CN1742845A - 一种治疗呼吸系统疾患的中药组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种治疗呼吸系统疾患的中药组合物，其原料药组成为麻黄(蜜炙)、石膏、苦杏仁(炒)、桑白皮(蜜炙)、葶苈子(炒)、当归、丹参、地龙、僵蚕(炒)、甘草。还公开了该中药制剂的抗病毒、抗菌、解热、镇咳、祛痰、平喘及抗炎应用及其制备方法和活性成分的检测方法。该组合物是以清肺化痰、止咳平喘，佐以活血化瘀为主要功效的中药，主治急性支气管炎或肺炎恢复期的痰热咳嗽证，并且特别适用于小儿。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药组合物，更具体地说，涉及一种治疗呼吸系统疾患的中药组合物，以及其制备方法。
背景技术
急性支气管炎是呼吸系统疾病中最为常见的多发病之一，特别是小儿属易感人群。据统计，该病约占小儿疾病中的9～11％，由于治疗不当，病情久延，反复发作，可严重的影响小儿身体的健康和发育。目前该病的治疗方法较多，无论是西药或中药都有一定的疗效，但都存在不足之处，诸如抗生素的使用时间过长，可以产生耐药菌株，尤其是可导致菌群紊乱，消化不良。而且，当今呼吸道疾病90％以上是以病毒感染为主，当前已有滥用抗菌素之势，造成治疗费用的过大负担，而中医中药治疗病毒感染有一定的优势。
目前，中国药典(2005年版)中所收载的和市场上有售的、功能主治类似品种有“小儿肺热咳喘口服液”、“小儿咳喘颗粒”及急支糖浆(颗粒)等，因各方组成、针对性及侧重面等不同，故所产生的疗效也有所不同。目前市场上有售的治疗该类疾病的(特别是适用于小儿的)中成药有小儿肺热咳喘口服液和小儿咳喘颗粒等都是古方麻杏石甘汤的加减方，但在思路上都没有突破性进展；急支糖浆(颗粒)(也可用于小儿)是在现代药理学基础上组成的处方，却缺少中医药学的整体观念。
发明内容
本发明克服了上述现有技术的不足，是一种在中医药学的理论基础上大胆创新，特别是把活血化瘀和疏通气道的观念引入本病的治疗方案中的中药方剂。
本发明的目的是提供一种新的治疗呼吸系统疾患的中药组合物。
本发明的另一个目的是提供制备上述中药组合物的制备方法。
本发明的另一个目的是提供上述中药组合物的用途。
本发明的另一个目的是提供一种检验上述中药组合物活性成份的方法。
本发明人经过多年研究，反复的推敲和长期临床实践，设计出一种治疗呼吸系统疾病的中药组合物，该种组合既继承了古方的精华(麻杏石甘汤)，又结合现代急性支气管炎属痰热咳嗽证的发病特点而临证化载进行了发展，故本方具有古方和实践经验的双重依据。该组合物用于治疗急性支气管炎痰热咳嗽证(特别是小儿)，具有见效快、疗程短、不良反应少等特点，对肺炎恢复期的痰热咳嗽证也有着较好的疗效。其原料药组成为(以制成1000g成品计)：
麻黄(蜜炙) 75-175g
石膏 750-1750g
苦杏仁(炒) 75-175g
桑白皮(蜜炙) 75-175g
葶苈子(炒) 30-120g
当归 125-250g
丹参 125-250g
地龙 75-175g
僵蚕(炒) 75-175g
甘草 75-175g
优选的原料组成为：
麻黄(蜜炙) 100-150g
石膏 1000-1500g
苦杏仁(炒) 100-150g
桑白皮(蜜炙) 100-150g
葶苈子(炒) 50-100g
当归 150-226g
丹参 150-226g
地龙 100-150g
僵蚕(炒) 100-150g
甘草 100-150g
特别优选的原料药组成为：
麻黄(蜜炙) 112-137g
石膏 112-1370g
苦杏仁(炒) 112-137g
桑白皮(蜜炙) 112-137g
葶苈子(炒) 68-82g
当归 170-206g
丹参 170-26g
地龙 112-137g
僵蚕(炒) 112-137g
甘草 112-137g
最优选的原料药组成为：
麻黄(蜜炙) 125g
石膏 1250g
苦杏仁(炒) 125g
桑白皮(蜜炙) 125g
葶苈子(炒) 75g
当归 188g
丹参 188g
地龙 125g
僵蚕(炒) 125g
甘草 125g
急性支气管炎属于中医“咳嗽”范畴，其病理病机与痰有关，病理部位在肺。祖国医学认为：“肺主气，外合皮毛、开窍于鼻，职司呼吸和通调水道，肺气易开易肃降，特别是小儿脏腑娇嫩，形气未充，肌肤疏落，藩篱不固，加之寒暖不能自调，故六淫之邪可从口鼻或皮毛而人，致毛窍闭塞，肺失宣降而出现感冒，咳嗽痰鸣，喘息等症。又由于小儿乃“稚阴稚阳之体”，阳常有余，阴常不足“，感受外邪易于化热伤肺，肺之津液被灼为痰，痰热壅肺，气道不利，失于宣降则咳嗽，痰稠；肺气上逆则热痰阻于气道，则喉中痰鸣；又因气为血帅，气行血行，气滞则血瘀。痰热凝聚不消，当可导致瘀血内生的病机。本方特色是在清化痰热中稍加疏通气道，活血化瘀之品，而屡获良效。临床证实其疗效显著，因热清痰化，肺气顺畅则咳喘诸证可速愈矣。
本方以麻黄、生石膏为君药。麻黄，性味辛、苦、温。辛而能散，苦而能降，温而能通，故能发汗、平喘利水。蜜炙后减弱发汗作用，取其平喘止咳之效。生石膏，味辛、甘、大寒。清热泻火，除烦止渴。主要用于肺胃气分，实热症候，肺热咳喘。味辛、甘、大寒而质不燥，清热泻火之力甚强，并能清泄里热而透散，用于热郁与肺不得宣降所致发热、咳嗽、气喘最为相宜。二药相合，共奏清热泄肺，止咳平喘，除烦止咳之功效，而做为方中的君药。
苦杏仁、桑白皮、葶苈子共为臣药。苦杏仁，味苦微温，有小毒，止咳平喘。《伤寒论》麻黄杏仁石膏甘草汤为治肺热咳喘，肺中壅热，肺气失于宣降，而见咳喘、口渴等证的主方。本方是在上方基础上，根据痰热咳嗽证进行加味，其中桑白皮，性味甘寒，泻肺平喘，古有“泻肺之有余，非桑皮不可”之说。葶苈子，苦辛大寒。泻肺平喘，利水消肿，为肺家气分药。适用于痰涎壅盛，肃降失司，咳喘胸闷不得卧者。苦杏仁、桑白皮、葶苈子三药同伍，共为臣药，以辅君药麻黄、生石膏以清热泻肺，止咳平喘之功效。
方中，当归、丹参、地龙、僵蚕共为佐药。当归，甘辛补血调经、活血止痛，为其常规用法。而《本经》称其能“主咳逆上气”。先贤用当归于咳喘者为数不多，且多与祛痰止咳、平喘药同用，如苏子降气汤，金水六君煎。丹参，苦微寒，活血祛瘀，凉血消痈，除烦安神。二药合用，功能活血化瘀，祛痰止咳，使痰热壅滞得以活化消散。地龙，成寒，清热平喘；僵蚕，成辛平，祛风解痉，化痰散结。二药同伍，清热解痉，平喘化痰散结，使气道舒畅，，痰浊易咯，咳喘之苦顿消。僵蚕和地龙二者均有息风止痉、化痰散结，平喘泄热之功效。《本草思辨录》云；“白僵蚕，味辛气温而性燥，故治湿胜之风痰，...僵蚕劫痰湿而散肝风，故主之。”现代药理学亦已证实僵蚕有催眠与抗惊厥作用；地龙有解热、镇静及平喘的作用，现代药理学亦已表明其具有显著的舒张支气管之作用，能使支气管平滑肌扩张而达到气道舒畅及平喘的目的，对缓解与治疗急性支气管炎痰热壅肺证起到很重要的作用，增强了本方祛痰、平喘和镇静的作用。本发明组合物通过增加僵蚕和地龙两味药使本方配伍更加严谨周密，因而收到了令人满意的临床效果。在上述药味的基础上再加上以上四味药，特别是后两味药，每每奏效，同时又能起到防止或治疗其瘀血内生和小儿痰喘发痉的作用。方中甘草为使药，性味甘平。有清热解毒，祛痰止咳，平喘，佐以活血化痰之功。
本方以清热泻肺为主，又能活血化瘀，使痰瘀凝结得以化散，更能使气道舒畅，痰浊易咯，肺热得清，宣泻肃降得行，则痰热壅肺诸证皆除。本方标本兼治，以治标为主。方药以仲景麻黄杏仁石膏甘草汤为主，加清泄化瘀祛风解痉之品，实属本方特点。
本发明的中药组合物的制备方法可采用中成药制剂的常规制备方法，其中中药成分的浸出方法可参见奚念珠主编的《药剂学》(第三版)第二章(人民卫生出版社，1996年)，并采用常规制剂的制备方法将该中药组合物制备成颗粒剂、胶囊剂、片剂、口服液和膏剂等剂型。
该中药组合物的制备方法可以是：称取以上十味原料药，加水20～3倍，优选10～4倍；煎煮1～4次，优选2～3次；每次0.5～4小时，优选0.5～2小时，合并煎液，滤过，滤液静置，取上清液减压浓缩至相对密度为1.0-1.3(50～80℃)的清膏。根据制备剂型的要求加入相应的辅料，例如制备颗粒剂，将适量柠檬酸加入所得的清膏，溶解，混匀，再加入干膏量1～5倍的蔗糖粉或和其它辅料及乙醇适量，制粒，分装，即得颗粒剂；例如制备口服液，将适量蜂蜜及防腐剂苯甲酸钠加入浓缩的上清液中，煮沸使其溶解，加水适量，搅匀，冷藏24～48小时，滤过，灌封，灭菌，即得口服液；例如制备胶囊，将得到的清膏放冷，加乙醇使含醇量达65％以上，搅匀，静置24小时以上，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度为1.0以上(70℃左右)，加干膏量2.5倍的糊精，喷雾干燥得粉末后，再进行一步制粒，将制得颗粒装胶囊即得胶囊剂；例如制备片剂，将得到的清膏放冷，加乙醇使含醇量达65％以上，搅匀，静置24小时以上，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度为1.0以上(70℃左右)，加干膏2倍量的预胶化淀粉，喷雾干燥得粉末后，再进行一步制粒，整粒、压片或者包薄膜衣或糖衣即得片剂。
需要指出的是，对于本领域的技术人员而言，在制备的本发明中药组合物的各种剂型时，可以采用添加其他辅料或者减少辅料、或者改进工艺，所用的这些改变或者修饰都是药物制剂技术中常用的手段，仍然为本发明的范围。
本发明中药组合物中活性物检验方法为：
鉴别方法
(1)取本发明组合物10g，研细，加浓氨试液2ml，再加氯仿30ml，加热回流1小时，放冷，滤过、滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取盐酸麻黄碱对照品，加甲醇1ml制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各2-5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-浓氨试液(20∶5∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.2％茚三酮乙醇试液，在105℃烘约5分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的红色斑点。
(2)取本发明组合物10g，研细，加乙醇20ml，超声处理20分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草对照药材1g，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液5ul，对照药材溶液1-3ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸(10∶10∶0.5)为展开剂，展开，取出晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约5分钟，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的兰紫色荧光主斑点。
(3)取本发明组合物10g研细，加甲醇30ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣用1％氨溶液15ml分次溶解，合并，用氯仿提取2次，每次20ml，弃去氯仿液，取碱溶液加稀盐酸2ml，混匀，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取阿魏酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液510ul，对照品溶液5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-甲醇-冰醋酸(30∶3∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏数分钟至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(4)取丹参对照药材1g，加水30ml煎煮30分钟，放冷，滤过，滤液加稀盐酸2ml，用乙醚提取二次，每次20ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典1995年版一部附录VIB)试验，吸取鉴别(3)项下供试品溶液5ul，对照品溶液2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲酸(4∶1∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，应显相同颜色的荧光斑点。
含量测定(麻黄)：
测定方法1对照品溶液的制备精密称取盐酸麻黄碱对照品适量，加水制成每1ml含0.02mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本发明组合物适量，加氯化钠和40％氢氧化钠溶液后进行水蒸气蒸馏，馏出液置含稀盐酸的量瓶中，用40％氢氧化钠溶液调pH值至6.0-7.0制成供试品溶液。
测定法取上述两种溶液分别加入含溴麝香草酚蓝的枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液，再各加入氯仿进行萃取，分取氯仿层，用分光光度法在414nm波长处测定吸收度，计算即得。具体内容为：精密吸取上述两种溶液各3ml，分别置具塞三角瓶中，各精密加入含0.0125％溴麝香草酚蓝的枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液(pH7.6)10ml，摇匀后，再各精密加入氯仿10ml，充分振摇3分钟，倾入分液漏斗中，轻轻摇动，静止10分钟，分取氯仿层，静止5分钟，以相应的试剂为空白，照分光光度法(中国药典2000年版一部附录VB)试验，在414nm波长处测定吸收度，计算即得。
测定方法2对照溶液的制备将盐酸麻黄碱用水稀释后，加入高碘酸与氢氧化钠溶液适量，用盐酸调节pH至7，加甲醇适量制得对照品溶液。
供试品溶液的制备取本品适量加氢氧化钠溶液适量摇匀后再加氯化钠适量超声后进行蒸馏提取至预先盛有盐酸溶液的量瓶中，取适量稀释后再加入高碘酸与氢氧化钠溶液适量，用盐酸调节pH至7，加甲醇适量溶解过滤后取续滤液即得。
测定法取上述两种溶液分别注入以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的液相色谱仪中，以甲醇-水(1∶1)为流动相；检测波长为254nm，理论塔板数按盐酸麻黄碱计算应不低于3000。
以上述两种方法计算，本发明组合物每1g含麻黄以盐酸麻黄碱(C10H15NO·HCL)计，不得少于0.30mg。
通过动物试验证明，本发明的组合物具有抗病毒、抗菌、解热、镇咳、祛痰、平喘及抗炎作用。
通过临床试验表明：本发明的组合物对小儿急性支气管炎痰热咳嗽症，优于临床常用的“急支颗粒”，能明显改善临床症状与体征。具有疗程短，见效快，剂型稳定、无明显毒副反应的特点。因此，本发明的组合物可用于治疗急性支气管炎或肺炎恢复期的痰热咳嗽证，特别是适用于小儿。
本发明的组合物是通过口服给药的，以合剂为例，一岁至三岁一次10ml，三岁以上至七岁一次15ml，七岁以上至十二岁一次20ml，十二岁以上至十四岁一次30ml，十四岁以上一次40ml，一日三次；或遵医嘱。可参照口服液的剂量(以活性成份的含量折算)服用其他的剂型。
附图说明
图1表示正常鼠肺组织(×200)
图2表示肺泡壁内小血管轻度扩张(×100)
图3表示肺泡壁小血管明显扩张、充血(×100)
图4表示肺泡壁内小血管扩张充血，伴有灶性出血(×100)
图5表示本发明制剂的清热作用
具体实施方式
下面通过实施例来具体地说明本发明的实施方式，本领域的技术人员应当认识到，这些具体的实施例仅表明为了达到本发明的目的而选择实施的技术方案，但不是对技术方案的限制，根据现有技术对本发明技术方案的进行改进是显然的，都属于本发明保护的范围。
实施例1
原料药
麻黄(蜜炙) 125g 石膏 1250g 苦杏仁(炒) 125g
桑白皮(蜜炙) 125g 葶苈子(炒) 75g 当归 188g
丹参 188g 地龙 125g 僵蚕(炒) 125g
甘草 125g
制备方法：以上十味，加6.5倍水煎煮三次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液静置，取上清液减压浓缩至相对密度为1.2-1.25(50℃)的清膏，加入柠檬酸2.5g，溶解，混匀，再加入蔗糖粉(为干膏量的2.99倍)及乙醇适量，制粒，制成1000g本发明颗粒剂I-A，即得250袋或25瓶(每袋装4g/袋，或每瓶装40g)。
根据上述的活性成份检测方法，测得每1g含麻黄以盐酸麻黄碱(C10H15NO·HCL)计，大于0.60mg。
实施例2
参照实施例1，不同处为：加8倍水煎煮二次，每次2小时。制得本
发明颗粒剂I-B。
实施例3
麻黄(蜜炙) 175g 石膏 750g 苦杏仁(炒) 175g
桑白皮(蜜炙) 75g 葶苈子(炒) 120g 当归 125g
丹参 250g 地龙 75g 僵蚕(炒) 175g
甘草 75g
取以上十味原料药，加8倍水煎煮2～3次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液，滤液减压浓缩至相对密度为1.1-1.2(50℃)，加适量蜂蜜及0.2％的苯甲酸钠，煮沸使溶解，加水适量，搅匀，冷藏24～48小时，滤过，灌封，灭菌，即得100瓶(每瓶10ml)本发明口服液制剂II-A。
实施例4
参照实施例3，不同处为：加6倍水煎煮2～3次，每次1小时。即得本发明口服液制剂II-B。
实施实例5
麻黄(蜜炙) 150g 膏 1500g
苦杏仁(炒) 150g 桑白皮(蜜炙) 150g
葶苈子(炒) 100g 当归 226g
丹参 226g 地龙 150g
僵蚕(炒) 150g 甘草 150g
称取以上十味原料药，加12倍水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.1～1.25(80℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量达65％以上，搅匀，静置24小时以上，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度为1.0以上(70℃左右)，加干膏量2.5倍的糊精，喷雾干燥得粉末后，再进行一步制粒，将制得颗粒装胶囊即得3000粒本发明胶囊制剂III-A。
实施例6
参照实施例5，不同处为：加水10倍煎煮3次，每次2小时。即得本发明胶囊制剂III-B。
实施例7
麻黄(蜜炙) 137g 石膏 1370g
苦杏仁(炒) 137g 桑白皮(蜜炙) 137g
葶苈子(炒) 82g 当归 206g
丹参 206g 地龙 137g
僵蚕(炒) 137g 甘草 137g
称取以上十味原料药，加水10倍，煎煮2～3次，每次1～2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.1～1.25(80℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量达65％以上，搅匀，静置24小时以上，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度为1.0以上(70℃左右)，加干膏2倍量的预胶化淀粉，喷雾干燥得粉末后，再进行一步制粒，整粒、压片及包薄膜衣即得1600片本发明片剂制剂IV-A。
实施例8片剂4-2
参照实施例7，不同处为：加水8倍。即得本发明片剂制剂IV-B。以下实施例将研究本发明中药组合物的性能
试验目的：观察本发明中药组合物的抗病毒、抗菌、解热、镇咳、祛痰、平喘及抗炎作用，以实施例1的颗粒剂I-A为受试样品。
试验材料
1、药物与试剂(※为补充试验内容)
本发明制剂：实施例1的本发明颗粒剂I-A。
含量；相当生药2.45g/g颗粒。
空白对照(赋型剂)：由本发明人自制。(参照实施例1制备颗粒剂的方法，由蔗糖和柠檬酸细粉制成，两者的比例为2.99∶0.01)
细菌内毒素：国家标准品，批号：924，中国药品生物制品检定所。
肺炎链球菌：菌号：31001，批号：20，为标准菌株，由中国药品生物制品检定所。
呼吸道合胞病毒(RSV)：标准毒株Long株，Vero细胞单层培养液。
TCID50＝10-6。由中国科学院武汉病毒研究所提供。
安乃近：批号：950810，沈阳第五制药厂。
急支糖浆：批号：950121，由四川涪陵制药厂生产
※批号：980907104，由太极集团涪陵制药厂生产。
阿斯匹林：批号：950710，中国山西太原晋阳制药厂。
苯巴比妥钠：批号：951124，上海新亚药业公司。
※氢化可的松：沈阳第一制药厂生产，批号：950605。
氯化胺：批号：950608，北京向阳制药厂。
双黄连冲剂：批号：970101，哈尔滨天工制药有限公司。
双黄连口服液：批号；97110341，中国郑州众生制药厂。
2、药物配制
临用时用蒸馏水配成不同浓度，等容积给药。
3、动物
昆明种小鼠，SD大鼠，均由大连医科大学实验动物中心提供。合格证号：辽实动字第522号，普通级一级实验动物。
Balb/c鼠，由湖北省医学科学动物实验中心提供。合格证号第042号。
※昆明种小白鼠，雌雄各半，体重18-22g。
Wistar大白鼠，雌雄各半，体重200-250g。
豚鼠，雌雄各半，体重252.1±46.6g。
以上动物购于沈阳药科大学动物饲养室，动物合格证号码：辽实动字033号，实验动物环境设施合格证号：辽实动字036号。
4、仪器
751型紫外分光光度计。
试验期间实验室温度：18-22℃。
实施例9本发明中药组合物抗呼吸道合胞病毒的体内试验
(1)病毒毒力测定
①感染RSV临床：Ba1b/c鼠5只用细胞培养病毒滴鼻感染，取原液50-60μl滴鼻。感染后24h小鼠出现毛耸，活动减少，食少等症状。第3-4天后症状好转，食欲、精神恢复。第8天剖杀，取血分离血，取肺。
②琼脂扩散法检测血清RSV抗体：以RSV-McAb抗体为对照，样品血清以1∶50，1∶100稀释。加样后37℃过夜，均出现沉淀线，尤以1∶50样品为显。
③小鼠肺匀浆，用10％鼠肺悬液上清(过滤清洁后)，在Vero培养测定RSV50＝10-1-0
表1 病毒毒力测定结果
| N | 24-48h症状 | 第8天血清 | 肺悬液Veto细胞培养 | ||||
| 琼指扩散试验(/n) | TCID50(/n) | ||||||
| 5 | 毛耸、活动减少、食少等症状 | 1∶50++/3 | 1∶100+/5 | 10-1++/4 | 10-2+/3 | 10-3±/1 | 10-4-/5 |
(2)药物抗病毒试验
Ba1b/c小鼠用RSV病毒原液每鼻孔50μl商鼻，4小时后开始给药，按表2所示剂量连续给药8天，每天一次。给药后第8天剖杀小鼠，取血分离血清，用间接免疫荧光染色法检测RSV抗体；观察肺部病理变化；测定肺悬液在Vero细胞中病毒滴度(TCID50)。
①分组与给药
取雌性6周龄Balb/c小鼠110只，体重18-22克，随机分为八组(见表2)：第一组为正常对照组(小鼠未感染RSV)，等容积蒸馏水；第二组至第八级感染RSV；第二组为蒸馏水组；第三组为空白对照组；第四组为吗啉呱组，剂量为0.01g/kg/d；第五组为双黄连口服液组，剂量为11.0ml/kg/d；第六组为本发明颗粒剂I-A小剂量组(6g/kg/d)；第七组为本发明颗粒剂I-A中剂量组(9g/kg/d)；第八组为本发明颗粒剂I-A大剂量组(12.5g/kg/d)。ig给药八天，每天一次。
表2 本发明制剂抗RSV-Balb/c鼠体内试验分组
| 组别 | 剂量(g/kg/d) | n | |
| 正常对照生理盐水辅料吗啉呱双黄连口服液本发明颗粒剂I-A本发明颗粒剂I-A本发明颗粒剂I-A | (A1)(A2)(A3)(B1)(B2)(C1)(C2)(C3) | 等容积等容积等容积0.0111.0ml/kg/d6912.5 | 1010151515151515 |
注：正常对照组小鼠未感染RSV。
②血清RSV抗体的测定
以1∶50和1∶100稀释血清，采用RSV-McAb和Vero细胞用间接免疫荧光法检测血清RSV抗体。结果见表3。
表3 Balb/c小鼠血清RSV抗体的测定结果
| 组别 | RSV-McAb | 阳性率(％) | 阴性率(％) | |
| 1∶50(/n) | 1∶100(/n) | |||
| A1A2A3B1B2C1C2C3 | -/10+++/8+++/10+/2+/3+/5+/2-/1 | -/10++/2++/5-/13-/12-/10-/13-/14 | 0100.0100.013.020.033.013.06.60 | 100.00087.080.067.087.094.40 |
n：动物数
③病毒滴度的测定
Balb/c小鼠于给药第八天，制备鼠肺悬液，在Vero细胞中进行病毒滴度测定，结果见表4。
表4 肺悬液病毒滴度的测定结果
| 组别 | 肺悬液稀释度 | TCID50 | |||
| 10-1 | 10-1 | 10-1 | 10-1 | ||
| A1A2A3B1B2C1C2C3 | -+++--±±- | -+++----- | -±±----- | -------- | 0101-2101-200000 |
④Balb/c小鼠于给药第八天，取鼠肺组织做石腊包埋，切片，HE染色，光镜(×100，×200)下观察肺病变：
C1、C2组个别鼠肺泡内小血管轻度扩张；
C3、B1、B2、A1组鼠肺组织正常；
A2、A3组小鼠肺泡壁小血管明显扩张，充血，并伴有肺泡内灶性出血。
参见图1、2、3、4。
综上所述，本发明制剂在抗RSV小鼠体内试验中表明，口服本发明颗粒剂I-A9g-12.5g/kg/d，有明显的抗RSV作用，与对照组比较有明显差异，间接免疫荧光检测抗体阴性率为94.4％，与阳性对照药物吗啉呱抗RSV效果接近；鼠肺组织切片可见，本发明颗粒剂I-A治疗8天后，肺组织恢复正常，而阴性对照组呈现肺炎症表现；用该样品治疗后鼠肺悬液在Vero细胞培养中已测不出病毒滴度。上述试验结果表明本发明制剂有明显抗呼吸道合胞病毒(RSV)作用。
实施例10本发明中药组合物抑菌试验
(1)对肺炎链球菌感染小鼠的体内保护作用
取昆明种小鼠90只，随机分为6组，分组原则及情况同止咳作用项。阳性对照组为双黄连冲剂组(ig80％双黄连冲剂25ml/kg，相当双黄连20g/kg)；每组动物15只，每天给药二次(上午9∶00一次，下午3∶00一次)，预防给药7天后，用在血清肉汤培养液中培养18小时的肺炎链球菌菌液(菌液浓度为106/ml)感染小鼠，腹腔注射，每鼠0.5ml。感染后各组按原剂量继续ig给药7天，每天两次观察动物反应，记录动物死亡数，结果见表5。
表5 本发明制剂对肺炎链球菌感染小鼠的体内保护作用
| 药物名称 | 剂量(g/kg/d) | 对数剂量X | 动物数(只) | 死亡动物数(只) | (％) | ED50与95％可信限 |
| 蒸馏水空白对照本发明颗粒剂I-A本发明颗粒剂I-A本发明颗粒剂I-A | 等容积等容积502512.5 | 1.691.391.10 | 1515151515 | 121271012 | 80.080.046.766.780.0 | ED50＝44.7g/kg95％可信限为16.6g/kg，104.7g/kg。 |
| 双黄连冲剂 | 20 | 1.30 | 15 | 12 | 80.0 |
由表5可见，本发明颗粒剂I-A在所用大、中两个剂量时能减少动物死亡数，具有一定的抑菌作用。
(2)体外抑菌作用(试管二倍稀释法)
取肺炎链球菌菌株进行增菌培养(37℃，6小时)，用肉汤稀释成1∶105试验菌液。将样品用肉汤配成1g/ml的样品溶液(PH＝7.2)，取灭菌试管三组，每组10支。每支试管内加样品溶液0.5ml，然后每组进行两倍稀释，最后一管做阴性对照。每个试管各加入试验菌液0.5ml，混合均匀，将三组试管于37℃孵箱中培养18小时后观察结果。重复三次实验，结果见表6。
表6 本发明制剂体外抑菌试验结果
| 药物 | 试管编号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 |
| 药液浓度(g/ml) | 1 | 0.5 | 0.25 | 0.13 | 0.06 | 0.03 | 0.02 | 0.01 | 0.004 | / | |
| 双黄连冲剂本发明颗粒剂I-A空白对照 | --+ | --+ | --+ | -++ | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ |
双黄连的MIC为0.125g/ml，本发明颗粒剂I-A的MIC为0.25g/ml，辅料不抑菌。
由表6可见，本发明颗粒剂I-A在体外抑菌试验中具有一定的抑菌作用。
实施例11本发明中药组合物的解热试验
取SD大鼠，雌雄各半，体重160-180克，用肛门温度计测肛门温度，每半小时测一次，共测两次，以两次温度的平均值作为该鼠的正常体温。选择两次温差不过0.5℃，正常体温在37.0-38.0℃的大鼠，腹腔注射细菌内毒素(600Eu/Kg)，1小时后测体温一次，选出体温升高1-2℃的大鼠60只，随机分为6组：蒸馏水对照组(ig等容积的蒸馏水)；空白对照组(ig等容积的赋型剂)；受试物高剂量组(ig100％本发明颗粒剂I-A25ml/kg，相当颗粒25g/kg，相当生药61.3g/kg，约为临床剂量4.92倍)；受试物中剂量组(ig50％本发明颗粒剂I-A溶液25ml/kg，相当颗粒12.5g/kg，相当生药30.7g/kg，约为临床剂量2.46倍)；受试物低剂量组(ig25％本发明颗粒剂I-A溶液25ml/kg，相当颗粒6.25g/kg，相当生药15.3g/kg，约为临床剂量1.23倍)；安乃近对照组(ig8％安乃近溶液25ml/kg)；每组10只，ig给药一次，给药后每半小时测体温一次，共测6次。记录体温，计算给药后体温与致热温度的升(降)值，进行t检验，结果见表7、图5。
表7 本发明制剂的清热作用(
X±SD)
| 组别 | 剂量(g/kg) | 正常体温(℃) | 致热温度(℃) | 药后30min(℃) | 降(升)热值(℃) | 药后60min(℃) | 降(升)热值(℃) |
| 空白对照安乃近本发明颗粒剂I-A本发明颗粒剂I-A本发明颗粒剂I-A | 等容积22512.56.25 | 37.33±0.5737.70±0.2837.46±0.3337.18±0.3337.40±0.52 | 38.57±0.5438.86±0.2538.74±0.1738.37±0.3738.35±0.31 | 39.04±0.1938.80±0.2338.61±0.3038.70±0.3938.55±0.31 | 0.47±0.39-0.07±0.12**-0.13±0.20**0.33±0.530.20±0.22 | 39.01±0.6138.70±0.2538.74±0.3938.84±0.6438.70±0.17 | 0.44±4.48-0.12±0.09**0.00±0.35**0.48±0.570.36±0.28 |
| 药后90min(℃) | 降(升)热值(℃) | 药后120min(℃) | 降(升)热值(℃) | 药后150min(℃) | 降(升)热值(℃) | 药后180min(℃) | 降(升)热值(℃) |
| 38.85±0.4438.60±0.2338.55±0.3138.77±0.5438.73±0.26 | 0.28±0.47-0.2±0.13**-0.1±0.29**0.41±0.480.38±0.37 | 38.67±0.4138.50±0.2738.48±0.2938.33±0.5938.61±0.21 | 0.10±0.45-0.3±0.13**-0.26±0.37*-0.04±0.620.26±0.36 | 38.67±0.4738.30±0.1938.35±0.3338.07±0.4338.45±0.28 | 0.10±0.39-0.5±0.16**-0.3±0.39**-0.3±0.52**0.10±0.39 | 38.62±0.3938.20±0.1138.32±0.2137.96±0.5638.33±0.39 | 0.05±0.32-0.6±0.25**-0.4±0.29**-0.4±0.46**-0.03±0.48 |
*P＜0.05 **P＜0.01
由表7可见，本发明颗粒剂I-A在大、中两个剂量时，具有明显的清热作用。安乃近的清热作用也非常显著，与大剂量组作用相当。
实施例12本发明中药组合物的止咳试验
(1)小鼠氨水引咳法
取昆明种小鼠60只，雌雄各半，体重18-22克，随机分为6组：蒸馏水对照组(ig等容积的蒸馏水)；空白对照组(ig等容积的赋型剂)；受试物高剂量组(ig200％本发明颗粒剂I-A溶液25ml/kg，相当颗粒50g/kg，相当生药122.5g/kg，约为临床剂量4.84倍)；受试物中剂量组(ig100％本发明颗粒剂I-A溶液25ml/kg，相当颗粒25g/kg，相当生药61.3g/kg，约为临床剂量2.42倍)；受试物低剂量组(ig本发明颗粒剂I-A溶液25ml/kg，相当颗粒12.5g/kg，相当生药30.6g/kg，约为临床剂量1.21倍)；急支糖浆对照组(ig原药液50ml/kg，大约与受试物中剂量相当)。每组动物10只。给药七天，每天一次，末次给药1小时后，将小鼠置于500ml烧杯中，并用平皿将烧杯盖好，用喷雾装置将氨水定量喷入烧杯中，然后观察和记录小鼠的咳嗽潜伏期和2分钟内的咳嗽次数，结果列于表8，可知受试物组与空白对照组相比，能明显延长咳嗽潜伏期，减少咳嗽次数，经过t检验在统计学上非常有意义(p＜0.01，p＜0.05)，且呈良好的量效关系。急支糖浆的止咳作用也非常显著，与中剂量组作用相当。
表8 本发明制剂的止咳作用(小鼠氨水引喘法)
| 组别 | 剂量(g/kg) | 动物数(只) | 潜伏期(秒)-X±SD | 咳嗽次数--X±SD |
| 蒸馏水对照空白对照急支糖浆本发明颗粒剂I-A本发明颗粒剂I-A本发明颗粒剂I-A | 等容积等容积50ml/kg502512.5 | 101010101010 | 38.1±9.0839.0±10.264.5±16.9**69.0±23.8**62.8±18.9**55.0±18.3* | 56.2±17.156.7±17.626.1±5.85**23.9±16.2**26.0±16.3**37.1±19.2* |
*P＜0.05 **P＜0.01(与空白对照组比较)
※(2)豚鼠枸橡酸引咳法
取豚鼠47只，体重132.9±20.2g，随机分为五组。第一组豚鼠灌胃等容积生理盐水；第二组豚鼠灌胃急支糖浆30ml/kg；第三一五组豚鼠灌胃本发明颗粒剂I-A30g/kg，15g/kg和7.5g/kg，连续灌胃7天，末次给药后40分钟，将豚鼠放于700ml玻璃钟罩内，向钟罩内喷入17.5％枸橡酸溶液10秒钟，观察豚鼠的咳嗽潜伏期和5分钟内咳嗽次数，数据进行t检验，结果见表9。
表9 本发明制剂对枸橡酸引发豚鼠咳嗽的影响
| 组别 | 药物剂量(g/kg) | 动物数(只) | 咳嗽潜伏期( x±SD)秒 | 咳嗽次数( x±SD)/5分钟 |
| 生理盐水急支糖浆本发明颗粒剂I-A本发明颗粒剂I-A本发明颗粒剂I-A | --30ml/kg30157.5 | 1099910 | 44.2±15.8126.3±70.1**136.4±71.4**140.1±73.8**100.7±76.9* | 12.2±5.673.33±1.87**1.89±1.17***2.40±1.26**3.90±3.54** |
注：*与生理盐水组比较 P＜0.05
**与生理盐水组比较 P＜0.01
***与生理盐水组比较 P＜0.001
由表9数据可以看出，本发明颗粒剂I-A具有比较明显的抑制因枸橡酸引发豚鼠咳嗽的作用，可使豚鼠的咳嗽潜伏期明显延长，5分钟的咳嗽次数明显减少。
实施例13本发明中药组合物的化痰试验
(1)大鼠毛细玻璃管排痰量法
取SD大鼠60只，雌雄各半，体重180-220克，随机分为6组，分组原则及情况同止咳作用项。阳性对照组为氯化胺组(ig所配氯化胺溶液25ml/kg，相当氯化胺1g/kg)。禁食12小时，苯巴比妥钠(100mg/kg)腹腔注射麻醉后，仰位固定。剪开颈正中部皮肤，分离出气管。在甲状软骨下缘正中两软骨环之间用尖锐的注射器针头扎一小孔，然后插入玻璃毛细管一根，使毛细管刚好接触气管底部表面，借以吸取气管后部之痰液。当毛细管内被痰充满时，立即另换一根。以毛细管吸取痰液长度作为评价药物的化痰效果。记录给药前2小时的正常分泌量，按以上所示剂量给药一次，继续观察4小时，记录分泌量。比较给药前后平均每小时的分泌量。结果列于表10，可知受试物组与空白对照组比较，能使痰液排出量明显增加，经t检验在统计学上非常有意义(P＜0.01)，且有量效关系。氯化胺的化痰作用也非常显著，与大剂量组相当。
表10 本发明制剂的化痰作用(毛细玻管排痰量法)
| 组别 | 动物数(只) | 剂量(g/kg) | 排痰标量(cm) x±SD | |
| 给药前 | 给药后 | |||
| 蒸馏水对照空白对照氯化胺本发明颗粒剂I-A本发明颗粒剂I-A本发明颗粒剂I-A | 101010101010 | 等容积等容积1502512.5 | 1.89±0.351.97±0.261.96±0.221.91±0.141.39±0.330.93±0.12 | 2.16±0.352.07±0.372.81±0.29**2.94±0.25**2.47±0.22**2.03±0.20 |
**P＜0.01(与空白对照组比较)
※(2)小鼠气管段酚红法
取昆明种小鼠50只，雌雄各半，体重20.3±1.1g，随机分为五组，每组10只。第一组小鼠经口灌胃等容积生理盐水；第二组小鼠经口灌胃急支糖浆30ml/kg；第三-五组小鼠经口灌胃本发明颗粒剂I-A剂30、15、7.5g/kg，给药30分钟后，腹腔注射5％酚红0.1ml/10g体重，注射酚红后30分钟，处死小鼠，剥离气管周围组织。剪下自甲状软骨下至气管分支处的一段气管，放入盛有2.0ml生理盐水的试管中，10分钟后加2滴5％的NaOH，在波长546nm处测光密度值，由酚红标准曲线计算出酚红排泌量，与对照组比较差异的显著性，结果见表11。
表11 本发明制剂对小鼠气管酚红排泌量的影响
| 组别 | 药物剂量(g/kg) | 动物数(只) | 气管酚红排泌量( x±SD)/μg/ml |
| 生理盐水急支糖浆本发明颗粒剂I-A本发明颗粒剂I-A本发明颗粒剂I-A | --30ml/kg30157.5 | 1010101010 | 1.89±1.5110.59±2.45**3.76±2.96**3.26±2.82*2.31±1.61 |
注：*与生理盐水组比较 P＜0.05
**与生理盐水组比较 P＜0.01
**与生理盐水组比较 P＜0.001
由表11数据表明，本发明颗粒剂I-A具有明显的祛痰作用，大、中剂量对酚红排泌量有明显的促进作用，排泌量增多，急支糖浆组作用最为明显，与生理盐水对照组比较，P＜0.001。
实施例14本发明中药组合物的平喘作用
取豚鼠50只，雌雄各半，体重120±17g，随机分为五组，每组10只。第一组动物灌胃等容积生理盐水；第二组动物灌胃急支糖浆3ml/100g体重；第三-五组灌胃本发明颗粒剂I-A30g/kg，15g/kg和7.5g/kg，连续给药7天，在给药的末次40分钟，将豚鼠放于700ml玻璃钟罩中，逐只用2％的乙酰胆碱和0.1％的组织胺混合液定时10秒喷雾，观察豚鼠的引喘潜伏期(即从喷雾开始到哮喘发作，呼吸极度困难，直至抽搐跌倒的时间)，结果见表12。
表12 本发明制剂对豚鼠的平喘作用
| 组别 | 药物剂量(g/kg) | 动物数(只) | 引喘潜伏期( X±SD)秒 |
| 生理盐水急支糖浆本发明颗粒剂I-A本发明颗粒剂I-A本发明颗粒剂I-A | --30ml30157.5 | 1010101010 | 55.70±8.8098.20±33.61**102.0±20.95***94.00±33.03**85.20±17.02* |
注：*与生理盐水组比较 P＜0.05
**与生理盐水组比较 P＜0.01
***与生理盐水组比较 P＜0.001
由表12数据可以看出，本发明颗粒剂I-A有着比较明显的抑制由Ach-His混合液诱发的豚鼠支气管痉挛所导致的呼吸困难、喘息的作用，可使引喘潜伏期明显地延长，说明本发明颗粒剂I-A具有较明显的平喘作用。
实施例15本发明中药组合物的抗炎作用
(1)小鼠耳二甲苯致炎法
取昆明种雄性小鼠60只，体重26-30克，随机分为6组：蒸馏水对照组(ig等容积的蒸馏水)；空白对照组(ig等容积的赋型剂)；受试物高剂量组(ig200％本发明颗粒剂I-A溶液30ml/kg，相当颗粒60g/kg，相当生药147.0g/kg，约为临床剂量5.80倍)；受试物中剂量组(ig100％本发明颗粒剂I-A溶液30ml/kg，相当颗粒30g/kg，相当生药73.5g/kg，约为临床剂量2.90倍)；受试物低剂量组(ig 50％本发明颗粒剂I-A溶液30ml/kg，相当颗粒15.0g/kg，相当生药36.8g/kg，约为临床剂量1.45倍)；阿斯匹林组(ig所配阿斯匹林溶液25ml/kg，相当阿斯匹林0.2g/kg)。Ig给药十天，每天一次，末次给药后1h于小鼠右耳涂0.05ml二甲苯致炎。2h后将小鼠颈椎脱臼处死，沿耳廓基线剪下两耳，用直径9mm打孔器分别在小鼠左、右耳片同一部位打下圆耳片，称重，以两耳片重量之差作为肿胀度，进行t检验，并按下式计算各组肿胀抑制率，结果列于表13，可知受试物与空白对照组比较能显著抑制二甲苯所致小习耳肿胀，经t检验在统计学上非常有意义(P＜0.01)，且有量效关系。阿斯匹林的抗炎作用也非常显著，与大剂量组作用相当。
表13 本发明制剂对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响
| 组别 | 剂量(g/kg) | 动物数(只) | 肿胀度(mg)X±SD | 肿胀抑制率(％) |
| 蒸馏水对照空白对照阿斯匹林本发明颗粒剂I-A本发明颗粒剂I-A本发明颗粒剂I-A | 等容积等容积0.2603015 | 101010101010 | 15.0±2.3214.3±3.394.18±1.30**4.30±1.14**5.39±0.97**7.95±1.53** | 70.869.962.344.4 |
**P＜0.01(与空白对照组比较)
※(2)大鼠足趾蛋清致炎法
取大鼠50只，体重252.1±46.6g，雌雄各半，随机分为五组，每组10只。第一组灌胃等容积蒸馏水；第二组-第四组灌胃本发明颗粒剂I-A30g/kg，15g/kg和7.5g/kg，连续灌胃给药7天；第五组大鼠在第七天时皮下注射氢化可地松30mg/kg，全部动物末次给药后20分钟于大鼠右后足皮下向关节方向注射新鲜蛋清0.1ml/只，分别于注射蛋清后30，45，60，90分钟，分别用大鼠足肿胀仪测量足肿胀度，结果见表14。
足肿胀度＝注射蛋清后足容积-注射蛋清前足容积
表14 本发明制剂对大鼠足肿胀的影响
| 组别 | 药物剂量(g/kg) | 动物数(只) | 足肿胀度(mm)(X±SD)- | |||
| 30’ | 45’ | 60’ | 90’ | |||
| 生理盐水氢化可的松本发明颗粒剂I-A本发明颗粒剂I-A本发明颗粒剂I-A | --30mg30157.5 | 1010101010 | 38.9±14.128.6±14.727.8±16.5303.±25.137.1±19.3 | 44.9±16.927.9±15.1*26.6±14.9*32.9±21.528.6±17.2* | 49.1±12.927.9±14.6***32.1±18.5*28.5±15.5***32.9±17.5* | 44.9±10.319.5±5.6***17.6±12.3*18.0±9.61*29.8±18.9 |
注：*与生理盐水组比较P＜0.05
***与生理盐水组比较P＜0.001
表14数据表明，本发明制剂具有明显的抑制大鼠足趾肿胀的作用。
结论：本发明制剂具有显著的抗病毒、解热、镇咳、祛痰、平喘、抗炎和一定的抑菌作用。
综上所述，通过主要药效学试验方面的研究，充分证明了本发明制剂的有效性和安全性，既为本发明制剂进行临床试验提供了依据，也为临床试验用药提供了安全用药的参考剂量。
实施例16临床实验
本发明颗粒剂I-A 对照组：急支颗粒
根据II期临床试验计划，采用多中心随机双盲双模拟的对照方法进行临床观察研究。全部213例受试对象均来源于三家国家临床药理研究基地(天津中医学院第一附属医院，南京中医药大学附属医院，河南省中医药大学第一附属医院)的儿科门诊、病房或急诊观察室。213例中，除5例因不符合试验计划要求剔除外，纳入统计者208例，包括试验组102例，其中门诊病例73例，占71.57％，住院病例21例，占20.59％，观察室病例8例，占7.84％；对照组106例，其中门诊病例73例，占68.87％，住院病例24例，占22.64％，观察室病例9例，占8.49％。两组病例来源比较，X2＝0.1820，P＞0.05，差异无显著性意义。
表15 两组患者急性支气管炎总疗效比较
| 组别 | 例数 | 痊愈 | 显效 | 进步 | 无效 | 痊愈率(％) | 总有效率(％) |
| 试验组对照组 | 102106 | 3523 | 5356 | 1118 | 39 | 34.3121.70 | 86.2774.53 |
注：总有效率，指痊愈率+显效率(即愈显率)，以下同此。
Ridit分析：U＝2.4404，P＜0.05。两组比较，差异有显著性意义。典型病例
病例1：
GY，女，5岁。2001年3月5日开始试验。随机号：甲A10。
主诉：咳嗽2天。
现病史：2天前开始咳嗽，1天前咳嗽明显加重。现咳嗽频繁，有痰量不多，痰色黄白，口渴，尿不黄，大便干。
查体：体温36.3℃，神清，精神尚好，呼吸平。咽充血，双肺呼吸音粗糙，偶闻及干鸣音，心音有力，心率85次/分，未闻及杂音，腹软。舌质红，苔黄，脉滑。
实验室检查：
血常规：WBC8.4×109/L，N30.8％，HB112g/L，RBC4.69×1012/L。
X线胸透：双肺纹理稍多。
诊断与辨证：小儿急性支气管炎(痰热咳嗽证)
诊治经过：确诊后予甲A10号试验药物。每次给予本发明药物和急支颗粒模拟药各15ml，每日3次，口服。治疗3天，咳嗽减轻，有痰如故，双肺干鸣音消失，呼吸音仍粗糙。治疗5天，咳嗽、痰诸证消失，体温36.5℃，咽不红，双肺呼吸音清，心音有力，心率86次/分。舌质淡红，苔薄，脉平。
复查血常规：WBC8.7×109/L，N44.9％，HB126g/L，RBC4.83×1012/L。X线胸透仍示心肺无著变。根据疗效评定标准，总疗效为痊愈(0/15＝0)，证候疗效为显效(0/11＝0)。试验中。未发现有任何不良反应，安全性评价为一级。
病例2：
ZMY，女，4岁。2001年4月4日住院治疗。随机号：乙D10。
主诉：咳嗽2天。
现病史：患儿2天前开始咳嗽。，咳嗽阵作，有痰量不多，痰色黄白，尿不黄，大便不干。
查体：体温37.2℃，神清，精神尚好，呼吸平。咽充血，双肺呼吸音粗糙，心音有力，心率120次/分，未闻及杂音，腹软。舌质红，苔黄，脉数。
实验室检查：
血常规：WBC5.0×109/L，L32.9％，N59.0％，HB119g/L，PLT222×109/L。
尿常规、便常规(-)。
X线胸透：双肺纹理增多紊乱。
诊断与辨证：小儿急性支气管炎(小儿咳嗽痰热咳嗽证)
诊治经过：确诊后予乙D10号试验药物。每次给予本发明药物和急支颗粒模拟药各15ml，每日3次，口服。治疗1天，咳嗽减轻，治疗4天，咳嗽、有痰、大便干诸证消失，体温36.2℃，双肺呼吸音清，心音有力，心率110次/分。舌质淡红，苔薄，脉平。复查血常规：WBC10.0×109/L，L19％，N77.0％，HB143g/L，PLT179×109/L。X线胸透：(-)。根据疗效评定标准，总疗效、证候疗效均评为痊愈。试验中，未发现有任何不良反应，安全性评价为一级。
病例3：
YC，男，2岁。2001年7月3日开始试验。随机号：丙D06。
主诉：咳嗽、低热1天。
现病史：1天前开始咳嗽、发热。现咳嗽频繁，喉间有痰鸣音，低热，口不渴，尿不黄，大便正常。
查体：体温37.9℃，神清，精神尚好，呼吸粗促，31次/分。因充血，双肺呼吸音粗糙，偶闻及痰鸣音，心音有力，心率120次/分，未闻及杂音，腹软。舌质红，苔黄，指纹紫。
实验室检查：
血常规：WBC3.7×109/L，N75.8％，HB125g/L，RBC4.25×1012/L，PLT129×109/L。尿常规、大便常规：(-)。
X线胸透：双肺纹理粗重。
诊断与辨证：小儿急性支气管炎(痰热咳嗽证)
诊治经过：确诊后予丙D06号试验药物。每次给予本发明药物和急支颗粒模拟药各15ml，每日3次，口服。治疗3天，低热消失，咳嗽次数减少，仍有喉间痰鸣，体温正常，呼吸平稳，双肺呼吸音粗糙。治疗5天，咳嗽、痰诸证消失，体温36.4℃，咽稍红，双肺呼吸音清，心音有力，心率86次/分。舌质淡红，苔薄，指纹淡紫。复查血常规：WBC5.2×109/L，N77.9％，HB137g/L，RBC4.18×1012/L，PLT117×109/L。尿常规、大便常规：(-)。X线胸透仍示心肺无著变。根据疗效评定标准，总疗效为痊愈(0/15＝0)，证候疗效为显效(0/11＝0)。安全性评价为一级。
以上结果表明，本发明颗粒剂I-A是以清肺化痰、止咳平喘，佐以活血化瘀为主要功效中药新药，主治小儿急性支气管炎痰热咳嗽证。试验结果表明，试验组的总疗效，痊愈率为34.31％，总有效率(痊愈+显效率)为86.27％；而对照组的痊愈率为21.70％，总有效率为74.53％。两组比较，试验组疗效高于对照组，差异有显著性意义。试验组对痰热咳嗽证候的痊愈率为27.45％，总有效率为90.20％；而对照组的痊愈率为19.81％，总有效率为75.47％。两组比较，差异无显著性意义。试验组的总积分值和证候积分值差值的均值也均高于对照组，差异有显著性意义。
各项指标改善情况的统计分析结果，两组治疗后咳嗽、咯痰等症状、异常舌脉及肺部体征均较治疗前有明显改善，其中试验组咳嗽、异常舌苔的改善作用优于对照组，差异有显著性意义。治疗前，两组患者的血白细胞计数和X线胸片异常情况比较，均无显著性差异，具有可比性。治疗后，两组血白细胞计数均有明显改善，X线胸片异常也有一定程度的改善，但两组组间比较，差异均无显著性意义。说明两药对血白细胞计数增高和X线胸片肺纹理增粗的改善作用相近。两组治疗前鼻咽部病毒检测及咽拭子细菌培养的阳性率比较，差异无显著性意义；两组治疗后的阴转率比较，差异也无显著性意义，但两组的阴转率均在80％以上，说明两药均有较好的抗病毒及抗菌作用。
本组213例患儿，除1例(试验组病例)在治疗过程中出现口唇发干(安全性评价为“二级”)外，均未发现有不良反应，安全性评价均为“一级”。实验室指标包括血尿便常规、肝肾功能、心电图治疗前后变化分析，也未发现与试验药物有关的异常改变。说明本发明颗粒剂I-A按试验剂量临床应用，比较安全。
结论
本发明颗粒剂I-A按试验剂量、5天疗程应用，对小儿支气管炎痰热咳嗽证具有较好疗效，其在总疗效、咳嗽主症改善以及中医证候总计分减少等方面，均明显高于对照药(急支颗粒)，充分证实其清肺化痰、止咳平喘的功效，另外，通过对患儿服药前后鼻因部病毒检测和咽拭子细菌培养结果也从临床上证实了本品所具有的抗病毒及抗菌作用(III期阳性转阴率为100％)，且未见明显毒副作用。
Claims (11)
1.一种治疗呼吸系统疾患的中药组合物，其原料药组成为，以制成1000g成品计：
麻 黄(蜜炙) 75-175g 石 膏 750-1750g
苦杏仁(炒) 75-175g 桑白皮(蜜炙) 75-175g
葶苈子(炒) 30-120g 当 归 125-250g
丹 参 125-250g 地 龙 75-175g
僵 蚕(炒) 75-175g 甘 草 75-175g。
2.根据权利要求1所述的组合物，其中原料药组成为，以制成1000g成品计：
麻 黄(蜜炙) 100-150g 石 膏 1000-1500g
苦杏仁(炒) 100-150g 桑白皮(蜜炙) 100-150g
葶苈子(炒) 50-100g 当 归 150-226g
丹 参 150-226g 地 龙 100-150g
僵 蚕(炒) 100-150g 甘 草 100-150g。
3.根据权利要求2所述的组合物，其中原料药组成为，以制成1000g成品计：
麻 黄(蜜炙) 112-137g 石 膏 112-1370g
苦杏仁(炒) 112-137g 桑白皮(蜜炙) 112-137g
葶苈子(炒) 68-82g 当 归 170-206g
丹 参 170-26g 地 龙 112-137g
僵 蚕(炒) 112-137g 甘 草 112-137g。
4.根据权利要求3所述的组合物，其中原料药组成为，以制成1000g成品计：
麻 黄(蜜炙) 125g 石 膏 1250g
苦杏仁(炒) 125g 桑白皮(蜜炙) 125g
葶苈子(炒) 75g 当 归 188g
丹 参 188g 地 龙 125g
僵 蚕(炒) 125g 甘 草 125g。
5.根据权利要求1至4任一权利要求所述的组合物，可制备的剂型选自颗粒剂、胶囊剂、口服液、膏剂或片剂。
6.权利要求1至4任一权利要求所述组合物的制备方法，其包括如下步骤：
(1)称取所述的十味原料药，加水20～3倍，煎煮1～4次，每次0.5～4小时；
(2)合并煎液，滤过，滤液静置；
(3)取上清液减压浓缩至相对密度为1.0-1.3(50～80℃)的清膏。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其包括如下步骤：
(1)称取所述的十味原料药，加水20～4倍，煎煮2～4次，每次0.5～4小时；
(2)合并煎液，滤过，滤液静置；
(3)取上清液减压浓缩至相对密度为1.0-1.3(50～80℃)的清膏。
8.权利要求1至4任一权利要求所述的组合物的应用，包括抗病毒、抗菌、解热、镇咳、祛痰、平喘及抗炎。
9.根据权利要求8所述的应用，其为在制备治疗急性支气管炎或肺炎恢复期的痰热咳嗽证药物中的应用。
10.检测权利要求1至4任一权利要求所述组合物的活性物含量的方法，其包括：
对照品溶液的制备精密称取盐酸麻黄碱对照品适量，加水适量制得对照品溶液；
供试品溶液的制备取本发明组合物适量，加氯化钠和40％氢氧化钠溶液后进行水蒸气蒸馏，馏出液置含稀盐酸的量瓶中，用40％氢氧化钠溶液调pH值至6.0-7.0制成供试品溶液；
测定法 取上述两种溶液分别加入含溴麝香草酚蓝的枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液，再各加入氯仿进行萃取，分取氯仿层，用分光光度法在414nm波长处测定吸收度，计算即得；
以盐酸麻黄碱为对照品，以分光光度法测定供试品中的麻黄含量每1g所述组合物含麻黄以盐酸麻黄碱(C10H15NO·HCL)计，不得少于0.30mg。
11.检测权利要求1至4任一权利要求所述组合物的活性物含量的方法，其包括：
对照溶液的制备将盐酸麻黄碱用水稀释后，加入高碘酸与氢氧化钠溶液适量，用盐酸调节pH至7，加甲醇适量制得对照品溶液；
供试品溶液的制备取本品适量加氢氧化钠溶液适量摇匀后再加氯化钠适量超声后进行蒸馏提取至预先盛有盐酸溶液的量瓶中，取适量稀释后再加入高碘酸与氢氧化钠溶液适量，用盐酸调节pH至7，加甲醇适量溶解过滤后取续滤液即得；
测定法取上述两种溶液分别注入以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的液相色谱仪中，以甲醇-水(1∶1)为流动相；检测波长为254nm，理论塔板数按盐酸麻黄碱计算应不低于3000；
以盐酸麻黄碱为对照品，以液相色谱法测定供试品中的麻黄含量每1g所述组合物含麻黄以盐酸麻黄碱(C10H15NO·HCl)计，不得少于0.30mg。
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