CN1680355A - 一种治疗慢性咽炎、慢性扁桃体炎的中药有效部位山香园总黄酮的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明的目的是提供一种治疗慢性咽炎、慢性扁桃体炎的中药植物药有效部位——山香园总黄酮(TFS)的制备方法与其药物应用。以山香圆苷A计，分光光度法测总黄酮≥50％，测定波长266±2nm。由途径一制得的总黄酮可制成片剂、咀嚼片、口含片、分散片、胶囊、软胶囊、口服液、糖浆剂、滴丸、注射剂；由途径二制得的总黄酮可制成片剂、咀嚼片、口含片、分散片、胶囊、软胶囊、口服液、糖浆剂、滴丸。

Description

一种治疗慢性咽炎、慢性扁桃体炎的中药有效部位山香园总黄酮的制备方法

技术领域

本发明属于一种中草药山香园叶有效部位的制备方法，具体的说是一种治疗慢性咽炎、慢性扁桃体炎的中药——山香园总黄酮(TFS)的制备方法与其药物应用。

背景技术

慢性咽炎是发病率高、病程长、较难治愈的慢性疾病。中医称慢性咽炎为“虚火喉痹”，分为阴虚型、气虚型和痰热型等证型，并时有兼证。本病的病变主要是咽部慢性充血、增生等炎症病变。据报道：在我国咽炎发病率约占15％；它不仅妨碍患者的正常工作和生活，给患者带来很大痛苦，也可能引起其他严重感染，加重病情，随着现代医学的发展，改进生活质量方面的治疗已日益受到人们的重视，治疗方案中的比例也日趋增大。传统药物其疗效不确切、易产生耐药性、副作用较多，不能从根本上解决患者的痛苦；化学药品因其存在一定的副作用，在市场上占据份额较小；中药产品因其副作用低，可减轻患病时症状而在市场上占据很大的份额。研制疗效确切的中药品种并按GMP生产，既有广阔的国内市场，又可作为“绿色中药”进军东南亚、北美与西欧市场，产生的经济效益与社会效益将十分显著。

山香圆(Turpinia arguta Seem)为我国传统中草药，系省沽油科山香圆属植物，其叶具有较好的抗菌消炎作用，临床上主要用于治疗扁桃体炎、咽喉炎、扁桃体脓肿等。山香园总黄酮(TFS)是从中药山香圆叶提取的有效部位，其主要有效成分为黄酮类成分。山香园总黄酮是现代化中药的产物，用其制成的胶囊剂等产品为新型治疗慢性咽炎、慢性扁桃体炎中成药。山香园总黄酮制剂与六神丸治疗慢性咽炎、慢性扁桃体炎的对比验证试验结果表明虽然有效率两者间无显著性差异(P＞0.05)，但显效率与痊愈率总黄酮制剂组为91％与67％，而六神丸组为75％与53％。体内抗菌试验表明粗制剂对小鼠腹腔感染金葡萄菌有明显保护作用。

发明内容

本发明的目的是提供一种治疗慢性咽炎、慢性扁桃体炎的中草药有效部位——山香园总黄酮(TFS)的制备方法与其药物应用。以山香圆苷A计，分光光度法测总黄酮≥50％，测定波长266±2nm。由途径一制得的总黄酮可制成片剂、咀嚼片、口含片、分散片、胶囊、软胶囊、口服液、糖浆剂、滴丸、注射剂；由途径二制得的总黄酮可制成片剂、咀嚼片、口含片、分散片、胶囊、软胶囊、口服液、糖浆剂、滴丸。

本发明的技术方案如下：

山香园总黄酮的制备方法：将山香园叶经过水提醇沉、滤过、浓缩的提取工段→上柱液的处理后用树脂吸附的富集工段→硅胶吸附的精制工段。还提供了精制工段可选择的两条所得山香园总黄酮制成不同剂型药物的途径。

一种治疗慢性咽炎、慢性扁桃体炎的中药有效部位山香园总黄酮的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)提取工段

乙醇提取山香园叶中草药得到醇提取液，回收乙醇并浓缩得清膏；

(2)树脂富集工段

③上柱液的处理

清膏用水稀释，再加乙醇溶解，过滤得到醇提液，沉淀保存备用，醇提液回收乙醇后，再用水稀释得上柱液；

④树脂吸附与解吸

将上柱液过处理好的D101型或D201型大孔吸附树脂柱，以水或稀乙醇洗脱树脂柱上吸附的杂质；再用50～95％乙醇洗脱树脂柱上吸附的有效成份，收集醇洗脱液，回收乙醇并浓缩得到浓缩液；

(3)精制工段

将树脂富集工段得到的浓缩液，加入粗硅胶搅匀，再烘干或晾干，然后用乙醇提取硅胶吸附的有效成份，醇提液回收乙醇，真空干燥，研匀，包装，即得山香园总黄酮的制备方法。

所述的制备方法，其特征在于将树脂富集工段中上柱液处理后的残渣，加0.01～0.1mol/L氢氧化钠溶液，加热至50～60℃搅拌溶解，离心，过滤，滤液加盐酸调节pH值至1～2，静置，离心，沉淀用乙醇加热溶解，分次加入粗硅胶拌样，将样品均匀吸附于硅胶上，再烘干或晾干；反复用乙醇回流提取，滤过，得醇提滤液，回收乙醇，真空干燥，研匀，即得总黄酮B，将同批投料药材的总黄酮A与总黄酮B混匀，即得山香圆总黄酮。

上述方法具体为：其特征在于树脂富集工段中上柱液处理后的残渣，加0.01～0.1mol/L氢氧化钠溶液(按投料药材量的1～2∶1)，加热至50～60℃搅拌溶解1～2小时，静置6～12小时，离心，过滤，滤液加盐酸调节pH值至1～2，静置24～48小时，离心，沉淀用适量乙醇(投料药材量与乙醇比为5～10∶1)，加热溶解，分次加入粗硅胶(投料药材量与硅胶比为3～6∶1)拌样，将样品均匀吸附于硅胶上；将拌样硅胶置于100～105℃干燥1～2小时(厚度1～2cm)，取出加3～6倍量乙醇回流提取6～8次，每次1～2小时，滤过，滤液回收乙醇，真空干燥，研匀，即得总黄酮B。

所述的制备方法，其特征在于：

(1)提取工段

取山香圆叶，净选，切丝(宽1～2cm)加10～12倍量(生药重量∶溶媒体积，下同)50～95％乙醇浸渍12～24小时，提取1～2小时，过滤，滤液备存；药渣再加相同浓度乙醇提取2~4次，每次加8～10倍量乙醇，每次1～2小时，滤过，滤液合并，回收乙醇并浓缩，得清膏；

(2)树脂富集工段

①上柱液的处理

将提取工段得到的清膏，加中性水稀释至生药重量∶水体积比为1～2∶1，加乙醇至含醇量30～40％，静置12～24小时，滤过，沉淀留存；滤液回收乙醇后，加中性水稀释至生药重量∶水体积至0.5～1∶1，加热至50℃，即可；

②树脂吸附与解吸

将上柱液，加于已处理好的D101型或D201型大孔吸附树脂柱上，以水或稀乙醇洗脱至洗脱液近无色；再用50～95％乙醇洗脱树脂柱至洗胶液近无色，收集醇洗脱液，回收乙醇并浓缩得到浓缩液；

(3)精制工段

将树脂富集工段得到的醇洗脱的浓缩液，加入40～80目粗硅胶搅匀，浓缩，再加入硅胶、乙醇，搅拌均匀，将样品均匀吸附于硅胶上为止；将带样硅胶置于100～105℃干燥1～3小时，取出，冷至室温，加入3～6倍量乙醇，提取6～8次，每次1～2小时，滤过，回收乙醇得清膏，真空干燥，研匀，包装，即得。

山香园总黄酮的制备方法，

所述的制备方法，其特征在于

(1)提取工段

取符合规定的山香圆叶，切1～2cm丝，取75kg(总黄酮含量以山香圆苷A计1.5％，投入多功能提取罐)，加12倍量80％乙醇，浸渍24小时，加热提取2小时，滤过，滤液打入浓缩罐；药渣再加10倍量80％乙醇提取4次、每次1小时，滤过，滤液打入浓缩罐，与第1次提取液合并浓缩，回收乙醇，并浓缩至清膏(34kg，相对密度1.10，60℃)。

(2)树脂富集工段

①上柱液的处理

将提取工段得到的清膏，加中性水(pH6.5～7.5，下同)稀释至生药∶水比为1～2∶1，加乙醇至含醇量30～40％，静置12～24小时，滤过，沉淀留存(含有黄酮苷元成分)；滤液回收乙醇至无醇味(相对密度1.05～1.10)，加中性水稀释至生药∶水至0.5～1∶1，加热至50℃，即可；

②树脂吸附与解吸

将上柱液，加于已处理好的D101型(AB-8型)或D201型大孔吸附树脂柱上(按生药∶树脂体积比＝1～3∶1)，以水或稀乙醇(1～10％)，洗脱至洗脱液近无色(流速视柱径大小调节)；再用50～95％乙醇洗脱至洗胶液近无色(不含黄酮类成分，取300ml回收溶剂移至水浴锅蒸干，残渣经盐酸-镁粉反应应为阴性)，收集醇洗脱液，回收乙醇并浓缩得到浓缩液(相对密度1.15～1.20，50℃)。

(3)精制工段

将树脂富集工段得到的醇洗脱的浓缩液，在相对密度至1.05～1.08时，加入适量的粗硅胶(40～80目，投料药材量的1～2％)，搅匀，浓缩至上层液相对密度1.10～1.20时，再加入适量硅胶(投料药材量的5～10％)，再加适量乙醇，搅拌均匀，将样品均匀吸附于硅胶上为止；将带样硅胶置于100～105℃干燥1～3小时(厚度1～3cm)，取出，冷至室温，加入3～6倍量乙醇，提取6～8次，每次1～2小时，滤过，回收乙醇，真空干燥，研匀，包装，即得(以山香圆苷A计，分光光度法测总黄酮≥50％，测定波长：266±2nm)。

山香园总黄酮用于药物各种剂型的研制开发，由途径一制得的总黄酮可制成片剂、咀嚼片、口含片、分散片、胶囊、软胶囊、口服液、糖浆剂、滴丸、注射剂；由途径二制得的总黄酮可制成片剂、咀嚼片、口含片、分散片、胶囊、软胶囊、口服液、糖浆剂、滴丸。

药效学研究

根据中药药效研究指导原则，治疗本病药物的药效学指标之一应以抑制细胞增殖的急性和慢性炎症为主。山香园总黄酮(TFS)抗炎作用实验采用了急性、亚急性及免疫性炎症模型，结果表明TFS能明显抑制二甲苯所致鼠耳肿胀、角叉菜性足肿胀、棉球肉芽肿，且疗效优于阳性对照药。此外，我们对AA大鼠采用了预防加治疗的方式于致炎后第12天ig给药，发现TFS不仅对AA大鼠的原发性和继发性炎症有较好的治疗作用，而且对继发性病变以多发性关节炎为特征的慢性周身炎症也有明显的改善作用。综上所述，TFS具有明显的抗炎作用。

TFS对二甲苯诱导小鼠耳肿胀的影响

昆明种小鼠50只，随机分为5组，每组10只。灌胃给药，每天1次，连续3d。末次给药后1h于小鼠左耳前后两面涂抹二甲苯0.05ml，右耳作对照，2h后将小鼠脱颈处死，沿耳廓基线剪下两耳，用直径9mm的打孔器分别在同一部位打下圆耳片，称重，以左右耳片之差为肿胀度。

用TFS(120、240、480mg/kg)ig3d对二甲苯诱导的小鼠耳水肿有明显的抑制作用。见表1。

表1 TFS对二甲苯诱导的小鼠耳胀的影响(n·10，X± s)

组别	剂量(mg/kg)	耳肿胀度(mg)
			模型TFS山香圆*	-1202404808880	18.03.314.1±2.8′13.1±3.9″8.1±3.0″12.2±3.8″

与模型组比较：′ρ＜0.05，″ρ＜0.01。

^*相当于生药量。(下同)

TFS对角叉菜胶诱导大鼠足肿胀的影响

取SD大鼠50只，分组与给药同前。于每鼠右足趾皮下注射10g/l角叉菜胶0.1ml致炎，分别在致炎前和致炎后1、3、5、7h，用Volumemeter测量致炎侧足容积，以各鼠致炎前、后容积的差值为肿胀度。

TFS(80、160、320mg/kg)ig3d，各时间段均可明显抑制角叉菜胶诱导的大鼠足肿胀，与模型组相比均有显著性差异(P＜0.05)。见表2。

                              表2 TFS对角叉菜胶诱导大鼠足肿胀的影响(n·10，X± s)

组别	剂量(mg/kg)	致炎前足容积(ml)	大足肿胀(ml)1h                 3h                  5h                  7h
							模型TFS山香圆	-801603205920	2.63±0.132.52±0.162.49±0.172.55±0.112.53±0.20	0.48±0.170.41±0.110.32±0.17′0.27±0.17″0131±0.14″	1.23±0.190.93±0.16″0.72±0.16″0.47±0.15″0.78±0.18″	0.92±0.110.62±0.13″0.51±0.19″0.35±0.15″0.51±0.23″	0.69±0.210.51±0.15′0.42±0.18″0.27±0.14″0.40±0.18″

与模型组比较：′ρ＜0.05，″ρ＜0.01。

TFS对棉球诱导大鼠肉芽肿的影响

取SD大鼠50只，分组同前。乙醚浅麻醉，无菌条件下，将棉球〔每个(50±1)mg，高压灭菌后加氨苄西林0.1ml(1mg)，50℃烘干〕，分别植入大鼠两侧腹股沟皮下。手术当天开始灌胃给药，连续7d。第8天颈椎脱臼致死，取出棉球，置60℃烤箱烤至恒重，减去原棉球净重，即为肉芽肿净重，以10mg/kg计算。TFS(80，160，320mg/kg)ig7d对棉球诱导的大鼠肉芽肿有明显的抑制作用。见表3。

   表3 TFS对棉球诱导大鼠肉芽肿的影响(n·10，X± s)

组别	剂量(mg/kg)	肉芽肿重量(g/kg)
			模型TFS山香圆	-801603205920	4.48±0.8693.95±0.6043.26±0.707″2.16±0.704″2.82±0.721″

与模型组比较：′ρ＜0.05，″ρ＜0.01。

TFS对AA大鼠原发性与继发性炎症的影响

模型制备：将灭活的卡介苗(80℃水浴1h)加入无菌的液体石蜡中，乳化制成Freund完全佐剂。卡介苗的浓度为10g/l，于每鼠左后足趾皮内注射Freund完全佐剂0.1ml致炎。

观察指标：取SD大鼠60只，♂，分组同前。致炎前3dig给药，分别于致炎前，致炎后6h，12h，18h及24h，用Volumemeter检测致炎前、后大鼠致炎侧足肿胀，以观察AA大鼠原发性病变；致炎后12d开始ig给药，并检测非致炎侧足肿胀，每4天1次，以致炎前后足容积差为肿胀度。同时进行关节评分(0～4)：0、无红肿；1、足小趾关节红肿；2、趾关节红肿、足跖均红肿；3、踝关节以下均红肿；4、包括踝关节，全部红肿；除致炎侧外，三足的积分之和为关节总积分，最高为12分，以评分值对AA大鼠多发性关节炎进行评估，以观察AA大鼠继发性病变。

TFS对角叉菜胶诱导大鼠足肿胀的影响：TFS(80、160、320mg/kg)ig3d，各时间段均可明显TFS对AA大鼠原发炎症的影响，致炎前3d ig给药，结果发现，TFS(80、160、320mg/kg)不同时间段均可明显抑制AA大鼠的原发性足肿胀，与模型组相比差异均有显著性(P＜0.05)。见表4。

                                   表4 TFS对AA大鼠原发性炎症的影响(n·10，X± s)

组别	剂量(mg/kg)	致炎前足容积(ml)	致炎后不同时间足肿胀度(ml)6h                  12h              18h                    24h
							模型TFS山香圆萘普生	-80160320592030	1.99±0.122.06±0.182.03±0.232.08±0.172.12±0.211.95±0.24	0.95±0.240.93±0.430.70±0.26′0.59±0.19″0.90±0.310.65±0.21″	1.68±0.151.46±0.291.18±0.27″0.79±0.18″1.16±0.31″1.01±0.30″	1.99±0.211.65±0.36′1.40±0.38″1.18±0.34″1.32±0.29″1.21±0.29″	1.83±0.241.34±0.34″1.05±0.33″0.90±0.32″0.92±0.24″0.82±0.24″

与模型组比较：′ρ＜0.05，″ρ＜0.01。

TFS对AA大鼠继发性炎症的影响：TFS(80、160、320mg/kg)ig×10d，不同时间段均可明显抑制AA大鼠的继发性足肿胀和多发性关节炎，与模型组相比均有显著性差异(P＜0.05)。见表5、6

                                  表5 TFS对AA大鼠继发性足肿胀的影响(n·10，X± s)

组别	剂量(mg/kg)	致炎前足容积(ml)	致炎后不同时间足肿胀度(ml)12d             16d              20d           24d              28d
								模型TFS山香圆来氟米特	-8016032059206	2.11±0.112.11±0.171.98±0.222.08±0.132.10±0.232.06±0.21	0.30±0.080.32±0.070.29±0.060.31±0.080.29±0.070.25±0.04	0.36±0.070.35±0.100.33±0.070.31±0.070.31±0.090.29±0.08′	0.47±0.090.37±0.08′0.35±0.06″0.29±0.07″0.34±0.06″0.25±0.07″	0.4±0.080.32±0.07″0.29±0.05″0.24±0.06″0.28±0.06″0.22±0.05″	0.39±0.08″0.30±0.06″0.27±0.04″0.20±0.05″0.23±0.06″0.20±0.04″

与模型组比较：′ρ＜0.05，″ρ＜0.01。

                           表6 TFS对AA大鼠多发性关节炎的影响(n·10，X± s)

组别	剂量(mg/kg)	致炎后不同时间足肿胀度(ml)12d             16d              20d               24d                28d
							模型TFS山香圆来氟米特	-80160320592012	5.3±1.34.3±0.74.2±1.24.6±1.44.8±2.04.2±1.7	7.9±1.56.4±1.1′5.8±1.0″6.5±1.0′6.1±1.7′6.2±1.7′	9.0±1.48.8±1.47.2±1.9′5.8±1.3″6.9±1.4′5.6±1.6″	8.8±1.16.7±1.1″6.4±1.3″5.1±1.0″6.1±1.3″4.7±1.4″	7.8±0.85.7±1.0″4.9±1.0″4.5±0.5″5.3±0.9″4.4±0.7″

与模型组比较：′ρ＜0.05，″ρ＜0.01。

临床研究

山香园总黄酮原料药材山香园叶在我国民间医药应用治疗上述病症已有几百年历史。将该总黄酮制剂作为临床验证组100例，六神丸(武汉健民制药厂生产)对照组61例，以中医病种风热喉痹、喉喑、风热乳蛾(西医病种慢性咽炎、慢性扁桃体炎)进行临床研究，结果显示：两组病例其中验证组有效率为100％，显效率平均为91％，痊愈率平均为67％；对照组有效率为98％，显效率平均为74.5％，痊愈率平均为52.5％。经统计分析：有效率P＞0.05没有差异，痊愈率P＜0.05有显著差异，显效率P＜0.01有极显著差异。说明本品在治疗风热喉痹、喉喑、风热乳蛾的研究中痊愈率和显效率明显优于六神丸。在治疗风热喉痹(显效率92.5％)，风热乳蛾(显效率97％)，比治疗喉喑(显效率75％)效果更好。

本品具有清热解毒、利咽消肿。用于慢性咽炎、慢性扁桃体炎的治疗，也可用于口腔感染、急性咽炎等的治疗。

具体实施方式

所述的制备方法：

途径一

(1)提取工段

取符合规定的山香圆叶，切1～2cm丝，称取75kg(总黄酮含量以山香圆苷A计1.5％，投入多功能提取罐)，加12倍量80％乙醇，浸渍24小时，加热提取2小时，滤过，滤液打入浓缩罐；药渣再加10倍量80％乙醇提取4次、每次1小时，滤过，滤液打入浓缩罐，与第1次提取液合并浓缩，回收乙醇，并浓缩至清膏(34kg，相对密度1.10，60℃)。

(2)树脂富集工段

①上柱液的处理

将提取后的清膏，加中性水稀释至生药重量∶水体积比1∶1，搅匀，加乙醇至含醇量达40％，搅匀，静置48小时，离心，滤过，沉淀留存；滤液回收乙醇至无醇味(相对密度1.10～1.15，50℃)，加中性水稀释至生药重量∶水体积比1∶1，即75L。

②树脂吸附与解吸

将上柱溶液加热至50℃，加上已处理好D101型大孔吸附树脂柱上(30kg)，用10％乙醇洗脱至滤出液呈近无色(流速2BV/hr)；再用70％乙醇洗脱至流出液不含黄酮成分(200ml，回收乙醇，浓缩液移至蒸发皿，于水浴上蒸干，残渣经盐酸-镁粉反应呈阴性)。

③精制工段

将解吸得到的乙醇液，回收乙醇并浓缩至相对密度约1.08时，加入粗硅胶(40～80目)2kg，搅匀，继续浓缩至上层液相对密度约1.15时，分次加入硅胶6kg，拌匀，将样品均匀吸附于硅胶上，将拌样硅胶置于105℃干燥2小时，加入3倍量乙醇提取6次，每次2小时，滤过，滤液合并，减压回收，真空干燥，研匀，得总黄酮730g(总黄酮含量67.1％，转移率约44％)。

途径二：

(1)提取工段  同途径一项下操作

(2)树脂富集工段  同途径一项下操作

(3)精制工段

①树脂解吸后处理得到总黄酮A：730g。

②将树脂富集工段醇沉后的沉淀，加0.05mol/L氢氧化钠50L，加热至50℃，搅样溶解2小时，静置6小时，离心，过200目滤布，滤液加盐酸调节pH值1～2，静置36小时，离心，沉淀加乙醇10L，加热溶解，分次加入硅胶16kg，拌样，将样品均匀吸附于硅胶上，置105℃干燥2小时，加3倍量乙醇，提取6次、每次2小时，滤过，滤液合并，回收乙醇，真空干燥，得到总黄酮B529g，将总黄酮A与总黄酮B合并，得到山香圆总黄酮1259g(总黄酮含量以山香圆苷A计，分光光度法测54.2％，转移率约61％)。

所述的药物应用：

山香园总黄酮用于药物各种剂型的研制开发，由途径一制得的总黄酮可制成片剂、咀嚼片、口含片、分散片、胶囊、软胶囊、口服液、糖浆剂、滴丸、注射剂；由途径二制得的总黄酮可制成片剂、咀嚼片、口含片、分散片、胶囊、软胶囊、口服液、糖浆剂、滴丸。

Claims (5)

1、一种治疗慢性咽炎、慢性扁桃体炎的中药有效部位山香园总黄酮的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)提取工段

乙醇提取山香园叶中草药得到醇提取液，回收乙醇并浓缩得清膏；

(2)树脂富集工段

①上柱液的处理

清膏用水稀释，再加乙醇溶解，过滤得到醇提液，沉淀保存备用，醇提液回收乙醇后，再用水稀释得上柱液；

②树脂吸附与解吸

将上柱液过处理好的D101型或D201型大孔吸附树脂柱，以水或稀乙醇洗脱树脂柱上吸附的杂质；再用50～95％乙醇洗脱树脂柱上吸附的有效成份，收集醇洗脱液，回收乙醇并浓缩得到浓缩液；

(3)精制工段

将树脂富集工段得到的浓缩液，加入粗硅胶搅匀，再烘干或晾干，然后用乙醇提取硅胶吸附的有效成份，醇提液回收乙醇，真空干燥，研匀，包装，即得山香园总黄酮的制备方法。

2、据权利要求1所述的制备方法，其特征在于将树脂富集工段中上柱液处理后的残渣，加0.01～0.1mol/L氢氧化钠溶液，加热至50～60℃搅拌溶解，离心，过滤，滤液加盐酸调节pH值至1～2，静置，离心，沉淀用乙醇加热溶解，分次加入粗硅胶拌样，将样品均匀吸附于硅胶上，再烘干或晾干；反复用乙醇回流提取，滤过，得醇提滤液，回收乙醇，真空干燥，研匀，即得总黄酮B，将同批投料药材的总黄酮A与总黄酮B混匀，即得山香圆总黄酮。

3、根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于

(1)提取工段

取山香圆叶，净选，切丝(宽1～2cm)加10～12倍量(生药重量∶溶媒体积，下同)50～95％乙醇浸渍12～24小时，提取1～2小时，过滤，滤液备存；药渣再加相同浓度乙醇提取2~4次，每次加8～10倍量乙醇，每次1～2小时，滤过，滤液合并，回收乙醇并浓缩，得清膏；

(2)树脂富集工段

①上柱液的处理

将提取工段得到的清膏，加中性水稀释至生药重量∶水体积比为1～2∶1，加乙醇至含醇量30～40％，静置12～24小时，滤过，沉淀留存；滤液回收乙醇后，加中性水稀释至生药重量∶水体积至0.5～1∶1，加热至50℃，即可；

②树脂吸附与解吸

将上柱液，加于已处理好的D101型或D201型大孔吸附树脂柱上，以水或稀乙醇洗脱至洗脱液近无色；再用50～95％乙醇洗脱树脂柱至洗胶液近无色，收集醇洗脱液，回收乙醇并浓缩得到浓缩液；

(3)精制工段

将树脂富集工段得到的醇洗脱的浓缩液，加入40～80目粗硅胶搅匀，浓缩，再加入硅胶、乙醇，搅拌均匀，将样品均匀吸附于硅胶上为止；将带样硅胶置于100～105℃干燥1～3小时，取出，冷至室温，加入3～6倍量乙醇，提取6～8次，每次1～2小时，滤过，回收乙醇得清膏，真空干燥，研匀，包装，即得。

4、根据权利要求2所述的山香园总黄酮的制备方法，其特征在于树脂富集工段中上柱液处理后的残渣，加0.01～0.1mol/L氢氧化钠溶液(按投料药材量的1～2∶1)，加热至50～60℃搅拌溶解1～2小时，静置6～12小时，离心，过滤，滤液加盐酸调节pH值至1～2，静置24～48小时，离心，沉淀用适量乙醇(投料药材量与乙醇比为5～10∶1)，加热溶解，分次加入粗硅胶(投料药材量与硅胶比为3～6∶1)拌样，将样品均匀吸附于硅胶上；将拌样硅胶置于100～105℃干燥1～2小时(厚度1～2cm)，取出加3～6倍量乙醇回流提取6～8次，每次1～2小时，滤过，滤液回收乙醇，真空干燥，研匀，即得总黄酮B。

5、据权利要求1所述的制备方法，其特征在于

(1)提取工段

取符合规定的山香圆叶，切1～2cm丝，取75kg(总黄酮含量以山香圆苷A计1.5％，投入多功能提取罐)，加12倍量80％乙醇，浸渍24小时，加热提取2小时，滤过，滤液打入浓缩罐；药渣再加10倍量80％乙醇提取4次、每次1小时，滤过，滤液打入浓缩罐，与第1次提取液合并浓缩，回收乙醇，并浓缩至清膏(34kg，相对密度1.10，60℃)；

(2)树脂富集工段

①上柱液的处理

将提取工段得到的清膏，加中性水(pH6.5～7.5，下同)稀释至生药∶水比为1～2∶1，加乙醇至含醇量30～40％，静置12～24小时，滤过，沉淀留存(含有黄酮苷元成分)；滤液回收乙醇至无醇味(相对密度1.05～1.10)，加中性水稀释至生药∶水至0.5～1∶1，加热至50℃，即可；

②树脂吸附与解吸

将上柱液，加于已处理好的D101型(AB-8型)或D201型大孔吸附树脂柱上(按生药∶树脂体积比＝1～3∶1)，以水或稀乙醇(1～10％)，洗脱至洗脱液近无色(流速视柱径大小调节)；再用50～95％乙醇洗脱至洗胶液近无色(不含黄酮类成分，取300ml回收溶剂移至水浴锅蒸干，残渣经盐酸-镁粉反应应为阴性)，收集醇洗脱液，回收乙醇并浓缩得到浓缩液(相对密度1.15～1.20，50℃)；

(3)精制工段

将树脂富集工段得到的醇洗脱的浓缩液，在相对密度至1.05～1.08时，加入适量的粗硅胶(40～80目，投料药材量的1～2％)，搅匀，浓缩至上层液相对密度1.10～1.20时，再加入适量硅胶(投料药材量的5～10％)，再加适量乙醇，搅拌均匀，将样品均匀吸附于硅胶上为止；将带样硅胶置于100～105℃干燥1～3小时(厚度1～3cm)，取出，冷至室温，加入3～6倍量乙醇，提取6～8次，每次1～2小时，滤过，回收乙醇，真空干燥，研匀，包装，即得(以山香圆苷A计，分光光度法测总黄酮≥50％，测定波长：266±2nm)。