及一种治疗精神分裂症的抑郁症状的方法,该方法包括给予治疗有效量的化合物I或其盐。
本发明的另一方面涉及一种治疗躁狂症和/或双极疾病的保养的方法,该方法包括给予治疗有效量的化合物I或其盐。
本发明的另一方面涉及一种治疗抗精神病药-诱导的帕金森氏综合症的方法,该方法包括给予治疗有效量的化合物I或其盐。
本发明进一步地涉及一种治疗物质滥用,例如尼古丁、酒精或可卡因滥用的方法,该方法包括给予治疗有效量的化合物I或其盐。
在广泛的方面,本发明涉及用作药物的反式-1-(6-氯-3-苯基二氢化茚-1-基)-3,3-二甲基哌嗪或其盐。
因此,本发明还涉及一种治疗选自包括精神病症状的疾病、精神分裂症(例如一种或多种精神分裂症的阳性症状、阴性症状和抑郁症状、精神分裂症样的疾病、情感分裂疾病、妄想疾病、短暂的精神病疾病、共享的精神病疾病和双极疾病中的躁狂症、焦虑病症、包括抑郁症的情感障碍、睡眠障碍、偏头痛、抗精神病药-诱导的帕金森氏综合症、和例如可卡因滥用、尼古丁滥用或酒精滥用的滥用疾病的方法,该方法包括给予治疗有效量的化合物反式-1-(6-氯-3-苯基二氢化茚-1-基)-3,3-二甲基哌嗪或其盐。
在此使用的术语“反式-1-(6-氯-3-苯基二氢化茚-1-基)-3,3-二甲基哌嗪”,即没有有关对映体形式的具体指定(例如使用(+)和(-),或使用R/S-约定是指提到的任何由这一化合物形成的对映体,即两个对映体中的任何一个或两者的混合物,例如外消旋体混合物)。但是,在本文中优选对应于化合物I的对映体的含量至少是50%,即至少作为外消旋体混合物,但是优选化合物I是对映体过量的。
在本文中对于医药用途,应理解为当指定对映体形式作为式(I)中化合物I的形式时,那么化合物是相对立体化学纯的,优选对映体过量至少是70%,更优选至少是80%(80%对映体过量是指在上述混合物中I与其对映体的比值是90∶10),至少是90%,至少是96%,或优选至少是98%过量的。在一个优选的实施方案中,化合物I的非对映体过量至少是90%(90%非对映体纯度是指化合物I与反式-1-(1S,3S)-6-氯-3-苯基二氢化茚-1-基)-3,3-二甲基哌嗪的比值是95∶5),至少是95%,至少是97%,或至少是98%。
本发明的另一方面涉及一种如在此描述的治疗方法,其中用化合物或其盐治疗的患者还用至少一种其它药物治疗。在这方面的一个特别相关的实施方案是用通过CYP2D6代谢的其它药物进行治疗。
在一个适当的实施方案中,另一种药物是抗精神病药。因此,一个实施方案涉及本发明的化合物、盐或药物组合物在治疗患精神分裂症或还使用其它药物治疗的其它精神病的患者中的用途,例如,其中这种其它药物是一种抗精神病药。
在另一实施方案中,本发明涉及本发明的化合物或盐在治疗患精神分裂症或作为物质滥用者,例如酒精或麻醉剂滥用者的其它精神病的患者中的用途。
本发明的化合物、盐或组合物可以以任何适当的方式给药,例如以口服、口腔、舌下或胃肠外方式给药,并且对于这些给药方式,该化合物或盐可以以任何适当的形式存在,例如以片剂、胶囊、粉末、用于注射的糖浆或溶液或分散体形式。在一个实施方案中,本发明的化合物或盐是以固体药物实体形式,合适地以片剂或胶囊形式给药的。
固体药物制剂的制备方法是现有技术中所熟知的。如此可以通过将活性成分与普通的助剂、填充剂和稀释剂混合,随后在适当的压片机中将混合物压紧来制备片剂。助剂、填充剂和稀释剂的例子包括玉米淀粉、乳糖、滑石粉、硬脂酸镁、明胶、乳糖树胶等。还可以使用任何其它的助剂或添加剂(例如着色剂、芳香剂、防腐剂等),条件是它们可以与活性成分配伍。
用于注射的溶液可以通过将本发明的盐和合适的添加剂溶解在一部分用于注射剂的溶剂(优选无菌水)中,将溶液调节到所需的体积,将溶液灭菌并装入适当的安瓿或小瓶来制备。可以加入任何本领域常用的适宜的添加剂,例如渗透剂、防腐剂、抗氧化剂、加溶剂,等。
以游离碱计算,上述式(I)化合物的日剂量适宜地为1.0-160毫克/天,更适宜地为1-100毫克,例如优选为2-55毫克。
在此使用的与疾病或病症有关的术语“治疗”还包括视情况而定的预防。
制备方法
外消旋形式的式(I)化合物可以,例如,通过类似于EP 638 073和Bges等人在J.Med.Chem.,1995,38,4380-4392页列出的方法制备,接着通过非对映体盐的结晶来旋光拆分该外消旋化合物,从而得到式(I)的对映体。
本发明人现已开发了一条合成途径,其中式(I)的对映体是经过始于对映体纯的V,即化合物Va((1S,3S)-6-氯-3-苯基二氢化茚-1-醇,见下文)的合成顺序得到的。因此,在这种方法中,式V中间体被拆分,例如通过手性色谱法或酶催化方法拆分,以得到式Va的对映体。这种新的合成路线得到的式(I)化合物比上述让最终产物I的非对映体盐结晶更有效,例如当仅仅将需要的对映体用于后面的步骤时,拆分中间体而不是拆分最终产物得到更有效的合成,产生例如更高的体积产率和更少的试剂消耗。
因此,式(I)的对映体可以通过涉及以下步骤的方法获得:
使苯乙腈与2,5-二氯苄腈在碱(合适地为叔丁醇钾(t-BuOK))的存在下,在适宜的溶剂例如二甲醚(DME)中反应,进一步地与氯代乙酸甲酯(MCA)反应,导致自发的闭环并一锅生成式(II)化合物。
然后适当地通过在乙酸、硫酸和水的混合物中将式(II)化合物加热来进行酸性水解以形成式(III)化合物,之后通过在合适的溶剂(例如甲苯)中加热式(III)化合物和三乙基胺或N-甲基吡咯烷-2-酮(NMP)进行脱羧,以形成式(IV)化合物。
然后将式(IV)化合物还原,合适地在诸如醇的溶剂(例如乙醇或异丙醇)中,并优选在-30到+30℃的范围内,例如低于30℃,低于20℃,低于10℃,或优选低于5℃的温度下,用硼氢化钠(NaBH4)还原,以形成具有顺式构型的式(V)化合物。
将式(V)化合物拆分得到所需的对映体(式Va),即同样具有顺式构型的((1S,3S)-6-氯-3-苯基二氢化茚-1-醇):
将(V)拆分为(Va)可以,例如,使用手性色谱法,优选液相色谱法进行,合适地在涂覆有手性聚合物的手性硅胶柱上进行,手性聚合物是例如改性的直链淀粉,优选涂覆在硅胶上的直链淀粉三-(氨基甲酸3,5-二甲基苯基酯)。将合适的溶剂用于手性液相色谱法,诸如,例如醇、腈、醚或烷烃、或其混合物,合适地为乙醇、甲醇、异丙醇、乙腈、或甲基叔丁基醚或其混合物,优选甲醇或乙腈。手性液相色谱法可以使用合适的技术,例如模拟移动床技术(SMB)放大。
或者,通过酶催化的拆分将式(V)化合物拆分得到Va化合物。现已发现对映体纯的化合物Va或其酰化衍生物可以通过对外消旋化合物V中的羟基进行酶催化的对映体选择性的酰化而得到具有高光学纯度的化合物Va或其酰化衍生物来制备。或者,对映体纯的化合物Va也可以通过包括将外消旋化合物V转化成相应的酯衍生物的方法,即接着将羟基位置的酯基进行酶催化的对映体选择性的脱酰作用来得到。已经报道了酶催化的对映体选择性的脱酰作用用于其它化合物。
因此,将化合物V拆分为化合物Va可以通过选择性的酶催化酰化作用进行。选择性的酶催化酰化作用是指酶催化酰化作用优先地对将式V化合物的一种顺式对映体转化为相应的乙酰化衍生物而留下化合物V的另一种顺式对映体作为反应混合物中未转化的顺式对映体(例如化合物Va)是有效的,如下所列:
其中R,例如是乙酸基、丙酸基、丁酸基、戊酸基、己酸基、苯甲酸基、月桂酸基、异丁酸基、2-甲基丁酸基、3-甲基丁酸基、戊酸基、2-甲基戊酸基、3-甲基戊酸基或4-甲基戊酸基。合适的不可逆的酰基给体是,例如乙烯基酯、2-丙烯基酯或2,2,2-三卤代乙基酯。或者,另一对映体是乙酰化的(即乙酰化的Va是产物,未显示),并且醇Va可以随后通过分离乙酰化的Va并随后除去酯基来得到。
或者,化合物V到化合物Va的拆分可以通过选择性的酶催化脱酰作用而进行。选择性的酶催化脱酰作用是指酶催化脱酰作用优先地对转化式V化合物的一种酯(Vc)有效而留下反应混合物中另一顺式对映体(Vd)作为未转化的式V化合物的酯。
合适的式(V)化合物的酯(Vc)是诸如乙酸酯、丙酸酯、丁酸酯、戊酸酯、己酸酯、苯甲酸酯、月桂酸酯、异丁酸酯、2-甲基丁酸酯、3-甲基丁酸酯、戊酸酯、2-甲基戊酸酯、3-甲基戊酸酯、4-甲基戊酸酯的酯。
其中R1,例如是乙酸基、丙酸基、丁酸基、戊酸基、己酸基、苯甲酸基、月桂酸基、异丁酸基、2-甲基丁酸基、3-甲基丁酸基、戊酸基、2-甲基戊酸基、3-甲基戊酸基、或4-甲基戊酸基。或者,将Va的酯未经转化而留在反应混合物中(即乙酰化的Va是产物,未显示),并且可以随后通过分离乙酰化的Va并随后通过标准的方法除去酯基来得到醇Va。
因此,对映体选择性的酶催化酰化作用是指酶催化的酰化作用优先地对转化式(V)化合物的一种对映体有效,而优先地留下反应混合物中未转化的式(V)化合物的另一对映体。对映体选择性的酶催化脱酰作用是指酶催化的脱酰作用优先地对转化式(Vc)化合物的一种对映体有效,而优先地留下反应混合物中未转化的式(Vc)化合物的另一对映体。
因此,一个实施方案涉及一种制备式V化合物(S,S)-或(R、R)-对映体(即具有顺式构型)的方法,该方法包括:
a)使用酰化剂使外消旋化合物V发生对映体选择性的酶催化酰化作用,或者
b)使外消旋化合物Vc发生对映体选择性的酶催化脱酰作用以形成脱酰化的化合物Va的混合物。
通过酶催化拆分得到的混合物可以不是完全纯的,例如除了较大量的所需的对映体(Va)外,它们还可含有较少数量的另一对映体。在根据本发明的酰化作用或脱酰作用之后得到的组分物混合物取决于,例如,所用的具体的水解酶和反应进行的条件。根据本发明的酶催化的酰化作用/脱酰作用的特征是与另一种对映体相比,一种对映体的相当更大的部分被转化。因此,根据本发明的对映体选择性的酰化作用会产生优先地含有(R,R)-形式的式(Vb)化合物和(S,S)-形式的式(Va)化合物的混合物,或者可以产生优先地含有(S,S)-形式的式(Vb)化合物和(R,R)-形式的式(Va)化合物的混合物。同样地,对映体选择性的酶催化的脱酰作用可以产生优先地含有(S,S)-形式的式(Vd)化合物和(R,R)-形式的式(Va)化合物的混合物,或者可以产生优先地含有(R,R)-形式的式(Vd)化合物和(S,S)-形式的式(Va)化合物的混合物。通过本发明的旋光拆分方法得到的Va的光学纯度通常至少为98%ee。但是,光学纯度的较低值是可以接受的。
根据本发明,对映异构体选择性的酶催化酰化反应是在基本上抑制水解反应的条件下进行的。如果有水存在于反应体系中,则水解是酰化反应的逆反应。因此,对映异构体选择性的酶催化酰化反应优选在无水的有机溶剂或几乎无水的有机溶剂(酶通常需要有些水存在才有活性)中进行。合适的溶剂包括烃类,例如己烷、庚烷、苯和甲苯;醚类,例如二乙基醚、二异丙基醚、四氢呋喃、1,4-二氧六环、叔丁基甲基醚和二甲氧基乙烷;酮类,例如丙酮、二乙基酮、丁酮和甲基乙基酮;酯类,例如乙酸甲酯、乙酸乙酯、丁酸乙酯、丁酸乙烯酯和苯甲酸乙酯;卤代烃类,例如二氯甲烷、氯仿和1,1,1-三氯乙烷;二级和三级醇类,例如叔丁醇;含氮溶剂,例如二甲基甲酰胺、乙酰胺、甲酰胺、乙腈和丙腈;和非质子性的极性溶剂,例如二甲基亚砜、N-甲基吡咯烷-2-酮和六甲基磷三酰胺。用于酶催化的酰化反应的优选的有机溶剂是诸如甲苯、己烷、二氧六环和四氢呋喃(THF)的有机溶剂。
合适的不可逆的酰基给体是,例如乙烯基酯、2-丙烯基酯或2,2,2-三卤代乙基酯的酰基给体。
对映异构体选择性的酶催化的脱酰反应优选在水或水和有机溶剂的混合物中,适宜地在缓冲液的存在下进行。合适的有机溶剂例如是与水互溶的溶剂,如醇类、乙腈、二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亚砜(DMSO)、1,4-二氧六环、DME和二甘醇二甲醚。
现已发现可以使用新酶435(念珠菌属南极洲脂肪酶B,来自新酶A/S,Fluka Cat.-No.73940)进行根据本发明的酶催化的酰化反应。通常,根据本发明的酶催化的酰化作用或脱酰作用优选使用脂肪酶、酯酶、酰基转移酶或蛋白酶进行。根据本发明的有用的酶是能够对式(V)的外消旋化合物中的羟基进行R-选择性的酰化作用或S-选择性的酰化作用的酶,或者能够对式(Vc)的外消旋化合物中的酰基进行R-选择性的脱酰作用或S-选择性的脱酰作用的酶。特别是固定化形式的酶包括交联的酶晶体(CLEC)可用于本发明。一个优选的实施方案涉及使用脂肪酶进行化合物V的酶催化拆分。最优选的脂肪酶是念珠菌属南极洲脂肪酶(Fluka目录号62299);洋葱假单胞菌脂肪酶(Fluka目录号62309);新霉CALB L(念珠菌属南极洲脂肪酶B)(新霉A/S);新霉435(念珠菌属南极洲脂肪酶B)(新霉A/S);或者脂酶TL IM(疏绵状毛高温霉脂肪酶)(新霉A/S,优选以固定化的形式。
在惰性溶剂(例如醚,合适地为四氢呋喃)中,合适地通过和例如亚硫酰氯、甲磺酰氯或对甲苯磺酰氯的试剂反应,将式(Va)顺式-醇的醇基转变为合适的离去基团,例如,卤素,如Cl或Br,优选Cl,或磺酸基,如甲磺酸基或甲苯磺酸基。所得的化合物具有式(VI)结构,其中LG是离去基团:
在一个优选实施方案中,LG是Cl,即式(VIa)的顺式氯化物:
然后将化合物VI(例如,带有的LG为氯)与2,2-二甲基哌嗪在合适的溶剂(例如酮,如甲基异丁基酮或甲基乙基酮,优选甲基异丁基酮)中,在碱(例如碳酸钾)的存在下反应,以得到化合物I。
此外,分子中的哌嗪部分可以通过使化合物VI与下面的式(VII)化合物反应来引入,其中PG是保护基,例如但不局限于,例如苯甲氧基羰基(常常称作Cbz或Z)、叔-丁氧基羰基(常常称作BOC)、乙氧基羰基、或苄基,从而得到下面的式(VIII)化合物。随后将化合物VIII脱保护得到化合物I。
在合成过程中,化合物I的某些顺式非对映异构体(即,1-((1S,3S)-6-氯-3-苯基二氢化茚-1-基)-3,3-二甲基哌嗪)在最终产物中作为杂质形成。这种杂质主要应归于在形成化合物VI的步骤中一些反式(VI)(例如,当LG是Cl时是(1S,3R)-3,5-二氯-1-苯基二氢化茚)的生成。因此,通过将所需的顺式化合物VI从反式和顺式(VI)的混合物中结晶出来可以使杂质减到最少;在该情况下LG在化合物VI中是Cl,这可通过将混合物与合适的溶剂(例如烷烃,如庚烷)搅拌来完成,从而将所需的顺式VI沉淀并使不想要的反式化合物VI进入溶液。通过过滤分离所需的顺式化合物VI(例如,当LG是Cl时),用上述溶剂洗涤并干燥。
还可以通过沉淀化合物I的合适的盐而除去顺式的化合物I,合适的盐为例如有机酸盐,如有机二元酸,合适地为式(I)化合物的富马酸盐或马来酸盐,随后任选地再次重结晶。
本发明在另一方面中还涉及如本文描述的用于合成式(I)化合物的的中间体,即特别是中间体Va和VI,包括化合物VIa。在本文中认为当指定该立体异构的形式时,则该立体异构体是化合物的主要成分。特别是当指定该对映体形式时,则该化合物具有对映体过量的所述对映体。
因此,本发明的一个实施方案涉及式(Va)化合物,优选具有至少60%的对映体过量(60%对映体过量是指在所述的混合物中Va与其对映体的比值是80∶20),至少70%,至少80%,至少85%,至少90%,至少96%,优选至少98%。此外,化合物的非对映体过量优选是至少70%(70%非对映体过量是指在所述的混合物中化合物Va与(1R,3S)-6-氯-3-苯基二氢化茚-1-醇的比值是85∶15),至少80%,至少85%,至少90%,或至少95%。一个实施方案涉及基本上纯的化合物Va。
本发明的另一实施方案涉及式(VI)化合物,优选具有至少60%的对映体过量,至少70%,至少80%,至少85%,至少90%,至少96%,优选至少98%。
其中LG是可能的离去基团,优选地选自卤素,例如氯,或磺酸基。一个实施方案涉及非对映体纯的化合物VI;即具有优选至少10%的非对映体过量(10%非对映体过量是指在所述的混合物中化合物VI与反式非对映体(例如(1S,3R)-3,5-二氯-1-苯基二氢化茚,当LG=Cl时)的比值是55∶45),至少25%或至少50%的化合物。一个实施方案涉及基本上纯的化合物VI。
因此,本发明还涉及具有以下式(VIa)的化合物:
优选地具有至少60%,至少70%,至少80%,至少85%,至少90%,至少96%,优选地至少98%的对映体过量。一个实施方案涉及非对映体纯的化合物,即具有优选至少10%的非对映体过量(10%非对映体过量是指在所述的混合物中该化合物与反式非对映体(例如(1S,3R)-3,5-二氯-1-苯基二氢化茚)的比值是55∶45),至少25%或至少50%的化合物。一个实施方案涉及基本上纯的化合物VI,其中LG是Cl。
如上所述,在一个特别有趣的实施方案中本发明涉及:
-化合物I或其盐,
-如本文描述的含有化合物或其盐的药物组合物,
-如本文描述的化合物I或其盐的医药用途,其中化合物I具有至少60%的对映体过量(60%对映体过量是指在所述的混合物中化合物I与其对映体的比值是80∶20),至少70%,至少80%,至少85%,至少90%,至少96%,优选至少98%。
一个实施方案涉及如本文描述的化合物I或其盐以及用途,其中化合物I具有至少10%的非对映体过量(10%非对映体过量是指在所述的混合物中化合物I与顺式-(1S,3S)非对映异构体的比值是55∶45),至少25%,至少50%,至少70%,至少80%,至少90%,至少95%,至少97%,优选至少98%。
一个实施方案涉及基本上纯的化合物I或其盐;还涉及本文所描述的医药用途。
另一方面涉及可得到的,特别是可通过如本文描述的本发明的方法获得的化合物I或其盐,特别是富马酸盐或马来酸盐;还涉及如本文所描述的医药用途。
在下面非限制性的实施例中将举例说明本发明。
实施例
药理学
结合测定
对于所有的测定:结果以占对照组的特异性结合的抑制作用百分比来表示,并且通过利用Hill方程曲线拟合的非线性回归分析来确定IC50值(引起对对照组的特异性结合的最大抑制作用的一半时的浓度)。抑制作用常数(Ki)是由Cheng Prusoff方程(Ki=IC50/(1+(L/KD))计算的,其中L等于测定中放射性配体的浓度,而KD等于放射性配体对受体的亲和力。
α-1肾上腺素能受体亚型
利用标准的稳定转染技术产生表达大鼠α1d的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系和表达牛α1a的幼仓鼠肾(BHK)细胞。从犹他大学(盐湖城,UT)获得表达仓鼠α1b受体的大鼠-1细胞系。收获表达合适的(α1a、α1b、α1d)受体的细胞系并使用Ultra-Turrax匀浆器在冰冷的50mM Tris pH 7.7中匀化,或者储存在-80℃保持冰冻直到使用。将[3H]哌唑嗪(0.3-0.5nM)用作评价α1受体亚型的亲和力的放射性配体。使用测定缓冲液确定总的结合并在1μM WB-4101存在下确定对所有α1受体亚型的非特异性结合。将等分试样在25℃培养20分钟。在所有测定中,通过在用聚亚乙基亚胺(PEI)预先处理的GF/B过滤器上真空过滤来分离结合的和游离的放射性配体,并在闪烁计数器中计数。
α-1肾上腺素能受体(对[3H]哌唑嗪与大鼠α-1-受体结合的抑制作用)
通过这种方法,在体外测定药物对来自大鼠脑的膜中[3H]哌唑嗪(0.25nM)与α-1受体的结合的抑制作用。该方法由hyttel等人在J.Neurochem,,1985,44,1615-1622中作了修改。
DA D1受体:
在接触实验室Cerep使用目录参考测定号803-1h确定对人D1受体的亲和力。使用来自表达人重组D1受体的CHO细胞的膜。将0.3nM[3H]-SCH23390用作放射性配体并在连续稀释物中测试化合物,同时测试参考化合物SCH23390,以便评价测定的适应性。将等分试样在22℃培养60分钟并用液体闪烁计数器测定结合的放射性。将特异性的对照对D1受体的结合定义为在没有化合物存在下测定的总结合与在1μM SCH 23390存在下确定的非特异性结合之间的差。
DA D2受体:
利用标准的稳定转染技术产生表达大约800fmol/mg人重组D2受体的CHO细胞。使用标准规程收获膜并通过向在50mM Tris-HCl,120mM NaCl、4mM MgCl2的混合物中的膜制剂中加入化合物的连续稀释物来测定亲和力。将0.1nM[3H]-螺环哌啶酮用作评价对人D2受体亲和力的放射性配体。在缓冲液存在下测定总的结合和在10μM氟哌啶醇存在下测定非特异性的结合。在37℃培养混合物30分钟,在冰上短暂地冷却。通过在用0.1%聚乙二胺(PEI)预先处理的GF/C过滤器上真空过滤分离结合的和游离的放射性配体,并将过滤器在闪烁计数器中计数。
效果测定
DA D1受体:
如下测定了该化合物对在内部产生的稳定地表达人重组D1受体的CHO细胞系中D1受体介导的cAMP形成的抑制能力:在实验前3天以11000细胞/孔的浓度将细胞接种在96-孔板上。在实验的当天,在预热的G缓冲液(1mM MgCl2、0.9mM CaCl2、1mM IBMX在PBS中的溶液)中洗涤细胞一次,并通过加入100μl的30nM A68930和稀释在G缓冲液中的试验化合物的混合物来开始测定。在37℃培养细胞20分钟,然后通过加入100μl S缓冲液(0.1M HCl和0.1mMCaCl2)来停止反应,并将板在4℃下放置1小时。加入68μl N缓冲液(0.15M NaOH和60mM NaAc)并将板摇动10分钟。将60μl反应物转移到含有40μl 60mM NaAc pH6.2的cAMP急骤板(FlashPlates)上,然后加入100μl IC混合物(50mM NaAc pH6.2、0.1%NaAzid、12mM CaCl2、1%BSA和0.15μCi/ml125I-cAMP)。在4℃培养18小时后,将板洗涤一次并在Wallac TriLux计数器中计数。
DA D2受体:
如下测定该化合物对在用人D2受体转染的CHO细胞中D2受体介导的对cAMP形成的抑制作用的抑制能力。在实验前3天以8000细胞/孔的浓度将细胞接种在96孔板上。在实验的当天,在预热的G缓冲液(1mM MgCl2、0.9mM CaCl2、1mM IBMX在PBS中的溶液)中将细胞洗涤一次,并通过加入100μl的1μM坤匹洛尔、10μM毛喉素(forskolin)和试验化合物的G缓冲溶液来开始测定。在37℃培养细胞20分钟,然后通过加入100μl S缓冲液(0.1M HCl和0.1mMCaCl2)来停止反应,并在4℃下放置板1小时。加入68μl N缓冲液(0.15M NaOH和60mM NaAc)并将板摇动10分钟。将60μl反应物转入含有40μl 60mM NaAc pH6.2的cAMP急骤板(FlashPlates)中,然后加入100μlIC混合物(50mM NaAc pH6.2、0.1%NaAzid、12mM CaCl2、1%BSA和0.15μCi/ml125I-cAMP)。在4℃培养18小时后,将板洗涤一次并在Wallac TriLux计数器中计数。
血清素5-HT2A受体
在实验前2或3天,将表达250fmol/mg 5-HT2A受体的CHO细胞以在实验当天足够得到单-融合层的密度铺成平板。在37℃下在湿度95%的5%CO2培养箱中给所述细胞装载染料(来自MolecularDevices的Ca2+-试剂盒并使用Hank′s平衡盐w/o酚红,加入20mMHEPES,并用2M NaOH将pH值调节到7.4作为分析缓冲液)60分钟。将激光强度设置到合适的水平,以得到大约8000-10000荧光单位的基础值。基础荧光的变化应小于10%。使用覆盖至少三十年的递增的试验化合物的浓度来评价EC50值。评价IC50值,将试验物质的相同的浓度范围与5-HT的EC85比较。将试验物质在5-HT前5分钟加入到细胞中。使用Cheng-Prusoff方程计算Ki值。测定一定浓度的试验化合物的激发百分数相对于最大浓度的5-HT(100%)。将一定浓度的试验化合物的抑制作用%测定为5-HT的EC85对其响应被降低的百分比。最大抑制是指曲线所能达到的抑制水平。它被表示成在该水平下的抑制百分数并用于区分完全和部分的拮抗剂。
化合物与CYP2D6相互作用的体外测定(CYP2D6抑制剂测定)
原理:使用微粒体和特异性的CYP2D6底物AMMC(3-[2-(N,N-二乙基-N-甲基铵)-乙基]-7-甲氧基-4-甲基香豆素)评价人CYP2D6的抑制作用,微粒体是从表达CYP2D6的杆状病毒/昆虫细胞cDNA作为酶源制备而来的。将AMMC O-脱甲基化为AHMC(3-[2-(N,N-二乙氨基)乙基]-7-羟基-4-甲基香豆素),后者是通过测定荧光的出现而被检测的。本发明的优选化合物对CYP2D6的活性表现出比5微摩尔更高的IC50。IC50是对CYP2D6活性产生50%抑制作用的化合物的浓度。
材料和方法:
由表达CYP2D6的杆状病毒/昆虫细胞cDNA制备而来的微粒体是从BD Biosciences(Gentest 456217)获得的。通过荧光光谱加孔板读数器(Tecan Nordic)测定荧光的Ex.(405nm)Em.(465nm)。与重组的CYP2D6微粒体和低NADPH-再生体系一起培养,该重组的CYP2D6微粒体含有1.5pmol在总体积为0.2ml pH值7.4的100mM磷酸盐缓冲液中的重组CYP2D6,所述磷酸盐缓冲液含有1.5AMMC(3-[2-(N,N-二乙基-N-甲基铵)-乙基]-7-甲氧基-4-甲基香豆素),低NADPH-再生体系由0.0082mM NADP+、0.41mM葡萄糖-6-磷酸、0.41mM氯化镁和0.4单位/ml葡萄糖-6-磷酸脱氢酶组成。培养时间是45分钟并通过添加0.075ml 80%乙腈20%0.5M Tris碱来淬灭培养。所有化学试剂都是分析等级的,来自Sigma(St.Louis,MO)。使用溶于DMSO(二甲亚砜)中的40-0.02微摩尔的8个浓度(培养液的最终浓度低于1.0%)的被测试化合物来产生IC50曲线(从N.Chauret等人,DMD,Vol.29,Issue 9,1196-1200,2001改良而来)。通过线性内推法计算IC50值。
QT-间隔
麻醉的兔子:
下面描述的模型最初由Carlsson等人,[J Cardiovasc Pharmacol.1990;16:276-85]设计为促心律不齐模型,但现已为改进为适合如下面“动物标本”下所述的筛选体系。
动物标本
从Harlan(荷兰)购买体重为2.0-2.8kg的雄兔(HsdIf:NZW,远亲后代)。在实验当天测定个体体重并记录。通过静脉输液戊巴比妥(10mg/ml,18mg/kg),接着用α-氯醛糖(100mg/kg,输液体积为4ml/kg,在20分钟内)经耳缘静脉给药来诱发全身麻醉。将气管插管并使兔子在45次跳动/分钟和6ml/kg的潮流气量下用空气通气。将血管导液管植入用于给药测试化合物的颈静脉中。将另外的导液管植入用于采血和监护血压的左侧颈动脉中。在皮下放置针形电极以记录标准的双极先导II:将阴极置于右肩的前部,将阳极置于接近左侧腰部。
实验方案
在短期的平衡之后,在赋形剂或测试化合物的IV丸剂给药前-20、-10和0分钟时得到前剂量值。跟踪丸剂给药的效果40分钟。
数据取样和计算
使用Macintosh计算机的图表软件v3.6.1将ECG、血压和HR连续地记录在Maclab 8/s上。采样频率是1000Hz。用电子仪器记录和测定对心电图(PQ-、QRS-、QT-、QTc-间隔和心率)和平均动脉血压(MAP)的影响。
分析方法
通过手性HPLC(使用CHIRALCELOD柱,0.46cm ID×25cmL,10μm,在40℃)测定实施例1a中的化合物(Va)的对映体过量。将正己烷/乙醇95∶5(vol/vol)用作流动相。在1.0ml/min的流速下,使用UV检测器在220nm下进行检测。
用于实施例1b的转化速率的HPLC分析:
柱:Lichrospher RP-8柱,250×4mm(5μm粒径)
洗脱液:如下制备的缓冲的MeOH/水:将1.1ml Et3N加入150ml水中,加入10%H3PO4(水溶液)至pH=7并加入水至总量为200ml。将混合物加入到1.8L MeOH中。
通过手性HPLC(使用CHIRALPAKAD柱,0.46cm ID×25cmL,10μm,在21℃)测定实施例1b中的化合物(Va)的对映体过量。将庚烷/乙醇/二乙胺89.9∶10∶0.1(vol/vol/vol)用作流动相,在1.0ml/min的流速下,使用UV检测器在220nm下进行检测。
通过熔凝二氧化硅毛细管电泳(CE)使用以下的条件确定化合物(I)的对映体过量:Capillar:50μm ID×48.5cm L,流动缓冲液:1.25mM β-环糊精在25mM磷酸二氢钠中的溶液,pH1.5,电压:16kV,温度:22℃,注入:40mbar 4秒,检测:柱状二极管阵列检测195nm,试样浓度:500μg/ml。在这一体系中,化合物I具有大约10分钟的保留时间,并且另一对映体具有大约11分钟的保留时间。
在Bruker Avance DRX500仪器上于500.13MHz或者在BrukerAC 250仪器上于250.13MHz记录1H NMR谱。将氯仿(99.8%D)或二甲亚砜(99.8%D)用作溶剂,并将四甲基硅烷(TMS)用作内标标准物。
使用如Bges等人在J.Med.Chem.1995,38,4380-4392(4388页,右列)中所述的1H NMR确定化合物的顺/反式比值。通过在氯仿中的1H NMR,使用顺式异构体在5.3ppm处的信号和反式异构体在5.5ppm处的信号的积分确定化合物VI的顺/反式比值。通常,可以通过NMR将含量大约在1%的不希望的异构体检测出来。
使用差示扫描量热法(DSC)测定熔点。设备是TA-InstrumentsDSC-2920,在5°/分钟下将其校准以得到作为起始值的熔点。在氮气流下以5°/min将大约2毫克的样品在松散封闭的锅中加热。合成
关键原料的合成
通过改自Bges在J.Med.Chem.1983,26,935中描述的方法,通过用硼氢化钠(NaBH4)还原IV来合成化合物V,使用乙醇作为溶剂,并在大约0℃进行该反应。两种化合物均描述于Bges等人的Med.Chem.1995,38,4380-4392中。使用Sommer等人在J.Org.Chem.1990,55,4822中描述的一般方法从II合成化合物IV,其中还描述了II及其合成。
实施例1a 使用手性色谱法合成(1S,3S)-6-氯-3-苯基二氢化茚-1-醇(Va)
使用CHIRALPAKAD柱,10cm ID×50cm L,10μm,在40℃通过制备色谱拆分外消旋的顺式-6-氯-3-苯基二氢化茚-1-醇(V)(492克)。将甲醇用作流动相,在190ml/min的流速下,使用UV检测器在287nm下进行检测。将外消旋的醇(V)以50,000ppm的甲醇溶液注入;在28分钟间隔内注入90ml。将所有包含超过98%对映体过量的标题化合物的馏分合并,然后用旋转蒸发器蒸发至干,随后在40℃的真空中干燥。得到220克固体。元素分析和NMR与其结构一致,按照手性HPLC,对映体过量高于98%,[α]D 20+44.5(c=1.0,甲醇)。
实施例1b 通过利用酶催化拆分合成(1S,3S)-6-氯-3-苯基二氢化茚-1-醇(Va)
将化合物V(5g,20.4mmol)溶于150ml无水甲苯中。加入0.5g新酶435(念珠菌属南极洲脂肪酶B)(新酶A/S,Fluka目录号73940),随后加入丁酸乙烯酯(13ml 102.2mmol)。在21℃下使用机械搅拌器搅拌混合物。1天后,加入额外的0.5g新酶435。4天后达到54%的转化率时,过滤混合物并在真空中进行浓缩以得到含有(1R,3R)-顺式-6-氯-3-苯基二氢化茚-1-醇-丁酸酯和99.2%对映体过量的所需的化合物Va(99.6%化合物Va和0.4%(1R,3R)-顺式-6-氯-3-苯基二氢化茚-1-醇)的混合物的油状物。
实施例2(1S,3S)-3,5-二氯-1-苯基二氢化茚(VI,LG=Cl)的合成
将按照实施例1a中所描述的方法得到的顺式-(1S,3S)-6-氯-3-苯基二氢化茚-1-醇(Va)(204克)溶于THF(1500ml)并冷却到-5℃。在1h期间内滴加在THF(500ml)中的溶液形式的亚硫酰氯(119克)。在室温下将混合物搅拌过夜。把冰(100g)加入到该反应混合物中。当冰融化时,分离水相(A)和有机相(B),用饱和的碳酸氢钠(200ml)将有机相B洗涤两次。将碳酸氢钠相与水相A合并,用氢氧化钠(28%)调节到pH9,然后再将有机相B洗涤一次。分离所得的水相(C)和有机相B,并用乙酸乙酯萃取水相C。将乙酸乙酯相与有机相B合并,用硫酸镁干燥,然后使用旋转蒸发器蒸发至干,得到油状的标题化合物。产率为240克,直接用于实施例5中。根据NMR确定的顺/反式比值为77∶23。
实施例3 3,3-二甲基哌嗪-2-酮的合成
将碳酸钾(390克)和乙二胺(1001克)与甲苯(1.501)一起搅拌。加入2-溴代异丁酸乙酯(500克)的甲苯溶液(750ml)。将悬浮液加热至回流过夜,然后过滤。用甲苯(500ml)洗涤滤饼。将合并的滤液(体积为4.0l)在水浴上加热并在0.3大气压下使用Claisen装置蒸馏;在35℃收集第一批1200ml馏出物(混合物中的温度是75℃)。加入更多的甲苯600ml),并在76℃收集另外的1200ml馏出物(混合物中的温度是80℃)。再次加入甲苯(750ml),然后在66℃收集1100ml馏出物(混合物中的温度是71℃)。在冰浴上搅拌混合物并接种,借此将产物沉淀。通过过滤将产物分离,用甲苯洗涤,并在真空中在50℃烘箱中干燥过夜。得到171g 3,3-二甲基哌嗪-2-酮(52%)。NMR与结构一致。
实施例4 2,2-二甲基哌嗪的合成
将3,3-二甲基哌嗪-2-酮(8.28kg,64.6mol)和四氢呋喃(THF)(60kg)的混合物加热到50-60℃。得到略微不澄清的溶液。在氮气下搅拌THF(50kg),并加入LiAlH4(250g,在可溶性塑料袋中,来自Chemetall),产生缓慢放出的气体。气体停止放出后,加入更多LiAlH4(总共用了3.0kg,79.1mol),并且由于放热,温度从22℃升高到了50℃。在41-59℃在2小时内缓慢地加入3,3-二甲基哌嗪-2-酮溶液。将该悬浮液在59℃(夹套温度为60℃)再搅拌一小时。冷却混合物,并保持温度在25℃以下(必须用温度为0℃的夹套冷却)在两小时内加入水(3l)。然后在23℃在20分钟内加入氢氧化钠(15%,3.50kg),必要时进行冷却。在半小时内加入更多的水(9l)(必要的冷却),并将混合物在氮气下搅拌过夜。加入过滤试剂硅藻土(4kg),过滤混合物。用THF(40kg)洗涤滤饼。在800mbar下将合并的滤液在反应器中浓缩,直到反应器内的温度是70℃(蒸馏温度为66℃)。将残余物(12.8kg)进一步在旋转蒸发器上浓缩到大约10l。最后,在大气压下将混合物分段蒸馏,并在163-4℃收集产物。产率为5.3kg(72%)。NMR与结构一致。
实施例5反式-1-((1R,3S)-6-氯-3-苯基二氢化茚-1-基)-3,3-二甲基哌嗪鎓(化合物I)马来酸氢盐的合成
将顺式-(1S,3S)-3,5-二氯-1-苯基二氢化茚(VI,LG=Cl)(240g)溶于2-丁酮(1800ml)。加入碳酸钾(272g)和2,2-二甲基哌嗪(在实施例4中制备的)(113g)并将该混合物在回流温度加热40小时。向反应混合物中加入二乙醚(2l)和盐酸(1M,6l)。分离各相,并用浓盐酸将水相的pH值从8降低到1。再次用水相洗涤有机相,以便确保所有产物处于水相之中。将氢氧化钠(28%)加入到水相中,直到pH值是10为止,并用二乙醚(2l)将水相萃取两次。合并二乙醚萃取液,用硫酸钠干燥,然后使用旋转蒸发器蒸发至干。得到251克油状的标题化合物。根据NMR确定的顺/反式比值为82∶18。将该粗油状物(大约20克)进一步在硅胶上用闪式色谱法提纯(洗脱剂:乙酸乙酯/乙醇/三乙胺90∶5∶5),接着在旋转蒸发器上蒸发至干。得到12克油状(根据NMR确定的顺/反式比值为90∶10)的标题化合物。将该油溶于乙醇(100ml)中,然后向这种溶液中加入马来酸的乙醇溶液至pH 3。将所得的混合物在室温下搅拌16小时,然后通过过滤收集形成的沉淀物。减少乙醇的体积并收集另一批沉淀物。得到3.5克标题化合物的固体(按照NMR没有检测到顺式异构体)。对映体过量>99%。
熔点为175-178℃。NMR与结构一致。
实施例6化合物I的合成
将反式-1-((1R,3S)-6-氯-3-苯基二氢化茚-1-基)-3,3-二甲基哌嗪马来酸氢盐(I)(9.9克)、浓氨水100ml)、盐水(150ml)和乙酸乙酯(250ml)的混合物在室温下搅拌30分钟。分离各相,再次用乙酸乙酯萃取水相。将合并的有机相用盐水洗涤,经硫酸镁干燥,过滤并在真空中蒸发至干。得到7.5克油。NMR与结构一致。
实施例7反式-1-((1R,3S)-6-氯-3-苯基二氢化茚-1-基)-3,3-二甲基哌嗪鎓(化合物I)富马酸盐的合成
将反式-1-((1R,3S)-6-氯-3-苯基二氢化茚-1-基)-3,3-二甲基哌嗪(如实施例6所述得到的)(1g)溶于丙酮(100mL)中。向这种溶液中加入富马酸的乙醇溶液,直到所得溶液的pH值是4为止。在冰浴中将所得混合物冷却1.5小时,从而形成沉淀。通过过滤收集固体化合物。将该化合物在真空中干燥得到白色固体化合物(1.0g)。对映体过量>99%。熔点为193-196℃。NMR与结构一致。