CN1337164A - 一种微生物杀菌剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明是一种微生物杀菌剂及其制备方法。其特征在于含重量百分比烟梗末或木屑、麦麸等植物粉碎材料85－90%,木霉菌孢子粉8－12%。该杀菌剂按一定的步骤制取。采用本发明的微生物杀菌剂进行植物病害的生物防治,其效果持久,病害难以产生抗药性,对人体和作物无危害,对病害的选择性大,具有广谱杀菌剂效果,不污染环境,不会对植物产生药害,安全、无毒、无残留。对土壤及叶部真菌,特别是疫霉菌、腐霉菌、镰刀菌及丝核菌、链格孢菌、毛盘孢菌等有显著防治效果,同时对烟草有一定的促生作用。

Description

一种微生物杀菌剂及其制备方法

本发明涉及促进植物生长、防治植物真菌病害及防虫的微生物杀菌剂及其制备方法。

植物的真菌病害如烟草赤星病(tobacco bromn spot)、烟草黑胫病、烟草炭疽病、烟草猝倒病等烟草真菌病害以及立枯病、炭疽病等是世界各地乃至我国烟草等植物从苗期到成熟期造成危害的主要真菌病害。近年来，由于受气候、施肥条件、移栽品种等条件变化的影响，这些病害的发生与危害日益严重。在目前无优良抗病品种的情况下，主要采取化学防治即化学杀菌剂(化学农药)作为控制上述病害流行的主要方法。但化学杀菌剂如菌核净、保利安、甲霜宁等的大量使用，一方面会污染环境，另一方面长期、反复使用会导致病菌产生抗药性，药剂对病菌无效，以及造成烟草叶片的严重药害，烟草叶片上化学农药的残留，影响烟草吸食的安全性。

本发明的目的是克服化学杀菌剂存在的问题，提供一种微生物杀菌剂，其制作成本低，能改善土壤结构，促进土壤中有机质转化，促进植物生长，抑制病菌生长，对病害防治效果达80％以上。

本发明的另一目的是提供上述微生物杀菌剂的制备方法。

本发明是这样实现的：以烟草根际、叶面微生态学理论为基础，筛选高效优良菌株，采用独特的发酵工艺，经浓缩活化制成活菌制剂。

本杀菌剂含重量百分比烟梗末或木屑、麦麸等植物粉碎材料85-90％，木霉菌孢子粉8-12％。

所述的木霉菌为TV-1，或T918、Tr13、A405。

所述的微生物杀菌剂的制备方法按下列步骤制取：

1)基料的制备：

①将烟梗经粉碎机粉碎成烟梗末后，过20目筛，按过筛烟梗末∶水＝

  1∶0.4-0.5的比例加入水，混匀，作为基料装入棉布袋中；

②将装好基料的布袋放入蒸饭车内，0.4磅压力下灭菌，待蒸汽从蒸

  饭车密封门的底部冒出时开始计时，5-6小时后，关闭蒸汽阀门，

  打开蒸饭车密封门，待蒸汽散尽后，将已灭菌的烟梗末倒入消毒好的

  塑料桶内盖严备用；

2)菌浆的制备：

①菌种培养：一级斜面菌种培养，采用固体PDA马铃薯培养基，将木

  霉菌种接种在试管培养基上，26-29℃下培养46-50小时，

  得一级斜面菌种；二级摇瓶菌种培养，采用液体PDA马铃薯培养液，

  将一级斜面菌种接入上述灭菌摇瓶培养液中，26-28℃下振荡光

  照培养72-76小时作为种子液；

②液体发酵培养：采用理查氏酵母膏高温灭菌培养液，待培养液冷却至

  27.5℃时，将锥形瓶中的种子液按5‰的比例接种入500升发

  酵罐，保持27±1℃，通气量每小时8立方米，保压0.05Mpa，

  培养48-72小时得到相应拮抗菌的菌浆；

3)菌浆的处理：

  制备好的菌浆经过板框过滤机过滤后，得到滤渣，将制备好的基料与滤

  渣以重量比1∶0.8-1的比例混合均匀后，再以体积比3％加入抗

  菌素利福平母液，加入体积比2％的链霉素母液搅匀，备用；

4)窗纱培养片、用具和培养室的消毒灭菌处理；

5)培养：

  将搅匀处理过的菌浆用刷均匀地刷在培养片上，刷时厚度为1-2mm，

  将刷好的培养片放在下铺灭菌蒸馏水浸润的脱脂纱布培养盘上，保持相

  对湿度在90％以上，26±1℃光照培养2天后，室温控制在27-

  28℃，待表面产生孢子较多时，室温保持30±1℃，通气、换气、

  晾干培养片；

6)菌剂的制备：

  将培养片上样品晾干至含水量2-3％后，取下粉碎，过100目筛后，

  进行孢子含量测定，达到109个/克，即为合格成品。

图1为本发明的生产工艺流程图。

本发明与现有技术相比具有以下积极效果：在植物侵染性病害中，80％以上是真菌引起的。采用本发明的微生物杀菌剂进行植物病害的生物防治，其效果持久，病害难以产生抗药性，对人体和作物无危害，对病害的选择性大，具有广谱杀菌剂效果，不污染环境，不会对植物产生药害，安全、无毒、无残留。对土壤及叶部真菌，特别是疫霉菌、腐霉菌、镰刀菌及丝核菌、链格孢菌、毛盘孢菌等有显著防治效果，同时对烟草有一定的促生作用。此外本发明的杀菌剂还有投入低，充分利用废弃烟梗、麦杆、木屑、麦麸等作为原料，变废为宝，减少烟梗积压，以及烟梗、麦杆焚烧带来的环境污染，烟梗燃烧后焦油阻塞管道等问题，具有易于工业化和商品化开发的优势。

以下结合实施例对本发明作进一步的详述。

实施例：

本杀菌剂的制备方法按下列步骤制取：

1)基料的制备：

①将烟梗经粉碎机粉碎成烟梗末后，过20目筛，按过筛烟梗末∶水＝

  1∶0.5的比例加入水，混匀，作为基料装入棉布袋中；

②将装好基料的布袋放入蒸饭车内，0.4磅压力下灭菌，待蒸汽从蒸

  饭车密封门的底部冒出时开始计时，5-6小时后，关闭蒸汽阀门，

  打开蒸饭车密封门，待蒸汽散尽后，将已灭菌的烟梗末倒入消毒好的

  塑料桶内盖严备用；

2)菌浆的制备：

①菌种培养：一级斜面菌种培养，采用固体PDA马铃薯培养基，将木

  霉菌种(TV-1，或T918、Tr13、A405)接种在试管培养基上，26-

  29℃下培养46-50小时，得一级斜面菌种；二级摇瓶菌种培养，

  采用液体PDA马铃薯培养液(121℃灭菌30-45分钟)，将

  一级斜面菌种接入上述灭菌摇瓶培养液中，26-28℃下振荡光照

  培养72-76小时作为种子液；

②液体发酵培养：采用理查氏酵母膏高温灭菌培养液(121℃灭菌30

  -45分钟)，待培养液冷却至27.5℃时，将锥形瓶中的种子液按5‰

  的比例接种入500升发酵罐，保持27±1℃，通气量每小时8立

  方米，保压0.05Mpa，培养48小时得到相应拮抗菌的菌浆；

3)菌浆的处理：

制备好的菌浆经过板框过滤机过滤后，得到滤渣，将制备好的基料与滤

  渣以重量比1∶0.8的比例混合均匀后，再以体积比3％加入抗菌素

  利福平母液(浓度为10mg/l)，加入体积比2％的链霉素母液(浓度为

  10mg/l)搅匀，备用；

4)窗纱培养片、用具和培养室的消毒灭菌处理：

①窗纱培养片、用具的消毒：窗纱培养片采用烤种用的不锈钢纱网，用

  75％酒精喷雾进行表面消毒，刷子，勺子用75％酒精泡5-10分

  钟；

②培养室的消毒采用熏蒸消毒，用甲醛∶高锰酸钾＝2∶1进行熏蒸5

  -7小时，然后通风10小时左右后备用；

5)培养：

  将搅匀处理过的菌浆用刷子均匀地刷在培养片上，刷时厚度在1-2mm

  将刷好的培养片放在下铺灭菌蒸馏水浸润的脱脂纱布培养盘上，保持相

  对湿度在90％以上，26±1℃光照培养2夭后，室温控制在27-

  28℃，待表面产生孢子较多时，室温保持30±1℃，通气、换气、

  晾干培养片；

6)菌剂的制备：

  将培养片上样品晾干至含水量2-3％后，取下用粉碎机粉碎，过100

  目筛后，采用血球计数器进行孢子含量测定，达到10⁹个/克(样品)，

  即为合格成品，用分装机分装入袋中。

本发明的杀菌剂防治对象是：烟草立枯病、猝倒病、黑胫病、赤星病等真菌病害。

Claims (3)

1、一种微生物杀菌剂，其特征在于含重量百分比烟梗末或木屑、麦麸等植物粉碎材料85-90％，木霉菌孢子粉8-12％。

2、根据权利要求1所述的微生物杀菌剂，其特征在于所述的木霉菌为TV-1，或T918、Tr13、A405。

3、根据权利要求1所述的微生物杀菌剂的制备方法，其特征在于按下列步骤制取：

1)基料的制备：

①将烟梗经粉碎机粉碎成烟梗末后，过20目筛，按过筛烟梗末∶水＝

  1∶0.4-0.5的比例加入水，混匀，作为基料装入棉布袋中；

②将装好基料的布袋放入蒸饭车内，0.4磅压力下灭菌，待蒸汽从蒸

  饭车密封门的底部冒出时开始计时，5-6小时后，关闭蒸汽阀门，

  打开蒸饭车密封门，待蒸汽散尽后，将已灭菌的烟梗末倒入消毒好的

  塑料桶内盖严备用；

2)菌浆的制备：

①菌种培养：一级斜面菌种培养，采用固体PDA马铃薯培养基，将木

  霉菌种接种在试管培养基上，26-29℃下培养46-50小时，

  得一级斜面菌种；二级摇瓶菌种培养，采用液体PDA马铃薯培养液，

  将一级斜面菌种接入上述灭菌摇瓶培养液中，26-28℃下振荡光

  照培养72-76小时作为种子液；

②液体发酵培养：采用理查氏酵母膏高温灭菌培养液，待培养液冷却至

  27.5℃时，将锥形瓶中的种子液按5‰的比例接种入500升发

  酵罐，保持27±1℃，通气量每小时8立方米，保压0.05Mpa，

  培养48-72小时得到相应拮抗菌的菌浆；

3)菌浆的处理：

  制备好的菌浆经过板框过滤机过滤后，得到滤渣，将制备好的基料与滤

  渣以重量比1∶0.8-1的比例混合均匀后，再以体积比3％加入抗

  菌素利福平母液，加入体积比2％的链霉素母液搅匀，备用；

4)窗纱培养片、用具和培养室的消毒灭菌处理；

5)培养：

  将搅匀处理过的菌浆用刷均匀地刷在培养片上，刷时厚度在1-2mm，

  将刷好的培养片放在下铺灭菌蒸馏水浸润的脱脂纱布培养盘上，保持相

  对湿度在90％以上，26±1℃光照培养2夭后，室温控制在27-

  28℃，待表面产生孢子较多时，室温保持30±1℃，通气、换气、

  晾干培养片；

6)菌剂的制备：

  将培养片上样品晾干至含水量2-3％后，取下粉碎，过100目筛后，

  进行孢子含量测定，达到10⁹个/克，即为合格成品。

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