CN1799315A - 一种超氧化物歧化酶萝卜及其生产方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种超氧化物歧化酶萝卜及其生产方法，播种前用萝卜SOD专用制剂进行拌种，按照常规种植管理条件进行管理，在出苗15天后的生长期中开始用萝卜SOD专用制剂800－1200倍液进行喷雾，每隔15－20天喷一次，共喷4－6次，得到的果实。将益微SOD制剂用到萝卜上，通过植物有益内生芽孢杆菌在萝卜体内繁殖、转移，提高萝卜体内的SOD活性和含量。SOD萝卜除了保持原有萝卜的优良性状，SOD含量明显提高，具有增强人体免疫力和延缓衰老的功效。因此，SOD萝卜市场前景看好，符合绿色食品和功能食品的发展方向。利用萝卜专用SOD制剂生产的萝卜即保持了较高的SOD酶活，而且在深加工过程中仍可保持较高的SOD酶活。
Description
技术领域
本发明属于萝卜及其生产方法，特别是涉及一种具有较高含量超氧化物歧化酶(SOD)的萝卜及其生产方法。
背景技术
萝卜又名莱菔、芦菔，原产于我国，栽培历史悠久，种植面积较大，在北方种植面积仅次于大白菜，近几年来随着保护地蔬菜的面积的扩大，冬春蔬菜品种和产量不断增加，然而萝卜作为大众蔬菜，仍是城乡居民生活不可缺少的蔬菜。萝卜用途广泛，肥大的肉质根不仅可以生食、炒食、腌渍、干制等多种食法，萝卜因含淀粉酶，生食还有消积化食的功能。萝卜根和种子内含有莱菔子素，有杀菌作用。萝卜还具有祛痰、止泻、利尿等功能。由于地方性引种的萝卜品种单一，导致产量低，品质差、不耐贮运等缺点，不能充分发挥优良品种在生产中的作用，因此对萝卜品质改进，特别是使萝卜具有一些特殊的医疗保健作用意义非常重大。
SOD酶是生物重要保护酶之一，它能增强机体抗逆能力，防衰老。益微SOD是中国农业大学的专利产品，由植物体内有益内生共生芽孢杆菌(Bacillus spp.)制备而成，已有制剂、制品、粗酶、细酶以及结晶五个层次的产品。益微SOD用于植物生长，可使其具有增产、改善品质、提高植物SOD酶含量的作用。益微SOD酶的独特优点是耐热性好，在深加工和贮藏过程中不易失活。
发明内容
本发明为解决公知技术中存在的技术问题而提供一种具有较高含量超氧化物歧化酶(SOD)的萝卜及其生产方法。
本发明的SOD萝卜是将益微SOD高科技研究成果应用在萝卜的生产过程中，结合萝卜的栽培管理，在特定时期内进行处理，获得的高含量SOD酶的萝卜即SOD萝卜。本发明SOD萝卜除了保持原有萝卜的优良性状，其SOD酶含量明显提高，具有增强人体免疫力和延缓衰老的功效。
本发明为解决公知技术中存在的技术问题所采取的技术方案是：
一种超氧化物歧化酶萝卜，播种前用萝卜SOD专用制剂进行拌种，用每亩地的用种量加入20-50克的SOD专用制剂拌种，拌均匀后再播种，然后在常规种植管理条件下，在出苗15天后的生长期中采用萝卜SOD专用制剂进行喷雾后得到的果实。
本发明还可以采用如下技术措施：
生产超氧化物歧化酶萝卜的方法，采用常规种植萝卜的方法种植，在萝卜植株生长期用萝卜SOD专用制剂800-1200倍液向萝卜植株叶面、果实进行喷雾至萝卜收获期。
所述向萝卜植株喷雾萝卜专用SOD制剂的方法是，每次取萝卜专用SOD制剂20g兑水15kg，制成800-1200倍液进行喷雾，使用时应每隔15-20天喷一次，在萝卜的整个生长期内共喷4-6次为好。
所述萝卜专用SOD制剂为白色或灰色粉末，其中芽孢杆菌含量为2.5×10-3.5×10cfu/g，含水率≤5％，细度为100％通过0.09mm筛。
本发明具有的优点和积极效果是：SOD萝卜是将益微SOD高科技研究成果应用在萝卜的生产过程中，结合萝卜的栽培管理，在特定时期进行处理，获得的高含SOD酶的萝卜即SOD萝卜。SOD萝卜除了保持原有萝卜的优良性状，SOD含量明显提高，具有增强人体免疫力和延缓衰老的功效。因此，SOD萝卜市场前景看好，符合绿色食品和功能食品的发展方向。将益微SOD制剂用到萝卜上，通过植物有益内生芽孢杆菌在萝卜体内繁殖、转移，提高萝卜体内的SOD活性和含量。使用萝卜专用SOD制剂后，产生的SOD酶有较强的耐温抗热性和抗逆能力，在70℃条件下处理1小时，酶活为原酶活的47％；100℃条件下处理30分钟，酶活为原酶活的37％；对臭氧、高温高酸的耐性强；益微SOD制剂是由植物体内有益内生共生芽孢杆菌中制备而成，具有高度的安全性，增加了产品的耐贮性、抗旱性和抵抗病虫害能力。因此利用萝卜专用SOD开发的萝卜保持了较高的SOD酶活，并可使诱发癌症的亚硝酸盐和硝酸盐含量明显降低，而且在萝卜深加工过程中仍可保持较高的SOD酶活。
具体实施方式
为能进一步了解本发明的发明内容、特点及功效，兹例举以下实施例详细说明如下
实施例1、
萝卜专用SOD制剂的生产
一、菌株的发酵生产
1、生产中的技术指标
灭菌条件：温度121-125℃，压力0.11-0.14mpa，时间30min
培养条件：温度28-34℃，压力0.05mpa，通气值1∶1，pH值7-7.5
放罐指标：含菌量≥70亿/ml，芽孢形成≥700％，杂菌率≤0.3％
2、菌种生产
从芽孢杆菌CGMCC 0175(专利号93103774.3)原菌种斜面上挑取少许在备用斜面试管内划线，置于28-30℃温箱中培养24h，取出检查，确认无杂菌污染，菌体生长整齐时，再继续培养24-48h，然后涂片、染色，并在油镜下观察，无杂菌污染，孢子整齐时，作为发酵生产的菌种。
3、发酵生产
发酵生产分种子罐培养和发酵罐培养两部分进行，发酵液达到规定指标时及时放罐。
二、制备生物制剂
1、添加吸附剂
向得到的发酵液中投入6倍菌体重量细度为0.09mm的轻质碳酸钙或草炭或腐植酸，然后机械搅拌3-6小时，使芽孢杆菌充分被载体吸附。
2、压滤
采用明流式或暗流式板扛压滤机滤去多余水份。
3、干燥
低温干燥(不超过70℃)，使含水率≤5％。
4、粉碎
用超细度粉碎机粉碎，细度要求为100％通过0.09mm孔径筛，控制细度的目的是为防止使用时堵塞喷头。
5、包装。
实施例2、
萝卜专用SOD制剂为白色或灰色粉末，其中芽孢杆菌含量为2.5×10-3.5×10cfu/g，含水率≤5％，细度为100％通过0.09mm筛。
实施例3、
采用喷雾法生产SOD萝卜
超氧化物歧化酶萝卜，播种前用萝卜SOD专用制剂进行拌种，用每亩地的用种量加入20克的SOD专用制剂拌种，拌均匀后再播种，在常规种植管理条件下，在出苗15天后的生长期中采用萝卜SOD专用制剂进行喷雾后得到的果实。
生产超氧化物歧化酶萝卜的方法，采用常规种植萝卜的方法种植，在萝卜植株生长期用萝卜SOD专用制剂800-1200倍液向萝卜植株叶面、果实进行喷雾至萝卜收获期。
所述向萝卜植株喷雾萝卜专用SOD制剂的方法是，每次取萝卜专用SOD制剂20g兑水15kg，制成800-1200倍稀释液进行喷雾，使用时应每隔15-20天喷一次，即在萝卜幼苗期进行一次喷雾；萝卜叶片生长盛期实施1-2次喷雾；萝卜肉质根膨大期实施1-2次喷雾。因此在萝卜的整个生长期内共喷4-5次为好。此外也可根据萝卜植株的大小自行配置萝卜SOD专用制剂的溶液浓度，但其浓度一般应掌握在300-1500倍液范围内。
配液时应注意：本SOD制剂为可湿性粉剂，使用前应用少量水将粉剂制成糊状后再逐渐加足稀释的水量，不要把粉剂直接撒到水中，以免影响喷施。
采用萝卜专用SOD制剂在对其植株进行喷雾过程中可与其它栽培管理结合，不发生矛盾。
萝卜专用SOD制剂的兼容性：本SOD制剂还可与多种杀虫剂、杀菌剂混合使用，但不能与杀细菌剂(如农用链霉素、土霉素、青霉素和四环素等)混合使用，也可与植物生长调节剂和叶面肥等混合使用。还可减少化学药剂的用量。该SOD制剂可与各种肥料配合施用，减少肥料用量。
萝卜专用SOD制剂的安全性：SOD制剂具有高度的安全性，对作物、人、蓄无毒，不会引起不良反应。
在SOD萝卜生产过程中，除去SOD制剂的处理外，其他栽培管理仍可按照当地常年积累总结的操作规程进行。
实施例4、
表1 SOD萝卜的SOD酶活标准
| 项目名称 | 计量单位 | 指标 |
| SOD | IU/g | 200-500 |
实施例5、
SOD的测定
SOD的测定方法采用NBT光化学法，具体如下：
(1)设备：752型分光光度计；台式离心机；光照培养箱；冰箱；10ml小烧杯等。
(2)试剂：氯化硝基氮蓝四唑(NBT)——上海前进制剂厂生产
L-甲硫氨酸(L-Met)————上海康达氨基酸厂生产
乙二胺四乙酸(EDTA)————北京化工厂生产
核黄素(VB2)———————北京西中化工厂生产
(3)反应液的配制
NBT反应液的制备：配制pH7.8，50mmol/L的磷酸缓冲液1000ml，加入1.933mg的L-Met，待完全溶解后，放入45.8mg NBT，0.47mg核黄素(配成0.47mg/ml溶液，吸取1ml加入)和29.0mgEDTA，溶液终浓度：Met为13mmol/L；NBT为6.3×10-3mmol/L；核黄素为1.3×10-3mmol/L；EDTA为0.1mmol/L，置于棕色试剂瓶中，用黑布罩遮光，于4℃冰箱中可保存1个月。
(4)材料的预处理
萝卜果肉用研钵研碎，按照果肉∶50mM磷酸缓冲液＝1∶2的比例加入缓冲液，10000rpm离心10分钟，取上清液进行SOD酶活测定。
(5)测定方法
吸取30μl样品，放入10ml透明玻璃小烧杯中，加入3mlNBT反应液，混匀，在28℃SOD光化反应室中，2×15W日光灯光照20分钟(光照为4000勒克司)，在560nm处测定吸光度，以NBT反应液作空白对照，每组设3次重复，整个测定过程除光化反应外，均在避光或弱光条件下进行。同时测试过程中以美国″Sigma″公司、上海宝安公司的标准酶和贵州老来福药业公司生产的SOD口服液作为测试对照。
(6)计算
SOD酶活(IU/g)＝(OD对照-OD样品)/(1/2OD对照)×稀释倍数
实施例6、
益微SOD对萝卜中SOD酶活的作用效果
严格按照SOD萝卜的栽培生产过程，以清水处理为对照，其他栽培管理措施均一致，根据实施例5的SOD测定方法，测定SOD萝卜和对照萝卜的SOD酶活，结果见表2。
由表2可知，SOD萝卜中SOD酶活显著高于普通萝卜，且在a＝0.05水平差异显著，酶活提高93.6％。说明通过该项技术可以生产出具有高SOD酶活的SOD保健萝卜。
表2 SOD萝卜的SOD活性测定
| 样品 | 重复次数 | SOD酶活(IU/g) | 酶活提高百分率(％) |
| SOD萝卜 | 3 | 328.3A | 93.6 |
| 对照 | 3 | 169.5B | - |
实施例7、
SOD萝卜中SOD的耐热性测定
严格按照SOD萝卜的栽培生产过程，以清水处理为对照，其他栽培管理措施均一致。根据实施例5的SOD测定方法，测试前将所测试的样品在100℃中保持20分钟，测定SOD萝卜和对照萝卜的SOD酶活性，结果见表3。
由表3可知，经过热处理后，SOD萝卜中仍保持较高的SOD酶活，但对照含有的SOD酶活极低。说明通过该项技术生产的SOD萝卜，适于在常温下保存和进行深加工，仍能保持较高的SOD活性。
表3 SOD萝卜中SOD的抗热性测定
| 样品 | 重复次数 | SOD酶活(IU/g) |
| SOD萝卜 | 3 | 229.8A |
| 对照 | 3 | 33.9B |
Claims (4)
1.一种超氧化物歧化酶萝卜，其特征在于：播种前用萝卜SOD专用制剂进行拌种，用每亩地的用种量加入20-50克的SOD专用制剂拌种，拌均匀后再播种，然后在常规种植管理条件下，在出苗15天后的生长期中采用萝卜SOD专用制剂进行喷雾后得到的果实。
2.一种生产超氧化物歧化酶萝卜的方法，其特征在于：采用常规种植萝卜的方法种植，在萝卜植株生长期用萝卜SOD专用制剂800-1200倍液向萝卜植株叶面、果实进行喷雾至萝卜收获期。
3.根据权利要求2所述的一种生产超氧化物歧化酶萝卜的方法，其特征在于：所述向萝卜植株喷雾萝卜专用SOD制剂的方法是，每次取萝卜专用SOD制剂20g兑水15kg，制成800-1200倍液进行喷雾，使用时应每隔15-20天喷一次，在萝卜的整个生长期内共喷4-6次为好。
4.根据权利要求2所述的一种生产超氧化物歧化酶萝卜的方法，其特征在于：所述萝卜专用SOD制剂为白色或灰色粉末，其中芽孢杆菌含量为2.5×10-3.5×10cfu/g，含水率≤5％，细度为100％通过0.09mm筛。
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