CN1695956A - 一种活字印刷术－组织切片制备及组织芯片填补的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种活字印刷术式的组织学切片方法，将带有有机黏附剂的片基粘附于蜡块表面进行切片，并将切下的切片贴于载玻片上烤片，经过烤片后的玻片，冷却后放入有机溶液中溶解黏附剂和石蜡，该方法在制备组织芯片或对组织芯片修补有着良好的应用前景。
Description
一、技术领域
本发明涉及一种组织学切片方法，更具体地，涉及一种利用载体黏附的切片方法。
二、背景技术
随着组织学、病理学的发展，人们对人体或其他动植物的认识，从解剖学上的器官水平向组织、细胞水平发展。但由于对组织、细胞的观察需要通过显微镜的工具进行。但由于完整的器官很难用显微镜观察，因此需要把器官切成很薄的切片进行染色观察，为了解决这个问题，出现了组织切片方法。该方法的原理是通过把器官切成小块组织，用福尔马林固定后，利用酒精脱去该组织中的水分，再浸入二甲苯或苯溶液脱去酒精，最后组织块浸入熔化石蜡溶液中脱去二甲苯，放入模具内用石蜡溶液进行包埋，冷却后形成石蜡块。该石蜡块利用切片机进行切片，形成含有组织薄片的石蜡切片，如果连续切片，石蜡切片由于切片时产生的微热使切片边缘彼此粘着，形成石蜡切片条。把石蜡切片裱于玻璃片上再进行脱蜡，染色、封片后就可以用显微镜进行观察研究。
该切片方法的发明给组织学、病理学的发展带来了极大促进，并且该方法已经成为组织学技术中最经典的方法。但该方法同样存在一些不足之处。由于石蜡经过切片后形成的石蜡切片很薄，容易卷曲、破裂，何粘连出现皱褶，做成切片后由于组织片破裂、重叠给观察、研究带来困难。为了解决上述问题，出现了利用把石蜡切片漂浮在一定温度的水上，利用水的张力，展平切片，把载玻片一半浸入水里，用镊子把一片石蜡切片拔靠在玻片面，抽出载玻片，即将粘贴在载玻片上的切片带出。将载玻片竖立排水，置于架格上放入高于石蜡熔点的烤箱内进行烤片。然后脱蜡、染色、封片进行观察。该方法部分解决了石蜡切片的粘连出现皱褶的问题。但由于该方法对操作人员的专业技术要求高，石蜡切片漂浮于水中容易黏附其他切片的碎片，造成污染。并且，该方法不能解决组织卷曲的问题。
近年来，出现了组织芯片技术，该技术将数十个、数百个乃至上千个小的组织片整齐地排列在某一载体上(通常是载玻片)而制作成微缩组织切片，其基本操作程序(如图13所示)包括：设计并拟定组织芯片的分类系列、核对组织或有关疾病的病理诊断、组织定位、阵列蜡块的制作、再从源蜡块上钻取组织并转移到空白石蜡块的相应位置、组织芯片切片。组织芯片的特点有：体积小、信息含量大、高通量；减少或避免了对原始组织蜡块的破坏；组织样本的定位准确，减少无效组织；批量制作及可能的结果分析自动化；不同来源的病例的处理、染色和分析条件相同。
由于组织芯片蜡块的样本量以数十～数百个为多，组织数多，组织小，并且都包含在一张石蜡切片中，因此切片、裱片难度极高。为了解决上述问题，有人发明了一种利用胶片的切片方法，该方法通过带有特殊黏附剂的胶片，特殊黏附剂——能通过紫外线照射或者其他物理化学方式使之分解的黏附材料，将靶目标固定在切片机的样品夹上，取一段带有特殊黏附剂的胶带(面积要比靶目标稍微大一些)，取下背面底板，通过胶带上的特殊黏附剂紧密贴附在靶目标表面，用橡胶滚轴在胶带上轻轻捻滚使二者充分接触，切片机转换到切片模式，根据实际要求选择切片厚度1～20微米，将靶目标切下取一铝膜避光包装防脱片处理具有黏附性的载玻片，撕开铝膜，把黏附了靶目标的胶带紧贴在载玻片的表面上，用橡胶滚轴在胶带上轻轻捻滚使二者充分接触，将他们浸入DEPC水中用紫外线灯管照射胶带表面5分钟，胶带上的特殊黏附剂在紫外线的作用下分解，关闭紫外线灯管，将他们从DEPC水中取出，轻轻将胶带揭去，这时靶目标留在载玻片上。但由于该方法极为繁琐，并且需要特殊的设备和试剂，价格昂贵，很难推广使用，并且使组织切片或组织芯片成本明显上升。
在组织芯片制作过程中，会出现“无效组织”问题和样本组织点移位缺失问题。“无效组织”问题：在组织芯片制作之前，先要对组织蜡块进行诊断和标记，这时诊断和标记的仅仅是组织的表面，而组织深层的结构变化通过表面是无法探知的，如一块肿瘤组织芯中，有的是肿瘤组织、有的是称为“无效组织”的肿瘤坏死组织，纤维、血管组织等等，这样常常会造成部分组织点与原模板设计和原诊断不符的现象，这种现象几乎是无法避免的，在所有肿瘤组织中均可以出现，过多的“无效组织”的芯片只能作为废片处理。样本组织点移位缺失问题：组织芯片制作程序繁多，而且组织芯长短不一，组织芯与受体蜡块结合不紧密，切片展片时组织芯可能会偏移甚至脱落。这两个问题使组织芯片产品的合格率十分低。
三、发明内容
本发明的目的是提供一种高效、简便和低成本的切片制备方法及对组织芯片中无效组织样本和缺失组织样本进行修补的方法，以克服上述中的不足之处。本发明的主要构思是，利用有机黏附剂及石蜡可溶于有机溶液中，并且切片经过烤片后即与载玻片牢固粘附，并可用有机溶液去除石蜡而不会发生掉片的原理，完成本发明构思。发明的内容是，取一段为带有机黏附剂的片基，粘附于蜡块表面，适当加压使片基充分与石蜡块接触，进行切片。有机粘附剂可以是丙烯酸类，也可以是可溶于有机溶液(苯、二甲苯)等黏附剂。片基可以是胶片，也可是玻璃纸，生物膜、聚二氟乙烯膜、硝酸纤维膜或纸等材料。切下的石蜡切片黏附片基上，也可以重复上述步骤，形成的连续切片黏附于片基上。根据需要，选择适当的大小切片贴于载玻片上，进行烤片。该载玻片可以是经过处理的，以增加对组织的附着力。经过烤片后的玻片，冷却后放入有机溶液中，溶解石蜡和黏附剂。该有机溶液可以是苯、二甲苯或其他有机溶液。黏附剂溶解后，片基自动从玻片上脱落，组织牢固附在玻片上。之后的处理同常规组织技术处理方式。
同样，我们也可以根据需要选取适当大小切片或裁剪片基，黏附于玻片上，形成不同形状和方式的组织排列，并根据需要对组织切片上缺失的组织进行活字印刷术式的修补。
下面结合附图和具体实施例进一步阐述本发明。
附图说明：
图一胶带粘附于蜡块表面
图二切片过程
图三带有组织芯片切片的胶带粘附在玻片上
图四烤片过程
图五脱蜡、脱黏附剂
图六缺点的组织芯片示意图
图七胶带粘附于补点蜡块表面
图八切片过程
图九带有补点切片的胶带粘附在缺点芯片上
图十烤片过程
图十一脱蜡、脱黏附剂
图十二补完点后的组织芯片
图十三切片方法的流程示意图
实例1组织芯片切片制备
第一步如图1所示：石蜡组织阵列块(2)固定在切片机的样品夹(1)上使用切片机在修片模式切修样品表面将靶目标充分暴露，取一段带有有机黏附剂的胶带(3)(面积要比靶目标稍微大一些)，取下背面底板，通过胶带上的黏附剂紧密贴附在靶目标表面，用橡胶滚轮(4)轻轻碾压胶片，使二者紧密黏附。
第二步如图2所示：用组织切片机刀片(5)按照使用需要的厚度(1～20μm)将黏附了组织芯片的胶带(3)从样品夹(1)上的石蜡组织阵列块(2)表面切下。
第三步如图3所示：把带有组织芯片切片的胶带(3)黏附在经过载玻片(6)上，用橡胶滚轮(4)碾压使二者紧密黏附。
第四步如图4所示：黏附好转移胶带的载玻片置于60℃烤片机(7)上，使组织芯片的石蜡融化，组织样本与载玻片结密结合。第五步如图5所示：冷却后，将载玻片放于有机溶液(苯，二甲苯等有机溶液)(10)中10-15分钟，溶解胶带上的背胶，胶带自动脱落或可以轻轻揭下胶带(3)，组织芯片完整地黏附在载玻片上即组织芯片(9)，用于HE染色，免疫组化，原为杂交等实验领域。
实例2用于填补组织芯片中缺失的组织样本
该方法也可以用于对组织芯片中缺失的组织样本进行修补，也就是活字印刷修补法。
第一步如图6所示：组织芯片制作过程中从病理蜡块中抽提组织芯，病理蜡块的厚度不同组织芯长短也不同，将不同长度的组织芯做成组织阵列后进行切片，就可能造成阵列片中有部分样本点缺失，同时在抽提组织芯时也可能个出现错误，样本点与实际阵列设计有出入如：肿瘤组织取成非肿瘤组织，腺体组织取成肌层组织或坏死组织等，我们可以将错误的样本点除去，形成缺失部分点的组织芯片。
第二步如图7所示：按照阵列设计将要填补样本点的组织芯排列在一个空白蜡块中，将包含样本点组织芯的蜡块(11)固定在切片机的样品夹(1)上使用切片机在修片模式切修蜡块表面将样本点充分暴露，取一段带有有机黏附剂的胶带(3)(面积要比蜡块稍微大一些)，取下背面底板，通过胶带上的黏附剂紧密贴附在蜡块表面，用橡胶滚轮(4)轻轻碾压胶片，使二者紧密黏附。
第三步如图8所示：用组织切片机在切片模式下用刀片(5)按照需要的厚度(1～20μm，通常为5μm)将黏附了样本点组织的胶带(3)从样品夹(1)上包含样本点组织芯的蜡块(11)表面切下。
第四步如图9所示：将带有样本点组织的胶带(3)对应黏附在缺失部分点的组织芯片(12)上缺失点的部位上(如果位置有差异可以将带有样本点的胶带作相应裁减使其逐一对应在缺失点的位置上)，用橡胶滚轮(4)碾压使二者紧密黏附。
第五步如图10所示：黏附了缺失样本点组织胶带的组织芯片置于60℃烤片机(7)上，使样本点组织的石蜡融化，样本点组织与芯片结密结合。
第六步如图11所示：冷却后，将黏附了缺失样本点组织胶带的组织芯片放于有机溶液(苯，二甲苯等有机溶液)(10)中10-15分钟，溶解转移胶带上的背胶，胶带自动脱落或可以轻轻揭下胶带(3)，要填补的样本点完整地黏附在缺失样本点的组织芯片(13)上，最终完成修补好样本点的组织芯片，如图12所示。
应理解，本说明书之题目及本说明书所述及之实施例仅用于说明本发明而不用于对本发明的范围进行限制。
Claims (6)
1、一种组织学切片方法，包括组织蜡块的制作，其特征在于将带有机黏附剂的片基粘附于蜡块表面进行切片，并将切下的切片贴于载玻片上烤片，经过烤片后的玻片，冷却后放入有机溶液中溶解黏附剂和石蜡。
2、根据权利要求1所述的一种组织学切片方法，其特征在于所述有机黏附剂为丙烯酸类黏附剂或可溶于有机溶液的黏附剂。
3、根据权利要求1所述的一种组织学切片方法，其特征在于所述片基可以是胶片，也可是玻璃纸、生物膜、聚二氟乙烯膜、硝酸纤维膜或纸。
4、根据权利要求1所述的一种组织学切片方法，其特征在于所述玻片可以是经过防脱片处理。
5、根据权利要求1或2所述的一种组织学切片方法，其特征在于所述有机溶液为苯或二甲苯溶液。
6、据权利要求1所述的一种组织学切片方法，其特征在于在修补组织芯片中缺失的组织样本中的应用。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |
Denomination of invention: Method for repairing tissue specimen deficient from tissue chip Effective date of registration: 20190805 Granted publication date: 20090923 Pledgee: Hongkou Branch of Shanghai Rural Commercial Bank Co.,Ltd. Pledgor: SHANGHAI OUTDO BIOTECH Co.,Ltd. Registration number: Y2019310000002 |
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| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right | ||
| CX01 | Expiry of patent term |
Granted publication date: 20090923 |
|
| CX01 | Expiry of patent term |