CN1805750A - 活性维生素d单用或与其它治疗性制剂联用治疗免疫介导的疾病 - Google Patents

Abstract

本发明涉及通过给予动物活性维生素D化合物来治疗、缓解或预防动物中免疫介导的疾病的方法。本发明还涉及通过将活性维生素D化合物与其它治疗性制剂联合给予动物来治疗、缓解或预防动物中免疫介导的疾病的方法。

Description

活性维生素D单用或与其它治疗性制剂联用治疗免疫介导的疾病

                   发明背景

发明领域

本发明涉及通过给予动物活性维生素D化合物来治疗、缓解动物中免疫介导的疾病的方法。本发明还涉及通过将活性维生素D化合物与其它治疗性制剂联合给予动物来治疗、缓解动物中免疫介导的疾病的方法。

背景技术

维生素D是一种必需的作为钙平衡正调节器的脂肪可溶性维生素(见Harrison′s Principles of Internal Medicine：Part Eleven，″Disorders of Bone andMineral Metabolism，″Chapter 335，pp.1860-1865，E.Braunwald等编，McGraw-Hill，New York(1987))。维生素D的活性形式是1α，25-二羟基维生素D₃(也称为钙三醇(骨化三醇))。从不参与钙平衡的各种器官的细胞中已经发现了活性维生素D化合物的特异性核受体(Miller等，Cancer Res.52：515-520(1992))。除了影响钙平衡外，活性维生素D化合物还涉及骨形成，免疫反应的调节，胰腺B细胞分泌胰岛素过程的调节，肌细胞的机能以及表皮和造血组织的分化和生长。

另外，已有许多报道证实了活性维生素D化合物在治疗过度增殖性疾病(如癌症和牛皮癣)中的用途。例如，现已表明某些维生素D化合物和类似物通过诱导恶性细胞(具体是白血病细胞)分化成非恶性巨噬细胞(单核细胞)而有很强的抗白血病活性，从而可用于治疗白血病(Suda等，美国专利No.4,391,802；Partridge等，美国专利No.4,594,340)。还报道了钙三醇和其它维生素D₃类似物在治疗前列腺癌方面有抗增殖和分化作用(Bishop等，美国专利No.5,795,882)。活性维生素D化合物也参与了皮肤癌的治疗(Chida等.，Cancer Research45：5426-5430(1985))，结肠癌的治疗(Disman等.，Cancer Research 47：21-25(1987))，和肺癌的治疗(Sato等人，Tohoku J.Exp.Med.138：445-446(1982))。提示活性维生素D化合物有重要的治疗用途的其它报道归纳总结在Rodriguez等的美国专利No.6,034,079中。

活性维生素D化合物也与其它药物制剂，具体是细胞毒性制剂联合给药来治疗过度增殖性疾病。例如，已证明用活性维生素D化合物预先处理过度增殖的细胞然后用细胞毒性制剂治疗，可增强该细胞毒性制剂的效果(美国专利6,087,350；WO 01/64251)。

维生素D参与正常的细胞生长和成熟。其作为免疫调节剂的作用已受到了更多的关注。几种免疫介导的疾病，例如，多发性硬化，Sjgren氏综合征，类风湿性关节炎，甲状腺炎和克罗恩氏病与维生素D水平低有关。关于综述，见Deluca等，FASEB J.15：2579-2585(2001)；Long等，Pediat.Infect.Dis.J.18：283-290(1999)；Cantorna，Proc.Soc.Exp.Biol.Med.223：230-233(2000))。

尽管活性维生素D化合物的给药会导致显著的治疗效果，但是用该化合物治疗过度增殖性疾病、免疫介导的疾病和其它疾病受到了这些化合物对钙代谢的影响的限制。在有效用作抗增殖剂/免疫抑制剂的体内所需水平下，活性维生素D化合物会通过其内在固有的钙血(calcemic)活性来诱导显著升高且有潜在危险性的血钙水平。即，由于高钙血症风险，钙三醇和其它活性维生素D化合物在临床上用作抗增殖剂的用途受到严格限制。

已有很多研究在鉴定保留了抗增殖作用但对钙代谢的影响较低的维生素D类似物和衍生物。已产生了成百的化合物，其中很多化合物的高钙血作用降低，但还没有发现既保留了抗增殖活性同时完全消除了高钙血作用的化合物。

现已表明，全身性高钙血症的问题可通过以“脉冲给药(pulse-dose)”方式给予足量活性维生素D化合物来克服，这样可观察到有抗增殖作用且同时避免严重高钙血症的发生。根据美国专利No.6,521,608，活性维生素D化合物可每隔三天以上给药，例如一周一次，剂量为每天至少0.12微克/千克(对于70千克人而言为8.4微克)。用于美国专利No.6,521,608的脉冲给药方案中的药物组合物含有5-100微克活性维生素D化合物，其可以口服、静脉内、肌内、局部、透皮、舌下、鼻内、瘤内或其它制剂形式给予。

自身免疫疾病

身体的免疫系统应该是防护身体抗细菌、病毒以及任何其它外来物质，当该系统出现故障，产生抗健康组织、细胞和器官的抗体时，就引起了自身免疫疾病。T细胞和巨噬细胞提供有益的保护，但也可产生有害的或致命的免疫应答反应。

自身抗体可引起自身免疫疾病的原理性机制是靶细胞的补体依赖的裂解性破坏，调理作用，免疫复合物的形成，生理性配基受体位点的阻塞和细胞表面受体的刺激。自身抗体可结合于细胞表面受体并抑制或刺激细胞的特定功能(Paul，W.E.主编，Fundamental Immunology，Raven Press，New York，31章，p.839(1989))。

自身免疫疾病可以是器官特异性的或系统性的(全身性的)，可由不同的致病机制引起。器官特异性自身免疫的特征是T细胞区室内的耐受性和抑制，主要组织相容性复合体(MHC)抗原的异常表达，抗原模拟和MHC基因的等位基因变异。系统性自身免疫疾病包括多克隆B细胞的活化和免疫调节性T细胞、T细胞受体以及MHC基因的异常。器官特异性自身免疫疾病的例子包括糖尿病、甲状腺机能亢进症、自身免疫性肾上腺技能不全、纯红细胞性贫血、多发性硬化和风湿性心炎。典型的系统性自身免疫疾病包括系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、慢性炎症、Sjgren氏综合征、多肌炎、皮肌炎和硬皮病。

现在对自身免疫疾病的治疗包括给予免疫抑制剂如可的松、氨甲喋呤、硝基咪唑硫嘌呤和环磷酰胺或其组合。然而，给予免疫抑制剂时面临两难的选择，患者治疗的越有效，其对感染侵袭的抵抗力越差。因此，需要改进的、更安全的、对预防和治疗自身免疫疾病具有长期效果的治疗。具体地，需要比现在可用的治疗性制剂更具有特异性并且毒性更小的治疗。

炎性疾病

炎症在宿主防卫和免疫介导的疾病的进展中起着重要作用。在对伤害(例如外伤、缺血和外来颗粒)和感染(例如细菌或病毒感染)的应答反应中，通过各事件(包括化学调节剂(例如细胞因子和前列腺素)和炎性细胞(如白细胞))的复杂级联启动了炎性反应。炎性反应的特征是血流增加、毛细渗透增加，以及噬菌细胞的汇集。这些事件导致了受伤或感染部位的肿胀、发红、发热(热方式改变)以及发脓。

细胞因子和前列腺素控制着炎性反应，它们在有次序的和自身限制的级联中被释放到血液或受侵袭的组织中。细胞因子和前列腺素的这种释放增加了向受伤或感染区域的血流，并可能造成发红和发热。有些此类的化学品引起液体渗漏到组织中，造成肿胀。这种保护性的过程可刺激神经并引起疼痛。当这些改变在有限的时间里发生在相关区域时，对身体有益。

在炎性反应中，体液和细胞免疫元素之间精巧的平衡的相互作用可消除有害物质，启动受损组织的修复。当这种精巧的平衡的相互作用被打破时炎性反应可对正常组织造成严重的损伤，并且可能比启动该反应的最初侵袭更为有害。在这些不受控制的炎性反应中，需要临床干涉以阻止组织受伤害以及器官功能异常。类风湿性关节炎、骨关节炎、克罗恩氏病、牛皮癣和炎性肠疾病等疾病的特征都是慢性炎症。

现在对炎性疾病的治疗包括症状性给药法和免疫抑制剂以控制症状。例如，非甾体抗炎药物(NSAID)如阿司匹林，布洛芬，非诺洛芬，萘普生，托美丁；，苏灵大，甲氯灭酸钠，吡罗昔康，氟比洛尔，二氯芬酸，丙嗪，萘丁美酮，依托度酸和酮洛芬，具有止痛和抗炎作用。然而，据信NSAID不能改变疾病的进程。(Tierney等，主编，Current Medical Diagnosis & Treatment，37版，Appleton &Lange(1998)，p.793)。而且，NSAID经常引起胃肠道的副作用，影响下肠道，造成穿孔或加剧炎性肠疾病，产生肾脏毒性，延长出血时间。

皮质类甾醇是另一类常用的控制炎性症状的药物。像NSAID一样，皮质类甾醇不改变疾病的自然进程，因此，当停用该药时，活跃的疾病的临床表现常常再次出现。长期的皮质类甾醇治疗造成难以应付的反应，这一严重问题大大限制了它的长期使用。

低剂量的免疫抑制剂例如细胞毒制剂也常用于炎性疾病的治疗。例如，氨甲喋呤，叶酸的一种拮抗剂，常被用于牛皮癣、类风湿性关节炎以及其它炎性疾病的治疗。像其它细胞毒制剂一样，氨甲喋呤常常引起口腔炎、红斑、秃头症、恶心、呕吐、腹泻，并伤害主要器官如肾和肝。免疫抑制剂的长期使用往往使患者对感染没有抵抗力。

人们在坚持不懈地寻找炎性疾病的新的治疗。具体说，人们在坚持不懈地寻找针对炎性疾病的根本原因、降低现在所用药物的剂量和/或给药频率或可使现在所用的治疗更有效的新治疗。

移植排异

移植排异发生在接受来自遗传不同的个体组织的个体中，由T细胞依赖性机制介导。为防止同种异体移植物排异，将免疫抑制剂，如神经贮钙蛋白磷酸酶抑制剂(如环孢菌素A，FK506和雷帕霉素)和直接或间接妨碍干扰素(IL)-2信号转导的糖皮质激素给予移植接受者(见，例如Borel，PharmacoL Rev.42：260-372(1989)；Morris，P.J.，Curr.Opin.Inzmurlol.3：748-751(1991)；Sigal等，Ann.Rev.Inanmunol.10：519-560(1992)；和L′Azou等，Arch.Toxicol.73：337-345(1999))。免疫抑制剂的作用持续时间短，因此移植接受者通常需要一生都用免疫抑制剂治疗以防止移植排异。长期施用免疫抑制剂造成移植接受者受严重的副作用之苦，例如发生感染和癌症。

环孢菌素A，FK506和雷帕霉素是现在最常用的免疫抑制剂。这些免疫抑制剂通过破坏T细胞受体(TCR)信号转导而不加分别的作用于所有T细胞。给移植接受者长期施用环孢菌素A或FK506造成很多严重的不良效应，包括但不限于，肾小管的变化，震颤，多毛症，高血压，高血脂，牙龈增生，神经毒性，胃肠道并发症，高血钾，高血糖和糖尿病。见，例如Hardman等主编，Goodman&Gilman′s，治疗的药理学基础(The Pharmacological Basis Of Therapeutics)，第10版，Mc-Graw-Hill，New York(2001)，pp.1468-1470。除给予环孢菌素A或FK506等免疫抑制剂来防止同种异体移植物排异之外的另一种选择是给予调节TCR活化、T辅助细胞(Th)1/Th2细胞增殖和/或Th1/Th2细胞分化的制剂。这类制剂的例子包括但不限于，CTLA-4Ig，抗CD40抗体，抗CD40配基抗体，抗IL-2受体抗体和抗CD28抗体。虽然这些制剂更加地靶向特异性，但将它们给予个体后，还是可能而且确实发生了过敏性反应。此外，淋巴组织增生和机会性感染是常见的与施用这些制剂相关的不良副作用。因此，需要改进的、更安全的、对预防和治疗移植排异具有长期作用的治疗。具体说，需要比现在可用的治疗药剂更特异并且毒性更小的治疗。

                            发明概述

本发明的一个方面是一种用于治疗、缓解或预防动物中免疫介导的疾病的方法，该方法包括给予动物活性维生素D化合物。在本发明第二个优选的方面，活性维生素D具有降低的高钙血效应，使得可以给予动物较高剂量的该化合物而不诱导高钙血症。在本发明的另一个实施方式中，活性维生素D化合物以脉冲给药方式给予从而可给予动物高剂量的活性维生素D化合物而不诱导高钙血症。本发明的另一个方面是一种用于治疗、缓解或预防动物中免疫介导的疾病的方法，该方法包括将活性维生素D化合物和一种或多种治疗性制剂联合给予动物。

在本发明的一个优选实施方式中，免疫介导的疾病是自身免疫疾病，炎性疾病或移植排异。在优选实施方式中，一种或多种治疗制剂选自免疫调节剂，抗血管生成剂，抗炎剂或皮肤病制剂。在另外的实施方式中，给予治疗性制剂的组合。在本发明的一个实施方式中，可在给予一种或多种治疗性制剂之前开始给予维生素D，和/或在给予一种或多种治疗性制剂时或之外继续给予维生素D。在本发明的另一个实施方式中，将维生素D和一种或多种治疗性制剂联合给予的方法被重复一次以上。

本发明维生素D和一种或多种治疗性制剂的组合可具有附加的效力或附加的治疗效果。本发明还包括治疗功效大于叠加的增效性组合。优选地，这类组合还降低或避免不需要的或不良的效应。在某些实施方式中，本发明包括的组合治疗提供一种总体治疗，该治疗相对于单用活性维生素D或任何治疗性制剂有所改进。在某些实施方式中，可降低现有或试验性的治疗制剂的剂量，或给药频率减少，这可增加患者的依从性，从而改进了治疗，降低不需要的或不良的效应。

此外，本发明的方法不仅可用于以前未治疗的患者，还可用于免疫介导的疾病的现有标准和/或试验性治疗部分或完全难以控制的患者的治疗。在优选的实施方式中，本发明提供用于治疗或缓解已表明或有可能难以受其它疗法控制或对其它疗法不响应的免疫介导的疾病的方法。

                            发明详述

本发明的一个方面是一种用于治疗、缓解或预防动物中免疫介导的疾病的方法，该方法包括给予动物活性维生素D化合物。在本发明第二个优选的方面，活性维生素D具有降低的高钙血效应，使得可以给予动物较高剂量的该化合物而不诱导高钙血症。本发明的另一个方面是用于治疗、缓解或预防动物中免疫介导的疾病的方法，该方法包括以脉冲给药方式给予活性维生素D化合物，从而可给予动物高剂量的活性维生素D化合物而不诱导高钙血症。

本发明的另一个方面是一种用于治疗、缓解或预防动物中免疫介导的疾病的方法，该方法包括将活性维生素D化合物和一种或多种治疗性制剂联合给予动物，这些治疗性制剂是正在使用的、已使用的，或已知可用于治疗、缓解或预防免疫介导的疾病的治疗性制剂。

本文所述的方法可用于治疗或缓解自身免疫疾病，包括但不限于簇状秃发，强直性脊柱炎，抗磷脂综合征，自身免疫阿狄森氏病，肾上腺自身免疫疾病，自身免疫溶血性贫血，自身免疫肝炎，自身免疫卵巢炎和睾丸炎，自身免疫血小板减少症，Beget氏病，大泡性类天疱疮，心肌症，腹腔口炎性皮炎，慢性疲劳免疫障碍综合征，慢性炎性脱髓鞘多神经病，丘-施综合征，瘢痕性类天疱疮，CREST综合征，冷凝集素病，克罗恩氏病，盘状狼疮，特发性混合性冷球蛋白血症，纤维肌痛-纤维肌炎，血管球性肾炎，格雷夫斯氏病，急性感染性多发性神经炎，桥本氏甲状腺炎，先天性肺纤维化，先天性血小板减少性紫癜，IgA神经病，青年性关节炎，扁平苔癣，Ménière氏病，混合性结缔组织疾病，多发性硬化，I型或免疫介导的糖尿病，严重肌无力，寻常天疱疮，恶性贫血，节结性多动脉炎，polychrondritis，多腺综合征，风湿性多肌病，多肌炎和皮肌炎，原发性无丙种球蛋白血症，原发性胆硬化，牛皮癣，牛皮癣关节炎，雷诺氏现象，莱特尔氏综合征，类风湿性关节炎，肉状瘤病，硬皮病，进行性全身性硬化症，肖格伦氏综合征，古德帕斯彻氏综合征，全身肌强直综合征，全身性红斑狼疮，红斑狼疮，高安氏动脉炎，颞动脉炎，巨细胞性动脉炎，溃疡性结肠炎，眼色素层炎，脉管炎(vasculitides)如疱疹样皮炎脉管炎，白癫风以及韦格纳氏肉芽肿病。本文所述的方法对于治疗或缓解具有以下特征的自身免疫疾病尤其有用：淋巴细胞的T细胞向受侵袭真皮或表皮组织的渗透增加，增加的T细胞活化和/或异常抗原呈递，或增加的B细胞活化和/或异常抗体的产生。

本文所述方法可用于治疗或缓解炎性疾病，包括但不限于，哮喘，脑炎，炎性肠疾病(例如克罗恩氏病和溃疡性结肠炎)，慢性阻塞性肺疾病，炎性骨质溶解，过敏性疾病，脓毒性休克，肺纤维化(例如先天性肺纤维化)，炎性脉管炎(如节结性多动脉炎，韦格纳氏肉芽肿病，高安氏动脉炎，颞动脉炎，和淋巴瘤样肉芽肿)，创伤后血管成形(例如血管成形术后再狭窄)，未分化脊椎关节病，未分化关节病，关节炎，炎性骨质溶解，慢性肝炎，以及由于长期病毒或细菌感染造成的慢性炎症。具体的，本文所述方法可用于治疗或缓解以增加的T细胞活化和/或异常抗原呈递为特征的炎性病症。本文所述的方法还可用于治疗或缓解与炎性骨质溶解相关的一种或多种症状，以异常的骨质再吸收为特征的病症，或以骨质流失为特征的病症(如骨质疏松症)。

本文所述方法可用于治疗、缓解或预防移植排异，包括但不限于，肝移植排异，肾移植排异，骨移植排异，皮肤移植排异，心脏移植排异，血液灌输排异和眼移植排异。

本发明所述的方法还可用于以增加的T细胞或B细胞活化和/或异常T细胞或B细胞活化为特征的皮肤病症，例如，牛皮癣，紫外线损伤，遗传过敏性皮炎，过敏性和刺激接触性皮炎，扁平苔癣，簇状秃发，坏疽性脓皮病，白癫风，瘢痕性类天疱疮，红斑狼疮，硬皮病和风疹。可用本发明的组合物和方法治疗的牛皮癣类型的例子包括但不限于，斑块性牛皮癣，脓疱性牛皮癣，红皮性牛皮癣，滴状牛皮癣和皮褶牛皮癣。

如本文所用，术语“免疫介导的病症”和“免疫介导的疾病”以及类似的术语指由身体免疫应答反应引起的病症和疾病。在一个具体的实施方式中，免疫介导的病症是由异常的或失控的T细胞介导的应答反应引起的病症。在另一个具体的实施方式中，这种病症是由异常的或失控的B细胞介导的应答反应引起的病症。免疫介导的病症的例子包括但不限于，自身免疫疾病，炎性疾病，免疫介导的皮肤病，以及移植排异。在某些实施方式中，免疫介导的病症不是牛皮癣或过度增殖性病症。根据本发明，术语“免疫介导的病症”不包括癌症。

如本文所用，术语“治疗有效量”指足够使病症的一种或多种症状缓解，或阻止病症发展，或使病症消退的治疗制剂的量。例如，对于以炎症为特征的炎性疾病或自身免疫疾病的治疗，治疗有效量指减轻关节、器官或组织的炎症至少5％，优选至少10％，至少15％，至少20％，至少25％，至少30％，至少35％，至少40％，至少45％，至少50％，至少55％，至少60％，至少65％，至少70％，至少75％，至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少100％的治疗制剂的量。对于牛皮癣的治疗，治疗有效量优选指减轻人牛皮癣区域和严重性指数(PASI)评分至少20％，至少35％，至少30％，至少40％，至少45％，至少50％，至少55％，至少60％，至少65％，至少70％，至少75％，至少80％或至少85％的治疗制剂的量。或者，对于牛皮癣的治疗，治疗有效量优选指提高人总体评估分数至少25％，至少35％，至少30％，至少40％，至少45％，至少50％，至少55％，至少60％，至少65％，至少70％，至少75％，至少80％，至少85％，至少90％或至少95％的治疗制剂的量。对于类风湿性关节炎的治疗，治疗有效量优选指降低人疾病活性评分(DAS)分数至少20％，至少35％，至少30％，至少40％，至少45％，至少50％，至少55％，至少60％，至少65％，至少70％，至少75％，至少80％或至少85％的治疗制剂的量。对于红斑狼疮的治疗，治疗有效量优选指降低人全身狼疮活性检测(SLAM)分数至少20％，至少35％，至少30％，至少40％，至少45％，至少50％，至少55％，至少60％，至少65％，至少70％，至少75％，至少80％，or至少85％的治疗制剂的量。

如本文所用，术语“移植排异”、“器官移植排异”和“移植物-对-宿主疾病”可互换使用，指受体免疫系统对遗传不同的组织、器官或移植物的排斥。

如本文所用，术语“治疗”指由于给予一种或多种治疗制剂而导致的与免疫介导的病症有关的一种或多种症状的缓解。在某些实施方式中，这些术语指由于给予患有免疫介导的病症的动物一种或多种治疗制剂而导致的一个或多个关节肿胀的减轻，或与免疫介导的病症有关的疼痛的减轻。在其它实施方式中，这些术语指人PASI评分、DAS评分或SLAM评分的降低。在其它实施方式中，这些术语指人总体评估分数的提高。

如本文所用，术语“活性维生素D化合物”指当给予患者或与细胞接触时具有生物活性的维生素D化合物。维生素D化合物的生物活性可采用本领域技术人员熟知的试验进行评估，如测定维生素D调控的基因表达的免疫试验。维生素D化合物在机体中以几种具有不同活性水平的形式存在。例如，维生素D化合物可先在肝脏中在碳-25位发生羟化而部分活化，然后在肾脏中进一步在碳-1位羟化而完全活化。原型活性维生素D化合物是1α，25-羟基维生素D₃。已知大量的其它活性维生素D化合物，并可用于本发明的实施。本发明的活性维生素D化合物包括但不限于以下专利所述维生素D化合物的同类物、同源物和衍生物，各专利均纳入本文作为参考：美国专利4,391,802(1α羟基维生素D衍生物)；4,717,721(其17-侧链长度大于胆固醇或麦角钙化醇侧链的1α-羟基衍生物)；4,851,401(环戊烷基维生素D同类物)；5,145,846(带烯基、炔基和烷基侧链的维生素D₃同类物)；5,120,722(三羟基骨化三醇)；5,547,947(氟代胆骨化醇化合物)；5,446,035(甲基取代的维生素D)；5,411,949(23-氧杂衍生物)；5,237,110(19-去甲-维生素D化合物)；4,857,518(羟基化24-高(homo)维生素D衍生物)。具体的例子包括ROCALTROL(Roche Laboratories)；CALCIJEX可注射骨化三醇；LeoPharmaceutical研究的药物，如EB 1089(24a，26a，27a-三高-22，24-二烯-1αa，25-(OH)₂-D₃)，KH 1060(20-g表-22-氧杂-24a，26a，27a-三高-1α，25-(OH)₂D₃)，MC 1288和MC 903(骨化三醇)；Roche Pharmaceutical的药物如：1，25-(OH)₂-16-烯-D₃，1，25-(OH)₂-16-烯-23-炔-D₃和25-(OH)₂-16-烯-23-炔-D₃；Chugai Pharmaceuticals如22-氧杂骨化三醇(22-氧杂-1α，25-(OH)₂-D₃)；Illionis大学如1α-(OH)-D₅；和Medical Chemistry-Schering AG研究所如ZK161422(20-甲基-1，25-(OH)₂-D₃)和ZK 157202(20-甲基-23-烯-1，25-(OH)₂-D₃)；1α-(OH)-D₂；1α-(OH)-D₃和1α-(OH)-D₄。其它例子包括1α，25-(OH)₂-26，27-d₆-D₃、1α，25-(OH)₂-22-烯-D₃、1α，25-(OH)₂-D₃、1α，25-(OH)₂-D₂、1α，25-(OH)₂-D₄、1α，24，25-(OH)₃-D₃、1α，24，25-(OH)₃-D₂、1α，24，25-(OH)₃-D₄、1α-(OH)-25-FD₃、1α-(OH)-25-FD₄、1α-(OH)-25-FD₂、1α，24-(OH)₂-D₄、1α，24-(OH)₂-D₃、1α，24-(OH)₂-D₂、1α，24-(OH)₂-25-FD₄、1α，24-(OH)₂-25-FD₃、1α，24-(OH)₂-25-FD₂、1α，25-(OH)₂-26，27-F₆-22-烯-D₃、1α，25-(OH)₂-26，27-F₆-D₃、1α，25S-(OH)₂-26-F₃-D₃、1α，25-(OH)₂-24-F₂-D₃、1α，25S，26-(OH)₂-22-烯-D₃、1α，25R，26-(OH)₂-22-烯-D₃、1α，25-(OH)₂-D₂、1α，25-(OH)₂-24-表-D₃、1α，25-(OH)₂-23-炔-D₃、1α，25-(OH)₂-24R-F-D₃、1α，25S，26-(OH)₂-D₃、1α，24R-(OH)₂-25F-D₃、1α，25-(OH)₂-26，27-F₆-23-炔-D₃、1α，25-(OH)₂-26-F₃-D₃、1α，25，28-(OH)₃-D₂、1α，25-(OH)₂-16-烯-23-炔-D₃、1α，24R，25-(OH)₃-D₃、1α，25-(OH)₂-26，27-F₆-23-烯-D₃、1α，25R-(OH)₂-22-烯-26-F₃-D₃、1α，25S-(OH)₂-22-烯-26-F₃-D₃、1α，25R-(OH)₂-D₃-26，26，26-d₃、1α，25S-(OH)₂-D₃-26，26，26-d₃和1α，25R-(OH)₂-22-烯-D₃-26，26，26-d₃。其它例子可见于美国专利No.6,521,608。也见，例如，美国专利No.6,503,893；6,482,812；6,441,207；6,410,523；6,399,797；6,392,071；6,376,480；6,372,926；6,372,731；6,359,152；6,329,357；6,326,503；6,310,226；，6,288,249；6,281,249；6,277,837；6,218,430；6,207,656；6,197,982；6,127,559；6,103,709；6,080,878；6,075,015；6,072,062；6,043,385；6,017,908；6,017,907；6,013,814；5,994,332；5,976,784；5,972,917；5,945,410；5,939,406；5,936,105；5,932,565；5,929,056；5,919,986；5,905,074；5,883,271；5,880,113；5,877,168；5,872,140；5,847,173；5,843,927；5,840,938；5,830,885；5,824,811；5,811,562；5,786,347；5,767,111；5,756,733；5,716,945；5,710,142；5,700,791；5,665,716；5,663,157；5,637,742；5,612,325；5,589,471；5,585,368；5,583,125；5,565,589；5,565,442；5,554,599；5,545,633；5,532,228；5,508,392；5,508,274；5,478,955；5,457,217；5,447,924；5,446,034；5,414,098；5,403,940；5,397,775；5,395,830；5,393,749；5,384,313；5,374,629；5,373,004；5,371,249；5,321,018；5,281,731；5,260,290；5,254,538；5,250,523；5,247,104；5,246,925；5,232,836；5,194,431；5,185,150；5,086,191；5,036,061；5,030,772；4,973,584；5,354,744；4,940,700；4,927,815；4,866,048；4,851,400；4,847,012；4,804,502；4,769,181；4,755,329；4,719,205；4,719,204；4,619,920；4,594,192；4,588,716；4,588,528；4,564,474；4,552,698；4,689,180；4,505,906；4,502,991；4,481,198；4,448,726；4,448,721；4,428,946；4,411,833；4,367,177；4,360,472；4,360,471；4,358,406；4.336.193；4,307,231；4,307,025；4,305,880；4,279,826；和4,248,791。

在本发明的一个优选实施方式中，活性维生素D化合物与维生素D相比具有降低的高血钙效应，从而可给予高剂量的该化合物而不在动物中诱导高血钙症。降低的高血钙效应定义为比给予等剂量的1α，25-羟基维生素D₃(骨化三醇)所诱导的高钙血效应低的效应。作为例子，EB1089的高钙血效应是骨化三醇高钙血效应的50％。具有降低的高钙血效应的另外的活性维生素D化合物包括Ro23-7553和Ro24-5531，可获自Hoffman LaRoche。具有降低的高钙血效应的活性维生素D化合物的其它例子可见于美国专利No.4,717,721。确定活性维生素D的高钙血效应在本领域是常规的，可如Hansen等，Curr.Pharm.Des.6：803-828(2000)所述进行。

活性维生素D化合物的给药

活性维生素D化合物优选给药剂量约为1μg-285μg，更优选约15μg-105μg。在一个具体的实施方式中，活性维生素D化合物的有效量是3，4，5，10，15，20，25，30，35，40，45，50，55，60，65，70，75，80，85，90，95，100，105，110，115，120，125，130，135，140，145，150，155，160，165，170，175，180，185，190，195，200，205，210，215，220，225，230，235，240，245，250，255，260，265，270，275，280或285μg或更多。在某些实施方式中，活性维生素D化合物的有效量是约1μg-285μg，更优选约15μg-250μg，更优选约15μg-200μg，更优选约15μg-105μg，更优选约20μg-80μg，更优选约30μg-60μg，甚至更优选约45μg。在某些实施方式中，本发明的方法包括给予活性维生素D的剂量为约0.12μg/kg体重-3μg/kg体重。化合物可通过任何途径给予，包括口服、肌肉内、胃肠外、直肠、鼻、局部或透皮。

如果每天给予活性维生素D化合物，可保持低剂量，例如约0.5μg-5μg，以避免或减少高钙血症的诱导。如果活性维生素D化合物具有降低的高钙血效应，可给予更高的日剂量而不造成高钙血症，例如约10μg-20μg或更高(高达约50μg-100μg)。

在本发明的一个优选实施方式中，活性维生素D化合物以脉冲给药方式给予，从而可给予更高剂量的活性维生素D化合物而不诱导高钙血症。脉冲给药指间歇性给予活性维生素D化合物，方案为连续间歇性给药或不连续间歇性给药。高剂量的活性维生素D化合物包括如上文所述的大于3μg。因此，在本发明某些实施方式中，治疗或缓解免疫介导的病症的方法包括间歇性给予高剂量活性维生素D化合物。脉冲给药的频率可受很多因素限制，包括但不限于，化合物或剂型的药代动力学以及活性维生素D化合物对动物的药效作用。例如，患有免疫介导的疾病且肾脏功能受损的动物需要的活性维生素D化合物给药频率可能更少，因为这些动物分泌钙的能力降低。

以下只是示例性的，仅用于阐释术语“脉冲给药”可包括本领域技术人员设计的任何不连续给药方案。

在一个实施例中，活性维生素D化合物的给药频率可不多于每3天一次，每4天一次，每5天一次，每6天一次，每7天一次，每8天一次，每9天一次，或每10天一次。给药可连续1，2，3或4周或1，2或3个月，或更长。任选地，一段时间的间歇后，可用相同或不同的方案给予活性维生素D化合物。根据活性维生素D化合物对动物的药效作用，间歇的时间可以是1，2，3或4周，或更长。在另一个实施例中，可每周一次给予活性维生素D化合物，进行3个月。在优选实施方式中，每周一次给予活性维生素D化合物，在4周的周期中给予3周。间隙1周后，可用相同或不同的方案给予活性维生素D化合物。可用于本发明方法的给药方案的其它例子提供于出版的美国治疗No.6,521,608，整体纳入作为参考。

提供上述的给药方案只是处于阐述的目的，不应理解为限制性的。本领域技术人员将可容易地理解所有活性维生素D化合物均在本发明的范围内，并且活性维生素D化合物的准确剂量和给药方案可由于很多因素而变化。

在疾病或病症的短期或长期治疗中，药物制剂的治疗有效剂量可根据以下因素而变化，包括但不限于，被治疗的疾病或病症，具体的药物制剂和给药途径。根据本发明的方法，有效剂量的活性维生素D化合物是有效治疗或缓解免疫介导的病症的任何剂量的该化合物。高剂量的活性维生素D化合物可以是约3μg-285μg或上述范围内的任何剂量。剂量、剂量频率、持续时间或其任意组合，可根据动物的年龄、体重、反应和以往的病历以及药物制剂的给药途径、药代动力学、药效作用而变化。这些因素是本领域技术人员通常所考虑的。

维生素D化合物的吸收率和清除率受很多本领域技术人员熟知的因素影响。如上所述，活性维生素D化合物药代动力学特性限制了血液中可获得的维生素D化合物的峰值浓度、而不诱发高钙血症。活性维生素D化合物吸收率以及吸收度、分布、在组织中的结合或定位、生物转化以及细胞的分泌都可影响药物制剂可给药的频率。在某些实施方式中，根据上述的给药方案，以脉冲给药方式给予高剂量活性维生素D化合物作为治疗或缓解免疫介导的病症的方法。

在本发明一个实施方式中，活性维生素D化合物的给药剂量足够达到其峰值血浆浓度约为0.1nM-20nM。在某些实施方式中，本发明的方法包括活性维生素D化合物的给药剂量达到峰值血浆浓度为0.1nM，0.2nM，0.3nM，0.4nM，0.5nM，0.6nM，0.7nM，0.8nM，0.9nM，1nM，2nM，3nM，4nM，5nM，6nM，7nM，8nM，9nM，10nM，12.5nM，15nM，17.5nM或20nM或其中的任何浓度范围。在其它实施方式中，活性维生素D化合物的给药剂量达到其峰值血浆浓度超过约0.5nM，优选0.5nM-20nM，更优选约1nM-10nM，更优选约1nM-7nM，甚至更优选约3nM-5nM。

在其它优选实施方式中，活性维生素D化合物的给药剂量至少为0.12μg/kg体重，更优选剂量为约0.5μg/kg体重。

本领域技术人员将认同，这些标准剂量是用于约70kg的平均体型的成年人，并且可根据如上所述通常考虑的因素而调整。

在某些实施方式中，本发明的方法还包括给予活性维生素D化合物的剂量迅速，例如4小时内达到峰值血浆浓度。在另外的实施方式中，本发明的方法包括给予活性维生素D化合物的剂量被快速(例如在小于12小时的清除半衰期内)清除。

虽然获得高浓度的活性维生素D化合物是有益的，但它必须与临床安全性例如高钙血症相平衡。因此，在本发明的一个方面，本发明的方法包括间断性地给予患有免疫介导的疾病的动物高剂量的活性维生素D化合物，监测动物与高钙血症有关的症状。这些症状包括软组织(例如心脏组织)钙化，骨密度增加以及高钙血肾病。在另外的实施方式中，本发明的方法包括间断性地给予患有免疫介导的疾病的动物高剂量的活性维生素D化合物，监测动物的钙血浆浓度以确保钙血浆浓度低于约10.2mg/dL。

在某些实施方式中，可安全地获得维生素D化合物的高血液水平，同时降低钙到血液的运输。在一个实施方式中，当与钙降低的饮食例如钙摄入少于600mg/天，优选约400-500mg/天联合给予时，获得更高的活性维生素D化合物水平而没有高钙血症的发作。在另一个实施方式中，可在晚上睡前给予活性维生素D化合物以将钙的吸收最小化。见美国专利No.5,891,865。在一个实施例中，可由不能通过小肠被运输到血液中的吸附剂、吸收剂、配基、螯合物或其它结合部分来截留钙。在另一个实施例中，可通过将例如二膦酸盐如唑来膦酸(zoledronate)，帕米膦酸钠或阿仑膦酸钠与活性维生素D化合物联合给予来抑制破骨细胞化合率。

在某些实施方式中，安全地获得维生素D化合物的高血液水平，同时将钙的清除率最大化。在一个实施例中，可通过确保足够的水合和盐摄入来增加钙的分泌。在另一个实施例中，可用利尿剂治疗来增加钙的分泌。活性维生素D化合物可作为包含药学上可接受的运载体的药物组合物的一部分给予，其中活性维生素D化合物的量可有效达到其设定的目的。药物组合物还可含有一种或多种赋形剂，稀释剂或本领域技术人员已知的并且与本发明制剂的方法有密切关系的任何成分。

药物组合物可制备成单次剂型。剂型适于口服、粘膜(鼻、舌下、阴道、口腔、直肠)、胃肠外(静脉、肌肉内、动脉内)，或局部给予。本发明有效的剂型包括口服剂型和静脉内剂型。静脉内剂型包括但不限于，推注或滴注。在优选实施方式中，静脉内剂型是无菌的，或可在给予对象之前进行灭菌，因为它们通常绕过患者的天然防污染屏障。静脉内剂型的例子包括但不限于注射用水USP；水性运载体包括但不限于：氯化钠注射液、林格氏注射液、葡萄糖注射液、葡萄糖和氯化钠注射液、乳酸化的林格氏注射液；可与水溶混的运载体包括但不限于：乙醇、聚乙二醇和聚丙二醇；和非水性运载体包括但不限于：玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯和苯甲酸苄酯。

在本发明的一个优选实施方式中，包含活性维生素D化合物的药物组合物是乳液前浓缩物(preconcentrate)制剂。本发明的组合物应对了或显著减少了该领域内遇到的与活性维生素D化合物治疗相关的困难，包括，具体是给予患者后化合物的不良的药代动力学参数。

本发明一方面提供了一种药物组合物，它包含(a)亲脂相组分，(b)一种或多种表面活性剂，(c)活性维生素D化合物；其中所述组合物是乳液前浓缩物，它在以水∶组合物为1∶1或水更多的比例用水稀释后形成在400nm下的吸光度大于0.3的乳液。本发明的药物组合物还可包含一亲水相组分。

本发明另一方面提供了一种药物乳液组合物，它包含水(或其它水性溶液)和乳液前浓缩物。

本文所用的术语“乳液前浓缩物”表示在与例如水接触后能提供乳液的体系。本文所用的术语“乳液”指包含水和有机组分(包括疏水性(亲脂性)有机组分)的胶态分散液。术语“乳液”包括本领域技术人员能理解的常规的乳液，以及下文所定义的“亚微米液滴乳液”。

本文所用的术语“亚微米液滴乳液”表示包含水和有机组分(包括疏水性(亲脂性)有机组分)的胶态分散液，其中有机组分形成的液滴或颗粒具有小于约1000nm的平均最大尺寸。

亚微米液滴乳液可鉴定为具有以下一个或多个特征。当使其各组分接触而基本上没有提供能量(例如没有加热或高速剪切装置或其它显著搅动)时，它们是自发或基本上自发形成的。它们具有热力学稳定性，并且是单相的。

亚微米液滴乳液颗粒可以是球形的，但也可以是其它结构，例如具有片层、六角形或等方形对称性的液晶。通常，亚微米液滴乳液包括最大尺寸(例如平均直径)在大约50-1000nm、更佳在200-300nm之间的液体或颗粒。

本文所用的术语“药物组合物”理解为组合物的个别组分或成分本身是药学上可接受的，例如当预计用于口服给药时其是口服所接受的，当预计用于局部给药时是局部给药所能接受的。

本发明的药物组合物通常在用水稀释后形成乳液。根据本发明，在以水∶组合物为大约1∶1或水更高的比例下用水稀释乳液前浓缩物后将形成乳液。根据本发明，水与组合物的比例例如可以在1∶1至5000∶1之间。例如水和组合物的比例可以约为1∶1，2∶1，3∶1，4∶1，5∶1，10∶1，200∶1，300∶1，500∶1，1000∶1，或5000∶1。本领域技术人员很容易确定适合任何给定情况或场合的水与组合物的具体比例。

根据本发明，在用水稀释所述乳液前浓缩物后，将形成在400nm处吸光度至少为0.3的乳液。在以1∶100稀释本发明的乳液前浓缩物后形成的乳液在400nm下的吸光度例如在0.3-4.0之间。例如，在400nm下的吸光度例如约为0.4，0.5，0.6，1.0，1.2，1.6，2.0，2.2，2.4，2.5，3.0，或4.0。测定液体溶液吸光度的方法是本领域技术人员所熟知的。本领域技术人员能够确定和调节本发明的乳液前浓缩物的组分的相对比例，以便在用水稀释后获得吸光度在本发明范围内的乳液。

本发明的药物组合物例如可以是半固体制剂或液体制剂。本发明的半固体制剂可以是本领域普通技术人员所知道的任何半固体制剂，例如包括凝胶、糊浆、乳膏和油膏。

本发明的药物组合物包含亲脂相组分。适合用作亲脂相组分的组分包括任何药学上可接受的与水不互溶的溶剂。这些溶剂没有或基本上没有表面活性剂功能。

亲脂相组分可包括单酸、二酸或三酸甘油酯。可用于本发明范围内的单酸、二酸或三酸甘油酯包括从C₆，C₈，C₁₀，C₁₂，C₁₄，C₁₆，C₁₈，C₂₀和C₂₂脂肪酸衍生获得的那些。典型的甘油二酯具体包括，二油精、二棕榈精以及混合的三辛酸甘油酯-三癸酸甘油酯二酯。较佳的的三酸甘油酯(甘油三酯)包括植物油、鱼油、动物脂肪、氢化的植物油、部分氢化的植物油、合成的甘油三酯、改性的甘油三酯、分级的甘油三酯、中等和长链甘油三酯、结构性甘油三酯及其混合物。

在上述列出的甘油三酯中，较佳的甘油三酯包括：杏仁油、巴巴苏油、琉璃苣油、黑醋栗油、菜籽油、蓖麻油、椰子油、玉米油、棉籽油、月见草油、葡萄籽油、落花生油、芥菜籽油、橄榄油、棕榈油、棕榈核油、花生油、油菜籽油、红花油、芝麻油、鲨鱼肝油、豆油、向日葵油、氢化的蓖麻油、氢化的椰子油、氢化的棕榈油、氢化的豆油、氢化的植物油、氢化的棉籽油和蓖麻油、部分氢化的豆油、部分酱油和棉籽油、三己酸甘油酯、三辛酸甘油酯、三癸酸甘油酯、三(十一烷酸)甘油酯、三月桂酸甘油酯、三油酸甘油酯、三亚油酸甘油酯、三亚麻酸甘油酯、辛酸/癸酸甘油三酯、辛酸/癸酸/月桂酸甘油三酯、辛酸/癸酸/亚油酸甘油三酯和辛酸/癸酸/硬脂酸甘油三酯。

较佳的甘油三酯是以LABRAFAC CC商品名购买的中链甘油三酯。其它较佳的甘油三酯包括中性油，例如中性植物油，具体是分级的椰子油如以商品名MIGLYOL市售的产品，包括产品MIGLYOL 810；MIGLYOL 812；MIGLYOL818；和CAPTEX 355。

其它合适的是辛酸-癸酸甘油三酯，例如已知以MYRITOL市售的产品(包括MYRITOL 813)。其它合适的此类产品是CAPMUL MCT，CAPTEX 200，CAPTEX 300，CAPTEX 800，NEOBEE M5和MAZOL 1400。

作为亲脂相组分，尤其佳的是产品MIGLYOL 812.(见美国专利No.5,342,625)。

本发明的药物组合物可进一步包含亲水相组分。亲水相组分可包括，例如，药学上可接受的低分子量单氧基烷二醇或多氧基烷二醇的C_1-5烷基或四氢糠基二醚或偏醚。合适的亲水相组分包括，例如含2-12个碳原子(尤其是4个碳原子)的单氧或多氧(尤其是单氧或二氧)烷二醇的二醚或偏醚(尤其是偏醚)。较佳的是，单或多氧烷二醇部分为直链。用于本发明的典型亲水相组分是已知以TRANSCUTOL和COLYCOFUROL为商品名出售的产品(见美国专利No.5,342,625)。

在一个尤其佳的实施方案中，亲水相组分包含1，2-丙二醇。

本发明的亲水相组分当然还可包括一种或多种额外的组分。然而，较好的是任何额外添加的组分宜包含使活性维生素D化合物足够可溶的材料，从而使得作为活性维生素D化合物载体介质的亲水相的效力没有显著受损。可行的额外亲水相组分的例子包括低级(例如C_1-5)烷醇，尤其是乙醇。

本发明的药物组合物还包含一种或多种表面活性剂。可用于本发明的表面活性剂包括亲水性或亲脂性表面活性剂，或其混合物。尤其佳的是非离子亲水性和非离子亲脂性表面活性剂。

合适的亲水性表面活性剂包括天然或氢化植物油与乙二醇的反应产物，即聚乙二醇化的天然或氢化的植物油，例如聚乙二醇化的天然或氢化的蓖麻油。这些产物可用已知方式获得，例如通过天然或氢化的蓖麻油或其级分与环氧乙烷以大约1∶35至1∶60的摩尔比反应获得，并从产物中任选地除去游离的聚乙二醇组分，例如按照德国Auslegeschriften 1,182,388和1,518,819中公开的方法进行。

适用于本发明药物化合物的亲水性表面活性剂还包括聚氧乙烯-山梨糖醇酐-脂肪酸酯，例如，单和三月桂酰基、棕榈酰基、硬脂酰基和油酰基酯，例如已知以TWEEN为商品名购得的产品，其包括：

TWEEN 20(聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐单月桂酸酯)，

TWEEN 40(聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐单棕榈酸酯)，

TWEEN 60(聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐单硬脂酸酯)，

TWEEN 80(聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐单油酸酯)，

TWEEN 65(聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐三硬脂酸酯)，

TWEEN 85(聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐三油酸酯)，

TWEEN 21(聚氧乙烯(4)山梨糖醇酐单月桂酸酯)，

TWEEN 61(聚氧乙烯(4)山梨糖醇酐单硬脂酸酯)，和

TWEEN 81(聚氧乙烯(5)山梨糖醇酐单油酸酯)。

用于本发明组合物的此类产品中尤其佳的是上述产品TWEEN 40和TWEEN 80(见Hauer，等.，美国专利No.5,342,625)。

另外适合用于本发明药物化合物的亲水性表面活性剂是聚氧乙烯烷基醚；聚乙二醇脂肪酸酯，例如聚氧乙烯硬脂酸酯；聚甘油脂肪酸酯；聚氧乙烯甘油酯；聚氧乙烯植物油；聚氧乙烯氢化植物油；多元醇和诸如脂肪酸、甘油酯、植物油、氢化植物油以及固醇的物质的反应混合物；聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物；聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物；丁二酸二辛酯(dioctylsuccinate)、磺基琥珀酸二辛酯钠(diocytlsodiumsulfosuccinate)、二-[2-乙基己基]-琥珀酸酯或十二烷基硫酸钠；磷脂，尤其是卵磷脂如大豆卵磷脂；丙二醇单-和二-脂肪酸酯，例如丙二醇二辛酸酯、丙二醇二月桂酸酯、丙二醇羟基硬脂酸酯、丙二醇异硬脂酸酯、丙二醇月桂酸酯、丙二醇蓖麻油酸酯、丙二醇硬脂酸酯，尤其佳的是丙二醇辛酸-癸酸二酯；和胆汁盐，如碱金属盐，如牛磺胆酸钠。

合适的亲脂性表面活性剂包括醇类；聚氧乙烯烷基醚；脂肪酸；胆汁酸；甘油脂肪酸酯；乙酰化甘油脂肪酸酯；低级醇脂肪酸酯；聚乙二醇脂肪酸酯；聚乙二醇甘油脂肪酸酯；聚丙二醇脂肪酸酯；聚氧乙烯甘油酯；单/二甘油酯的乳酸酯；丙二醇二甘油酯；山梨糖醇酐脂肪酸酯；聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯；聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物；酯交换的植物油；固醇；糖酯；糖醚；蔗糖甘油酯(sucroglycerides)；聚氧乙烯植物油；聚氧乙烯氢化植物油；多元醇和至少一种选自脂肪酸、甘油酯、植物油、氢化植物油和固醇的物质的反应混合物；及其混合物。

适合用于本发明药物化合物的亲脂性表面活性剂还包括天然植物油三酸甘油酯和聚亚烷基多元醇的酯交换产物。这些酯交换产物是本领域中已知的，可根据美国专利No.3,288,824的通用步骤获得。它们包括各种天然(例如非氢化的)植物油(例如玉米油、核仁油、杏仁油、落花生油、橄榄油和棕榈油及其混合物)与聚乙二醇(尤其是平均分子量为200-800的聚乙二醇)的酯交换产物。较佳的是通过2摩尔份天然植物油三酸甘油酯与一摩尔份聚乙二醇(如平均分子量为200-800)酯交换而获得的产物。各种形式的酯交换产物是已知的，以商品名LABRAFIL购得。

适用于本发明药物组合物的其它亲脂性表面活性剂包括油溶性维生素衍生物，例如生育酚PEG-1000琥珀酸酯(“维生素E TPGS”)。

其它适合用作本发明药物化合物中的亲脂性表面活性剂是单-、二-和单/二-甘油酯，尤其是辛酸或癸酸与甘油的酯交换产物；山梨糖醇酐脂肪酸酯；季戊四醇脂肪酸酯和聚亚烷基二醇醚，例如季戊四醇- -二油酸酯、-二硬脂酸酯、-单月桂酸酯、-聚乙二醇醚和-单硬脂酸酯，以及季戊四醇-脂肪酸酯；单甘油酯，例如甘油单油酸酯，甘油单棕榈酸酯和甘油单硬脂酸酯；甘油三乙酸酯或(1，2，3)-三醋精；以及固醇及其衍生物，例如胆固醇及其衍生物，尤其是植物甾醇(如包含谷甾醇、菜油甾醇或豆甾醇的产物)，及其环氧乙烷加合物，例如大豆固醇及其衍生物。

本领域普通技术人员可以理解，几种市售的表面活性剂组合物含有少量至适量三酸甘油酯，通常是诸如酯交换反应中三酸甘油酯起始物的不完全反应的结果。因此，适用于本发明药物组合物的表面活性剂包括那些含有三酸甘油酯的表面活性剂。含有三酸甘油酯的市售表面活性剂组合物的例子包括，表面活性剂家族GELUCIRES，MAISINES，ANDIMWITORS中的一些成员。这些化合物的具体例子是GELUCIRE 44/14(饱和聚乙二醇化甘油三酯)；GELUCIRE 50/13(饱和聚乙二醇化甘油三酯)；GELUCIRE 53/10(饱和聚乙二醇化甘油三酯)；GELUCIRE 33/01(半合成的C8-C18的饱和脂肪酸的甘油三酯)；GELUCIRE39/01(半合成的甘油三酯)；其它GELUCIRE，例如37/06，43/01，35/10，37/02，46/07，48/09，50/02，62/05，等；MAISINE35-1(亚油酸甘油三酯)；和IMWITOR742(辛酸/癸酸甘油三酯)(见美国专利No.6,267,985)。

本领域技术人员还知道其它一些具有显著含量的甘油三酯的市售表面活性剂组合物。应当理解这些含甘油三酯和表面活性剂的组合物也适合来提供本发明的亲脂相组分的全部或部分以及表面活性剂的全部或部分。

当然，本发明组合物中组分的相对比例将根据组合物的具体类型的不同而显著不同。该相对比例也将根据组合物中组分的具体功能而异。相对比例还将根据采用的具体组分以及产品组合物所需的物理性质而异，例如在组合物用于局部用时，它是否是自由流动的液体还是糊浆。在任何具体情况下确定可行的比例是本领域普通技术人员力所能及的。因此，下述所有的比例和相对重量应理解为仅仅是表示较佳的或个别的发明教导，而不是对本发明最宽范围的限制。

本发明的亲脂相组分的合适含量为组合物总重量的大约30-90％重量。较佳的是，亲脂相组分的含量为组合物总重量的大约50-85％重量。

本发明的表面活性剂的合适含量为组合物总重量的大约1-50％重量。较佳的是，表面活性剂的含量为组合物总重量的大约5-40％重量。

本发明组合物中活性维生素D化合物的含量显然取决于预定的给药途径以及其它组分存在的程度。然而，通常本发明的活性维生素D化合物的合适含量约为组合物总重量的0.005-20％重量。较佳的是，活性维生素D化合物的含量为组合物总重量的0.01-15％重量。

本发明的亲水相组分的合适含量为组合物总重量的大约2-20％重量。较佳的是，亲水相组分的含量约为组合物总重量的5-15％重量。

本发明的药物组合物可以是半固体制剂。本发明范围内的半固体制剂可包括，例如含量约为组合物总重量60-80％重量的亲脂相组分，含量约为组合物总重量的5-35％重量的表面活性剂，以及含量约为组合物总重量的0.01-15％重量的活性维生素D化合物。

本发明的药物组合物可以是液体制剂。本发明范围内的液体制剂可包含，例如，含量约为组合物总重量50-60％重量的亲脂相组分，含量约为组合物总重量4-25％重量的表面活性剂，含量约为组合物总重量0.01-15％重量的活性维生素D化合物，以及含量约为组合物总重量的5-10％重量的亲水相组分。

可采用的其它组合物包括以下组合物，其中各组分占该组合物总重量的百分比不包括活性维生素D化合物：

a   Gelucire 44/14                    大约50％

    Miglyol 812                       大约50％

b   Gelucire 44/14                    大约50％

    维生素E TPGS                      大给10％

    Miglyol 812                       大约40％

c   Gelucire 44/14                    大约50％

    维生素E TPGS                      大约20％

    Miglyol 812                       大约30％

d   Gelucire 44/14                    大约40％

    维生素E TPGS                      大约30％

    Miglyol 812                       大约30％

e   Gelucire 44/14                    大约40％

    维生素E TPGS                      大约20％

    Miglyol 812                       大约40％

f   Gelucire 44/14                    大约30％

    维生素E TPGS                      大约30％

    Miglyol 812                   大约40％

g   Gelucire 44/14                大约20％

    维生素E TPGS                  大约30％

    Miglyol 812                   大约50％

h   维生素E TPGS                  大约50％

    Miglyol 812                   大约50％

i   Gelucire 44/14                大约60％

    维生素E TPGS                  大约25％

    Miglyol 812                   大约15％

j   Gleucire 50/13                大约30％

    维生素E TPGS                  大约5％

    Miglyol 812                   大约65％

k   Gelucire 50/13                大约50％

    Miglyol 812                   大约50％

l   Gelucire 50/13                大约50％

    维生素E TPGS                  大约10％

    Miglyol 812                   大约40％

m   Gelucire 50/13                大约50％

    维生素E TPGS                  大约20％

    Miglyol 812                   大约30％

n   Gelucire 50/13                大约40％

    维生素E TPGS                  大约30％

    Miglyol 812                   大约30％

o   Gelucire 50/13                大约40％

    维生素E TPGS                  大约20％

    Miglyol 812                   大约40％

p   Gelucire 50/13                大约30％

    维生素E TPGS                  大约30％

    Miglyol 812                   大约40％

q   Gelucire 50/13                大约20％

    维生素E TPGS                  大约30％

    Miglyol 812                            大约50％

r   Gelucire 50/13                         大约60％

    维生素E TPGS                           大约25％

    Miglyol 812                            大约15％

s   Gelucire 44/14                         大约50％

    PEG 4000                               大约50％

t   Gelucire 50/13                         大约50％

    PEG 4000                               大约50％

u   维生素E TPGS                           大约50％

    PEG 4000                               大约50％

v   Gelucire 44/14                         大约33.3％

    维生素E TPGS                           大约33.3％

    Miglyol 812                            大约33.3％

w   Gelucire 50/13                         大约33.3％

    维生素E TPGS                           大约33.3％

    PEG 4000                               大约33.3％

x   Gelucire 44/14                         大约50％

    Vitamin E TPGS                         大约50％

y   Gelucire 50/13                         大约50％

    Vitamin E TPGS                         大约50％

z   Vitamin E TPGS                         大约5％

    Miglyol 812                            大约95％

aa  Vitamin E TPGS                         大约5％

    Miglyol 812                            大约65％

    PEG 4000                               大约30％

ab  Vitamin E TPGS                         大约10％

    Miglyol 812                            大约90％

ac  Vitamin E TPGS                         大约5％

    Miglyol 812                            大约85％

    PEG 4000                               大约10％；和

ad  Vitamin E TPGS                         大约10％

Miglyol 812                             大约80％

PEG 4000                                大约10％

在本发明的一个实施方式中，药物组合物含有活性维生素D化合物、亲脂组分和表面活性剂。亲脂组分的百分比可以是约1％-100％。亲脂组分的百分比可以是约1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36，37，38，39，40，41，42，43，44，45，46，47，48，49，50，51，52，53，54，55，56，57，58，59，60，61，62，63，64，65，66，67，68，69，70，71，72，73，74，75，76，77，78，79，80，81，82，83，84，85，86，87，88，89，90，91，92，93，94，95，96，97，98，99或100％。表面活性剂的百分比可以是约1％-100％。表面活性剂的百分比可以是约1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36，37，38，39，40，41，42，43，44，45，46，47，48，49，50，51，52，53，54，55，56，57，58，59，60，61，62，63，64，65，66，67，68，69，70，71，72，73，74，75，76，77，78，79，80，81，82，83，84，85，86，87，88，89，90，91，92，93，94，95，96，97，98，99或100％。在一个实施方案中，亲脂组分是MIGLYOL812，表面活性剂是维生素E TPGS。在优选实施方式中，药物组合物含有50％MIGLYOL 812和50％维生素E TPGS，90％MIGLYOL 812和10％维生素ETPGS，或95％MIGLYOL 812和5％维生素E TPGS。

在本发明另一个实施方式中，药物组合物含有活性维生素D化合物和亲脂组分例如约100％MIGLYOL 812。

在一个优选实施方式中，药物组合物包括50％MIGLYOL 812，50％维生素E TPGS和少量的BHA和BHT。已表明该制剂化学上和物理上都出乎意料得稳定(见实施例3)。增强的稳定性为该组合物提供了更长的保存期。重要的是，这种稳定性还使得该组合物可在室温保存，从而避免了冷藏保存时的一些复杂因素和花费。此外，该组合物适于口服，并且已表明可溶解高剂量的活性维生素D化合物，因此可用于高剂量脉冲给予活性维生素D化合物来治疗过度增殖性疾病和其它疾病。

包含本发明活性维生素D化合物的药物组合物还可包含一种或多种添加剂。本领域熟知的添加剂包括，例如防粘剂、防沫剂、缓冲剂、抗氧化剂(例如抗坏血酸棕榈酸酯、丁基羟基茴香醚(BHA)、丁基羟基甲苯(BHT)和生育酚(例如α-生育酚(维生素E)))、防腐剂、螯合剂、粘度调节剂、张力调节剂(tonicifier)、调味剂、着色剂、香料、遮光剂、悬浮剂、粘合剂、填充剂、增塑剂、润滑剂及其混合物。这些添加剂的用量很容易由本领域技术人员根据所需具体性质来确定。例如，基于组合物的总重量，抗氧化剂的量可以是约0.05-0.35重量％。

添加剂还可包括增稠剂。合适的增稠剂可以是那些本领域中已知和使用的，包括例如，药学上可接受的聚合物材料和无机增稠剂。用于本发明药物组合物的典型增稠剂包括聚丙烯酸酯和聚丙烯酸酯共聚物树脂，例如聚丙烯酸和聚丙烯酸/甲基丙烯酸树脂；纤维素和纤维素衍生物，包括烷基纤维素如甲基-、乙基-、和丙基-纤维素；羟烷基纤维素如羟丙基纤维素；和羟丙基烷基纤维素如羟丙基甲基纤维素；乙酰化纤维素如醋酸纤维素、乙酸苯二甲酸纤维素、乙酸琥珀酸纤维素和苯二甲酸羟丙基甲基纤维素；及其盐，例如羧甲基纤维素钠；聚乙烯吡咯烷酮，例如包括聚-N-乙烯吡咯烷酮，和乙烯吡咯烷酮共聚物如乙烯吡咯烷酮-乙酸乙烯酯共聚物；聚乙烯树脂，例如包括聚乙酸乙烯酯和醇，以及其它聚合材料，包括胺黄树胶、阿拉伯胶、海藻酸盐如海藻酸及其盐如海藻酸钠；和无机增稠剂，如atapulgite、膨润土和硅土，包括亲水性二氧化硅产物如烷基化(如甲基化)硅胶，具体是胶态二氧化硅产品。

可加入上述这些增稠剂，例如来提供缓释效果。然而，当希望口服给药时，通常不需要使用前述增稠剂，它们通常不是优选的。另一方面，当预计用于局部施用时，要施用增稠剂。

本发明的组合物可以任何合适的方式来给药，例如以口服形式、以单位剂型形式、在溶液中、在硬的或软的胶囊形式(包括明胶胶囊形式)、以诸如软膏、糊浆、洗液、凝胶、油膏、泥罨、糊剂、膏药、皮肤贴剂等方式进行肠胃外或局部给药(施加到皮肤上)、或以例如滴眼、洗液或凝胶制剂形式用于眼用。还可采用易流动的形式如溶液和乳液，例如用于病灶内注射或作为灌肠剂进行直肠给药。

当本发明的组合物配制成单位剂型时，活性维生素D化合物的量宜为每单位剂量1-200微克。更优选的，每单位剂量的活性维生素D化合物约为1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，15，20，25，30，35，40，45，50，55，60，65，70，75，80，85，90，95，100，105，110，115，120，125，130，135，140，145，150，155，160，165，170，175，180，185，190，195或200μg或其中的任何量。在一个优选的实施方式中，每单位剂量的活性维生素D化合物的量将约为5-180μg，更优选的约10-135μg，更优选的约45μg。在一个实施方式中，单位剂型包含45，90，135或180μg骨化三醇。

当组合物的单位剂型是胶囊时，胶囊中组分的总量优选为约10-1000微升。更优选的，胶囊中组分的总量约为100-300微升。在一个实施方式中，胶囊中组分的总量优选为约10-1500mg，优选约100-1000mg。在一个实施方式中，总量约为225，450，675或900mg。在一个实施方式中，单位剂型是包含45，90，135，or180ug骨化三醇的胶囊。

与活性维生素D化合物联用的治疗制剂

本发明的一个方面提供用于治疗、缓解或预防免疫介导的疾病的方法，该方法包括将活性维生素D化合物和一种或多种治疗性制剂联合给予需要该治疗的动物。治疗制剂包括但不限于，小分子、合成药物、肽、多肽、蛋白质、核酸(如DNA和RNA核苷酸，包括但不限于反义核苷酸序列、三螺旋和编码生物活性蛋白质、多肽或肽的核苷酸序列)、抗体、合成或天然无机分子、模拟药物、和合成或天然的有机分子，和小分子。任何已知有用的、或已采用的、或目前正在用的用于治疗、缓解或预防与免疫介导的疾病相关的一种或多种症状的药物，都可与本发明所述维生素D化合物联用。关于已采用的、或目前正在用的用于治疗免疫介导的疾病的治疗制剂，见例如，Hardman等，主编，Goodman&Gilman′s，治疗的药理学基础(The Pharmacological Basis Of Therapeutics)，第10版，Mc-Graw-Hill，纽约(1996)，643-754页，1381-1484，1649-1678，以及emedicine网页(www.emedicine.com)。这些制剂的例子包括但不限于，免疫调节剂(例如小有机分子，T细胞受体调节剂，细胞因子受体调节剂，T细胞耗竭剂，细胞因子拮抗剂，单核因子拮抗剂，淋巴细胞抑制剂，抗癌药剂，皮质类固醇，细胞毒制剂和免疫抑制剂)；抗血管生成剂例如血管抑素，TNF-α拮抗剂(例如抗TNF-α抗体)，整联蛋白α_vβ₃拮抗剂(例如蛋白样制剂如非催化性金属蛋白酶片段，RGD肽，肽模拟物，融合蛋白，解整联蛋白或其衍生物或同类物，以及免疫特异性结合于整联蛋白α_vβ₃的抗体，核酸分子，有机分子和无机分子)；抗炎剂(例如非甾类抗炎剂，非麻醉性止痛剂如对乙酰氨基酚和非那西汀，氯喹，金盐，氨甲喋呤，D-青霉胺，别嘌呤醇，秋水仙碱，丙磺舒，苯磺唑酮，抗组胺剂，抗疟剂如羟化氯喹，抗病毒剂，抗生素，和PPARγ激动剂；和用于皮疹和肿胀的皮肤病药剂(如光线疗法，光化学疗法，以及局部制剂如缓和剂、水杨酸、煤焦油、局部皮质类固醇、他扎罗汀和局部类维生素A)。在某些实施方式中，治疗制剂包括系统性给药的制剂例如，皮质类固醇，咪唑硫嘌呤，氨甲喋呤，环磷酰胺(Cytoxan)，苯丁酸氮芥，麦考酚酸吗乙酯(mycophenolate mofetil)(CellCept)，巯基嘌呤，雷帕鸣(rapamune)，他克莫司(FK506)，环孢菌素，类维生素A，氮芥，干扰素，抗生素，抗组胺剂，PUVA，化学疗法和UV光。

免疫调节剂

本领域技术人员已知的免疫调节剂可用于本发明的方法和组合物中。免疫调节剂是调节宿主免疫系统的制剂。具体的，免疫调节剂是改变对象免疫系统对一种或多种外来抗原的应答反应能力的制剂。在一个具体实施方式中，免疫调节剂是使对象免疫系统的一方面发生转变的制剂，例如使免疫应答反应从Th1转变为Th2反应。在某些实施方式中，免疫调节剂是抑制或减弱对象免疫系统的制剂(即免疫抑制剂)。在某些其它实施方式中，免疫抑制剂是活化或增加对象免疫系统的制剂(即免疫刺激剂)。根据本发明，在本发明组合治疗中所用的免疫调节剂不包括维生素D衍生物或同类物(类似物)。

免疫调节剂可影响对象免疫应答反应的一个或多个或所有方面。免疫应答的方面包括但不限于，炎性反应，补体级联，白细胞和淋巴细胞分化，增殖，和/或效应子功能，单核细胞和/或嗜碱细胞计数，以及免疫系统的细胞间的细胞通信。在本发明某些实施方式中，免疫调节剂调节免疫应答反应的一个方面。在其它实施方式中，免疫调节剂调节免疫应答反应一个以上的方面。在本发明的一个优选实施方式中，将免疫调节剂给予动物抑制了或降低了动物免疫应答能力的一个或多个方面。在本发明的一个具体实施方式中，免疫调节剂阻止或抑制动物中的免疫应答反应。根据本发明，免疫调节剂不是活性维生素D化合物，例如骨化三醇。

可选择免疫调节剂以干扰T细胞和/或B细胞的功能。也可选择免疫调节剂以干扰T细胞和B细胞之间的相互作用，例如T辅助亚型(TH1或TH2)和B细胞间的相互作用，以抑制中和抗体的形成。可选择免疫调节剂以抑制TH1细胞和细胞毒淋巴细胞(CTLs)的相互作用，减少CTL介导的杀伤的发生。可选择免疫调节剂以改变(例如阻止或抑制)CD4⁺和/或CD8⁺T细胞的增殖，分化，活性和/或功能。例如，可用对T细胞特异性的抗体作为免疫调节剂以耗竭或改变CD4⁺和/或CD8⁺T细胞的增殖、分化，活性和/或功能。免疫调节剂的例子包括但不限于蛋白样制剂如细胞因子，肽模拟物，和抗体(例如人抗体，人源化抗体，camelised抗体，嵌合抗体，单克隆抗体，多克隆抗体，单结构域抗体，Fvs，ScFvs，Fab或F(ab)₂片段或表位结合片段)，核酸分子(例如反义核酸分子和三螺旋)，小分子，有机化合物和无机化合物。具体地，免疫调节剂包括但不限于，氨甲喋呤，来氟米特，环磷酰胺(Cytoxan)，硝基咪唑硫嘌呤(Immuran)，环孢菌素，二甲胺四环素，抗生素，他克莫司(FK506)，甲强龙，皮质类固醇，类固醇，麦考酚酸吗乙酯(CellCept)，雷帕霉素(西罗莫司)，苯丁酸氮芥，咪唑立宾，脱氧精胍菌素，布喹那，malononitriloamides，T细胞调节子，B细胞调节子和细胞因子受体调节子。T细胞调节子的例子包括但不限于，抗T细胞受体抗体(例如，抗CD4抗体(例如，cM-T412(Boeringer)，IDEC-CE9.1(IDEC和SKB)，mAB 4162W94，Orthoclone和OKTcdr4a(Janssen-Cilag))，抗CD3抗体(例如，Nuvion(Product Design Labs)，OKT3(Johnson&Johnson))，抗CD5抗体(例如，抗CD5蓖麻毒素连接的免疫偶联物)，抗CD7抗体(例如，CHH-380(Novartis))，抗CD8抗体，抗CD40配基单克隆抗体(例如，IDEC-131(IDEC))，抗CD52抗体(例如，CAMPATH 1H(Ilex))，抗CD2抗体，抗CD11a抗体(例如，Xanelim(Genentech))，和抗B7抗体(例如，IDEC-114)(IDEC)))和CTLA4-免疫球蛋白(CTLA4-Ig)。B细胞调节子的例子包括但不限于，抗B细胞受体抗体，抗CD 19抗体和抗CD20抗体(例如，Rituxan(IDEC)，Bexxar)。细胞因子受体调节子的例子包括但不限于，可溶性细胞因子受体(例如，TNF-α受体的细胞外结构域或其片段，IL-1受体的细胞外结构域或其片段，以及IL-6受体的细胞外结构域或其片段)，细胞因子或其片段(例如，IL-2，IL-3，IL-4，IL-5，IL-6，IL-7，IL-8，IL-9，IL-10，IL-11，IL-12，IL-15，TNF-α，TNF-β，干扰素(IFN)-α，IFN-β，IFN-γ，和GM-CSF)，抗细胞因子受体抗体(例如，抗IFN受体抗体，抗IL-2受体抗体(例如，Zenapax(Protein Design Labs))，抗IL-4受体抗体，抗IL-6受体抗体，抗IL-10受体抗体，和抗IL-12受体抗体)，抗细胞因子抗体(例如，抗IFN抗体，抗TNF-α抗体，抗IL-1抗体，抗IL-6抗体，抗IL-8抗体(例如，ABX-IL-8(Abgenix))，抗IL-9抗体和抗IL-12抗体。在一个具体实施方式中，细胞因子受体调节子是IL-4，IL-10或其片段。在其它实施方式中，细胞因子受体调节子是抗IL-1抗体，抗IL-6抗体，抗IL-12受体抗体，或抗TNF-a抗体。在其它实施方式中，细胞因子受体调节子是TNF-α受体的细胞外结构域或其片段。在优选实施方式中，用作免疫调节剂的蛋白、多肽或肽(包括抗体)衍生自和蛋白、多肽或肽的接受者相同的物种，以降低对这些蛋白、多肽或肽的免疫应答反应的可能性。在其它优选实施方式中，当动物是人时，用作免疫调节剂的蛋白、多肽或肽是人的或人源化的。

根据本发明，在给予本发明的活性维生素D化合物和其它治疗制剂之前、之后或同时给予患有免疫介导的病症的动物一种或多种免疫调节剂。优选地，给予患有免疫介导的病症的动物一种或多种免疫调节剂以如所需降低或抑制免疫应答反应的一个或多个方面。可用本领域技术人员熟知的任何技术来测定具体动物中免疫应答反应的一个或多个方面，从而确定何时需要给予所述动物免疫调节剂。在一个优选实施方式中，在对象中保持平均绝对淋巴细胞计数约500细胞/毫米³，优选地600细胞/毫米³，650细胞/毫米³，700细胞/毫米³，750细胞/毫米³，800细胞/毫米³，900细胞/毫米³，1000细胞/毫米³，1100细胞/毫米³，或1200细胞/毫米³。在另外的优选实施方式中，如果患有免疫介导的病症的动物的绝对淋巴细胞计数是500细胞/毫米³或更少，550细胞/毫米³或更少，600细胞/毫米³或更少，650细胞/毫米³或更少，700细胞/毫米³或更少，750细胞/毫米³或更少，或800细胞/毫米³或更少，则不给予这些动物免疫调节剂。

在一个优选实施方式中，给予患有免疫介导的病症的动物一种或多种免疫调节剂以瞬时降低或抑制免疫应答反应的一个或多个方面。这种对免疫系统一个或多个方面的瞬时降低或抑制可持续数小时，数天，数周或数月。优选地，这种对免疫应答反应一个或多个方面的瞬时抑制或降低持续几个小时(例如，2小时，4小时，6小时，8小时，12小时，14小时，16小时，18小时，24小时，36小时或48小时)，几天(例如，3天，4天，5天，6天，7天或14天)，或几周(例如，3周，4周，5周或6周)。

在本发明的一个实施方式中，根据本发明的方法将降低或耗竭T细胞(优选记忆T细胞)的免疫调节剂给予患有免疫介导的病症的动物。在本发明的其它实施方式中，根据本发明的方法将使CD8⁺T细胞失活的免疫调节剂给予患有免疫介导的疾病的动物。在一个具体实施方式中，抗CD8抗体用于降低或耗竭CD8⁺T细胞。干扰或阻抑TH细胞活化B细胞所需相互作用因此阻抑中和性抗体产生的抗体可用作本发明方法中的免疫调节剂。例如，T细胞活化B细胞需要发生某些相互作用(Durie等，Immunol.Today，15(9)：406-410(1994))，如T辅助细胞上的CD40配基结合到B细胞上的CD40抗原，以及T细胞上的CD28和/或CTLA4配基结合到B细胞上的B7抗原。没有这两种相互作用，B细胞不能被活化以诱导产生中和性抗体。CD40配基(CD40L)-CD40相互作用是阻抑免疫应答反应所希望的点，因为该相互作用在T辅助细胞活化及其功能上均有显著活性，并且在其信号途径中缺乏冗余性。因此，在本发明具体实施方式中，当给予一种或多种免疫调节剂时，CD40L和CD40的相互作用被瞬时阻抑。这可通过用阻抑TH细胞上的CD40配基和干扰TH细胞上的CD40配基与B细胞上的CD40抗原的正常结合的试剂来实现。可选择CD40配基的抗体(抗CD40L)(可获自Bristol-Myers Squibb Co；见，例如，欧洲专利申请555,880，1993年8月18日公开)或可溶性CD40分子并用作本发明方法的免疫调节剂。在另一个实施方式中，根据本发明的方法，将减低或抑制CD4⁺T辅助细胞的TH0，TH1和/或TH2亚型的一种或多种生物活性(例如分化、增殖和/或效应子功能)的免疫调节剂给予患有免疫介导的病症的动物。这类免疫调节剂的一个例子是IL-4。以TH1细胞的功能为代价，IL-4增强TH2细胞的抗原-特异性活性(见，例如，Yokota，等，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA，83：5894-5898(1986)；和美国专利No.5,017,691)。影响T辅助细胞(具体是TH1和/或TH2细胞)生物活性(例如增殖、分化、和/或效应子功能)的免疫调节剂的其它例子包括但不限于，IL-2，IL-6，IL-9，IL-10，IL-12，IL-15和IFN-γ。在其它实施方式中，根据本发明的方法，给予患有免疫介导的病症的动物的免疫调节剂是防止抗原呈递的细胞因子。在一个优选实施方式中，本发明方法中采用的免疫调节剂是IL-10。IL-10也降低或抑制包括细菌清除在内的巨噬细胞作用。可用于本发明的免疫调节剂的其它例子包括但不限于，皮质类固醇(例如，氯地米松，倍他米松，可的松，去氧皮质酮，地塞米松，氟氢可的松，氢化可的松，甲强龙，帕拉米松，氢化波尼松，强的松和去炎松)，硝基咪唑硫嘌呤，麦考酚酸吗乙酯，环孢菌素A，FK506，氨甲喋呤，5-氟尿嘧啶，6-硫鸟嘌呤，阿糖胞苷，美法仑，白消安，亚硝基脲氮芥，环己亚硝脲，甲基苄肼，氨烯咪胺，顺铂，碳铂，来氟米特和环磷酰胺。已证明环磷酰胺短期治疗成功地打断了CD4⁺和CD8⁺T细胞对腺病毒衣壳蛋白的作用(Jooss等，Hum.Gene Ther.7：1555-1566(1996))，在更高剂量时，阻止了中和性抗体的形成。氢化可的松或环孢菌素A已成功用于减少细胞因子的诱导，其中有些细胞因子参与了细菌感染的清除。可根据本发明的方法给予患有免疫介导的病症的动物编码具有免疫调节活性的蛋白、多肽或肽的核酸分子，或具有免疫调节活性的蛋白、多肽或肽。此外，可根据本发明的方法给予患有免疫介导的病症的动物编码具有免疫调节活性的蛋白、多肽或肽的衍生物、同类物、片段或变体的核酸分子，或具有免疫调节活性的蛋白、多肽或肽的衍生物、同类物、片段或变体。优选地，这些衍生物、同类物、变体和片段保留了全长野生型蛋白、多肽或肽的免疫调节活性。可用本领域熟知的任何技术生产可用作免疫调节剂的蛋白、多肽或肽。见，例如，Ausubel等，主编，分子生物学小方法(Short Protocols in Molecular Biology)，第16章，第4版，John Wiley & Sons，NY(1999)，其中描述了生产蛋白、多肽或肽的方法，该文整体纳入本文作为参考。可用例如美国专利No.6,245,527以及Harlow等，抗体：实验室手册(ALaboratory Manual)，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，NY(1988)(整体纳入本文作为参考)所述方法生产可用作免疫调节剂的抗体。优选地，本发明组合物和方法中采用商业上可获得的和已知作为免疫调节剂的制剂。可用本领域技术人员熟知的任何技术体外和/体内测定制剂的免疫调节活性，例如用CTL试验，增殖试验以及用于测定特定蛋白如共刺激分子和细胞因子表达的免疫试验(例如ELISA)。

抗血管生成剂

本领域技术人员熟知的任何抗血管生成剂都可用于本发明组合物和方法。抗血管生成剂的非限制性的例子包括减少、抑制或中和血管生成的蛋白，多肽，肽，融合蛋白，抗体(例如，人抗体，人源化抗体、camelised抗体，嵌合抗体，单克隆抗体，多克隆抗体，单结构域抗体，Fvs，ScFvs，Fab片段，F(ab)₂片段和其抗原结合片段)，核酸分子(例如反义核酸分子或三螺旋)，有机分子，无机分子和小分子。具体地，抗血管生成剂包括但不限于，内皮抑素，血管抑素，apomigren，抗血管生成的抗凝血酶III，纤维结合蛋白的29kDa N末端和40kDa C末端蛋白水解片段，uPA受体拮抗剂，泌乳刺激素的16kDa蛋白水解片段，血小板因子-4的7.8kDa蛋白水解片段，血小板因子-4的抗血管生成的24个氨基酸的片段，称为13.40的抗血管生成因子，血小板反应素I的抗血管生成的22个氨基酸的肽片段，SPARC的抗血管生成的20个氨基酸的肽片段，含有RGD和NGR的肽，层粘连蛋白的抗血管生成的小肽，纤维结合蛋白，原骨胶原和EGF，整联蛋白α_vβ₃拮抗剂(例如，抗整联蛋白α_vβ₃抗体)，TNF-α拮抗剂，酸性纤维生长因子(aFGF)拮抗剂，碱性纤维生长因子(bFGF)拮抗剂，血管内皮生长因子(VEGF)拮抗剂，和VEGF受体(VEGFR)拮抗剂(例如，抗VEGFR抗体)。

在本发明的一个具体实施方式中，抗血管生成剂是内皮抑素。天然存在的内皮抑素由胶原蛋白XVIII(编码两种剪接形式的胶原蛋白XVIII的cDNA的GenBank登录号是AF18081和AF18082)的C末端～180个氨基酸组成。在本发明的另一个实施方式中，抗血管生成剂是血浆酶原(纤溶酶原)片段(血浆酶原的编码序列可见于GenBank登录号NM 000301和A33096)。天然血管抑素肽包含血浆酶原的4个三环(kringle)结构域，三环域1-4。已证明重组的三环域1，2和3具有天然肽的抗血管生成特性，而三环域4没有这种活性(Cao等，J.Biol.Chem.271：29461-29467(1996))。所以，血管抑素肽包含至少一个、优选一个以上的选自三环域1、三环域2和三环域3的三环结构域。在一个具体实施方式中，抗血管生成肽是人血管抑素分子的40kDa的同工型，人血管抑素分子的42kDa的同工型，人血管抑素分子45kDa的同工型或其组合。在另一个实施方式中，抗血管生成剂是血浆酶原的三环域5结构域，它是比血管抑素更有效的血管生成抑制剂(血管抑素包含三环域1-4)。在本发明另外的实施方式中，抗血管生成剂是抗凝血酶III。抗凝血酶III，以下称抗凝血酶，包含使该蛋白与脉管壁连接的肝磷脂(肝素)结合结构域，以及与凝血酶相互作用的活性位点环。当抗凝血酶结合于肝磷脂时，该蛋白启动构象变化使活性环可与凝血酶相互作用，导致所述环被凝血酶蛋白水解性断裂。蛋白水解性断裂造成抗凝血酶的另一个构象变化，它(i)改变凝血酶和抗凝血酶相互作用的界面，以及(ii)由肝磷脂释放复合物(Carrell，Science 285：1861-1862(1999)，本文作为参考)。O′Reilly等，Science 285：1926-1928(1999)，发现断裂的抗凝血酶具有强力的抗血管生成活性。因此，在一个实施方式中，抗血管生成剂是抗凝血酶的抗血管生成形式。在本发明另一个实施方式中，抗血管生成剂是纤维结合蛋白的40kDa和/或29kDa蛋白水解片段。

在本发明另一个实施方式中，抗血管生成剂是尿激酶血浆酶原激活剂(uPA)受体拮抗剂。在本发明的一个实施方式中，拮抗剂是uPA的显性失活突变体(见，例如，Crowley等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：5021-5025(1993))。在本发明的另一个实施方式中，拮抗剂是肽拮抗剂或其融合蛋白(Goodson等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91：7129-7133(1994))。在本发明的另一个实施方式中，拮抗剂是显性失活的可溶性uPA受体(Min等，Cancer Res.56：2428-2433(1996))。在本发明的另一个实施方式中，本发明的治疗性分子是泌乳刺激素16kDa的N末端片段(包含约120个氨基酸)或其生物活性片段(泌乳刺激素的编码序列可见于GenBank登录号NM 000948)。在本发明的另一个实施方式中，抗血管生成剂是7.8kDa的血小板因子-4片段。在本发明的另一个实施方式中，本发明的治疗性分子是与血小板因子-4的抗血管生成的13个氨基酸的片段对应的小肽，称为13.40的抗血管生成因子，血小板反应素I的抗血管生成的22个氨基酸的肽片段，SPARC的抗血管生成的20个氨基酸的肽片段，层粘连蛋白的抗血管生成的小肽，纤维结合蛋白，原骨胶原，或EGF，或整联蛋白α_vβ₃的小肽拮抗剂或VEGF受体。在另一个实施方式中，小肽包含RGD和NGR基序。在某些实施方式中，抗血管生成剂是TNF-α拮抗剂。

TNF-α拮抗剂

本领域技术人员熟知的任何NF-α拮抗剂均可用于本发明组合物和方法。TNF-α拮抗剂的非限制性的例子包括阻抑、减少、抑制或中和TNF-α的功能、活性和/或表达的蛋白，多肽，肽，融合蛋白，抗体(例如，人抗体，人源化抗体、camelised抗体，嵌合抗体，单克隆抗体，多克隆抗体，单结构域抗体，Fvs，ScFvs，Fab片段，F(ab)₂片段和其抗原结合片段)，核酸分子(例如反义核酸分子或三螺旋)，有机分子，无机分子和小分子。在各实施方式中，相对于对照如磷酸盐缓冲盐水(PBS)，TNF-α拮抗剂减少TNF-α的功能、活性和/或表达至少10％，至少15％，至少20％，至少25％，至少30％，至少35％，至少40％，至少45％，至少50％，至少55％，至少60％，至少65％，至少70％，至少75％，至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少99％。

免疫特异性结合TNF-α的抗体的例子包括但不限于，英夫利昔单抗(infliximab)(REMICADETM；Centacor)，D2E7(Abbott Laboratories/KnollPharmaceuticals Co.，Mt.Olive，N.J.)，CDP571(也称为HUMICADE^TM)以及CDP-870(均为cellech/Pharmacia，Slough，U.K.)，和TN3-19.12(Williams等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91：2762-2766(1994)；Thorbecke等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：7375-7379(1992))。本发明还包括在本发明的组合物和方法中采用以下美国专利所公开的免疫特异性结合TNF-α的抗体：美国专利NO.5,136,021；5,147,638；5,223,395；5,231,024；5,334,380；5,360,716；5,426,181；5,436,154；5,610,279；5,644,034；5,656,272；5,658,746；5,698,195；5,736,138；5,741,488；5,808,029；5,919,452；5,958,412；5,959,087；5,968,741；5,994,510；6,036,978；6,114,517；和6,171,787；这些专利均整体纳入本文作为参考。可溶性TNF-α受体的例子包括但不限于，sTNF-R1(Amgen)，依那西普(etanercept)(ENBREL^TM；Immunex)及其大鼠同源物RENBREL^TM，衍生自TNFrI，TNFrII的可溶性TNF-α抑制剂(Kohno等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA87：8331-8335(1990)，和TNF-αInh(Seckinger等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87：5188-5192(1990))。

在一个实施方式中，本发明方法中采用的TNF-α拮抗剂是可溶性TNF-α受体。在一个具体的实施方式中，用于本发明组合物和方法的TNF-α拮抗剂是依那西普(ENBRELTM；Immunex)或其片段、衍生物或同类物。在另一个实施方式中，用于本发明组合物和方法的TNF-α拮抗剂是免疫特异性结合TNF-α的抗体。在一个具体实施方式中，用于本发明组合物和方法的TNF-α拮抗剂是英夫利昔单抗(REMICADETM；Centacor)或其衍生物、同类物或抗原结合片段。本发明包括的其它TNF-α拮抗剂包括但不限于，IL-10，已知其通过干扰素活化的巨噬细胞阻抑TNF-α的产生(Oswald等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA89：8676-8680(1992))，TNFR-IgG(Ashkenazi等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88：10535-10539(1991))，啮齿类产物TBP-1(Serono/Yeda)，疫苗CytoTAb(Protherics)，反义分子104838(ISIS)，肽RDP-58(SangStat)，酞咪哌啶酮(Celgene)，CDC-801(Celgene)，DPC-333(Dupont)，VX-745(Vertex)，AGIX-4207(AtheroGenics)，ITF-2357(Italfarmaco)，NPI-13021-31(Nereus)，SCIO-469(Scios)，TACE靶(munix/AHP)，CLX-120500(Calyx)，Thiazolopyrim(Dynavax)，金诺芬(Ridaura；SmithKline Beecham Pharmaceuticals)，奎纳克林(水合二氯麦帕克林)，替尼达帕(Enablex)，黑色素(Large Scale Biological)，和抗p38MAPK抗原(Uriach)。可根据本发明的方法给予患有免疫介导的病症的动物编码具有TNF-α拮抗剂活性的蛋白、多肽或肽的核酸分子，或具有TNF-α拮抗剂活性的蛋白、多肽或肽。此外，可根据本发明的方法给予患有免疫介导的病症的动物编码具有TNF-α拮抗剂活性的蛋白、多肽或肽的衍生物、同类物、片段或变体的核酸分子，或具有TNF-α拮抗剂活性的蛋白、多肽或肽的衍生物、同类物、片段或变体。优选地，这些衍生物、同类物、变体和片段保留了全长野生型蛋白、多肽或肽的TNF-α拮抗剂活性。可用本领域熟知的任何技术生产作为TNF-α拮抗剂的蛋白、多肽或肽。可用本领域熟知的技术来设计具有TNF-α拮抗剂活性的蛋白、多肽或肽以增加这些蛋白、多肽或肽的体内半衰期。优选地，本发明组合物和方法中采用商业上可获得的和已知作为TNF-α拮抗剂的制剂。可用本领域技术人员熟知的任何技术体外和/体内测定制剂的TNF-α拮抗剂活性。

整联蛋白α_vβ₃拮抗剂

本领域技术人员熟知的任何整联蛋白α_vβ₃拮抗剂都可用于本发明的方法和组合物。如本文所用，“整联蛋白α_vβ₃拮抗剂”和同类术语指阻抑、降低或中和整联蛋白α_vβ₃的功能、活性和/或表达的任何蛋白、多肽、肽、融合蛋白、抗体、抗体片段、大分子或小分子。在各实施方式中，相对于对照如PBS，整联蛋白α_vβ₃拮抗剂降低整联蛋白α_vβ₃的功能、活性和/或表达至少10％，至少15％，至少20％，至少25％，至少30％，至少35％，至少40％，至少45％，至少50％，至少55％，至少60％，至少65％，至少70％，至少75％，至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少99％。本发明包括在本发明组合物和方法中采用一种或多种整联蛋白α_vβ₃拮抗剂。整联蛋白α_vβ₃拮抗剂的例子包括但不限于，例如蛋白样制剂如非催化性金属蛋白酶片段，RGD肽，肽模拟物，融合蛋白，解整联蛋白或其衍生物或同类物，以及免疫特异性结合于整联蛋白α_vβ₃的抗体，核酸分子，有机分子和无机分子。整联蛋白α_vβ₃识别的RGD肽的非限制性例子包括三黄素(Triflavin)。免疫特异性结合于整联蛋白α_vβ₃的抗体的例子包括但不限于，11D2(Searle)和LM609(Scripps)。小分子肽模拟性整联蛋白α_vβ₃拮抗剂的非限制性例子包括S836(Searle)和S448(Searle)。解整联蛋白的例子包括但不限于Accutin。本发明还包括在本发明方法中采用以下美国专利所公开的任何整联蛋白α_vβ₃拮抗剂：美国专利No.5,149,780；5,196,511；5,204,445；5,262,520；5,306,620；5,478,725；5,498,694；5,523,209；5,578,704；5,589,570；5,652,109；5,652,110；5,693,612；5,705,481；5,767,071；5,770,565；5,780,426；5,817,457；5,830,678；5,849,692；5,955,572；5,985,278；6,048,861；6,090,944；6,096,707；6,130,231；6,153,628；6,160,099；和6,171,588，这些专利均整体纳入本文作为参考。在某些实施方式中，整联蛋白α_vβ₃拮抗剂是有机小分子。在一个优选实施方式中，整联蛋白α_vβ₃拮抗剂是免疫特异性结合于整联蛋白α_vβ₃的抗体。在一个优选实施方式中，整联蛋白α_vβ₃拮抗剂抑制或减少血管生成。

[00121]在一个优选实施方式中，用作整联蛋白α_vβ₃拮抗剂的蛋白、多肽或肽(包括抗体和融合蛋白)衍生自和蛋白、多肽或肽的接受者相同的物种，以降低对这些蛋白、多肽或肽的免疫应答反应的可能性。在其它优选实施方式中，当动物是人时，用作整联蛋白α_vβ₃拮抗剂的蛋白、多肽或肽是人的或人源化的。

根据本发明，在给予活性维生素D化合物和一种或多种已用于、正用于或已知可用于治疗所述免疫介导的病症的其它治疗制剂之前、之后或同时给予患有免疫介导的病症的动物一种或多种整联蛋白α_vβ₃拮抗剂。可根据本发明的方法给予患有免疫介导的病症的动物编码作为整联蛋白α_vβ₃拮抗剂的蛋白、多肽或肽的核酸分子，或作为整联蛋白α_vβ₃拮抗剂的蛋白、多肽或肽。此外，可根据本发明的方法给予患有免疫介导的病症的动物编码作为整联蛋白α_vβ₃拮抗剂的蛋白、多肽或肽的衍生物、同类物、片段或变体的核酸分子，或作为整联蛋白α_vβ₃拮抗剂的蛋白、多肽或肽的衍生物、同类物、片段或变体。优选地，这些衍生物、同类物、变体和片段保留了全长野生型蛋白、多肽或肽的整联蛋白α_vβ₃拮抗剂活性。

抗炎剂

抗炎剂在炎性和自身免疫病症的治疗中已取得成功，现在抗炎剂是这些病症的常用和标准的疗法。本领域技术人员熟知的任何抗炎剂都可用于本发明的组合物和方法。抗炎剂的非限制性例子包括非甾体抗炎剂(NSAID)，非麻醉止痛剂如对乙酰氨基酚和非那西汀，甾体抗炎药，β-激动剂，抗胆碱能制剂，甲基黄嘌呤，氯喹，金盐，氨甲喋呤，D-青霉胺，别嘌呤醇，秋水仙碱，丙磺舒，苯磺唑酮，抗组胺剂，抗疟剂如羟化氯喹，抗病毒剂，抗生素，和PPARγ激动剂。NSAID的例子包括但不限于，阿司匹林，布洛芬，塞来昔布(CELEBREX^TM)，双氯芬酸(VOLTAREN^TM)，依托度酸(LODINE^TM)，非诺洛芬(NALFON^TM)，消炎痛(INDOCIN^TM)，酮咯酸(ketoralac)(TORADOL^TM)，丙嗪(DAYPRO^TM)，nabumentone(RELAFEN^TM)，苏灵大(CLINORIL^TM)，托美丁(TOLECTIN^TM)，罗非昔布(VIOXX^TM)，萘普生(ALEVE^TM，NAPROSYN^TM)，酮洛芬(ACTRON^TM)和萘丁美酮(RELAFEN^TM)。这些NSAID通过抑制环加氧酶来发挥功能。甾体抗炎药物的例子包括但不限于，糖皮质激素，地塞米松(DECADRON^TM)，可的松，氢化可的松，强的松(DELTASONE^TM)，氢化波尼松和去炎松。抗组胺剂包括但不限于，烷基胺(例如溴苯那敏，氯苯吡胺，右氯苯那敏和曲普利定)，乙醇胺(例如，卡比沙明，氯马斯汀，乘晕宁，苯海拉明和抗敏胺)，乙(撑)二胺(例如，苄吡二胺和吡拉明)，酚噻嗪(例如，甲安菲他明，异丙嗪和timeprazine)，哌嗪(例如，苯甲嗪，羟嗪和美其敏)，哌啶(例如，阿扎他定和二苯环庚啶)，特非那定，阿司咪唑，氯雷他定和西替利嗪。抗病毒剂包括但不限于，金刚胺，病毒唑，金刚乙胺，阿昔洛韦，法昔洛韦，膦甲酸，9-1；3-二羟-2-丙氧甲基鸟嘌呤，三氟尿苷，阿糖腺苷，二脱氧肌苷，斯塔夫定，zalciltabine，齐多夫定以及干扰素。抗生素包括但不限于，在癌症治疗中所用的抗生素(例如，放线菌素D，阿霉素，红比霉素，博来霉素和普卡霉素)，代谢抑制剂(例如磺胺药和三甲氧苄胺嘧啶)，细胞壁合成抑制剂(例如，β-内酰胺和万古霉素)，蛋白质合成抑制剂(例如，四环素，氨基糖苷，大环内酯药物，氯洁霉素和氯霉素)，以及核酸功能或合成抑制剂(例如，氟化喹啉和利福平)。PPARγ激动剂包括噻唑烷二酮如曲格列酮，环格列酮，吡格列酮和罗格列酮。见美国专利Nos 5,594,015，5,478,852和5,326,770。

皮肤病制剂

本领域技术人员熟知的任何皮肤病制剂都可用于本发明方法中。皮肤病制剂指帮助治疗皮肤疾病和病症的制剂。优选地，皮肤病制剂指用于预防、治疗或缓解皮肤病症，具体是与T细胞渗透增加、T细胞活化增加和/或异常抗原呈递有关的皮肤病症的局部制剂。在尤其优选的实施方式中，皮肤病制剂指用于预防、治疗或缓解牛皮癣或其一种或多种症状的局部制剂。皮肤病制剂的例子包括但不限于，用于治疗或缓解皮肤病症的蛋白，多肽，肽，融合蛋白，抗体(例如，人抗体，人源化抗体、camelised抗体，嵌合抗体，单克隆抗体，多克隆抗体，单结构域抗体，Fvs，ScFvs，Fab片段，F(ab)₂片段和其抗原结合片段)，核酸分子(例如反义核酸分子或三螺旋)，有机分子，无机分子和小分子。在一个具体实施方式中，皮肤病制剂是光疗法(即紫外线B放射)或光化学疗法(例如PUVA)。根据本发明，皮肤病制剂不是维生素D化合物。

在一个优选实施方式中，皮肤病制剂是局部制剂。局部制剂的例子包括但不限于缓和剂、水杨酸、煤焦油、蒽林、局部类固醇、局部皮质类固醇(例如，difloroasone diacetate，丙酸氯倍他索，丙酸卤倍他索，二丙酸倍他米松，醋酸氟轻松，哈西奈德，脱氧米松，去炎松，丙酸氟替卡松，氟轻松，氟氢缩松，莫米松糠酸酯，倍他米松，aclometasome dipropionate，丙缩强羟龙和氢化可的松)，和局部类维生素A(例如，他扎罗汀)。在某些实施方式中，皮肤病制剂是系统性给药的制剂。系统性给药的皮肤病制剂的例子包括但不限于，皮质类固醇(例如，去炎松)，叶酸拮抗剂(例如，氨甲喋呤)，类维生素A(例如，acetretin)和环孢菌素。

联合治疗

本发明的联合治疗包括给予活性维生素D化合物和与活性维生素D化合物具有不同作用机制的一种或多种治疗制剂。可用于本发明联合治疗的非活性维生素D化合物的治疗制剂的机制可在本领域中找到(见例如，Hardman等主编，1996，Goodman & Gilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics第10版，McGraw-Hill，New York.643-754，1381-1484，1649-1678页，和Physician’s DeskReference(PDR)第55版.，2001，Medical Economic Co.，Inc.，Montvale，NJ(www.pdr.net)，以及emedicine网页。本发明的联合治疗包括给予活性维生素D化合物和至少一种其它治疗制剂，该治疗制剂通过与活性维生素D化合物一起发挥功能以具有叠加或协同作用，来改进活性维生素D化合物的治疗效果。根据本发明，至少一种活性维生素D化合物和一种与活性维生素D化合物作用不同的其它治疗制剂可有利地联合用于治疗或缓解免疫介导的病症。给予一种或多种活性维生素D化合物可先于(例如，0.5小时、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、36小时、48小时、5天、1周、2周、1月、或更长)，后于(例如，0.5小时、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、36小时、48小时、5天、1周、2周、1月、或更长)，或同时与一种或多种非活性维生素D化合物的治疗制剂给予。

根据本发明，一种或多种活性维生素D化合物可有利地与以下制剂联用：一种或多种抗血管生成因子(例如，血管抑素或内皮抑素)，一种或多种TNF-α拮抗剂(例如，抗TNF-α抗体)，一种或多种整联蛋白α_vβ₃拮抗剂，一种或多种抗炎剂，一种或多种免疫调节剂和/或一种或多种皮肤病制剂。这种联合应用可减少与给予活性维生素D化合物和其它治疗制剂相关的不良副作用。

在一个具体实施方式中，给予一种或多种活性维生素D化合物减少已知用于治疗或缓解具体的免疫介导的病症的一种或多种剂量给药的剂量和/或频率。例如，给予活性维生素D化合物可降低用于治疗实体器官同种异体移植的他克莫司(FK 506，一种免疫抑制剂)注射的正常推荐起始剂量(连续灌注为0.03-0.05毫克/千克/天)。此外，给予活性维生素D化合物可降低对于成人肾脏移植患者(0.2毫克/千克/天)、成人肝脏移植患者(0.1-0.15毫克/千克/天)和小儿肝脏移植患者(0.15-0.2毫克/千克/天，间隔12小时分2次给药)的他克莫司推荐起始口服剂量。在一个优选实施方式中，在他克莫司治疗期间每3天或更长时间给予一次活性维生素D化合物，其可以更低剂量或更少频率给药而不影响治疗效果。

用于治疗或缓解类风湿性关节炎的治疗制剂的例子包括但不限于，Remicade，皮质类固醇，他克莫司，二膦酸盐(bisphosphonate)，NSAID(例如，布洛芬，fenprofen，消炎痛和萘普生)，抗疟药物(例如，羟化氯喹和磺胺药)，阿那白滞素(Anakinra)，硝基咪唑硫嘌呤，Enbrel(依那西普的商品名)，西乐葆和环磷酰胺。用于治疗或缓解克罗恩氏病的治疗制剂的例子包括但不限于，磺胺药(Azulfidine)，氨基水杨酸盐，类固醇(例如，强的松)和英夫利昔单抗。用于治疗或缓解全身性红斑狼疮的治疗制剂的例子包括但不限于，NSAID，抗疟药物(例如，羟化氯喹)，皮质类固醇，糖皮质激素(例如，去炎松)，氨甲喋呤和硝基咪唑硫嘌呤。用于治疗或缓解哮喘的治疗制剂的例子包括但不限于，皮质类固醇二丙酸氯地米松(Vanceril，AeroBid，Flovent，强的松，甲基强的松和氢化可的松)，白三烯(leukotriene)抑制剂，氨茶碱和茶碱。用于治疗或缓解自身免疫肝炎的治疗制剂的例子包括但不限于，皮质类固醇(例如，强的松)，硝基咪唑硫嘌呤和巯基嘌呤。用于治疗、缓解或预防移植排异的治疗制剂的例子包括但不限于，硝基咪唑硫嘌呤，环孢菌素，麦考酚酸吗乙酯，雷帕鸣(rapamune)，皮质类固醇和OKT2单克隆抗体。用于治疗或缓解多发性硬化的治疗制剂的一个例子是IFN-1a(Avonex)。

用于治疗或缓解大泡性全身性狼疮的治疗制剂的例子包括但不限于，氨苯砜，皮质类固醇(例如，强的松和去炎松)以及氨甲喋呤。用于治疗或缓解硬皮病的治疗制剂的例子包括但不限于，强的松，硝基咪唑硫嘌呤，氨甲喋呤，环磷酰胺和青霉胺。用于治疗或缓解坏疽性脓皮症(pyoderma gangrenosum)的治疗制剂的例子包括但不限于，强的松，硝基咪唑硫嘌呤，环磷酰胺，苯丁酸氮芥，他克莫司，免疫球蛋白和肽咪哌啶酮。用于治疗或缓解簇状秃发的治疗制剂的例子包括但不限于，环孢菌素，补骨脂素，地蒽酚，clobetiasol propionate，强的松，去炎松，倍他米松和米诺地尔。用于治疗或缓解白癫风的治疗制剂的例子包括但不限于，去炎松，氢化可的松，强的松，补骨脂素和三甲沙林。用于治疗或缓解接触性皮炎的治疗制剂的例子包括但不限于，氯倍他索，氢化可的松，强的松，曲安西龙，羟嗪，多虑平和二硫龙。用于牛皮癣的已知治疗的例子包括但不限于，羟基脲，氨甲喋呤，环孢菌素，阿维A，紫外线B放射光疗法，光化学疗法，局部皮质类固醇(例如，双醋二氟松，丙酸氯倍他索，丙酸卤倍他索，倍他米松二丙酸盐，醋酸氟轻松，哈西奈德，脱氧米松，去炎松丙酮化合物，丙酸氟替卡松，游离氟轻松(flucinolone acetonide)，氟氢缩松，莫米松糠酸酯，倍他米松，aclometasome dipropionate，丙缩强羟龙和氢化可的松)，二羟基蒽酚(地蒽酚)，煤焦油，水杨酸和局部类维生素A(例如，他扎罗汀)，大环内酯抗生素(例如，他克莫司)，抗CD3单克隆抗体，抗CD4单克隆抗体，抗CD11a单克隆抗体，抗IL-2Rα单克隆抗体，抗ICAM1抗体，抗LFA1抗体，抗CD80单克隆抗体，CTLA4Ig和缓和剂。关于牛皮癣治疗的综述，见，例如，Ashcroft等，J.of Clin.Pharm.and Therap.25：1-10(2000)；Karasek，Cutis 64：319-322(1999)；Drew，Primary Care 27：385-406(2000)；Lebwohl，Dermatologic Clinics 18：13-19(2000)；和Peters等，Am.J.Health-Sys.Pharm.57：645-659(2000)。在一个具体实施方式中，用于给予人以治疗或缓解牛皮癣的一种或多种活性维生素D化合物可先于(例如，0.5小时、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、36小时、48小时、5天、1周、2周、1月、或更长)，后于(例如，0.5小时、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、36小时、48小时、5天、1周、2周、1月、或更长)，或与下列制剂同时给予所述的人：羟基脲，氨甲喋呤，环孢菌素，阿维A，紫外线B放射光疗法，光化学疗法，一种或多种局部皮质类固醇，二羟基蒽酚，煤焦油，水扬酸，IL-10，一种或多种局部类维生素A，一种或多种大环内酯抗生素，一种或多种抗CD3单克隆抗体，一种或多种抗CD4单克隆抗体，一种或多种抗CD 11a单克隆抗体，一种或多种抗IL-2Rα单克隆抗体，一种或多种抗ICAM1抗体，一种或多种抗LFA1抗体，一种或多种抗CD80单克隆抗体，CTLA4Ig或一种或多种缓和剂。在另一个实施方式中，给予患牛皮癣的动物优选人种或多种活性维生素D化合物，先于(例如，0.5小时、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、36小时、48小时、5天、1周、2周、1月、或更长)，后于(例如，0.5小时、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、36小时、48小时、5天、1周、2周、1月、或更长)，或与下列制剂同时给予：Xanelim(Genentech/Xoma)，Enbril(Enmunex，Inc.)，Remicade(J&J/Centocor)，ABX-IL-8(Abgenix)，mEC-114(mEC Pharmaceuticals，Inc.)，Novim(PDL，Inc.)，Zenapax(PDL，Inc.)，和/或Amevive(Biogen，Inc.)。

本发明的活性维生素D化合物和联合治疗的一种或多种治疗制剂可同时或顺序给予动物。本发明的活性维生素D化合物和联合治疗的一种或多种治疗制剂也可循环给药。循环治疗包括给予第一种治疗制剂一段时间，然后给予第二种治疗制剂一段时间，并重复这种顺序给药，即，循环，以减少对其中一种制剂产生抗性，避免或减少其中一种制剂的副作用，和/或改进治疗的功效。本发明的活性维生素D化合物和联合治疗的一种或多种治疗制剂可同时给予对象。术语“同时”不限于准确地在同一时间给予治疗制剂，而是指活性维生素D化合物和一种或多种治疗制剂在一时间间隔内按顺序给予动物，从而活性维生素D化合物可与其它制剂同时作用以提供比其它方式给药更多的益处。活性维生素D化合物和一种或多种治疗制剂可分开给药，以任何合适的形式，通过任何合适的途径。在优选实施方式中，可在同一患者访问(visit)内给予活性维生素D化合物和一种或多种治疗制剂。活性维生素D化合物和联合治疗的一种或多种治疗制剂可在相同的药物组合物中给予动物。或者，活性维生素D化合物和联合治疗的一种或多种治疗制剂可在分开的药物组合物中同时给予动物。活性维生素D化合物和一种或多种治疗制剂可通过相同或不同的给药途径给予动物。

在一种或多种治疗制剂给药之前的任何时间段的活性维生素D化合物治疗均可用于本发明。用活性维生素D化合物治疗的准确时间将根据所用的活性维生素D化合物，免疫介导的病症，患者以及其它相关因素而异。可在给予一种或多种治疗制剂少至12小时和多至3个月之前给予活性维生素D化合物。如果每天给予活性维生素D化合物，在给予一种或多种治疗制剂之前，可给予活性维生素D化合物约1-10天。在某些实施方式中，本发明的方法包括在给予一种或多种治疗制剂之前1，2，3，4，5，6，7，8，9或10天每天给予活性维生素D化合物。如果活性维生素D化合物以脉冲给药方式给药，可在给予一种或多种治疗制剂之前至少1天给予活性维生素D化合物，在给予一种或多种治疗制剂之前最长给予3个月。在某些实施方式中，本发明方法包括在给予一种或多种治疗制剂之前每3，4，5，6，7，8，9或10天给予活性维生素D化合物一次，持续3-60天。

以每天或脉冲给药方式给予的活性维生素D化合物可继续与一种或多种治疗制剂同时给予。另外，可在给予一种或多种治疗制剂之后继续给予性维生素D化合物。

在本发明某些实施方式中，活性维生素D化合物与一种或多种治疗制剂联合给药的方法可至少重复一次。该方法可重复所需的次数以达到或维持治疗反应，例如，从一次至约10次。该方法每次重复时，活性维生素D化合物和一种或多种治疗制剂可以和之前重复中所用的相同或不同。另外，各重复中活性维生素D化合物给药的时间段和给药方式(即每天或脉冲给药)可变化。

在某些实施方式中，在疾病症状出现或诊断之前或之后给予本发明的治疗性或药物组合物。在一个具体实施方式中，相对于一种制剂治疗或其它已知的联合治疗，本发明的联合治疗不诱导下列一种或多种不需要的或不良作用：生命现象异常(发烧，心动过速，心博徐缓，高血压，低血压)，高钙血，血液学症状(贫血，淋巴球减少，白血球减少，血小板减少)，头痛，寒战，头昏，恶心，虚弱，背痛，胸痛(胸压)，腹泻，肌痛，疼痛，瘙痒，牛皮癣，鼻炎，发汗，注射位点反应，血管舒张，机会性感染危险增加以及发生某些类型癌症的危险增加。

可根据本发明治疗的动物包括可从给予本发明化合物中受益的动物。这些动物包括人，宠物如狗或猫，牲畜如牛、猪、绵羊、山羊等。

下列实施例是本发明方法的描述性而非限制性的例子。本领域技术人员显然能根据医学治疗和药物科学中通常遇到的条件和参数的差异作其它合适的改进和变化，这些均在本发明的精神和范围内。

                            实施例1

                    半固体骨化三醇制剂的制备

制备了5种含有表1所列成分的半固体骨化三醇制剂(SS1-SS5)。最终制剂含有0.208毫克钙三醇/克半固体制剂。

                   表1：半固体钙三醇制剂的组成

组分	SS1	SS2	SS3	SS4	SS5
						钙三醇	0.0208	0.0208	0.0208	0.0208	0.0208
Miglyol 812	80.0	0	65.0	0	79.0
						Captex 200	0	82.0	0	60.0	0
Labrafac CC	0	0	0	0	12.0
						维生素E TPGS	20.0	18.0	5.0	5.0	9.0
Labrifil M	0	0	0	0	0
						Gelucire 44/14	0	0	30.0	35.0	0
BHT	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05
						BHA	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05

所示量为以克表示。

1.赋形剂的制备

如下所述，制备100克量的表1所示五种半固体钙三醇制剂(SS1-SS5)。

所列的组分，除钙三醇外，在合适的玻璃容器中混合均匀。维生素E TPGS和GELUCIRE 44/14在称重前先在60℃下加热和均一化，然后加入制剂中。

2.活性制剂的制备

在≤60℃下加热半固体赋形剂使其均一。在柔和光下，称取出12±1毫克钙三醇到各个带螺帽的玻璃瓶中，每个制剂放一个瓶子。(钙三醇对光敏感，在用钙三醇/钙三醇制剂时应使用柔和的光/红光)。将确切重量记录至0.1毫克。在钙三醇放入瓶中后立即将塞子塞在瓶上。然后，用下式计算使其浓度为0.208毫克/克所需的各赋形剂的量：

C_w/0.208＝所需的赋形剂重量

其中C_w＝钙三醇的重量(毫克)，0.1208为钙三醇的最终浓度(毫克/克)。

最后，将适量赋形剂加入各个含钙三醇的瓶中。加热制剂(≤60℃)，同时混合，使钙三醇溶解。

                           实施例2

                        其它制剂的制备

按照实施例1的方法，制备了含有表2所示组分的12种不同的骨化三醇制剂。

                                                  表2：组合物制剂

组分	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
													Miglyol812N	95	65	90	85	80	95	65	90	85	80	50	0
维生素ETPGS	5	5	10	5	10	5	5	10	5	10	50	50
													PEG4000	0	30	0	10	10	0	30	0	10	10	0	50
BHA	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05	0.35	0.35	0.35	0.35	0.35	0.35	0.35
													BHT	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05	0.35	0.35	0.35	0.35	0.35	0.35	0.35

所示量为百分数。

                           实施例3

                       稳定的单剂制剂

制备骨化三醇制剂以产生表3的组合物。将维生素E TPGS加热到约50℃，以合适的比例与Miglyol 812混合。将BHA和BHT加入到各制剂中，在最终制剂中各达到0.35％w/w。

               表3：骨化三醇制剂

制剂号	MIGLYOL(％w/w)	维生素E TPGS(％w/w)
			1	100	0
2	95	5
			3	90	10
4	50	50

制备制剂之后，将制剂2-4加热到约50℃，与骨化三醇混合产生0.1μg骨化三醇/mg总制剂。然后将这些含有骨化三醇的制剂加入(～250μL)到25mL容量瓶中，加入去离子水至25mL刻度线。然后将溶液涡旋，在混合(起始)和混合后最多10分钟立即检测400nm吸光度。如表4所示，与水混合后，所有3种制剂均产生了乳白色溶液。制剂4看起来形成了稳定的悬浮液，10分钟后在400nm没有可观察到的吸光度改变。

           表4

  在水中悬浮的制剂的吸光度

制剂号	400nm的吸光度
			起始	10分钟
	2	0.7705			0.6010
3			1.2312	1.1560
	4	3.1265			3.1265

为了进一步评价骨化三醇制剂，进行了溶解性试验以评估各制剂中溶解的骨化三醇的量。将制剂加热到50℃，然后加入合适质量的骨化三醇得到骨化三醇浓度为0.1-0.6μg/mg制剂。然后将制剂冷却至室温，在有和没有偏振光的情况下用光显微镜测定未溶解的骨化三醇的存在。对于各制剂，骨化三醇在测试的最高浓度(0.6μg/mg制剂)是可溶的。

现在在人2期临床试验中采用的是45μg骨化三醇剂量。为了开发含有该剂量的胶囊，制备了含有0.2μg骨化三醇/mg制剂以及BHA和BHT各0.35％w/w的各制剂。将225mg的原料制剂混合物(45μg骨化三醇)填充到3号硬明胶胶囊中。然后在5℃，25℃/60％相对湿度(RH)，30℃/65％RH和40℃/75％RH分析胶囊的稳定性。在合适的时间点，分析稳定性样品的完整骨化三醇含量以及胶囊的溶解。将3只打开的胶囊溶解在5mL甲醇中，在分析前保持在5℃，测定胶囊的骨化三醇含量。然后用反相HPLC分析溶解的样品。在30℃使用Phemonex Hypersil BDS C18柱，洗脱时乙腈梯度为55％-95％水溶液，流速为1.0毫升/分钟。在265nm检测到峰，每次过柱加入25μL样品。将样品的峰面积与参考标准比较以计算骨化三醇含量，如表5所示。将一只胶囊放在含有50mL去离子水(溶有0.5％十二烷基硫酸钠)的6个低体积溶解器的一个之中，来进行溶解试验。37℃以75rpm混合之后在30，60和90分钟取样。将100μL样品注入到Betasil C18柱上，流动相为50∶40∶10乙腈∶水∶四氢呋喃(1毫升/分钟)，在30℃测定样品骨化三醇的含量(在265nm检测峰)。示出了6个胶囊90分钟溶解试验结果的平均值(表6)。

表5：骨化三醇制剂在硬明胶胶囊中的化学稳定性(每胶囊填充225mg总质量，45μg骨化三醇)

存贮条件	时间(mos)	试验a(％)
						制剂1	制剂2	制剂3	制剂4
		N/A	0	100.1	98.8					99.1	100.3
5℃	1.0					99.4	98.9	98.9	104.3
		25℃/60％RH	0.5	99.4	97.7					97.8	102.3
1.0	97.1					95.8	97.8	100.3
			3.0	95.2	93.6				96.8	97.9
35℃/65％RH	0.5					98.7	97.7	96.8			100.7
		1.0	95.8	96.3	97.3				100.4
	3.0					94.2	93.6	95.5		93.4
		40℃/75％RH	0.5	96.4	96.7				98.2		97.1

	1.0	96.1	98.6	98.5	99.3
						3.0	92.3	92.4	93.0	96.4

^a试验结果说明基于45μg含量/胶囊，骨化三醇相对于预期值的％。数值包括前骨化三醇，它是骨化三醇的活性同工型。

表6：骨化三醇制剂在硬明胶胶囊中的物理稳定性(每胶囊填充225mg总质量，45μg骨化三醇)

存贮条件	时间(mos)	溶解a(％)
						制剂1	制剂2	制剂3	制剂4
		N/A	0	70.5	93.9					92.1	100.1
5℃	1.0					71.0	92.3	96.0	100.4
		25℃/60％RH	0.5	65.0	89.0					90.1	98.3
1.0	66.1					90.8	94.5	96.2
			3.0	64.3	85.5				90.0	91.4
35℃/65％RH	0.5					62.1	88.8	91.5			97.9
		1.0	65.1	89.4	95.5				98.1
	3.0					57.7	86.4	89.5		88.8
		40℃/75％RH	0.5	91.9	90.2				92.9		93.1
1.0	63.4					93.8	94.5	95.2
			3.0	59.3	83.6				87.4	91.1

^a如所述进行胶囊溶解，以标准和预期的45μg骨化三醇/胶囊的含量为基础计算骨化三醇％。其活性同工型，前骨化三醇，未包括在溶解的骨化三醇的％计算中。所示数值来自90分钟样品。

化学稳定性结果说明，降低MIGLYOL 812含量同时增加维生素E TPGS含量使完整骨化三醇的回收率增加，见表5。制剂4(50∶50MIGLYOL 812/维生素ETPGS)是化学稳定性最高的制剂，在25℃/60％RH 3个月后完整骨化三醇的回收只有轻微降低，这使其可在室温保存。

通过各稳定性条件下的溶解作用来评价制剂的物理稳定性。和化学稳定性一样，降低MIGLYOL 812含量和增加维生素E TPGS含量改善了制剂的溶解性能(表6)。制剂4(50∶50MIGLYOL 812/维生素E TPGS)溶解性能最好，其稳定性适于在室温保存。

在充分描述了本发明后，本领域技术人员应当理解，在宽的和与所述条件、制剂和其它参数等价的范围内，能实施相同的发明而不影响本发明或其实施方案的范围。本文所引用的所有专利、专利申请和出版物全部完整地纳入本文作为参考。

Claims (39)

1.一种治疗或缓解动物免疫介导的疾病的方法，包括以脉冲给药方式给予动物治疗有效量的活性维生素D化合物，频率不多于每3天一次。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述免疫介导的疾病是自身免疫疾病或炎性疾病。

3.一种治疗、缓解或预防动物移植排异的方法，包括以脉冲给药方式给予动物治疗有效量的活性维生素D化合物，频率不多于每3天一次。

4.如权利要求1或3所述的方法，还包括给予一种或多种治疗制剂。

5.如权利要求1或3所述的方法，其特征在于，所述活性维生素D化合物是骨化三醇。

6.如权利要求1或3所述的方法，其特征在于，所述活性维生素D化合物具有降低的高钙血效应。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述活性维生素D化合物选自EB1089，Ro23-7553和Ro24-5531。

8.如权利要求1或3所述的方法，其特征在于，所述脉冲给药频率不多于每4天一次。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述脉冲给药频率不多于每周一次。

10.如权利要求1或3所述的方法，其特征在于，所述活性维生素D化合物给药剂量约为15μg-105μg。

11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述活性维生素D化合物给药剂量约为15μg-90μg。

12.如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述活性维生素D化合物给药剂量约为25μg-75μg。

13.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述活性维生素D化合物给药剂量约为30μg-60μg。

14.如权利要求13所述的方法，其特征在于，所述活性维生素D化合物给药剂量约为45μg。

15.如权利要求1或3所述的方法，其特征在于，所述活性维生素D化合物的给药剂量足够使活性维生素D化合物的峰值血浆浓度达到至少0.5nM。

16.如权利要求1或3所述的方法，其特征在于，所述活性维生素D化合物为口服、静脉内、胃肠外、直肠、局部、鼻或透皮给药。

17.如权利要求16所述的方法，其特征在于，所述活性维生素D化合物为口服或静脉内给药。

18.如权利要求1或3所述的方法，其特征在于，还包括降低动物血液中钙的水平。

19.如权利要求18所述的方法，其特征在于，所述降低包括饮食中降低钙，由不能通过小肠被运输到血液中的吸附剂、吸收剂、配基、螯合物或其它钙结合部分来截留钙，给予二膦酸盐，增加水合和盐的摄入，或利尿剂治疗。

20.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述一种或多种治疗制剂选自免疫调节剂、抗血管生成剂、抗炎剂、皮肤病制剂和其组合。

21.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述活性维生素D化合物先于一种或多种治疗制剂的给药至少12小时给予。

22.如权利要求21所述的方法，其特征在于，在给予所述一种或多种治疗制剂之前以脉冲给药方式给予所述活性维生素D化合物1天至约3个月。

23.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述活性维生素D化合物与所述一种或多种治疗制剂同时给药。

24.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述活性维生素D化合物在给予所述一种或多种治疗制剂之外的情况下再继续给药。

25.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述活性维生素D化合物在给予所述一种或多种治疗制剂后给药。

26.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述方法重复至少一次。

27.如权利要求26所述的方法，其特征在于，所述方法重复一次至约10次。

28.如权利要求26所述的方法，其特征在于，所述活性维生素D化合物在各重复中是相同或不同的，所述一种或多种治疗制剂在各重复中是相同或不同的。

29.如权利要求26所述的方法，其特征在于，所述活性维生素D化合物的给药时间段在各重复中是相同或不同的。

30.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述活性维生素D化合物作为单位剂型给药，该单位剂型包含约10μg-75μg骨化三醇，约50％MIGLYOL 812和约50％生育酚PEG-1000琥珀酸盐(维生素E TPGS)。

31.如权利要求30所述的方法，其特征在于，所述单位剂型包含约45μg骨化三醇。

32.如权利要求30所述的方法，其特征在于，所述单位剂型还包含选自下组的至少一种添加剂：抗氧化剂、缓冲剂、防沫剂、防粘剂、防腐剂、螯合剂、粘度调节剂、张力调节剂、调味剂、着色剂、香料、遮光剂、悬浮剂、粘合剂、填充剂、增塑剂、增稠剂、润滑剂及其混合物。

33.如权利要求32所述的方法，其特征在于，所述添加剂之一是抗氧化剂。

34.如权利要求33所述的方法，其特征在于，所述抗氧化剂选自丁基羟基茴香醚(BHA)和丁基羟基甲苯(BHT)。

35.如权利要求34所述的方法，其特征在于，所述单位剂型包含BHA和BHT。

36.如权利要求30所述的方法，其特征在于，所述单位剂型是胶囊。

37.如权利要求36所述的方法，其特征在于，所述胶囊是明胶胶囊。

38.如权利要求36所述的方法，其特征在于，所述胶囊中成分的总体积是10-1000μL。

39.如权利要求30所述的方法，其特征在于，所述单位剂型包含约45μg骨化三醇，约50％MIGLYOL 812，约50％维生素E TPGS，BHA和BHT。