CN1730664A - 细菌总数快速检测试剂套组及其检测装置中的过滤比色杯 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及两种试剂组及一种具有特殊物理化学性能的过滤比色杯装置。其一，为体细胞三磷酸腺苷释放试剂组。它能有选择地使采自食品、食品生产线或其它不同来源样品中的非细菌，即高等多细胞生物的体细胞有效释出三磷酸腺苷。然后，辅以有特殊物化性能的过滤比色杯装置的处理，率先将其排除。其二，细菌细胞一体化裂解发光试剂组。它既可使样品中剩下的细菌细胞释放出三磷酸腺苷，又有萤火虫荧光素酶酶促荧光反应的全部试剂。它们是以萤火虫荧光素酶检测三磷酸腺苷为基本原理，细菌总数快速检测实用化技术的关键。本发明试剂套组使用时，其检测准确，与常规活细胞平皿计数法的符合率达93－98％；并且检测速度快，可在1－5分钟内取得微生物总量检测。
Description
一、技术领域：本发明涉及一种试剂套组及过滤装置，尤其涉及一种对细菌总数进行快速检测的试剂套组及利用试剂套组进行检测的检测装置中的过滤装置，属于生物化学领域。
二、背景技术：随着人们生活水平的提高，人们的健康卫生意识逐渐提高，尤其是食品安全是当前深受政府和人民普遍关注的问题，它直接关系到人们的生活和健康。食品卫生的不规范，给人们的生活和健康带来了极大的危害。我国卫生部曾颁发“食品企业实施HACCP体系”的指南[卫法监发(2000年)174号]。HACCP是Hazard Analysis Critical Control Point(危险因素分析关键控制点)的英文缩写，也是发达国家普遍采用对食品、饮料企业的生产设备的细菌及食品残渣(细菌滋生条件)污染程度进行产前监控的认证体系。此后，卫生部从2004年5月1日实施的“食品企业卫生规范”中对蜜饯、乳制品、饮料、熟肉制品及定型包装饮用水五类企业的环境卫生、厂房设施卫生、人员卫生及清洁消毒、污水管理提出了明确要求。2004年1月1日实施的“中华人民共和国食品卫生微生物检测国家标准”则对包括肉及肉制品、乳及乳制品、蛋品、水产品、罐头等12大类，49小类食品饮料的菌落总数，以及大肠菌群，沙门氏菌、志贺氏菌等14个类别微生物的检测或检验程序，合格标准提出了明确的定义和指标。
但是，由于国内目前还缺少能与HACCP认证体系配套，对食品污染的微生物总量进行准确、快速检测的科技手段，致使已经颁布的“规范”“标准”或认证体系难以发挥应有的效果。我国至今采用常规的“活细胞平皿计数法”，其检测速度慢，效率低，从采集样品到取得结果至少需要24～48小时。因此，难以从生产原料、生产设备层面进行实时而有效的监控。往往是产品已经出来，检验结果还未完成。这就势必造成轻则产品质量下降，资源浪费，重则导致产品召回或卫生事故。并且在水处理、环境监测、啤酒及其它酿酒业、奶牛养殖及奶品制造、纸制品及纸浆制造领域行业，医学、法医学检测，如酶联免疫试剂、潜便血、菌血症、早期癌变检测试剂盒制备行业，也存在对微生物进行快检的需求。因此，制成低成本、低价格、高质量的细菌总数快速检测方法、试剂及装置，是解决我国进行快速卫生监测以满足各行业微生物标准检测以达到卫生规范要求的重要技术保障。
萤火虫的发光是由于其体内能产生称作萤火虫荧光素酶(虫光素酶)的特殊蛋白质，它是一种以ATP(三磷酸腺苷)为必需底物，能将化学能转变成光能的生物催化剂，它能将有效的存在于所有生物(人、动植物、微生物)细胞中的能量物质ATP以及荧光素转变成荧光，这一生化反应如下：
其中：ATP：三磷酸腺苷；Luciferin：荧光素；O2：氧气；Mg++：二价镁离子；Luciferase：虫光素酶；Amp：一磷酸腺苷；Oxyluciferin：氧化荧光素；PPi：焦磷酸；CO2：二氧化碳。
上述反应表明，ATP是该反应不可替代的物质，在有足量的荧光素和氧的条件，荧光强弱取决于ATP的数量。由于虫光素酶、ATP生理状态和荧光之间有着精确的数量关系，可将ATP定量地转变成易于检测的光信号，因此，虫光素酶被称为生物传感器。
三磷酸腺苷(ATP)是所有生物细胞中的能量物质，在有虫荧光素酶存在的情况下极微量的ATP就可以同虫荧光素反应发光，这种荧光可以用微量荧光检测仪检测。由于这种发光反应的发光强度在反应的其它试剂过量的情况下与ATP的含量存在明显的线性的关系。每种细菌个体所含的ATP在常态下也是稳定的，而且不同种细菌的ATP含量的绝对值在一定程度也很相近，所以每个发光值都会对应一个相应的细菌总数。导致污染食品问题的细菌，支撑其生命活动所必须的ATP存在于细胞内，可以通过使用特殊的试剂或方法把细菌细胞内的ATP释放出来，促使其发生三磷酸腺苷荧光反应，通过测定发出荧光的量就可以反映被测样品中细菌的总数。
但原有的三磷酸腺苷荧光法细菌总数快速检测法存在着未能有效去除体细胞及其它非细菌所产生的三磷酸腺苷的状况，而一个体细胞内所含有的三磷酸腺苷的含量是单一细菌细胞内三磷酸腺苷含量的100-1000倍，所以一旦被测样品中混有体细胞将对测试结果产生严重的干扰，使荧光值和细菌数不成线性关系，从而无法准确测定样品中污染细菌的真实数量。因此，使用此方法检测的准确度一直难以达到一个理想的水平。
三、发明内容：
1、发明目的：本发明提供了一种细菌总数快速检测试剂套组及其检测装置中的过滤比色杯，其目的是解决传统的“活细胞平皿计数法”对食品污染的微生物总量进行检测的速度慢、效率低，而现在的检测法中非细菌细胞ATP的干扰又影响检测准确度等方面存在的问题。
2、技术方案：本发明是通过以下技术方案来实现的：
一种细菌总数快速检测试剂套组，其特征在于：该试剂组主要包括体细胞三磷酸腺苷释放试剂组和细菌细胞一体化裂解发光试剂组；体细胞三磷酸腺苷释放试剂组主要组份为按体积百分比取0.001％-0.05％的Triton X-100、使细菌稳定的稳定剂、表面活性剂；细菌细胞一体化裂解发光试剂主要组份及各组份浓度及质量比为：
以下所有的百分比皆为该溶液在混合后的溶液中的体积百分比
萤火虫荧光素酶 0.1μg/ml-15mg/ml
虫荧光素 0.03mM-0.9mM
Triton X-100或Triton X-20或Triton X-60或Triton X-80中的一种
0.1％-10％
缓冲液 0.005％-0.5％
牛血清白蛋白 0.2 mg/ml-5mg/ml
含有二硫键的抗氧化剂 0.1mM-10mM。
体细胞三磷酸腺苷释放试剂组中的稳定剂为0.15M Nacl或由磷酸氢二钠8.1mM、磷酸二氢钾1.5mM、氯化钾2.7mM、PH7.2(PBS PH7.2)构成的稳定剂；表面活性剂为0.001％-0.5％的Tween 20或Tween60或Tween 80。
细菌细胞一体化裂解发光试剂中的缓冲液主要组分和浓度及质量比如下：
Tricine或Tris中的一种 1mM-50mM
硫酸镁或醋酸镁或氯化镁中的一种 0.5mM-10mM
EDTA 0.1mM-20mM
用NaOH调整pH值为7.8。
抗氧化剂为DTT或通过加入巯基乙醇(2-mercaptoethanol)提供二硫键来防止萤火虫荧光素酶被异常氧化做抗氧化剂其浓度通常为0.003-0.05％，优选DTT。
释放试剂组中的Triton X-100用其它低浓度的提取剂代替，如十六烷基三甲基溴化铵0.0005％-0.001％、二甲亚砜0.01％-0.05％，都可得到不会裂解细菌细胞而只裂解体细胞的裂解剂。
该过滤比色杯由透明材料的杯身和0.1μm-1.0μm孔径的虑膜制成的杯底构成，其杯身和杯底为不与体细胞三磷酸腺苷释放试剂组和细菌细胞一体化裂解发光试剂组发生发应的材料制成。
透明材料的杯身采用玻璃或合成材料构成，合成材料为透明的聚丙烯或透明的聚苯乙烯，底部0.1μm-1.0μm孔径的滤膜，采用聚四氟乙烯或聚碳酸酯或硝酸纤维材料制成。
杯身内的上部设有活塞式加压器。
3、优点及效果：通过本发明技术方案的实施，能够很好地解决传统的“活细胞平皿计数法”对食品污染的微生物总量进行检测的速度慢、效率低，而现在的检测法中非细菌细胞ATP的干扰又影响检测准确度等方面存在的问题。本发明以ATP发光作为微生物总数指标的方法其快速、灵敏，通过针对体细胞裂解剂试剂组和针对细菌细胞的裂解剂试剂组配合特殊工艺的过滤比色杯装置达到可以排除非细菌产生三磷酸腺苷，进而可以精确测定被测样品表面或其中细菌总数的目的。本发明试剂用于ATP荧光法微生物快检系统中，其检测准确，与常规活细胞平皿计数法的符合率达93-98％；并且检测速度快，可在1-5分钟内取得环境或食品的微生物总量检测；由于其采用基因工程或有机合成的方法制备荧光素和荧光素酶，大大降低试剂的成本，也有效提高了产量；应用本试剂的检测系统可携至室内外使用，并且该检测系统通过特定的设备与电脑连接后可直接获得检测结果并储存资料备查。本发明试剂应用范围广，不仅在食品检测领域，并且在水处理、环境监测、啤酒及其它酿酒业、奶牛养殖及奶品制造、纸制品及纸浆制造领域行业，医学、法医学检测，如酶联免疫试剂、潜便血、菌血症、早期癌变检测试剂盒制备行业进行快速微生物检测也可应用，本发明试剂既能使微生物细胞有效释放ATP，又不干扰萤火荧光素酶促发光反应。同时本发明的细菌细胞一体化裂解发光试剂(AFA)也可以作为一种环境及表面清洁程度的快速评估方法或试剂。因为整个试剂系统已经具备对样品中细菌和体细胞进行三磷酸腺苷(ATP)的提取并进行萤火虫荧光素酶催化虫荧光发光反应。所以细菌细胞一体化裂解发光试剂(AFA)本身也可以作为环境及表面清洁程度的初步快速评估方法或试剂进行单独使用。
四、附图说明：
附图1为本发明试剂组对大肠杆菌1的裂解效果示意图；
附图2为本发明试剂组对大肠杆菌2的裂解效果示意图；
附图3为本发明试剂组对酶母的裂解效果示意图；
附图4为本发明试剂组对不同浓度不同菌体的裂解发光值对比示意图；
附图5为本发明试剂组对血液的裂解效果示意图；
附图6为本发明体细胞对枯草杆菌1催化发光比较示意图；
附图7为本发明体细胞对枯草杆菌2催化发光比较示意图；
附图8为利用本发明试剂组及装置去除非细菌ATP的示意图；
附图9为本发明浓缩液体的示意图；
附图10为本发明专用浓缩器示意图。
五、具体实施方式：
本发明中的体细胞三磷酸腺苷(ATP)释放试剂组(SRA)：以下所有的百分比皆为该溶液在混合后的溶液中的体积百分比，可以采用Triton X-100或Triton X-20或Triton X-60或Triton X-80中的一种，主要采用Triton X-100，浓度为0.001％-0.05％，根据进行的对比实验在这个浓度范围内非离子去污剂Triton X-100不会裂解细菌细胞，而只裂解体细胞。最适的Triton X-100浓度为0.005％。为了减少0.001％-0.01％的Triton X-100对细菌细胞的轻微影响在SRA试剂中加入能使细菌稳定的。同时用磷酸氢二钠8.1mM、磷酸二氢钾1.5mM、氯化钾2.7mM、pH 7.2(PBS pH 7.2)构成的稳定剂对细菌细胞也有很好的稳定作用，mM是指一种浓度单位是(毫摩尔，mMOLE)。在本试剂中加入0.001％-0.5％的表面活性剂Tween20或Tween60或Tween80才能使试剂发挥最满意的效果。也可以用其它低浓度的“提取剂(extractant)，像典型的去污剂有阳离子去污剂十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)0.0005％-0.001％、有机溶剂二甲亚砜(DMSO)0.01％-0.05％都可得到不会裂解细菌细胞而只裂解体细的裂解剂。
本发明中的细菌细胞一体化裂解发光试剂(AFA)：
1.萤火虫荧光素酶(luciferase)0.1μg/ml-15mg/ml为催化虫荧光素和ATP反应发光的必要催化剂；
2.虫荧光素(D-lucifrin)0.03mM-0.9mM；
3.Triton X-100 0.1％-10％作为本试剂系统的主体裂解试剂在这个浓度范围内将会获得对细菌细胞最大程度的裂解，同时获得的发光值也是最大的，最优选的Triton X-100为1％浓度；
4.硫酸镁(MgSO4)0.03mM-1.7mM主要为本反应提供必要的金属镁离子，同时也可添加同浓度的醋酸镁(MgAC2)和同浓度的氯化镁(MgCl2)或其它形式的镁盐都可为本反应提供必要的镁离子；
5.EDTA是金属螯合剂对酶有稳定作用浓度为0.01mM-2mM；
6.DTT 0.1mM-10mM含有二硫键可以防止萤火虫荧光素酶被氧化，对酶的保护有极为重要的作用。同时也可通过加入巯基乙醇(2-mercaptoethanol)来提供二硫键来防止萤火虫荧光素酶被异常氧化做抗氧化剂浓度通常为0.003-0.05％，但实际测试发现添加DTT作为抗氧化剂的效果要优于巯基乙醇。
7.Tricine缓冲液：Tricine 1mM-50mM
硫酸镁(MgSO4)0.5mM-10mM
EDTA 0.1mM-20mM
用NaOH调整Ph值为7.8；
由于溶液整体的pH值(酸碱度)对整个荧光反应的影响非常大，经实验得到反应适合pH值6.5-8.0，所以必要的缓冲也是本发明的重要组成部分。同时本缓冲液也可以用TE缓冲液来代替(Tis-HCl 1mM-50mM，EDTA 0.1mM-20mM)。
8.牛血清白蛋白(BSA)：0.2mg/ml-5mg/ml
由于本身萤火虫荧光素酶的性质不稳定，细菌细胞一体化裂解发光试剂(AFA)含有很多对萤火虫荧光素酶活性有影响的物质，所以添加高浓度的牛血清白蛋白(BSA)对于细菌细胞一体化裂解发光试剂(AFA)的稳定性和长时间保存都是必要的。
应该指出在细菌细胞一体化裂解发光试剂(AFA)中，萤火虫荧光素酶(luciferase)、虫荧光素(D-lucifrin)、镁离子是相对预测样品中细菌细胞含有的ATP是过量的，这样可以保证裂解发出的荧光量和细菌总数相互对映。此细菌细胞一体化裂解发光试剂(AFA)主要创新点在于使整个细菌细胞裂解和催化发光的体系构建在一起，同时能保证不互相干扰，这样在操作上和便携性上就有了很大的提高，所以能保证细菌细胞的完全裂解又不干扰整个催化发光体系的系统的溶液配比是本发明的关键。
本发明利用上述试剂组的过滤比色杯装置，该过滤比色杯由具有高透光率的透明材料的杯身和底部0.1μm-1.0μm孔径的虑膜组成。
高透光率的透明材料的杯身可以采用玻璃或合成材料构成，主要为保证不与体细胞三磷酸腺苷释放试剂组(SRA)和细菌细胞一体化裂解发光试剂(AFA)发生发应，并且要保证有很高的透光率能使发出的光子如实地被微量荧光检测仪(如英国BiotraceM3、美国New Horizon3650、美国Turner TD20/20、国产滨松系列产品)的光电倍增管检测。透明的聚丙烯(PP)或透明的聚苯乙烯(PS)为制作杯身材料的首选。
底部0.1μm-1.0μm孔径的滤膜，可以采用聚碳酸酯、聚四氟乙烯、硝酸纤维等材料，但要保证膜的材料不能与体细胞三磷酸腺苷(ATP)释放试剂组(SRA)和细菌细胞一体化裂解发光试剂(AFA)发生发应。本发明人认为聚四氟乙烯、硝酸纤维是作为杯底滤膜的首选材料，0.22μm孔径的滤膜能配合体细胞三磷酸腺苷(ATP)释放试剂组(SRA)有效去除非细菌ATP干扰达到最佳效果。
在使用体细胞三磷酸腺苷(ATP)释放试剂组(SRA)处理待检样品使其中含有的体细胞裂解释放出三磷酸腺苷(ATP)后，应采用过滤比色杯加压过滤去除其中的三磷酸腺苷(ATP)和体细胞及非细菌细胞的碎片，从而只保留被检样品的细菌细胞，以便精确计算细菌总数。加压方式中空气加压为本发明的首选。这种方法具有干扰小，不易带入三磷酸腺苷(ATP)及对细菌菌体无损害的优点。
同时本过滤比色杯具有浓缩和富集细菌的作用，由于被测样品中所含有的细菌总数往往过低，如纯净水、矿泉水、灭菌后的罐头制品等……，有可能低于试剂系统或仪器的最低检测限度。此时就有必要对样品进行成倍浓缩或富集才能达到最低检测限度，通过浓缩的倍数推算出被测样品中的原始细菌总数。此浓缩、富集方案要求被检测样品为液体或溶液的形式提供。
利用本发明的检测试剂组和检测装置进行细菌总数检测过程如下：
1、取50μl待检测溶液加入到本发明检测装置过滤比色杯中，加入约100μl的本发明三磷酸腺苷释放试剂组，释放非细菌细胞的ATP，并进行加压过滤处理，以去除它对检测结果的干扰；
2、将上述过滤后的需检测溶液中加入100μl本发明细菌细胞一体化裂解发光试剂，裂解处理后，进行发光反应，通过荧光检测装置可以准确检测出除去非细菌细胞ATP干扰的液体的荧光值通过软件或人工换算得出待测溶液的细菌总数。
利用本发明的检测试剂组和检测装置对各种细菌进行检测的结果如下：
如附图1、附图2、附图3所示，其中X为Triton X-100的浓度，Y为荧光值，通过对大肠杆菌、酵母进行不同浓度的Triton X-100裂解剂的选择，结果发现Triton X-100的最佳浓度为1％，在这个浓度下的发光值是最高的，同时TritonX-100是多种提取剂中对萤火虫荧光素酶影响最小的，细菌细胞一体化裂解发光试剂(AFA)选择1％的Triton X-100作为裂解剂。
如附图4所示，是本发明构建的细菌细胞一体化裂解发光试剂(AFA)通过对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、酵母细胞、枯草杆菌不同浓度进行测试均取得较好的效果，其中，X为原菌液稀释10的N次方倍，Y为荧光值；1为酵母菌的测试曲线；2为金黄色葡萄球菌的测试曲线；3为枯草杆菌的测试曲线；4为大肠杆菌的测试曲线。
| 菌体浓度 | 金黄色葡萄球菌 | 大肠杆菌 | 酵母菌 | 枯草杆菌 |
| 5μl 10-1 | 403878 | 144748 | 667252 | 223603 |
| 约106个 | 约105个 | 约105个 | 约105个 | |
| 5μl 10-2 | 75119 | 30451 | 80612 | 91302 |
| 约105个 | 约104个 | 约104个 | 约104个 | |
| 5μl 10-3 | 15843 | 8120 | 13801 | 14676 |
| 约104个 | 约103个 | 约103个 | 约103个 | |
| 5μl 10-4 | 9345 | 8835 | 7534 | 10453 |
| 约103个 | 约102个 | 约102个 | 约102个 | |
| 5μl 10-5 | 10040 | 9081 | 4600 | 6107 |
| 约102个 | 约101个 | 约101个 | 约101个 |
如附图5所示，其中为X Triton浓度，Y为荧光值，为通过对典型的体细胞血液细胞进行不同浓度的裂解剂实验得到，最为合适的体细胞三磷酸腺苷(ATP)释放试剂组(SRA)的裂解剂为0.005％的Triton X-100。
如附图6所示，用典型的10-1浓度体细胞淋巴细胞与10-1-10-6细菌细胞(枯草杆菌)混合与单独测试10-1-10-6细菌细胞(枯草杆菌)裂解催化发光做比较，可见10-1浓度体细胞淋巴细胞对较低浓的枯草杆菌测试有较大的干扰。
如附图7所示，用10°浓度体细胞淋巴细胞与10-1-10-6细菌细胞(枯草杆菌)混合与单独测试10-1-10-6细菌细胞(枯草杆菌)裂解催化发光做比较，结果发现当体细胞浓度较高的时候对细菌总数的准确测定有很严重的干扰，要想准确测定必须排除非细菌三磷酸腺苷(ATP)干扰。
如附图8所示，利用本发明试剂组及过滤比色杯装置去除非细菌ATP，将活塞式加压器5设置在过滤比色杯装置6上，过滤比色杯装置6设置在过滤比色杯架11上，过滤比色杯中设有本发明试剂组，各种试剂及细菌和体细胞在其中进行反应后，将干扰物8、非细菌细胞ATP进行裂解分离，而细菌细胞不变，过滤比色杯下面设有吸水纸，可以吸收分离后的物质。过滤时采取空气加压方式，过滤比色杯起到浓缩和富集细菌的作用。
如附图9所示，如需检测的溶液浓度达不到检测要求时，则需要对其进行浓缩处理，如附图10所示，在注射器前端设置专用浓缩器来进行浓缩。
Claims (8)
1、一种细菌总数快速检测试剂套组，其特征在于：该试剂组主要包括体细胞三磷酸腺苷释放试剂组和细菌细胞一体化裂解发光试剂组；体细胞三磷酸腺苷释放试剂组主要组份为按体积百分比取0.001％-0.05％的Triton X-100、使细菌稳定的稳定剂、表面活性剂；细菌细胞一体化裂解发光试剂主要组份及各组份浓度及质量比为：
以下所有的百分比皆为该溶液在混合后的溶液中的体积百分比
萤火虫荧光素酶 0.1μg/ml-15mg/ml
虫荧光素 0.03mM-0.9mM
Triton X-100或Triton X-20或Triton X-60或Triton X-80中的一种
0.1％-10％
缓冲液 0.005％-0.5％
牛血清白蛋白 0.2mg/ml-5mg/ml
含有二硫键的抗氧化剂 0.1mM-10mM。
2、根据权利要求1所述的细菌总数快速检测试剂套组，其特征在于：体细胞三磷酸腺苷释放试剂组中的稳定剂为0.15MNacl或由磷酸氢二钠8.1mM、磷酸二氢钾1.5mM、氯化钾2.7mM、PH7.2(PBS PH7.2)构成的稳定剂；表面活性剂为0.001％-0.5％的Tween 20或Tween60或Tween 80。
3、根据权利要求1所述的细菌总数快速检测试剂套组，其特征在于：细菌细胞一体化裂解发光试剂中的缓冲液主要组分和浓度及质量比如下：
Tricine或Tris中的一种 1mM-50mM
硫酸镁或醋酸镁或氯化镁中的一种 0.5mM-10mM
EDTA 0.1mM-20mM
用NaOH调整pH值为7.8。
4、根据权利要求1所述的细菌总数快速检测试剂套组，其特征在于：抗氧化剂为DTT或通过加入巯基乙醇(2-mercaptoethanol)提供二硫键来防止萤火虫荧光素酶被异常氧化做抗氧化剂其浓度通常为0.003-0.05％，优选DTT。
5、根据权利要求1所述的细菌总数快速检测试剂套组，其特征在于：释放试剂组中的Triton X-100用其它低浓度的提取剂代替，如十六烷基三甲基溴化铵0.0005％-0.001％、二甲亚砜0.01％-0.05％，都可得到不会裂解细菌细胞而只裂解体细胞的裂解剂。
6、一种细菌总数快速检测装置中的过滤比色杯，其特征在于：该过滤比色杯由透明材料的杯身和0.1μm-1.0μm孔径的虑膜制成的杯底构成，其杯身和杯底为不与体细胞三磷酸腺苷释放试剂组和细菌细胞一体化裂解发光试剂组发生发应的材料制成。
7、根据权利要求6所述的细菌总数快速检测装置中的过滤比色杯，其特征在于：透明材料的杯身采用玻璃或合成材料构成，合成材料为透明的聚丙烯或透明的聚苯乙烯，底部0.1μm-1.0μm孔径的滤膜，采用聚四氟乙烯或聚碳酸酯或硝酸纤维材料制成。
8、根据权利要求6所述的细菌总数快速检测装置中的过滤比色杯，其特征在于：杯身内的上部设有活塞式加压器。
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