CN1676043A - 壳聚糖在饮料中的抗菌作用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及利用第一抗菌化合物(即壳聚糖、单宁酸或它们的混合物)与第二抗菌化合物(优选苯甲酸盐、山梨酸盐、EDTA或它们的混合物)联合用于抑制食品制品，特别是饮料中微生物生长的组合物和方法。本发明还涉及冷装填组合物和冷装填方法，在这种组合物和方法中单独使用壳聚糖或与第二抗菌化合物(优选苯甲酸盐、山梨酸盐、EDTA或它们的混合物)联合使用以杀死微生物和/或抑制饮料中微生物的生长。

Description

壳聚糖在饮料中的抗菌作用
发明领域
本发明涉及通过添加第一抗菌化合物(即壳聚糖、单宁酸、或它们的混合物)和第二抗菌化合物(优选苯甲酸盐、山梨酸盐、EDTA和它们的混合物)来杀死微生物和/或抑制微生物在饮料中生长的方法，特别是包含有果汁的饮料。另外，本发明涉及仅含有壳聚糖或与第二抗菌化合物联合使用的饮料。
发明的背景技术
在为人类的消费制造饮料时一个主要的关注点是微生物的生长。含果汁的饮料为细菌、霉菌和酵母菌的生长提供了一个适宜的生长环境。如不实施控制这种生长的措施，这些产品就会迅速变质。抑制微生物生长的方法包括在包装时进行巴氏杀菌(热包装)，和采用无菌的包装条件。尽管这些方法可以高效地除去那些造成产品变质的微生物，但其价格昂贵、不适合特定的饮料，以及与某些类型的容器相抵触。
防腐剂诸如山梨酸盐和苯甲酸盐也可以包含在饮料中以减少微生物的生长，并且当采用冷装填包装方法时经常使用这种防腐剂。但是，必须在防腐剂的有效浓度和随浓度提高产生的不利于风味的趋势之间找到一个平衡。因此，一直在不断寻找更好的防腐剂组合物。
发展更有效的防腐剂的尝试包括：应用多磷酸盐以提高山梨酸盐防腐剂的效能(U.S.专利5,431,940；还有U.S.专利6,294,214和6,440,482)；应用二碳酸二烷基酯(U.S.专利3,979,524)；将山梨酸盐防腐剂与游霉素和二碳酸二烷基酯组合(U.S.专利6,376,005)；和将山梨酸盐或苯甲酸盐与抗坏血酸以及二碳酸二甲酯组合(U.S.专利5,866,182)。理想地，一种防腐剂组合物应该具有广谱的活性(也就是可以杀死和/或抑制细菌、霉菌和酵母菌)，对人类消费是安全的，在低浓度时是有效的，价格低廉，并且不明显地影响其所被加入其中的饮料的味道。
发明概述
本发明是基于这样一个发现，即壳聚糖可与其他防腐剂(优选苯甲酸盐、山梨酸盐、EDTA或它们的混合物)一起协同作用以杀死和/或抑制立即可饮的饮料中细菌、酵母菌和霉菌的生长，这种饮料包括含有果汁的立即可饮的饮料。这里有至少两个重要的结论。第一，壳聚糖与苯甲酸盐、山梨酸盐、EDTA或它们的混合物的一种组合比这些试剂单独使用更为高效。第二，当将它们组合应用时，这些抗菌剂在更低浓度时是有效的。单宁酸被认为是另外一种能与壳聚糖产生同样效果的试剂。
一般地，本发明涉及一种通过添加第一抗菌化合物(壳聚糖、单宁酸或它们的混合物)和第二种抗菌化合物(例如苯甲酸盐、山梨酸盐、EDTA，或它们的混合物)以杀死微生物和/或抑制饮料中微生物生长的方法。在它们的联合使用中，第一抗菌化合物和第二抗菌化合物以足够的浓度添加从而可以在室温下将微生物水平降低和维持在低于大约1cfu/ml达至少大约8个星期。应用本发明，就不必进行热处理以灭活包括酵母菌和霉菌在内的食物腐败微生物。因此，可以应用冷包装方法。当然，如果需要也可以采用这种热处理。
在另一个实施方式中，本发明涉及一种通过添加第一抗菌化合物(也就是，壳聚糖、单宁酸、或它们的混合物)和第二抗菌化合物以杀死微生物和/或抑制饮料中微生物生长的方法。在它们的联合使用中，该第一和第二抗菌化合物以足够的浓度添加，从而可以在室温下将微生物水平低于降低和维持在大约1cfu/ml达至少大约8个星期。
优选地，在以上描述的方法中应用的第二抗菌化合物是苯甲酸盐、山梨酸盐、EDTA(乙二胺四乙酸)或它们的混合物。它们可以以适合在食品制品中应用的任意形式(例如作为钠盐或钾盐)进行添加。
在一个实施方式中，本发明提供一种在包装食品制品中杀死和/或抑制微生物生长的方法，包括添加一种从壳聚糖、单宁酸或它们的混合物中选择的第一抗菌化合物和一种第二抗菌化合物，其中在它们的联合使用中，第一抗菌化合物和第二抗菌化合物以足够的浓度添加，从而可以在室温下将包装食品制品中的微生物水平降低和维持在低于大约1cfu/ml达至少大约8个星期。
在另一个实施方式中，本发明提供一种包装饮料，其中包含一种从壳聚糖、单宁酸、或它们的混合物中选择的第一抗菌化合物和一种第二抗菌化合物，其中在它们的联合使用中，第一抗菌化合物和第二抗菌化合物以足够的浓度添加从而可以在室温下将包装饮料中的微生物水平降低和维持在低于大约1cfu/ml达至少大约8个星期。
在另外一个实施方式中，本发明提供一种提供冷装填包装饮料的方法，该方法包括：
(1)制备一种饮料，其中制备的饮料中包括从壳聚糖、单宁酸或它们的混合物中选择的一种第一抗菌化合物和从苯甲酸盐、山梨酸盐、EDTA或它们的混合物中选择的一种第二抗菌化合物；
(2)将制备好的饮料放置于一个容器中；
(3)密封该容器以提供这种冷装填包装饮料，
其中步骤(2)和(3)在0到大约80℃的温度下进行；其中在它们的联合使用中，将第一抗菌化合物和第二抗菌化合物以足够的浓度添加到饮料中，从而可以在室温下将冷装填包装饮料中的微生物水平降低和维持在低于大约1cfu/ml达至少大约8个星期。
在另外一个实施方式中，本发明提供一种提供冷冻装填包装饮料的方法，该方法包括：
(1)制备一种饮料，其中制备的饮料中包括壳聚糖；
(2)将制备好的饮料放置于一个容器中；
(3)密封该容器以提供这种冷装填包装饮料，
其中步骤(2)和(3)在0到大约80℃的温度下进行；并且其中将壳聚糖以足够的浓度添加到饮料中，从而可以在室温下将冷装填包装饮料中的微生物水平降低和维持在低于大约1cfu/ml达至少大约8个星期。
发明详述
壳聚糖是一种通常在高温下在碱中对壳质进行脱乙酰作用而制得的多糖。尽管壳质不能溶解在大多数溶剂中，但是壳聚糖能溶解于包括柠檬酸在内的有机酸的稀溶液中。在许多种液体中溶解壳聚糖的方法是本领域技术人员所熟知的(参见，例如，U.S.专利5,453,282；U.S.专利5,654,001；和U.S.专利6,323,189)。它已经应用于许多生物医学应用中并且近些年来已经成为一种流行的膳食补充剂。
单宁酸和壳聚糖已经经试验检验，并且已经发现在立即可饮的饮料中，特别是在含果汁的立即可饮的饮料中，其可以与山梨酸盐/苯甲酸盐或山梨酸盐/苯甲酸盐/EDTA一起协同作用。山梨酸盐是一种普遍应用的防腐剂，并且已经发现对霉菌、酵母菌和特定类型的细菌是有效的。苯甲酸盐有相同的活性范围，尽管其通常比山梨酸盐的效果稍差，并且其在酸性的环境中效果最好。EDTA通常是一种螯合剂，其捕获食品中的金属杂质，否则金属杂质会促进微生物的生长和食品的腐败。所有这些试剂都有广泛的商业来源。
该方法和组合物在含果汁饮料中的应用效果最好，其中果汁饮料可以是碳酸的或非碳酸的。果汁优选含有柠檬酸的果汁，如桔子汁、柠檬汁、酸橙汁、葡萄汁、橘子汁和它们的混合物。其他可能被应用的果汁包括苹果汁、葡萄汁、梨汁、油桃汁、穗醋栗汁、覆盆子汁、醋栗汁、欧洲黑莓汁、紫黑浆果汁、草莓汁、石榴汁、番石榴汁、猕猴桃汁、芒果汁、木瓜汁、西瓜汁、糙皮甜瓜汁、樱桃汁、酸果蔓汁、菠萝汁、桃子汁、杏汁、李子汁等等。这些果汁可以是天然果汁(如直接从天然水果中获得)、加工过的果汁、再成型果汁等等。尽管不是优选的，本发明仍然与包含有蔬菜汁的饮料相适应。
通常，最优选的饮料是pH值大约为2.5到大约4.5的非碳酸型饮料，包括天然酸性的饮料或酸化饮料。该防腐剂可以与人造的或天然的甜味剂以及与食品制品中常用的其他添加剂结合使用，只要它们不对饮料的感官性能起反作用。这些添加剂包括，例如，食用香料、着色剂、稳定剂、稠化剂、营养物质如维生素和矿物质、乳化剂和抗氧化剂。当应用壳聚糖时，优选使用低分子量的形式(优选大约6000g/mol或更少)，因为其对粘度有相对小的影响。
本发明允许杀死微生物和/或抑制微生物污染物的生长，其中微生物污染物包括在处理和包装过程中从外界环境中引入的成分。该第一和第二(如果采用的话)抗菌化合物以足够的浓度加入，从而可以在室温下将微生物水平降低和维持在少于大约1cfu/ml达至少大约8个星期。已经发现，对于已经被高达大约104cfu/ml的微生物污染物污染的饮料，本发明的组合物和方法可以有效地杀死微生物达到在大约5个星期内低于大约1cfu/ml的水平，并且在室温下维持这个低于大约1cfu/ml的水平达大约8个星期。除非后来发生污染(例如，由于初期包装的失败)，否则这种水平预期可以在低于大约1cfu/ml的水平保持一段更长的时间。当然，当应用本发明以提供更高的安全限度时，还应该进一步采取措施以避免和/或减少食品制品的微生物污染，其中这种食品制品包括饮料。
第一抗菌化合物是壳聚糖、单宁酸、或它们的混合物；壳聚糖是优选的用于本发明中的抗菌化合物。添加壳聚糖到最终浓度可以达到大约0.1到大约200ppm(优选大约1到大约100ppm)。在其他的实施方式中，单宁酸(优选添加到最终浓度达到大约10到大约100ppm)可以用于替代壳聚糖或与壳聚糖一起使用。第二抗菌化合物的例子包括苯甲酸盐、山梨酸盐、EDTA和它们的混合物。当应用甲酸盐或山梨酸盐时，通常将其添加到最终浓度达到大约10到大约1000ppm(其它适当的范围是大约50到大约500ppm和大约50到大约150ppm)；当应用EDTA时，其最终浓度应该是大约0.5到大约300ppm，优选和更优选的浓度分别是大约1到大约100ppm和大约10到大约50ppm。在一个优选的实施方式中，第一抗菌化合物是壳聚糖，第二抗菌化合物是苯甲酸盐、山梨酸盐和EDTA的混合物。通常地，在相关的食品制品中，添加的抗菌化合物的总体水平应该低于大约2000ppm，优选低于大约1000ppm。
本发明也包括通过以上讨论的方法制作的饮料。例如，在一个优选实施方式中，本发明包括立即可饮的饮料，其中该饮料中含有至少百分之一的果汁，大约1到200ppm的壳聚糖和大约10到大约1000ppm的苯甲酸盐或山梨酸盐。还可以包括其它试剂，如单宁酸和EDTA。优选的浓度是那些上面所讨论的以及还包括，例如，在一种饮料中含有大约1到大约100ppm的壳聚糖和大约50到大约500ppm苯甲酸盐或山梨酸盐。单宁酸也可以以一个优选的大约10到100ppm的浓度被加入到组合物中。
在以上描述的方法和组合物中应用的壳聚糖可以是与人类消费饮料的制备相容的任何分子形式。因此，一般而言，壳聚糖应该具有一个低的平均分子量(即低于大约50,000g/mol)，优选具有低于大约6000g/mol的平均分子量。饮料通常应该包含至少百分之一的果汁，浓度在大约百分之五到大约百分之九十五的范围内，优选大约百分之五到大约百分之五十的范围内。它们应该被酸化，具有在大约2.0到大约6.0范围内的pH值，优选地，具有在大约2.5到大约4.5间的范围内的pH值。
本发明的一个优点是允许在饮料的制备中采用冷装填包装方法。冷装填方法在本领域是众所周知的，与“热装填”方法不同，其是在低于大约80℃的温度下，并且通常在0到大约35℃的温度下进行液体的包装。在冷装填方法中应用本发明呈现了许多优点，包括，例如改善了与高水平微生物污染物有关的稳定性，降低了成型成本(也就是，相对低水平的抗菌化合物就是有效的)，提高了成型的灵活性(也就是，防腐剂系统在一个宽的水硬度和碱性条件范围内都是有效的)，改善了产品风味(也就是，由于可以应用低水平的抗菌化合物和具有避免热处理条件的能力)，延长了在环境温度下的货架期，等等。
冷装填包装的条件可以根据生产者的需要和任何由将被包装的液体引入的限制条件而改变。因此，本发明包括用于饮料包装的冷装填方法的一个改进，其特征在于加入的壳聚糖的最终浓度为大约1和大约200ppm。优选地，该方法中包含上述浓度的山梨酸盐、苯甲酸盐和/或EDTA。当第一和第二抗菌化合物一起应用时，不需要添加其它防腐剂。然而，只要它们不对饮料的感官性能起反作用，该方法也适合与其它防腐剂、着色剂、稳定剂等一起使用。如以上所讨论的，在pH值为大约2.0到大约6.0，优选pH值为大约2.5到大约4.5时，该方法最适合应用于含果汁的饮料。在冷装填方法中，单宁酸也可以与壳聚糖一起使用。单宁酸可以以任何适合于食品制品的形式使用，并且添加的最终浓度应该为大约1到大约500ppm，优选最终浓度为大约10到大约300ppm和大约10到大约100ppm。
本发明中的饮料可以利用本领域公知的常规方法进行制备。尽管通常优选冷装填，但是该方法和组合物也适合于热包装或无菌包装操作。已经描述了制作饮料组合物的方法，例如，在U.S.专利4,737,375和6,294,214中描述的方法。这些方法，或者本领域公知的任何其他方法，都可以与这里描述的方法和组合物一起应用。
除非另有注明，否则本说明书中的所有百分比或水平都是按重量计算的。
实施例
实施例1.一种pH值低于4.0的非碳酸型液体饮料是通过混合水、高果糖玉米糖浆、梨汁浓缩物、柠檬酸、抗坏血酸(维它命C)和调味剂而制成的。在重建的基础上，该饮料含有百分之十的果汁。通过足够量的抗坏血酸的强化，该饮料可以提供至少百分之百的USRDI(美国推荐的每日摄入量)的维生素C。用硬度大约为60ppm的水配制这种饮料。
另外，使用如下防腐剂配制该饮料：
5ppm的壳聚糖；
200ppm的苯甲酸钠；
200ppm山梨酸钾；和
30ppm的EDTA。
给该饮料接种大约2×102cfu/ml水平的霉菌种混合物。将该饮料密封并放置于一个76°F的房间里。对样品进行无菌提取并涂平板以确定饮料中剩余的霉菌水平。下面的表格给出了结果：
    时间(星期)     霉菌(cfu/ml)
    最初接种     210
    1     3
    2     2
    3     ＜1
    4     ＜1
    6     ＜1
    8     ＜1
实施例2.本实施例阐述了在冷装填方法中单独使用壳聚糖的效果。一种pH值低于4.0的非碳酸液体饮料是通过混合水、高果糖玉米糖浆、梨汁浓缩物、柠檬酸、抗坏血酸(维它命C)，和风味剂而制成的。在重建的基础上，该饮料含有百分之十的水果汁。通过足够量的抗坏血酸的强化，该饮料可以提供至少百分之百的USRDI(美国推荐的每日摄入量)的维生素C。用硬度大约为60ppm的水配制这种饮料。
该饮料是用20ppm的壳聚糖配制而成的；没有添加苯甲酸钠、山梨酸钾、或EDTA。
给该饮料接种大约103cfu/ml水平的酵母菌种混合物。将该饮料冷密封并放置于一个76°F的房间里。对样品进行无菌提取并涂平板以确定饮料中剩余的酵母菌水平。下面的表格给出了结果：
    时间(星期)     酵母菌(cfu/ml)
    最初接种     960
    1     ＜1
    2     ＜1
    3     ＜1
    4     ＜1
    6     ＜1
    8     ＜1
对比实施例.一种相似的但非本发明的非碳酸饮料如实施例2的方法进行制备，除了：(1)应用硬度大约为220ppm的水和(2)使用不同的防腐剂系统外的。该防腐剂系统不提供壳聚糖，来配制饮料之其提供250ppm苯甲酸钠、250ppm山梨酸钾和400ppm的EDTA。
给该样品接种大约103cfu/ml水平的酵母菌种混合物。如在实施例2中那样处理和测定接种后的样品。在储藏1个星期之后，酵母菌的生长过度以至于难以计数；在储藏2个星期之后，样品已经发酵了。
实施例3.一种pH值低于4.0的非碳酸液体饮料是通过混合水、高果糖玉米糖浆、橙汁、菠萝、梨和红葡萄汁的浓缩物、柠檬酸、抗坏血酸(维它命C)和调味剂制备而成的。在重建的基础上，该饮料含有百分之十的果汁。通过足够量的抗坏血酸的强化，该饮料可以提供至少百分之百的USRDI(美国推荐每日摄入量)的维生素C。用硬度大约为130ppm的水配制这种饮料。
另外，使用如下防腐剂配制该饮料：
20ppm的壳聚糖；
400ppm的苯甲酸钠；
200ppm山梨酸钾；和
30ppm的EDTA。
向该饮料中接种大约2.5×102cfu/ml水平的霉菌种混合物和大约1.3×103cfu/ml水平的酵母菌种混合物。将该饮料密封并放置于一个76°F的房间里。对样品进行无菌提取并涂平板以确定在饮料中剩余的霉菌和酵母菌水平。下面的表格给出了结果：
    时间(星期)     霉菌(cfu/ml)     酵母菌(cfu/ml)
    最初接种     250     1260
    1     18     57
    2     ＜1     2
    5     ＜1     ＜1
    8     ＜1     ＜1
实施例4.一种pH值低于4.0的非碳酸液体饮料是通过混合水、高果玉米糖浆、梨汁浓缩物、柠檬酸、抗坏血酸(维它命C)和调味剂而制成的。在重建的基础上，该饮料含有百分之十的果汁。通过足够量的抗坏血酸的强化，该饮料可以提供至少百分之百的USRDI(美国推荐每日摄入量)的维生素C。用硬度大约为220ppm的水配制这种饮料。
另外，使用如下防腐剂配制该饮料：
10ppm的壳聚糖；
400ppm的苯甲酸钠；
200ppm山梨酸钾；和
30ppm的EDTA。
向该饮料的各个样品中分别接种大约1.7×102cfu/ml和大约44cfu/ml水平酵母菌种混合物或霉菌种混合物。将该饮料密封并放置于一个76°F的房间里。对样品进行无菌提取并涂平板以确定在饮料中剩余的霉菌或酵母菌水平。下面的表格给出了结果：
    时间(星期)     霉菌(cfu/ml)     酵母菌(cfu/ml)
    最初接种     170     44
    1     ＜1     ＜1
    2     1     ＜1
    3     ＜1     ＜1
    4     ＜1     ＜1
    6     ＜1     ＜1
    8     ＜1     ＜1
引用的所有参考文献在此作为参考文献被完整的引入本申请中。现在，已经对本申请进行了充分的描述，那些本领域的技术人员可以理解在不影响本发明或任何实施方式的精神或保护范围的情况下，本发明可以在一个宽的和相等的条件、参数等范围内实施。

Claims (35)

1、一种在包装食品制品中杀死微生物或抑制微生物生长的方法，包括添加第一抗菌化合物和第二抗菌化合物，其中第一抗菌化合物是从由壳聚糖、单宁酸或它们的混合物组成的组中选择的，其中在它们的联合使用中，第一抗菌化合物和第二抗菌化合物以足够的浓度添加从而可以在室温下将包装食品制品中的微生物水平降低和维持在低于大约1cfu/ml达至少大约8个星期。
2、如权利要求1所述的方法，其中所述的包装食品制品是包装饮料。
3、如权利要求2所述的方法，其中所述的包装食品制品是冷包装饮料。
4、如权利要求2所述的方法，其中第二抗菌化合物是从由苯甲酸盐、山梨酸盐、EDTA和它们的混合物组成的组中选择的。
5、如权利要求3所述的方法，其中第二抗菌化合物是从由苯甲酸盐、山梨酸盐、EDTA和它们的混合物组成的组中选择的。
6、如权利要求2所述的方法，其中第一抗菌化合物和第二抗菌化合物是包装饮料中仅有的抗菌化合物。
7、如权利要求3所述的方法，其中第一抗菌化合物和第二抗菌化合物是包装饮料中仅有的抗菌化合物。
8、如权利要求4所述的方法，其中第一抗菌化合物和第二抗菌化合物是包装饮料中仅有的抗菌化合物。
9、如权利要求5所述的方法，其中第一抗菌化合物和第二抗菌化合物是包装饮料中仅有的抗菌化合物。
10、如权利要求4所述的方法，其中第一抗菌化合物是壳聚糖，其最终浓度为大约1到大约200ppm，第二抗菌化合物如果是苯甲酸盐或山梨酸盐，则其被添加到最终浓度为大约10到大约1000ppm，或如果是EDTA，则其被添加到最终浓度为大约0.5到大约300ppm。
11、如权利要求8所述的方法，其中第一抗菌化合物是壳聚糖，其最终浓度为大约1到大约200ppm，第二抗菌化合物如果是苯甲酸盐或山梨酸盐，则其被添加到最终浓度为大约10到大约1000ppm，或如果是EDTA，则其被添加到最终浓度为大约0.5到大约300ppm。
12、如权利要求10所述的方法，其中第一抗菌化合物是壳聚糖，其最终浓度为大约1到大约100ppm，第二抗菌化合物如果是苯甲酸盐或山梨酸盐，则其被添加到最终浓度为大约50到大约500ppm，或如果是EDTA，则其被添加到最终浓度为大约1到大约200ppm。
13、如权利要求11所述的方法，其中第一抗菌化合物是壳聚糖，其最终浓度为大约1到大约100ppm，第二抗菌化合物如果是苯甲酸盐或山梨酸盐，则其被添加到最终浓度为大约50到大约500ppm，或如果是EDTA，则其被添加到最终浓度为大约1到大约200ppm。
14、一种包含第一抗菌化合物和第二抗菌化合物的包装饮料，其中第一抗菌化合物是从由壳聚糖、单宁酸或它们的混合物组成的组中选择的，其中在它们的联合使用中，第一抗菌化合物和第二抗菌化合物以足够的浓度添加从而可以在室温下将包装食品制品中的微生物水平降低和维持在低于大约1cfu/ml达至少大约8个星期。
15、如权利要求14所述的包装饮料，其中包装饮料是冷装填包装的饮料。
16、如权利要求14所述的包装饮料，其中第二抗菌化合物是从由苯甲酸盐、山梨酸盐、EDTA和它们的混合物组成的组中选择的。
17、如权利要求15所述的包装饮料，其中第二抗菌化合物是从由苯甲酸盐、山梨酸盐、EDTA和它们的混合物组成的组中选择的。
18、如权利要求16所述的包装饮料，其中第一抗菌化合物和第二抗菌化合物是包装饮料中仅有的抗菌化合物。
19、如权利要求17所述的包装饮料，其中第一抗菌化合物和第二抗菌化合物是包装饮料中仅有的抗菌化合物。
20、如权利要求16所述的包装饮料，其中第一抗菌化合物是壳聚糖，其最终浓度为大约1到大约200ppm，第二抗菌化合物如果是苯甲酸盐或山梨酸盐，则其被添加到最终浓度为大约10到大约1000ppm，或如果是EDTA，则其被添加到最终浓度为大约0.5到大约300ppm。
21、如权利要求17所述的包装饮料，其中第一抗菌化合物是壳聚糖，其最终浓度为大约1到大约200ppm，第二抗菌化合物如果是苯甲酸盐或山梨酸盐，则其被添加到最终浓度为大约10到大约1000ppm，或如果是EDTA，则其被添加到最终浓度为大约0.5到大约300ppm。
22、如权利要求20所述的包装饮料，其中第一抗菌化合物是壳聚糖，其最终浓度为大约1到大约100ppm，第二抗菌化合物如果是苯甲酸盐或山梨酸盐，则其被添加到最终浓度为大约50到大约500ppm，或如果是EDTA，则其被添加到最终浓度为大约1到大约200ppm。
23、如权利要求21所述的包装饮料，其中第一抗菌化合物是壳聚糖，其最终浓度为大约1到大约100ppm，第二抗菌化合物，如果是苯甲酸盐或山.梨酸盐，则其被添加到最终浓度为大约50到大约500ppm，或如果是EDTA，则其被添加到最终浓度为大约1到大约200ppm。
24、一种提供冷装填包装饮料的方法，该方法包括：
(1)制备一种饮料，该制备的饮料中包括从壳聚糖、单宁酸或它们的混合物中选择的第一抗菌化合物和从苯甲酸盐、山梨酸盐、EDTA或它们的混合物中选择的第二抗菌化合物；
(2)将制备好的饮料放置于一个容器中；
(3)密封该容器以提供这种冷装填包装饮料，
其中步骤(2)和(3)在0到大约80℃的温度下进行；其中在它们的联合使用中，第一抗菌化合物和第二抗菌化合物以足够的浓度添加到饮料中从而可以在室温下将冷装填包装饮料中的微生物水平降低和维持在低于大约1cfu/ml达至少大约8个星期。
25、如权利要求24所述的方法，其中第一抗菌化合物是壳聚糖，其最终浓度为大约1到大约200ppm，第二抗菌化合物如果是苯甲酸盐或山梨酸盐，则其被添加到最终浓度为大约10到大约100ppm，或如果是EDTA，则其被添加到最终浓度为大约0.5到大约300ppm。
26、如权利要求25所述的方法，其中第一抗菌化合物是壳聚糖，其最终浓度为大约1到大约100ppm，第二抗菌化合物，如果是苯甲酸盐或山梨酸盐，则其被添加到最终浓度为大约50到大约500ppm，或如果是EDTA，则其被添加到最终浓度为大约1到大约200ppm。
27、如权利要求24所述的方法，其中第一抗菌化合物和第二抗菌化合物是冷装填包装饮料中仅有的抗菌化合物。
28、如权利要求25所述的方法，其中第一抗菌化合物和第二抗菌化合物是冷装填包装饮料中仅有的抗菌化合物。
29、如权利要求26所述的方法，其中第一抗菌化合物和第二抗菌化合物是冷装填包装饮料中唯一的抗菌化合物。
30、一种提供冷装填包装饮料的方法，该方法包括：
(1)制备饮料，其中制备的饮料中包括壳聚糖；
(2)将制备好的饮料放置于一个容器中；
(3)密封该容器以提供这种冷装填包装饮料，
其中步骤(2)和(3)在0到大约80℃的温度下进行；其中壳聚糖以足够的浓度添加到饮料中，从而可以在室温下将冷装填包装饮料中的微生物水平降低和维持在低于大约1cfu/ml达至少大约8个星期。
31、如权利要求30所述的方法，其中壳聚糖是冷装填包装饮料中仅有的抗菌化合物。
32、如权利要求30所述的方法，其中在冷装填包装饮料中壳聚糖的浓度是大约1到大约100ppm。
33、如权利要求31所述的方法，其中在冷装填包装饮料中壳聚糖的浓度是大约1到大约100ppm。
34、如权利要求32所述的方法，其中在冷装填包装饮料中壳聚糖的浓度是大约10到大约50ppm。
35、如权利要求33所述的方法，其中在冷装填包装饮料中壳聚糖的浓度是大约10到大约50ppm。
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