CN1781545B - 提取草药的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种获得草药提取物的方法，包括：超临界提取所述草药以得到油提取物和残余物；和在水/醇液体混合物中提取所述残余物以得到超临界提取后的水醇提取物。

Description

提取草药的方法
本申请为专利申请号为02804729X的发明专利申请的分案申请。
本申请要求2001年2月9日提交的美国临时申请60/267,428的利益。
发明领域
本发明一般涉及实现解烟毒的方法。本发明特别涉及用于实现解烟毒的含姜黄的组合物。
发明背景
来源于烟草发烟燃烧或主动吸烟者呼出的烟草烟是人接触诱变剂和致癌物的来源。研究表明在吸烟者与非吸烟者中接触烟草烟与诸如呼吸疾病和肺心病以及肺癌这样的健康危害之间存在紧密的相关性。已知主动吸烟和被动吸烟者在其尿中排泄出大量烟草衍生的诱变剂。此外，研究已经确定了人癌症与烹熟过度的肉(诸如：例如在在烤架上烤熟的肉)之间的相关性。(参见Burros，M.，“茶？姜黄？寻找较安全的烤肉”(Tea？Turmeric？The Quest for SaferBarbecue)-《纽约时代周刊》(The New York Times)2000年7月5日在Web上(下文的″Burro的文章″))。在高温下肌肉中的肌酸与氨基酸反应而形成称作杂环胺类的导致癌症的化合物。然而，已经将盐水腌制用于减少这些杂环胺类。科学家推测诸如大蒜、洋葱、细香葱、姜黄、百里香、迷迭香和薄荷科芬芳植物以及维生素C和E这样的抗氧化剂有助于减少这类胺。然而，当将脂肪置于火上并产生烟时，盐水腌制不会减少其它致癌物上升的水平。(参见Burros的文章)。
已经发现姜黄可有效抑制吸烟者中尿诱变剂的形成和排泄。(参见P.Kalpagam，T.C.Raghuram，T.P.Krishna和K.Krishnaswamy，“姜黄对吸烟者中尿诱变剂的作用”(″Effect ofTurmeric on Urinary Mutagens in Smokers″)，《诱变》(Mutagenesis)，第7卷，第2期，第107-109页(1992)(认为可用活性成分姜黄素对烟草诱变剂解毒))。还发现姜黄是有效的抗诱变剂且可以用于化学预防。探讨姜黄和/或姜黄素的文章包括：Krishnaswamy，K.，和Raghuramulu，N.，“对膳食实践具有突出影响的生物活性植化物质”(Bioactive Phytochemicals withEmphasis on Dietary Practices)，《印度药物研究杂志》(Indian J Med Res)108，1998年11月，pp.167-181；Deshpande，S.S.，Ingle，A.D.，和Maru，G.B.，“不含姜黄素的姜黄水提取物对苯并[α]芘诱导的小鼠体内前胃乳头状瘤的抑制作用”(Inhibitory Effects of Curcumin-Free Aqueous TurmericExtract on Benzo[alpha]pyrene-Induced ForestomachPapillomas in Mice)，《癌症通讯》(Cancer Letters)，118(1997)79-85；Srimal R.C.，“姜黄：药物特性综述”(Turmeric：A Brief Review of Medicinal Properties)，Fitoterapia，第LXVIII卷，第6期，1997，pp.483-493；Arbiser，J.L.，Klauber，N.，Rohan，R.，van Leeuwen，R.，Huang，M.T.，Fisher，C.，Flynn，E.，Byers，H.R.，“姜黄素是血管发生的体内抑制剂”(Curcumin is an In Vivo Inhibitor ofAngiogenesis)，《分子学药物》(Mol Med)(1998年6月)，4(6)：376-83；Plummer，S.M.，Holloway，K.A.，Manson，M.M.，Munks，R.J.，Kaptein，A.，Farrow，S.，和Howells，L.，“化学预防剂姜黄素抑制结肠细胞中环加氧酶2的表达包括通过NIK/IKK信号传导复合物抑制NF-κB活化”(Inhibition of Cyclo-Oxygenase 2 Expression in Colon Cells by theChemopreventive Agent Curcumin Involves Inhibition of NF-kappaB activation Via the NIK/IKK Signaling Complex)，《癌基因》(Oncogene)(1999年10月28日)，18(44)：6013-20；Singhal，S.S.，Awasthi，S.，Pandya，U.，Piper，J.T.，Saini，M.K.，Cheng，J.Z.，和Awasthi，Y.C.，“姜黄素对谷胱甘肽连接的酶在K562人白血病细胞中的作用”(The Effect of Curcuminon Glutathione-Linked Enzymes in K562 Human LeukemiaCells)，《毒理学通讯》(Toxicol Lett)1999年9月20日，109(1-2)：87-95；Kang，B.Y.，Song，Y.J.，Kim，K.M.，Choe，Y.K.，Hwang，S.Y.，Kim，T.S.，“姜黄素通过抑制白细胞介素-12在巨噬细胞中产生抑制Th1细胞因子在CD4+T细胞中的分布”(Curcumin Inhibits Th1 Cytokine Profile in CD4+T Cells BySuppressing  Interleukin-12 Production in Macrophages)，《英国药理学杂志》(Br J Pharmacol)，1999年9月，128(2)：380-4。
此外，可以将姜黄用于降低急剧升高的血纤蛋白原的水平。(参见Ramirez-Bosca A.，Soler A.，Carrion-Gutierrez，M.A.，MiraD.P.，Zapata J.P.，Diaz-Alperi J.，Bernd A.，Almagro E.Q.和Miquel，J.，“姜黄的水醇提取物降低用于动脉粥样化预防形成的Apo B/Apo A之比的相关性”(A Hydroalcoholic extract ofCurcuma Longa Lowers the Apo B/Apo A Ratio Implications forAtherogenesis Prevention)，《老化与发育机制》(Mechanismsof Ageing and Development)114(2000)207-210。照此看起来姜黄有益于接触烟的人的心血管系统。
已经报导了存在于诸如丁子香、小豆蔻等这样许多香料中的化合物丁子香酚表现出对烟草烟的抗诱变性。(参见Sukumaran K.和Ramadasan K.，“用丁子香酚和植物提取物抑制烟草诱导的诱变”(Inhibition of Tobacco-Induced Mutagenesis by Eugenol andPlant Extracts)，《突变研究》(Mutation Research)343(1995)25-30)。此外，认为丁子香酚表现出抗过氧化活性。(参见Krishnaswamy，K.和Raghuramulu，N.，“对膳食实践具有突出影响的生物活性植化物质”(Bioactive Phytochemicals withEmphasis on Dietary Practices)，《印度药物研究杂志》(Indian J Med Res)108，1998年11月，pp.167-181)。
据报导绿茶对香烟烟诱发的人体内突变具有化学预防作用。(参见Lee I.P.，Kim Y.H.，Kang M.H.，Roberts C.，Shim J.S.，和Roh J.K.，“绿茶(普洱茶)对香烟的烟诱导的人体内突变(SCE)的化学预防作用”(Chemopreventive Effect of Green Tea(Camellia sinensis)Against Cigarette Patton Ref.：9510.101Smoke-Induced Mutations(SCE)in Humans)，《细胞生化杂志增刊》(Journal of Cellular Biochemistry Supplement)27：68-75(1997))。例如，参见Klaunig J.E.，Xu Y.，Han C.，Kamendulis L.M.，Chen J.，Heiser C.，Gordon M.S.，和MohlerIII E.R.，“饮茶对吸烟者和非吸烟者体内的氧化性应激反应的作用”(The Effect of Tea Consumption on Oxidative Stressin Smokers and Nonsmokers)，《茶的抗氧化剂作用》(Antioxidant Effects of Tea)，pp.249-254中有关饮绿茶对吸烟诱发的氧化性损害的作用的讨论。例如，参见Renqing Z.，ZhouY.，Chen D.，Shenben L.，和Haug A.，“茶的水提取物的制备过程中浸泡温度和浸泡时间对姐妹染色体交换试验中环境烟草烟抗诱裂性的作用”(Effects of Soaking Temperature and Soaking TimeDuring Preparation of Water Extract of Tea onAnticlastogenicity Against Environmental Tobacco Smoke inthe Sister-Chromatid Exchange Assay)，《毒理学通讯》(Toxicology Letters)115(2000)23-32中有关对绿茶水提取物对环境烟草烟的抗诱裂性活性的讨论。此外，已经报导了绿茶表现出癌症化学预防作用。(参见Katiyar K.S.，Agarwal R.，Zaim M.T.，和Mukhtar H.，“绿茶对N-亚硝基二乙胺和苯并[α]芘诱导的A/J小鼠体内前胃和肺致癌的预防作用”(Protection Against N-nitrosodiethylamine and Benzo[alpha]pyrene-inducedForestomach and Lung Tumorigenesis in A/J Mice by GreenTea)，《致癌作用》(Carcinogenesis)，第14卷，第5期，pp.849-855(1993)；Suganuma M.，Okabe S.，Kai Y.，Sueoka N.，Sueoka E.，和Fujiki，H.，“表儿茶素 酸酯与(-)-表儿茶素、舒林酸或他莫昔芬在人肺癌细胞系PC-9中对癌症预防活性的协同作用”(Synergistic Effects of(-)-Epigallocatechin Gallate with(-)-Epicatechin，Sulindac，or Tamoxifen on Cancer-Preventive Activity in the Human Lung Cancer Cell Line PC-9)，《癌症研究》(Cancer Research)59，44-47，1999年1月1日)。
据报导含有迷迭香提取物的特定盖仑制剂的香烟过滤嘴可有效减少烟中发现的游离基。(参见I.Emani，C.Rolando，M.Rojas，K.Alexandrov，H.Scherf，和H.Bartsch：“迷迭香香烟过滤嘴可以减少与烟草相关的癌症”(A Rosemary Cigarette Filter MayReduce Tobacco-Linked Cancer)，《生物合成与化学预防过滤》(Biosyntech Chemopreventive Filter-Coresta，pp.3-10，2000年10月)。
将欧芹叶油中的挥发性芳香成分肉豆蔻醚报导为可能的癌症化学预防剂。(参见Zheng G.，Kenney P.M.，Zhang J.，和Lam L.K.T.，“欧芹叶油中的挥发性芳香成分肉豆蔻醚对苯并[α]芘诱发的致癌的抑制作用”(Inhibition of Benzo[alpha]pyrene-induced Tumorigenesis by Myristicin，a Volatile AromaConstituent of Parsley Leaf Oil)，《致癌作用》(Carcinogenesis)，第13卷，第10期，pp.1921-1923(1992))。
因此，已知使用天然组分使人解烟毒。然而，存在对使用天然组分组合物改善解烟毒活性的需求。
概述
本发明的一种实施方案提供了通过使用由有效量的姜黄的超临界提取物和水醇提取物组成的组合物实现解人烟毒的方法。
详细描述
本发明的一种实施方案提供了用于实现解人烟毒的组合物。该组合物可以含有有效量的姜黄超临界提取物和水醇提取物。该组合物还可以含有有效量的下列组分：(A)姜的超临界和水醇提取物；(B)迷迭香、欧芹子、薄荷和丁子香的超临界提取物；(C)迷迭香、欧芹叶、薄荷和丁子香的水醇提取物；和(D)绿茶的水提取物。例如，该组合物可以提供比已知组合物改善的解烟毒特性，这是因为它含有用超临界/水醇双提取法制备的姜黄提取物。另一方面，已知的组合物仅含有仅使用超临界提取法或水醇提取法之一制备的姜黄提取物。
本发明的另一个实施方案提供了实现解人烟毒的方法，该方法包括对接触(直接或间接)与烟形式相关的毒素、例如来自烟草或其它部分可燃烃类来源的毒素的人(经口服)给予有效量的所述组合物治疗有效时间期限的步骤。照此可以将该组合物给予足以实现解人烟毒的时间期限。
可以按照至少约350mg或约375-2000mg的每日剂量经口服给予所述的(草药)组合物(不包括非活性组分)。如果该组合物包括非活性组分，那么该组合物的活性组分(例如草药提取物)可以包括口服给药组合物中的常用量。例如，可以以每日为基础将该组合物给予至少4周的期限。例如，可以通过用水吞咽该组合物来进行口服给药。口服给药的组合物可以是任意常规剂型，例如包括胶囊(硬胶囊和/或软胶囊)、片剂、酏剂、粉剂、颗粒剂、水或非水介质的混悬液、小药囊等。口服给药的组合物还可以是一个或多个软胶囊的形式。
术语″解烟毒″的含义包括降低人体内诱变剂和血纤蛋白原的升高水平。这类物质的升高水平可能是因人直接或间接接触例如来自烟草、烃燃烧、烤肉等的烟所导致的。
所述的姜黄提取物可以是该草药的″全系列″提取物，使得该提取物可以含有姜黄素以及提供改善的解烟毒活性的油和其它成分。照此该姜黄提取物不仅可以含有姜黄素类级分、而且可以含有天然存在的蛋白抗氧化剂因子和诸如姜黄酮这样有价值的精油成分。然而，常规的姜黄提取物仅通过经溶剂提取(例如使用丙酮或二氯甲烷)分离一种成分、特别是一种或多种姜黄素类来制备。
因此，所述的姜黄提取物可以含有该植物亲脂性级分的超临界提取物和该植物亲水性级分的水醇提取物。超临界提取的应用使得亲脂性成分不会因在作为常规提取中发生时的溶剂、氧和/或热的压力而在提取过程中被降解。由此可以以最纯和最浓的形式使用亲脂性成分。照此，该姜黄提取物可以使消费者具有以最完整的形式体验姜黄的复原和解毒特性的机会。
姜黄提取物包括独特的清除和调节能力，尤其是它可以与绿茶水提取物具有协同作用。绿茶水提取物本身并非表现出对已知诱变剂的不显著预防活性。薄荷和丁子香提取物也是香烟和其它烟诱变性的抑制剂。迷迭香和欧芹叶提取物提高了(使两者一致)解毒活性并提高了所述组合物的功效。姜提取物对苯并芘和色氨酸热解物具有活性并提高了该组合物的生物利用度。
可以如下制备姜黄的超临界提取物和超临界提取后的水醇提取物。可以对可在低温下磨碎以保护热敏性成分的姜黄根进行超临界提取而得到(i)含有准确亲脂性(例如油溶性/非极性)成分的油提取物(下文的″超临界姜黄提取物″)和(ii)不含油的残余物。可以用于获得超临界姜黄提取物的合适的超临界提取工艺例如公开在E.Stahl，K.W.Quirin，D.Gerard的《用于提取与精制的高密度气相》(DenseGases for Extraction and Refining)，Springer Verlag 1988中，将该文献引入本文作为参考。
已经发现约25-33千克的姜黄粗粉可以产生1千克的油提取物。然后可以用由60-80份醇和40-20份水组成的水/醇(例如水/乙醇)混合物提取不含油的残余物。用该水/醇混合物提取所述的不含油的残余物得到一系列广泛的极性成分，包括水溶性成分和姜黄素类(例如全部范围的姜黄素类)。然后可以蒸发掉水/醇液体，从而得到粉状提取物残余物、下文称作″(超临界提取后)的姜黄水醇提取物″。已经发现约6千克的不含油的姜黄残余物可以产生约1千克的超临界提取后的姜黄水醇提取物。可以按约3.0-6.0份超临界提取后的水醇提取物与1份的超临界姜黄提取物的重量比将超临界提取后的水醇提取物与超临界姜黄提取物合并或与之掺合。还可以按每1份超临界姜黄提取物约5.3份超临界提取后的水醇提取物的重量比合并超临界提取后的水醇提取物与超临界提取物。可以分别加入超临界姜黄提取物和超临界提取物的姜黄水醇提取物并与其它提取物掺合，条件是所得的组合物含有适宜重量比的超临界姜黄提取物和超临界提取后的姜黄水醇提取物。
可以使用用于制备姜黄的超临界提取物和超临界提取后的水醇提取物的步骤来制备姜的超临界提取物和超临界提取后的水醇提取物。可以将姜的超临界提取物和超临界提取后的水醇提取物彼此掺合且然后加入到其它草药提取物中。所得的组合物可以含有超临界提取后的姜的水醇提取物和超临界姜提取物，可以按照约4.4份超临界提取后的提取物与1份的超临界提取物的重量比合并它们两者。
此外，可以使用用于制备姜黄和姜的超临界提取物的步骤来制备丁子香、薄荷、欧芹子和迷迭香的超临界提取物。可以通过用由60-80份醇和40-20份水组成的水/醇(例如水/乙醇)混合物提取所述植物部位来制备丁子香、薄荷、欧芹叶和迷迭香各自的水醇提取物。然后可以蒸发掉水/醇液体，从而得到粉状提取物残余物。就丁子香、薄荷、欧芹和迷迭香中的每一种而言，可以将超临界提取物和水醇提取物彼此掺合且然后加入到其它草药提取物中或可以将所述的超临界提取物和水醇提取物分别加入到用于本组合物的其它草药提取物中并与之掺合。
该组合物可以含有一定范围重量比的下列组分：(i)约1.75∶1-2.25∶1或约2∶1的迷迭香的水醇提取物与迷迭香的超临界提取物；(ii)约1.75∶1-2.25∶1或约2∶1的欧芹叶的水醇提取物与欧芹子的超临界提取物；(iii)约4∶1-6∶1或约4.4∶1的姜的超临界提取后的水醇提取物与姜的超临界提取物；(iv)约1.75∶1-2.25∶1或约2∶1的薄荷的水醇提取物与薄荷的超临界提取物；和/或(v)约1.75∶1-2.25∶1或约2∶1的丁子香的水醇提取物与丁子香的超临界提取物。如上所述，可以按约3-6份超临界提取后的水醇提取物与1份的超临界提取物的重量比或可以按约5.3份超临界提取后的水醇提取物与1份的超临界姜黄提取物的重量比合并姜黄超临界提取后的水醇提取物与姜黄超临界提取物。
可以通过下列步骤制备绿茶水提取物：(i)例如在80℃或80℃以下的温度下将干燥的绿茶叶浸入水约10-60分钟的期限；(ii)过滤所浸入的茶叶而得到水提取物；和(iii)干燥该提取物而得到(干燥的)固体物质。这类提取工艺例如描述在R.Zhou等的《毒理学通讯》(Toxicology Letters)115(2000)23-32中，将该文献引入本文作为参考。另一种用于获得绿茶水提取物的合适的提取工艺例如描述在S.K Katiyar等的《致癌作用》(Carcinogenesis)，第14卷，第5期，pp.849-855(1993)中，将该文献引入本文作为参考。
该组合物可以含有下列重量比的组分：(i)约1∶1-2∶1或约1.5∶1的姜黄、迷迭香、欧芹、姜、薄荷和丁子香的提取物与(ii)绿茶提取物。
该组合物还可以含有有效量(例如使组合物表现出解烟毒特性的一定用量)的上述各提取物。例如，该组合物可以含有下列重量的组分：(i)约45％-55％或约50％的超临界提取后的姜黄水醇提取物和姜黄超临界提取物，其中所述的超临界提取后的姜黄水醇提取物与姜黄超临界提取物可以以彼此适宜的重量比存在(参见上文)；(ii)约1.5％-2.5％的迷迭香的超临界和水醇提取物；(iii)约1.5％-2.5％或约2.0％的欧芹子超临界提取物和欧芹叶的水醇提取物；(iv)约1.5％-2.5％或约2.0％的姜的超临界提取后的水醇提取物和超临界姜提取物，其中所述的超临界提取后的姜水醇提取物与超临界姜提取物可以以彼此适宜的重量比存在(参见上文)；(v)约1.5％-2.5％或约2.0％的薄荷的超临界提取物和薄荷的水醇提取物；(vi)约1.5％-2.5％或约2.0％的丁子香超临界提取物和水醇提取物；和(vii)约35％-45％或约40％的绿茶水提取物。
此外，所述的姜黄超临界提取物可以含有约43％-47％或约45％的姜黄酮类。姜黄的超临界提取后的水醇提取物可以含有最低约11％或约11％-15％的姜黄素类。姜的超临界提取物可以含有约28％-32％的有刺激性气味的化合物和约6％-10％的姜烯或约30％的有刺激性气味的化合物和约8％的姜烯。姜的超临界提取后的水醇提取物含有约1％-5％或约3％的有刺激性气味的化合物。绿茶水提取物可以含有约43％-47％或约45％的多酚类。丁子香的超临界提取物可以含有约63％-67％或约65％的丁子香酚。欧芹子的超临界提取物可以含有约23％-27％或约25％的肉豆蔻醚。薄荷的超临界提取物可以含有约33％-37％或约35％的薄荷醇。迷迭香的超临界提取物可以含有约21％-25％或约23％的酚类抗氧化剂。迷迭香的水醇提取物可以含有约21％-25％或约23％的酚类抗氧化剂。
所述的组合物还可以含有药物上可接受的载体，诸如、例如一种或多种药物上合适的：非活性赋形剂、载体、稀释剂、佐剂和润滑剂。例如，非活性赋形剂、载体、稀释剂、润滑剂和佐剂可以包括：纤维素、取代的纤维素、碳酸钙、磷酸二钙、淀粉、乳糖、改性的食物淀粉、葡萄糖、硫酸钙、碳酸镁、硬脂酸镁、硬脂酸、甘油、植物油、聚山梨醇酯类、卵磷脂、二氧化硅、食品糖皮、滑石、交联羧甲基纤维素钠、聚维酮、水和明胶。该(活性组分)组合物可以含有其它非活性赋形剂、载体、稀释剂、润滑剂和佐剂，诸如、例如公开在《食品添加剂手册》(Handbook of Food Additives)(CRC Press)中的那些非活性赋形剂、载体、稀释剂、润滑剂和佐剂，将该文献引入本文作为参考(仅涉及其相关部分)。可以含有例如用于口服给药组合物中的任意常用量的药物上可接受的载体。
下表是典型组合物(不包括非活性组分)，其中例如由人经口服使用所述的组合物。表中列举的用量代表所列组分的每日剂量。
表
上表中所列的组合物还可以含有非活性组分，诸如、例如橄榄油(超纯)、麦芽糖糊精和黄蜂蜡。该组合物的胶囊形式可以进一步含有明胶、植物甘油、纯水和角豆。表中所列的组合物可以是一种软胶囊形式，其中所列的用量可以构成该组合物的单一一次服用量或单位剂量。可以使用8盎司水或另一种液体来服用胶囊。此外，例如如果接触高(较高)浓度的烟，那么可以每天服用两粒或多粒该组合物的胶囊。
提供了上述描述的实施方案以便使本领域技术人员能够实施或应用本发明。能够对这些实施方案进行各种修改且本文提供的一般原理也可以应用于其它实施方案。因此，本发明并非限于上述实施方案和/或而是应与本文以任意方式公开的原理和新特征以最宽范围相一致。

Claims (5)

1.一种获得草药提取物的方法，包括：
超临界提取所述草药以得到油提取物和残余物；和
在水/醇液体混合物中提取所述残余物以得到超临界提取后的水醇提取物，
其中所述草药选自下列成分组成的组：姜黄、姜、丁子香、薄荷、欧芹子和迷迭香，
其中所述水/醇液体混合物包括60∶40至80∶20重量比的醇/水。
2.权利要求1的方法，其中所述草药为姜黄。
3.权利要求1的方法，其还包括将所述粉末提取物与所述油提取物混合。
4.权利要求1的方法，其还包括在超临界提取所述草药之前，低温研磨所述草药。
5.权利要求1的方法，其中所述水/醇液体混合物中的所述醇包括乙醇。
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