CN1793323A - 一种微生物杀菌剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

一种微生物杀菌剂及其制备方法是一种用于防治植物叶部病害的生物农药及其制备方法。本发明就是提供一种菌株对多种植物病原真菌具有强烈的拮抗杀菌作用，以及该菌株制成药剂的生产方法。一种微生物，其特征在于它是用于植物真菌病害生物防治的木霉菌Tr01。一种微生物杀菌剂及其制备方法：(1)一级种培养采用常规PDA培养基；二级种制备以稻粒培养基培养获得；发酵罐培养以稻粒为发酵材料，按照二级种与发酵料重量比1∶70～120接入二级种，并在24－29℃条件下供氧发酵，10－30天后，获得孢子粉；(2)以孢子粉、木质素磺酸钙、十二烷基苯磺酸钠、轻质碳酸钙按重量比为8～12∶5～12∶2～6∶70～85配制成制剂。

Description

一种微生物杀菌剂及其制备方法

技术领域：

本发明是一种用于防治植物叶部病害的生物农药及其制备方法。

背景技术：

随着化学农药大量持续使用带来的对生态环境及人体健康的直接或间接的污染和危害问题越来越严重，近年来开发利用无公害、对生态环境友好的活体微生物农药的研究及应用越来越多，尤其是世界上的一些发达国家投入了大量的人力、物力、财力用于微生物农药的开发应用。木霉菌作为自然界中广泛存在的一种微生物，其对植物病原菌的生防作用早在上个世纪三十年代就被人们发现。木霉菌对真菌性植物病害有着多种类型的作用机制，主要包括对病原真菌的重寄生作用、溶菌作用、营养与生态位点的竞争作用以及产抗生素作用。作为极具潜力的生防菌，因其具有对生态环境及人畜安全无害、作用机制独特、不易产生抗药性等多种优点，目前在世界各国开展木霉菌制剂研究相当多，并且已登记木霉菌杀菌剂有十多个品种。我国在木霉菌剂研制上起步落后于一些发达国家，目前多数研究开发仍处于研发阶段，截止目前仅有一个木霉菌登记品种特立克。因此，我国木霉菌生防制剂开发应用空间极大。

发明内容：

本发明就是针对上述问题，提供一种菌株对多种植物病原真菌具有强烈的拮抗杀菌作用，以及该菌株制成药剂的生产方法。

本发明是采用如下技术方案：

一种微生物，其特征在于它是用于植物真菌病害生物防治的木霉菌Tr01(Trichoderma harzianum)，其保藏登记号为CGMCC No.1555。

一种微生物杀菌剂及其制备方法，

(1)一级种培养采用常规PDA培养基；二级种制备以稻粒培养基培养获得；发酵罐培养以稻粒为发酵材料，按照二级种与发酵料重量比1∶70～120接入二级种，并在24-29℃条件下供氧发酵，10-30天后，获得孢子粉；

(2)以孢子粉、木质素磺酸钙、十二烷基苯磺酸钠、轻质碳酸钙按重量比为8～12∶5～12∶2～6∶70～85配制成制剂。

本发明的有益效果：

利用木霉菌Tr01菌株发酵配制的生防制剂，可以用于多种蔬菜病害如灰霉病、叶霉病、早疫病、白粉病等防治，平均防效可达60-75％以上，增产5-15％以上。对多种蔬菜病害具有良好的防治作用，具有对人、动物安全无害，对生态环境友好，无农药残留与污染问题，同时不存在病原菌产生抗药性等多种优点。

微生物(株)：Tr01

保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心

保藏时间：2005年12月08日

保藏编号：CGMCC No：1555

具体实施方式：

实例1：

本项发明木霉菌株(Trichoderma harzianum，编号Tr01)是从作物根际土壤中分离筛选获得。经过菌株的分离培养、纯化、鉴定转移到PDA(培养基配方：马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂20克、水1000毫升)试管斜面内作为源菌种备用。

一级种固体培养基配方：采用PDA平板培养基。将试管PDA中培养好的木霉菌菌种挑入PDA平板中，并在26℃恒温培养箱中培养7-9天后，平板表面产生浓绿色孢子后，用于固体扩繁接种；

二级种培养基制备方法：将稻粒在沸水中蒸煮20分钟并浸泡30分钟后，将稻粒捞出并装入17×30cm的聚丙烯塑料袋中500g，并用袋套封口，在121℃、1个大气压下灭菌90分钟。

将培养好的一级种接入二级种培养基中，每袋接入培养好的木霉菌PDA菌碟6个，然后封口，在28℃条件下培养10天后，待其菌丝长满整个培养料后，进行固体发酵罐的接种。

固体发酵罐发酵材料的准备方法：将固体发酵材料一稻粒装入发酵罐中，利用蒸气灭菌2小时后，用自来水冷却至28℃即可。

按照1∶100比例接入发酵罐中培养好的二级菌种，充分搅拌均匀后，开始发酵，发酵控制条件如下：第一阶段为菌丝生长培养阶段，即在28℃、相对湿度95％条件下静态培养，并进行间隔定时供氧，发酵时间10天，此时发酵料菌丝生长完成；第二阶段为产孢发酵培养阶段，发酵罐技术参数为温度设置为26℃、湿度设定为85％，搅拌参数设定为1次/24小时，每次5分钟，发酵10天后，发酵料上完全长满浓绿色分生孢子、无白色气生菌丝后，取出发酵料。发酵好的材料，放置于控温、控湿的无菌室中，进行干燥处理，在26℃相对湿度25％条件下自然干燥后熟10天。干燥后的发酵料用旋风式孢子收集机进行收集，获得高纯度木霉菌孢子粉。

然后用小型搅拌机将木霉菌孢子粉、木质素磺酸钙、十二烷基苯磺酸钠、轻质碳酸钙等配料放入搅拌机中充分搅拌混合均匀(各组份用量按照孢子粉：木质素磺酸钙：十二烷基苯磺酸钠：轻质碳酸钙为10∶10∶5∶75的比例加入)，并分装成每袋20克的木霉菌可湿粉杀菌剂。

利用该木霉菌杀菌剂600～800倍叶面喷雾防治灰霉病、叶霉病及白粉病等多种蔬菜病害可获得75％以上的防治效果。

实例2：

经过纯化的木霉菌菌株(Trichoderma harzianum，编号Tr01)转移到PDA(培养基配方：马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂20克、水1000毫升)试管斜面内作为源菌种备用，一级种、二级种制备同实例一。

固体发酵罐发酵材料的准备方法：将固体发酵材料一稻粒装入发酵罐中，利用蒸气灭菌2小时后，用自来水部冷却至28℃即可。

按照1∶100比例接入发酵罐中培养好的二级菌种，充分搅拌均匀后，开始发酵，发酵控制条件如下：第一阶段为菌丝生长培养阶段，即在28℃、相对湿度95％条件下静态培养，并进行间隔定时供氧，发酵时间7天，此时发酵料菌丝生长完成；第二阶段为产孢发酵培养阶段，发酵罐技术参数为温度设置为26℃、湿度设定为85％，搅拌参数设定为1次/24小时，每次5分钟。发酵10天后，发酵料上完全长满浓绿色分生孢子、无白色气生菌丝后，取出发酵料。发酵好的材料，放置于控温、控湿的无菌室中，进行干燥处理，在26℃相对湿度25％条件下自然干燥10天。干燥后的发酵料用旋风式孢子收集机进行收集，获得高纯度木霉菌孢子粉。

然后用小型搅拌机将木霉菌孢子粉、木质素磺酸钙、十二烷基苯磺酸钠、轻质碳酸钙等配料放入搅拌机中充分搅拌混合均匀(各组份用量按照孢子粉：木质素磺酸钙：十二烷基苯磺酸钠：轻质碳酸钙为10∶5∶2.5∶82.5的比例加入)，并分装成每袋20克的木霉菌可湿粉杀菌剂。

利用该木霉菌杀菌剂600～800倍叶面喷雾防治灰霉病、叶霉病及白粉病等多种蔬菜病害可获得60％以上的防治效果。

Claims (4)

1.一种微生物，其特征在于它是用于植物真菌病害生物防治的木霉菌Tr01(Trichoderma harzianum)，其保藏登记号为CGMCC No.1555。

2.一种微生物杀菌剂及其制备方法，其特征在于：

(1)一级种培养采用常规PDA培养基；二级种制备以稻粒培养基培养获得；发酵罐培养以稻粒为发酵材料，按照二级种与发酵料重量比1∶70～120接入二级种，并在24～29℃条件下供氧发酵，10～30天后，获得孢子粉；

(2)以孢子粉、木质素磺酸钙、十二烷基苯磺酸钠、轻质碳酸钙按重量比为8～12∶5～12∶2～6∶70～85，配制成制剂。

3.根据权利要求2所述的一种微生物杀菌剂及其制备方法，其特征在于：

(1)一级种培养采用常规PDA培养基；二级种制备以稻粒培养基培养获得；发酵罐培养以稻粒为发酵材料，按照二级种与发酵料重量比1∶100接入二级种，并在24～29℃条件下供氧发酵，10～30天后，获得孢子粉；

(2)以孢子粉、木质素磺酸钙、十二烷基苯磺酸钠、轻质碳酸钙按重量比为10∶10∶5∶75配制成制剂。

4.根据权利要求2所述的一种微生物杀菌剂及其制备方法，其特征在于：

(1)一级种培养采用常规PDA培养基；二级种制备以稻粒培养基培养获得；发酵罐培养以稻粒为发酵材料，按照二级种与发酵料重量比1∶100接入二级种，并在24～29℃条件下供氧发酵，10～30天后，获得孢子粉；

(2)以孢子粉、木质素磺酸钙、十二烷基苯磺酸钠、轻质碳酸钙按重量比为10∶5∶2.5∶82.5配制成制剂。