CN1796402B - 湖北贝母总生物碱制备工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种湖北贝母总生物碱制备工艺，该工艺包括药材前处理、乙醇回流提取、浓缩、除杂、上柱纯化和真空干燥等步骤。其中乙醇回流提取步骤中采用了适当浓度的含水乙醇作为提取溶剂，上柱纯化步骤中采用了大孔吸附树脂纯化技术。该工艺避免了贝母生物碱提取工艺中氯仿、乙酸乙酯等有机溶剂的使用，提高了产品质量，缩短了生产周期，适合工业生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药有效成分的制备工艺，具体涉及湖北贝母总生物碱的制备工艺。
背景技术
湖北贝母为百合科贝母属植物湖北贝母(Fritillaria Hupehensis Hsiaoet K.C.Hsia)的干燥鳞茎，微苦、凉，入肺、心经，具有清热润肺、化痰止咳及散结之功效。湖北贝母鳞茎含多种异甾体类生物碱，主要有湖贝甲素、湖贝甲素甙、浙贝乙素、浙贝甲素、湖贝乙素、湖贝嗪、湖贝辛及湖贝啶等。药理学研究表明，湖北贝母总生物碱是其生物活性有效部位。目前，湖北贝母总生物碱的提取工艺主要是有机溶剂提取法，即采用甲醇或无水乙醇热回流提取，所得粗浸膏用适量酸水溶解，然后碱化酸水液至一定pH值，再用氯仿、乙酸乙酯等有机溶剂萃取，制备湖北贝母总生物碱。这种方法由于采用了易燃、易爆和毒性较大的有机溶剂，不仅生产成本高、环境污染严重，而且由于萃取过程中存在严重乳化现象，生产周期长，不利于工业化生产。
发明内容
本发明的任务是提供一种湖北贝母总生物碱制备工艺，使其具有简易、高效、低成本，且适宜工业化生产等优点，以克服传统制备工艺的不足。
本发明的技术方案依次包括药材前处理、乙醇回流提取、浓缩、除杂、上柱纯化和真空干燥等步骤，具体方法如下：
a.药材前处理：将湖北贝母进行干燥和破碎过筛，药材干燥温度为40～60℃，筛网目数为10～20目，得湖北贝母药材粉末；
b.乙醇回流提取：将所得湖北贝母药材粉末与3～6倍生药材重量的水体积的浓度为30～70％的乙醇混合，常压下回流提取2～4次，每次乙醇回流提取时间为30～120分钟，过滤后收集并合并滤液；
c.浓缩：将所得滤液置于旋转蒸发器上，在70℃下减压浓缩6～8小时，以除去乙醇并浓缩至1/4倍生药材重量的水的体积，得浓缩液；
d.除杂：在所得浓缩液中加入1/4倍生药材重量的浓度为2％的盐酸和相当于2.4～4.8％生药材重量的硅藻土，充分搅拌15分钟，过滤，收集滤液和残渣，残渣继续用2％的盐酸溶液洗涤两次，每次酸水的用量为1/4倍生药材重量的水体积，合并以上三次滤液；
e.上柱纯化：采用5％氢氧化钠碱化上一步骤所得滤液，即用5％氢氧化钠将滤液的pH值调至7.0～9.0之间，然后以每小时1～4倍树脂床体积的速度流过大孔吸附树脂，所用树脂的重量为生药材重量的1/3～1/6，然后用6～10倍树脂床体积的蒸馏水以相同速度流过树脂，除去无机盐和水溶性杂质，再用3～5倍树脂床体积的浓度为20％～50％的乙醇溶液以相同速度进行洗脱，除去部分极性大的杂质，最后采用5～10倍树脂床体积的浓度为80％～90％的乙醇溶液以相同速度流过大孔吸附树脂，将树脂上吸附的生物碱洗脱下来，收集该部分洗脱液并浓缩至流浸膏；
f.真空干燥：将所得流浸膏置于50℃～60℃真空干燥箱中干燥，干燥后的固体被粉碎后即得到湖北贝母总生物碱成品。
本发明的制备工艺适合湖北贝母总生物碱的制备。本发明的工艺在药材提取流程中采用了30％～70％乙醇水溶液作为提取溶剂，一方面保证了湖北贝母总生物碱的完全提取，另一方面可避免贝母药材中过多的脂溶性杂质和淀粉被带到提取液中，影响后续操作。对提取液适度浓缩再用2％盐酸水溶液酸化处理，并加入硅藻土助滤，既缩短了生产周期，又减少了湖北贝母生物碱中某些成分因与强酸长时间接触而分解的程度。酸水液碱化至适当pH值后，用大孔吸附树脂分离纯化，避免了贝母生物碱提取工艺中氯仿、乙酸乙酯等有机溶剂的使用，同时又提高了成品中生物碱的含量，改善了成品性状。
将本发明工艺提取的湖北贝母总生物碱与传统有机溶剂萃取工艺所得总生物碱化学成分经薄层色谱对照，显示采用大孔吸附树脂分离纯化所得样品与传统有机溶剂萃取工艺所得总生物碱中各个化学成分Rf值相同，表明采用本发明方法制备的湖北贝母总生物碱与传统有机溶剂萃取工艺方法所得总生物碱的化学成分一致(见图2)。本发明方法生产的湖北贝母总生物碱可用于药品生产。
附图说明
图1为本发明湖北贝母总生物碱制备工艺流程图。
图2为本发明工艺提取的湖北贝母总生物碱与传统有机溶剂萃取工艺所得总生物碱化学成分的薄层色谱对照图，其展开剂为环己烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶二乙胺6∶4∶0.2∶0.9；展开条件为二次展开，第一次8cm，第二次16cm；显色剂为稀碘化铋钾试液；图中编号部位对应的样品是：
1：为湖贝甲素对照品，由同济医学院药学院天然药化教研室提供，经红外图谱(IR)、紫外图谱(UV)、质谱(MS)和核磁共振谱(NMR)鉴定；
2、3：为40％乙醇除杂后的总碱；
4、6：为传统工艺处理的总碱；
5：为浙贝甲素对照品，由同济医学院药学院天然药化教研室提供，经红外图谱(IR)、紫外图谱(UV)、质谱(MS)和核磁共振谱(NMR)鉴定；
7、8：为50％乙醇除杂后的总碱；
9：为浙贝乙素对照品，由同济医学院药学院天然药化教研室提供，经红外图谱(IR)、紫外图谱(UV)、质谱(MS)和核磁共振谱(NMR)鉴定。
该图谱显示：采用大孔吸附树脂分离纯化所得样品与传统工艺(有机溶剂萃取)所得总生物碱中各个化学成分Rf值相同。这表明采用本发明制备所得湖北贝母总生物碱与传统工艺(有机溶剂萃取)所得总生物碱化学成分的一致。
具体实施方式
实施例1
以湖北贝母1kg为原料，在60℃烘烤12小时后，破碎过20目筛，然后与4倍生药材重量的水的体积的50％乙醇溶液混合，于水浴锅上热回流提取3次，每次提取1小时，过滤后收集并合并三次滤液。将滤液置于旋转蒸发器上，于70℃下减压浓缩6小时，得到250毫升浓缩液。将浓缩液与250毫升的2％盐酸溶液混合后，加入24g硅藻土，充分搅拌15分钟，过滤，收集滤液和残渣。残渣再用2％盐酸溶液重复洗涤2次，先将残渣与2％盐酸溶液混合，搅拌5分钟后，过滤。合并以上三次滤液。滤液用5％Na0H溶液碱化调节pH至8后，以每小时2倍树脂床体积的速度流过D101大孔吸附树脂，所用树脂的重量为生药材重量的1/5，然后用10倍树脂床体积的蒸馏水以相同速度流过树脂，再用5倍树脂床体积的40％的乙醇溶液以相同速度进行洗脱，最后采用8倍树脂床体积的90％的乙醇溶液以相同速度流过大孔吸附树脂，将树脂上吸附的生物碱洗脱下来，收集该部分洗脱液并浓缩；于50℃真空干燥箱中，干燥恒重后，得4.7673g淡黄色固体。精密称取上述黄棕色固体粉末10mg，用酸性染料比色法测定总生物碱含量即纯度为59％。
实施例2
以湖北贝母1kg为原料，在60℃烘烤12小时后，破碎过20目筛，然后与4倍生药材重量的水的体积的50％乙醇溶液混合，于水浴锅上热回流提取3次，每次提取1小时，过滤后收集并合并三次滤液。将滤液置于旋转蒸发器上，于70℃下减压浓缩6小时，得到250毫升浓缩液。将浓缩液与250毫升的2％盐酸溶液混合后，加入24g硅藻土，充分搅拌15分钟，过滤，收集滤液和残渣。残渣再用2％盐酸溶液重复洗涤2次，先将残渣与2％盐酸溶液混合，搅拌5分钟后，过滤。合并以上三次滤液。滤液用5％NaOH溶液碱化调节pH至8后，以每小时2倍树脂床体积的速度流过D101大孔吸附树脂，所用树脂的重量为生药材重量的1/5，然后用10倍树脂床体积的蒸馏水以相同速度流过树脂，再用5倍树脂床体积的50％的乙醇溶液以相同速度进行洗脱，最后采用8倍树脂床体积的90％的乙醇溶液以相同速度流过大孔吸附树脂，将树脂上吸附的生物碱洗脱下来，收集该部分洗脱液并浓缩；于50℃真空干燥箱中，干燥恒重后，得4.0739g淡黄色固体。精密称取上述黄棕色固体粉末10mg，用酸性染料比色法测定总生物碱含量即纯度为73％。
Claims (5)
1.一种湖北贝母总生物碱制备工艺，包括以下步骤：
a.将湖北贝母进行干燥和破碎过筛，得湖北贝母药材粉末；
b.将所得湖北贝母药材粉末与3～6倍生药材重量的水体积的浓度为30～70％的乙醇混合，常压下回流提取2～4次，每次乙醇回流提取时间为30～120分钟，过滤后收集并合并滤液；
c.将所得滤液置于旋转蒸发器上，在70℃下减压浓缩6～8小时，以除去乙醇并浓缩至1/4倍生药材重量的水体积，得浓缩液；
d.在所得浓缩液中加入1/4倍生药材重量的浓度为2％的盐酸和相当于2.4～4.8％生药材重量的硅藻土，充分搅拌15分钟，过滤，收集滤液和残渣，残渣继续用2％的盐酸溶液洗涤两次，每次酸水的用量为1/4倍生药材重量的水体积，合并以上三次滤液；
e.采用5％氢氧化钠碱化上一步骤所得滤液，然后以每小时1～4倍树脂床体积的速度流过大孔吸附树脂，所用树脂的重量为生药材重量的1/3～1/6，然后用6～10倍树脂床体积的蒸馏水以相同速度流过树脂，除去无机盐和水溶性杂质，再用3～5倍树脂床体积的浓度为20％～50％的乙醇溶液以相同速度进行洗脱，除去部分极性大的杂质，最后采用5～10倍树脂床体积的浓度为80％～90％的乙醇溶液以相同速度流过大孔吸附树脂，将树脂上吸附的生物碱洗脱下来，收集该部分洗脱液并浓缩至流浸膏；
f.将所得流浸膏置于50℃～60℃真空干燥箱中干燥即得湖北贝母总生物碱。
2.根据权利要求1所述的湖北贝母总生物碱制备工艺，其特征在于步骤a中的药材干燥温度为40～60℃，破碎过筛的筛网目数为10～20目。
3.根据权利要求1所述的湖北贝母总生物碱制备工艺，其特征在于所述的采用5％氢氧化钠碱化滤液是将滤液的pH值调至7.0～9.0之间。
4.根据权利要求3所述的湖北贝母总生物碱制备工艺，其特征在于所述的采用5％氢氧化钠碱化滤液是将滤液的pH值调为8。
5.根据权利要求1所述的湖北贝母总生物碱制备工艺，其特征在于所述的经5％氢氧化钠碱化后的滤液流过大孔吸附树脂的速度为每小时2倍树脂床体积的速度；所用树脂的重量为生药材重量的1/5。
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